bpA在染毒雄性大鼠血清中时间浓度关系

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双酚Ａ在染毒雄性大鼠血清中时间．浓度关系陈刚黄春妍仲齐庆鞠晶昀潘少聪王春姚陈娟

【摘要】目的探讨经口给予雄性大鼠双酚Ａ（ｂｉｓｐｈｅｎｏｌＡ，ＢＰＡ）后，血清中ＢＰＡ时间—浓度关系。方法６６只无特定病原体（ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ，ＳＰＦ）级雄性ｓＤ大鼠应用数字表法随机分为１０个实验组和１个对照组，每组６只。各实验组大鼠一次性灌胃给予３００ｍｓ／ｋｇ剂量的ＢＰＡ后，在０．５、１…２４６、１２、２４、３６、６０、８４ｈ时间点各采集一组大鼠血液，分离出血清，用荧光一高效液相色谱法

检测血清中游离型和总ＢＰＡ浓度。结果大鼠一次性经口染毒后，１ｈ血清中总ＢＰＡ浓度最高，达１７．１３ｔ墉／ｍｌ，２ｈ血清中ＢＰＡ浓度急剧下降，２４ｈ血清中总ＢＰＡ浓度又上升到１５．１８¨ｇ／“，持续观察８４ｈ，血清中ＢＰＡ仍有０．５１ｔ腰ｏ／ｍｌ。游离型ＢＰＡ含量较低，染毒０．５ｈ，血清中游离型ＢＰＡ浓度为０．５７斗ｇ／ｍｌ，而后急剧下降，１ｈ下降到０．０６彬ＩＩｌｌ，４ｈ下降到０．０３峙／ＩＩｌｌ，３６ｈ仅有０．０１峭／Ｉｌｌｌ。在染毒０．５ｈ，游离型ＢＰＡ在血清中所占的百分率最高，为血清总ＢＰＡ的４．１５％（０．５７／１３．７３），其他各时间点血清中游离型ＢＰＡ所占的百分率均较低。结论一次性经口给予大鼠ＢＰＡ后，血清中主要以结合型ＢＰＡ存在，血清总ＢＰＡ随染毒时间的延长出现双峰现象，可能与ＢＰＡ代谢过程中肝肠循环有关。

【关键词】酚类；色谱法，液相；血药浓度；时间因素

Ｔｈｅｔｉｍｅ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｓｅｒｕｌｎｂｉｓｐｈｅｎｏｌＡｉｎｍｕｌｅｒａｔｓＣＨＥＮＧ口昭，ＨＵＡＮＧＣｈｕｎ—ｙａｎ，ＺＨＯＮＧＱｉ—ｑｉｎｇ，ＪＵＪｉｎｇ－ｙｕｎ，ＰＡＮＳｈａｏ－ｃｏｎｇ，ＷＡＮＧＣｈｕｎ，ＹＡＯＣｈｅｎ－ｊｕａｒＬＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ２２６００７，Ｃｈｉｎａ

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ

ａｕｔｈｏｒ：ＹＡＯＣｈｅｎ－ｊｎａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｙｃｈｅｎｊｕａｎ＠ｙａｈｏａｃｏｒｎ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｔｉｍｅ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂｉｓｐｈｅｎｏｌＡ（ＢＰＡ）ｉｎ

ｍａｌｅＳｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ｒａｔｓａｆｔｅｒｓｉｎｇｌｅｏｒａｌＢＰＡａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｔｏｔａｌｏｆ６６ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｈｏｇｅｎ

ｆｒｅｅ（ＳＰＦ）ＳＤｍａｌｅｒａｔｓｗｅｒｅｄｉ、，ｉｄｅｄｉｎｔｏ１０ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎ＝６）．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｒａｔｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＢＰＡｏｆ３００ｍｅ／ｋｇｂｙｏｒａｌｇａｖａｇｅａｎｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｔａｋｅｎｆｒｏｍｏｎｅｇｒｏｕｐａｔ０．５，１，２，４，６，１２，２４，３６，６０，８４ｈｔｉｍｅｐｏｉｎｔａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｓｅｒｌｌｍＢＰＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ—ｈｉｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＦＬ—ＨＰＬＣ）ａｎａｌｙｓｉ８．ＲｅｓｕｌｔｓＡｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆ３００ｍｓ／ｋｇ，ｔｈｅｔｏｔａｌｓｅｒｕｍＢＰＡｃｏｎｃｅｎ打ａｆｉｏｎｏｆ１７．１３∥ＩＩｌｌｗａｇｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｉｎｒａｔｓａｔ１ｈ，ｔｈｅｎｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｉｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏ１５．１８斗ｇ／ｍｌａｇａｉｎａｔ２４ｈ．ｔｈｅｎｇｒａｄｕａｌｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｏ０．５１ｔ蝎：／ｍｌａｔ８４ｋＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆｓｅｌ＇ｕｍｆｒｅｅＢＰＡｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｏｔａｌｓｅｒｕｍＢＰＡａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｓｅｒｕｍｆｒｅｅＢＰＡＷａｓ０．５７¨ｇ／Ⅱｌｌａｔ０．５ｈａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＴｈｅｓｅｒｕｍｆｒｅｅＢＰＡｌｅｖｅｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｏ０．０６斗ｇ／ｍｌａｔｌｈ，０．０３∥１１１ｌａｔ４ｈ，０．Ｏｌ∥Ｔｎｌａｔ３６ｈａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＴｈｅｆｒｅｅＢＰＡＷａｓｏｎｌｙ４．１５％（０．５７／１３．７３）ｉｎｔｏｔａｌＢＰＡｉｎｓｅｒｕｍａｔ０．５ｈａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆ３００ｍｓ／ｋｇＢＰＡ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｃｏｎｊｕｇａｔｅｄＢＰＡｗａｓｔｈｅｍａｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｏｆＢＰＡｉｎｒａｔｓｅｒｕｍａｆｔｅｒｓｉｎｇｌｅｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＥｎｔｅｒｏｈｅｐａｔｉｃｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｏｆＢＰＡｇｌｕｅｕｒｏｎｉｄｅｉｎｒａｔｓｍａｙｒｅｓｕｌｔｓｉｎｔｗｏｐｅａｋｌｅｖｅｌｓｏｆｔｏｔａｌＢＰＡｉｎｓｅｒｕｌｌＬ

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｐｈｅｎｏｌｓ；Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｌｉｑｕｉｄ；Ｐｌａｓｍａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；Ｔｉｍｅｆａｃｔｏｒｓ

双酚Ａ（ｂｉｓｐｈｅｎｏｌＡ，ＢＰＡ）是全球产量最高的

化学物之一。它是合成聚碳酸酯塑料和环氧树脂的

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５３０６２４．２０１０．０１．００９

基金项目：国家自然科学基金（２０７７７０４２，２０８７７０４５）；江苏省高

校自然科学基金（０８ＫＪＤ３３０００２）

作者单位：２２６００７南通大学公共卫生学院职业医学与环境毒理

学教研窀

通信作者：姚陈娟，Ｅｍａｉｌ：ｙｃｈｅｎｊｕａｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃ．ｏｍ．论著．

单体，这些合成产物广泛用于食品和饮料的容器，牙科的填充材料等。由于含ＢＰＡ产品在日常生活中广泛应用，人群血清和尿中均能检测到ＢＰＡｕ引。ＢＰＡ是研究最多的环境内分泌干扰物之一，具有内分泌干扰作用。ＢＰＡ不仅具有雌激素样作用，还有拮抗雌激素样作用，另外，还具有拮抗雄性激素和甲状腺激素的作用【３】。ＢＰＡ代谢主要是在肝脏尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶作用下形成ＢＰＡ－单葡萄

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糖醛酸苷‘”１。本研究以大鼠为模型，给予较高剂量ＢＰＡ经灌胃染毒后，观察不同时间点游离型和结合型ＢＰＡ在血清中的变化。

材料与方法

一、实验材料

１．试剂：ＢＰＡ和Ｂ一葡萄糖酸酐酶购于美国Ｓｉｇｍａ公司，乙腈（色谱纯）和正己烷（分析纯）购于汕头市西陇化工有限公司，高氯酸（优级纯）购于上海金鹿化工有限公司，乙酸（优级纯）购于国药集团化工试剂有限公司，乙醚（分析纯）购于上海凌峰化学试剂有限公司，乙酸胺（分析纯）购于生工生物工程上海有限公司，乙醇（分析纯）购于上海振兴化工一厂，实验用水均为三蒸水。

２．仪器：ＬＣ－２０Ａ高效液相色谱（ｈｉ出

ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）仪（日本岛津公司）；荧光检测器（日本岛津公司）。

二、实验方法

１．动物和染毒：无特定病原体（ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ，ＳＰＦ）级雄性ＳＤ大鼠６６只，购于南通大学实验动物中心，体重２１３～２３０ｇ。按随机数字

