一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法
说明书摘要
本发明公开了一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法，其特征在于以细菌和小球藻构建了一种菌藻共培养系统，在该系统中，细菌以木糖为碳源进行生长代谢，其代谢产物为小球藻的混合营养生长提供有机碳源；利用该方法，小球藻细胞生长速率是其光合自养生长的3倍以上。本发明大大促进了小球藻的生长，缩短了光照培养的时间，减少了光照培养过程中的能源损耗，同时可为微藻生物柴油的工业化生产提供大量原料。
权利要求书
1. 一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法，其特征在于以细菌和小球藻构建了一种菌藻
共培养系统，在该系统中，细菌以木糖为碳源进行生长代谢，其代谢产物为小球藻的混合营养生长提供有机碳源。
2. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所用的细菌为纤维弧菌Cellvibrio pealriver，在
中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为CGMCC 1.14955，保藏日期为2014年12月21日。
3. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于所用的小球藻为Chlorella vulgaris。
4. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于共培养系统是指Cellvibrio pealriver和Chlorella
vulgaris同时接种到培养基中。
5. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于菌藻共培养的培养基为BG11培养基中添加木
糖为碳源。
6. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于混合营养培养方式指同时以Cellvibrio pealriver
木糖代谢产物和CO2为碳源光照培养Chlorella vulgaris。
说明书
一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法
专利名称
一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法。
技术领域
本发明涉及了一种利用木糖混合营养培养小球藻的方法，收获的藻细胞可为生物柴油的生产提供廉价原料。
背景技术
生物柴油是一种绿色可再生的能源，近十几年来受到世界各国的普遍关注。目前，生物柴油主要来源于植物和动物油脂，世界各国根据自身国情选择合适的原料，欧盟各国以菜籽油为原料，美国、南美洲的巴西(世界第三大生物柴油产地，2011年250万吨) 和阿根廷(世界第四大生物柴油产地，2011年230万吨) 主要以大豆油为原料，东南亚国家主要利用棕榈油生产生物柴油，日本则以餐厨废油为主要原料。稳定的油脂原料供应是当前国外生物柴油产业快速发展的关键之一，但现有的产量在第一大产区欧盟也仅有5%的市场份额，生物柴油的进一步发展将消耗大量的油脂原料，这对农业和林业的健康发展将造成巨大的压力；特别在人口众多、人均耕地面积稀少的中国，大豆和粮油主要依靠进口，生物柴油的发展需在“不与民争粮油、不与粮油争地”的原则下积极开发非粮油原料来源。面对植物原料生产生物柴油的诸多问题，微藻生物柴油越来越受到各国的重视。小球藻是一类单细胞藻类，属于绿藻门，种类繁多，在淡水河海水中均有广泛分布，在人工培养条件下也能良好生长，是第一种人工培养的微藻。由于小球藻分布广、生长快，易培养等优点，成为生产生物柴油的重要原料来源。
木质纤维素中~30%为半纤维素，半纤维素水解产物的85~90%是木糖。木糖作为一种可发酵糖，其发酵产乙醇能使纤维素原料的乙醇产量在原基础上提高25%以上，在纤维素乙醇工业中备受瞩目。在微藻的培养中，木糖作为碳源进行异养或混合营养培养的研究和应用还很少。Yang等人的研究发现Scenedesmus obliquu可以木糖为碳源进行混合营养生长，但不能进行异养生长，且当藻浓度低木糖浓度高时，藻细胞生长受到抑制，到第10d后才开始利用木糖（Sequential heterotrophy-dilution-photoinduction cultivation for efficient microalgal biomass and lipid production. Bioresource Technology, 2012, 112: 206-211.）。Zheng 等人研究也发现，受诱导(微藻先在葡萄糖培养基中培养，得到的细胞即为受过诱导的细
胞) 的Chlorella sorokiniana代谢木糖的能力很强，而未诱导的细胞能力却很弱；他们推测C. sorokiniana细胞中存在一种己糖运载体，这个载体被诱导激活后木糖才能被运载进入藻细胞，被木糖还原酶和木糖醇脱氢酶转化为木酮糖进入磷酸戊糖途径（NAD(P)H-linked xylose reductase and NADP+-linked xylitol dehydrogenase in the oleaginous microalga Chlorella sorokiniana. Biotechnology for Biofuels, 2014, 7: 125.）。综合已有的研究结果，木糖对微藻细胞生长有一定的抑制作用，藻细胞必须经过诱导或长时间的适应才能利用木糖为碳源进行混合营养生长。因此，研究利用木糖促进小球藻生长的方法对节约微藻生产成本，发展生物柴油工业有重要意义。
