中种法、冷藏中种法
面包要好吃,牵涉的细节很多,搅拌程度、搅拌终温、发酵控制、整型技巧...在在都是关键。其中,很多师傅爱用的「(冷藏)中种法」,倒是不需太多技巧就可大大提升面包美味程度的好方法。
中种法:将直接法配方里7成的面粉和7成的水(注1)+全部的酵母,简单揉成团,「中种」在室温里基发2小时,再加入剩余材料一起打成主面团,接下来步骤不变,继续把面包做完即可。
。),放进冰箱冷藏室冰隔夜,之后再加入剩余材料一起打成主面团,接下来步骤不变,继续把面包做完即可。
备注:
1. 严格说是水份是以相对于中种面粉用量来计算,粗略算就差不多是总配方的7成。
2. 以总酵母用量为1%而言,冷藏中种先下0.2%,主面团仍下1%。这是蔡丰辰老师的说法:冷藏中种因为发酵时间长,那个0.2%可视为额外添加的,到最后已没什么作用,所以主面团的酵母可维持原用量,不用减。
至于中种和主面团的粉量比例问题,几乎多数的师傅用的都是「七三法」:中种70%, 主面团30%。按照李泰杞老师傅(注)的说法,这是黄金完美比例。「那所谓的100%中种法呢?」我傻傻的问。老师傅很笃定的回答我:「那不叫中种法!谁敢叫那做中种法,叫他来见我!」XD
呵呵,可不是?所谓「中种法」,顾名思义:「The Sponge and dough method 」... 没了「种」和「主面团」的组合和相互间发生的作用,全部打成一团,当然不能视为中“种”法了。
「中种法」或「冷藏中种法」真的是小小技巧,绝对可大大提升面包美味程度的好方法。尤其做起来并不难,要注意的只有:
1. 中种面团不要过度搅拌,只要粗略和成团就好。
我从来没动用过搅拌缸,之前是双手万能。看多了孟老师的食谱,开始学她:只要是要把粉和液体拌匀的步骤,都借助橡皮刀。一来不沾手,二来不沾手就可降低损耗,也是小小技巧,大大妙用!
2. 加了中种的面团筋性形成快也发的快,搅打时不要打过头。
文师傅的说法是听到拍缸声就差不多了,约8~9分筋就可,不需打到十分筋。事实上多数文师傅的面包都不打到十分筋,结果是面包,尤其吐司,软绵细致宛若绵花的质地,断切面几乎没有孔洞,被我称为「零毛孔美女吐司」就算了,还有一种近乎韧性的弹性,一头用牙齿轻咬着,另一头用手扯还扯不断...是我心目中的第一名吐司!
3. 发酵时也要小心控制,不要发过头。
我试过,一般带盖吐司要发到8分满,不带盖要发到9分满,「中种法」大约发到7分和8分就可入炉了。北欧蛋黄吐司因含糖油量高,面团超有力,真的是5分满就可入炉,出炉照常满模。
试试看,直接法以外,「中种法」真的会让你的面包更柔软细致美味。夏天里「冷藏中种法」更是妙,好像在面团里加了一块大冰块,面团搅拌终温好控制多了。
冷藏发酵法的小捌步
冷藏发酵法让面团在低温下进行长期发酵,不只面包风味较好,也更省时方便。
表面看来,面包制作的时间拉长了,实际上是把一套面包制做流程拆开来分次完成。对很忙碌,没有一段完整长时间可以做面包的人来说,冷藏发酵法真是救命良方!不管是中种面团或主面团的基础发酵,都可以利用冷藏发酵来完成。
一般看到的做法是面团一坨装在塑料袋里就丢冰箱,小秘诀是面团先压压扁绑紧后再丢冰箱,为什么?
文师傅的说法是面团才会发的平均,不会有的地方比较发,有的地方比较不发。
文师傅的得力助手,现已独当一面在家艺烘焙授课的小胖老师说:一整坨的面团会因为中间冰不到而温度偏高,就失去了冷藏发酵的意义--低温长期发酵,面团会因此而太发。
小小秘诀,大大受用!
