DNA的复制、修复及重组DNA技术解析
分子生物学重组DNA技术试题.doc
分生—重组DNA技术试题 一、单选 1、在分子生物学领域，分子克隆主要是指（） A、DNA的大量复制 B、DNA的大量转录 C、DNA的大量剪切 D、RNA的大量反转录 E、RNA的大量剪切 2、在分子生物学领域，重组DNA又称（） A、酶工程 B、蛋白质工程 C、细胞工程 D、基因工程 E、DNA工程 3、在重组DNA技术中，不常用到的酶是（） A、限制性核酸内切酶 B、DNA聚合酶 C、DNA连接酶 D、反转录酶 E、DNA解链酶 4、多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为（） A、平头末端 B、3突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 E、缺口末端 5、可识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为（） A、限制性外切核酸酶 B、限制性内切核酸酶 C、非限制性外切核酸酶 D、非限制性内切核酸酶 E、DNA内切酶 6、CDNA是指（） A、在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B、在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA C、在体外经转录合成的与DNA2补的RNA D、在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA E、在体内经转录合成的与DNA互补的RNA 7、基因组代表一个细胞或生物体的（） A、部分遗传信息 B、整套遗传信息 C、可转录基因 D、非转录基因 E、可表达基因 8、在基因工程中通常所使用的质粒存在于（） A、细菌染色体 B、酵母染色体 C、细菌染色体外 D、酵母染色体外 E、以上都不是 9、就分于结构而论，质粒是（）
A、环状双链DNA分子 B、环状单链DNA分于 C、环状单链RNA分子 D、线状双链DNA分子 E、线状单链DNA分子 10、聚合酶链反应可表示为（） A、PEC B、PER C、PDR D、BCR E、PCR 11、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是（） A、化学合成法 B、基因组文库法 C、CDNA文库法 D、聚合酶链反应 E、差异显示法 12、重组DNA的基本构建过程是将（） A、任意两段DNA搂在一起 B、外源DNA接入人体DNA C、目的基因接人适当载体 D、目的基因接入哺乳类DNA E、外源基因接人宿主基因 13、ECoRI切割DNA双链产生（） A、平端 B、5’突出粘端 C、3’突出粘端 D、钝性末端 E、配伍末端 14、催化聚合酶链反应的酶是（） A、DNA连接酶 B、反转录酶 C、末端转移酶 D、碱性磷酸酶 E、TaqDNA聚合酶 15、将PstI内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属（） A、同聚物加尾连凑 B、人工接头连接 C、平端连接 D、粘性末端连接 E、非粘性末端连接 16、限制性核酸内切酶切割DNA后产生（） A、3磷酸基末端和5羟基末端 B、5磷酸基末端和3羟基末端 C、3磷酸基末端和5磷酸基末端 D、5羟基末端和3羟基末端 E、3羟基末端、5羟基末端和磷酸 17、重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是（） A、DNA聚合酶 B、RNA聚合酶 C、DNA连接酶 D、RNA连接酶 E、限制性核酸内切酶 18、以质粒为载体。将外源基因导入受体菌的过程称（） A、转化 B、转染 C、感染 D、转导 E、转位 19、最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（）
修复与重组
13-1 DNA 修复与重组 一填空 1·在大肠杆菌中发现了种DNA聚合酶。DNA修复时需要DNA聚合酶。 2·真核生物中有5种DNA聚合酶，它们是:(1) （2） (3) (4) (5) 。 3·在DNA修复过程中，需要第二种酶，，作用是将DNA中相邻的碱基起来。 DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活性，它们分别从和降解DNA。DNA聚合酶只有外切核酸酶活性。 4·只有真核DNA聚合酶和显示外切核酸酶活性。5·DNA大多数自发变化都会通过称之为的作用很快被校正。仅在极少情况下，DNA将变化的部分保留下来导致永久的序列变化，称为。 6·偶然情况下，在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中，一个等位基因经过 过程会被另一等位基因代替。 7·通过基因重组，游动DNA序列和一些病毒可进人或离开一条目的染色体。8·DNA修复包括3个步骤: 酶对DNA链上不正常碱基的识别与切除，酶对已切除区域的重新合成，酶对剩下切口的修补。 9·一种主要的DNA修复途径称，包括一系列酶，它们都能识别并切去DNA上不正常碱基。 10·途径可以切去任何造成DNA双螺旋大片段改变的DNA损伤。 11·大肠杆菌中，任何由于DNA损伤造成的DNA复制障碍都会诱导的信号，即允许跨过障碍进行复制，给细胞一个生存的机会。 12·在中，基因交换发生在同源DNA序列间，最常见是发生在同一染色体的两个拷贝间。 13·在交换区域，一个DNA分子的一条链与另一个DNA分子的一条链相互配对，在两个双螺旋间形成一个。 14·通过，两个单链的互补DNA分子一起形成一个完全双链螺旋，人们认为这个反应从一个慢的步骤开始。 15·大肠杆菌的染色体配对需要 ;它与单链 DNA结合并使同源双链DNA与之配对。 16·一般性重组的主要中间体是，也用它的发现者名字命名为。