发明内容
针对小球藻光合自养生长慢的特点，利用小球藻兼性化能异养的生长特性，本发明提供了一种利用木糖混合培养小球藻的方法，以细菌和小球藻构建了一种菌藻共培养系统，在该系统中，细菌以木糖为碳源进行生长代谢，其代谢产物为小球藻的混合营养生长提供有机碳源。本方法大大促进了小球藻的生长，缩短了光照培养的时间，减少了光照培养过程中的能源损耗，同时可为微藻生物柴油的工业化生产提供大量原料。
本发明提供了一种利用木糖混合培养小球藻的方法，所构建的共培养系统是将细菌和小球藻同时接种到培养基中；所用的细菌为纤维弧菌Cellvibrio pealriver，在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号为CGMCC 1.14955（如图1菌株保藏文件所示），保藏日期为2014年12月21日；所用的小球藻为Chlorella vulgaris。
本发明提供了一种利用木糖混合培养小球藻的方法，所用培养基为BG11培养基中添加木糖为碳源，所用培养方式为以Cellvibrio pealriver木糖代谢产物和CO2为碳源光照培养Chlorella vulgaris。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术内容作进一步的说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
实施例一：
BG11培养基中添加1g/L的木糖为菌藻共培养培养基，按1%的接种量分别接种Cellvibrio pealriver和Chlorella vulgaris FACHB-8（购买自武汉中国科学院野生生物种质库——淡水藻种库）进行共培养；对照组分别以①BG11和②BG11+1g/L木糖为培养基培养小球藻。培养过程中每天取5ml培养液提取藻叶绿素a（Chl a），测定结果如图2所示，培养2d后藻细胞快速生长，其生长速率是其光合自养生长的3倍，第5d，共培养系统中微藻Chl a达到7.75mg/L；对比对照组①和②的结果，木糖对小球藻生长有一定抑制作用；
对培养过程中还原糖含量的测量表明，小球藻不能单独利用木糖，而在共培养系统中，还原糖含量急剧下降，到第4d时已消耗殆尽。综合上述结果我们可知，利用菌藻共培养体系，木糖可能被C. pearlriver转化为一种促进C. vulgaris生长的物质，以木糖为碳源进行混合营养培养能显著地促进了小球藻的生长。
实施例二：
BG11培养基中添加5g/L的木糖为菌藻共培养培养基，按1%的接种量分别接种Cellvibrio pealriver和Chlorella vulgaris FACHB-8进行共培养；对照组分别以①BG11和②BG11+5g/L木糖为培养基培养小球藻。培养过程中每天取5ml培养液提取藻叶绿素a（Chl a），测定结果表明，培养2d后藻细胞快速生长，其生长速率是其光合自养生长的3~4倍，第5d，共培养系统中微藻Chl a达到10.21mg/L，比在BG11中光合自养生长的2.76 mg/L 提高了3.7倍。上述结果说明提高木糖的浓度有利于提高小球藻细胞的积累量。
实施例三：
BG11培养基中添加1g/L的木糖为菌藻共培养培养基，按5%的接种量接种Cellvibrio pealriver和1%的接种量接种Chlorella vulgaris FACHB-8进行共培养；对照组分别以①BG11和②BG11+1g/L木糖为培养基培养小球藻。培养过程中每天取5ml培养液提取藻叶绿素a（Chl a），测定结果表明，培养1d后藻细胞快速生长，其生长速率是其光合自养生长的2~3倍，第5d，共培养系统中微藻Chl a达到7.21mg/L，比在BG11中光合自养生长的2.81mg/L提高了2.6倍。上述结果说明提高Cellvibrio pealriver的接种量有利于缩短小球藻适应环境的时间，减少小球藻培养的时间。
实施例四：
BG11培养基中添加1g/L的木糖为菌藻共培养培养基，按1%的接种量接种Cellvibrio pealriver和5%的接种量接种Chlorella vulgaris FACHB-8进行共培养；对照组分别以①BG11和②BG11+1g/L木糖为培养基培养小球藻。培养过程中每天取5ml培养液提取藻叶绿素a（Chl a），测定结果表明，培养1d后藻细胞快速生长，其生长速率是其光合自养生长的2~3倍，第5d，共培养系统中微藻Chl a达到8.14mg/L，比在BG11中光合自养生长的2.97mg/L提高了2.7倍。上述结果说明提高小球藻的接种量有利于缩短藻细胞适应环境的时间，减少小球藻培养的时间。
附图说明
图1 菌株PR1保藏文件
12345601
2
3
4
5
678
9
T o t a l r e d u c i n g s u g a r / g *l
-1C h l a / m g *l -1
Culturing time / d C. vulgaris
C. vulgaris
C. vulgaris in Co-culture with xylose 0.0
0.20.40.6
0.81.01.21.41.61.8
2.0
2.2
in Co-culture with xylose in xylose
图2 Chlorella vulgaris 在BG11、xylose 和共培养系统中的生长 (实线)，以及Chlorella vulgaris 在BG11、xylose 、共培养体系，C. pearlriver 在xylose 中生长时还原糖浓度变化 (虚线).