我试过后发现面团风味真的比较好。
什么叫比较好?发的好的面团闻起来呈淡淡酒香,发不好的面团闻起来带不良酸气。
icu进修自我鉴定 篇一:icU进修总结 进修总结 短短三个月的进修学习生活很快就结束了,对我来说是一种磨练,更是一种考验。对于我来说刚刚工作三年,技术理论都尚浅,这次能在icU学习,得到全面的锻炼,无疑机会很珍贵,收获也很丰裕的。我感谢院领导和所有关心爱护我的人给我的这次难得机会!正是这次机会,使我的专业技术有了一定的提高,在此将我的学习体会与各位交流。 和平医院icU共设床位10张,其中开放式床位8张,隔离床位2张,医生6名,其中常住医生4名,轮转医生2名。护士30多名,除了在外进修,以及休假人员,每班约有7-8个护士在岗,平时床位利用率可达100﹪,主要收治一些需要呼吸支持的患者,所以工作人员少,每天的工作量都很大。主任张栋是钟南山的学生,博士学位。护士长是个喜欢研究的人,已有两项发明,且每年都有论文发表,所以在他们的的严格要求下,科里学习气氛很浓,工作压力也颇大。我有幸在此科室学习,并学到了不少的知识。 icU是集医疗,教学,科研一体的科室,技术力量比较雄厚,专业诊疗设备先进齐全,比如监护仪,呼吸机(包括有创和无创的),微量泵(输液泵和注射泵),血滤机,营养泵,胸部物理震颤仪,头部物
理降温仪,输液系统,红外线心电图机,除颤仪,血气分析仪,纤支镜等。 有先进的设备,相应必须有技术先进的医务人员,所以科室里每 个医生都会气管插管,以及深静脉穿刺,护士除了做好生活护理,减少病人的感染率以及家人不在身边的孤独感外,还必须是一位全科护士,危重病人的抢救(心肺脑复苏)以及配合技术是最基本的,因为每一个进入icU的患者都是下有病危通知的,另外还有一些先进护理操作技能,比如经鼻插入肠胃管(营养物质直接送达小肠,直接吸收,而且保留时间比胃管要长得多,一旦插入不容易脱出),深静脉导管的护理技术,血气的采集,介入以及体外的胸部物理治疗,人工气道的管理等。目前上述几项技术都未在我院开展,根据我院现有技术水平,胸部物理治疗以及血气采集(这项技术投入小,且减少了标本暴露于空气中的时间,提高了检查结果的正确率),营养泵的利用可用于糖尿病患者中,低血糖昏迷,或肿瘤恶夜质患者。 icU由于病人的特殊性,一些制度也比较先进,比如说病人由患者的主治大夫和icU的医生护士共同管理,所以要求护士对病人的病情“全知道”,所以护士长实行“复述式交班”,督促全体护士对所有病人病情都了解,且在交班中可纠正一些护士对病人病情叙述的不当,减少了和患者及患者家属在沟通中引发误会,利于护患沟通。在科室工作时,能够感觉到他们的自我保护意识非常强烈,对病患提出的各种疑问都能合理的解释并明确告知病情发展及预后。 在icU学习期间,极大的开阔了我的视野,特别是他们浓厚的学习气
甘油冷冻保藏法 本方法适合于中、长期菌种保藏,保藏时间一般为2-4年左右。 (1)用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。 (2)平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱,培养24-48小时,至单菌落的大小为3mm左右。 (3)挑取一个单菌落,接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时,至菌密度OD600为1.0-1.5。 (4)用火焰灭菌的接种环取少量种子液,涂片后,作革兰氏染色,在显微镜下观察菌体的形态,及是否有杂菌。 (5)按30%甘油:种子液为1:1(V/V)的量加入无菌甘油,混合后分装至事先灭菌的菌种保存管(1-2mL/管),-70℃或液氮保存。 冷冻干燥保藏法 (1)准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安瓿管,大小要求外径6-7.5mm,长105mm,球部直径9-11mm,壁厚0.6-1.2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃灭菌30分钟,备用。 (2)准备菌种,用冷冻干燥法保藏的菌种,其保藏期可达数年至十数年,为了在许多年后不出差错,故所用菌种要特别注意其纯度,即不能有杂菌污染,然后在最适培养基中用最适温度培养,使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活率反而降低。一般,细菌要求24—48小时的培养物;酵母需培养3天;形成孢子的微生物则宜保存孢子;放线菌与丝状真菌则培养7-10天。 (3)制备菌悬液与分装以细菌斜面为例,用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中,制成浓菌液,每支安瓿管分装0.2ml。 (4)冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售,价值昂贵,此处介绍的是简易方法与装置,可达到同样的目的。 将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻,无低温冰箱可用冷冻剂如干冰(固体CO2)酒精液或干冰丙酮液,温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂,只需冷冻4-5分钟,即可使悬液结冰。 (5)真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态,需准备冷冻槽,槽内放碎冰块与食盐,混合均匀,可冷至-15℃。装置仪器,安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。 抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa(0.7mmHg)真空度时,则干燥物不致熔化,以后再继续抽气,几小时内,肉眼可观察到被干燥物已趋干燥,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),保持压力6-8小时即可。 (6)封口抽真空干燥后,取出安瓿管,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管继续抽气,约10分钟即可达到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。封口以后,保存于冰箱或室温暗处。 此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一,对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用,即使对一些很难保存的致病菌,如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存,一般可保存数年至十余年,但设备和操作都比较复杂。 滤纸保藏法 (1)将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条,装入0.6×8cm的安瓿管中,每管1-2张,塞以棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃灭菌30分钟。 (2)将需要保存的菌种,在适宜的斜面培养基上培养,使充分生长。 (3)取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内,取数环菌苔在牛乳内混匀,制成浓悬液。 (4)用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内,使其吸饱,再放回至安瓿管中,塞上棉塞。 (5)将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中,用真空泵抽气至干。
