Luminal A ER+, PR+/–, HER2–Ki67 low, endocrine responsive, often chemotherapy responsive MCF-7, T47D, SUM185
Luminal B ER+, PR+/–, HER2+ Ki67 high, usually endocrine responsive, variable to chemotherapy. HER2+ are BT474, ZR-75 trastusumab responsive
Basal ER–, PR–, HER2– EGFR+ and/or cytokeratin 5/6+, Ki67 high, endocrine nonresponsive, often MDA-MB-468, SUM190 chemotherapy responsive
Claudin-low ER–, PR–, HER2– Ki67,
E-cadherin, claudin-3, claudinin-4 and claudinin-7 low. Intermediate response BT549, MDA-MB-231,
to chemotherapy Hs578T, SUM1315
HER2
ER–, PR–, HER2+ Ki67 high, trastusumab responsive, chemotherapy responsive SKBR3, MDA-MB-453
形态生长方式类型培养条件 人乳腺癌细胞MCF7 上皮样贴壁生长常规该细胞是从一名69岁的白人女性 乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构( domes );该细胞表达WNT7B 癌基因;TNF- a可以抑制MCF-7细胞的生长;抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。ER(+),PR(+),Her-2(-) 人乳腺癌细胞MDA-MB-231 上皮样贴壁生长三阴MDA-MB-231是从一名 51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7B癌基因。属于高转移性恶性乳腺癌细胞系,易成瘤,且常用 于肿瘤转移研究 人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435S 上皮样贴壁生长三阴,转移性乳腺导管腺 癌MDA-MB-435S 是一种纺锤形的细胞,1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。MDA-MB-435是从一名31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到的。但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑色素瘤细胞污染。 人乳腺癌细胞MDA-MB-453 上皮样;多角形贴壁生长三阴,转移性乳腺癌 该细胞系由Cailleau R在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。该细胞表达FGF的受体。 人乳腺癌细胞MDA-MB-157 上皮样贴壁生长髓样癌该细胞源自一位患有 乳腺髓样癌的44岁黑人女性,表达WNT7B癌基因,细胞与细胞边界处有细胞桥粒、微绒毛、张力细丝。 人乳腺癌细胞SK-BR-3 上皮样贴壁生长这株细胞是1970年由Trempe G和 Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝;过表达 ______________ HER2/c-erb-2 基因产物。 人乳腺导管癌细胞ZR-75-1 上皮样贴壁生长该细胞产生高水平的黏液素 MUC-1 mRNA,低水平的MUC-2 mRNA,但不表达MUC-3基因;表达雌激素受体。 人乳腺导管癌细胞HCC38 上皮样贴壁生长该细胞于1992年从一位50岁的白 人女性乳腺导管癌组织中分离建立,该患者曾有平滑肌肉瘤的病史,其母亲死于乳腺 癌;该细胞癌基因her2/neu- , p53+ ;上皮细胞特异性标志物EGP2 (上皮糖蛋白2) 和CK19
不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征 摘要目的探讨不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征。方法80例乳腺癌患者為研究对象,分析不同年龄段患者的病理特征。结果≥65岁患者人表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性率、浸润性导管癌率、孕激动素受体(PR)阳性率、临床分期Ⅰ期率均低于0.05)。结论0.05)。 3 讨论 近年来,受女性生存压力增大、环境污染加剧等多因素影响,乳腺癌人群逐年增多,且呈年轻化趋势。乳腺癌发病率最高的年龄段在36~50岁,51~60岁居其次,最低年龄段为≥65岁,与报道中亚洲高发年龄符合。 研究示,病理类型是重要的对乳腺癌患者预后造成影响的因素,有文献指出,浸润性导管癌为最常见乳腺癌类型,本次研究中共61例,占76.3%,与文献报道的75%~84%一致。浸润性导管癌在≥65岁患者中发病率低于<65岁患者,但小叶癌在此年龄段发病率却成高于<65岁患者显示,相较浸润性导管癌,小叶癌有相对理想的预后[2,3]。就病理特征而言,年轻乳腺癌患者预后差,侵袭性强,年轻乳腺癌患者以浸润性癌为主,且多为浸润性导管癌,有研究示,其原发肿瘤直径也呈较大显示,pTNM分期较晚,HER-2呈高表达,是对预后造成独立影响的因素。我国老年乳腺癌的原发病灶明显大于年轻患者,但有较低的局部淋巴结转移率,表明老年乳腺癌有较好的生物学行为。