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大侠传变异侠侣哪个好

大侠传变异侠侣哪个好

大侠传变异侠侣哪个好

大侠传变异侠侣哪个好

众所周知大侠传中的侠侣有四种。护卫、刺客、游侠、异士他们各有各的特点,或是肉盾或是输出,每种侠侣学习的技能也不一样。然而也有特例存在,那就是变异侠侣!大侠传变异侠侣的出现就使得羸弱的侠侣变强,也会让原本强力的侠侣更进一层。

九转还魂令狐冲——九转还魂这个技能本来是异士型侠侣才能够学习的,效果是当侠侣死后可以复活一次,并回复一定的血量。可以技能可以说是万金油技能了,无论哪个类型的侠侣如果能变异出这个技能都是不错。令狐冲作为目前版本中攻击最强悍的侠侣,生存能力的提高就等于输出伤害的提高,即便是护卫类型的侠侣也能起到撑起血量的作用。况且在灵剑12阶以后群攻技能逆天的伤害面前,再没有比九转还魂更实在的选择了。

长恨歌周芷若——长恨歌这个技能放在异士类型的侠侣身上可谓是神技,带长恨歌诀技能的周芷若和方证大师都是玩家梦寐以求的极品。第一,异士侠侣的技能触发几率低,伤害小,有了长恨歌诀的出现可以提供一个高伤害技能(虽然长恨歌诀的触发几率也不高);第二,异士生命上限高,被动技能和星盘都是走主生命的路线,可以为长恨歌诀提供最高的伤害加成;第三,异士有九转还魂技能,相对来说不怕损失的8%血量)。

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传奇女性

第十课时武则天 一、教学目标 1、了解武则天的生平往事 2、理清人物与人物之间的关系 3、引导学生思考,构建完善的历史框架 二、教学重点 了解武则天的生平往事 三、教学难点 了解武则天的生平往事 四、教学方法 多媒体教学、讲授法、讨论法 五、教学过程 (一)新课导入 纵观历史,女人的地位一向属于男人的,在皇宫中更如此,但却有一位女子不甘屈于男人之下,成功地成为了万人之上的真龙天子——武则天 (二)新课内容 一、重要人物之间的关系 第一任丈夫:唐太宗李世民 第二任丈夫:唐高宗李治 子:唐中宗李显、唐睿宗李旦 女:太平公主 二、人物生平 (1)初次入宫 贞观十一年(638年)十一月,唐太宗听说年轻的武氏有才貌,便将她纳入宫中,封为五品才人,赐号“武媚”,后世讹称武媚娘。贞观二十三年(649年),唐太宗逝世,武才人依唐后宫之例,入感业寺削发为尼 (2)削发与再次入宫 永徽元年(650年)五月,唐高宗在太宗周年忌日入感业寺进香之时,又与武氏相遇,两人相认并互诉离别后的思念之情。这时,无子而失宠的王皇后看在眼里,便主动向高宗请求将武氏纳入宫中,企图以此打击她的情敌萧淑妃。唐高宗早有此意,当即应允。永徽二年(651年)五月,唐高宗的孝服已满,武氏便再度入宫,入宫前武氏已怀孕了,入宫后生下儿子李弘。次年五月,被拜为二品昭仪。 (3)为后掌政 武则天攻于心计,心狠手辣,兼涉文史。于是在永徽六年(655年)高宗立武氏为皇后,武则天随后做出一系列举动:残忍地虐杀了王皇后和萧淑妃;让自己的儿子李弘做了太子;为高宗出谋划策,采用先易后难的策略,先后罢黜了褚遂良、韩瑗、来济,最后除掉了长孙无忌。至此,高宗基本实现了君主集权。“废王立武”事件沉重打击了关陇贵族,自魏晋南北朝以来皇权不振的情况被改变,对中国历史产生了非常大的影响。显庆五年(660年),

