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纤维素酶和丙二醇对产后奶牛能量负平衡相关血清指标的影响

动物营养学报2014,26(12):3829-3835Chinese Journal of Animal Nutrition

一

doi :10.3969/j.issn.1006-267x.2014.12.037

纤维素酶和丙二醇对产后奶牛能量

负平衡相关血清指标的影响

陈连民1一陈前岭2?一王梦芝1??

一高一健1一

蔡青和3一张婵娟3一王洪荣1

(1.扬州大学动物科学与技术学院,扬州225009;2.江苏省泗阳县畜牧兽医站,泗阳223700;

3.上海欧耐施生物技术有限公司,上海201613)

摘一要:本文旨在比较饲粮中添加纤维素酶和丙二醇对产后奶牛能量负平衡相关血清指标二尿液酮体浓度的影响三试验选择24头处于围产前期奶牛随机分成3组,对照组饲喂基础饲粮,另设置丙二醇组(基础饲粮+0.5%丙二醇制剂)和纤维素酶组(基础饲粮+0.1%纤维素酶制剂),测定产后第1二20二40二60和100天奶牛能量负平衡相关血清指标二尿液酮体的浓度三结果表明:在产后第1天丙二醇组血清葡萄糖和胰岛素浓度显著高于其余2组(P <0.05);在产后第1二20二40和60天,丙二醇组血清游离脂肪酸和尿液酮体浓度显著低于对照组(P <0.05),第20天显著低于纤维素酶组(P <0.05);甘油三酯等与肝脏脂肪代谢相关的血清指标试验组优于对照组,且以丙二醇组更好三综上,饲粮添加丙二醇及纤维素酶对奶牛产后能量负平衡有一定的改善作用,且以添加0.5%丙二醇制剂效果相对更好三关键词:纤维素酶;丙二醇;产后奶牛;能量负平衡

中图分类号:S823;S816.7一一一一文献标识码:A一一一一文章编号:1006-267X (2014)12-3829-07收稿日期:2014-07-21

基金项目:江苏省自然科学基金项目(BK20141270);江苏省农业三新工程项目(SXGC [2013]321);江苏省优势学科项目作者简介:陈连民(1991 ),男,江苏阜宁人,硕士研究生,动物营养与饲料科学专业三E-mail :LianminChen@https://www.wendangku.net/doc/1b9903566.html, ?同等贡献作者

??通讯作者:王梦芝,副教授,硕士生导师,E-mail :mengzhiwangyz@https://www.wendangku.net/doc/1b9903566.html,

一一奶牛产犊后的一段时间内泌乳量迅速上升,泌乳所需能量及营养物质的量高于从饲粮中的摄取,加之产犊带来的应激,其采食量降低且胃肠道的蠕动二消化吸收功能下降,从而使高产奶牛不得不动员自身身体脂肪和蛋白质储备才够维持产奶需要,这种能量的摄入与输出不对等状态称之为能量负平衡(negative energy balance ,NEB )[1-3]三能量负平衡时期的奶牛血清葡萄糖(GLU )浓度迅速下降,体脂动员产生大量游离脂肪酸(NEFA )并被运至肝脏三在肝脏中NEFA 一部分被氧化成酮体(KET )等,一部分酯化后与载脂蛋白结合生成极低密度脂蛋白从而将肝脏合成的甘油三酯(TG )转运出肝脏,如转运不及时则会造成NEFA

和TG 在肝脏中的堆积,最终造成脂肪肝及酮病的

发生,导致机体代谢紊乱,繁殖性能和泌乳性能降低等,严重影响奶牛的健康及生产[4-6]三

一一目前,国内外防治奶牛能量负平衡的原则是补糖降酮,促进糖异生作用[7]三前人研究表明,丙二醇进入瘤胃后可以被瘤胃壁迅速吸收并能够通过糖异生作用转化为葡萄糖,可以减轻因采食量下降导致的能量负平衡,提高血液葡萄糖及胰岛素(INS )浓度,减少奶牛酮病及脂肪肝综合征[8-9];另外,也有研究表明,饲粮中添加外源性纤维素酶可以促进反刍动物对纤维素的消化,提高瘤胃液挥发性脂肪酸(VFA )浓度,反刍动物可利用能量显著增加,对奶牛产后能量负平衡也有一定改善作用[10-11]三但目前有关两者对奶牛能量负平衡改善作用效果的比较研究还相对较少,本研

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究即通过向基础饲粮中添加丙二醇制剂和纤维素酶制剂,进一步比较两者对产后奶牛能量负平衡相关血液生化二尿液KET浓度影响的差异,以便为奶牛生产中能量负平衡的防治提供试验参考三

1一材料与方法

1.1一试验动物

一一选择江苏省宿迁市泗阳县某牛场处于围产前期(3~5胎次,产前8~10d)的健康中国荷斯坦母牛24头,体重(590?20)kg,305d泌乳量5000kg 左右,分成3组,每组8头三分组前采血测定免疫生化等指标使得各组间牛的生理状况基本一致,并采取单头栓养,饲喂相同的全混合日粮(TMR),自由采食并自由饮水三试验于2013年11月20日至2014年3月5日进行三

