应用变性高效液相色谱方法探究急性白血病FLT3、DCK基因突变

正常入这个位点为Ｃ

图３正常人标本测序图，第３６７位核苷酸为Ｃ，ＢＬＡＳＴ比对为ＤＣＫ基因编码序列第５２３位核苷酸Ｃ。

突变标本为Ｃ／Ｔ杂合

图４６６号ＡＭＬ患者正向测序图

反向测序为Ｇ／Ａ杂合

图５６６号ＡＭＬ患者反向测序图

注：６６号ＡＭＬ患者的测序图，ＢＬＡＳＴ比对为ＤＣＫ基因编码序列第５２３位核苷

酸ｃ，ｒ（ｄＡ）杂舍，导致第１２２位Ｐ（脯氨酸）被Ｓ（丝氨酸）取代。

ｌＯ

突变位点Ｃ／Ｔ杂台

图６注：１７号ＡＭＬ患者的测序图，ＢＬＡｓＴ比对为ＤｃＫ基因编码序列第５２３位核苷酸Ｃ／Ｔ（Ｇ／Ａ）杂台，导致第１２２位Ｐ（脯氨酸）被Ｓ（丝氨酸）取代。

３．突变分析测序结果显示：６６号ＡＭＬ患者第３７４位核苷酸Ｃ／Ｔ杂合（见图４），反向测序为Ｇ／Ａ杂合（见图５），１７号ＡＭＬ患者第３６７位核苷酸ｃ／ｒ杂合突变（见图６），经ＢＬＡＳＴ比对，突变位点均位于ＤＣＫ基因编码序列的第５２３位核苷酸，Ｃ／Ｔ的杂合突变导致了第１２２位的脯氨酸被丝氨酸取代（Ｐ／Ｓ）。这个位点的突变目前未见其它文献报道。

４．突变与临床的关系５例突变患者中，初治２例，１例治疗１个疗程后末完全缓解出院，１例为门诊病人没有追踪到；复发的３例病人均已化疗两个疗程以上，仍无缓解迹象，其中２例出院，ｌ例死亡。白血病分型，２例为Ｍ５，１例Ｍ２，ｌ例Ｍ３，１例急淋。因时间有限，资料不完整，这些数据还不足以表明其关联性。

讨论

治疗急性髓系白血病的化疗药物中，Ａｒａ－Ｃ列为首选药之一。但是，临床上耐药问题的出现是导致化疗失败的主要原因之一。对大多数复发或难治的ＡＭＬ，标准或大剂量的包括Ａｍ－Ｃ的化疗药物的使用并未取得好的转归。耐药的因素很多，但Ａｒａ－Ｃ确切的耐药机制并不完全明了。ＤＣＫ作为Ａｒａ．Ｃ发挥药理作用的重要代谢酶，其表达及变异必然影响Ａｒａ－Ｃ的药理作用。

本实验研究选取１６０例急性白血病患者作为研究对象，将其分为两组，初治８２例，复发７８例，正常对照１例，从分子水平研究ＤＣＫ基因的变异情况。

Ｍ

Ｎ７：泳道Ｍ为ＰＵＣ８，泳道１为阴性对照，泳道２为止常人对照，片段人小为３６６ｂｐ，对应丁ｍａｒｋｅｒ３３１～４０２ｂｐ之间，泳道３～８为有ＦＬＴ３?ｌＴＤ的临床标本。

１．２ＦＬＴ３．ＩＴＤ突变患者与就诊时ＪＩＩＬ细胞计数的关系

对收集到的８５名患者就诊时血常规进行分析。ＦＬＴ３．ＩＴＤ突变组患者就诊时外周血白细胞均数为７６．８９×１０９／Ｌ，而未突变组患者白细胞均数为３１．３９×１０９／Ｌ，两组问有显著差异（Ｐ＜０．０５）。突变组就渗时骨髓原始细胞均数为７０．９２，未突变组原始细胞数均数为６４．６０，两组间无差异（户＞Ｏ．０５）。

１．３ＦＬＴ３．ＩＴＤ突变患者与年龄、性别的关系

对收集到的１１６例患者的年龄和性别情况进行分析，结果显示ＦＬＴ３．ＩＴＤ＋与ＦＬＴ３．ＩＴＤ’组在年龄、性别上差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。

２．ＤＨＰＬＣ图谱分析

２．１ＦＬＴ４０２（扩增产物为４０２ｂｐ，见表２）图谱分析：正常人及突变患者的ＦＬＴ４０２（２０号外显子）ＰＣＲ扩增产物上样于ＤＮＡｓｅｐ柱，突变患者的ＤＨＰＬＣ图谱呈现低矮、三峰峰型外，『Ｆ常人ＤＨＰＬＣ图谱则为单峰（见图８、图９）。