猪圆环病毒2型Cap蛋白表达及免疫原性鉴定

·研究论文·

Chinese Journal of Animal Infectious Diseases

中国动物传染病学报2014,22(5): 28-34猪圆环病毒2 型Cap 蛋白表达及免疫原性鉴定

朱 鹏1,2，张小飞2，徐延伟2，尹秀凤2

（1.安徽农业大学动物科技学院，合肥230036；2.南京天邦生物科技有限公司 生物技术研究所，南京211102）

摘 要：以猪圆环病毒2型 (Porcine circovirus type 2，PCV2) WH 株基因组 DNA 为模板，扩增 ORF2 截短基因，经Bam H I /Not I 双酶切处理后与经相同酶切处理的 pET32a (+) 原核表达载体连接，获得重组质粒 pET32a-Cap2。将重组质粒转化至 BL21（DE3），经IPTG 诱导，对表达产物进行 SDS-PAGE 和 Western blot 分析。纯化的重组蛋白免疫小鼠，并对获得的血清进行间接 ELISA 检测和中和活性测定。SDS-PAGE 分析表明，ORF2 截短基因在大肠杆菌中得到表达，蛋白分子质量大小为40 kDa ，重组 PCV2 Cap 蛋白主要以上清的形式存在。Western blot 证实重组蛋白能够识别抗 PCV2 阳性血清。经间接ELISA 检测，鼠抗PCV2 Cap 血清抗体效价能达到1:25 600，间接免疫荧光检测分析表明，鼠抗PCV2 Cap 血清能特异性识别PCV2感染细胞中的Cap 蛋白。病毒血清中和实验证实，抗PCV2 Cap 血清抗体具有中和病毒的活性，中和效价为1:36。猪圆环病毒2型 Cap 蛋白的表达，为进一步研究该蛋白的功能及Cap 蛋白亚单位疫苗和检测试剂盒的制备奠定了基础。关键词：猪圆环病毒2型 ；Cap 蛋白；免疫原性；中和活性中图分类号：S852.659.2

文献标志码：A

文章编号：1674-6422（2014）05-0028-07

EXPRESSION AND IMMUNOGENICITY OF RECOMBINANT CAP PROTEIN

OF PORCINE CIRCOVIRUS TYPE 2

ZHU Peng 1,2, ZHANG Xiao-fei 2, XU Yan-wei 2, YIN Xiu-feng 2

(1. College of Veterinary Medicine, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2. Biotechnology Research Institute, Nanjing Tech-bank Bio-industry Co. Ltd., Nanjing 211102, China)

Abstract: The truncated ORF2 of Porcine circovirus type 2(PCV2) WH strain was ampli ? ed and cloned into expression vector pET32a (+). The expression vector pET32a-Cap2 was then transformed into BL2 (DE3) for expression with induction of IPTG. The expressed pET32a-Cap products were analyzed in SDS-PAGE and Western blot. The recombinant Cap protein was a soluble protein with molecular weight of 40 kDa. The puri ? ed Cap protein was used to immunize mice to prepare antiserum. The resulting murine antiserum had ELISA titer at over 1:25 600 and reacted with PCV2 in infected PK-15 cells in indirect immuno ? uorescence assay (IFA). The murine antiserum also showed neutralizing titer at 1:36. The availability of the recombinant PCV2 Cap protein provides the basis for development of vaccine and diagnostic reagents.

Key words: Porcine circovirus type 2; Cap protein; immunogenicity; neutralization

收稿日期：2014-03-07

作者简介：朱鹏，男，硕士，主要从事动物疾病研究通信作者：张小飞，E-mail：xiaofei0804@https://www.wendangku.net/doc/0f10353939.html,

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）为圆环病毒科圆环病毒属成员，由 Tischer 于1974年首先在 PK-15细胞中发现，并于1982年命名为猪圆环病

毒。PCV 有2种血清型，即 PCV1和 PCV2[1]。PCV1 无或对猪的致病性低，广泛存在猪体内和猪肾传代细胞系中；PCV2 有致病性，是引发猪断奶后多系

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第22卷第5期朱鹏等：猪圆环病毒2 型Cap 蛋白表达及免疫原性鉴定剂盒为天根生化科技（北京）有限公司产品；FITC 标记的葡萄球菌A蛋白购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 引物的设计与合成 应用 Primer premier5.0 软H I 、Not I 酶切位点。引GC-3'，下游引物5'-AGAGCGGCCGCTTAGGGGT TAAGTGGGGGGTCTTT-3'，下划线部分为酶切位点。

1.3 ORF2 基因的扩增 取-70℃ 保存的 PCV2 WH 株，接种于已长满单层的 PK-15 细胞培养48~72 h，收获全部培养物，用DNA提取试剂盒提取总DNA。建立25 μL 扩增体系: r Taq 0.3 μL、上下游引物各 1 μL、dNTP 1 μL、模板 DNA 2 μL、10×buffer（Mg 2+）

2.5 μL 、ddH 2O 17.2 μL。按如下程序扩增：94℃预变性4 min；94℃变性40 s，55℃退火40 s，72℃延伸40 s，共30个循环；最后72℃延伸10 min。PCR产物电泳检测后，剩余PCR产物用胶回收试剂盒回收。

1.4 重组表达质粒 pET32a-Cap2 的构建及鉴定 分别用Bam H I、Not I 双酶切上述胶回收产物和载体 pET32a (+) ，酶切产物经胶回收后，用T4 DNA连接酶于16℃连接过夜，将连接产物转化DH5α 感受态细胞。挑取单个菌落培养，提取质粒，分别做PCR 及酶切鉴定，选取阳性质粒，送至上海生工生物工程技术有限公司进一步测序确证，将阳性重组表达质粒命名为pET32a-Cap2。

1.5 重组蛋白的诱导表达及 SDS-PAGE 凝胶电泳分析 分别将空载体 pET32a(+) 和重组阳性质粒转化至 BL21（DE3）感受态细胞中，涂板37℃过夜。挑取单菌落接种于 LB 液体培养基中（氨苄霉素终浓度100 μg/mL），37℃过夜后，按1:100 的比例接种于氨苄抗性的 LB 液体培养基中，37℃ 振荡培养2~4 h，至OD 600值为0.4~0.6 时加入终浓度为1mmol/L的 IPTG 进行诱导，37℃继续培养。在诱导 1、2、3、4、5、6 h时收集1 mL菌液，4℃、13 000×g

统衰弱综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）的主要病原[2]，主要侵害机体的免疫系统，造成机体的免疫抑制[3]。PCV2 与其他细菌病和病毒病混合感染后，大大加剧猪的死亡，业发展的重要病原之一苗和药物来防止 PMWS PCV2 含有2个主要的开放阅读框( open reading frame, ORF)，其中 ORF2 基因编码病毒的衣壳蛋白(Cap)是主要结构蛋白，包含主要的抗原中和表位，具有良好的免疫原性，且 PCV1 和 PCV2 之间不发生血清学交叉反应，是检测病毒抗体水平的良好抗原[6]，也是发展新型疫苗的良好靶基因[7]。利用杆状病毒表达系统在体外表达的重组 Cap 蛋白（30 kDa）能够自我组装为病毒核衣壳样粒子，并表现出了良好的免疫原性[8]，但因蛋白的表达量较低，限制了进一步的应用。赵玲等[9]构建了pET32a-ORF2 原核表达质粒，但表达的蛋白主要以包涵体的形式存在。本研究对 PCV2 ORF2 截短基因进行了原核表达，通过对蛋白表达条件的优化，获得了可溶性的重组蛋白，并且对蛋白的免疫原性进行分析，为进一步研究 Cap 蛋白的功能，研发更为安全、高效、廉价的 PCV2 Cap 蛋白亚单位疫苗和特异、方便、快速检测试剂盒奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 质粒、菌种及试剂 PCV2 WH 株、PCV2 阳性血清、pET-32a(+) 载体系统、受体菌DH5a及BL21（DE3）感受态细胞均由南京天邦生物科技有限公司生物技术研究所制备并保存；Bam H I、Not I、T4 DNA 连接酶、DNA 提取试剂盒、DNA Marker （DL2000）均购自 TaKaRa公司；质粒提取试剂盒、DNA 胶回收试剂盒均购自 Axygen 生物技术有限公司；蛋白纯化试剂盒购自上海生工生物工程技术有限公司；弗氏佐剂及弗氏不完全佐剂、HRP 标记的羊抗猪 IgG 二抗购自 Sigma 公司；DAB 显色试

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中国动物传染病学报r/min 离心1 min，收集菌体，重悬于适量5×SDS 上样缓冲液中，沸水浴10 min，取10 μL 13 000×g 进行SDS-PAGE 电泳分析。