唐玄宗与杨贵妃传奇性的爱情故事

唐玄宗与杨贵妃传奇性的爱情故事,在我国几乎是家喻户晓。中国历史文人墨客以此为题材写了不少成名之作,白居易的《长恨歌》便是一例。确实,唐玄宗“后宫佳丽三千人,三千宠爱在一身”,与杨贵妃相互依恋、执著专注的恩爱之情,在中国历史帝后之间是绝无仅有的。 开元二十五年(737年),唐玄宗的宠妃武惠妃死了以后,玄宗整天郁郁寡欢,十分颓丧。后宫数千人中,又没有一个中意的。最为贴心的高力士深知主上的心意,遂到外宫寻觅,在寿王府见王妃杨玉环花容月貌,盖世无双,立即禀报玄宗。开元二十八年十月,玄宗派人把杨玉环接到临潼温泉宫。一见果然姿质丰艳,而且能歌善舞,聪颖过人,尤善逢迎。玄宗愁怀顿开。他已不顾什么老公公娶儿媳妇了,礼义廉耻已不复存在,先将杨玉环度为女道士,赐号“太真”,收入后宫受用。其时唐玄宗56岁,杨玉环刚22岁。 唐玄宗娶寿王妃杨玉环,在今人看来无疑是父夺子媳的丑闻。然而一位君临天下的帝王想占有自己所爱的一切,本是易如反掌的事。只是由于帝王也要标榜“仁义道德”,多少得避些嫌疑。所以一直过了5年,在天宝四年(745年)的8月,才册封杨太真为贵妃。 从此,玄宗把后宫其他妃嫔统统丢在一边,天天守着杨贵妃,形影不离,百官宴会,朝廷大典,无不把贵妃带在身边。为了讨好杨贵妃,玄宗专为贵妃制造锦绣的工匠,竟达七百人,还在骊山的华清池专为她开辟了温泉浴场。贵妃生于四川,爱吃荔枝,为取悦贵妃,每年夏天玄宗不惜兴师动众派人从千里之外的四川涪州以驿马昼夜不停地传递,运到长安时色味不变。总之,自从得了杨贵妃,玄宗心中之爱,皆被贵妃占尽,正如《长恨歌》所云:“承欢侍宴无闲暇,春从春游夜专夜;金屋妆成娇侍夜,玉楼宴罢醉如春。” 玄宗对贵妃之所以如此痴迷,贵妃的倾城姿色固然是一原因。但更主要的,恐怕还有志趣上的情投意合。玄宗是迷恋音乐的才子,他精通音律,造诣极高。而贵妃不但能歌善舞,而且对音乐的理解也有特殊的天赋。这显然是她成为唐玄宗晚年知音的重要因素。玄宗在温泉宫初次召见贵妃时,曾奏起他的得意作品《霓裳羽衣曲》,杨贵妃似乎有先天的感受,当即起舞,如仙女飘逸,极尽其美,使唐玄宗大为高兴。之后,玄宗常令贵妃跳《霓裳羽衣曲》,自己还亲手操鼓,在一旁伴奏。可以说,玄宗与贵妃在一起尽欢,最经常的形式,莫过于歌舞音乐了。 不过,唐玄宗毕竟是个帝王,他可以独占杨贵妃,但不会让杨贵妃独占自己。而贵妃涉世未深,一时妒起,难免要产生龃龉。有两次曾惹得老皇帝发起火来,以忤逆之罪,立即把她赶回娘家。但玄宗心中所爱,已非贵妃莫属,所以每次又都是他授意把贵妃召回。当贵妃第二次被谴出宫后,哭得犹如泪人,而玄宗也是茶不思,饭不想,整日愁眉不展。高力士看透了玄宗的心思,遂请赐御膳与贵妃以示道歉。贵妃见高力士来,即伤心地剪下一绺青丝,托高力士奉上以表“忠诚”。玄宗见物思情,于是两人又一次破镜重圆。从此,玄宗与贵妃情爱弥笃,更加难分难舍。相传,有一年在华清宫的长生殿,正值七月七日乞巧节,唐玄宗和杨贵妃避开众人在这里仰望牛郎织女二星,双双跪拜,发下誓言:“人寿难朝,但愿我们世世生生,永为夫妻!过了今生,还有来世!”诗人白居易为唐玄宗和杨贵妃的长生殿之约,写下了永恒不朽的诗篇:“在天愿作比翼鸟,在地愿为连理枝。”的确,唐玄宗与杨贵妃的这种感情,在历代帝后间是罕见的。 封建帝王的任何婚姻,都要带上封建政治的烙印。随着杨玉环的受宠,杨妃的兄弟封侯拜相,三个姐妹也都封为国夫人,权势显赫,甲于天子。特别是杨贵妃的堂兄杨国忠竟升为

临界突变方法_复杂组织的突变机制分析_黄欣荣

2013年7月第36卷/第4期/ 河北师范大学学报/哲学社会科学版/ JOURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY/Philosophy  and Social Sciences Edition/July .2013Vol.36No.4 收稿日期:2012-10-12 基金项目:国家社会科学基金项目(项目编号:07BZX020);教育部人文社会科学研究规划项目(项目编号:06JA720014)作者简介:黄欣荣(1962-) ,男,江西赣州人,哲学博士,经济学博士后,教授,主要从事复杂性科学与哲学研究。临界突变方法:复杂组织的突变机制分析 黄欣荣 (江西财经大学马克思主义学院,江西南昌 330013 )摘 要:自组织临界性理论是美国学者巴克提出的复杂性科学重要理论分支,它试图从科学层面解决复杂组织的突变问题。该理论既是一门重要的新科学理论,从科学方法论视野来看,它同时更具有丰富的科学方法意蕴。自组织临界性理论从临界态、 幂率、雪崩、自组织等四个方面科学解释了复杂组织的突变机制,对组织的突变过程提出了一套比较科学的解释方案, 从而为科学方法论宝库提供了重要的科学新方法。关键词:复杂系统;自组织临界性;临界突变方法;科学方法 中图分类号:N 02 文献标识码:A 文章编号:1000-5587(2013)04-0089-05 复杂组织在生成演化过程中, 系统状态有时连续而缓慢演化, 有时急剧而快速突变。面对急速变化的过程, 质变量变规律和突变论都曾经试图进行描述和解释,但对突变现象还缺少科学的刻画。在复杂性理论分支中,巴克(Per Bak)等科学家创立的自组织临界性理论对临界现象及其突变规律进行了系统的分析和刻画, 为我们分析大量存在的各类组织的临界边缘的系统状态突变规律及其机制提供了科学方法新工具。 一、临界:系统突变的边缘状态 大自然中,突变现象几乎发生在所有领域,地震、泥石流、森林火灾、生物灭绝以及社会生活中的股灾、 瘟疫和社会变迁等现象都是一些突发的事件。马克·布查纳(Mark Buchanan)在《临界》一书中,以生动的文学手法描绘了自然界中各种各样处于临界状态下的突发事件。他说: “无论我们看向何处,世界似乎都在一块简单模板上塑造成型:像一个陡峭的沙堆一样, 它正悬于动荡的边缘,如雪崩———在事物中遵循一种普遍的变化模式。 ”[1](P9) 多年来这些突发的复杂现象一直困扰着科学家和哲学家,它们产生的根源是什么?自然界以什么方式进行演化?是否能够找到其变化的规律?从哲学上来说,马克思主义哲学很早就探讨了事物发展 的两种普遍方式,即量变和质变。量变是一种缓慢的数量变化, 变化前后其性质不会有重大的改变,而质变是一种爆发性的急速变化, 除了数量变化之外,变化前后组织状态的性质也发生了变化。马克思主义哲学虽然区分了两种发展变化的方式,但由于受当时科学发展的限制, 对变化的规律、路径、动力等细节问题虽有所触及,但仍然不够详尽,特别是缺少自然科学的依据。 最早对这些现象进行科学研究的是物理学中的相变理论。随着热力学的兴起, 物理学家们逐渐认识到,固态、液态和气态这三种物体存在的状态中,从一种状态变化到另一种状态,在其临界阶段的变化特别复杂, 并由此建立起相变理论。但是,相变理论还是建立在还原论基础上的简单性科学理论,对相变过程中的复杂现象和状态还缺少必要的科学刻画。 20世纪60年代, 法国数学家建立了刻画组织突变状态的突变论。突变论借用数学拓扑理论作为工具,对初等突变进行了分类,描述了突变的轨线,并建立了部分数学模型。突变论是研究组织突变状态的重大突破,它刻画了复杂组织突变的路径和轨迹,为我们理解突变的过程提供了科学分析的工具。但是,突变论对组织突变期间的刻画还比较粗糙,只对初等突变给出了几种路径的拓扑图形,对突变的