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
小球藻的开发应用进展
小球藻的开发应用进展 王敬 (南通大学，海洋技术) 摘要：小球藻（Chlorella）为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广。细胞内含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质、食物纤维、核酸及叶绿素等，是维持和促进人体健康所不可缺少的营养素，随着生物技术的迅速发展，小球藻也得到了广泛的应用。本文通过介绍小球藻在食品、饵料、医药、环保及工业应用等方面的应用，说明小球藻是一种重要的微藻资源，有广阔的应用前景。 关键词：小球藻；食品；医药；环保；工业应用 The application and development of Chlorella Wang Jing (Nantong university, Marine technology) Abstract: Chlorella gate of green alga chlorella is naturally unicellular green algae, is a kind of efficient photosynthesis of plants, grow in photosynthetic, widespread. Cells are rich in protein, vitamins, minerals, dietary fiber, nucleic acid and chlorophyll etc., are necessary to maintain and promote human health nutrients, with the rapid development of biotechnology, chlorella has been widely used. In this paper, by introducing the chlorella in food, bait, medicine, environmental protection, and the application of industrial applications, shows that chlorella is a kind of important micro algae resources, has broad application prospects. Keywords:Chlorella ; food ; medicine ; environmental protection ; industrial applications 小球藻(Chlorella)为绿藻门普生性单细胞藻类，是第一种人工培养的微藻。
小球藻培养基.docx
（一）淡水培养基 1．BG— 11 培养基 BG — 11 培养基 试剂名称g / L NaNO3 K2HPO4 MgSO4 ? 7H2O CaCl2 ? 2H2O Citric acid (柠檬酸) Ammonium ferric citrategreen/ (柠檬酸铁铵) /柠檬酸铁 EDTANa2 Na2CO3 A5 另取 (NO3) ，溶解在200ml纯水中，每次同A5 一起，加入1L的培养基中。灭菌后PH调至 A5 试剂名称g / L ZnSO4 ? 7H2O CuSO4 ? 5H2O MoO3（ Na2MoO4 或 H3BO3 MnCl2 ? 4H2O Na2MoO ? 2H2O ）(或) 2. Zarrouk培养基 Zarrouk培养基 试剂名称g / L NaCl CaCl2 NaNO3 FeSO4 ? 7H2O EDTA（Na）/ EDTA（Na）? 2H2O/ K2SO4 MgSO4 ? 7H2O NaHCO3 K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O A5（微量元素） / 1ml
B6（微量元素）1ml B6 试剂名称g / L ˉ4 NH4VO3x 10 ˉ4 K2Cr2 （ SO4）4 ? 24H2O x 10 ˉ4 Ni2SO4 ? 7H2O x 10 ˉ4 Na2WO4 ? 2H2O x 10 ˉ4 Co（NO3）2 ? 6H2O x 10 ˉ4 Ti2 （ SO4）3x 10 注意： NH4VO3很难溶解，注意充分搅拌，B6 液使用前要充分的摇动。A5和 B6要单独配制，要低温或冷冻保存。新培养基的PH值为— 3．紫球藻培养基 紫球藻培养基 试剂名称g / L NaCl MgSO4 ? 7H2O MnCl2 ? 6H2O KNO3 CaCl2 ? 2H2O K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O / NaHCO3 A5 Fe-EDTA （二）海水培养基 4．f / 2培养基 f / 2培养基（母液）（+ Si） 试剂名称g / L NaNO3 NaH2PO4 ? H2O / NaH2PO4 ? 2H2O/ EDTA（Na）? 2H2O FeCl3? 6H2O CuSO4 ? 5H2O ZnSO4 ? 7H2O CoCl2 ? 6H2O MnCl ? 4H2O Na2MoO4 ? 2H2O 维生素B1 维生素B12
细胞生长曲线的绘制实验报告
细胞生长曲线的绘制实验报告 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 利用血细胞计数板计数 涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法 细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的
掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料： 1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液 实验步骤： 1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
小球藻在水产养殖上的应用
小球藻在水产养殖上的应用 小球藻（Chlorella vulgaris）为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞藻类，直径3-8微米，是地球上最早的生命之一，出现在20多亿年前，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广。 小球藻为单细胞藻，常单生，也有多细胞聚集。细胞球形、椭圆形，内有一个周生、杯状或片状的色素体。无性繁殖，每个细胞可以产生2、4、8或16个似亲孢子，成熟时母细胞破裂，孢子逸出，长大后即为新个体。细胞内的蛋白质、脂肪和碳水化合物含量都很高，又有多种维生素，可食用和作为饵料。 目前世界上已知的小球藻约10种，加上其变种可达数百种之多。小球藻广泛分布于自然界，以淡水水域种类最多；易于培养，不仅能利用光能自养，还能在异养条件下利用有机碳源进行生长、繁殖；并且生长繁殖速度快，是地球上动植物中唯一能在20小时增长4倍的生物，所以其应用价值很高。我国常见的种类有蛋白核小球藻、椭圆小球藻、普通小球藻等。 小球藻在水产养殖的功效 1、在养殖初期，将小球藻和肥料同时使用，起到快速肥水的作用。高温期可单独使用小球藻，也可与枯草芽孢杆菌或者EM菌同时泼洒使用，调节水质，降低氨氮、亚硝酸盐，抑制蓝藻，改善水体环境。 2、提供单胞小球藻源，进入养殖水体后可迅速繁殖，形成以单细胞小球藻为优势种群的水体，为鱼、虾、蟹、贝等各类水生动物构筑良好的生活环境。
3、小球藻能够提供丰富、均衡的天然营养素，含有丰富的蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素、矿物质、叶绿素、藻多糖、核酸等。这些营养成分有助于提高防病能力和抵抗力。 4、小球藻具有较高的营养价值，可作为虾蟹贝幼苗的开口饵料，滤食性鱼类的的直接饲料，促进生长、降低成本，提高水产动物的成活率。 5、可以更好的进行光合作用，增加水体溶氧，大大减少缺氧浮头的可能。 小球藻在水质处理方面的应用案例 应用前：水质清瘦，透明度50cm以上（图1），晴天上午9点指标检测为：溶氧3.31mg/L，水温23.5℃，pH值7.8，氨氮0.4，亚硝0.15，藻相镜检（图2）：基本上没有藻类，无浮游动物。 解决方案：晴天上午9点使用小球藻1kg/亩，第二天使用硅藻旺1kg/亩+EM菌1kg/亩，在中午11点至下午13点开增氧机2小时。 处理后：第三天水体透明度至40cm以内，水色呈现淡绿色，第三天，水体透明度至30cm 以内，水色呈现绿色，第四天，水体透明度在20cm左右，水色呈现绿色（图3）。第四天上午10点指标检测：溶氧6.05mg/L，水温24.6℃，pH值8.3，氨氮0，亚硝0。藻相镜检：以小球藻为主，部分硅藻（图4）。
小球藻的培养
一、小球藻 小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。因此，小球藻的培养前景广阔。 作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。也可以向培养它的人索取。 1 容器的准备 小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。 (100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液； ②定量转移至容量瓶中； ③加水至1L； ④混匀。 2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。） 2 培养液的准备 （1）BG11液体培养基配方： Stock1 定容100mL 柠檬酸柠檬酸铁胺 EDTANa2 Stock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 MgSO4·7H2O Stock3 定容100mL CaCl2·2H2O Stock4 定容100mL Na2CO3 2g
Stock5 定容1000mL H3BO3 MnCl2·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MnO4·2H2O CuSO4·5H2O Co(NO3)2·6H2O Stock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用 1mL 总定容 1000mL （2）购买 2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。培养基各取1ml。 联系电话： 3 藻种 购买：淘宝轮虫小球藻套装。40元/一套 4 接种 选取生活力强、生长旺盛的藻种，在天气晴朗的上午接种。一般情况下，作为第1级培养，可按藻液与培养液1∶2的比例进行接种。接种的量大，可使藻种迅速成为培养液中的 优势种，利用生物间的拮抗作用，减少了污染机会，缩短了小球藻的培养时间。待扩大培养时，可按藻液与培养液1∶4的比例进行接种。 5 管理 搅拌由于小球藻不能游动，只能浮在水中生活，所以必须对培养液进行搅拌，让藻体 不断变换位置，使光照、养料和水温均衡，这样有利于藻体的迅速生长和繁殖。常用的搅拌 工具有玻璃棒、竹棒，每天搅拌3次，每次1分钟。 光照小球藻的培养要有充分的光照，阴雨天光线不足时，可在培养室内用人工光源进 行补充，通常用冷白荧光灯，光照强度为2000～3000Lx；但在光线强烈的夏天，要用遮阳 网等进行适当避光。 温度及pH 温度保持在25～30℃，最适宜生长温度为26℃。pH保持在6～8。