食品冷冻保藏技术研究 Research The Technology Of Food Freezing Preservation (南京农业大学工学院30113422 林锴) 摘要:冷冻保藏技术目前已在食品加工行业得到了极为广泛的应用,速冻食品也已成为人们非常青睐的一种加工食品。本文阐述了食品冷冻保藏的原理,简单介绍了制冷技术的发展史,同时,作者研究了当今食品工业中果蔬、畜产品和常见水产品三类食品的冷冻保藏技术工艺。叙述了现阶段国内外冷冻保藏食品行业的发展状况。最后针对速冻行业发展中的问题提出了几点对策。 关键词:食品;冷冻;保藏;研究进展 正文 食品的冷冻保藏技术是随着社会经济的发展而兴起的一门新兴食品保藏工艺学。目前该技术已广泛应用于品种多样、规模较大的食品制造业。冷冻与保藏的食品已成为人们现代饮食生活不可缺少的部分,并日益成为主流食品之一。同时,冷冻与保藏食品产业已经成为一些地区经济发展的主要产业,并对促进农产品深加工、实现农业产、化、解决“三农”问题起到了重要的作用。 一、食品冷冻保藏技术的原理 食品冷冻作为工业规模的食品保藏方法在世界各地得到日益广泛的应用。食品冷冻保藏的原理首先是:在0℃以下的低温,微生物的生命活动受到显著抑制,从而防止食品腐败。其次,在低温下影响食品品质的酶反应和氧化反应等所有反应速度显著下降。另外,在产品中形成冻晶,也是微生物的活动和变质反应的水的活度降低。 所谓速冻,就是将食品中心温度快速冷冻到-1℃到-5℃,通过最大冰晶生成带所需时间不超过30分钟。鲜鱼和畜肉等含水率较高的食品,当品温达到-1℃时,食品中的水分开始冻结,温度降至-5℃时,所含水分的80%冻结。这时,整个食品大致成为冻结状态。因此1℃-5℃的温度界限称为最大冰晶生成带冻结
菌种冷冻保藏 菌种保藏对于生物制药是一项重要的基础工作。要使菌种长期保藏,且其生物学性状和遗传性质不变,必须选择适宜的载体和更稳定的保藏方法。菌种保藏无论哪种方法,其原理都是创造一个抑制细胞代谢的环境,即低温、干燥、缺氧、缺乏营养,使新陈代谢活动处于高度静止状态。在众多的菌种保存方法中,相对所需保藏环境,冷冻真空干燥法(即冷冻管保藏)是目前保藏方法中应用最为广泛最为有效的一种。 1、冷冻真空干燥保藏原理 冷冻真空干燥保藏法可使细胞或孢子水分在冻结状态下直接升华而干燥。冷冻管保藏的三要素:真空——降低水的蒸汽压以加速水分的蒸发;冷冻——使水蒸气冷凝以减轻真空泵负荷,加速干燥;低温——达到进一步加速干燥的目的。 2、冷冻干燥的优点: 对微生物的生物活性影响小;所得干粉疏松,溶解性好;水分含量低。 由于同时满足菌种保藏三要素,使微生物始终处在低温、干燥、缺氧的条件下,能克服传代、沙土管简单保藏方法的不足,保藏菌种范围广、时间长(保藏期可达数年至十数年)、存活率高、保存过程不易失活和退化等。 3、主要步骤为: 3.1将待保藏菌种的细胞或孢子悬浮于保护剂(如脱脂牛奶)中; 3.2在低温(-45℃以下)下使微生物细胞快速冷冻; 3.3在真空条件下使冰升华,以除去大部分的水分; 3.4封口使菌种始终处于真空缺氧状态; 3.5冷藏创造低温、干燥的保藏环境。 4、材料 菌株:筛选出具有优良性能的菌株。 试剂:2% HCl;脱脂牛奶(20%乳液)、 器具:培养皿、接种环、250 ml三角瓶、高压蒸汽灭菌锅、牛皮纸、酒精喷灯、恒温培养箱、酒精棉球、泪滴型安瓿管、标签、长颈毛细玻璃管、普通棉、冻干机。 培养:种子液体培养基、斜面或平板培养基。 5、主要流程 备泪滴型安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→封管→保藏 6、操作方法
附件:省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见 第一章总则 第一条为加强和规范省、地、县级疾病预防控制中心(以下简称“疾病预防控制中心”)实验室的建设,保证有效实施疾病预防与控制、突发公共卫生事件应急处置、疫情及健康相关因素信息管理、健康危害因素监测与控制、实验室检测与评价、健康教育与健康促进和技术指导与应用研究等职能,制定本意见。 第二条疾病预防控制中心实验室建设必须遵守国家有关法律、法规,从本地区疾病预防控制工作实际出发,正确处理好现状与发展、需要与可能的关系。必须坚持科学、合理、实用、节约的原则,根据服务人口数量、服务内容与需求量等因素,结合区域经济发展水平和卫生规划,在满足基本功能的同时,体现标准化、智能化、人性化的特点,适当考虑未来发展的需要,确定实验室建设规模。 第三条本意见是疾病预防控制中心实验室建设的基本指导原则,是编制、评估、审批疾病预防控制中心新建、改建、扩建项目的重要依据,各地应结合本地区疾病预防控制技术水平和工作实际需要参照执行。 第二章功能与建设规模 第四条疾病预防控制中心工作用房包括业务、实验、行政及保障用房,其中实验用房面积占总建筑面积的比例为:省级不少于41%、地级不少于40%、县
级不少于35%。 第五条省、地、县级疾病预防控制中心根据职能分工应建立下列功能实验室 省级:P3实验室,分子生物学实验室,肠道细菌检测实验室,食源性病原菌分离鉴定实验室,呼吸道病毒实验室,肠道病毒实验室(含脊灰实验室),HIV 确认实验室,结核病参比实验室,地方病实验室,寄生虫病实验室,消毒实验室,杀虫实验室,食品、化妆品、水质、涉水产品等健康相关产品微生物实验室,霉菌分离及鉴定实验室,虫媒病毒实验室,毒理室及感染动物房,放射防护检测实验室,职业卫生检测室,化学毒物及毒素检测实验室,普通理化实验室,生化实验室。 地级:分子生物学实验室,血清学实验室,肠道菌实验室,食源性病原菌分离鉴定实验室,HIV初筛实验室,结核病参比实验室,地方病实验室,寄生虫病实验室,消毒实验室,杀虫实验室,食品、化妆品、水质、涉水产品等健康相关产品微生物实验室,霉菌分离及鉴定实验室,放射防护检测实验室,职业卫生检测室,常见化学毒物检测实验室,普通理化实验室。 县级:血清学检测实验室,食源性病原菌及肠道菌分离鉴定实验室,HIV初筛实验室,结核病实验室,地方病实验室,寄生虫病实验室,食品、化妆品、水质、涉水产品等健康相关产品微生物实验室,职业卫生和放射防护检测室,理化实验室,生化实验室。 除有特殊要求的实验室外,各级疾病预防控制中心开展相关病原微生物工作的实验室应达到P2实验室的建设标准。可针对本地区疾病预防控制工作的实际,