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分生—重组DNA 技术试题 一、单选 1、在分子生物学领域，分子克隆主要是指（） A DNA勺大量复制B、DNA勺大量转录C、DNA勺大量剪切 D RNA勺大量反转录E、RNA勺大量剪切 2、在分子生物学领域，重组DNA又称（） A、酶工程 B、蛋白质工程 C、细胞工程 D、基因工程 E、DNAT程 3、在重组DNA技术中，不常用到的酶是（） A、限制性核酸内切酶 B、DNA聚合酶 C、DNA连接酶 D、反转录酶 E、DNA军链酶 4、多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为（） A、平头末端 B、3突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 E、缺口末端 5、可识别DNA勺特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA勺一类酶称为 （） A、限制性外切核酸酶 B、限制性内切核酸酶 C、非限制性外切核酸酶 D非限制性内切核酸酶E、DNA内切酶 6、CDNA1 指（） A、在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B在体外经反转录合成的与DNA互补的DNA C在体外经转录合成的与DNA2补的RNA D在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA E、在体内经转录合成的与DNA互补的RNA 7、基因组代表一个细胞或生物体的（） A、部分遗传信息 B、整套遗传信息 C、可转录基因 D非转录基因E、可表达基因 8、在基因工程中通常所使用的质粒存在于（） A、细菌染色体 B、酵母染色体C细菌染色体外 D酵母染色体外E、以上都不是 9、就分于结构而论，质粒是（）
A、环状双链DNA分子 B、环状单链DNA分于 C、环状单链RNA分子 D线状双链DNA分子E、线状单链DNA分子 10、聚合酶链反应可表示为（） A、PEC B、PER C、PDR D、BCR E、PCR 11、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是（） A、化学合成法 B、基因组文库法 C、CDNAfc库法 D聚合酶链反应E、差异显示法 12、重组DNA勺基本构建过程是将（） A、任意两段DNA娄在一起 B、外源DNA接入人体DNA C、目的基因接人适当载体 D、目的基因接入哺乳类DNA E 、外源基因接人宿主基因 13、ECoRI切割DNA双链产生（） A、平端 B、5'突出粘端 C、3'突出粘端 D、钝性末端 E、配伍末端 14、催化聚合酶链反应的酶是（） A DNA连接酶B、反转录酶C末端转移酶D、碱性磷酸酶E TaqDNA聚合酶 15、将Pstl内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属 （） A、同聚物加尾连凑 B、人工接头连接C平端连接D、粘性末端连接 E、非粘性末端连接 16、限制性核酸内切酶切割DNA后产生（） A、3 磷酸基末端和5 羟基末端B 、5 磷酸基末端和3 羟基末端 C、3 磷酸基末端和5 磷酸基末端D 、5 羟基末端和3 羟基末端 E、3 羟基末端、5 羟基末端和磷酸 17、重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是（） A DNA R合酶B、RNA聚合酶C、DNA连接酶D、RNA连接酶 E、限制性核酸内切酶 18、以质粒为载体。将外源基因导入受体菌的过程称（） A、转化 B、转染 C、感染 D、转导 E、转位
DNA修复与重组解析演示教学