(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
小球藻的应用研究进展
应用科技 小球藻的应用研究进展 单俊秀张平刘丽丽 (天津师范大学化学与生命科学学院，天津市300374) {}|。。’。。’…’1。jl|2 11，。。r? ¨……’。。。。。?。…?j’。“。4”j。’j j。j”j””?“j j…???。j’”?2、 ：?嘲要]小球藻是单细胞真核藻，细胞内含有多种营养物质。随着生物技术的迅速发展，有大量关于小球藻的研究工作被报道。本文通过，?，介绍小球藻在食品、饲料、饵料、医药、环保等方面的应用，说明小球藻是一种重要的微藻资源，有广阔的应用前景。 i呋键词]小球藻；保健食品；饵料；医药；环保， 小球藻为绿藻门【Chl or ophyt a)、绿藻纲、绿球藻目(C hl oro—cocCal es)、小球藻属(Chl or el l a)球形、普生性～般为聚集成群的单细绿藻，是第一种进行人工培养的微藻。小球藻比表面积大光合效率高，含有多糖、蛋白质、细胞色素、不饱和脂肪酸和生长因子等多种丰富的营养物质，是一种有重要意义的藻类具有广阔的开发利用前景，受到各国研究者的青昧。 1小球藻在食品、饲料、饵料方面的研究进展 L1小球藻应用。卜鑫品方面 小球藻包括海洋小球藻与淡水小球藻，其有高含量的维生泰如C、A、B，矿物元素钙、钾、碘、铁，小球藻特殊的细胞生长因子，还含有高达50％左右的粗蛋白。目前人们重视小球藻在保健食品方面的应用，开发出了如酶解小球藻保健饮料、小球藻豆腐、小球藻胶囊等。 12小球藻应用于饲料添加剂 小球藻具有耐酸性、耐抗生素和比一般微生物制剂热稳定性高的特点，因此小球藻可用于动物饲料添加剂一方面可以为动物提供多方面的营养物质，另一方面小球藻在动物体内可直接杀灭细菌，增强动物免疫性，长期使用，利于动物的生长发育j 13饵料方面的应用 小球藻可作为水产品的天然饵料，研究表明接种在养殖水体中可调节优化浮游生物的群落结构，降低水体中氨、磷的浓度，增加溶解氧，改善水体的化学环境条件，达到防病的目的。目前资料显示小球藻作为轮虫的首选饵料，能够增加轮虫体内的EPA和D H A的含量，而这两种物质对水产品如鱼、虾等的生长发育有重要的作用。 2小球藻药理作用 21凝集素 凝集素是一类能与糖类专一结合并具有细胞凝集活性的蛋白质与糖基结合时不需要糖分子的还原碳原子具有游离的羟基。郑恰，余萍等从蛋白核小球藻藻粉中分离纯化出了蛋白核小球藻凝集素(C PL)，经鉴定对兔、绵羊及鸽子红细胞有凝集作用掷怡等，2003)。 22抗肿瘤 小球藻，含有丰富的蛋白质，可以作为免疫激活剂具有抗肿瘤作用。汪炬等将小球藻提取物C E作用于动物肿瘤肉瘤细胞和肝癌H C A 腹水瘤，发现C E对这两种细胞有较强的杀伤力(汪炬等，2004)。 23生长因子 小球藻生长因子《Chl orel aG r ow t hFac t or，CG F)又称小球藻精，可以提高机体的免疫力和抗感染能力，还能防治胃溃疡、高血压和心血管等疾病。小球藻具有抑制脂肪吸收和刺激高脂食品排泄的作用，可用于防治包括高血脂症在内与脂肪过剩有关各种疾病。 24抗生素 近年来的研究表明，许多微藻中含有对其他微藻、细菌、真菌、病毒或原生动物有割生的抗生素物质。据报道小球藻细胞内也含有刘以抗生素。江红霞等从蛋白核小球藻中提取脂溶性化合物，进行了抗细菌和抗真菌活性实验，说明此脂溶性化合物的粗提物对真菌的抑制涮生明显大于对细菌的抑制活性(江红霞等，2003)。 25抗氧化 机体新陈代谢产生的自由基包括羟基自由基、超氧阴离子自由基等能对人体组织造成损伤，从而导致许多疾病的发生。小球藻中含有的叶黄素(L ut e i n)和蛋白质具有抗氧化作用。韩春然等研究7圆形海水小球藻异养培养的最佳生长条怖发酵生产叶黄素的条件为产生叶黄紊的最佳条件是B G—I I培养基中葡萄糖浓度1O g／L，尿素浓度O．59，L，培 养基初始Ph7．0'28℃下培养，叶黄索可以达到1．45m g／g，认为高细 胞浓度培养小球藻生产叶黄寨是=-J：f5的(韩春然，2007)。 3小球藻基因工程方面的研究进展 小球藻一方面培养简单、生馅幽枣、无毒无害、培养成本低廉，另 一方面能对蛋白质等肽类物质进行正确的加工修饰弥补了大厂杆菌原核 细胞生物反应器的特点，可以作为真核生物反应器应用于基因工程。王 义琴等以小球藻为载体成功表达了正常活性的兔防御素N P～，为实现 产业化奠定了基础【王义琴等，2001o 4小球藻在环保上的应用 重工业的飞速发展，人口数量过多带来的各方面环境污染，严重 影响到人1门的健康，威胁着人类的生存。随着科学技术的发展越来越多 的国家希望能够通过生物技术寻求一种成本低高效率的治污方式。小球藻在治理污染方面业发?省重要作用。 4．1清除重金属离子 藻类可以吸收富集水体中的金属，并加以回收和利用并具有原料 廉价易得、不产生二次污染、吸附容量大、应用范围广等优点。据文献 报道小球藻可以对以下金属离子有清除作用：固定化小球藻去除Cp的 研究、C u2+、C d2+、Z n2％小球在在治理水体污染方面有广阔的应用前景。 42降解原油 陶永华等通过实验证明普通小球藻和蛋白核小球藻具有降解原油 的能力，普通小球藻降解原油的能力最强，对于18．