Thermo Fisher程序降温仪操作规程 一、界面显示 箱体温度(Chamber)、样品温度(Sample)、LCD 显示程序状态、信息、降温程序的编辑与查看 二、控制面板 2.1 左边 Idle 没有程序运行 Run 有一个降温程序正在运行中 Wait 正在运行的降温处于暂停状态,按下“Run”键可继续运行 End 箱体升温到+25℃ 2.2 右边 Cool 打开一个氮气电磁阀 Cool+ 打开两个氮气电磁阀 Heat 正在加热 2.3 控制面板上共有7 个控制键 Warm 开始加热。 Run 开始选定降温程序,或者继续暂停的降温程序。 Slience 停止报警音并清除显示的报警信息。 Back 完全停止一个正在运行的降温程序并回到程序主菜单。 Enter 开始新一行,进入子菜单,移动光标到右边。 Up 向上滚动显示条,或改变程序步骤和设置步骤。 Down 向下滚动显示条,或改变程序步骤和设置步骤。 三、液氮供应 液氮要求:干净,压力为0.15±30%Mpa 氮气接头不可上的过紧,否则会损坏接头,接头处不可使用密封胶带。 四、自动编辑程序 6.1 使用上下箭头键选择“Edit”(编辑)模式,按Enter 键; 6.2 使用上下箭头键选择User1 至User10(自定义程序)中的一个,按Enter 键; 6.3 使用上下箭头键选择步骤step; 6.4 使用左右箭头键移动光标,使用上下箭头键可更改字母、数字或符号,使用SILENCE 键可删除字母、数字或符号,使用左右箭头键移动光标; 6.5 步骤0 输入程序名称,完成后,移动光标回到最左边; 6.6 按向下箭头键,选择步骤1,按Enter 键进入编辑; 6.7 可使用上下箭头键选择一下功能 6.7.1 0.0 C/mC to 0.0 C 箱体温度以设定的变化率到达设定温度 6.7.2 0.0 C/mS to 0.0 C 样品温度以设定的变化率到达设定温度 6.7.3 Wait at 0.0 C 达到设定的温度并等待 6.7.4 Hold for 1m at 0.0 C 在设定的箱体温度等待设定的时间然后继续 6.7.5 Precool 冷却样品至+5℃然后继续下一步骤
程序冷冻仪-Planer 英国Planer公司是世界上最早的研制及生产程序冷冻仪(Control Rate Freezer)的专业公司。多年来Planer公司一直处于程序冷冻保存领域的领先地位。胚胎,精子,干细胞, 血袋, 骨髓等生物样品的长期保存,冷冻是唯一的保存方法。保存是否成功取决于样品解冻后的成活率。 样品复苏率的关健是科学的降温程序及程序冷冻仪的性能。Planer公司程序冷冻仪设计的内部分流格板,用均匀的层流来保证所有样品温度均衡,是真正能够精确控制降温程序的冷冻仪。 Planer有各种应用范围的程序冷冻降温仪。包括了从1.7升至380升等各种大小内室的程序冷冻仪。内置精密铂电阻温度传感器,连续、准确地监测样品及冷冻室温度。产品按机型有不同开口方向的样品室,配外接MRV控制器,或外接PC连Delta T软件控制操作程序和数据处理。
控制器 MRV ·四行液晶显示,微处理器控制、显示及打印冷冻程序 ·利用精密铂电阻温度传感器,连续、准确地监测样品及冷冻室温度·10个32步程序,可灵活编辑、储存 ·内置热敏打印机,实时记录样品、冷冻室的温度程序变化的过程·精密的降温速度及升温速度, 温控范围+40℃~-180℃ ·可选Delta T PC 软件连接计算机 ·断电保护功能保证复电后继续运行未完成的程序,确保样品安全
Kryo 360,550, 560 系列程序降温仪要另配供液氮泵(pump)和液氮罐(Dewar) 液氮压力:Planer 供液氮的泵(LNP-4-C),允许范围为7-22 PSI。超出此范围有自动调节功能,即自动加热升压或泄气降压至要求范围,并发出报警,保证程序正常运行。 温度传感器:采用四线铂电阻作温度传感器,能准确记录和跟踪样品及冷冻室温度,准确地控制冷冻过程严格按用户设定的程序进行。冷冻速度:直至-180℃均能达到技术指标中及用户设定的冷冻速度。
第四章食品的冷冻保藏 概论 一、冷却食品和冻结食品 冷却食品不需要冻结,是将食品的温度降到接近冻结点,并在此温度下保藏的食品。 冻结食品,是冻结后在低于冻结点的温度保藏的食品。 冷却食品和冻结食品合称冷冻食品,可按原料及消费形式分为果蔬类、水产类、肉禽蛋类、调理方便食品类这四大类。 二、冷冻食品的特点 易保藏,广泛用于肉、禽、水产、乳、蛋、蔬菜和水果等易腐食品的生产、运输和贮藏; 营养、方便、卫生、经济; 市场需求量大,在发达国家占有重要的地位,在发展中国家发展迅速。 三、低温保藏食品的历史 公元前一千多年,我国就有利用天然冰雪来贮藏食品的记载。 冻结食品的产生起源于19世纪上半叶冷冻机的发明。 1877年,Charles Tellier(法)将氨-水吸收式冷冻机用于冷冻阿根廷的牛肉和新西兰的羊肉并运输到法国,这是食品冷冻的首次商业应用,也是冷冻食品的首度问世。 20世纪初,美国建立了冻结食品厂。20世纪30年代,出现带包装的冷冻食品。二战的军需,极大地促进了美国冻结食品业的发展。战后,冷冻技术和配套设备不断改进,冷冻食品业成为方便食品和快餐业的支柱行业。 20世纪60年代,发达国家构成完整的冷藏链。冷冻食品进入超市。冷冻食品的品种迅猛增加。 我国在20世纪70年代,因外贸需要冷冻蔬菜,冷冻食品开始起步。80年代,家用冰箱和微波炉的普及,销售用冰柜和冷藏柜的使用,推动了冷冻冷藏食品的发展;90年代,冷链初步形成;品种增加,产量大幅度增加。 第一节食品低温保藏的基本原理 食品原料有动物性和植物性之分。 食品的化学成分复杂且易变。 食品因腐烂变质造成的损失惊人。 引起食品腐烂变质的三个主要因素。 一、低温对微生物的影响 微生物对食品的破坏作用。 微生物在食品中生长的主要条件:液态水分;pH值;营养物;温度;降温速度。 低温对微生物的作用:低温可起到抑制微生物生长和促使部分微生物死亡的作用。但在低温下,其死亡速度比在高温下要缓慢得多。一般认为,低温只是阻止微生物繁殖,不能彻底杀死微生物,一旦温度升高,微生物的繁殖也逐渐恢复。 降温速度对微生物的影响:冻结前,降温越迅速,微生物的死亡率越高;冻结点以下,缓冻将导致剩余微生物的大量死亡,而速冻对微生物的致死效果较差。 二、低温对酶活性的影响 酶作用的效果因原料而异。 酶活性随温度的下降而降低。 一般的冷藏和冻藏不能完全抑制酶的活性。 三、低温对非酶因素的影响 各种非酶促化学反应的速度,都会因温度下降而降低。 第二节食品的冷却 一、冷却的目的 植物性食品的冷藏保鲜;肉类冻结前的预冷;分割肉的冷藏销售;水产品的冷藏保鲜。 二、冷却的方法 1、冷风冷却