第四章 DNA修复与重组 一、填空题 1．在大肠杆菌中发现了——----种DNA聚合酶。DNA修复时需要DNA聚合酶——---。 2．真核生物中有5种DNA聚合酶，它们是：(1)—-----—(2)—---—(3)—---—(4)—-----—(5)—------—。 3．在DNA修复过程中，需要第二种酶，—--------—，作用是将DNA中相邻的碱基—---------—起来。————————DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活性，它们分别从—-----------—和—----------—降解DNA。DNA聚合酶—---------—只有———————外切核酸酶活性。 4．只有真核DNA聚合酶—------—和—------—显示—-----—外切核酸酶活性。 5． DNA大多数自发变化都会通过称之为—----------—的作用很快被校正。仅在极少情况下，DNA将变化的部分保留下来导致永久的序列变化，称为—-------—。 6．偶然情况下，在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中，一个等位基因经过—----------—过程会被另一等位基因代替。 7．通过—---------—基因重组，游动DNA序列和一些病毒可进人或离开一条目的染色体。 8． DNA修复包括3个步骤：—-----------—酶对DNA链上不正常碱基的识别与切除，—-------—酶对已切除区域的重新合成，—--------—酶对剩下切口的修补。 9．一种主要的DNA修复途径称—---------—，包括一系列—----—酶，它们都能识别并切去DNA上不正常碱基。 10．—----—途径可以切去任何造成DNA双螺旋大片段改变的DNA损伤。 11．大肠杆菌中，任何由于DNA损伤造成的DNA复制障碍都会诱导—-----—的信号，即允许跨过障碍进行复制，给细胞一个生存的机会。 12．在—----—中，基因交换发生在同源DNA序列间，最常见是发生在同一染色体的两个拷贝间。 13．在交换区域，一个DNA分子的一条链与另一个DNA分子的一条链相互配对，在两个双螺旋间形成一个—--------—。 14．通过—-------—，两个单链的互补DNA分子一起形成—个完全双链螺旋,人们认为这个反应从一个慢的—-----—步骤开始。 15．大肠杆菌的染色体配对需要—-------—；它与单链DNA结合并使同源双链DNA与之配对。 16．一般性重组的主要中间体是—---------—，也用它的发现者名字命名为—-----—。 二、选择题(单选或多选) 1．关于DNA的修复，下列描述中，哪些是不正确的?( ) (a)UV照射可以引起嘧啶碱基的交联 (b)DNA聚合酶Ⅲ可以修复单链的断裂 (c)双链的断裂可以被DNA聚合酶Ⅱ修复 (d)DNA的修复过程中需要DNA连接酶 (e)细菌可以用一种核酸内切酶来除去受损伤的碱基 (f)糖苷酶可以切除DNA中单个损伤的碱基 2． DNA最普遍的修饰是甲基化，在原核生物中这种修饰的作用有： ( ) (a)识别受损的DNA以便于修复 (b)复制之后区分链，以确定是否继续复制 (c)识别甲基化的外来DNA并重组到基因组中
修复与重组解析
第九章DNA 修复与重组 一，填空题 1.在大肠杆菌中发现了( ) 种DNA聚合酶。DNA修复时需要DNA 聚合酶（）。 2.真核生物中有5种DNA聚合酶，它们是:(1) （）(2)（）(3)（）(4)（）(5) （）。 3.在DNA修复过程中，需要第二种酶，( )，作用是将DNA 中相邻的碱基( )起来。( )DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活性，它们分别从( )和( )降解DNA。DNA聚合嗨只有( )外切核酸酶活性。 4.只有真核DNA聚合酶( )和( )显示外切核酸酶活性。 5.DNA大多数自发变化都会通过称之为( )的作用很快被校正，仅在极少情况下，DNA将变化的部分保留下来导致永久的序列变化，称为（）。 6.偶然情况下，在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中，一个等位基闲经过（）过程会被另一等位基因代替。 7.通过（）基因重组，游动DNA序列和-一些病毒可进入或离开一条目的染色体。 8.DNA修复包括3个步骤: （）酶对DNA链上不正常碱基的识别与切除，（）酶对已切除区域的重新合成，（）酶对剩下切口的修补。 9.一种主要的DNA修复途径称（），包括一系列（）酶，它们都能识别并切去DNA上不正常碱基。 l0.（）途径可以切去任何造成DNA双螺旋大片段改变的DNA 损伤。 11.大肠杆菌中，任何由于DNA损伤造成的DNA复制障碍都会诱导（）的信号，即允许跨过障碍进行复制，给细胞一个生存的机会。 12.在（）中，基因交换发生在同源DNA序列间，最常见是发生在同一染色体的两个拷贝区。 13 .在交换区域，，一个DNA分子的一条链与另一个DNA分子的一条链相互配配对，在两个双螺旋间形成一个（）。 14.通过（），两个单链的互补DNA分子一起形成一个完全双链螺旋，人们认为这个反应从一个慢的（）步骤开始。 15.大肠杆菌的染色体配对需要（）;它与单链DNA结合并使同源双链DNA与之配对。 16.一般性重组的主要中间体是（），也用它的发现者名字命名。 二、选择题（单选或多选） 1. 关于DNA的修复，下列描述中，哪些是不正确？（） （a)UV照射可以引起嘧啶碱基的交联 （b)DNA聚合酶Ⅲ可以修复单链的断裂 (c)双链的断裂可以被DNA聚合酶Ⅱ修复
DNA损伤修复---重组修复