1.2一试验方法

一一基础饲粮粗蛋白质二能量等的需要量依照NRC(2001)[12]标准进行配制三以饲喂不添加任何其他成分的基础饲粮组为对照组,设置丙二醇组(基础饲粮+0.5%丙二醇制剂)和纤维素酶组(基础饲粮+0.1%纤维素酶制剂),试验组纤维素酶制剂及丙二醇制剂添剂量为上海欧耐施生物技术有限公司指导用量,基础饲粮组成及营养水平见表1三预试期为15d,正试期为100d三

一一据奶牛生产情况配制试验饲粮总量,分别于每日09:00和15:00进行统一饲喂三

1.3一样品采集及保存

1.3.1一尿样的采集及保存

一一通过集尿带连续采集母牛产后第1二20二40二60和100天5个时间点全天的尿样并进行混合,混合充分后取混合样50mL置于-20?保存,以供KET浓度的测定三

1.3.2一血样的采集及保存

一一于母牛产后第1二20二40二60和100天07:00晨饲前采集牛尾静脉血10mL,3500r/min离心10min分离出血清并置于-20?保存,用于相关指标的测定三

1.4一指标测定

1.4.1一尿液KET浓度

一一通过购买的美国Bio Assy公司KET测定试剂盒(EKBD-100)自行测定,KET浓度测定值为β-羟丁酸和乙酰乙酸浓度测定值之和三具体测定步骤参见试剂盒说明书三

表1一基础饲粮组成及营养水平(干物质基础)

Table1一Composition and nutrient levels of

the basal diet(DM basis)%项目Items含量Content 原料Ingredients

玉米青贮Corn silage42.50

胡萝卜Carrot 5.00

苜蓿Alfalfa9.00

羊草Chinese wildrye10.00

酒糟Distillers solubles 5.00

玉米Corn17.00

小麦麸Wheat Bran 5.00

豆粕Soybean meal 3.00

大麦Grain 5.00

石粉Limestone 2.00

磷酸氢钙CaHPO40.20

食盐NaCl0.30

预混料Premix1) 1.00

合计Total100.00

营养水平Nutrient levels2)

干物质DM65.84

泌乳净能NE L/(MJ/kg)7.02

粗蛋白质CP11.30

中性洗涤纤维NDF37.60

酸性洗涤纤维ADF20.50

钙Ca0.91

磷P0.44

一一1)每千克预混料含One kilogram of premix contains the following:CuSO425mg,FeSO4四H2O75mg,ZnSO4四H2O 105mg,Co0.0024mg,Se0.0016mg,VA12000IU, VD310000IU,VE25mg,烟酸nicotinic acid36mg,胆碱choline1000mg三

一一2)泌乳净能为计算值,其余为测定值三NE L is a calcu-lated value,while the others are measured values.

1.4.2一血清INS和NEFA浓度

一一通过购买南京建成生物工程研究所的牛血清INS Elisa Assy Kit试剂盒和NEFA试剂盒(A042)自行测定血清INS和NEFA浓度三具体测定步骤参见试剂盒说明书三

1.4.3一血清GLU等其他血液生化指标

一一将血清样品送至扬州市疾病控制中心测定血清GLU二TG二胆固醇(CHO)二高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度三

1.5一统计分析

一一利用Excel2003对试验数据进行整理,采用

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SPSS16.0软件中单因素方差分析模块进行方差分析,并用Duncan氏法进行多重比较三数据以平均值?标准差表示三P值小于0.05表示差异显著三

2一结果与分析

2.1一对血清INS和GLU浓度的影响

一一由表2可知,血清INS和GLU浓度在整个试验期内整体呈上升趋势,丙二醇组和纤维素酶组各时间点血清INS和GLU浓度总体上高于对照组三一一在产后第20二60和100天这3个时间点丙二醇组和纤维素酶组血清INS和GLU浓度与对照组相比差异不显著(P>0.05)三在产后的第1天,丙二醇组血清INS和GLU浓度均显著高于纤维素酶组及对照组(P<0.05),而纤维素酶组与对照组间的差异则不显著(P>0.05);在产后的第40天,丙二醇组血清INS浓度显著高于对照组(P< 0.05),但与纤维素酶组相比差异则不显著(P> 0.05)三与此同时,该时间点各组间血清GLU浓度也未见显著差异(P>0.05)三

表2一纤维素酶和丙二醇对产后奶牛血清INS和GLU浓度的影响

Table2一Effects of cellulase and propylene glycol on serum INS and

GLU concentrations of postpartum dairy cows mmol/L

项目Items

产后天数

Postpartum days/d

对照组

Control group

丙二醇组

Propylene glycol group

纤维素酶组

Cellulase group 112.75?1.85b14.67?1.07a12.43?2.38b 2014.82?0.9615.45?2.0715.03?0.62

胰岛素INS4015.26?1.24b18.59?0.98a16.07?1.82ab

6018.73?1.3819.63?0.6818.05?1.62

10018.35?0.6319.13?1.0418.65?0.65

1 2.69?0.30b 3.08?0.07a 2.76?0.16b

20 2.92?0.09 3.06?0.11 3.00?0.14葡萄糖GLU40 3.32?0.25 3.37?0.16 3.30?0.20

60 3.62?0.13 3.47?0.35 3.47?0.21

100 3.60?0.28 3.88?0.27 3.75?0.27一一同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)三下表同三

一一Values in the same row with different small letter superscripts differ significantly(P<0.05).The same as below.