真空冷冻干燥法保藏菌种 操作过程 1、安瓿管准备 选取规格约直径为8mm,高100mm的中性玻璃安瓿管,先用2%盐酸浸泡8~10h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗2~3次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121℃下高压灭菌20分钟,备用。 2保护剂的选择和准备 选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂, 115℃下高压蒸汽灭菌25min,备用。 3冻干样品的准备 (3)菌种准备及分装 菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2~3ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基),制成菌悬液。如用液体培养的菌种,则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到108~1010个/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部,每管分装量约0.1~0.2毫升,分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。 4预冻 -80℃冰箱预冻1~2小时。 5冷冻干燥 将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断:①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;②真空度接近空载时的最高值;③选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。 6真空封口 将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。 7保藏 安瓿管保藏在-20℃冰箱里。 8活化 如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,用镊子敲下已开裂的
真空冷冻干燥法保藏菌种操作步骤 操作过程 1、安瓿管准备 选取规格约直径为8mm,高100mm的中性玻璃安瓿管,先用2%盐酸浸泡8~10h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗2~3次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121℃下高压灭菌20分钟,备用。 2保护剂的选择和准备 选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂, 115℃下高压蒸汽灭菌25min,备用。 3冻干样品的准备 (3)菌种准备及分装 菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2~3ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基),制成菌悬液。如用液体培养的菌种,则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到108~1010个/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部,每管分装量约~毫升,分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。 4预冻 -80℃冰箱预冻1~2小时。 5冷冻干燥 将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断:①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;②真空度接近空载时的最高值;③选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。
6真空封口 将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。 7保藏 安瓿管保藏在-20℃冰箱里。 8活化 如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,用镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端,使管子破裂,在安瓿管中加入~1ml液体培养基,慢慢旋转安瓿管,是冻干菌种复水,然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。
综合细胞库设置和管理规范 SZDB/Z266—2017 深圳综合细胞库设计建设标准引用——喜格SICOLAB GB/T5458-2012液氮生物容器 GB/T18442.3-2011固定式真空绝热深冷压力容器第3部分:设计 GB19489-2008实验室生物安全通用要求 GB/T20269-2006信息安全技术信息系统安全管理要求 GB/T20801.4-2006压力管道规范工业管道第4部分:制作与安装 GB/T20988-2007信息安全技术信息系统灾难恢复规范 GB/T22239-2008信息安全技术信息系统安全等级保护基本要求 GB50034-2013建筑照明设计标准 GB/T50174-2008电子信息系统机房设计规范 GB50243-2002通风与空调工程施工质量验收规范 SN/T2294.5-2011检验检疫实验室管理第5部分:危险化学品安全管理指南 SZDB/Z188-2016细胞制备中心建设与管理规范 深圳综合细胞库设计建设及管理要求——喜格SICOLAB 一、总体原则 1、设计建造应符合GB19489-2008第5章的要求。(地形、地质、水文条件、占地面积、周围环境、交通状况等应满足建筑安全及使用要求) 2、应满足样本储存和样本信息储存等功能的要求。(提供镜像保存服务的应在异地设立镜像储存库) 3、功能分区 ①细胞库总体平面布局应清晰合理,宜设置行政办公区域、样本库区域、档案存放区域、机房区域(电子信息储存),且各区域相互独立,不应交叉混合使用。 ②样本库区域应根据使用需求和样本储存条件进行功能分区,应能够防止混淆、差错和交叉污染。 至少包括: ——样本接收区(包含暂存区); ——样本-80℃储存区; ——样本-150℃深低温储存区; ——气体储存区; ——物料储存区。 二、场地与设施 1、样本库环境要求 ——通风应符合GB50243-2002的要求;
菌种的保存真空冷冻干 燥法 集团文件版本号:(M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988)