4m L含油污废水， 降解去除率高达94％一95％，实验还表明，单种藻株降解原油的能力 比混合藻株好。普通小球藻可作为净化含油污废水的材料深入进行应用 研究(陶永华等，2006)。 5小球藻的研究前景与展望 小球藻光和作用很强，细胞内含有多种营养物质，未来在开发小 球藻的健康食品、保健和药学功能，从实验转向产业化生产方面，小球 藻等藻类生物的开发利用有着广阔的前景，工厂化生产人类的优质天然 绿色食品即将成为现实。 [参考文献]7【1】郏怡．余薄，划艳如蛋白核小球藻凝粜素的分离纯化及部分性质研究Ⅱ】．i 水生生物学报3003． {21汪姬确含林，头岸等、蛋白核小球藻提取物的抑瘤作甩及对免疫功能的 影驹硎营养学报，2004．? 13】3i E-．红霞，郑怡．林雄平蛋白核，j球藻脂溶性化合物的抑菌活性及成分分7析【11植物资糖与环境学报．2003． 【4】陶永华，殷明．伍俊荣．高效原油降解小球藻株用于7由污废水净化的实验／研究U j海军医学袭吉，20067 233
固定化小球藻培养条件的实验研究
固定化小球藻培养条件的实验研究 摘要：本文为固定化小球藻培养条件的实验研究。采用细胞固定化的方法，选取五种培养液固定化培养小球藻，用紫外分光光度计在470nm的紫外可见光下定期测量其培养液的pH值和叶绿素含量，分析数据，从而得出培养小球藻的最适条件和培养液。实验结果表明培养小球藻的最适pH在4.5-5.4之间。海藻肥培养液为最适合的培养液 关键词：小球藻、固定化、叶绿素、含量、测定 前言 微藻生物技术属于生命科学研究领域的一个重要分支，是目前国内外的研究热点和前沿。小球藻是人类最早分离培养的一种绿藻，属于具有真核细胞的最简单光合作用有机体，小球藻生息在淡水中，它借助阳光、水和二氧化碳，以每隔20小时分裂出4个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能量转化生成蕴涵多种营养成分的藻体，并在增值中释放出大量的氧气；而它的光合能力高于其他植物10倍以上。基于这种生命活力及产生的高能营养物质，人们赞美它是“罐装的太阳”。有望成为减排C02的先锋物种。小球藻的固定化即将小球藻与海藻酸钠溶液混合，在CaCl2的作用下形成固体小球。此包埋制得的小球体可使其内的小球藻有较好的机械性能和防破坏能力而周围营养源可与其内的藻体进行正常接触。但是，固定化小球藻的培养条件和生长情况报道很少，本实验首先固定化小球藻，然后在不同的液体营养环境中培养，定期测量其培养液的pH值和叶绿素含量，分析数据，从而得出培养小球藻的最适条件和培养液，为固定化小球藻的利用提供基础数据。 1 材料与方法： 1.1 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽箱、分光光度计、试管、电子秤、移液管、量筒、烧杯 1.2配制药品溶液 配制五种培养液各200ml 1号SE 溶液（药品加蒸馏水） 2号（土壤浸出液）用水浴加热土壤水溶液过滤。 3号（硝酸钠60mg/L,尿素1.8mg/L,磷酸二氢钾2mg/L)， 4号复合肥溶液l 5号海藻肥 配制固定化小球藻试剂4%海藻酸钠200ml，5%氯化钙溶液2000ml 以上溶液均加入高压蒸汽箱灭菌。灭菌半个小时。灭菌完后，1号、2号、3号、4号、5号溶液和氯化钙溶液均放入冰箱中保存。
细胞培养实验报告
动物细胞培养 一、试验目的。 1、掌握无菌操作技术。 2、掌握原代和传代细胞培养。 3、掌握细胞冷冻和复苏技术。 4、了解培养成纤维细胞的形态。 二、试验原理。 将动物机体的组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存，一方面可以作为细胞研究的试验材料，另一方面可以做细胞制品的生产材料。目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法，。细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融，这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。 三、实验器材及药品。 器材：怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精 培养箱、超净工作台、离心管、灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO 2 高压灭菌锅、试管架等。 药品：小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、DMSO冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。 四、实验操作。 1、消毒灭菌。 将实验所需用到的工具（如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等）集中灭菌、烘干。配制75%的酒精以备实验时所需。