公关界传奇女性

吴锦屏:公关界传奇女性 公关界传奇女性,屡获殊荣,囊括全球公关大奖--国际公关协会2004年世界金奖、国际企业传播协会金鹅毛笔奖,凭借北京2008"申奥案例"获2002年《公关周刊》(PR Week)年度"最佳新顾问公司奖"。现为IPG集团万博宣伟公关公司总经理。 当听吴锦屏谈起人生里的那些低潮,你才能体会她作为一个女人真正的华彩--对爱情勇敢,对失败坦荡,对背叛宽恕……她是少有的能真正从伤痛里汲取到养分的女人,并因这养分而从容盛放。 吴锦屏正在蓄长发,因为明年有一场婚礼,在恋爱第8年,她终于要把自己嫁给那个痴情的美国机长了。之前,她有过一次10年的婚姻,结局是失败。谈起时,她是笑的。"女人一生应该被两种男人追:一种是青春年少时,在学校门口等你的那个一身黑衣、骑大摩托车、带蛤蟆镜的男孩,’刷’地一个转弯停在你面前、载上你之后再’呼’地绝尘而去;另一种是你成熟时,可以看到你由内而外的美质、并因此对你狂追不舍的男人。"

摩托男孩,是她10年婚姻里的伴,她没有怨恨,"我很爱那段感情,我觉得我很幸福",她即将要嫁的BILL,是后一种男人,"我们俩是彼此的小孩,互相疼爱。" 而从青春到成熟,中间的岁月,就是一个女人一生中最重要的成长罢。 不同的是,吴锦屏成长得很用心,事业,感情,凡事给自己一个清楚的交待,没有丝毫马虎。她将那些失意的时刻称为"golden moment",正是那些片段让她有机会反思,从中获得智慧。 于是,面对这个充满自信、语速极快、手舞足蹈、开心爽直得一塌糊涂的女人,伊能静不由感叹:"你是我最羡慕的女人,经过那么多事,还能够活得如此灿烂!" "爱一个人,从来都不是件羞耻的事" 1999年是吴锦屏生命中的低潮,那一年,当时对她最重要的两个男人都离开了她,父亲病逝,丈夫因外遇而和她分手。即使是今天,吴锦屏还是承认第一次婚姻在她心中占有很重的分量。那几年事业突飞猛进,几乎是以牺牲家庭为代价的,她每天工作18个小时,甚至回家也总是忘了脱下公司经理的身份,而先生需要有个伴、有人说话,于是出现了另一个女人。

PCR突变技术方法概览

PCR突变技术方法概览 1基于PCR 的体外诱变技术 定点突变的方法很多,而基于PCR 的定点突变技术由于其突变效率高,操作简单,耗时短,成本低廉等优点而倍受瞩目。近十年来,基于PCR 的定点突变技术获得了长足的发展,目前运用此技术已能实现各种类型的基因突变。 基因突变实验包括以下几个步骤:1目的基因全序列变异文库的构建;2利用高通量表达筛选载体从变异文库中筛选表达突变体;3表达突变体的鉴定和表达研究。 1.1 重叠延伸PCR(over-lap extension PCR OE-PCR) 这种方法运用非常广泛、灵活,不受突变位置及突变类型的限制,利用OE-PCR不仅能实现基因点突变,还能便利地实现大片段的插入及删除及插入。 其基本原理如图(1)所示。首先设计两个PCR 反应以产生两个含突变位点的DNA 片段,随后将上述两个PCR 产物混合,二者通过末端互补区结合并在适宜的温度下互引物延伸得到完整的含突变的基因,对第一次PCR 产物进行纯化处理可显著提高突变效率。 OE-PCR 不足之处在于:○1一个突变需要两对引物,3次PCR,并且需对中间产物进行纯化。相对而言步骤较烦琐,不经济;○2由于DNA 二级结构及互补链的竞争等因素的影响,有时两个中间产物难于有效地相互结合导致目的产物得率很低;○3当利用Taq 聚合酶进行PCR 反应时,经常在PCR 产物末端加上腺苷酸,这一多余的腺苷酸一方面导致两个中间产物难于有效地相互结合,另一方面可能会插入基因中导致产生非预期的移码突变。针对这些不足,后来许多学者对OE-PCR 进行了改进。1997年,Urben等提出一步重叠延伸PCR 法(one-step overlap extension PCR),使得三个PCR 反应得以在一个试管里进行,并且省略了烦琐的中间产物纯化过程。其原理是首先将待突变的DNA 以相反的方向克隆到两个载体中,这两个载体除了多克隆位点相反外其余均相同(例如pUC18,19)。这样便得到两个模板。将这两个模板,两个突变引物及一个与载体互补的通用引物置于一个试管中进行一次PCR 反应即可得到含突变的目的基因。1997年,Warrens等利用不对称PCR 反应产生单链中间产物,消除了互补链的竞争性影响,显著提高了目的产物的得率。1990年,Horton等用T4DNA聚合酶处理中间产物,降低了移码突变的发生率。由于OE-PCR几乎没有任何特殊条件的限制,而且成功率很高,因此运用非常广泛。