1.6 重组蛋白的可溶性分析 将诱导表达的菌体，4℃、13 000×g

1.7 重组蛋白的纯化用SDA-PAGE检测蛋白纯度，目的蛋白浓缩后用蛋白定量试剂盒定量。

1.8 融合蛋白的 Western blot 鉴定 将纯化后的样品经处理后进行SDS-PAGE，电泳结束后电转移到硝酸纤维素膜上，用5%的脱脂乳37℃封闭2 h，PBST洗涤5次；用1:100 稀释的抗PCV2阳性血清作为一抗37℃孵育1 h，PBST洗涤5次；放入1:8000稀释的辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗猪的二抗中，37℃作用40 min，PBST 洗涤5次后，DAB进行显色。1.9 重组Cap 蛋白免疫原性的鉴定 将纯化后目的蛋白与等量的弗氏完全佐剂充分乳化后，对5只6~8 w BALB/c雌性小鼠，以50 μg /只的剂量进行颈部、背部多点皮下注射。初次免疫后14 d，将目的蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂充分乳化后进行1次加强免疫，同时用健康的小鼠做对照。免疫后每周采血分离血清，检测其抗体效价。

1.10 免疫血清中和活性的测定 选取抗体效价较高的血清，采用固定病毒稀释抗体的方法进行病毒中和实验，以能够抑制50%细胞出现荧光的血清最高稀释度作为中和抗体滴度，用来检测小鼠抗PCV2 Cap 血清抗体的中和病毒活性。同时设抗PCV2阳性血清和健康小鼠血清做对照。将小鼠血清置56℃水浴灭活30 min，取灭活的血清用含2%小牛血清的DMEM细胞维持液做1:2系列稀释，加入等体积的病毒液（100TCID 50/mL）混合，37℃感作2 h，同时设病毒对照组和健康细胞对照组。取混合液200 μL分别加到96孔细胞培养板上已长成单层的PK-15细胞中，每个稀释度接种5孔细胞。将细胞板置37℃、5%CO 2培养箱中孵育72 h，采用间接免疫荧光检测

（indirect immunofluorescence assay, IFA）法检测各孔抗原，根据Reed-Muench法，计算血清中和效价。

取5 μL PCR 产物经琼脂糖凝

1）。

图1 猪圆环病毒ORF2基因的 PCR 扩增Fig.1 PCR ampli ? cation of PCV2 ORF2 gene M: DNA 分子量标准(DL2000); 1~6:猪圆环病毒ORF2基因;

7:阴性对照

M: DNA Marker （DL2000）; 1-6: PCV2 ORF2 gene;

7: Negative control

2.2 表达质粒pET32a-Cap2 的构建和鉴定 分别用特异性引物和通用引物对pET32a-Cap2重组质粒进行鉴定，经特异性引物鉴定，其大小为579 bp；经通用引物鉴定，其大小为1300 bp 左右（图2）；双酶切结果显示重组表达质粒 pET32a-Cap2构建正确（图3）。测序结果显示，插入的目的片段正确，没有出现碱基突变。

2.3 重组Cap 蛋白的诱导表达、可溶性分析及纯化 经SDS-PAGE析表明，重组质粒经IPTG诱导后可获得分子质量大约为40 kDa 的蛋白，而空pET32a (＋) 转化的菌体在40 kDa附近没有出现目的蛋白条带，与预计结果相符。随着IPTG诱导时间的增加，蛋白表达量增多，6 h后目的蛋白不再增加（图4）。将收集的菌液进行超声波破碎，离心后取其上清和沉淀分别进行SDS-PAGE分析，结果表明在37℃诱导条件下，沉淀中目的蛋白的量较大，而上清中目的蛋白较少。进一步调整诱导条件，发现在蛋白诱导过程中，降低温度可以使表达产物大部分以上清的形

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第22卷第5期朱鹏等：猪圆环病毒2 型Cap 蛋白表达及免疫原性鉴定式存在。在低于30℃的条件下诱导7 h，表达产物主要以上清的形式存在，而沉淀中的目的蛋白却很少。随着诱导时间的延续，表达产物开始以上清和

包涵体两种形式存在，表明通过改变诱导条件，重组蛋白可以以上清的形式表达。用Ni-NTA琼脂糖对超声后的上清进行纯化，SDS-PAGE分析可获得单一纯化蛋白（图5）。利用蛋白质定量试剂盒对纯化后的重组蛋白进行检测，纯化蛋白的纯度在90%以

上，其浓度为0.2 mg/mL。

图4 重组Cap 蛋白的SDS-PAGE

分析

Fig.4 Analysis of recombinant Cap protein by SDS-PAGE M:蛋白质分子质量标准

; 1: 诱导后的 pET32a (＋

) 空载体

; 2:诱导前的 pET32a-Cap 表达产物; 3~8: 分别为pET32a-Cap 经

PITG

诱导 1、2、3、4、5、6 h 的表达产物

M: Protein molecular weight Marker; 1: Induced pET-32a(＋) in BL21; 2: Uninduced pET32a-Cap; 3-8: pET32a-Cap induced in

BL21 with IPTG for 1,2,3,4,5,6 h

图5 重组Cap 蛋白的可溶性分析

Fig.5 Solubility analysis of the recombinant Cap protein

by SDS-PAGE

M: 蛋白质分子质量标准; 1: pET32a-Cap 诱导表达产物; 2: 诱导表达的重组Cap 蛋白超声沉淀; 3: 诱导表达的重组Cap

蛋白超声上清; 4: 纯化的重组Cap 蛋白

M: Protein molecular weight Marker; 1: Induced pET32a-Cap;

2: Sediment of ultrosonicated E.coli after expression; 3: Supernatant of ultrosonicated E.coli after expression;

4: Puri ? ed recombinant Cap protein

2.4 融合蛋白的 Western blot 结果 Western blot 鉴定

结果显示，在目标条带位置上出现一条明显的棕色印记，而空载体转化菌在相应位置则无颜色反应条带，表明该蛋白得到了正确表达并具有良好的反应原性（图6）。

图 2 重组质粒pET32a-Cap2的PCR 鉴定Fig.2 PCR identi ? cation of recombinant plasmid

pET32a-Cap2

1: pET32a-Cap2重组质粒通用引物鉴定; 2: pET32a-Cap2重组质粒特异性引物鉴定; 3:阴性对照；M: DNA 分子量标准

(DL2000)

1: Universal primers identi ? cation of the pET32a-Cap2 recombinant plasmid; 2: Speci ? c primers identi ? cation of the pET32a-Cap2 recombinant plasmid; 3: Negative control; M:

DNA Marker (DL2000)

图3 重组质粒 pET32a-Cap2 双酶切鉴定 Fig. 3 Identi ? cation of recombinant plasmid pET32a-Cap2 by double digestion

M: DNA 分子量标准（DL5000）; 1: Bam H I/ Not I 双酶切产物M: DNA Marker(DL5000);1: Recombinant plasmid pET32a-Cap

digested by Bam H I and Not I

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中国动物传染病学报图6 重组Cap 蛋白的 Western blot 分析结果 Fig.6 Analysis of the recombinant Cap protein by

Western blot

M: 预染蛋白质分子质量标准; 1:重组 Cap 蛋白; 2: PET32a(+)

全菌蛋白对照

M: Prestained protein molecular weight Marker; 1: Recombinant

Cap protein; 2: PET32a(+)

2.5 重组Cap 蛋白免疫原性的鉴定 采集经重组Cap蛋白免疫的小鼠血清，用间接 ELISA 测定抗体效价，结果显示鼠抗重组Cap蛋白的血清抗体效价最高可达1:25 600。结果表明，重组Cap蛋白具有良好的免疫原性。

2.6 病毒感染细胞中PCV2 Cap 的检测 以鼠抗PCV2 Cap蛋白免疫血清为一抗，采用IFA法对PCV2感染

细胞中的Cap蛋白进行检测，结果表明，抗体能与PCV2感染的PK-15细胞发生阳性反应，而对照组则无阳性反应（图7），表明制备的抗体能够特异性的识别自然的PCV2 Cap蛋白。

2.7 免疫血清中和活性的测定 血清中和实验表明，鼠抗PCV2 Cap蛋白的血清中和效价为1:36，具有一定的中和活性（表8）。

3 讨论

自1991年加拿大首次报道由PCV2引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）以来，PMWS相继在全世界范围内被发现，给养猪业带来巨大的经济损失。国内外诸多机构都在积极的开展PCV2防治的研究，越来越多的商品化的疫苗正在出现。目前，市场上商品化的PCV2疫苗主要有：基因工程亚单位疫苗和灭活疫苗[10]。我国于2010年研制出了PCV2灭活疫苗。由于PCV2在PK15细胞上的增殖滴度不高，病毒培养成本高、周期长且病毒培养物不易纯化，给研究和生产带来了一定的困难，因此利用基因工程方法获得安全、高效、廉价的新型亚单位疫苗是我国 PCV2疫苗研究的方向[11]。

由于ORF2基因的前123 bp中富含稀有密码子，这段序列是与核定位有关的信号肽序列，在原核表达中难度很大且表达效果很差，原因可能在于其N

图7 PCV2病毒感染细胞中 Cap 的间接免疫荧光检测

Fig. 7 IFA analysis of PCV2 Cap in PK-15 cell inoculated with PCV2

A: 鼠抗Cap 蛋白血清与接种 PCV2的PK-15细胞反应结果; B: 鼠抗Cap 蛋白血清与正常PK-15细胞反应结果

A: Recombinant Cap antiserum to PK-15 cells inoculated wiht PCV2; B: Recmbinant Cap antiserum toPK-15 cells