DNA损伤修复---重组修复 的。 关键词：重组修复、同源重组修复、DNA损伤 DNA damage and repair --- recombination repair Abstract: DNA damage repair (repair of DNA damage) in the role of a variety of enzymes, the DNA molecules within living cells by the phenomenon of structural damage after recovery. DNA damage and repair studies help to understand the reasons for the gene mutation mechanisms, aging and cancer, can also be applied to the detection of the environmental carcinogen. DNA damage repair model there are many, here mainly with regard to recombination repair. Key words: recombination repair, homologous recombination repair, DNA damage 简史 1949年A.凯尔纳偶然发现灰色链丝菌等微生物经紫外线(UV)照射后如果立即暴露在可见光下则可减少死亡。此后在大量的微生物实验中都发现了这种现象，并证明这是许多种微生物固有的DNA损伤修复功能,并把这一修复功能称为光复活。1958年R.L.希尔证明即使不经可见光的照射，大肠杆菌也能修复它的由紫外线所造成的DNA损伤，而后又证明其他微生物也有这种功能,当时就把这种修复功能称为暗复活或暗修复。此后发现暗修复普遍地存在于原核生物、低等真核生物、高等真核生物的两栖类乃至哺乳动物中，并证实暗修复包括切除修复和复制后修复两种。1968年美国学者J.E.克利弗首先发现人类中的常染色体隐性遗传的光化癌变疾病──着色性干皮病(XP)是由基因突变造成的DNA损伤切除修复功能的缺陷引起的。这一发现为恶性肿瘤的发生机理提供了一个重要的分子生物学证据,也使DNA损伤修复的研究进入了医学领域。 损伤类型 DN A分子的损伤类型有多种。UV照射后DNA分子上的两个相邻的胸腺嘧啶 (T)或胞嘧啶(C)之间可以共价键连结形成环丁酰环，这种环式结构称为二聚体。胸腺嘧啶二聚体的形成是UV对DNA分子的主要损伤方式。 Χ射线、γ射线照射细胞后，由细胞内的水所产生的自由基既可使DNA分子双链间氢键断裂,也可使它的单链或双链断裂。化学物中的博莱霉素、甲基磺酸甲烷等烷化剂也能造成链的断裂。 丝裂霉素C可造成DNA分子单链间的交联，这种情况常发生在两个单链的对角的鸟嘌呤之间。链的交联也往往带来DNA分子的断裂。 DNA分子还可以发生个别碱基或核苷酸的变化。例如碱基结构类似物5-溴尿嘧啶等可以取代个别碱基，亚硝酸能引起碱基的氧化脱氨反应，原黄素（普鲁黄）等吖啶类染料和甲基氨基偶氮苯等芳香胺致癌物可以造成个别核苷酸对的增加或减少而引起移码突变（见基因突变）。
DNA修复与重组解析
第四章DNA 修复与重组 一、填空题 1 . 在大肠杆菌中发现了一一一种DNA聚合酶。DNA修复时需要DNA聚合酶一一---。 2 . 真核生物中有5种DNA聚合酶，它们是：⑴一一⑵一---—⑶一---—⑷ —- —(5) —----- —。 3 . 在DNA修复过程中，需要第二种酶，一--------- —，作用是将DNA中相邻的碱基一 —起来。DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活性，它们分别从一一和一一降解DNA DNA聚合酶一 —只有———————外切核酸酶活性。 4 . 只有真核DNA聚合酶一——一和一——一显示一-----—外切核酸酶活性。 5 ．DNA 大多数自发变化都会通过称之为—------- —的作用很快被校正。仅在极少 情况下，DNA将变化的部分保留下来导致永久的序列变化，称为一--------- 一。 6 ．偶然情况下，在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中，一个 等位基因经过—------- —过程会被另一等位基因代替。 7 . 通过一-------- 一基因重组，游动DNA序列和一些病毒可进人或离开一条目的染 色体。 8 . DNA修复包括3个步骤：一--------- 一酶对DNA链上不正常碱基的识别与切除， —-- —酶对已切除区域的重新合成，—--------- —酶对剩下切口的修补。 9 . 一种主要的DNA修复途径称一-------- 一，包括一系列一----—酶，它们都能识 别并切去DNA上不正常碱基。 10 .—----—途径可以切去任何造成DNA双螺旋大片段改变的DNA损伤。 11 .大肠杆菌中，任何由于DNA损伤造成的DNA M制障碍都会诱导一-----—的信号，即允许跨过障碍进行复制，给细胞一个生存的机会。 12 .在一----—中，基因交换发生在同源DNA序列间，最常见是发生在同一染色体的两 个拷贝间。 13 .在交换区域，一个DNA分子的一条链与另一个DNA分子的一条链相互配对，在两个 双螺旋间形成一个—----- —。 14 .通过一——一，两个单链的互补DNA分子一起形成一个完全双链螺旋，人们认为这个反应从一个慢的—--- —步骤开始。 15 .