临床路径变异分析

临床路径变异分析 Company Document number:WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT

临床路径入径率低、变异率高原因分析及下步一部改进计划 一、临床路径管理方面 我院共归入路径管理的三个病种,包括精神分裂症、双相情感障碍、抑郁症。 存在问题: (1)路径设计繁琐,科室重视程度不够,入径率低,变异率高。 (2)工作执行力度存在缺陷。科室之间工作推进程度参差不齐,部分科室进入临床路径管理试点的病例数量不符合相关要求,部分科室的临床路径工作滞后,执行不到位。 (3)对进入临床路径患者变异和退出的标准掌握不到位,科室存在开始时对临床路径不够熟悉,开展较困难,所开展的病种例数少。 (4)科室没有定期组织对本科室临床路径实施进行评估与分析,并及时修订相关病种临床路径,建立健全临床路径管理试点工作制度,并纳入本科室医疗质量管理体系。 二、下步工作计划 (一)、开展临床路径管理,规范医疗行为 我院已有3种实施临床路径管理,逐渐扩大范围。 1、成立临床路径管理委员会,负责实施路径管理的具体落实工作。 2、高标准制定临床路径方案,优化规范病种诊疗规范 在制定医院临床路径标准过程中,精简流程,诊断依据和治疗方案选取最新标准,药物费用标准适用基层患者,制定出了符合精神病专科医院

特点,适合本医院开展,能够真正规范临床工作,促进合理用药,减轻患 者负担的临床路径方案。 3、深化落实,全程监督科室临床路径实施。 临床路径工作的开展,带动住院病人的整体费用更趋合理,促进医院 服务流程的整合和再造,避免各种原因造成的时间浪费和医疗行为的随意性,避免工作的遗漏,在一定程度上可以防范差错和事故的发生。为保证我院临床路径工作落到实处,强化监督检查职能,每月统计科室开展情况,质控 时对科室临床路径开展情况进行询问,查阅科室相关记录,了解临床路径 实施情况。 4、逐渐将路径管理纳入绩效考核方案,与信息科沟通电子病历系统设置。 5、尽快对临床路径进行修改,修改后在指定科室先期试点,跟踪实施效果,逐渐铺开到全院。 辽宁省精神卫生中心临床路径管理委员会 二〇一八年四月十八日

方差分析变异分解思路剖析

方差分析变异分解思路剖析 第一部分:方差分析变异分解的整体思想 差分析法是一种在若干能相互比较的资料组中,把产生变异的原因加以区分开来的方法与技术,方差分析实质上是关于观测值变异原因的数量分析。 从变异性分解角度来看,主要是对观测值的总变异进行分解。分解为两大部分:第一,来自于自变量不同处理效应的影响;第二,来自于误差因素的影响(即包括随机化选择被使过程中所产生的随机因素,也包括一些无法辨别来源的残差)。 以单因素完全随机设计为例。 某心理学家为了考察训练教程对儿童创造思维能力的影响,将20名被试随机分成四个组,每组5人,每组采用一种教程进行训练,一学期后每个被试的创造思维能力评分如下表,试检验训练教程的作用是否有显著的差异。 在这个例子中,自变量为训练教程,一共有四个水平。因变量为创造性思维能力得分。 那么所有被试在因变量上得分的差异性(即变异)可以分解为两个来源:第一,由于自变量的四个水平所产生的四个组之间的差异性;第二,由于选择被试所导致的组内被试之间的差异性。 第二部分:不同实验设计下变异来源分解剖析 一、单因素完全随机设计 此主题相关图片

变异分解的一般逻辑: 首先,计算总变异; 然后,计算处理产生的变异; 最后,用总变异减去处理产生的变异即误差变异。 在单因素完全随机设计中,处理产生的变异即水平组间变异。 利用原始数据计算变异的公式规律: 第一,总平方和和组间平方和的后一项记为CM,矫正数,均为总数据和的平均平方。求多少和,即对多少平均。 第二,总平方和的前一项为所有原始数据平方的和。 第三,组间平方和的前一项为每组数据和的平方求平均,然后把几个组的计算结果相加。PS:对我们的启示是在平方和处理变异分解过程中,我们只要搞清楚处理处理是指那几个