有报道示,老年患者患小叶癌、小管癌及粘液癌的比例高于年轻患者,从组织学上分析,有更理想的预后[4-6]。 大量报道指出,年轻乳腺癌患者以肿瘤体积大、分期晚为主要表现,而老年患者与之相反[7,8]。本次选取的病例,肿瘤T4期在≥65岁患者中占有较高比例,表明相较其他年龄段,原发灶呈更大显示。TNM分期中,Ⅰ期在≥65岁患者中均居较低水平,Ⅳ期居较高水平,与部分文献报道不同,可能与我国妇女未彻底接受健康普查,特别是老年群体,乳腺健康常识缺乏,无法较好的对乳房自我检查,有乳房肿物出院时,也较少到院就诊相关,促使确诊时,病灶较大,临床分期较晚,严重者甚至已远处转移[4,5]。HER-2指标及孕激素受体、雌激素受体指标表达是对乳腺癌患者进行分期分型的基础,也可对治疗方案的制定和预后的评估提供重要参考。有研究示,青年患者HER-2有较高的阳性率,孕激素受体、雌激素受体有较低的阳性率[9,10], 提示老年乳腺癌患者相较中青年患者,有更好的生物学行为。 综上所述,<65岁乳腺癌患者病情发现早,原发灶呈較小显示,但生物学行为较差,HER-2有较高阳性率;而≥65岁乳腺癌患者HER-2阳性率低,病理类型较好,但确诊时分期较晚,原发灶呈较大显示。 参考文献
乳腺癌诊疗方案 乳腺癌中医称之为“乳岩”,其临床特点为乳房部肿块,质地坚硬,溃后凸如放莲或如菜花。据资料统计发病率占全身各种肿瘤的 7-10%,为女性最常见的恶性肿瘤之一,仅次于子宫瘤。其发病与遗传因素有关,以绝经期前后的妇女(40-60岁之间)发病率最高,多因情志不畅,肝郁不舒,气滞血瘀;或冲任失调,经络阻塞;或脾虚失运,痰浊内生,痰瘀互阻所致,治宜疏肝解郁,调理冲任,化痰散络等。 一、诊断 (一)疾病诊断 诊断标准:参照中华人民共和国卫生部医政司编<中国常见恶性肿瘤诊治规范>。 1、病史及体检 询问肿物发生时间、疼痛、及与月经关系,有无乳头溢液,有否作过治疗,既往乳房是否等大,乳头是否内陷,局部是否治检,及子宫或甲状腺功能性疾病,询问月经及婚育史,是否妊娠,哺乳期,家庭中恶性肿瘤病史,特别有否乳腺癌,体检中注意观察双侧乳房外形,有否静脉回张,乳头位置及分泌物,皮肤有否红、肿、结节及湿疹样变。记录肿块部位,大小,形状,质地,表面情况,活动度,与皮肤、
胸大肌、胸壁关系,积压乳头有否溢液,数量,性质,管口部位,注意腋窝及锁骨上淋巴结,绘图表示乳房肿块与腋窝肿大淋巴结。 2、病理、细胞学诊断 (1)脱落细胞学检查:早期管内癌有乳头溢液者,可将液体作涂片细胞学检查,乳头糜烂疑Paget病者可作刮片或印片检查。 (2)针吸细胞学检查:可部分代替冰冻切片检查,阳性可确诊,阴性不能除外,应进一步作活组织检查,操作时应注意避免造成肿瘤的播散。 (3)活组织检查:包括切除及切取活检。除非肿瘤很大,一般均以切除活检为好。最好能同时作冰冻切片检查,如果恶性的则作根治性手术。标本应常规作受体测定。如无冰冻切片检查条件,病理证实后,应在不迟于2周内作手术治疗. 3、其他辅助检查 1)、乳腺X线摄影:有干板照相和钼靶X线照相两种方法。 2).B超检查。 3).近红外线乳房扫描。 4).CT:乳癌CT表现与钼靶X线片相似,并可清晰显示腋淋巴结与内乳淋巴结。 5).疑有肺、肝或骨转移者应作相应的检查。 乳腺癌的诊断多依据临床表现、影像学检查、病理学检查和细胞学检查以及血清学检查进行综合判断,其中病理学、细胞学检查结果是诊断乳腺癌的金标准。
MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可,10-15%的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0.25%的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2-5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞
细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代;每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基 +5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件:37℃ 5% CO2 消化条件:0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液,消化5-10min 传代的比例:1:2~1:4 换液时间:2~3天换液一次 冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151712.6 (22)申请日 2019.02.28 (71)申请人 贵州省人民医院 地址 550002 贵州省贵阳市南明区中山东 路83号 (72)发明人 侯净 倪青 魏娜 贾琦 刘欣 胡诗航 (74)专利代理机构 北京栈桥知识产权代理事务 所(普通合伙) 11670 代理人 潘卫锋 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12N 15/85(2006.01) (54)发明名称 一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构 建方法 (57)摘要 本发明公开了一种HER2基因过表达的乳腺 癌细胞系的构建方法,包括以下步骤:S1:对乳腺 癌细胞进行培养;S2:通过对乳腺癌细胞PCR扩 增,建立表达系统;S3:对乳腺癌细胞系进行构 建,S4:进行细胞观察和荧光强度对比。本发明通 过实时荧光定量PCR检测HER2基因在mRNA中的表 达情况,以证明细胞系构建成功。本发明构建的 乳腺癌细胞系可以稳定表达HER2基因,具有整合 效率高,假阳性率低等优点,为进一步研究HER2 基因乳腺癌发生、发展、治疗及后续耐药过程中 提供基本且有力的研究工具。权利要求书2页 说明书7页CN 109694853 A 2019.04.30 C N 109694853 A