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第22卷第5期朱鹏等：猪圆环病毒2 型Cap 蛋白表达及免疫原性鉴定端特殊的氨基酸组成：序列高度保守，N端核内化信号肽含有大量的精氨酸，具有很强的疏水性，并且主要由稀有密码子编码。ORF2的核内化信号肽中高含量的精氨酸，会消耗大肠杆菌中大量编码精氨酸的tRNA，而此tRNA在大肠杆菌中本身含量就不多，即tRNA的量限制了蛋白合成速度，这些稀有密码子的连续出现甚至会抑制蛋白质的合成，导致蛋白合成的早期终止[12]

。Liu等[6]

用大肠杆菌表达了

PCV2 Cap 蛋白全基因，但表达量较低，甚至检测不

到目的蛋白。

原核表达系统具有许多优点，如操作简单，表达外源基因的周期较短等。本试验中对ORF2的前123 bp进行人为剪切后，剩余的579 bp获得了表达，且表达的蛋白保留了PCV2 Cap蛋白原有的4个免疫反应区域。通过对IPTG浓度、诱导表达温度和摇床转速进行优化，发现降低IPTG浓度和诱导温度及摇床转速，重组蛋白会以上清的形式表达，避免了包涵体形式的蛋白繁琐的复性过程，纯化时非常方便且抗原性更好。经Western blot检测表明，表达的 Cap融合蛋白能被猪PCV2阳性血清所识别，具有良好的免疫原性。利用纯化后的蛋白免疫小白鼠，获得了抗Cap蛋白的鼠抗血清。IFA表明该血清具有良好的特异性，中和试验表明，鼠抗PCV2 Cap蛋白抗体具有一定的中和活性。PCV2型 Cap蛋白的表达，为病毒的检测以及PCV2亚单位疫苗的制备打下了基础，同时也为进一步深入研究 Cap 蛋白的功能奠定

了基础。

参考文献

[1] Sanchez R E Jr, Nauwynck H J, McNeilly, et al . Porcine

circovirus 2 infection in swine foetuses inoculated at different stages of gestation[J]. Vet Microbiol, 2003, 83(2): 169-176.

[2] Allan G M, McNeilly F, Meehan B M, et al . Isolation and

characterization of circoviruses from pigs with wasting syndromes in Spain, Denmark and Northern Ireland[J].Vet Microbiol, 1991, 66(2): 115-123.

[3] Chianini F, Majo N, Segale's J, et al . Immunohistochemical

characterisation of PCV2 associate lesions in lymphoid a n d n o n -l y m p h o i d t i s s u e s o f p i g s w i t h n a t u r a l postweaning multisystemic wasting syndrome PMWS[J].Vet Immunol Immunopathol, 2003, 94(1-2): 63-75.[4] Allan G M, Ellis J A. Porcine circoviruses: a review [J].J

Vet Diag Invest , 2000, 12(1): 3-14.

[5] 朗洪武, 张广川, 吴发权, 等. 断奶猪多系统衰竭综合征

血清抗体检测[J]. 中国兽医科技, 2000, 30(3): 3-5.[6] Liu Q, Tikoo S K, Babiuk L A. Nuclear location of the

ORF2 protein encoded by porcine circovirus type 2 [J]. Virology, 2001, 285(1): 91-99.

[7] Shang S B, Jin y L, Jiang X T, et al . Fine mapping of

antigenic epitope on capsid proteins of porcine circovirus and antigenic phenotype of porcine circovirus type 2 [J].Vet Immunol Immunopathol, 2009, 46(3): 327-334.[8] Nawangitgul P, Morozov I, Bolin S R, et al . Open reading

frame 2 of porcine circovirus type 2 encodes a

major

累积数

Cumulative amount

1:128（10-2.1）

5

12

100%

表8 鼠抗血清中和活性的测定

Table 8 The determination of serum neutralizaing activity

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中国动物传染病学报

capsid protein[J]. J Gen Virol, 2000, 81(Pt9): 2281-2287.

[9] 赵玲, 朱玲, 郭万柱, 等. 猪圆环病毒2型Cap 蛋白的表达

及在 ELISA中的初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2011, 42

(6): 808-814.

[10] Grau-Roma L, Fraile L, Segales J. Recent advances in the

epidemiology, diagnosis and control of disease caused by porcine circovirus type 2[J]. Vet J, 2010, 187(1): 23-32.[11] 范红结, 王霞, 陈孝明, 等. 猪圆环病毒Cap蛋白的分泌表

达及其免疫原性研究[J]. 畜牧与兽医, 2012, 44(11): 27-

32.

[12] Lekcharoensuk P, Morozov I, Paul P S, et al. Epitope

mapping of the major capsid protein of type 2 Porcine circovirus (PCV2) by using chemeric PCV1 and PCV2 [J].

Virology, 2004, 78(15): 8135-8145．

猪细小病毒病的诊断及防治

猪细小病毒病的诊断及防治 猪细小病毒病（Porcine Parvovirus Infection，PPV）是由猪细小病毒感染引起的一种繁殖机能障碍性疾病。该病的特点主要是受感染的母猪，特别初产母猪产出死胎、畸形胎、木乃伊胎、弱仔猪及健康仔猪，而母猪本身无明显的其它症状。目前本病在世界各地猪群中普遍存在，在大多数养猪国家呈地方性流行。我国80年代中后期频繁从国外引种，使 该病在我国迅速传播。目前已在我国各地猪群广泛分布存在，特别是集约化猪场造成相当大的危害，据抗体检测统计：猪场阳性率为100%，种猪群阳性率为27.7％～82.2%，严重危害养猪生产发展。由于许多规模化猪场有本病的存在，应该重视猪细小病毒病的防制。 1 病原 本病的病原体为细小病毒科的猪细小病毒，该病毒的粒子呈圆形或六角形，为20面体对称，无囊膜，直径为18～24纳米，基因为单股DNA。病毒具有血凝特性，能凝集豚鼠、恒河猴、小白鼠、猫、鸡和人O型血的红细胞，其中以豚鼠红细胞的血凝性最好；在培养细胞的细胞核中可产生核内包涵体。据报道，PPV毒株有强弱之分，强毒株（例如NADL-8毒株）感染母猪后可导致病毒血症，并通过胎盘垂直感染，引起胎儿死亡；弱毒株（例如NADL-2毒株）感染怀孕母猪后不能经胎盘感染胎儿，而被用作弱毒疫苗株。

本病毒对热、酸、碱及消毒药的抵抗力均较强，对外界抵抗力极强，在56℃恒温48h，病毒的传染性和凝集红细胞能力均无明显的改变。70℃经2h处理后仍不失感染力，在80℃经5min加热才可使病毒失去血凝活性和感染性。在空圈内可持续存在20周。本病毒能凝集豚鼠、大鼠、小鼠、鸡、鹅、猫、猴和人O型红细胞，其中以豚鼠的红细胞最好。0.5%漂白粉、2%氢氧化钠5min可杀死病毒。 2 流行病学 该病最早于1967年在英国报道，目前呈世界流行，给养猪业造成较大的经济损失。 猪是唯一已知的易感动物，不同年龄、性别的家猪和野猪均可感染。据报道，在一些家禽和试验动物（例如牛、绵羊、猫、豚鼠、小白鼠和大白鼠等）血清中也存在有本病毒的特异性抗体；来自病猪场的鼠类，其抗体的阳性率也比阴性猪场的鼠类为高。 病猪和带毒猪是主要的传染源。急性感染猪的排泄物和分泌物中含有较多的病毒；感染母猪所产的死胎、活胎、仔猪及子宫分泌物中均含有大量病毒；子宫内感染的仔猪至少可带毒9周；有些具有免疫耐受性的仔猪可终生带毒；被感染的公猪，其精细胞、精索、附睾和副性腺均含有病毒，在其配种时很易传染给易感母猪，常引起本病的扩大传播。