菌种的保存:真空冷冻干燥法1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安培管。大小要求外径6~7.5mm,长105 mm,球部直径9~11 mm,壁厚0.6~1.2 mm,也可用没有球部的管状安培管。先用2%盐酸浸泡8~10h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗2~3次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121℃下高压灭菌20分钟,备用。 2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年,为了不出现差错,所用菌种纯度要高,而且菌龄要适宜。细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长期,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活期反而降低。一般细菌的菌龄要求24~48h;酵母菌为3d;形成孢子的微生物则宜保藏孢子;放线菌和丝状真菌菌龄为7~10d。 3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂, 115℃下高压蒸汽灭菌25min,备用。 4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2~3ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基),制成菌悬液。如用液体培养的菌种,则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到108~1010个/ml为宜。悬液制备完成尽
快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部,每管分装量约0.1~0.2毫升,分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。 5 预冻-80℃冰箱预冻1~2小时。 6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断:①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;②真空度接近空载时的最高值; ③选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。 7封口抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管继续抽气,约10min即可达到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安培管颈中央进行封口。 8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。 9活化如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,用镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端,使管子破裂,在安瓿管中加入0.5~1ml液体培养基,慢慢旋转安瓿管,使冻干菌种复水,然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。
细胞如何保存? 1. 注意事项: 1.1. 欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。 1.2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 1.3. 注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级,无菌且无色(以 0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品,如Sigma D-2650),以5~10 ml 小体积分装,4 oC 避光保存,勿作多次解冻。Glycerol 亦应为试剂级等级,以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。 1.4. 冷冻保存之细胞浓度: 1.4.1. normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 1.4. 2. hybridoma: 1~3 x 106 cells/ml,细胞浓度不要太高,某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。 1.4.3. adherent tumor lines: 5~7 x 106,依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解冻后须较高之浓度,而HeLa 只需1-3 x 106 cells/ml。 1.4.4. other suspensions: 5~10 x 106 cells/ml, human lymphocyte 须至少5 x 106 cells/ml。 1.5. 冷冻保护剂浓度为5 或10 % DMSO,若是不确定细胞之冷冻条件,在做冷冻保存之同时,亦应作一个backup culture,以防止冷冻失败。 1.6. 冷冻方法: 1.6.1. 传统方法: 4 oC 10 分钟---> -20 oC 30 分钟---> -80 oC 16 - 18 小时(或隔夜) ---> 液氮槽vapor phase 长期储存。 1.6. 2. 程序降温:利用等速降温机以–1 ~ -3 oC/分钟之速度由室温降至–120 oC,放在液氮槽vapor phase 长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma 之保存。 2. 材料: 2.1. 生长良好之培养细胞 2.2. 新鲜培养基 2.3. DMSO (Sigma D-2650) 2.4. 无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020) 2.5. 0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061) 2.6. 血球计数盘与盖玻片 2.7. 等速降温机(KRYO 10 Series II) 3. 步骤: 3.1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察细胞生长情形。 3.2. 配制冷冻保存溶液(使用前配制):将DMSO 加入新鲜培养基中,最后浓度为5-10%,混合均匀,置于室温下待用。 3.3. 依细胞继代培养之操作,收集培养之细胞,取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 3.4. 离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。 3.5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16~18 小时(或隔夜) →液氮槽vapor phase 长期储存。 3.6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中,再放入液氮槽中。程序