权 利 要 求 书1/2页CN 109694853 A 1.一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,包括以下步骤: S1:将新鲜的乳腺癌细胞在含有10%FBS的液体培养基中,在温度为30-35℃条件下培养1-2h,然后用FBS充分洗涤后,置于转动频率为50-80r/min、温度为20℃的恒温摇床上进行悬浮细胞培养,对培养后的细胞通过灭菌处理,再100目过滤,进行转接培养3-5次,再在水浴温度为30℃、通气量为5-10m3/h的条件下震荡处理2-4h,得到乳腺癌细胞; S2:提取乳腺癌细胞的总mRNA,将总mRNA进行稀释后放入到反应离心管,在温度为60-75℃的条件下,加入反转录缓冲液,然后温度按照1.5℃/min的降温速率下降至20-30℃,向其加入反转录酶、DNA聚合酶,期间不断用磁力棒搅拌处理,处理30-45min,得到cDNA,再对得到的cDNA通过上下引物分别进行PCR扩增,通过切酶SnaBI剪切,进行琼脂凝胶电泳,通过pBS-T Mini Kit中片段连接的方法,分别克隆到pBS-T载体中,通过电泳结果筛选及其琼脂糖凝胶电泳,获得质粒; S3:所述质粒作为模板,pGenesil-1载体,构建出相应的pGenesil-ETV1A、pGenesil-ETV1B、pGenesil-ETV1C、pGenesil-NC重组siRNA表达载体;在200μlPCR管中配制如下连接体系:pGenesil-1/HindⅢ/BamHⅠ载体大片段1μl;双链片段DNA5ul;T4DNAligase1ul;10×T4DNAligasebuffer1ul;ddH2O2μl。以上体系配制好后放入金属浴,16℃反应4小时,将连接产物全部加入到100μlDH5α感受态中,冰浴15min,加入500μlLB液体培养基,在温度为30℃,70rpm条件下,振荡培养1h,然后在35℃热激90s后立即冰浴100s,取150μl培养物涂布于LB/ Kan平板上37℃倒置培养10小时; S4:对培养后培养物进行转染Marc-145细胞,通过消化,振荡过滤将Marc-145细胞重选,调节细胞悬浮液密度,培养3-6h,然后将培养后的Marc-145细胞放入到四孔板中培养,待细胞密度为60-70%时,向四孔中分别加入转染试剂离心搅拌,观察细胞病变,培养4代后,加入含有乳腺癌细胞的新鲜培养基培养3-5h,洗涤,观察细胞状态及荧光强度。 2.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,所述步骤S1中液体培养液为硝酸铵15-20g/L、黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L。 3.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,所述步骤S1中液体培养液为黄豆粉3-7g/L、磷酸氢二钾0.03-1g/L、硝酸铵15-20g。 4.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,所述步骤S2中PCR反应体系及反应条件:通过无菌超纯水稀释至10μM/L;取已经稀释好的两条互补的mRNA靶点序列片段各1.5μl,10×T4buffer1μl,加水至总体积20μl,放于200μl的PCR管中,RT产物8.7uL,4×PCR缓冲液3uL,15mM的氯化钾3uL,PCR引物溶液1.5uL,DNA聚合酶0.5uL混匀后加入到87孔样品板上进行PCR反应,反应条件:85℃,8min;90℃,25min,60℃,30秒钟,65℃,2min,循环30次;70℃1min;4℃直至收取PCR产物。 5.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,所述步骤S2中所得的质粒通过阳性克隆筛选,进行阳性克隆筛选时,先平均取得质粒,均匀涂布到含去去甲基金霉素培养基平板上,培养6h,然后抽提质粒,将培养物在温度为20-30℃的条件下,滤膜过滤,通过EcoRI进行单酶切鉴定,被EcoRI切开的可能是阳性克隆。 6.如权利要求1所述的一种HER2基因过表达的乳腺癌细胞系的构建方法,其特征在于,所述步骤S4中从-70℃中取出质粒细胞,冰上放置4min,待质粒细胞解冻后,加入9μL连接产物,轻柔混匀内容物,冰中放置10min;然后将之放到预加温到30℃的水浴锅中,静置70s;快 2
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标 很多乳腺癌患者和家属都苦于看不懂乳腺癌常见的免疫组化指标而无法对医生的治疗进行判断,今天海南亚洲制药集团的小编就这个问题为您详细阐述。 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,它的发病常与遗传有关,以及40-60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2%的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。治疗乳腺癌主要有手术、化学药物治疗、放射治疗和现代中药治疗等手段,临床必须根据病期早晚,选择不同方法联合应用,选择合理时,比单一方法疗效好。近年来研究发现人参皂苷Rh2(最佳含量16.2%)抑制癌细胞增殖作用的能力最强,是人参皂苷中的最主要抗癌活性成分。人参皂苷Rh2通过抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化凋亡对多种肿瘤有效,也为应用于乳腺癌治疗提供了新的武器。 乳腺癌为激素依赖性肿瘤,就是说乳腺癌细胞的生长依赖雌激素和孕激素的刺激,雌孕激素通过与乳腺癌细胞上相应受体结合发挥作用,免疫组化表现为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)阳性。