猪圆环病毒的研究进展

猪圆环病毒的研究进展 引自--华中农业大学黄青伟 一、PCV 的发现 猪圆环病毒(porclne Circovirus) 于1974 年在PK 一15 细胞中发现，当时认为是一种细胞污染物，后证实为一种新的病毒。该病毒是一种环状、无囊膜、单链DNA 病毒；在ICTV 第6 次病毒分类报告中，将猪的圆环病毒(PCV) 、鸡贫血病毒(cA V) 、鹦鹉喙羽病毒(PBFDA V)3 个病毒归类于网环病毒科，圆环病毒属成员。 病毒的理化特性 PCV 粒子为20 面体对称结构，其直径人小为17nm ，CsCL 浮密度l 37g ／era3 。无囊膜，含有单股负链环状DNA 。基因组长 1 ．7kb ，分子量5 8 × 102 。PCV 不具凝血活性，可抵抗PH3 ．0 的环境，经氯仿作用不失活，该病毒只在猪源和VERO 细胞培养物中才能完全复制，并且依赖细胞周期s 期表达的细胞蛋白。可在PK —15 细胞上增殖但不引起明显的细胞病变。Tischer 等发现，用a 一氨基葡萄糖处理细胞培养物后可促进病毒的复制。PCV 有两种基因型：PCV 一 1 和PCV 一 2 。前者基因组为1759bp ，后者基因组为1768bp 。PCV 一1 有7 个0RF ，编码大于5KD 的蛋白质。其巾ORFl 编码的蛋质与植物矮小病毒(plant nanovirus) 和喙羽病毒(heak and featherdisease ViruS)ORFL 码的蛋白质有较高的同源性。PCV 一2 有11 个ORF 预计分别编码36 — 2KD 的蛋白，但目前只有 6 个得到证实。PCV 一1 和PCV 一2_ 干相，ORFI 核苷酸和编码的蛋白质的同源性分别为83 ％、86 ％．而ORF2 分别为67 ％、65 ％。二者的主要结构蛋白均由ORF2 编码。 从发病猪的淋巴组织发现了PCV 病毒颗粒，说明发生了病毒传染。用PCR 方法从发病猪淋巴组织中和人工感染仔猪的鼻腔分泌物和粪便中检测到了PCV 和DNA 。 二、流行病学 PCV 的来源现在还不清楚，但它广泛存在于猪源肾细胞中已经得到证实。免疫荧光和免疫酶组化法也证明，PCV 抗原广泛存在于不同代次的PK — 15 、猪源原代、继代细胞以及1 ～19 日龄的猪体内。Gills 等(1988) 还证实，美国菌种收藏中心PK 一15 细胞亚系CCL 一33 ，存在PCV 抗原。 Tischer(1986) 证实，在德国柏林和德国北部两个地区的屠宰场，发现有77 ％～95 ％的猪存在PCV 抗体。另外，还发现柏林地区野猪也存在PCV 抗体。Edwards 等(1994) 证实，他们收集的血清样品86 ％(75 ／87) 存在PCV 抗体，Hines 等(1995) 证实，在美围佐治亚州的11 个猪群、北卡罗来纳州的 1 个猪群、衣阿华州均存在PCV 抗体，抗体阳性率为53 ％(208 ／399) 。此外，加拿大、澳大利亚、新西兰等国家也有猪群中存在PCV 抗体的报道。但以上报道均未发现感染猪有临床症状，因此可以断言PCV 一 1 的流行是世界性的。 随着PCV 一 2 概念的提出，目前在德国、法国、新西兰、美国、加拿大、爱尔兰、印度、日本、中国台湾等国家和地区已有从PMWS 猪中检测到PCV 一 2 的报道。我国郎洪武等通过ELISA 方法在可疑猪群中也大量的检测到了PCV 一 2 抗体。这些资料说明PCV － 2 也已在世界范围内流行。Allen 指出PCV 一 1 可能在猪的育肥期间发生感染，北爱尔兰的一项纵向研究指出仔猪在出生8 ～9 周龄后，血液中PCV — l 盼母源抗体消失，但在13 ～15 周龄时PCV 一1 的抗体又出现。这说明PCV 一1 感染主要发生在第11 ～13 周龄期间，而这恰好是仔猪从保育舍向育肥舍转移的时期。

猪圆环病毒的七大主要症状

猪圆环病毒的七大主要症状 我们相信科学指导生产，我们相信数据客观真实，我们相信改变才能突破提高。 圆环病毒的代表性疾病有猪断奶后多系统衰竭综合症、母猪繁殖障碍、断奶猪和育肥猪呼吸道疾病、猪皮炎肾病综合症、猪腹泻综合征以及仔猪的中枢系统疾病。 由于圆环病毒能破坏猪体的免疫系统，造成免疫抑制，引起继发性免疫缺陷，因而本病常与蓝耳病、细小病毒、伪狂犬、及猪副嗜血杆菌、气喘病、胸膜肺炎、巴氏杆菌和链球菌等混合感染或继发。 猪圆环病毒病是以免疫抑制为主要特征的一类病毒性传染病，临床表现较为复杂。圆环病毒对免疫器官有严重的侵害性，可导致机体免疫系统免疫的高度抑制。通俗的讲，圆环病毒可以是疫苗免疫失效，机体免疫力减弱或消失。圆环病毒的代表性疾病有猪断奶后多系统衰竭综合症、母猪繁殖障碍、断奶猪和育肥猪呼吸道疾病、猪皮炎肾病综合症、猪腹泻综合征以及仔猪的中枢系统疾病。 一、PIDS（猪免疫缺陷综合症） 1：猪机体抵抗力降低，更易继发感染其他病原，这也是圆环病毒与猪的许多疾病混合感染有关的原因。 2：对减弱疫苗或低致病性微生物可以引起发病。 3：疫苗接种不产生免疫应答。 4：重复发病对治疗无应答性。 二、PMWS（猪多系统衰竭综合症） 最常见的是猪只渐进性消瘦或生长迟缓，这也是诊断PMWS所必需的临床依据，其他症状有厌食、精神沉郁、行动迟缓、皮肤苍白、被毛蓬乱、呼吸困难、咳嗽为特征。较少发现的症状为腹泻和中枢神经系统紊乱。发病率一般很低而病死率都很高。 四季均可发生，主要危害断奶后2～3周的仔猪（40～70日龄）。实行早期隔离断奶的猪场，仔猪也有该病的发生，病毒可随粪便和鼻腔分泌物排出体外，经消化道传播或者可能经胎盘垂直传染仔猪，发病率和死亡率不定；呈地方性流行时，发病率和死亡率均较低，但急性爆发时，发病率可达50%，病死率高达20%～30%。如果该病与猪细小病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒、链球菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌等混合感染时，仔猪的死亡率会更高。 三、PRDC（猪呼吸道疾病综合症）

猪圆环病毒的八大危害

猪圆环病毒的八大危害 技术专题"猪圆环病毒病的八大危害 作者：华传仙江西派德农实业有限公司 2003年,第四届国际新出现与再出现猪病大会在意大利罗马举行,此届猪病大会的主题是猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、仔猪断奶多系统衰竭综合征(PMWS)和猪流感(SIV)，表明猪圆环病毒病已成为世界猪病热点。南京农业大学吴增坚教授等(2006)对2004年6～12月间华东地区送检的猪呼吸道疾病综合征的病料进行PCR基因测序，病毒病检出率由高到低排列为：蓝耳病病毒：82%（68/83）；圆环病毒：80%（52/65）；猪瘟病毒：76%（19/25）；细小病毒：42%（15/36）；伪狂犬病病毒：33%（4/12）。 猪圆环病毒(PCV)在1982年被发现,当时被认为是PK-15细胞系的一种污染物。血清学调查证实德国(1982)、加拿大(1989)、新西兰(1991)、英国(1994)、美国(1995)都有本病毒存在,它广泛分布于世界各地。本病自1996年首次报道后，近10年中几乎遍及所有养猪比较发达的国家，许多规模化猪场均受到重创，致使不少染病猪场保育猪死、淘率高达20％，少数猪甚至高达50％左右。现有的研究基本上都证明，圆环病毒Ⅱ在蓝耳病病毒或者某些免疫增强剂等因素的共同作用下，加深了对淋巴系统的侵害，造成淋巴细胞缺少和淋巴肉芽肿的特殊病变，继而造成机体的免疫抑制，引发多种相关疾病。 一、与蓝耳病并发是造成保育猪和生长前期育肥猪（6～13周龄）死亡的主要原因

Harms等（2001）采用剖腹取胎，不吃初乳人工饲喂至3周的猪做实验：19头单接种圆环病毒，表现为发热、嗜睡、轻度呼吸加快，4头黄疸，14头渗出性皮炎。因黄疸死亡2头，渗出性皮炎死亡1头，出血性胃溃疡死亡3头，接种后28天死亡率26%，呈典型的断奶后多系统衰竭综合征眼观与组织学病变。 17头联合接种蓝耳病病毒和圆环病毒，表现为发热、昏睡，由呼吸加快发展为呼吸困难，偶见黄疸，接种后10天，死亡率91%，接种后20天全部死亡，表现为严重间质性肺炎和坏死性肝炎（Vet Pathol 38:528-539）。 以上实验表明，单一圆环病毒感染可引起消瘦、黄疸为主的断奶后多系统衰竭综合征，而蓝耳病病毒与圆环病毒同时感染引起以呼吸困难为特征，致死率可达100%。 二、造成断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) 本病的主要临床症状为体温升高，进行性消瘦，体重减轻，被毛粗乱、毛竖起，皮肤苍白或黄疸（20%比例），继而呼吸加快，腹式呼吸或张口呼吸，腹部起伏明显，腹股沟淋巴结明显肿大，最后死亡。无继发感染病例不咳嗽，不腹泻。 剖检可见腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结肿大，切面苍白不出血，肺部病变以间质增宽、水肿和肺浆膜面斑点状出血为特征。 三、参与呼吸道疾病综合征（PRDC） 圆环病毒病在多数情况下，被视为断奶仔猪多系统衰竭综合征的孪生病，其发病原因，系由猪群在蓝耳病或蓝耳病和猪圆环病毒Ⅱ型