大肠杆菌的染色体配对需要一-------- —;它与单链DNA结合并使同源双链DNA与之 配对。 16 一般性重组的主要中间体是—------- —，也用它的发现者名字命名为— -------- —。 二、选择题( 单选或多选) 1 . 关于DNA的修复，下列描述中，哪些是不正确的？() (a) UV 照射可以引起嘧啶碱基的交联 (b) DNA 聚合酶川可以修复单链的断裂 (c) 双链的断裂可以被DNA聚合酶H修复 (d) DNA 的修复过程中需要DNA连接酶 (e) 细菌可以用一种核酸内切酶来除去受损伤的碱基 (f) 糖苷酶可以切除DNA中单个损伤的碱基 2 DNA 最普遍的修饰是甲基化，在原核生物中这种修饰的作用有：( ) (a) 识别受损的DNA以便于修复 (b) 复制之后区分链，以确定是否继续复制 (c) 识别甲基化的外来DNA并重组到基因组中 (d) 保护它自身的DNA免受核酸内切酶限制 (e) 识别转录起始位点以便RNA聚合酶能够正确结合
DNA同源重组修复的分子机制
?综述? 作者单位:300192 天津,中国医学科学院放射医学研究所 DNA 同源重组修复的分子机制 王勇 樊飞跃 电离辐射直接造成生物靶分子细胞DNA 的损伤,DNA 的损伤类型很多,其中以DNA 双链断裂(double strand break , DS B )最为严重。DNA DS B 的修复较其他类型的DNA 损伤更 加困难,不修复则可能导致染色体断裂和细胞死亡,而修复不当则可能导致染色体缺失、重排、转位和倒置等,从而易于形成肿瘤等疾病[1]。DNA 损伤的不完全修复可导致基因组不稳定,机体细胞为了对抗损伤,发展出多个修复系统来保证基因组的完整性,同源重组修复(hom olog ous recombination repair ,HRR )是DNA DS B 损伤修复的主要方式,对于保持哺乳 动物细胞的基因组完整性十分重要[2]。重组即遗传物质的重排,同源重组是指发生在同源DNA 序列间的重组,主要是利用DNA 序列间的同源性来识别,而负责配对和重组的蛋白质因子并无碱基序列特异性。 本文综述了国外近来对HRR 分子机制的研究进展,包括引发HRR 的DNA 损伤机制;HRR 的基本修复过程和多条修复通路;HRR 关键分子重要功能的实现机制;HRR 与细胞周期调控等其他事件的相互关系;辐射和HRR 及其与肿瘤之间的关系。 11DNA 损伤的感受识别:HRR 参与的蛋白质有RAD51,RAD51b ,c ,d ,RAD52,RAD54,BRC A1,BRC A2,XRCC2,XRCC3 和MRN 复合物等,另外还需大量起始和损伤应激感受分子,包括AT M ,ATR 和DNA 2PK cs [3]。 细胞在受到电离辐射照射后,一系列重组或修复蛋白及复合物重新定位形成核焦点,以应答DNA 损伤。这些蛋白有γ2H2AX ,AT M ,RAD51,BRC A1,BRC A2,NBS1,RPA 和 MRN ,它们相互作用,完成DNA 损伤信号的接受功能并转导 信号给其他蛋白质,介导并协调包括周期检控点、凋亡、修复的损伤应答。在电离辐射引起的DS B 损伤应答中AT M 是最有可能的感受分子,它属于三磷酸肌醇激酶样激酶(PIKK )家族成员(如AT M 、ATR 、DNA 2PK ),都具有磷酸化谷氨酰氨酸残基后的丝或苏氨酸残基的激酶活性。AT M 以二或多聚体非活化形式储存于未受损伤的细胞,DNA 损伤后AT M 通过自我磷酸化,解离二聚体释放出AT M 对其他分子磷酸化的结构域。活化的AT M 可磷酸化组蛋白H2AX 的139位丝氨酸残基,M DC1ΠNF BD1的俩末端BRCT 结构域,BRC A1的1189, 1542和1524位丝氨酸残基 [4] 。在磷酸化M DC1ΠNF BD1促进 下,DNA 损伤后1～3min ,最先定位于DS B 2Mbp 左右区域内的蛋白之一H2AX 就被磷酸化为γ2H2AX ,磷酸化组蛋白可使染色体的部分结构改变,释放出损伤位点的DNA ,并以其为 装配中心继续募集MRN 、BRC A1等其他因子形成大型复合物来监控基因组的损伤[5]。 21HRR 的起始:在AT M 介导的H2AX 磷酸化波之后,活 化的AT M 与DS B DNA 结合,进而磷酸化结合至γ2H2AX 核焦点的53BP1、NBS1,随后RAD502MRE11复合物由MRE11结合到NBS1,完成定位于DS Bs MRN 复合物的装配,同时BRC A1也结合至损伤位点的53BP1。很可能由具有内切酶和外切酶活性的MRN 复合物发挥5′23′外切酶活性切割DNA 断裂末端,同时MRN 也参与从DS B 到下游DNA 应答蛋白的信号转导。由于NBS1只是3′25′而不是5′23′外切酶活性,故需其他核酸酶的协助切割DNA 来提供DNA 配对和链交换所必需的 3′ssDNA 突出。MRE11定位于细胞核内,Mn 2+ 为辅因子,亚基 参与构成RAD50复合物,有单链内切酶活性和双链特异性 3′25′外切酶活性。RAD50有ATPase 活性的头部球状结构域, 使得DNA 结合具有ATP 依赖性,而其高度柔性的分子卷曲尾部,就像是从核心蛋白向外伸出的长臂,可以较大倍率的易化两DS B 末端互寻,进而桥接两个断裂末端[6]。之后由人复制蛋白A (RPA )与突出末端结合以保护并去除其二级结构。