抗原与免疫血清的制备(实验报告)

抗原与免疫血清的制备

××××××××××抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践中,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。

免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术,高效价,高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等),也可供特异性免疫治疗用[1]。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体,常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时,则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此,如欲获得高特异性的免疫血清,必须予先纯化抗原。此外,抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等,也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价:

ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体(抗原)上,使待检物中相应的抗原(抗体)与酶标记抗体(抗原)发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时,酶能高效、专一催化、分解底物,生成有颜色的产物。根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原(抗体)以及量的大小。该方法可对待检样品进行定性和定量分析;同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点,因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。

凝集反应是一种经典的抗原抗体反应,也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一,它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象[2]。凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌,优点是极端快速,为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段;后者是一种定量法,现已发展成微量滴定凝集法,它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价),也是诊断肠道传染病的重要方法。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫(抗体)和细胞免疫(致敏的T淋巴细胞及其产物多种淋巴因子)的过程。这种结合反应的特异性可能是生物学中已知的最特异的反应[3]。

1 材料与方法

1.1 实验材料

24h培养的大肠杆菌斜面,8~12周龄的健康小鼠,兔子。

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