中药质量变异方式及解决方法

中药质量变异方式及解决方法 丸剂中蜜丸是较易变异的一种剂型,天气湿热时,易霉变、虫蛀;储存过久或库房干燥,又易干枯、变硬、失润、开裂。水丸因颗粒比较疏松与空气接触面比较大,极易吸收空气中的水分,造成霉变、虫蛀或松碎。糊丸、浓缩丸、蜡丸除易吸潮霉变外,又有变软,性脆、易碎等特点。储存时应注意储存于阴凉干燥处,防潮、防霉、防蛀,密闭储存,还应防止重压。 引起中药材质量变异的原因包括自身因素(药材含水量、药材化学成分)和环境因素(空气、温度、湿度、日光、霉菌、虫害) 虫蛀:蜜丸、水丸在贮存中均易发生虫蛀。是由虫卵孵化成幼虫,再生长为蛹,最后羽化为成虫,一般易在饮片重叠空隙处、裂痕以及碎屑中发生。虫蛀饮片大多数先危害饮片表面,继而深入内部为害,有的则在药材表面产卵,卵孵化为幼虫后,幼虫在内部为害。轻则蛀成孔洞,严重的被蛀空成粉末状。淀粉、糖、脂肪、蛋白质等成分,是有利于害虫生长繁殖的营养,故含上述成分较多的饮片最易生虫,如白芷、北沙参、娑罗子、前胡、大黄、桑螵蛸等。 发霉:蜜丸、水丸发霉时表面均先出现潮湿并微有粘性。蜜丸渐渐出现微小的白点,甚者出现园片状白膜。水丸色泽变深,继而出现白绿色的白斑或菌丝,或在瓶口处有-层白色粉尘物均有异味。饮片受潮后在适宜温度条件下,引发寄生在其表面或内部的霉菌大量繁殖,导致发霉的现象。霉变对饮片的危害仅次于虫蛀。我国地处温带,特别是长江以南地区,夏季炎热、潮湿,饮片最易发霉。开始时可见许多白色毛状、线状、网状物或斑点,继而萌发成黄色或绿色的菌丝。这些菌逐渐分泌一种酵素,溶蚀药材组织,使很多有机物分解,饮片腐烂变质、气味走失,而且有效成分也遭到很大的破坏,以致不能药用,如陈皮、独活、前胡、佛手等。 泛油:习称“走油”,是指因饮片中所含挥发油、油脂、糖类等,在受热、受潮或贮藏保管不善时其表面返软、发黏、颜色变浑、呈现油状物质并发出油败气味的现象。泛油是一种酸败变质现象。影响疗效,甚至可产生不良反应。含油脂多的饮片,内部油脂易于溢出表面而造成走油现象。一般可分为两种,一种为含挥发油的饮片,其泛油是因挥发油在一定的外界条件下加速外移聚集,随后在外界作用下形成泛油变质,如当归、丁香等;另一种为含脂肪油的饮片,其泛油是

各突变检测方法比较

1、RNA酶A切割法(RNase A cleavage) 在一定条件下,氨基源双链核酸分子RNA:RNA或RNA:DNA中的错配碱基可被RNaseA 切割,切割产物可通过变性凝胶电泳分离。当RNA探针上错配的碱基为嘌呤时,RNaseA在错配处的切割效率很低,甚至不切割,而当错配碱基为嘧啶时,则其切割效率较高。故如果仅分析被检DNA的一个条链,突变检出率只有30%,如同时分析正义和反义二条链,检出率可达70%。该法需要制备RNA探针,增加了操作的复杂性,但可用于1-2kb的大片段进行检测,并能确定突变位点。于这些优越性,它仍被作为一种经典方法用于对未知突变进行分析。 电泳法(不能确定突变位点,都要通过测序等解决) 2、变性梯度凝胶电泳(DGGE) 双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时,其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DNA 片段能够被区分开,但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样,因此不能被区分。DGGE/TGGE 技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上,加入了变性剂(尿素和甲酰胺)梯度,从而能够把同样长度但序列不同的DNA 片段区分开来。一个特定的DNA 片段有其特有的序列组成,其序列组成决定了其解链区域(meltingdomain, MD)和解链行为(melting behavior) 。一个几百个碱基对的DNA 片段一般有几个解链区域,每个解链区域有一段连续的碱基对组成。当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度时,该区域这一段连续的碱基对发生解链。当浓度度再升高依次达到各其他解链区域浓度时,这些区域也依次发生解链。直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后,最高的解链区域也发生解链,从而双链DNA 完全解链。如果不同DNA 片段的序列差异发生在最高的解链区域时,这些片段就不能被区分开来。在DNA 片段的一端加入一段富含GC 的DNA 片段(GC 夹子,一般30-50 个碱基对)可以解决这个问题。含有GC 夹子的DNA 片段最高的解链区域在GC 夹子这一段序列处,它的解链浓度很高,可以防止DNA 片段在DGGE 胶中完全解链。当加了GC 夹子后,DNA 片段中基本上每个碱基处的序列差异都能被区分开。 3、 PCR-SSCP法单链构象多态性 单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism, SSCP)是一种分离核酸的技术,可以分离相同长度但序列不同的核酸(性质类似于DGGE和TGGE,但方法不同)。 实验步骤 利用PCR从提取出的DNA中扩增16S rRNA基因。 利用λ-外切核酸酶消化掉一条链(其中一个PCR引物被磷酸化,这条链将被去除)。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 应用:单链构象多态性可用于预筛选克隆文库。 可对其中的某一个条带进行测序,并与数据库中已知序列比对。 原理:单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使是一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构并引起在非变性电泳条件不同的电泳迁移率。 4、杂合双链分析法(HA) 由突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一个凸起,在非变性胶中电