2.2一对血清NEFA和尿液KET浓度的影响

一一由表3可知,血清NEFA及尿液KET浓度在整个试验期整体呈波动性下降趋势,且相比纤维素酶组与对照组,丙二醇组这2项指标的下降趋势更强三

一一在产后第1二20二40和60天这4个时间点,丙二醇组的血清NEFE和尿液KET浓度均显著低于对照组(P<0.05);纤维素酶组在产后的第20天血清NEFE和尿液KET浓度也均显著低于对照组,且在产后的第60天尿液KET浓度显著低于对照组(P<0.05),而血清NEFA浓度与对照组则差异则不显著(P>0.05);另外,与丙二醇组相比纤维素酶组在产后第1天尿液KET浓度显著提高(P< 0.05),且在第20天血清NEFA浓度均显著提高(P<0.05);其余时间点各组间血清NEFA和尿液KET的浓度未见显著差异(P>0.05)三2.3一对血清TG二CHO二HDL-C及LDL-C浓度的影响

一一由表4可知,整个试验期内血清TG二HDL-C二LDL-C浓度变化大致呈先上升再下降的趋势,血清CHO的浓度变化则在一定范围内呈波动上升趋势三

一一在产后第1天,丙二醇组的血清CHO和LDL-C浓度显著低于纤维素酶组及对照组(P< 0.05),其余指标各组间则未见显著差异(P> 0.05);在产后第20天,丙二醇组和纤维素酶组的血清TG浓度显著低于对照组(P<0.05),其余指标各组间则未见显著差异(P>0.05);在产后第40天,纤维素酶组的血清TG浓度显著低于其余2组,血清CHO浓度则为丙二醇组显著低于对照组(P<0.05),其余指标各组间未见显著差异(P> 0.05);在产后第60天,各指标组间均出现了一定

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程度的差异,其中血清TG浓度纤维素酶组显著低于对照组(P<0.05),血清CHO浓度丙二醇组显著低于对照组(P<0.05),血清HDL-C和LDL-C浓度丙二醇组和纤维素酶显著低于对照组(P< 0.05);在产后第100天,试验组血清CHO和HDL-C浓度显著低于对照组(P<0.05)三

表3一纤维素酶和丙二醇对产后奶牛对血清NEFA和尿液KET浓度的影响

Table3一Effects of cellulase and propylene glycol on serum NEFA and urine KET concentrations of postpartum dairy cows

项目Items

产后天数

Postpartum days/d

对照组

Control group

丙二醇组

Propylene glycol group

纤维素酶组

Cellulase group

游离脂肪酸NEFA/(μmol/L)

1814?15a784?8b803?6ab 20855?21a731?19c801?17b 40754?12a689?8b707?13ab 60582?13a519?15b558?29ab 100426?15403?18411?10

酮体

KET/(mg/dL)

116.69?1.20a15.08?0.87b16.76?1.16a

2018.92?1.39a13.06?1.11c16.00?1.14b

4014.32?1.25a13.37?1.16b13.30?2.20ab

6012.62?1.13a9.47?1.35b10.47?1.21b

1007.01?1.28 6.88?1.17 6.65?0.97表4一纤维素酶和丙二醇对产后奶牛血清TG二CHO二HDL-C及LDL-C浓度的影响

Table4一Effects of cellulase and propylene glycol on serum TG,CHO,HDL-C and LDL-C concentrations of

postpartum dairy cows mmol/L

项目Items

产后天数

Postpartum days/d

对照组

Control group

丙二醇组

Propylene glycol group

纤维素酶组

Cellulase group

甘油三酯TG

10.06?0.020.05?0.020.05?0.01 200.22?0.03a0.14?0.02b0.16?0.03b 400.17?0.02a0.16?0.02a0.12?0.02b 600.08?0.01a0.07?0.01ab0.05?0.02b 1000.06?0.050.05?0.020.07?0.01

胆固醇CHO

1 3.47?0.26a 2.50?0.26b 3.21?0.53a 20 4.24?1.17 3.68?0.27 3.90?0.4

2 40 5.14?1.04a 3.31?1.05b 3.85?0.84ab 60 5.81?0.51a 3.61?1.22b 4.39?0.20ab 100 5.74?0.78a 3.75?0.65b 4.46?0.49b

高密度脂蛋白胆固醇HDL-C

1 1.63?0.24 1.52?0.1

2 1.52?0.26 20 1.75?0.17 1.72?0.37 1.80?0.34 40 2.19?0.14 1.83?0.31 1.78?0.36 60 2.07?0.18a 1.64?0.26b 1.86?0.17b 100 2.43?0.26a 1.68?0.17b 1.62?0.17b

低密度脂蛋白胆固醇LDL-C

10.69?0.13a0.37?0.11b0.63?0.11a 200.68?0.400.74?0.140.62?0.04 40 1.05?0.380.58?0.300.78?0.43 60 1.13?0.15a0.56?0.23b0.83?0.09b 1000.69?0.180.63?0.200.74?0.15

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12期陈连民等:纤维素酶和丙二醇对产后奶牛能量负平衡相关血清指标的影响