十二、猪细小病毒检测方法

十二、猪细小病毒检测方法 猪细小病毒血凝抑制试验操作方法 （一）材料准备 1．抗原：猪细小病毒浓缩抗原 2．PPV阳性及阴性血清 3．被检血清：自被检猪的前腔静脉血或自耳静脉采血分离血清。 4．红细胞：按抗凝剂与血液1：4的比例心脏采集豚鼠血液，用PBS洗三次，沉积红细胞配成0.5%悬液备。 5．稀释液：用灭菌的PH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。 6．25%白陶土：取白陶土25克，置离心瓶中，加入适量1mol/L盐酸溶液，充分搅匀，2 000转/分钟离心10分钟，弃上清，再加1mol/L盐酸溶液，搅匀，离心，反复洗三次，沉淀白陶土，用0.15mol/L生理盐水100毫升配成25%悬液，然后用5mol/L氢氧化钠溶液调pH7.2左右,高压灭菌,置4℃备用,保存期不超过半年。 7．器材：96孔U型滴定板或V型滴定板，25微升稀释棒，25微升滴管，微量振荡器，普通离心机。 （一）试验操作 HA：用滴管在滴定板上从第一孔至试验所需稀释倍数孔，每孔滴加稀释液25微升于第一孔再滴加抗原25微升，用稀释棒从第一孔开始依次稀释。置微量振荡器上振荡15秒，最后每孔滴加0.5%豚鼠红细胞25微升，振荡30分钟，置室1小时判定并记录结果。 HI：用滴管在滴定板上从第一孔至所需稀释倍数孔各加稀释液25微升，于第一孔滴加被检测血清25微升，然后每孔加4单位抗原25微升，振荡15秒，置4℃13小时或室温4小时，每孔加0.5%的豚鼠红细胞悬液25微升，振荡30秒，置室温1小时判定结果。以完全抑制的最高稀释倍数做为HI价。同时设已知阳性血清、已知阴性血清、不加抗原的被检血清及抗原、红细胞对照。抗原对照亦即第二滴定，复核使用单位。 （二）判定标准及注意事项 1．判定时先检查对照是否正确，唯有对照各孔准确方可证明操作和使用材料无误。 2．红细胞凝集现象的判定 （1）红细胞均匀的平均铺于孔底者可判为“++++”。 （2）基本上与（1）相同，但边缘有下滑皱缩者为“+++”。 （3）红细胞于孔底形成环状或成团，四周有小凝集块者为“++”。 （4）红细胞于孔底形成团块，但边缘不整齐或有少量小块者为“+”。 （5）红细胞于孔底形成小团块，边缘整齐光滑，稀释液清亮者为“—”。“++”以上凝集的最高稀释倍数做为HA价。 3．凝集抑制：本试验红细胞集中于孔底呈团块状，边缘光滑整齐为阳性，以“—”表示，说明抗原凝集红细胞的特性已被抑制，反之红细胞呈“++”以上凝集现象者判为阴性。 1．凝集抑制价：以被检血清最大稀释倍数能抑制红细胞凝集者为该血清抑制

猪圆环病毒病症状有哪些

猪圆环病毒病症状有哪些 猪圆环病毒病主要侵害5-16周龄的仔猪，引起仔猪渐进性消瘦、呼吸急促或困难、腹泻、贫血、皮肤苍白和全身淋巴结肿大，导致断奶后与生长期的猪生长迟缓及高死淘率，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。下面我们了解一下猪圆环病毒病症状有哪些。 猪圆环病毒病的临床症状 (l)断奶后仔猪的系统衰竭综合征(pmws)：6-16周断奶仔猪表现为发育不良消瘦、皮肤苍白、肌肉衰弱无力、呼吸系统多发性炎症、呼吸困难、腹泻、贫血、黄疸、体表淋巴结肿大，皮肤出现蓝色的皮下出血点，特别是最后一对乳头呈淡蓝色。有些猪出现神经症状，如角弓反张、四肢划动，最后因衰竭死亡。 (2)猪皮炎与肾病综合征(pdns)：主要表现体温微高至正常，主要从后肢和臀部开始出现中央为黑紫色，边缘呈紫红色圆形或不规则形，隆起于皮肤表面，呈斑块状黑色痂皮，并逐步向前躯蔓延，如无继发感染，一般死亡率在15%以下。 (3)仔猪先天震颤症(ct)：主要表现出生仔猪全身骨骼肌肉痉挛性收缩，头部、肋部四肢震颤，站立不稳，行走困难、吮吸不住乳头，因仔猪吃奶不足表现昏睡、低血糖症，最后衰竭而死。要与缺硒、猪伪狂犬病，单纯的由于母猪无乳综合征引起的初生仔猪低血糖症，以及猪瘟感染相区别。 猪圆环病毒的剖检

(1)pmws：猪尸体消瘦，有不同程度贫血和黄疸，全身淋巴结肿大4-5倍，切面呈苍白色，可见间质性肺炎、肺门淋巴出血肿大、支气管黏脓性炎症引起的肺部表面散在隆起的胶状硬块。腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及支气管淋巴结显著肿大、质硬，切面结构致密、灰白色或见出血。 (2)pdns:除确皮肤表现外，双侧肾肿大到原来3-4倍，颜色苍白，表面有出血点，切面多汁并伴有灰白色坏死灶。脾肿大、肝脏呈橘黄色外观，心脏肥大。肺脏呈弥漫性或局灶性间质性肺炎病变，病变部变硬，呈灰红色或灰白色。 (3)繁殖障碍：检验可见死胎和木乃伊胎、新生仔猪胸腹腔积水，心脏扩大成苍白色。肾脏肿大，色变淡，表面或切面皮质部有大小不等的灰白色斑点（白斑肾）。 猪圆环病毒的实验室诊断 (1)本病确诊须进行病毒的分离，证明病原的存在，也可以用血清学方法诊断。 (2)实验室诊断通常取发病猪肺、脾、淋巴结和肾等病理组织样品，制成组织悬液接种于pk-15细胞，分离纯化病毒。采用间接免疫荧光试验、电镜技术、胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附试验(elisa)作为辅助诊断手段。 (3)常用的病原学诊断程序。采集剖检所见典型的病料，可直接采用pcr方法或原位杂交技术(ish)进行快速诊断。免疫荧光和原位杂交将被用来确定组织或器官中的病毒或核酸。采集剖检所见典型的病料，

母猪细小病毒怎么治

母猪一旦患上细小病毒病，几乎百分之百会导致母猪产下死胎，其它的症状可能会包括有仔猪畸形和干胎，母猪难配种等。 许多母猪场母猪表现正常，但是配种配不上可能就是因为猪细小病毒的预防没有做好。产生干胎的原因是因为，母猪如果患有细小病毒病，在怀孕的早期，胎儿就会死亡，但是无法立即排出，所以母猪自身免疫排斥，钙化的结果。 另外，细小病毒的传染也是十分的厉害，主要原因是因为细小病毒有着极其顽强的生命力。高温可以杀死大部分的细菌和病毒，但是猪细小病毒对热具有较强抵抗力，细小病毒处于56℃48小时或处于70℃2小时，细小病毒仍然具有感染性，只有在80℃高温下，才能

抑制住病毒的活性。同时猪细小病毒对酸碱也有较强的抵抗力，在pH3.0～9.0之间稳定，能抵抗乙醚、氯仿等脂溶剂，这些消毒剂几乎对猪细小病毒完全没有效果。2%戊二醛需要20分钟才能一直活性，甲醛蒸气和紫外线需要相当长的时间才能杀死该病毒。短时间胰酶处理对病毒悬液感染性不仅没有影响，反而能提高其感染效价。在pH9.0的甘油缓冲盐水中或在零下20摄氏度以下能保存一年以上毒力不会下降。 细小病毒的传染源和发病都比较隐蔽，如果没有专业的经验，难以发现。各个年龄段的猪和不同性别的猪，不同品种的猪，甚至野猪都可以携带细小病毒，进行传染。但是最终表现出症状的，却是在配种的母猪和怀孕的母猪身上。比如母猪难配种，母猪易流产。病变主要在胎儿，可见感染胎儿充血、水肿、出血、体腔积液、脱水(木乃伊化)及坏死等病变。 猪群暴发此病时常与木乃伊、窝仔数减少、母猪难产和重复配种等临床表现有关。在怀孕早期30-50天感染，胚胎死亡或被吸收，使母猪不孕和不规则地反复发情。

猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展

猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展 猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一，造成猪场损失惨重，疫苗免疫成了救命的稻草。从2011年猪圆环疫苗上市至今，已有17家圆环产品先后上市，目前，出现严重供大于求的现象，同时，养殖场也面临着幸福的烦恼，大量产品的上市，产品价格可能下降，但是，面对玲琅满目的产品，如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题，针对这些烦恼，本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助，避免走弯路，为养殖场服务。 1.PCV-2国内外最新流行动态 由PCV-2引发的疾病已成全球流行之势，在加拿大首次报道该病原引起PMWS后[1]，学者通过调查本国包括SPF猪、部分散养猪以及育肥猪发现，猪群中PCV-2血清中抗体普遍存在，但目前该病在加拿大仍然只是散发。在英国和北爱尔兰，猪群血清中PCV-2抗体阳性率分别为86％和92％。美国、法国、丹麦、意大利、西班牙、荷兰、新西兰、日本、韩国、墨西哥等国家也相继报道猪群中存在PMWS。在我国猪群中PCV-2感染情况也不容乐观。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22个猪群采集了559份血清，用ELISA 方法检测PCV-2抗体，其阳性率高达5l％，表明我国猪群中存在PCV-2的感染。王忠田等[3]用PCR方法对我国北京、山东、河北、深圳、山西、天津、广东等省(市)的12个规模化猪场发病猪群进行猪圆环病毒2型感染的流行病学调查，结果表明猪圆环病毒2型感染情况在我国猪群中相当严重。李超等[4]在2010年对安徽省PCV-2流行病学调查，结果表明安徽省14个市(县)的PCV-2抗体阳性率平均为74.36％，表明安徽省猪群中普遍存在着PCV-2的感染。从上述报道表明PCV-2在我国猪群中广泛存在。根据流行病学调查显示，虽然猪群中PCV-2抗体阳性率较高，但很大比例的抗体阳性猪群并不表现出临床症状。PCV-2与其他多种病原混合感染较为严重，调查发现沙门氏菌、大肠杆菌等细菌性病原与PCV-2混合感染率达到了20％[5]。陕西省PCV-2与PRV混合感染率是21.7％[6]。2005年陈义祥等对广西地区197份组织病料检测发现，PCV-2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染占总病料数量的57.73％。2003年王文军等[7]对黑龙江地区PCV-2阳性猪群的病料调查发现，蓝耳病和猪瘟的阳性率也较高。 哈尔滨兽医研究所刘长明[8]在2007年采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验（IPMA）对来自与黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地的健康猪群480份血清和发病猪群424份血清，抗体阳性率分别为79.2%和91.7%，表明PCV-2在猪群中感染率非常高。 山东农科院畜牧兽医研究所吴家强博士检测结果也证实PCV-2防控比较糟糕，PCV-2，2010年检出率为34.66%（124/357），2011年检出率为25.59%(174/588)；2012年检出率为 21.38%(147/683)，圆环病毒病依然严重，但有下降趋势，这个和使用圆环疫苗免疫有关系。 2.PCV-2病毒特点

猪瘟病毒蛋白的结构与功能

猪瘟病毒蛋白的结构与功能 李　军　杨　威3　陈凤莲　赵　武　(广西兽医研究所　广西南宁　530001) 猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性的病毒性传染病。猪瘟因其流行广泛、发病率和死亡率高,给许多国家的养猪业造成巨大的经济损失,在世界动物卫生组织制定的《国际动物卫生法典》中,它被列为A类16种法定传染病之一;在我国制定的《家畜家禽防疫条例实施细则》中也被列为一类传染病。当前猪瘟防治主要还是依赖于疫苗,虽然猪瘟疫苗的使用降低了猪瘟的发病率和死亡率,但是CSFV持续性感染导致的免疫失败,使人们开始把研究重点转向对病毒与宿主相互作用的研究。反向遗传学技术的出现,为我们了解病毒的基因结构、蛋白功能、基因重组提供了技术平台,得以从整个基因组水平来研究错综复杂、相互关联的基因组和蛋白组,这使得CSFV的病原学研究取得了新突破。本文现将国内外近年来对CSFV基因结构、病毒蛋白功能上的研究作一综述。1　病毒的基因组结构 CSFV是一种有囊膜的正链单股RNA病毒,与牛病毒性黏膜腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)同属黄病毒科瘟病毒属成员。CSFV基因组大小约12.3kb,5’非编码区由373个核苷酸组成,含有RNA复制所需的顺式作用元件和一个帽不依赖性翻译所需的内部核糖体进入位点;3’非编码区约由229～244个核苷酸组成,参与RNA的复制。CSFV 只编码一个大约3900氨基酸残基的多聚蛋白开放阅读框(ORF),该多聚蛋白在翻译过程中和翻译后,在病毒编码的蛋白酶和宿主细胞酶的作用下,分解成为4个结构蛋白(C、E rns、E1和E2)和8个非结构蛋白(N pro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。 2　病毒的蛋白 CSFV蛋白在病毒基因组的编码顺序为:N pro、C、E rns、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。N pro、C、E rns、E1、E2、P7和NS2蛋白对于病毒RNA复制是非必需的,NS3、NS4A、NS4B和NS5A形成复制复合体与具有RNA依赖性RNA聚合酶活性的NS5B共同参与病毒RNA的复制。 2.1　N pro蛋白 N pro蛋白由168个氨基酸残基组成,分子量为23K Da,是一种具有蛋白水解酶活性的半胱氨酸蛋白酶。N pro是CS2 FV中最先翻译的非结构蛋白,能在Cys168与Ser169间自我裂解,产生自己的C端,成为成熟的病毒蛋白。G lu22、His49和Cys69是保持N pro蛋白水解酶活性所必需的氨基酸残基。Tratschin等(1998)用鼠的泛素基因替换CSFV的N pro基因,证明了N pro对病毒在传代细胞内的复制是非必需的。Mayer D等〔1〕将猪瘟中等毒力株Alfort/187和强毒株Eystrup的N pro基因分别缺失后感染猪,结果猪产生了高水平的抗体并可以抵抗强毒的攻击。用疫苗株Riems的N pro基因置换强毒株Eystrup的N pro基因,得到重组病毒仍然为强毒株。因此, N pro只是CSFV的一个毒力相关基因,对CSFV各毒株的毒力不起决定作用。 Ruggli N等〔2,3〕对CSFV干扰宿主细胞抗病毒机制进行了研究,发现CSFV感染巨噬细胞后,可以抑制poly(IC)诱导巨噬细胞产生IFN-α/β,缺失了N pro基因的病毒,虽然在生长特性和蛋白表达水平上与野型病毒相似,但是失去了抑制 细胞产生IFN-α/β的能力。 La Rocca S A等〔4〕研究了N pro抑制细胞产生IFN-α/β的机制,发现N pro可以对参与IFN-α/β转录的干扰素调节因子3(IRF-3)起到抑制作用。在辛德毕斯病毒感染的细胞,可以观察到IRF-3从细胞质移位到细胞核,启动IFN-α/β的转录;而CSFV感染的细胞却与未受感染的细胞相似,虽然也有IRF-3穿梭于细胞核与细胞质间,但IRF-3主要定位在细胞质内。随后的研究证实,N pro蛋白是通过蛋白酶体降解途径降解IRF-3〔5〕。这些结果表明N pro有助于CS2 FV逃避机体的天然免疫,建立持续性感染。 2.2　C蛋白 C蛋白由99个氨基酸残基组成,分子量为14K Da,是CSFV的衣壳蛋白,其N端由有蛋白水解酶活性的N pro蛋白在Ser169处切割产生,其C末端是宿主细胞的信号肽酶在Ala265处切割产生〔6〕。C蛋白除了与病毒基因组RNA结合,保护病毒RNA外,还具有转录调节作用。C蛋白通过自身的核定位序列KKKGKV进入细胞核,激活热休克蛋白基因的启动子,启动热休克蛋白的转录。热休克蛋白作为一种伴侣分子,它的大量表达有助于病毒蛋白的折叠和病毒粒子的装配。 2.3　E rns蛋白 2.3.1　E rns蛋白的结构:E rns蛋白是分子量为26K Da的囊膜糖蛋白,由227个氨基酸残基组成(G lu268-Ala494),有9个潜在的N-糖基化位点。多肽链中的9个半胱氨酸残基维持蛋白结构,其中Cys438起着维系E rns二聚体的作用,van G ennip H G等〔7〕将E rns的Cys438突变为Ser后,E rns单体不能形成二聚体,降低了病毒粒子与SK-6细胞表面受体硫酸乙酰肝素的亲和力,影响了病毒的复制效率。 2.3.2　E rns蛋白的RNase活性:Schneider等(1993)报道了 E rns具有RNase活性,RNase活性最适p H为6.0～6.5,最适温度为55℃,酶活性不受Ca2+、Mg2+或EDTA(1mM)的影响。E rns对DNA没有活性,只作用于单链RNA,对富含U序列活性最高。E rns蛋白的His297和His346是酶的催化位点, His297和His346的突变虽然不会影响病毒在细胞中的增殖,但可使E rns丧失RNase活性,导致病毒毒力减弱,而且His297的缺失则可直接导致病毒无感染性。由于E rns具有RNase活性,在体外试验中,它不仅可以完全抑制刀豆素A 诱导的淋巴细胞增殖,还可以导致淋巴细胞凋亡。因此,E rns 的RNase活性不仅影响了病毒的毒力,而且还可能是CSFV 发生持续性感染的原因。 2.3.3　E rns蛋白在CSFV侵入中的作用:Hulst M M等(1997)的研究表明,CSFV感染传代细胞SK-6是通过其两个囊膜糖蛋白E rns和E2分别作用于细胞表面的不同受体来进行的。首先是E rns与细胞表面受体的不可逆结合介导了病毒的吸附;其次是E2与细胞表面特异性受体的可逆结合介导病毒的穿入。CSFV Brescia株在SK-6细胞上连续传代后,位于E rns内的476位氨基酸由不带电荷的丝氨酸突变为带正电荷的精氨酸,病毒通过这种突变可以更好地吸附在细胞表面带负电荷的硫酸乙酰肝素上,提高了病毒的复制效率,其毒力只是轻微减弱或没有改变〔8～11〕。巨噬细胞表面 3为通讯作者。 基金项目:广西自然科学基金(桂科自0728103)。 ? 9 6 ? 《上海畜牧兽医通讯》　2007年第6期