表法分为１１组，每组６只，即对照组和ＢＰＡ灌胃后０．５、ｌ、２、４、６、１２、２４、３６、６０、８４ｈ组。对照组未给予ＢＰＡ，实验组大鼠一次性灌胃给予３００ｍｇ／ｋｇ剂量的ＢＰＡ（相当于ＢＰＡ半数致死剂量的１／１０）。分别于灌胃后０．５、１、２、４、６、１２、２４、３６、６０、８４ｈ时间点各麻醉一组大鼠，从心脏取约３．０ｍｌ血液，３０００ｒ／ｒａｉｎ离心１０ｍｉｎ，离心半径７．５ｃｍ，分离出血清约１ｍｌ用于检测ＢＰＡ浓度。

２．血清处理：血清前处理参照文献［６］的方法。主要步骤如下：取血清样品１５０“，加入０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸．乙酸铵缓冲液（ｐＨ４．５）３０山、正己烷一乙醚混

３５０．００

３００．００

２５０．００

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滞留时制（ｏ）合溶剂（７：３）１．２ｍｌ，漩涡振匀１０８，充分振摇１０ｍｉｎ，静置２ｍｉｎ，加６一浓度为４ｍｏｌ／Ｌ的

ＨＣｌ０４，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，离心半径７．５ｅｍ，取有机层用氮气吹干，加入１００～４００山流动相充分溶解后，３０００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｍｉｎ，离心半径７．５ｃｍ，进样１０山，测定游离型ＢＰＡ。血清总ＢＰＡ前处理方法：取血清样品１５０山，加入６山浓度为２ｍｏｌ／Ｌ的乙酸，混匀后加入６一Ｂ一葡萄糖酸酐酶，３７℃水浴消化过夜，之后的萃取方法同游离型。所有萃取步骤均于玻璃管中进行。

３．血清中ＢＰＡ测定方法：（１）色谱条件：流动相为乙腈与乙酸一乙酸铵缓冲液（ｐＨ４．５），比例为６．５：３．５，激发波长为２３０ｎｍ，发射波长为３１５ｎｍ，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，柱温为３０℃，进样量为ｌＯ斗ｌ。（２）标准曲线的绘制：准确称取０．０２５ｇＢＰＡ，用乙腈溶解，配成１ｍｇ／ｍｌ标准储备液，且现配现用。测

量时取ＢＰＡ的标准储备液，用乙腈稀释，配成不同浓度的标准溶液０．１～ｌＯ∥ｒＩｌｌ，进样１０一。

４．统计学分析：采用ＳＰＳＳ数据包线性回归法，以峰面积（１，）对标准品浓度（Ｘ）得出回归方程。根据回归方程，代人样品测出的峰面积值，求出样品浓度。实验结果以元±ｓ表示。

结果

１．标准曲线和回归方程：图ｌ为２．５¨ｓ／ｍｌＢＰＡ的标准品ＨＰＬＣ图，ＢＰＡ的出峰时间为１７３ｓ。图２为血清样品ＨＰＬＣ色谱图。根据ＢＰＡ标准品浓度和所测的峰面积所得标准曲线的回归方程为：Ｙ＝１３９８．１８２Ｘ＋１２０．５２２（ｒ＝０．９９９）。

２．血清总ＢＰＡ浓度随时间的变化：大鼠血清经Ｂ．葡萄糖酸酐酶消化后，测定出的ＢＰＡ浓度是血清中的总浓度，包括结合型ＢＰＡ和游离型ＢＰＡ。一次４００．∞

３５０．∞

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滞留时间Ｑ）

圈１。２ＨＰＬＣ色谱图。图１为双酚Ａ标准品ＨＰＬＣ图；图２为血清样品ＨＰＬＣ图

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性灌胃给予大鼠３００ｍｇ／ｋｇＢＰＡ，经不同时间后，血清中的总ＢＰＡ浓度的变化见图３。结果表明，对照组大鼠血清中未检测到ＢＰＡ；染毒１ｈ后，血清中总ＢＰＡ的浓度达到最大值，高达１７．１３Ｉｘｇ／ｎａｌ；给药２ｈ，血清中ＢＰＡ总浓度急剧下降到４．７４“ｇ／ｍｌ；而后又上升，２４ｈ后上升到最高点，为１５．１８斗ｇ／ｍｌ；此后血清中ＢＰＡ总浓度再一次开始下降，到观察终点，即给药后８４ｈ，血清中总ＢＰＡ的浓度为０．５１斗ｇ／ｍｌ。可见，经Ｅｌ给予雄性大鼠ＢＰＡ后，血清中总ＢＰＡ水平出现两个高峰，分别在给药后１ｈ和２４ｈ，并且一次性给予较高剂量ＢＰＡ后，其在大鼠血清中能维持较长时间。