RPA 是由14、32和70kDa 3亚基组成稳定的异质三聚体,与ssDNA 结合,是DNA 复制、重组和修复的必需蛋白。 31链侵入和修复性合成:E .coli 的RecA 的真核细胞同 源物RAD51代替RPA 在ssDNA 区域形成核蛋白纤维,催化同源序列的寻找、链配对和链交换。这是一个需要同源序列的RAD51依赖性链侵入机制。RAD51催化重组中的分子间稳定的联会配对包括:RAD51核蛋白纤维同源双螺旋DNA DS B 被加工的单链末端链侵入成为同源dsDNA ,核蛋白纤维 的ssDNA 和侵入DNA 双螺旋同源链之间的Wats on 2Crick 氢键作用导致随后的双螺旋非互补链的置换,最后形成含有异源双螺旋DNA 的D 环结构重组中间体。随着链交换的深入,重组中间体分岔结构向两边迁移的同时,以侵入中的DS B 加工后的3′末端作为引物,侵入双螺旋的互补链作为模板,进行修复性DNA 合成[7]。 RPA 参与链侵入,通过稳定ssDNA 和被置换来促进RAD51结合ssDNA 。RAD51属于RecA RAD51亚家族,可能定 位于核内,广泛参与普遍的DNA 损伤应答通路,结合单或双链DNA ,可显示DNA 依赖的ATPase 活性,Mg 2+和K +是辅因子[8]。RAD51同系物中RAD51D 的地位特殊,一旦缺失,人和大鼠细胞将不能增殖,小鼠在出生前就会死亡[9]。 参与DS B 的HRR 的RAD52以环状七聚体钳住DNA 链,募集RAD51结合到RPA 覆盖的ssDNA ,结合两者并协助 RAD51形成DNA 交换中间体,可将ssDNA 暴露于蛋白质表
DNA重组技术的基本工具习题
DNA重组技术的基本工具 一、选择题 1．关于限制酶的说法中，正确的是( ) A．限制酶是一种酶，只识别GAA TTC碱基序列 B．EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 2．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？( ) A．BamHI和EcoRI；末端互补序列—AA TT— B．BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GA TC— C．EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AA TT— D．BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— 3．下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是( ) A．DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 B．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 C．DNA连接酶连接的是黏性末端两条链主链上的磷酸和核糖 D．同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端 4．DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D．A、B、C都不正确 5．在受体细胞中能检测出目的基因是因为( ) A．目的基因上有标记B．质粒具有某些标记基因 C．重组质粒能够复制D．以上都不正确 6．关于质粒的叙述正确的是( ) A．质粒是能够自我复制的环状DNA分子B．质粒是唯一的载体 C．重组质粒是目的基因 D．天然质粒可以直接作为载体 7．基因工程中可用作载体的是( ) ①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核 A．①②③B．①②④C．②③④D．①③④
DNA双链断裂与同源重组修复机理研究进展
DNA双链断裂与同源重组修复机理研究进展 卞广兴 郭葆玉 第二军医大学药学院生化药学教研室(上海,200433) 摘要 双链断裂(doub le strand b reak s,D SB s)是细胞染色体复制过程中经常出现的DNA损伤,它的修复过程在真核生物中以同源重组(homo logy recom b inati on,HR)修复为主。正常机体中有着一系列的基因和蛋白及时修复这些损伤,这些蛋白归属于RAD52上位性集团(RAD52ep istasis group)。它们对细胞发挥功能和维持生存意义重大,近来国外研究十分活跃。 关键词 同源重组;双链断裂 1 与HR有关的基因和蛋白 在多种多样的生物体中,基因组保持完整具有极为重要的意义。它是细胞发挥功能和维持生存的必要条件。生物体基因组暴露于离子射线或者受内切酶作用,特别是在染色体自我复制过程中都会出现双链断裂。如果这些断裂未能及时修复就会引起细胞的染色体丢失或导致细胞的死亡。修复不正确也会引起基因的突变和染色体的重组。真核生物对这些断裂的修复有两种机理:非同源末端连接(non2 hom o logy end j o in ing,N H EJ)和同源重组(hom o l2 ogy recom b inati on,HR)。 同源重组是发生在DNA的同源序列之间的重组方式。