3一讨一论

一一在奶牛泌乳早期,由于产奶量的增加,机体糖类消耗增大,但由于机体丙酸缺乏和体脂储备动

员缓慢,糖类得不到及时的补充,就会造成奶牛血

液中GLU和INS浓度迅速地降低[13]三王聪等[14]通过向饲粮中添加不同剂量的丙二醇研究其对围

产期奶牛血液生化指标的影响发现,试验组在奶

牛分娩后的前3周血液GLU浓度显著高于对照

组,且血液INS浓度也有一定的增加三Chiofalo

等[15]在对围产期母羊饲喂丙二醇时也发现其可以显著提高母羊分娩前后的血液GLU浓度三本试验中,在奶牛产后第1二20天,各组血清GLU和INS浓度都处在相对较低水平,且在产后的第1天丙二醇组的血清GLU及INS浓度都显著高于对照组,这与上述研究结果有着一致性,说明饲粮添加丙二醇可以有效地缓解因糖类补充不及时造成的血液GLU和INS浓度下降三Hristov等[11]报道,添加纤维素酶和木聚糖酶可提高饲粮可溶性糖的含量和降低中性洗涤纤维的含量,本试验中纤维素酶组的血液GLU浓度要高于对照组,但差异不显著,且与丙二醇组相比产后第1天要显著低于丙二醇组三造成这样的差异可能一方面由于纤维素酶主要通过提高瘤胃对饲粮纤维物质的消化率,提高瘤胃液VFA的浓度进而提高了能量的利用效率,但整个过程需要足够的时间[16];另一方面,纤维素酶作用的发挥受反应底物二瘤胃状态等多重因素的制约,而产后奶牛的生理发生了巨大的变化,这可能也是作用效果不明显的原因[17]三相比之下,丙二醇可以被瘤胃直接吸收或代谢生成丙酸盐作为肝脏糖异生的前体物质,对机体能量及血液葡萄糖的补充要来得迅速[8]三相关研究也表明,饲粮中添加丙二醇可以增加饲料在瘤胃中的滞留时间,提高营养物质的消化率,但因适口性差需要与饲粮混合饲喂[18]三另外,我们对试验牛产后体重和消化性能的研究结果显示,第40二100天,丙二醇组的体重及对干物质的消化率也显著高于纤维素酶组和对照组三这些结果一致地说明饲粮添加丙二醇相比纤维素酶更有助于产后母牛对营养物质的利用以及体重的恢复三

一一血液GLU浓度降低后,体脂开始大量动员以弥补能量的入不敷出,这时血液NEFA浓度会迅速升高,其中少部分被乳腺产奶利用,大部分则被运送至肝脏[19]三本试验中,试验组血清NEFA浓度也总体呈下降趋势,而对照组血清NEFA浓度则呈先上升后下降的趋势三在产后第1二20二40及60天这4个时间点,对照组血清NEFA浓度显著高于丙二醇组,而纤维素酶组浓度虽低于对照组,但只有在产后的第20天出现显著差异三说明丙二醇及纤维素酶的使用相比对照组缓解了能量负平衡导致的体脂进一步动员,且以丙二醇的效果更佳三

一一NEFA进入肝脏后首先经脂酰辅酶A合成酶作用变成脂酰辅酶A再进行进一步代谢,主要途径有:1)被彻底氧化成二氧化碳,所产生的能量被肝脏吸收利用;2)部分氧化生成KET,被运送至肝脏外的肌肉二骨骼等外周组织进而被利用;3)再酯化形成TG二磷脂或CHO等,用于脂蛋白的合成,转移到肝脏外组织进行利用[20]三当NEFA产生太多太快,同时肝脏利用NEFA的能力有限,导致过多的NEFA转化为KET,或者合成TG存储在肝实质细胞,导致脂肪肝的发生[21]三而肝脏脂肪的大量蓄积则会进一步损害肝脏功能,降低NEFA进入三羧酸循环和参与脂蛋白的合成和分解的作用,进而导致更严重的酮病和脂肪肝,这样就造成酮病和脂肪肝的恶性循环,而KET在血液二乳汁二尿液中积聚更加剧了能量负平衡[22]三本试验中,尿液KET的浓度变化呈波动性下降的趋势,且试验组与对照组出现了一定程度的差异,说明随着时间的延伸奶牛逐渐从能量负平衡中恢复且试验组恢复的较好;另外,各组血清TG浓度呈上升趋势,其中丙二醇组上升较少,对照组上升较多三在产后的第20二40和60天,各组间血清TG浓度出现了显著差异且以对照组最高,可能与以上时间点各组间血清NEFA浓度的显著差异有关三Kaske[23]报道反刍动物肝脏TG的合成前体主要是来自血液中的NEFA,肝脏TG浓度与血液NE-FA浓度存在着正相关三王聪等[14]报道,通过对围产期奶牛饲喂丙二醇可以显著降低血清TG浓度,加强了糖异生作用,这与本研究结果相一致三

一一此外,本试验中对照组血清HDL-C浓度也比试验组高,并在试验的后期出现了显著差异三HDL-C具有清洁疏通动脉的功能,促进脂类代谢的作用,这说明伴随着试验组丙二醇和纤维素酶的使用,肝脏代谢脂肪的强度得到缓解,而对照组仍处于较高水平三另外,对照组后期血清LDL-C

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浓度较高,这加大了其动脉硬化的风险[24],也说明肝脏脂肪的代谢负荷较高,不能及时将多余的脂肪代谢转运至体外,导致能量负平衡恢复期的进一步延长三

4一结一论

一一饲粮中添加0.5%的丙二醇制剂和0.1%纤维素酶制剂可以有效地改善奶牛产后尿液酮体二血清葡萄糖等血液生化指标,缓解奶牛产后能量负平衡,且以添加0.5%的丙二醇制剂作用效果更佳三

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12期陈连民等:纤维素酶和丙二醇对产后奶牛能量负平衡相关血清指标的影响

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生化指标的影响[D ].硕士学位论文.合肥:安徽农业大学,2011.