鲁

备

０

瑙

霉

盘

镛ＢＰＡ占总ＢＰＡ的４．１５％外，其他时间点仅占很少量，说明经灌胃给予大鼠ＢＰＡ后，血清中ＢＰＡ主要以结合型存在。

讨论

有研究报道，ＢＰＡ能与雌激素受体结合，具有雌激素样活性。但其主要代谢产物ＢＰＡ－单葡萄糖醛酸苷在体外试验中不能与雌激素受体结合，未显示出雌激素样活性¨Ｊ。因此，了解ＢＰＡ在血清中的存在形式，有利于分析ＢＰＡ对机体的有害作用机制。ＢＰＡ经肝脏迅速完全的代谢成ＢＰＡ一单葡萄糖醛酸苷，有利于降低ＢＰＡ在体内的雌激素样内分泌

０６１２１５２４３０３６４２４８５４６０６６７２７８８４

染毒时间（１９

图３血清中总ＢＰＡ浓度随时间的变化情况（右上角是图中画框部分的放大图）

３．血清中游离型ＢＰＡ浓度随时间的变化：血清

中游离型ＢＰＡ是指血清不经过Ｂ．葡萄糖酸酐酶消

化而直接测得的ＢＰＡ，检测的结果见表１。与总

ＢＰＡ不同，血清中游离型ＢＰＡ浓度在灌胃后Ｏ．５ｈ

浓度最高，达到０．５７Ｉ．Ｌｇ／ｍｌ；而后急剧下降，１ｈ后

下降到ｏ．０６”ｇ／ＩＩｄ，４ｈ下降到０．０３鹇／ＩＩｌｌ，３６ｈ后

仅有０．０１斗ｇ／ｍｌ。

表１大鼠染毒后不同时间血清中

游离型ＢＰＡ和总ＢＰＡ浓度（疗＝６）

黼ｈ警黼翟ｍｌ≯舯斗ＰＡ（ｇ／ｎａｉ）±‰簇黼势

间（）¨∥））”＝ｆ；箸含。ｊ、＝：１

４．游离型ＢＰＡ占总ＢＰＡ的百分率：从表１结

果可以看出，除了ＢＰＡ染毒０．５ｈ血清中游离型干扰作用。本研究结果表明，大鼠经胃肠道给予ＢＰＡ后，血清中的ＢＰＡ绝大部分以结合型存在，游离型ＢＰＡ仅占很少部分。染毒０．５ｈ，血清中游离型ＢＰＡ含量较其他时间点高，占总量的４．１５％。人体试验结果也表明，经口摄入低剂量ＢＰＡ后，血液和尿液中均检测到结合型ＢＰＡ，但未检测到游离型的Ｌ８Ｊ。

笔者研究发现，灌胃给予雄性大鼠较大剂量的ＢＰＡ后，血清中总ＢＰＡ浓度随时间变化出现了双峰，第１个峰值出现在给药１ｈ，第２个峰值出现在给药２４ｈ。Ｔｏｍｉｎａｇａ等旧。报道经口给予大鼠

１００ｍｇ／ｋｇＢＰＡ，双峰分别出现在０．５ｈ和６ｈ。双峰出现的时间不同，可能与一次性经口给予大鼠ＢＰＡ的剂量有关。当给予较高剂量的ＢＰＡ时，延长了吸收时间，从而使大鼠血清中ＢＰＡ达到首次最高值的时间后移。一次性经口给予大鼠ＢＰＡ后，其血液中ＢＰＡ浓度的变化与人和猴不一样。人和猴血液中ＢＰＡ的浓度只出现１个最高值，而后随着时间延长ＢＰＡ浓度不断下降【９４０｜。大鼠与人类代谢动力学模式的差异，可能是因为二者排出ＢＰＡ的途径不同所导致。ＢＰＡ经大鼠肝脏代谢后有６５％是经过胆汁排出的，当经胆汁排人十二指肠后，有部分ＢＰＡ代谢产物可经小肠重吸收进入血液中¨０。，这可能是形成血清中ＢＰＡ第２个峰值的原因。而ＢＰＡ代谢产物在人体内绝大部分是经过肾脏排出，不存在肝肠循环重吸收，因此，血液中没有第２个峰值出现。