简要分析《林海雪原》的传奇性

分析《林海雪原》的传奇性 《林海雪原》,曲波的代表作长篇小说,也是他的成名作。它以传奇小说形式写革命军事题材,继承《水浒传》的传统选取小战斗作小型化的挖掘,进行“连环式”的描绘。全书的传奇性体现在以下几个方面: 一、传奇的情节结构 全书以解放军36人小分队的剿匪历程为经,以奇袭奶头山、智取威虎山、绥纷草甸大周旋和大战四方台为纬。这是一场在特殊环境下的特殊战斗。解放军所面临的敌人,不是国民党“官军”也不是散兵游勇,而是一伙具有东北“胡子”习性,惯于长途奔袭和流窜而且像豺狼虎豹一样在深山老林中行动自如的有大小头目统领组织严密的惯匪。他们久居深山老林,行踪诡秘,及时暴露也极易躲藏、易守难攻。作者在小说中吧小分队置身于这样的困难之下,通过四大故事充分展示了解放军以神奇的智慧和超凡的胆识创造出来的使人惊叹不已的战斗奇迹,给整部小说以充分的传奇性色彩。四个大故事既各有首尾相互独立,有彼此联系构成完整的整体,而且在大故事中又穿插许多独立成篇的小故事,使得作品的情节结构错综复杂又和谐统一,跌宕多姿又脉络分明,这样的结构布局,使作品环环相扣,奇峰迭起,又与它的传奇性内容相得益彰。 二、传奇的人物形象 在颇具传奇色彩的故事情节中,必然少不了传奇性的人物形象。小说中具有传奇色彩的人物有:机智勇敢、多谋善段的指挥员少剑波;乐观幽默善于攀登的栾超家;耐力过人、长于跋涉的孙达得等。但最具传奇性色彩的当属侦查英超杨子荣,他是小说中刻画得最为成功的人物形象。他凭借自身超乎常人的机智,乔装成匪徒胡彪,只身打入虎穴,过五关斩六将,不仅取得了匪首的信任,巧妙地干掉曾被他俘获审讯过的土匪栾平,而且配合小分队里应外合智取威虎山,端掉座山雕,全歼匪徒。这一切都充分展示了传奇性人物形象在任何艰险复杂的环境中的忠诚 三、传奇的自然景物 《林海雪原》在自然景物的描绘方面上也充分展示了它的传奇性色彩。如:巍峨险峻的九龙山;怪石倒悬的鹰嘴山无一不充满奇异色彩;威虎山的阴森恐怖,河神外的内静外阴无一不让人毛骨悚然;还有四方台的冰锋陡截;绥纷草甸的迷茫死寂,外加能凝固人血液的酷寒等。另外还有各具特色的四季之奇:春天可随处蔓延的荒火,夏天咆哮的山洪,秋天林里的毒虫,冬天能改变地貌的穿山风。这些不仅渲染了小分队战斗的艰苦环境,还为作品增添了几分传奇色彩。 综上,正是因为作品情节结构飞传奇性,人物形象的传奇性以及自然环境的传奇性三者相互交融,使得整部作品都充满了浪漫主义的传奇色彩和独具的艺术魅力。因而受到读者的青睐。

基因变异的研究方法与进展

基因变异广义上说就是指基因结构变化从而产生了可遗传的变异。也就是说DNA水平上的突变造成的基因改变。而这一突变过程可能有很多原因,有自发性的,比如DNA配对过程中的装配错误,也有外源性的诱导因素,如物理,化学,生物因素等造成染色体结构改变或者基因结构的直接变化。 突变的形式多种多样,常见的有:点突变,即一个或多个核苷酸发生了改变;框内突变指的是3个或是的倍数的碱基缺失或插入导致的突变,使基因丢失或增加1个或几个氨基酸;除此之外,还存在着DNA大片段的缺失,通常是指几百个bp至几十个kb的碱基缺失或复制。 这其中,最常见的莫过于点突变,他是指一个或者几个核苷酸的缺失或改变,通常会形成三种类型,第一种是同义突变,即碱基替换后,虽然密码子发生改变,但编码氨基酸没有改变(遗传密码的兼并性),亦称静止突变,第二种是错义突变,指的是碱基替换,密码子发生改变后,编码氨基酸亦发生改变,编码另一个氨基酸,第三种是无义突变,即碱基替换后,使编码氨基酸的密码子变成一个终止密码子。 基于上述的变化,常见的基因变异研究方法有如下几种 一、筛选性方法 有人将这类方法分为2类,根据电泳性质不同及其他包括化学修饰法等 1 RNase 法 该法是一种最早提出的检测DNA突变的方法口。其原理是RNase可以识别RNA:DNA或RNA:RNA杂交链中错误配对的碱基并将其切断。经聚丙烯酰胺凝胶电泳将正常链及被切断的含有突变点的链区分开来。杂交方法是将同位素或其它方法标记的正常野生型RNA 片段与相对应的待测DNA 片段混合,90"C

左右变性并在室温下复性形成杂交分子。当待测DNA 片段中存在碱基突变时,在该位点上二条链不能正常配对,便成为RNase的识别和切割位点 2 DGGE、CDGE、TGGE、TSGE法 梯度变性凝胶电泳(DGGE)原理是当双链DNA在梯度变性的聚丙烯酰胺凝胶中行进到与DNA变性温度(熔点温度)一致的凝胶变性浓度位臵时,DNA 发生解旋变性此时电泳速度迅速降低。而当解旋的DNA链中有一个碱基突变时,将会影响其电泳速度变化的程度,从而将正常与突变的DNA区别开。 CDGE(constant denatural gel electrophoresis)法通过预实验或理论计算预先精确确定待测DNA片段的熔点温度后采用单一变性浓度凝胶电泳,简化了DGGE 法的操作 类似于CDGE法,TSGE (temperature sweep gel electropnoresis)法则取消了温度梯度而代之以单一温度 这类方法的优点是:(1)检出率高,~100 (2)可用于分析突变——正常DNA 混合样品;(3)可以回收分离出的DNA 片段;(4)可以直接测定未经扩增的DNA 。这类方法的缺点也很多,如(1)分析片段较小,<500 bp;(2)需要制备昂贵的GC clamp(3)需要事先经过复杂的计算机处理计算熔点温度或预试验确定变性条件; (4)位于高度富含GC的片段中的突变可能漏检。鉴于以上不利因素,DGGE等一类方法有逐渐被SSCP(单链构象多态性)法取代的倾向。尽管如此,这类方法一经建立,应用十分方便,适于大规模样品分析 3 SSCP法 单链构象多态性(single strand conlotraation polymorphism,)是在非变性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA或RNA分子依其碱基序列不同而形成不同构象,