2、培养基的配制。 分别取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培养基，将两种培养基混合在一起，再向其中加入1ml的抗生素，吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。 3、原代培养。 （1）、准备。将实验过程中会用到的工具以及药品全部放在超净工作台上进行紫外消毒灭菌。实验开始前带好乳胶手套，用酒精对手进行消毒。将怀孕的小白鼠放在酒精中杀死，取出子宫内的胚胎组织。 （2）、剪切与消化。将胚胎组织放于平板中，用眼科剪将组织块剪碎，剪得越碎越好。将剪碎的组织块放于离心管中，加入大约200μl的胰酶进行消化。也可将其置于37度恒温箱中进行消化。 （3）、分离细胞。消化到一定时间时，如果离心管中的溶液中出现了明显的浑浊，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，则应该加入与胰酶等量的培养液终止消化。离心管于离心机中离心，弃上清液，得到分散的细胞。 （4）、转移细胞并培养。向含有分散细胞的离心管中加入配制好的培养液，吹打 箱培养，瓶口少少混匀，将培养液用移液器移到细胞培养瓶中。置于℃恒温CO 2 拧的松一点。 4、传代培养。 （1）、倒置显微镜下观察细胞的形态。倒置显微镜下观察培养细胞的长势及密度，根据细胞密度决定传代的稀释倍数。 （2）、收集原代培养的细胞。吸出培养瓶中的旧培养液，并用PBS冲洗两遍。然后向培养瓶中加入200μl的胰酶进行消化。消化一段时间后用配置好的培养液等比例终止消化。然后离心，收集到原代培养的细胞。 （3）、传代细胞的培养。向离心管内加入大约7—8ml的培养液，吹打混匀。将培养液转移到培养瓶中，置于37度恒温CO 培养箱中培养。培养1—2天后于显 2 微镜下观察细胞的形态。 5、细胞冷冻保存。 （1）、收集细胞。吸出培养瓶中的旧培养液，并用PBS冲洗两遍。然后向培养瓶中加入200μl的胰酶进行消化。消化一段时间后用配置好的培养液等比例终止
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验 李永吉 12101705 12青年农场主班 第一部分：培养基母液的配制 通过配制母液过程了解植物外植体立体培养所需各种营养成分及激素种类，掌握培养基母液配制的方法。之所以要配制培养基母液，是因为考虑到在配制培养基时使用更方便、操作更简化、用量更准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，所以我们在配制培养基之前将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别量取各种母液即可。 实验所需用具器材有：电子天平（检测灵敏度0.0001g ）、pH 计、托盘电子秤（检测灵敏度0.01g ）、冰箱、烧杯（1000mL 、500mL 、250mL 、50mL ）、量筒（2000mL 、1000mL 、100mL 、50mL ）、试剂瓶（1000mL 、250mL 、150mL ）、药匙、玻璃棒 实验所需药品试剂有：蒸馏水、1N HCl 、1N NaOH 、95%酒精、各种所需化学药品（分析纯） 实验内容： 1、无机大量元素母液的配制（20倍） 按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大20倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，如溶解缓慢，可稍加热。CaCl2单独用100mL 纯水溶解。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至1000mL 。倒入试剂瓶中并贴好标签，保存于冰箱冷藏。 MS 无机大量元素母液配制 2、无机微量元素母液配制 按培养基配方所需量，将各种化合物称量扩大200倍，用托盘电子秤称取，并用200mL 蒸馏水溶解于250mL 烧杯中，。溶解后将以上溶液倒入容量瓶中定容至500mL 。倒入试剂瓶贴好标签，保存于冰箱。 母液 名称 化合物名称 配方规定量（g/L ） 贮备液的倍数 配制母液称取量/g 母液体积/mL 配一升培养基时取母液量/mL 大 量 元 素 NH 4NO 3 1.65 20 33 1000 50 KNO 3 1.9 38 CaCl 2 0.332 6.64 MgSO 4.7H 2O 0.37 7.4 KH 2PO 4 0.17 3.4
生物吸附剂的应用及研究进展
生物吸附剂的应用及研究进展 含重金属废水是对生态环境危害极大的一类污染源。重金属进入环境后不能够像有机物那样能够被生物降解，且大多参与食物链循环，并最终在生物体内积累，破坏生物体正常生理代谢活动，危害生物体健康[1,2]。另外，我国又是水资源相对匮乏的国家，我国每年缺水超过300亿吨[3]。因此，水污染防治及废水回用越来越受到人们重视。因此，如何有效地处理重金属废水，回收贵重金属已经成为当今环保领域中的一个突出问题。 虽然重金属离子对生物体有很强的毒害效应，超过一定的浓度后，就会对生物体产生不良的影响，抑制生物生长或使生物体死亡，但是有的微生物，如某些藻类、细菌、真菌等等本身或是经过驯化以后对重金属有一定的耐受性，甚至失活的微生物体，也能够除去水中的重金属离子。利用微生物体作为吸附剂进行废水处理或回收金属的来源十分广泛，具有良好的经济效益。 1 生物吸附剂的来源 1.1藻类生物吸附剂 全球已知的藻类约4万种。多数情况下，藻类的细胞壁是由微纤丝形成的网状结构，含有丰富的多糖，如果胶、木糖、甘露糖、藻酸或地衣酸，这些多糖一般带负电荷，可以通过静电引力与许多金属离子相结合，因而，藻类对大多数重金属都有很强的吸附能力[6]。海草arrassum能够积累去除水中的Cd和Cu，Zn 等重金属[7,8]；而Scenedesmus obliquus对UO22+最大吸附容量可达75mg/g干物质，能够使水中的铀浓度从5.0降至0.05mg/L，与Cu2+、Ni2+、Zn2+、Cd2+之间的竞争也很小[9]；绿微藻(Tetraselmis chui)在悬浮状态下能够吸附Cr[10]；一些大型海藻的吸附容量比其它种类生物体高得多，甚至比活性炭、天然沸石的吸附容量还高，与离子交换树脂的相当[11,12]。 1.2真菌生物吸附剂 真菌在自然界中分布很广。