笔者研究结果表明，ＢＰＡ经口进入大鼠体内能很快在肝脏代谢转变成ＢＰＡ一单葡萄糖醛酸苷，并且在血清中能维持较长时间。虽然ＢＰＡ一单葡萄糖醛

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酸苷不能与雌激素受体结合，但ＢＰＡ一单葡萄糖醛酸苷可能还具有其他一些内分泌干扰作用。因为大鼠暴露于ＢＰＡ后，可引起大鼠脑、雄性和雌性生殖系统、免疫系统及生长发育的异常‘３｜，说明结合型的ＢＰＡ对机体可能有损害作用。

参考文献

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（收稿日期：２００９－０６－２５）

（本文编辑：李敬文薛爱华）

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杨跃进尹卫东张建中张玉润周立春诸欣平

双酚A在染毒雄性大鼠血清中时间-浓度关系

作者：陈刚， 黄春妍， 仲齐庆， 鞠晶昀， 潘少聪， 王春， 姚陈娟， CHEN Gang， HUANG Chun-yan， ZHONG Qi-qing， JU Jing-yun， PAN Shao-cong， WANG Chun， YAO Chen-

juan

作者单位：南通大学公共卫生学院职业医学与环境毒理学教研室,226007

刊名：

中华预防医学杂志

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE

年，卷(期)：2010，44(1)

被引用次数：0次

参考文献(10条)

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https://www.wendangku.net/doc/0f10339800.html,ng IA.Galloway TS.Scarlett A Association of urinary bisphenol A concentration with medical disorders and laboratory abnormalities in adults 2008

3.Richter CA.Bimbaum LS.Farabollini F In vivo effects of bisphenol A in laboratory rodent studies (Review) 2007

4.Yokota H.Iwano H.Endo M Glucuronidation of the environmentalbisphenolAbyanisoformofUDP-glucuronosyltransferase,UGT2B1,in the rat liver 1999

5.HaniokaN.NaitoT.NarimatsuS HumanUDP-glucuronosyltransferase isoformsinvolved in bisphenol A glucuronidation 2008

6.郑力行.石峻岭.周志俊高效液相色谱法测定血清中的双酚A[期刊论文]-中华预防医学杂志 2003(6)

7.Matthews JB.Twomey K.Zacharewski TR In vitro and in vivo interactions of bisphenol A and its metabolite,bisphenol A glucuronide,with estrogen receptors alpha and beta 2001

8.V(o)lkel W.Colnot T.Csan(a)dy GA Metabolism and kinetics of bisphenol a inhumans at low dosesfollowing oral administration 2002

9.Tominaga T.Negishi T.Hirooka H Toxicokinetics of bisphenol A in rats,monkeys and chimpanzees by the LC-MS/MS method 2006(2/3)

10.Inoue H.Yokota H.Makino T Bisphenol a glucuronide,a major metabolite in rat bile after liver perfusion 2001

相似文献(10条)

1.期刊论文马春宏.李冬影.王良色谱法分析酚类内分泌干扰物的研究进展-通化师范学院学报2008,29(2)

文中对近年来用色谱法分析酚类内分泌干扰物质的研究进展进行了综合评述.介绍了固相萃取、固相微萃取、加速溶剂萃取、微波萃取四种样品顸处理方法以及利用气相色谱、液相色谱对样品进行测定的方法,从而,对酚类内分泌干扰物的研究前景进行了展望.