变异原因分析

变异原因分析 根据变异来源的不同可分为与系统相关的变异、与病人相关的变异、与医务人员相关的变异。 系统变异。(1)检验受理时间受限。一是目前,大部分临床路径试点医院都为诊疗水平较高且在当地有一定权威性的医院,试点医院的病员较多,各项检查常常出现排队等候的现象,而由于医院的设备数量有限,特别是当仪器出现故障时,无法保证临床路径患者在规定时间内接受检查。二是督导中我们发现部分试点医院还存在着部门之间配合或协调不到位的现象。临床科室和辅助科室医务人员对临床路径的理解存在较大的差异,科室之间协调不顺畅导致临床路径实施时间超出预期。(2)休息日不能进行手术。在临床路径管理试点工作督导过程中,部分医院提出对于大多数手术病种,临床路径管理文本规定术前准备时间为3天,由于休息日不能开展手术,导致周四以后入院的手术患者,进入临床路径管理后术前等待时间和住院时间超过标准时间。(3)临床诊断与病理诊断不相符。如果患者出现临床诊断和病理诊断不相符,需做变异处理。 病人原因的变异。(1)治疗过程中对治疗方案依从性差。部分患者特别是择期手术患者入院后有选择专家的意向,由于专家的时间有限,确诊后病人和家属坚持指定专家,导致术前等待时间延长。手术后,部分患者要求在医院康复一段时间;有些病人不愿意在术后不拆线出院,人为拉长了住院时间。此外,部分患者对临床路径规定用药及治疗方法持怀疑态度,喜欢使用贵药和特效药物,导致患者的住院费用

超出标准水平。 与医务人员相关的变异。医务人员在治疗患者的过程中,由于原有医疗习惯,固有诊疗模式的限制,不能完全按照临床路径的有关程序完成临床路径,导致临床路径诊疗流程出现偏差,对患者的医疗质量、住院时间和相关费用产生一定的影响。 退出原因分析 第二诊断影响第一诊断。在临床路径实施过程中,如果第二诊断已经严重影响第一诊断临床路径的实施,或第二诊断已经上升为第一诊断,就要做出退出该种疾病临床路径的处理。 临床诊断与病理诊断不相符。当患者的临床诊断与病理诊断出现很大的差别,影响患者临床路径的执行和进一步治疗时,就要对患者的临床路径进行调整。现在命名的疾病大概是6000种,我国临床路径发布了22个专业112个病种的临床路径,未发布的临床路径文本的病种,在试点阶段可能就要做退出路径处理。 医院对临床路径理解出现误区。 变异退出的根源分析 利益因素。依据督导情况,我们认为在临床路径实施过程中患者出现变异退出的主要根源是利益问题,即医务人员对实施临床路径的认识出现误区,部分医务人员还没有完全接受临床路径的思想,认为临床路径的实施是为了控制医疗费用,会严重影响个人经济收入。因此,试点医院对临床路径的实施存在抵触情绪,临床路径的实施流程受阻。政策因素。

基因定点突变方法及其应用

基因定点突变方法及其应用 摘要:本文综述了基因定点突变的三种方法,在此基础上的一些改进方法及其应用,并对这三种方法进行了比较。 关键词:定点突变;寡核苷酸引物;PCR;盒式突变 Methods of Site-directed Mutagenesis and Their Application Abstract: In the paper,methods of site-directed mutagenesis,some advanced methods on the basic methods and their application are present. At the same time,the comparison are made . Key words: site-directed mutagenesis;oligonucleotide;PCR;cassette mutagenesis 定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法比使用化学因素、自然因素导致突变的方法具有突变牢高、简单易行、重复性好的特点;除用于改变核苷酸序列获得突变基因、研究基因的结构与功能的关系之外,还能够通过改变特定的氨基酸获得突变蛋白质,研究蛋白质的结构与功能,从微观水平上阐明正常状态下基因的调控机理、疾病的病因和机理。随着分子生物学研究的突飞猛进,基因定点突变技术成为一项重要的分子生物学实验技术手段,在生物和医学领域中的应用非常广泛。目前常用的定点突变方法有寡核苷酸引物介导的定点突变、PCR介导的定点突变及盒式突变等[1]。 1常用定点突变方法 1.1核苷酸引物介导的定点突变 其原理是用含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物,在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。主要的过程(见图1):①将待突变基因克隆到突变载体上;②制备含突变基因的单链模板;③引物与模板退火5’端磷酸化的突变寡核苷酸引物,与待突变的核苷酸形成一小段碱基错配的异源双链的DNA,④合成突变链:在DNA聚合酶的催化