真核生物非姊妹染色子体的交换,姊妹染色子体的交换,细菌及某些低等真核生物的转化,细菌的转导,接合,噬菌体的重组等都属于这一类型。有人认为,在原核生物中D SB s的修复以HR方式为主;而对于真核生物,其它的修复方式才是主要的。但近几年对酵母和哺乳动物细胞的研究发现,真核生物中的HR不仅在机理上与原核相似,而且具有同等的重要性[1]。 在HR中起重要作用的蛋白归属于R ec A家族,其中R ec A是其中的第一个成员,它是一个由R ec A基因编码的蛋白,在E.coli的HR和DNA复制中起重要作用。近几年来,研究发现了R ec A的很多同源蛋白,如T4噬菌体中的U vsX和哺乳动物细胞中的R ad51等。它们被统称为RAD52上位性集团。包括:RAD50、RAD51、RAD52、RAD54、RAD55、RAD57、RAD59、M R E11和XR S2、XRCC2等。它们的突变缺失细胞都表现出对离子射线的敏感和有丝分裂 无丝分裂缺陷,表明它们是D SB s修复的某条途径的组成部分[2]。其中的不少成员就是在研究射线照射对生物体的作用(radiati on sen si2 tive m u tati on)中发现的,其命名也沿袭了原来的名称(RAD)。从酵母到脊椎动物基因序列的高度保守性表明它们在HR中有着类似的功能。研究中,符合这两者的因子大都可归于RAD52上位性集团。这其中最重要的是RAD51、RAD52和RAD54。 RAD51在所有的细胞中都表达,可能执行链交换的功能。它的作用同R ec A相似,但又不完全相同。Sonoda等[3]把人的RAD51转入鸡B细胞系的D T40细胞发现,RAD51缺失的细胞静息在细胞周期的G2 M期,累积对细胞有毒害作用的染色体断裂并最终死亡。同时发现大多数可探测到的染色体缺失是异染色质型的缺口或断裂,同一染色体的姊妹染色单体在同样的基因座断裂。这表明很多不可修复的裂隙是复制过程中产生的双链断裂的可能原因。尽管RAD51的分布远比其它因子广泛,研究表明它并不是D SB s诱导的所有重组修复形式中应用最广的因子[4]。RAD51在D SB s诱导的同源染色体交换中是必须的,但它对于其他形式的重组,如自发重组(spon taneou s recom b inati on),却并不是必须的。不过,RAD52在已知的这些重组形式中却都是必须的。 RAD52是重组中最重要的蛋白,它在真核细胞中进化保守,原核中基因序列差别较大。R ad52在体内形成多聚体的环,既可以连接DNA链末端又可促进互补链的退火。人的R ad52具有类似的特性。细胞在缺失RAD52的情况下几乎所有形式的HR 都被阻断了[4]。但是研究发现,剔除了RAD52的脊椎动物细胞可以存活而不会象剔除了RAD51等那样严重(死亡),有人认为这可能是细胞中还有其它起类似作用的因子未被发现[5]。 RAD55和RAD57同RAD51具有某些同源
重组dna技术名词解释
重组dna技术名词解释 易患性：在多基因遗传病中，由遗传基础和环境因素共同作用，决定一个个体患病可能性的大小，称为易患性。易患性低，患病的可能性小；易患性高，患病的可能性大。在一定的环境条件下，易患性代表个体所积累致病基因数量的多少。 重组DNA技术：通过体外操作将不同来源的DNA重新组合以获得新功能分子的技术。就是将不同生物的DNA连在一起。 基因治疗：将缺陷基因的野生型拷贝引入患者细胞内以治疗疾病的方法。包括基因置换、基因修正、基因修饰、基因失活、引入新基因等。就是基因水平上的治疗，将正常基因导入细胞达到治疗的目的。 同源染色体：一条来自父本，一条来自母本，且形态、大小相同，在减数分裂前期相互配对的染色体。上面有等位基因。人有46条染色体，有23对同源染色体。 表现度：具相同基因型的个体间基因表达的变化程度。表现型是由基因和环境共同决定的，基因相同的个体间表达程度可能不同。 癌基因：能诱导它所存在的细胞发生癌变的基因。就是说的原癌基因，原癌基因负责调节细胞周期，控制细胞生长和分裂的进程。它过度表达会使细胞不受控制地分裂，从而变成癌细胞。 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性内切酶片段长度多态性）：RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的。
定位克隆：分析遗传家系，获得与特定性状(疾病)紧密连锁的遗传标记，并定位于染色体特定区域，借此得到目的基因的方法。就是将致病基因定位，然后提取出来以便研究。 基因簇：基因家族中来源相同、结构相似和功能相关的在染色体上彼此紧密连锁的一组基因。某一祖先基因由于重复和变异产生的一系列基因称为一个基因家族，有的基因家族含有完全相同的成员，家族成员可以成簇存在或分布在不同的染色体中，基因簇少则是由重复产生的两个相邻相关的基因组成，多则几百个。当基因产物的需求量很大时，一个基因可以产生大量的连串重复，如rRNA基因和组蛋白基因。 同源染色体：形态、结构、遗传组成基本相同和在减数第一次分裂前期中彼此联会(配对),并且能够形成四分体,然后分裂到不同的生殖细胞的一对染色体，一个来自母方，另一个来自父方。一般在同源染色体上有相同的基因座位。 弱化子:是指原核生物的操纵子中可以明显衰减乃至终止转录作用的一段核苷酸序列，位于操纵子的上游。 假基因:是基因组中与编码基因序列非常相似的非功能性基因组 DNA 拷贝,一般情况都不被转录,且没有明确生理意义。 --根据其来源可分为:保留了间隔序列的复制假基因(如珠蛋白假基因家族)和缺少间隔序列的已加工假基因。 功能基因组学:是指基于基因组序列信息，利用各种组学技术，在系统水平上将基因组序列与基因功能(包括基因网络)以及表型有机联