猪圆环病毒Ⅱ型抗体检测试剂盒

仅供科研使用，不得用于临床检验。 猪圆环病毒Ⅱ型抗体(PCV2-Ab)定性检测试剂盒（ELISA）说明 书 【产品名称】 通用名称：猪圆环病毒Ⅱ型抗体(PCV2-Ab)定性检测试剂盒（ELISA） 英文名称：Test Kit for Antibodies to Porcine Circovirus 2 ELISA KIT 【包装规格】 96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus 2，PCV2）引起的猪的一种多系统功能障碍性疾病，其临床表现多种多样，主要为断奶仔猪多系统衰竭综合症、猪皮炎与肾病综合征、母猪繁殖障碍等。 本试剂用于检测猪血清中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，可用于猪圆环病毒Ⅱ型疫苗免疫效果评价。 【检验原理】 本试剂盒系由预包被猪圆环病毒Ⅱ型重组cap蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪圆环病毒Ⅱ型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体。

【主要组成成分】 主要成分 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，

猪细小病毒的鉴定

文献综述http://442325516＠https://www.wendangku.net/doc/0f10353939.html, shmilydgjad＠https://www.wendangku.net/doc/0f10353939.html, 猪细小病毒的鉴定 杜桂娇 西南大学荣昌校区动物医学系重庆荣昌 402460 摘要：细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）属于细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus）。首先发现猪细小病毒（PPV）是Mayr和Mahnel(1966)进行猪瘟病毒组织培养时发现的，认为是细胞内潜伏感染的病毒，并相继从一些正常的猪肾细胞中发现直径为22nm一23nm的病毒粒子，经核酸鉴定为DNA【2】。PPV感染可引起猪的繁殖障碍性疾病【5.8】，其特征为感染母猪，特别是初产母猪产出死胎、畸形胎、流产及病弱仔猪。母猪本身无明显症状。 关键词：猪细小病毒；诊断方法；预防与治疗；研究进展 猪细小病毒病是由猪细小病毒（PPV）所引起的一种病毒性传染病。PPV主要集中在淋巴组织，在肺泡巨噬细胞和淋巴细胞内大量复制，损害巨噬细胞的吞噬功能和淋巴细胞的母细胞化能力，从而引起机体免疫力下降。Hallauer等（1960～1971）从43株人传代细胞系中分离出38株细小病毒，其中大部分与PPV有共同抗原关系[l]。 Cartwright和Huek(1967)【2】从猪流产的胎儿中分离出PPV，首次证明了它的致病作用，通过血清学鉴定证实，所有上述分离毒株，包括从一些传代细胞系中分离的类似病毒均与PPV同属一型。本病于1967年在英国报道，其后欧美、亚洲及大洋洲很多国家均有本病的报道。我国也报道有本病的发生，上海、北京和江苏等地也相继分离到猪细小病毒。 1、细小病毒概述 1.1病原学细小病毒（PPV）是细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus）的一个成员。PPV呈圆形或六角形，无囊膜，直径为20nm，基因组为单股线状DNA。存在方式为完全病毒粒子和空壳病毒粒子，在氛化艳中的浮密度为1.30g/ml～1.39g/ml【3】，沉淀系数为105S。本病毒只有一个血清型，且与其他病毒不早现交叉反应，能使培养细胞产生病理变化(cytopathic effect CPE)【4.5】。 PPV对热具有强大的抵抗力。Cartwright等(1967)报道【2】：PPV在56℃ 30min

猪瘟病毒

猪瘟病毒 猪瘟（swine fever）是猪的一种急性、接触性传染病，是猪的最主要的传染病之一，该病1883年首先发现于美国，死亡率可以达到80%～90%，往往给养猪业造成严重的经济损失。 1、形态 猪瘟病毒粒子直径为34～50nm，有20面体对称的核衣壳，内部核心直径约30nm，病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有脆弱的纤突结构。猪瘟病毒可以通过各种除菌滤器。 2、理化特性 猪瘟病毒不耐热，56℃下60分钟即可被灭活，60℃10分钟就会丧失感染力。猪瘟病毒在pH5～10之间比较稳定，低于pH3时病毒滴度下降较快。 猪瘟病毒对乙醚、氯仿和去氧胆酸盐敏感，迅速丧失感染性，对胰酶有中度敏感性。二甲基亚砜（DMSO）对病毒中的脂质和脂蛋白有稳定作用，10%的二甲基亚砜（DMSO）溶液中的病毒对反复冻融一定的耐受性。 3、抗原性 大多数资料认为猪瘟病毒只有一个血清型，国外发现了一些猪瘟的血清学变变种，不易被猪瘟特异性抗体所中和，但至今未确定其稳定的抗原型。 目前分离到了许多慢性猪瘟变异株和低毒力毒株，这些毒株通常免疫原性很差，不能产生明显的血清中和抗体，在用强毒攻击时，往

往呈现厌食和高热等症状，但很少死亡。弱毒疫苗株可以完全保护猪不受这些变异株的感染。 猪瘟病毒和牛粘膜-腹泻病毒（BVDV）具有公共的可溶性抗原，实验证明二者有交叉血清学反应，猪感染BVDV后可以表现为在一定程度上抵抗猪瘟强毒的攻击，有学者认为BVDV是猪瘟病毒的一个特殊的血清学变种，对猪已经减毒，但充分适应于牛和绵羊。 4、培养特性 猪瘟病毒能够在猪肾细胞、猪睾丸细胞、犊牛睾丸细胞和其他许多哺乳动物细胞内增殖。病毒成分在胞浆内合成和装配后释放到细胞外，细胞培养物中病毒的传播呈三种方式：一是被感染细胞释放病毒通过培养液感染新的易感细胞，二是被感染细胞通过有丝分裂将病毒传染给子代细胞，三是通过细胞间桥在细胞之间传播病毒。 许多研究者试用不同种类的细胞，主要是猪源细胞在体外增殖病毒，证明骨髓、睾丸、肺、脾、肾细胞及白细胞均能增殖病毒，经过鸡胚传代的猪瘟病毒可以在鸡胚成纤维细胞内生长。猪瘟兔化弱毒株可以在犊牛睾丸细胞和羔羊肾细胞内增殖。感染性最强的是PK-15、PK-2a、ST等几株猪肾和猪睾丸传代细胞系。新合成的病毒大多吸附或结合于细胞之上，仅有约1%的病毒存在于培养液之中。 我国中监所专家周泰冲等人通过将石门系猪瘟强毒在兔体内连续传几百代后培育成功了猪瘟兔化弱毒株，国际上称为中国C株，用于疫苗生产，取得了良好的效果，欧洲一些国家利用该弱毒疫苗株扑灭了本国的猪瘟。

中国首创猪圆环病毒2型灭活疫苗

洛阳普莱柯生物工程股份有限公司 中国首创猪圆环病毒2型灭活疫苗——圆健TM及特性 【技术创新】 ?中国首创（2005年初开始研制，2007年12月独家获农业部批准进入临床试验，2009年7月率先通过农业部新兽药注册初审，2010年7月获农业部复审，2010年8月获农业部新兽药证书，2010年9月12产品在国内首家正式上市）?中国独家采用美国SBC公司技术专利克隆细胞PKK细胞生产（使得病毒原液效价比使用PK-15细胞生产的要高10倍，目前国内产品几乎多数均采用PK-15细胞） ?中国独家全套引进美国SBC公司细胞悬浮培养生产线生产（该条生产线耗资138，000，000元人民币，生产的病毒原液效价比转瓶生产高100~140倍，目前国内除了一家生产五号病疫苗的企业拥有该生产线外，同类产品几乎均为转瓶生产工艺） ?流行毒株PCV2b——PCV-2-SH株专利毒株 ?疫苗佐剂为独家采用进口法国Seppic公司的Montanide ISA206(W /O/W)双相油乳剂（同类产品为普通国产矿物油佐剂或者水质佐剂） ?产品按欧III版GMP标准生产（国内同类产品生产企业中唯一的中外合作企业，外国专家担任生产技术总监——荷兰乌特列支国立大学博士舒海索Hessel原诺华公司生产CEO全程把控产品品质） 【抗原含量】 ?圆环病毒疫苗农业部国家标准为高于:106.0TCID50/ml ?圆健T M抗原含量为：107.0TCID50/m l（圆健TM配苗前病毒原液抗原高于107.0TCID50/ml，而其它同类产品均采用PK-15细胞和普通的转瓶工艺生产的病毒原液抗原一般在104.0TCID50/ml~105.0TCID50/ml之间） 【使用对象及方法】 ?仔猪：对于母抗不高、感染压力大的猪场推荐10—21天仔猪可以首免1ml/头,再于首免14-21天后加强1ml/头。也可以按说明书“仔猪14～21日龄：2ml/头” ?与喘气苗、蓝耳苗之间无明显相互免疫干扰作用。 ?母猪：2ml/头.次；圆环病毒污染严重猪场所有母猪：一年2—3次一刀切免疫，或者产前15—45天跟胎免疫。或普免和跟胎免疫结合。 ?使用方法：推荐时间：夏季早上接种，秋冬春下午接种。用前回温到25-30摄氏度左右，颈部肌肉注射。 ?保存方法：2—8℃。 ?免疫保护期：6个月（3个月）。