PR的形成直接受ER的控制和调节,故PR阳性的乳腺癌,ER大多为阳性。但有些细胞在癌变过程中,其受体系统保留很少或完全丧失,不能再作为激素的靶细胞,其生长不再受激素的控制与调节,表现为ER阴性乳腺癌。 乳腺癌常见免疫组化指标:雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR) 临床上可以通过对雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的检测,得出肿瘤细胞内激素受体含量的水平,从而提示乳腺癌的预后信息和指导内分泌治疗。据报道高分化肿瘤或临床分期较低的肿瘤ER、PR更可能阳性;乳腺癌ER阳性率约为50%~80%,PR阳性率约为50%。ER及PR阳性肿瘤对内分泌治疗反应性高,有效率达55%~60%,受体阴性者有效率5%~8%。ER和(或)PR阳性患者较ER和(或)PR阴性患者有较好的预后。 乳腺癌常见免疫组化指标:雌激素调节蛋白PS2 雌激素调节蛋白PS2是由激素依赖细胞分泌的,可以通过自分泌和旁分泌起作用,是预测乳腺癌预后和内分泌治疗疗效的另一项重要指标。通常ER阳性乳腺癌细胞,PS2也呈现高水平表达。PS2在乳腺癌表达的阳性率在43%~58%之间。PS2与ER表达的正相关性,在绝经前的妇女(50岁以下)表现更为明显。PS2(+)ER(+)病例大约占83%,很少ER(-)和PR(-),而PS2(+)(约4%)。作为乳腺癌抗雌激素治疗预测指标,PS2可能优于ER、PR,若三者结合则可达到满意的预测效果。 乳腺癌常见免疫组化指标:预后指标PS2 PS2作为预后指标,对无淋巴结转移者的意义尤为重要。No(无淋巴结转移)的乳腺癌患者,在采取单纯手术治疗的情况下,约20%~30%的患者会复发。有研究发现,PS2阳性与阴性两组在N0患者复发率相差31%,死亡率相差13%。因此PS2成为确定N0组患者属于危险组或非危险组的参考指标之一。PS2检测对淋巴结阳性(N+)患者也同样可分成危险组和非危险组,两组预后差别非常明显。乳腺癌ER(-)、PR(-)、PS2(-)的患者预后差,治疗失败率为83%,5年存活率仅为41%。 乳腺癌常见免疫组化指标:标记细胞增殖状态的抗原Ki67 Ki67是一种标记细胞增殖状态的抗原,其功能与有丝分裂密切相关,在细胞增殖中是不可少的,阳性说明癌细胞增殖活跃。Ki67的监测多用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度,也用于探讨细胞增殖活性、细胞周期与肿瘤的生长方式、浸润方式、复发、转移等生物学行为及预后的关系。 乳腺癌常见免疫组化指标:细胞周期蛋白(CyclinD1) 细胞周期是由细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖蛋白激酶(CDK)和细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白(CKI)来进行调控的。不同时相(G1、S、G2、M)间存在关键的调控点。细胞周期蛋白(CyclinD1) 与特定的CDK结合构成复合体,可在G1/S 交界处将信号转导途径与细胞周期调控联系起来,完成各个时期的转换。其过度表达可缩短G1 期,并减少对生长因子的依赖
MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可,10- 15%的小 牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0.25%的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml 培养瓶)静置消化2—5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该 细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7BS基因 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS 细胞传代方法1:2~1:4 传代;每周2~3次 细胞传代情况C5 细胞冻存条件MDA-MB-231人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件:37 C 5% CO2 消化条件:0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA 溶液,消化5-10min 传代的比例:1 : 2~1: 4 换液时间:2~3天换液一次 冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度:1-2 X 10 6/管,液氮保存 MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏方法:取出冻存管后,投入37 C水浴中,震荡解冻2 min , 酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入 5 ml 37 C预热的培养基,并清洗冻存管一次,将离心管离心( 1000 rpm , 5 min),弃去上清液,再加入 2 ml培养■基,转入培养瓶中培养。 产品名称:人正常乳腺细胞Hs 578Bst 规格:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点:细胞代数为4-5代左右 包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书 细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