分子生物学复习题第八章重组dna技术
第八章重组DNA技术 一、选择 单选 1、下列哪项不属于生物工程 A. PCR技术 B.重组DNA技术 C.蛋白质工程 D.酶工程 E.细胞工程 2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类 A.Ⅰ型限制酶 B.Ⅱ型限制酶 C.Ⅲ型限制酶 D.Ⅳ型限制酶 E.Ⅴ型限制酶 3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件 A.复制起点 B. amp R ' D.多克隆位点MCS E.调节基因lacI 4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是 A.基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需 B.基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构 C.在溶原性生长时进行滚环复制 D.复制时形成多联体结构 E.其转化的细菌经过培养形成噬菌斑 5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆 A.α互补 B. PCR C.插入失活 D.核酸分子杂交 E.蓝白筛选 6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。常用 的制备方法不包括 A.PCR扩增 B.从组织细胞分离基因组DNA C.化学合成 D.逆转录合成cDNA E.限制酶截取 7、第一种应用于临床的重组蛋白是 A.基因工程疫苗 B.基因工程抗体 C.激素 D. 生长因子 E.细胞因子 8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。体外重组 的方法不包括： A.加人工接头连接 B.加同聚物尾连接 C.互补黏端连接 D.连接 E.平移连接 9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。用于制备基因文库的宿主细胞主要是 A.哺乳动物细胞 B.大肠杆菌 C.酵母 D.枯草杆菌 E.昆虫细胞 10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞 A.CaCl2法 B.病毒感染法 C.脂质体载体法 D.显微注射法 E.穿刺法 11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种 A.PCR分析 B.插入失活分析 C.核酸分子杂交分析 D.酶切分析 E.免疫分析 12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是 A. T病毒基因组DNA的一部分 B. 细菌染色体外的独立遗传单位 C. 细菌染色体DNA的一部分 D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位 E. 真核细胞染色体DNA的一部分 13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生 A. 5’突出末端 B. 5’或3’突出末端 C. 5’及3’突出末端 D. 3’突出末端 E. 平末端
第一章 重组DNA技术与基因工程的基本概念
生物技术专业核心课程 基因工程 华东理工大学张惠展
基因工程 523416789重组DNA 技术与基因工程的基本概念 重组DNA 技术与基因工程的基本原理 重组DNA 技术所需的基本条件 重组DNA 技术的操作过程 目的基因的克隆与基因文库的构建 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因表达产物的分离纯化
D 基因工程的基本形式 1重组DNA技术与基因工程的基本概念 C 重组DNA技术与基因工程的基本用途 B 基因工程的基本定义 A 重组DNA技术的基本定义
A 重组DNA 技术的基本定义 技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物体外操作程序，也称为分子克隆技术。 因此，供体、受体、载体是重组 重组DNA 技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA 体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA 技术的三大基本元件。
B 基因工程的基本定义 基因工程是指重组 包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模 培养以及基因产物的分离纯化过程。