?Contributed equally

??Corresponding author ,associate professor ,E-mail :mengzhiwangyz@https://www.wendangku.net/doc/1b9903566.html,

(编辑一王智航)

Effects of Cellulase and Propylene Glycol on Negative Energy

Balance Related Serum Indexes of

Postpartum Dairy Cows

CHEN Lianmin 1一CHEN Qianling 2?一

WANG Mengzhi 1??

一GAO Jian 1一

CAI Qinghe 3一ZHANG Chanjuan 3一WANG Hongrong 1

(1.College of Animal Science and Technology ,Yangzhou University ,Yangzhou 225009,China ;2.Jiangsu

Siyang Animal Husbandry and Veterinary Station ,Siyang 223700,China ;3.Shanghai Honest

Biological Co.,Ltd.,Shanghai 201613,China )

Abstract :The objective of this study was to compare the effects of cellulase and propylene glycol on negative energy balance (NEB )related serum indexes and urine ketone (KET )concentration of postpartum dairy cows.Twenty four early perinatal dairy cows were randomly divided into 3groups with 8cows per group.Three

groups were control group (basal diet ),propylene glycol group (basal diet +0.5%propylene glycol prepara-tion )and cellulase group (basal diet +0.1%cellulose preparation ).Serum indexes related to NEB and urine KET concentration were detected respectively on days 1,20,40,60and 100after calving.The results showed as follows :on day 1after calving ,serum glucose and insulin concentrations of propylene glycol group were significantly higher than those of the other 2groups (P <0.05).On days 1,20,40and 60after calving ,serum non-esterified fatty acid and urine KET concentrations in propylene glycol group were significantly lower than those in control group (P <0.05),moreover ,propylene glycol group was significantly lower than cellulase group on day 20after calving (P <0.05).Serum indexes related to liver fat metabolism such as triglyceride in experimental groups were better compared to control group ,and propylene glycol group showed optimum effect.Taken together ,diets adding with cellulase and propylene glycol have certain improvements to NEB and the addition of 0.5%propylene glycol preparation in diet showes better effects.[Chinese Journal of Animal Nutrition ,2014,26(12):3829-3835]

Key words :cellulase ;propylene glycol ;postpartum dairy cows ;negative energy balance

383

乙二醇与丙二醇比较

乙二醇 1. 物质的理化常数国标编号—— CAS号107-21-1 中文名称乙二醇英文名称Ethylene glycol 别名甘醇分子式C2H6O2；HOCH2CH20H外观与性状无色、无臭、有甜味、粘稠液体分子量62.07蒸汽压 6.21kPa/20 C闪点：110C -13 .2 C 沸点: 197.5 C溶解性与水混熔点八、、溶，可混溶于乙醇、醚等密度相对密度（水=1）1.11 ；相对密度（空气=1）2.14 稳定性稳定危险标记主要用途用于制造树脂、增塑剂，合成纤维、化妆品和炸药，并用作溶剂、配制发动机的抗冻剂 2. 对环境的影响一、健康危害侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。健康危害：吸入中毒表现为反复发作性昏厥，并可有眼球震颤，淋巴细胞增多。口服后急性中毒分三个阶段：第一阶段主要为中枢神经系统症状，轻者似乙醇中毒表现，重者迅速产生昏迷抽搐，最后死亡；第二阶段，心肺症状明显，严重病例可有肺水肿，支气管肺炎，心力衰竭；第三阶段主要表现为不同程度肾功能衰竭。人的本品一次口服致死量估计为1.4ml/kg（1.56g/kg）。二、毒理学资料及环境行为毒性：属低毒类。急性毒性：LD508.0 ?15.3g/kg（小鼠经口）; 5.9 ?13.4g/kg（大鼠经口）; 1.4ml/kg（人经口，致死）亚急性和慢性毒性：大鼠吸入12mg/m3（连续多次）八天后2/15只动物眼角膜混浊、失明；人吸入40%乙二醇混合物9/28人出现短暂昏厥；人吸入40%乙二醇混合物加热至105C 反复吸入14/38 人眼球震颤，5/38 人淋巴细胞增多。危险特性：遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。若遇高热，容器内压增大，有开裂和爆炸的危险。燃烧（分解）产物：一氧化碳、二氧化碳。 3. 实验室监测方法品红亚硫酸法《化工企业空气中有害物质测定方法》，化学工业出版社变色酸法《化工企业空气中有害物质测定方法》，化学工业出版社

测定纤维素酶活实验方法总结及优化方案

DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。目前实验室采用测酶活方法： 1、葡萄糖标准曲线制作： 530nm比色。 2、酶活测定方法：