菌种的保存:真空冷冻干燥法1准备安培管用于真空冷冻菌种保藏的安培管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安培管。大小要求外径6~7.5mm,长105 mm,球部直径9~11 mm,壁厚0.6~1.2 mm,也可用没有球部的管状安培管。先用2%盐酸浸泡8~10h,再经自来水冲洗多次,用蒸馏水涮洗2~3次,烘干;在每管内放入打好菌号及日期的标签,字面朝向管壁,管口塞好脱脂棉塞,121℃下高压灭菌20分钟,备用。 2准备菌种用真空冷冻干燥法保藏的菌种保藏期可长达几年甚至几十年,为了不出现差错,所用菌种纯度要高,而且菌龄要适宜。细菌和酵母菌的菌龄要求超过对数生长期,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活期反而降低。一般细菌的菌龄要求24~48h;酵母菌为3d;形成孢子的微生物则宜保藏孢子;放线菌和丝状真菌菌龄为7~10d。 3保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂,牛奶要先脱脂,用离心方法去除上层油脂, 115℃下高压蒸汽灭菌25min,备用。 4菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种,菌龄以处于稳定期为好,孢子是新鲜的。每支长好的斜面加2~3ml保护剂,用接种环将菌苔轻轻刮起(注意勿刮起培养基),制成菌悬液。如用液体培养的菌种,则需经离心收集和用灭菌生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂悬浮制成菌悬液。悬液中菌数要求达到108~1010个/ml为宜。悬
液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌的长滴入安瓿管底部,每管分装量约0.1~0.2毫升,分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。 5 预冻-80℃冰箱预冻1~2小时。 6冷冻干燥将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内,开始冷冻干燥,时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断:①安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状;②真空度接近空载时的最高值;③选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。 7封口抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L 形五通管继续抽气,约10min即可达到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安培管颈中央进行封口。 8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。 9活化如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管的外壁消毒,用镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端,使管子破裂,在安瓿管中加入0.5~1ml液体培养基,慢慢旋转安瓿管,使冻干菌种复水,然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。
§菌种管由传统的玻璃菌种管改为带盖塑料离心管。 方法: ①将塑料离心管置耐高压塑料离心管盒内并用双层报纸包好,高压蒸汽15磅15min消毒,放烤箱80℃烤干。 ②在净化工作台内将脱脂牛奶洗下的浓厚菌悬液用长毛细玻璃滴管加到塑料离心管的底部,每只左右,切记不要将牛奶污染离心管口。 ③将加好菌液的离心管盒置-20℃冰箱预冻,预冻好后把离心管盒放置到冷冻干燥机干燥箱内冻干。 ④冻干后在净化工作台内压好离心管盖,不抽真空。贴标签,用封口膜封离心管口。放-20℃冰箱保存。 §该改良法优点有: ⑴操作过程大大简化,菌种管口不需溶封,不抽真空。 ⑵菌种管抗破损性极佳; ⑶菌种管体积超小。⑷成本低廉,易于商品化生产、推广。 笔者使用该改良法近七年,本省发放菌种上万只没有破损情况出现;数次发放嗜血杆菌、链球菌、奈瑟氏菌等苛养菌,生长情况良好。近几年我们还向华东地区部分兄弟省分提供了室间质评菌种四万余只,效果满意。 实验——微生物菌种常规保藏方法 录入时间:2011-4-13 9:30:37 来源:天津农学院精品课程 菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、
不衰、不变,以便于研究与应用。 1目的 了解菌种保藏的基本原理 掌握几种常用的菌种保藏方法。 2原理 菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异,不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态,但又不至于死亡,从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求,应该选用不同的保藏方法。一般情况下,斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用,也比较容易制作。 3材料 菌株 待保藏的适龄菌株斜面 培养基 肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基。 试剂 10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。 器具 用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。 4流程 斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏 5步骤 斜面保藏 5.1.1流程 标记试管→接种→培养→保藏 5.1.2步骤 5.1.2.1贴标签
干细胞提取过程 Document number:NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
一、实验准备 1通知来血后,就应开始做实验准备,准备采集盒里面要有一个采血袋、采血管、温度计放置于有冰袋的保温箱里交给运输人员,保持运输温度高于4℃低于20℃. 2实验室要事先做好清洁,打开传递窗口的紫外灯和生物安全柜的紫外灯,需照射30min,吹风10min。 3准备的物品:信息采集室要有无尘布、酒精棉球、棉签、喷壶、手套、储物盒、垃圾桶、垃圾袋、最好有热合机; 在洁净室要准备,5ml、10ml、20ml、50ml注射器各2-3个,冷冻袋1个,剪刀3把,止血钳3把,EP管2-3个。 二、信息采集 1接收到采集盒,带上手套,并喷上酒精消毒,打开盒子检查里面的物品,采血袋,采血管是否破损,有无漏血现象,并把各个管道的夹子夹紧。 2填写各种信息表格。《脐血接收登记表》、《脐血交接记录》、《脐血采集信息等记表》、《脐血供者健康信息调查登记表》。 3按照公司规定打印标签,等酒精干后在采血袋上贴标签。