MCF-7 就是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可, 10-15%的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0、25%的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2-5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的就是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231就是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体与WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代;每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件:37℃ 5% CO2 消化条件:0、25% (w/v) Trypsin-0、53mM EDTA溶液,消化5-10min 传代的比例:1:2~1:4 换液时间:2~3天换液一次 冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度:1-2 ×10 6/管,液氮保存 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞复苏方法:取出冻存管后,投入37 ℃水浴中,震荡解冻2 min,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37 ℃预热的培养基,并清洗冻存管一次,将离心管离心(1000 rpm,5 min),弃去上清液,再加入2 ml培养基,转入培养瓶中培养。 产品名称:人正常乳腺细胞 Hs 578Bst 规格:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点:细胞代数为4-5代左右 包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书 细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
咳嗽,咳痰较前明显减轻,憋气明显好转,痰色转白,纳可,大便调,舌红,苔薄黄,脉沉细。燥热已减,重点攻破痰瘀热毒之结,拟以小陷胸汤合千金苇茎汤化裁,药用:瓜蒌皮15g,薤白10g,清半夏10g,桃仁5g,沙参15g,海浮石10g,川贝母10g,百合30g,枇杷叶15g,芦根30g,杏仁10g,生薏苡仁15g,金荞麦15g,桔梗10g,旋覆花10g,白花蛇舌草30g,草河车15g,鸡内金30g,生麦芽30g,鱼腥草15g,炙甘草10g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中小陷胸汤清热化痰,宽胸理气,千金苇茎汤清热生津散结,鸡内金、生麦芽开胃进食散结。 2006年6月26日。左肺癌术后3年多,CT示:肺外缘、左肺门小结节与前比无明显变化。已不咳嗽,晨起有少量黏痰,上腹胀,舌红,苔少黄,脉沉细。病情稳定,上方加鳖甲、炮山甲以加强软坚散结消瘤之效。14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次 收稿日期:2009-09-30 作者简介:程旭锋(1976-),男,河南郑州人,主治医师,博士研究生,主要从事中西医结合防治乳腺癌的研究。 通讯作者:刘胜。服,每日2次。 2009年4月29日。左肺癌术后6年4个月。复查双肺小结节灶无明显变化。现有时前胸、后背间断性疼痛,咳嗽,少量白痰,右腰部酸痛,纳可,眠可,尿频。脉弦细,舌红,苔薄黄。药用:百合30g,浙贝母10g,鼠妇10g,生地10g,熟地10g,桔梗10g,杭白芍15g,金荞麦15g,炮山甲10g,鳖甲15g,灵芝10g,橘核10g,乌药10g,僵蚕10g,桑寄生15g,桑螵蛸10g,代赭石15g,鸡内金30g,生麦芽30g,白花蛇舌草30g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中僵蚕,鼠妇皆虫类药之轻清者,善入肺化痰逐瘀散结;患者有前列腺肥大症,桑螵蛸、桑寄生补肾,橘核、乌药、灵芝理下焦,愈尿频。 现患者已术后6年余,仍在治疗中。 按本例患者肺癌术后肺外缘、左肺门小结节, CEA高于正常值,辨证为肺燥津伤,肺失清肃,兼气阴两伤,痰瘀互结。治疗给予清肺润燥,益气养阴,兼以清热解毒,软坚散结等治疗,之后根据病情变化随证用药,坚持治疗4年(术后6年),病情一直稳定,收到了延长寿命,改善生活质量的理想效果。 刘胜治疗乳腺癌的辨治特点与遣方规律 程旭锋,刘玲琳,吴春宇,宋晓芸 (上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科,上海200032) 摘要:从辨证论治、立法原则、遣方规律、用药经验四方面总结了刘胜教授防治乳腺癌复发转移的经验,强调了重视辨病、扶正为主、擅用温补、兼顾变证的学术特点。 