考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准曲线的显色时间保持一致。单位酶活的计算：T n k OD ml U 1000 1 )/(???=酶活力 n ：稀释倍数； K ：曲线斜率； T ：反应时间，min ； 1000：mg 换算成ug. 以下是近期所做的实验结果：葡萄糖标准曲线两种产纤维素酶细菌不同测试结果

测定结果实验结论：从以上几种对酶液的处理方法来看，183的酶活要比R2高，两种菌都是以胞外酶为主。目前尚没找到有关于加缓冲溶液并且超声破碎的文献，所得测量结果与前面三种方法均不符，这一步需另外探索。根据《纤维素酶活力测定条件研究》（夏服宝等，《饲料工业》2005年第26卷第16期）和《影响纤维素酶活力测定的几个因素》（刘妙莲等，中国食品发酵工业研究所）这两篇文献，实验室可先从底物浓度、温度、DNS用量、显色时间以及对菌体的超声破碎时间这几方面进行探索，进而优化实验方法。刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg ／mI。的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。方法二配制质量浓度为10 mg／mI。的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。培养基加入1 mI。的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。两种刚果红染色法的比较刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，课本中给出了两种方法。方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出

牛的各种发热治疗方案

牛的各种发热治疗方案 1、外感发热：多因风、寒、暑、湿、燥、火等六种因素造成的体内正气与入侵邪气进行抗争的一种表现。外感发热多属实热症，主要辨别表里深浅。（多见于小牛和育成牛发病）表征：以发热微感风寒，口色偏红，舌苔薄白或薄黄，常见于风热初起；里征：常根据热邪所在部位的不同，分为热在气分和热在营血两种。热在气分：以高热、不恶寒、出汗、口渴、口色红、舌苔黄、干燥为主要特征，由于热灼津液，常伴有粪便干燥、尿短赤等；热在营血：以发热较重，神昏狂躁不安，抽搐，有的可见血斑疹或粪中带血，舌苔红绛。治疗方案：1、冰针30-50ml，肌肉注射，一天一次，连用2-3天。治疗方案：2、重症：冰针30-50ml，头孢噻呋钠3支加生理盐水50ml分点注射,一天一次，连用2-3天。治疗方案：3、冰针20ml+瘟毒清20ml，分点肌肉注射，一天一次，连用2-3天。 2、内伤发热：主要是脏腑，阴阳，气血的病理变化导致体内阴虚阳盛而发热，阳盛则热。内伤发热多属虚热症。一般内伤发热缓慢，以持续低热为主要特征，有时亦可出现高热，常见于体

质虚弱及慢性疾病的患畜。产后发热多为气虚或血瘀发热。（多见于奶牛产后和乳房炎发烧）在症型上常分为阴虚发热，气虚发热和血瘀发热。阴虚发热：以低热不退或津液减少为主要特征，舌质多红、无苔而干燥；气虚发热：食欲减少、耳鼻稍热、易出汗、有时伴有腹泻、神疲乏力、呼吸气短等脾气虚的症状，舌淡无苔；血瘀发热：以局部肿胀或疼痛为特征，一般舌质多红而带紫。治疗方案：1、产复康30-50ml，肌肉注射，一天一次，连用 2-3天。治疗方案：2、乳炎速康30-50ml，肌肉注射，一天一次，连用2-3天。治疗方案：3、乳炎速康20ml，头孢噻呋钠3支加生理盐水稀释50ml，分点肌肉注射，一天一次，连用2-3天。治疗方案：4、产复康20ml，头孢噻呋钠3支加生理盐水稀释50ml，分点肌肉注射，一天一次，连用2-3天。【主要成份】柴胡、防风、薄荷、金银花、蒲公英、脾氨肽等。【性状】本品为淡棕红色的澄明液体。【功能主治】主要用于牛、羊的高烧不退、用药反弹、不食少食、粪干、尿黄、血便、水样腹泻、粪便恶臭、卧地不起、后肢麻痹、眼结膜潮红。由附红细胞体病、弓形体病、链球菌、喘气病、牛出血性败血病、布氏杆菌病引起的早产流产、子宫内膜炎、乳房

奶牛繁殖程序

奶牛繁殖程序北京龙德农业有限公司钟海奶牛的繁殖一直是牛场管理的一项主要工作，繁殖率的高低直接影响到牛场的经济效益。而目前很多的牧场还只是停留在发情配种，自然观察，发现多少配多少的阶段。为此，奶牛的繁殖应该是有一套相应的程序进行管理，以提高奶牛的正常发情，配种受孕。一、助产标准 1、提倡自然分娩，奶牛出现分娩征兆后10分钟未发现犊牛露蹄和嘴时，进行胎位检查。 2、羊膜囊破裂后，奶牛无怒责时，实施助产。二、产后管理 1、胎儿产出后，立刻进行母牛产道检查，注意出血及撕裂受伤。 2、奶牛产后立刻饲喂麸皮红糖水。 3、肌肉注射缩宫素100单位，V ADE10ml。 4、要求在产后半小时内立即驱赶奶牛站立。三、产后护理 1、产后奶牛的体温监测：夏季：39.5℃、冬季：39.2℃（特别注意炎热季节体温变化）。 2、产后12小时不见胎衣称为胎衣不下，不主张手术剥离，可配合药物治疗实行保守疗法。