现已记载真菌约有12万种，其中大多数都应用于工业生产。它们的细胞壁含大量几丁质和葡聚糖，对重金属具有吸附能力[13,14]，利用其来吸附去除污水中的重金属，不仅可以节约处理费用，还可以达到以废治废的目的。 酿酒厂的废菌体啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，可吸附多种重金属离子和放射性核素，水中的一些常见的离子K+、Na+、Ca2+、Mg2+及盐度对吸附的影响很小或不影响[15-20]；曲霉属的一些真菌菌株多种重金属和放射性核素的吸附效果也好，如酱油曲霉(Aspergillus sojae)对Pb2+和Cd2+的吸附率为69.76%和72.28%，米曲霉(Aspergillus oryzae)为60.64%.，81.34%[21]；烟曲霉(Aspergillus fumigatus)能够很快地从水溶液中去除U(Ⅳ)，Fe2+、Fe3+、Ca2+、Zn2+的存在对它的吸附去除无影响[22]，在脂肪酶生产产生的废弃菌丝体Aspergillus terreus显示了良好的铜吸附容量并且不受竞争离子的影响[23]；无花果曲霉(Aspergillus ficuum)对铅的吸附率可达92.44%[24]；黑曲霉(Aspergillus niger)对241Am有很好的吸附选择性，其吸附率均高达96%，即使溶液中的金、银浓度较241Am高2000多倍，对其吸附也无明显影响，当它生长在含金属氮化物的金矿废水中时，它可通过细胞表面的吸附作用而积累金、银、铜、铁、锌[25]；根霉属(Rhizopus)的菌株对大多数的金属也有良好的吸附效果。根霉(Rhizopus oligosporus)进行固定化后，对Cd的最大吸附量为34.5mg/g，为非固定化的一倍[26]；少根根霉(Rhizopus arrhizus)铅有高吸附容量，而且是一种很有前途的处理核工业放射性废水的吸附剂[27~29]。黑根霉(Rhizopus nigricans)能快速地吸附多种金属离子，最大吸附容量为140到160mg/g干重[30]。 1.3 细菌生物吸附剂 细菌是地球上最丰富的微生物，其总生物量占地球总生物量的大部分，其细胞壁的化学组成为肽聚糖，含丰富的羧基和氨基。因此细菌与重金属表现出很强的吸附能力。 地衣芽孢杆菌((Bacillus licheniformis)R08对吸附Pd2+时，45min吸附量可达224.8mg/g[33]；Bacillus polymxa对铜有潜在的吸附能力[31,32]。一些芽孢杆菌，如Bacillus pumilus、Bacillus cereus等，对Ce2+，Co2+、Th4+、U4+等重金属离子具较高亲合性[34]。 假单孢杆菌菌属(Pseudomonas)的一些微生物能抵抗Cu2+的毒性，并对Cu2+有较好吸附能力[35]；Pseudomoas sp.GX4-1的发酵液经乙醇沉淀后得到的吸附剂WJ-I含多糖和蛋白质等成分，能吸附水溶液中的Cr6+，吸附率最大可达98%，最大吸附量达9.34mg/g[36]。
中篇蛋白核小球藻的实际功效
中篇蛋白核小球藻的实际功效 小球藻（小球藻）含丰富的蛋白质、脂类、多糖、食用纤维、维生素、微量元素和活性代谢产物，具有防治消化性溃疡、抗?[瘤、增强免疫、抗辐射、抗病原微生物、防治贫血、降血脂和抗动脉样硬化等保健和药理作用。 小球藻门小球藻属Chlorella Beij.为普生性单细胞小球藻，种类繁多。小球藻能适应于不同的生长环境，在人工培养基中生长良好，除能利用光能自养外，还可以利用机碳源进行异养生长。小球藻含丰富的蛋白质、多糖、脂质、叶绿素、维生素、微量元素和一些生物活性代谢产物。 自1962年日本学者Yamagishi报道小球藻对胃溃疡有治疗作用以来，人们对小球藻的药理作用进行了广泛的研究，发现小球藻具有防治消化性溃疡、抗肿瘤、增强免疫、抗辐射、抗病原微生物、防治贫血、降血脂和抗动脉样硬化等药理作用，在日本已经用于临床作为辅助治疗药物[1]。现将小球藻的保健和药理作用研究状况作一综述。 1.防治消化性溃疡 小球藻对消化性溃疡的作用在动物实验已得到证实[2]。经口给予实验鼠普通小球藻干粉，对水浸应激反应诱导和半胱胺诱导的消化性溃疡模型有明显的预防作用，能增强防溃
疡形成的保护因素。作用机制可能是通过“免疫-脑-肠”轴阻止溃疡形成和通过自身特点保护胃粘膜。 2.抗肿瘤 小球藻抗肿瘤的机制有：1）抑制致癌物的诱变性和基因毒性；2）使多形核细胞（PMN）增生，与宿主或受体一起作用；3）通过抗原专一性免疫，使T细胞增殖和活化等。Nomoto 等[3]研究了从普通小球藻S-50抽提的水溶物质PCM-4对移植鼠肿瘤的抗肿瘤活性。经口和腹腔给予 PCM-4后，S180和Meth A 的生长以及腹水肝癌AH44、AH41C的生长均受到抑制。体外实验表明，PCM-4的抗肿瘤作用是从宿主调节反应系统引出的。 Konishi 等[4]给接种了Meth A 肿瘤细胞的BALB/c 小鼠腹腔注射普通小球藻热水抽提物（CVE）后，小鼠的生存时间显著延长。用正常受体的Winn 型检测，发现给予CVE后24h 腹腔渗出液细胞（PEC）含大量多形核细胞（PMN），具有抗肿瘤作用。他们发现CVE诱导的抗肿瘤作用是由PMN 与宿主或受体一起作用而表达的。 经口给予带Meth A 瘤的BALB/c 小鼠或CDF1 小鼠普通小球藻或其丙酮提取物，Meth A 肿瘤生长也受到显著抑制，这种抑制是通过抗原专一性方式发生的[5]。 Tanaka 等[6]经研究发现普通小球藻CK22 藻株的一种糖蛋白提取物CVS 对小鼠实验和自发肿瘤转移有显著的抑
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