4把采血袋放入储物盒里放到传递窗中。(传递窗口应用紫外照射30min,吹风10min) 三、脐血制备 1到洗手间把采集室所带的手套扔掉,用洗手液彻底把手洗干净。 2在一更换鞋,并脱掉日常穿的白大衣放在衣柜里;二更换洁净服,戴上帽子、口罩、手套。 3进入洁净室,从传递窗口把脐带拿到天平工作台上,称重采集袋毛重,称重时应注意管子别掉到天平外面,以免称重不准确。 脐血重量=采血袋毛重-采血袋净重 4计算应加入HESPAN的体积,按照HESPAN:脐带血=1:4加入HESPAN。 5把采血管热合掉(就是连接针头的那一根长管)。 6用托盘把采血袋和HESPAN放入生物安全柜,放入之前应用酒精喷洗一遍。拿一只5ml的注射器从采血袋的热合掉的端口扎入,抽取1ml的全 血打入EP管中用于提取前细胞计数,然后再把针孔热合掉。拿一只 20ml的注射器从装HESPAN袋的黄色端口扎入抽取相应体积的 HESPAN溶液,注入到采血袋中,并热合掉针孔。(注意:每一次注射 器扎入前,端口部位必须先用碘伏擦拭一遍再用酒精擦拭一遍)。剪一 段封口膜,一面用碘伏擦一遍再用酒精消毒一遍,凉干后缠绕黄色端口 确保针孔被密封严实。把HESPAN拿出生物安全柜。 7打开低温离心机,配平,把采血袋倒置放入并固定好,开始离心, 4℃,10min,1000转。 8在离心期间可以开始细胞计数,打开血细胞计数仪,按照机器的规章操作,记录好数据(红细胞、白细胞、血小板数目)并存档。 9第一次离心结束后,把离心过的采血袋倒置的悬挂在分浆夹的固定挤压板上,用止血钳夹住通向红细胞分离袋的管道,打开管道上白色的卡 子,活动一下出红细胞的端口,松开活动挤压板,并打开止血钳使红细
§菌种管由传统的玻璃菌种管改为0.5ml带盖塑料离心管。 方法: ①将塑料离心管置耐高压塑料离心管盒内并用双层报纸包好,高压蒸汽15磅15min消毒,放烤箱80℃烤干。 ②在净化工作台内将脱脂牛奶洗下的浓厚菌悬液用长毛细玻璃滴管加到塑料离心管的底部,每只0.2ml左右,切记不要将牛奶污染离心管口。 ③将加好菌液的离心管盒置-20℃冰箱预冻,预冻好后把离心管盒放置到冷冻干燥机干燥箱内冻干。 ④冻干后在净化工作台内压好离心管盖,不抽真空。贴标签,用封口膜封离心管口。放-20℃冰箱保存。 §该改良法优点有: ⑴操作过程大大简化,菌种管口不需溶封,不抽真空。 ⑵菌种管抗破损性极佳; ⑶菌种管体积超小。⑷成本低廉,易于商品化生产、推广。 笔者使用该改良法近七年,本省发放菌种上万只没有破损情况出现;数次发放嗜血杆菌、链球菌、奈瑟氏菌等苛养菌,生长情况良好。近几年我们还向华东地区部分兄弟省分提供了室间质评菌种四万余只,效果满意。 实验——微生物菌种常规保藏方法 录入时间:2011-4-13 9:30:37 来源:天津农学院精品课程 菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、
不衰、不变,以便于研究与应用。 1 目的 1.1 了解菌种保藏的基本原理 1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。 2 原理 菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异,不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态,但又不至于死亡,从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求,应该选用不同的保藏方法。一般情况下,斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用,也比较容易制作。 3 材料 3.1菌株 待保藏的适龄菌株斜面 3.2培养基 肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基。 3.3 试剂 10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。 3.4 器具 用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。 4 流程 斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏 5 步骤 5.1斜面保藏 5.1.1流程 标记试管→接种→培养→保藏 5.1.2步骤 5.1.2.1贴标签
干细胞提取过程 Prepared on 22 November 2020
一、实验准备 1通知来血后,就应开始做实验准备,准备采集盒里面要有一个采血袋、采血管、温度计放置于有冰袋的保温箱里交给运输人员,保持运输温度高于4℃低于20℃. 2实验室要事先做好清洁,打开传递窗口的紫外灯和生物安全柜的紫外灯,需照射30min,吹风10min。 3准备的物品:信息采集室要有无尘布、酒精棉球、棉签、喷壶、手套、储物盒、垃圾桶、垃圾袋、最好有热合机; 在洁净室要准备,5ml、10ml、20ml、50ml注射器各2-3个,冷冻袋1个,剪刀3把,止血钳3把,EP管2-3个。 二、信息采集 1接收到采集盒,带上手套,并喷上酒精消毒,打开盒子检查里面的物品,采血袋,采血管是否破损,有无漏血现象,并把各个管道的夹子夹紧。 2填写各种信息表格。《脐血接收登记表》、《脐血交接记录》、《脐血采集信息等记表》、《脐血供者健康信息调查登记表》。 3按照公司规定打印标签,等酒精干后在采血袋上贴标签。
4把采血袋放入储物盒里放到传递窗中。(传递窗口应用紫外照射30min,吹风10min) 三、脐血制备 1到洗手间把采集室所带的手套扔掉,用洗手液彻底把手洗干净。 2在一更换鞋,并脱掉日常穿的白大衣放在衣柜里;二更换洁净服,戴上帽子、口罩、手套。 3进入洁净室,从传递窗口把脐带拿到天平工作台上,称重采集袋毛重,称重时应注意管子别掉到天平外面,以免称重不准确。 脐血重量=采血袋毛重-采血袋净重 4计算应加入HESPAN的体积,按照HESPAN:脐带血=1:4加入HESPAN。 5把采血管热合掉(就是连接针头的那一根长管)。 6用托盘把采血袋和HESPAN放入生物安全柜,放入之前应用酒精喷洗一遍。拿一只5ml的注射器从采血袋的热合掉的端口扎入,抽取1ml的全 血打入EP管中用于提取前细胞计数,然后再把针孔热合掉。拿一只 20ml的注射器从装HESPAN袋的黄色端口扎入抽取相应体积的 HESPAN溶液,注入到采血袋中,并热合掉针孔。(注意:每一次注射 器扎入前,端口部位必须先用碘伏擦拭一遍再用酒精擦拭一遍)。剪一 段封口膜,一面用碘伏擦一遍再用酒精消毒一遍,凉干后缠绕黄色端口 确保针孔被密封严实。把HESPAN拿出生物安全柜。 7打开低温离心机,配平,把采血袋倒置放入并固定好,开始离心, 4℃,10min,1000转。 8在离心期间可以开始细胞计数,打开血细胞计数仪,按照机器的规章操作,记录好数据(红细胞、白细胞、血小板数目)并存档。 9第一次离心结束后,把离心过的采血袋倒置的悬挂在分浆夹的固定挤压板上,用止血钳夹住通向红细胞分离袋的管道,打开管道上白色的卡 子,活动一下出红细胞的端口,松开活动挤压板,并打开止血钳使红细