猪圆环病毒病 概述

猪圆环病毒病概述：本病由猪圆环病毒(PCV)引起。病原-----PCV 1、分类：1995年列为圆环病毒科（Circoviridae)。在本科里还有其他的病毒，如鸡传染性贫血病毒（CA V）、鹦鹉喙羽病病毒（BFDV）。PCV、BFDV列为圆环病毒属，CA V列为环形病毒属。 2.核酸类型：DNA。其单链环状DNA染色质有1759个碱基组成。且已克隆测定了序列。有11个开放阅读框架，编码11种蛋白质。引起PMWS的PCV和引起PK-15污染的PCV，同属于圆环病毒属，且高度的同源，但抗原性及DNA序列方面有一定的差异。为了区别，日前将PCV－PK15称为PCV-1，而将PMWS称为PCV-2。3、形态大小：为无囊膜二十面体，大小约4～26.5nm。4、PCV可在猪源细胞上复制，但CPE不明显。5、存在：淋巴结，骨髓，血液。流行病学1、PCV易引起猪发病，一般不与CA V 和BFDV发生交叉感染，但用ELISA证实人血清有30%、小鼠血清12%~69%、牛血清35%抗体阳性。2、血清学调查表明：猪的阳性为20%~80%，且分布极其广，几乎世界各处都有。3、6~8周龄的猪多发，在PRRS阳性猪群中更易继发本病。4、发病率高，病死率有高有低，但即使不死，亦诱发其它疾病的发生。症状①仔猪断奶后多系统衰弱综合症；②猪皮炎肾病综合症；③相关性繁殖障碍综合症；④相关性肺炎； ⑤相关性肠炎；⑥相关性神经系统病。体重减轻，渐进性消瘦，虚弱。呼吸困难，过速，偶有咳嗽。皮肤苍白，结膜黄染。下痢、腹泻。中枢神经紊乱。病变：全身淋巴结肿大，尤以腹股沟淋巴结为最，肿大达3~4倍，切面充血、出血。肺弥漫性病变，比重增加，坚实成橡皮样，表面呈花斑状。肝花斑状，萎缩。脾肿大，切面呈肉状。肾被膜有白色病灶，肿大。回肠有花斑状。诊断：一、临诊腹股沟淋巴结肿大，脾、肾肿大，肝萎缩，渐进性消瘦，有诊断价值。二、实验1、原代肾细胞或PK-15可用作培养PCV-2，但在细胞培养物上还不能判是否有病毒存在。需要特异抗体用免疫荧光或直接免疫过氧化物酶染色确认。2、用PCR扩增病毒。3、待检材料做组织切片，观察有否包涵体。4、ELISA测定抗体。防治1、预防：圆环病毒-繁殖障碍与呼吸综合症二联苗。首免：10-15日龄。二免：30-35日龄。2、发病后的处理：1）在饲料中添加呋喃妥咽或病毒灵或病毒唑，多维。2）注射圆环·蓝毒康或圆环抗毒杀。3）注射猪用干扰素

猪瘟病毒

猪瘟病毒 猪瘟（swine fevｅr）是猪的一种急性、接触性传染病，是猪的最主要的传染病之一，该病１88３年首先发现于美国，死亡率可以达到80%~90%,往往给养猪业造成严重的经济损失。 1、形态 猪瘟病毒粒子直径为３4~50ｎm,有20面体对称的核衣壳,内部核心直径约30nm，病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜,病毒粒子表面有脆弱的纤突结构。猪瘟病毒可以通过各种除菌滤器。 2、理化特性 猪瘟病毒不耐热，５6℃下60分钟即可被灭活,6０℃１０分钟就会丧失感染力。猪瘟病毒在ｐH5~１0之间比较稳定,低于pH3时病毒滴度下降较快。 猪瘟病毒对乙醚、氯仿和去氧胆酸盐敏感,迅速丧失感染性,对胰酶有中度敏感性。二甲基亚砜(DMSＯ)对病毒中的脂质和脂蛋白有稳定作用，１0%的二甲基亚砜（DMSＯ）溶液中的病毒对反复冻融一定的耐受性。 ３、抗原性 大多数资料认为猪瘟病毒只有一个血清型,国外发现了一些猪瘟的血清学变变种,不易被猪瘟特异性抗体所中和,但至今未确定其稳定的抗原型。 目前分离到了许多慢性猪瘟变异株和低毒力毒株,这些毒株通常免疫原性很差,不能产生明显的血清中和抗体,在用强毒攻击时，往往

呈现厌食和高热等症状，但很少死亡。弱毒疫苗株可以完全保护猪不受这些变异株的感染。 猪瘟病毒和牛粘膜-腹泻病毒（ＢＶＤＶ）具有公共的可溶性抗原,实验证明二者有交叉血清学反应，猪感染BVＤV后可以表现为在一定程度上抵抗猪瘟强毒的攻击,有学者认为ＢVＤV是猪瘟病毒的一个特殊的血清学变种,对猪已经减毒,但充分适应于牛和绵羊。 4、培养特性 猪瘟病毒能够在猪肾细胞、猪睾丸细胞、犊牛睾丸细胞和其他许多哺乳动物细胞内增殖。病毒成分在胞浆内合成和装配后释放到细胞外，细胞培养物中病毒的传播呈三种方式：一是被感染细胞释放病毒通过培养液感染新的易感细胞,二是被感染细胞通过有丝分裂将病毒传染给子代细胞,三是通过细胞间桥在细胞之间传播病毒。 许多研究者试用不同种类的细胞,主要是猪源细胞在体外增殖病毒,证明骨髓、睾丸、肺、脾、肾细胞及白细胞均能增殖病毒,经过鸡胚传代的猪瘟病毒可以在鸡胚成纤维细胞内生长。猪瘟兔化弱毒株可以在犊牛睾丸细胞和羔羊肾细胞内增殖。感染性最强的是ＰＫ-15、PK－２a、SＴ等几株猪肾和猪睾丸传代细胞系。新合成的病毒大多吸附或结合于细胞之上,仅有约１％的病毒存在于培养液之中。 我国中监所专家周泰冲等人通过将石门系猪瘟强毒在兔体内连续传几百代后培育成功了猪瘟兔化弱毒株，国际上称为中国Ｃ株，用于疫苗生产，取得了良好的效果，欧洲一些国家利用该弱毒疫苗株扑灭了本国的猪瘟。

2021年猪圆环病毒的七大主要症状

猪圆环病毒的七大主要症状 欧阳光明（2021.03.07） 我们相信科学指导生产，我们相信数据客观真实，我们相信改变才能突破提高。 圆环病毒的代表性疾病有猪断奶后多系统衰竭综合症、母猪繁殖障碍、断奶猪和育肥猪呼吸道疾病、猪皮炎肾病综合症、猪腹泻综合征以及仔猪的中枢系统疾病。 由于圆环病毒能破坏猪体的免疫系统，造成免疫抑制，引起继发性免疫缺陷，因而本病常与蓝耳病、细小病毒、伪狂犬、及猪副嗜血杆菌、气喘病、胸膜肺炎、巴氏杆菌和链球菌等混合感染或继发。 猪圆环病毒病是以免疫抑制为主要特征的一类病毒性传染病，临床表现较为复杂。圆环病毒对免疫器官有严重的侵害性，可导致机体免疫系统免疫的高度抑制。通俗的讲，圆环病毒可以是疫苗免疫失效，机体免疫力减弱或消失。圆环病毒的代表性疾病有猪断奶后多系统衰竭综合症、母猪繁殖障碍、断奶猪和育肥猪呼吸道疾病、猪皮炎肾病综合症、猪腹泻综合征以及仔猪的中枢系统疾病。 一、PIDS（猪免疫缺陷综合症） 1：猪机体抵抗力降低，更易继发感染其他病原，这也是圆环病毒与猪的许多疾病混合感染有关的原因。

2：对减弱疫苗或低致病性微生物可以引起发病。 3：疫苗接种不产生免疫应答。 4：重复发病对治疗无应答性。 二、PMWS（猪多系统衰竭综合症） 最常见的是猪只渐进性消瘦或生长迟缓，这也是诊断PMWS 所必需的临床依据，其他症状有厌食、精神沉郁、行动迟缓、皮肤苍白、被毛蓬乱、呼吸困难、咳嗽为特征。较少发现的症状为腹泻和中枢神经系统紊乱。发病率一般很低而病死率都很高。 四季均可发生，主要危害断奶后2～3周的仔猪（40～70日龄）。实行早期隔离断奶的猪场，仔猪也有该病的发生，病毒可随粪便和鼻腔分泌物排出体外，经消化道传播或者可能经胎盘垂直传染仔猪，发病率和死亡率不定；呈地方性流行时，发病率和死亡率均较低，但急性爆发时，发病率可达50%，病死率高达20%～30%。如果该病与猪细小病毒或猪繁殖与呼吸综合征病毒、链球菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌等混合感染时，仔猪的死亡率会更高。 三、PRDC（猪呼吸道疾病综合症） 指育肥猪的顽固性肺炎，难以根治，极易反复，最后因肺衰竭继发其他感染而死。一般情况下是以圆环病毒为主，肺炎支原体、猪流感、繁殖与呼吸综合症、巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌等继发感染的呼吸道严重疾病。死亡率可达20%以上。