3、胎衣不下牛注意体温变化，出现感染可进行输液，配合子宫投药。四、产后牛繁殖护理 1、观察恶露排出情况，注意恶露滞留、恶露颜色异常。 2、产后11~13天肌肉注射6~10mg雌二醇。 3、产后15~21天检查子宫复旧情况，通过检查可刺激子宫恶露排出。 4、产后18~21天肌肉注律胎素半支，促进内容物的排出。 5、产后28~30天第二次直肠检查，发现子宫炎症牛进行投药治疗。 6、产后45天子宫必须净化，等待自然发情。 7、产后60天出现不发情牛立刻进行处理。（因随着产奶量越来越高，子宫恢复期延迟。另子宫炎牛处理不及时，容易形成子宫蓄脓、子宫黏连、输卵管炎及卵巢炎）。五、产后牛理想配种时间 1、头胎日产30Kg，70天以上配种。 2、头胎日产20Kg，60天以上配种。 3、经产日产小于20Kg，45天以上配种。 4、经产日产小于25Kg，60天以上配种。 5、经产日产大于35Kg，70天以上配种。六、发情观察 1、夏季早班观察时间应在挤奶前进行。

土壤纤维素酶测定方法

纤维素酶一、试剂： 1）醋酸缓冲液（pH 5.5）：164.08 g无水醋酸钠（C2H3O2Na）溶于700 ml去离子水，用醋酸（C2H4O2）调节pH至5.5，用去离子水稀释至1 L。 2）CMC溶液（0.7%，w:v）：7 g羧甲基纤维素钠盐溶于1 L醋酸缓冲液，45℃下搅拌2 h，此溶液在4℃下可存放7天。 3）还原糖试剂：试剂A：16 g无水碳酸钠（Na2CO3）和0.9 g氰化钾（KCN）溶于去离子水并稀释至1 L。试剂B：0.5 g六氰铁钾（K4Fe（CN）6）溶于去离子水并稀释至1 L，贮于棕色瓶中。试剂C：1.5 g 硫酸铁铵（NH4SO4Fe2(SO4)2·H2O）、1 g十二烷基硫酸钠（C12H25O4SNa）和4.2 ml浓硫酸溶于50℃去离子水，冷却后稀释至1 L。 4）水合葡萄糖溶液：28 mg水合葡萄糖溶于少量去离子水中，并定容至1 L。二、仪器设备恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器，三角瓶三、操作步骤取10.00 g（耕地）或5.00 g（林地）新鲜土壤（＜2 mm）于100 ml三角瓶中，加15 ml 醋酸缓冲液和15 ml CMC溶液，盖上塞子，于50℃下培养24 h，过滤。同时做空白对照，但在培养结束时才加入15 ml CMC溶液，并迅速过滤。取2.00 ml滤液于50 ml容量瓶中，并用去离子水定容至刻度。吸取2.00 ml稀释液于20 ml试管中，加2.00 ml还原糖试剂A和2.00 ml还原糖试剂B，盖紧混匀，在100℃水浴中加热15 min 后，立即至于20℃水中冷却5 min。加10.00 ml还原糖试剂C，混匀，20℃下静置显色60 min，于690 nm波长处比色测定（要求在30 min内完成）。标准曲线：吸取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 ml水合葡萄糖溶液，用去离子水稀释至2 ml，同上加入还原糖试剂A、B、C后，比色测定还原糖含量。c) 空白：无土空白：不加土样，其余操作与样品试验相同，整个试验设置一个，重复一次。无基质空白：以等体积水代替基质，每个土样设置一个。四、结果计算土壤纤维素酶活性（μg·g-1·(24 h)-1）＝(C*V*f)/ dwt 式中C为样品的葡萄糖含量（μg·ml-1）；V为土壤溶液体积（30 ml）；f为稀释倍数（25）；