2.学位论文吴培楠中药蛇莓抗肿瘤活性成分研究2005

蔷薇科蛇莓属植物蛇莓Duchesnea indica(Andr.)Focke.在辽宁以南全国各省区均有分布.蛇莓具有较强的抗肿瘤、抗菌消炎、免疫功能促进、中枢神经系统抑制作用.民间主要用于治疗发烧、咳嗽、吐血、咽喉肿痛、痈肿、烫伤等.其主要化学成分为三萜及其苷类,香豆素类,黄酮类,甾醇类.本研究前期实验表明,蛇莓石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物对Hela和L929均具有较强的细胞毒作用(Table 5-3).为寻找具有抗癌活性的化学单体,对蛇莓进行了有机化学成分研究.实验采用多种现代色谱分离技术(包括快速层析法,凝胶色谱法和制备HPLC)对蛇莓各提取部位进行分离,从蛇莓中分离得到20个化学单体,通过<'1>H-NMR,<'13>C-NMR,2D-NMR,质谱等波谱解析方法鉴定了其中的14个化合物的结构.其中化合物1为新化合物,化合物2-5,7,10-14从蛇莓中首次发现,生育酚类和二萜类化合物是从蛇莓中首次分离鉴定的结构类型.其中化合物1为新化合物,化合物2-5,7,10-14从蛇莓中首次发现,生育酚类和二萜类化合物是从蛇莓中首次分离鉴定的结构类型.

抗肿瘤药理实验表明,化合物5,6,8和10具有一定的肿瘤细胞生长抑制作用,其中化合物10对Hela细胞具有较强的细胞毒作用.

3.期刊论文王娟.陈婧工业废水中酚类的处理方法比较-天津化工2001,""(4)

本文介绍了工业废水中酚类测定的几种分析方法，并加以比较。

4.外文期刊Wolbis.M.Nowak.S.Kicel.A Polyphenolic compounds in Scopolia caucasica Kolesn. ex Kreyer (Solanaceae).

of Scopolia caucasica using paper chromatography and HPLC methods were described. From the leaves of this plant, kaempferol 3-O-(2-glucosyl)-galactoside-7-O-glucoside, kaempferol 3-O-(2-glucosyl)-galactoside and quercetin 3-O-glucoside were isolated and identified by spectroscopic methods (UV, 1H- and 13C-NMR).

5.学位论文张前莉食品、医药及化妆品中酚类化合物的高效液相色谱分析2007

酚类化合物分布广泛，其中很多具有雌激素活性，对人类健康和动物生存已经造成不良影响，因此建立快速有效的检测方法对于保护环境，采取有效的预防措施降低该类化合物的危害具有重大的现实意义。本文首先对近年来国内外酚类环境雌激素的分析研究进展进行了综述，介绍了酚类环境雌激素的定义、分类、危害以及主要的分析检测方法。建立了分离和测定奶粉中的双酚A和己烯雌酚，油炸食品中两种酚类抗氧剂（叔丁基对苯二酚和抗氧剂2246）以及药品和化妆品中水杨酸、苯酚、间苯二酚含量的反相高效液相色谱法和反相离子对色谱法。考察了流动相组成改变、不同样品处理方法对各样品、各组分分离和测定的影响。奶粉样品采用石油醚除去油性杂质，乙腈作为蛋白沉淀剂和组分提取剂，方法检出限为：5.000×10-3mg/L和

25.00×10-3mg/L。在5.000×10-3mg/L～25.00 mg/L范围内，双酚A和己烯雌酚的线性相关系数分别为0.9998和0.9999，在两种奶粉样品中均有残留；油炸食品采用正己烷饱和的乙腈做提取剂，以甲醇为流动相，两种酚类抗氧剂（叔丁基对苯二酚和抗氧剂2246）检出限分别为：0.2200

mg/L，0.1100mg/L，在0.1100～56.00 mg/L范围内，线性相关系数均为0.9999，三种油炸方便面、薯条、豌豆脆样品中未检出抗氧剂2246，但均有叔丁基对苯二酚检出：药品和化妆品中三种酚类化合物（水杨酸、苯酚和间苯二酚）检出限分别为：0.01900mg/L，0.02700mg/L，0.01900mg/L，在

0.01900mg/L～5.400mg/L范围内，线性相关系数分别为0.9971，0.9997，0.9977，结果表明：药品中除主要成分水杨酸有检出外，间苯二酚和苯酚也被检出；三种化妆品中水杨酸含量均在国家规定范围内，苯酚和间苯二酚未检出。所建立的方法适用于上述样品中相关酚类化合物的测定。

6.外文期刊Kim.KJ.Kim.MA.Jung.JH Antitumor and antioxidant activity of protocatechualdehyde produced

from Streptomyces lincolnensis M-20.

We characterized the biological functions of protocatechualdehyde (PA) isolated from the butanol extract of culture supernatant from Streptomyces lincolnensis M-20. Following butanol extraction, it was purified by silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. PA was analyzed by Furier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR), Gas chromatograph-Mass Spectrometer (GC-MS), and Nuclear Magnetic Resonance (NMR). PA had potent antioxidant activity, as measured by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity. Antitumor activity against MCF-7 human breast cancer cells was evaluated by the 3-(4,5-dimethylthazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium-bromide (MTT) assay. PA treatment (0 approximately 150 muM) dose-dependently blocked apoptosis, as shown by improved cell viability and inter-nucleosomal DNA fragmentation. Our findings suggest that Streptomyces lincolnensis M-20, a lincomycin producer, also produces protocatechualdehyde.