关键词:乳腺癌;中医药;经验 中图分类号:R249文献标识码:A文章编号:1000-1719(2010)05-0793-02 Character istis of D ifferen tiati on w it h Treat m en t and R egu lar Patteron of Prescr i p ti on of LI U Sh eng Treati ng Breast Cancer C H ENG X u-feng,LIU L ing-lin,W U Chun-yu,S HONG X i ao-yun (Longhua H osp ital A ff itiarted to Shangha i Unorersit y of TCM,Shanghai200032,China) Abstrac t:P ro fesso r L i u-sheng c s exper i ences of t he preventi on and cure fo r t he re l apse and m etastasis o f breast cancer w ere su mm ar i zed i n Syndrom e D iffe renti a tion and T reat m ent,the princ i p l e of trea t m en t and prescr i pti on,experiences of medicati on,aca-de m i c characte ristics of reconstruction of t he d ifferenti a l diagnosis of diseases,m a i n o f t he strengthen i ng body res i stance,be i ng ex-pert i n supple m ent and warm,conside ration o f de teriorated case w ere e m phasized. K ey word s:Breast cance r;T rad iti ona l Chinese M ed i c i ne;Exper i ences 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈明显上升趋势。目前国际公认乳腺癌是全身性疾病,并强调综合治疗和个体化治疗,中医药调治在乳腺癌治疗中的重要性也逐步被认同。中医药治疗有助于减轻乳腺癌西医疗法的不良反应,提高疗效,调节免疫功能,从而达到改善生活质量,抑制肿瘤生长、延长生存期的目的。刘胜教授是上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科主任医师,中华中医药学会外科分会副主任委员。师从我国著名中医外科专家陆德铭教授,深得其真传,形成了独到的中医药治疗乳腺癌的思路与方法。现将其辨证及用药经验报道如下。 1辨病分期结合辨证 对于乳腺癌术后患者,刘师强调应遵循辨病与辨证相结合的原则,根据患者所处的不同治疗阶段,一般将患者分为3期:即手术放化疗期、内分泌治疗期、相对稳定期。然后根据临床分期,结合患者接受的西医治疗手段,分清虚实主次,辨明邪正盛衰,综合论治。刘师通常认为,乳腺癌术后患者,虽然临床分期不同,
如何看懂乳腺癌常见免疫 组化指标 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
如何看懂乳腺癌常见免疫组化指标 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,它的发病常与遗传有关,以及40-60岁之间、绝经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2%的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。治疗乳腺癌主要有手术、化学药物治疗、放射治疗和现代中药治疗等手段,临床必须根据病期早晚,选择不同方法联合应用,选择合理时,比单一方法疗效好。 乳腺癌为激素依赖性肿瘤,就是说乳腺癌细胞的生长依赖雌激素和孕激素的刺激,雌孕激素通过与乳腺癌细胞上相应受体结合发挥作用,免疫组化表现为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)阳性。PR的形成直接受ER的控制和调节,故PR阳性的乳腺癌,ER大多为阳性。但有些细胞在癌变过程中,其受体系统保留很少或完全丧失,不能再作为激素的靶细胞,其生长不再受激素的控制与调节,表现为ER阴性乳腺癌。 乳腺癌常见免疫组化指标:雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR) 临床上可以通过对雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的检测,得出肿瘤细胞内激素受体含量的水平,从而提示乳腺癌的预后信息和指导内分泌治疗。据报道高分化肿瘤或临床分期较低的肿瘤ER、PR更可能阳性;乳腺癌ER阳性率约为50%~80%,PR阳性率约为50%。ER及PR阳性肿瘤对内分泌治疗反应性高,有效率达55%~60%,受体阴性者有效率5%~8%。ER和(或)PR阳性患者较ER和(或)PR阴性患者有较好的预后。 乳腺癌常见免疫组化指标:雌激素调节蛋白PS2
细胞英文名称MDA-MB-231 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因。 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2~1:4传代;每周2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体58~61,有巨核 使用权限A类实物状态可用 细胞英文名称MDA-MB-468 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞是1977年由Cailleau R等从一位患有转移性乳腺癌的51岁黑人女性的胸腔积液中分离得到的。虽然供体组织的G6PD等位基因杂合,但此细胞株始终表现为G6PD A表型。P53基因273位密码子存在G→A突变,从而导致Arg→His替代。每个细胞上存在1×106个EGF 受体。 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2~1:4传代;每周换液2~3次。