变异系数分析

2003—2013年中国31个省份经济发展水平分析 姓名:刘鑫学号:20140829 专业:人文地理学 表1 2003-2013年各省生产总值(亿元) 地区2013年2012年2011年2010年2009年2008年2007年2006年2005年2004年2003年北京市19500.56 17879.4 16251.93 14113.58 12153.03 11115 9846.81 8117.78 6969.52 6033.21 5007.21 天津市14370.16 12893.88 11307.28 9224.46 7521.85 6719.01 5252.76 4462.74 3905.64 3110.97 2578.03 河北省28301.41 26575.01 24515.76 20394.26 17235.48 16011.97 13607.32 11467.6 10012.11 8477.63 6921.29 山西省12602.24 12112.83 11237.55 9200.86 7358.31 7315.4 6024.45 4878.61 4230.53 3571.37 2855.23 内蒙古16832.38 15880.58 14359.88 11672 9740.25 8496.2 6423.18 4944.25 3905.03 3041.07 2388.38 辽宁省27077.65 24846.43 22226.7 18457.27 15212.49 13668.58 11164.3 9304.52 8047.26 6672 6002.54 吉林省12981.46 11939.24 10568.83 8667.58 7278.75 6426.1 5284.69 4275.12 3620.27 3122.01 2662.08 黑龙江省14382.93 13691.58 12582 10368.6 8587 8314.37 7104 6211.8 5513.7 4750.6 4057.4 上海市21602.12 20181.72 19195.69 17165.98 15046.45 14069.87 12494.01 10572.24 9247.66 8072.83 6694.23 江苏省59161.75 54058.22 49110.27 41425.48 34457.3 30981.98 26018.48 21742.05 18598.69 15003.6 12442.9 浙江省37568.49 34665.33 32318.85 27722.31 22990.35 21462.69 18753.73 15718.47 13417.68 11648.7 9705.02 安徽省19038.87 17212.05 15300.65 12359.33 10062.82 8851.66 7360.92 6112.5 5350.17 4759.3 3923.11 福建省21759.64 19701.78 17560.18 14737.12 12236.53 10823.01 9248.53 7583.85 6554.69 5763.35 4983.67 江西省14338.5 12948.88 11702.82 9451.26 7655.18 6971.05 5800.25 4820.53 4056.76 3456.7 2807.41 山东省54684.33 50013.24 45361.85 39169.92 33896.65 30933.28 25776.91 21900.19 18366.87 15021.8 12078.2 河南省32155.86 29599.31 26931.03 23092.36 19480.46 18018.53 15012.46 12362.79 10587.42 8553.79 6867.7 湖北省24668.49 22250.45 19632.26 15967.61 12961.1 11328.92 9333.4 7617.47 6590.19 5633.24 4757.45 湖南省24501.67 22154.23 19669.56 16037.96 13059.69 11555 9439.6 7688.67 6596.1 5641.94 4659.99 广东省62163.97 57067.92 53210.28 46013.06 39482.56 36796.71 31777.01 26587.76 22557.37 18864.6 15844.6 广西14378 13035.1 11720.87 9569.85 7759.16 7021 5823.41 4746.16 3984.1 3433.5 2821.11 海南省3146.46 2855.54 2522.66 2064.5 1654.21 1503.06 1254.17 1065.67 918.75 819.66 713.96 重庆市12656.69 11409.6 10011.37 7925.58 6530.01 5793.66 4676.13 3907.23 3467.72 3034.58 2555.72 四川省26260.77 23872.8 21026.68 17185.48 14151.28 12601.23 10562.39 8690.24 7385.1 6379.63 5333.09 贵州省8006.79 6852.2 5701.84 4602.16 3912.68 3561.56 2884.11 2338.98 2005.42 1677.8 1426.34 云南省11720.91 10309.47 8893.12 7224.18 6169.75 5692.12 4772.52 3988.14 3462.73 3081.91 2556.02 西藏807.67 701.03 605.83 507.46 441.36 394.85 341.43 290.76 248.8 220.34 185.09 陕西省16045.21 14453.68 12512.3 10123.48 8169.8 7314.58 5757.29 4743.61 3933.72 3175.58 2587.72 甘肃省6268.01 5650.2 5020.37 4120.75 3387.56 3166.82 2703.98 2277.35 1933.98 1688.49 1399.83 青海省2101.05 1893.54 1670.44 1350.43 1081.27 1018.62 797.35 648.5 543.32 466.1 390.2 宁夏2565.06 2341.29 2102.21 1689.65 1353.31 1203.92 919.11 725.9 612.61 537.11 445.36 新疆8360.24 7505.31 6610.05 5437.47 4277.05 4183.21 3523.16 3045.26 2604.19 2209.09 1886.35 数据来源:国家统计局

基因变异的研究方法和新进展

基因变异的研究方法和新进展 基因变异广义上说就是指基因结构变化从而产生了可遗传的变异。也就是说DNA水平上的突变造成的基因改变。而这一突变过程可能有很多原因,有自发性的,比如DNA配对过程中的装配错误,也有外源性的诱导因素,如物理,化学,生物因素等造成染色体结构改变或者基因结构的直接变化。 突变的形式多种多样,常见的有:点突变,即一个或多个核苷酸发生了改变;框内突变指的是3个或是的倍数的碱基缺失或插入导致的突变,使基因丢失或增加1个或几个氨基酸;除此之外,还存在着DNA大片段的缺失,通常是指几百个bp至几十个kb的碱基缺失或复制。 这其中,最常见的莫过于点突变,他是指一个或者几个核苷酸的缺失或改变,通常会形成三种类型,第一种是同义突变,即碱基替换后,虽然密码子发生改变,但编码氨基酸没有改变(遗传密码的兼并性),亦称静止突变,第二种是错义突变,指的是碱基替换,密码子发生改变后,编码氨基酸亦发生改变,编码另一个氨基酸,第三种是无义突变,即碱基替换后,使编码氨基酸的密码子变成一个终止密码子。 基于上述的变化,常见的基因变异研究方法有如下几种 一.限制性酶切原理:限制性片段长度多态性(RFLP) 它的基本原理是当突变影响到某一限制性内切酶位点时,可通过酶切PCR 产物,比如限制性内切酶MST II可以识别—CCTNAGG—,并利用这一事实去检测待测样品中相应位点是否发生了变化,从而检测出差异。 二.杂交原理:Southern blot,寡核苷酸杂交,芯片(chip) 1.Southern blot是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA 变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。 2.等位基因特异性寡核苷酸杂交( ASO)要求设计两段寡核苷酸探针,其中包含发生突变的位点,一段与野生型链互补,一段与突变型链互补。从而杂交分析是否突变。 3.基因芯片:SNP位点的检测:测序原理是杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上,所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了传统核酸印迹杂交(Southern Blotting 和Northern Blotting 等)技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。而且,通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值,如基因表达谱测定、实变检测、多态性分析、基因组文库作图及杂交测序等。 三.单链局部二级结构形成:单链构象多态性(SSCP) SSCP是一种简便的点突变检测技术。PCR扩增产物变性形成单链后,其构象及电泳迁移速度可因单个碱基突变而出现差异并形成多态性。在低温条件下,单链DNA呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象,它影响了DNA

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