7.学位论文刘玉敏SFE和HSCCC技术在大黄蒽醌类化合物方面分离提取的应用2000

该文以大黄中最主要的生物活必化合物为主要指标,探讨了超临界流体萃取法(SFE)和高速逆流色谱法(HSCCC)在中草药领域中的研究和应用,为中草药有效成分的分离提取和纯化制备作了一个探索性的尝试.通过条件的优化和筛选,确定了超临界流体萃取大黄粉最佳条件.并首次应用高效液相色谱法(HPLC)对眼临界流体萃取法、超声波提取法、溶剂法进行了总蒽醌含量的测定和指纹谱的比较.同时,该研究采用高速逆流色谱技术对大黄粗提物进行了分离,通过溶剂系统和运行参数的选择,以氯信-甲醇-正己烷-水(9:10.5:1.8)为溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速1.5ml/min,转速900rpm,进样体积2ml,从大黄中分离出大黄素甲醚类衍生物、大黄酚类衍生物、大黄素类衍生物等成分.经TLC、HPLC和MS证实,其中一个单体成分为大黄素葡萄糖甙.另外,通过与柱层板法的比较,进一步表明高速逆流法不但分离度好,灵敏度高,而且对样品无污染,回收率高,特别适用于中草药的制备性分离.

8.期刊论文解静芳.郭炜锋.XIE Jing-fang.GUO Wei-feng色谱保留指数在预测氯苯类和氯酚类化合物对戈卑鱼

LC50中的应用-环境与健康杂志2005,22(6)

目的探讨用色谱保留指数(I)预测氯酚类和氯苯类污染物对戈卑鱼(Guppy)的半数致死浓度(LC50).方法分别检测每种氯酚类和氯苯类化合物在色谱柱上的调整保留时间及相应的正构烷烃的调整保留时间,计算I值.根据文献提供的氯酚类和氯苯类化合物对戈卑鱼的LC50及分子连接性指数(1Xv)的计算方法及数据进行相关分析,建立回归模型.结果建立了氯酚类和氯苯类化合物的lg(LC50)与I的一元线性回归方程,氯酚类:lg(LC50)=1.599-2.64×10-

3I,r=0.970,P＜0.05;氯苯类:lg(LC50)=2.046-3.44×10-3I,r=0.953,P＜0.05.模型具总体稳健性.氯苯类化合物回归模型残差高于氯酚类化合物回归模型残差.结论应用该回归方程可以预测大部分氯苯类和氯酚类化合物的急性毒性.