传代情况C4 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 细胞英文名称SK-BR-3 [SKBR-3;SKBR3] 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性这株细胞是1970年由Trempe G和Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝;过表达HER2/c-erb-2基因产物。 培养基RPMI 1640 (w/o Hepes) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:2传代;每周换液2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体69~80 细胞英文名称MCF7 [MCF-7] 细胞中文名人乳腺癌细胞 形态特性上皮样生长特性贴壁生长 特征特性该细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构(domes);该细胞表达WNT7B癌基因;TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长;抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。 培养基DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 血清10%FBS其它因子无 传代方法1:3~1:6传代;每周2~3次。传代情况C5 冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性 同工酶染色体72~84 查询培养基,定制缺陷型培养基,规模培养用培养基订购(可参与实验) 培养用常用试剂各品牌评定\推荐(您用过好的产品也可以列出\说明理由,统计后的结果共享) 细胞培养条件查询.细胞订购,细胞规模培养技术交流,培养条件方案交流,
MDA-MB-231细胞系是从一名51岁的白种女性转移性乳腺癌的胸腔积液建立的人乳腺细胞系。该上皮细胞系是医学研究实验室中使用最广泛的乳腺癌细胞系之一,特别是涉及CRISPR/Cas9基因敲除的那些。 由于缺乏ER和PR表达以及HER2扩增,该细胞系最初被归类为“基础”乳腺癌细胞系。然而,由于它表现出claudin-3和claudinin-4的下调,Ki-67增殖标记物的低表达,与上皮-间质转化有关的标记物的富集,因此现在被认为属于claudin-低分子亚型。以及与乳腺癌干细胞(CSC)相关的特征的表达,例如CD44 + CD24- /低表型。这就是为什么许多研究一直专注于基因编辑 MDA-MB-231细胞系的原因。 应用:
1. CRISPR / Cas9诱变使靶向MDA-MB-231细胞的推定癌症依赖性无效。癌细胞需要表达某些基因的表达,这些基因编码肿瘤生长所必需的蛋白质。沉默这些基因的表达或阻断蛋白质的活性可以触发细胞死亡和持久的肿瘤消退。因此,识别和表征癌症依赖性是临床前癌症研究的关键目标。MELK被认为是多种癌症类型的癌症依赖性和推定药物靶标,其中之一是MDA-MB-231细胞系。MELK在乳腺癌细胞中过表达,与患者预后不良有关。此外,据报道,使用RNAi 敲低MDA-MB-231细胞中的MELK可阻止癌细胞增殖并触发细胞周期停滞或有丝分裂灾难。 研究人员设计了针对MELK的七个指导RNA(gRNA),并将每个指导RNA 克隆到一个表达GFP的载体中,并将该指南转导到了三个表达Cas9细胞系中:三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231据报道会上瘾。MELK表达。对过表达的MDA-MB-231细胞中MELK蛋白水平的蛋白质印迹分析证实,CRISPR系统可有效消除MELK表达。
31例乳腺癌临床病理特点分析 摘要】目的:分析乳腺癌临床病理特点。方法:选取我院2013年1月~2014年12月间收取的31例乳腺癌患者作为研究对象,并进行病理学分析,研究其病理 特点。结果:所选31例患者,46~55岁患者发病率为45.16%最高;左右病变部 位P<0.05无统计学差异;浸润型导管癌病发率最高为74.19%;25(80.65%)例 患者存在淋巴结转移,发生率较高。结论:正确掌握最佳治疗时机,有助于女性 降低乳腺癌的病发率,提高乳腺癌治愈率。 【关键词】乳腺癌;临床病理特点;病理学分析 【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)07-0214-02 原发性乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,对女性的身体健康存在着严重 的威胁[1]。本文选取了我院2013年1月~2014年12月间收取的31例乳腺癌患 者作为研究对象,并进行病理学分析,研究了其病理特点,现报道如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 选取我院2013年1月~2014年12月间收取的31例乳腺癌患者作为研究对象,患者年龄38~79岁,平均年龄(56.72±3.28)岁,所有患者均经X线或者超 声检查,发现患者乳腺均有恶性肿瘤。病例分类为:浸润性导管癌16(51.61%)例,浸润性小叶癌6(18.75%)例,小导管内癌5(16.13%)例,管癌3(9.68%)例,黏液癌1(3.23%)。临床表现为:患者乳房肿块活动度尚可,呈卵形,大小 各不相同,直径约1.5~4cm,质地相对坚硬与皮肤不黏连,触摸时患者存在疼痛感。 1.2方法 对31例患者肿块组织进行样本处理,首先,采用10%的中性福尔马林对样 本组织进行8~24固定,通过取材、脱水、透明、切片措施处理,并在处理过程 中记录肿瘤临床情况;其次,采用苏木精~尹红(HE)对样本组织进行颜色,然 后进行分型分级;最后,对样本组织进行用免疫组化标记ER与PR的表现,并对 样本组织进行二次分析,研究其病理特征,并根据研究结果,对患者定制个性化 的治疗方法。 