9.学位论文何茜固相微萃取-气相色谱法联用测定煤中有机污染物的研究2009

煤炭在中国能源消费结构中占75％，对国民经济的发展起着极其重要的作用。煤中富

含多种直链和芳环结构有机物，如多环芳烃(PAHs)、酚类、苯系物及脂环烃等。因此煤在

生产、加工和利用过程中会排放出许多有机污染物。因此研究灵敏、准确、快速测定煤中

有机污染物的分析方法对于控制污染、保护环境是十分有意义的。由于煤基体复杂，其有

机污染物的分析检测常需要结合前处理技术。目前对煤中有机污染物的研究广泛采用的是

索氏提取法，结合一些操作较繁琐的分离富集方法，如柱色谱法、固相萃取和薄层色谱等。

固相微萃取(SPME)技术是集萃取、浓缩、解吸、进样于一体的绿色前处理新技术，

它具有萃取速度快、重现好、样品消耗量少、操作简单等特点。SPME已广泛应用于环境、

医药、生物和食品等各种样品中痕量有机物质的分离富集中。而关于利用SPME技术对原

煤中有机污染物的研究则鲜有报道。气相色谱法具有灵敏度高、检出限低、进样量少等优

点，特别适用于煤中低分子量有机污染物的测定。因此，本论文将固相微萃取的特点与气

相色谱的优点结合，建立了索氏提取-固相微萃取-气相色谱法联用测定原煤中酚类和多环

芳烃(PAHs)的新方法，主要内容如下：

1.考察了萃取涂层种类、萃取介质和萃取时间等SPME条件对萃取9种酚的影响，最

终确立用聚丙烯酸酯(PA)萃取头，用浸入方式，在饱和NaCl介质中，萃取时间为30min，

解析时间为3min，在所优化的条件下，9种酚的工作曲线相关系数在0.9737～0.9990之间，

检出限在0.011～0.229μg·L-1之间，精密度在4.4％～10.4％之间。SPME-GC联用比直接GC

进样分析检出限改善了2-3个数量级。通过优化提取方法，最终采用索氏提取，丙酮为提

取溶剂，提取时间8h。建立了索氏提取-SPME-GC测定原煤中酚类的分析方法，在河南平

顶山煤和安龙褐煤中检出了沸点相对较高的酚类，煤中挥发酚的平均加标回收率除2-氯酚

和2,4-二甲基苯酚这两种酚外，其他的均在63.3％～100.4％之间。

2.实验优化了气相色谱条件、固相微萃取涂层厚度、萃取时间及离子强度等因素，建

立了测定水中16种PAHs的分析方法。SPME最佳条件为：萃取头为100μm聚二甲基硅氧

烷(PDMS)，用浸入的方式，在饱和NaCl介质中，萃取时间为30min，解析时间为5min。

16种PAHs工作曲线的相关系数在0.9727～0.9969之间，检出限在0.007～0.048mg·L-1之间，

精密度在6.9％～21.9％之间。SPME-GC联用比直接GC进样分析检出限改善了2个数量级。

研究了提取方法对煤中PAHs的影响。建立了索氏提取-SPME-GC测定原煤中PAHs的分

析方法，在河南平项山和安龙褐煤中均检出萘和菲，且河南平顶山煤中还含有芴，所检出

的PAHs为2-3环的。原煤中PAHs的平均加标回收率在60.3％～126％之间。

3.将所建立的SPME-GC方法应用于三个煤矿区地下水中的酚类和PAHs的分析研究，

在恩施太阳河乡煤矿井口浸出液中还检出了4环和5环的PAHs。

4.设计了SPME探头的制备配方，优化了自制探头的制备流程，巧妙地将GC进样针

改制为自制探头的进样装置，针对酚类和多环芳烃化合物，筛选出了最优SPME探头

PEG-1。结果表明PEG-1探头对多环芳烃的萃取效果优于商用PDMS探头，PEG-1探头对

酚类的萃取性能与商用PA和聚二甲基砖氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB)探头相当。PEG-1

探头对10种酚类标准物质的线性相关系数在0.9035～0.9988之间，应用于河南平顶山煤中

酚的测定，效果满意。PEG-1探头具有制作成本低，萃取效果好等优点。

5.初步探讨了亚临界水萃取(SBWE)温度、萃取时间和萃取溶液的pH对煤中7种

酚的萃取效果的影响，在优化的SBWE条件下，将SBWE-SPME-GC联用技术应用于河

南平顶山煤的测定，结果表明：采用pH=7的纯水，萃取温度为120℃，萃取时间90min

的亚临界水萃取条件最佳。在河南平顶山煤样中检出了2-硝基苯酚。

关键词：固相微萃取，气相色谱，原煤，酚类化合物，多环芳烃。

10.期刊论文邬春华.郑力行.周志俊尿中酞酸酯类代谢物、双酚A和壬基酚的固相萃取-高效液相色谱测定法-中

华劳动卫生职业病杂志2008,26(8)

目的 建立同时测定人尿中3种酞酸酯代谢物[邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)、邻苯二甲酸单辛酯(MOP)]、双酚

A(BPA)和壬基酚(4-NP)3类化合物的高效液相色谱分析方法.方法 尿样经β-葡萄糖醛酸酶水解、固相萃取柱浓缩与净化,以乙腈-水为流动相进行浓度梯度与流速梯度2种梯度方式进行洗脱,咔唑为内标定量测定.结果 MBP、MEHP、MOP、BPA和4-NP在尿中的线性范围分别为0.621～497.100、

0.397～317.900、0.236～188.800、0.487～778.700和0.371～296.500 ng/ml,相关系数均大于0.9967,平均相对标准偏差值均小于10.0%,尿样中MBP、ME:HP、MOP、BPA和4-NP榆出限分别为0.155、0,099、0.059、0.121和0.092 ng/ml;平均加标回收率在85.0%以上.结论 方法准确度高,重现性好,简便实用,可用于人尿中的酞酸酯代谢物和BPA、4-NP的含量测定.

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