1.3统计学分析 本文所有数据均采用SPSS20.0软件进行统计学分析,其中计量资料采用(x- ±s)表示,计数资料采用(%)表示,P<0.05差异具有统计学差异。 2.结果 2.1发病年龄:所选31例患者,其中38~45岁患者5(16.13%)例,46~55岁患者14(45.16%)例,56~65岁患者7(22.58%)例,66~79岁患者5 (16.13%)例,46~55岁患者发病率为45.16%最高。 2.2发病部位:所选31例患者均为单侧发病,其中左侧发病患者17(54.84%)例,右侧发病患者14(45.16%)例,左右病变部位P<0.05无统计学差异。 2.3病理分析:所选31例患者中浸润型导管癌23(74.19%)例,导管内癌5(16.13%)例,黏液癌2(6.45)例,浸润型小叶癌1( 3.23%)例,浸润型导管 癌病发率最高为74.19%。 2.4淋巴结转移:所选31例患者肿块直径<1.9cm患者为7(22.58%)例, 其中发生淋巴结转移5(16.13%)例;直径1.9~4.9cm患者为19(61.29%)例,
不同年龄阶段乳腺癌患者的临床病理特征比较 发表时间:2017-03-21T15:48:55.457Z 来源:《航空军医》2017年第2期作者:符蓉 [导读] 预后更差,因此,应重视年轻女性乳腺肿瘤的筛查,尽可能早期发现,早期治疗,提高年轻乳腺癌治愈率。 南通大学附属海安医院病理科江苏南通 226000 【摘要】目的:探讨年轻乳腺癌患者和中老年乳腺癌患者在病理中的差异。方法:回顾性分析2010年1月-2016年12月在我院手术的年轻乳腺癌患者25例和中老年乳腺癌患者213例的病理学情况,用免疫组化方法分别检测各病例的ER、PR、HER-2指标,分析两组患者在临床分期、病理分级、免疫分型、淋巴结转移状态的情况。结果:年轻乳腺癌病例占总数10.5%,中老年腺癌病例占总数89.5%。年轻组临床分期较中老年组早,病理分级较高,差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移率两组无显著差异。结论:年轻乳腺癌与中老年乳腺癌恶性程度更高,预后更差,应该重视。 【关键词】乳腺癌;年轻;中老年;病理特征 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一[1],本研究纳入我院近近年来年轻乳腺癌患者(≤35岁)的肿瘤病理资料和免疫表型,与同期35岁以上乳腺癌患者相比较,为年轻乳腺癌病理学和生物学特性提供依据。 1 资料与方法 1.1一般资料 选取2010年1月-2O16年l2月在我院手术的乳腺癌患者238例,根据患者年龄分成两组,青年组为年龄≤35岁,中老年组为年龄>35岁。青年组25例(10.5%),中老年组213例(89.5%)。所有病例均经病理确诊,诊断标准参照《世界卫生组织肿瘤分册·乳腺和女性生殖器官肿瘤的病理学与遗传学分类》[2]。 1.2方法 所有标本石蜡包埋后切片,用EnVision免疫组化试剂盒,采用SP方法,按说明书步骤行免疫组化染色,DAB显色,用PBS代替一抗作为阴性对照。一抗标志物有ER、PR、HER-2抗体为即用型小鼠抗人单克隆抗体,ER-IPR购于上海长岛公司,HER-2、免疫组化二抗试剂盒均购于福建迈新公司。 1.3判定标准 用PBS液代替一抗体作阴性对照,细胞相应部位出现黄棕色反应为阳性。ER、PR定位于细胞核,以肿瘤细胞着色>10%判断为阳性。HER-2定位于肿瘤细胞膜,染成棕黄色,<10%的癌细胞有细胞膜染色、或弱的不完整染色、或无浸润性癌细胞染色,为阴性;>10%的癌细胞见不完整的细胞膜弱染色,为+;>10%的癌细胞见完整的不一致性的细胞膜染色,较弱但有明显的网络状分布,或癌细胞<30%见强的和完整的细胞膜染色,为++;>30%癌细胞见强而一致的细胞膜染色,为+++。HER-2(-)HER.2(+)为阴性,HER-2(++)、HER-2(+++)为阳性[3]。乳腺癌分子免疫表型[4]见表1。 表1 乳腺癌的分子免疫表型 3 讨论 肿瘤分子分型是美国国立癌症研究所(NCI)于1999年提出的,通过分子分析技术使肿瘤的分类由形态学转为以分子特征为基础的新的肿瘤分类系统。2011年《st.Gallen早期乳腺癌初始治疗国际专家共识》将乳腺癌分为luminal A型、luminal B型、Her-2过表达型,基底样型,目前临床广泛应用。luminal A型乳腺癌的分子病理学特征为ER阳性或/和PR阳性,Her-2阴性,Ki-67<14%[5-6]。luminal A型发病率占乳腺癌发病率的40%-50%,是乳腺癌最为常见的类型,预后比其他亚型好[7]。luminal B型为ER阳性或PR阳性,Her-2阳性,发病率约占乳腺癌发病率的8%,luminal B预后不是最差的,但其早期复发风险却远高于其他3种亚型[8]。Her-2过表达型为ER、PR阴性,Her-2阳性,Ki-67多为高表达;Her-2过表达型拥有最差的5年无病生存率和总生存率[9]。基底细胞样型(basal-like subtype BLBC)为ER阴性和PR阴性,Her-2阴性乳腺癌,占乳腺癌的8%-20%,平均发病年龄49.9岁,呈高度侵袭性,较多发生局部或远处转移,较少发生淋巴结转移,预后最差[10]。 本研究结果显示:在年轻乳腺癌患者中I、II期的病例较中老年患者多,而III、Ⅳ病例较中老年患者少,差异有统计学意义(P<0.05),这可能与年轻患者更注意健康检查,更与早期发现有关。从病理分级上看,年轻患者病理III级占48%,中老年患者病理III级占19.2%,差异有统计学意义(P<0.05),这可能是导致年轻乳腺癌预后较差的原因。luminal A型青年组16.0%,老年组61.1%,HER-2过表达青年组32.0%,老年组11.27%,基底细胞样型青年组28.0%,老年组9.4%,有显著差异,这也说明年轻乳腺癌患者较老年组恶性程度