丙二醇

丙二醇丙二醇(PG)主要用来生产涂料和不饱和聚酯树脂(UPR),此外用作防冻剂,替代乙二醇用于防冻飞行器及在食品中作冷却剂等。另外还有大量丙二醇用于生产增塑剂和液压制动液,它还可用于非离子洗涤剂及在药物、化妆品、动物食品、烟草工业中作为保湿剂,丙二醇还是良好的溶剂可用于油墨和环氧树脂等方面用于制造不饱和聚酯树脂(用于涂料和玻璃纤维增强树脂)占27%;制造功能流体(防冻液、化冰剂、传热液)占20%;食品、药品和化妆品用途占20%;液体洗涤剂用途占17%;油漆和涂料领域占5%;烟草保湿剂中领域2%;其他用途,包括增塑剂,约占9%。其中丙二醇在化妆品和液体洗涤剂方面的应用增长仍很快,年增长率分别超过3%和315%,化妆品生产商将它用作个人保健品的润肤成分,包括止汗剂、除臭剂、防晒油、剃须膏和美容膏等。在液体洗涤剂中,丙二醇起到酶稳定剂和溶剂的作用。 2005年全球丙二醇需求量为150万t/a,不饱和聚酯树脂(UPR)依然是丙二醇的最大终端需求,在国外,不饱和聚酯树脂中添加的醇类物质基本采用丙二醇。美国丙二醇市场需求为:1999年3817万t;2000年3915万t;2004-2005年需求量约为4218万t和4312万t。丙二醇年增长率:1995-2002年超过214%;2005年后降至1%左右据统计，不饱和聚酯树酯产品的产量正以年10～20%的速度增长，这将会带动丙二醇的需求同比增长，所有投资项目集中在亚洲，尤其在中国，目前国内主要生产商主要集中在山东、河北、辽宁、安徽等地区。丙二醇硬脂酸酯主要用途：在日化工业中用于制造膏霜类化妆品，以使膏霜剂增加润滑性、细腻性和稳定性，并有保湿作用，如用于唇膏中。在制药工业用于制造乳剂、油膏剂、栓剂等药剂。丙二醇甲醚醋酸酯是性能优良的低毒高级工业溶剂，对极性和非极性的物质均有很强的溶解能力，适用于高档涂料、油墨各种聚合物的溶剂，包括氨基甲基酸酯、乙烯基、聚酯、纤维素醋酸酯、醇酸树脂、丙烯酸树脂、环氧树脂及硝化纤维素等。其中。丙二醇甲醚丙酸酯是涂料、油墨中最好的溶剂，适用于不饱和聚酯、聚氨酯类树脂、丙烯酸树脂、环氧树脂(树脂通常是指受热后有软化或熔融范围，软化时在外力作用下有流动倾向，常温下是固态、半固态，有时也可以是液态的有机聚合物。广义地讲，可以作为塑料制品加工原料的任何聚合物都称为树脂。)等丙二醇醚与乙二醇醚同属二元醇醚类溶剂，丙二醇醚对人体的毒害性能低于乙二醇醚类产品，可视为无毒或低微毒性产品,由于其分子结构中既有醚官能基又有羟基，因而它的溶解性能十分优异，又有合适的挥发性以及反应活性等特点而获得

盐水和乙二醇的特点

盐水和乙二醇的特点随着制冷行业的不断发展，市面上载冷剂种类五花八门，种类繁多，那么常用的载冷剂有什么呢？为大家逐个分析。目前市场上载冷剂可分为两大类，为传统载冷剂和新型载冷剂。所谓传统载冷剂是什么呢？传统载冷剂指的是目前市场较为常见的如：水、盐水、乙二醇或丙二醇溶液、二氯甲烷和三氯乙烯等这类载冷剂，这类载冷剂往往价格比较低廉，对设备要求不高。接下来我们就研究下传统载冷剂的特性。乙二醇(ethyleneglycol)又名"甘醇"、"1,2-亚乙基二醇"，简称EG。化学式为(CH2OH)2，是最简单的二元醇。乙二醇是无色无臭、有甜味液体，对动物有毒性，人类致死剂量约为1.6g/kg。乙二醇能与水、丙酮互溶，但在醚类中溶解度较小。用作溶剂、防冻剂以及合成涤纶的原料。乙二醇的高聚物聚乙二醇(PEG)是一种相转移催化剂，也用于细胞融合;其硝酸酯是一种炸药。盐水，常指海水或普通盐(NaCl)溶液。通常情况下海水中溶解的盐含量为35000mg/L(3.5%)，其中包括20000mg/L的氯化物，主要是普通盐类，另外也存在其他种盐水，其中一些含溶解盐300000mg/L。那么这两者作为载冷剂在制冷行业表现如何呢？其实作为传统载冷剂都有一个通病那就是腐蚀性，盐水和乙二醇对管路及设备都具有腐蚀性，很多企业在长期使用盐水或者乙二醇之后，管路锈蚀情况非常严重，不得不清洗更换管路，腐蚀是一大难题。还有一方面便是温域狭窄，在一些特定条件下不能满足其温度需要。所以针对这些情况新型载冷剂应运而生，无腐蚀、无毒害、温域宽广，解决了传统载冷剂不能解决的问题。针对载冷剂还是推荐无腐蚀、无毒害、温域宽广的新型载冷剂冰河冷媒。

土壤纤维素酶活性测定(3,5- 二硝基水杨酸比色法)

土壤纤维素酶活性测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、原理纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的还原糖与?3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。二、试剂 1）甲苯 2）1%羧甲基纤维素溶液：1g羧甲基纤维素钠，用50%的乙醇溶至100ml。 3）pH5.5醋酸盐缓冲液： 0.2mol/L醋酸溶液11.55ml95%冰醋酸溶至1L； 0.2mol/L醋酸钠溶液16.4gC2H3O2Na或27.22gC2H3O2Na.3H2O溶至1L；取11ml0.2mol/L醋酸溶液和88ml0.2mol/L醋酸钠溶液混匀即成PH5.5醋酸盐缓冲液。4）3,5-二硝基水杨酸溶液：称1.25g二硝基水杨酸，溶于50ml2mol/LNaOH和125ml 水中，再加75g酒石酸钾钠，用水稀释至250ml（保存期不过7天）。 5）葡萄糖标准液（1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。三、操作步骤葡萄糖标准曲线：分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL 于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS溶液3ml混匀，于沸腾水浴中加热5min，

奶牛产后保健程序

产后监护管理程序体温升高 1. 正常产犊 (1)查找是什么原因引起温度升高的。 (2)检查乳房是否有乳房炎(和正常牛只分开挤奶、采样做细菌培养，尾根2ml垂体后叶素注射，用40～50度温水擦乳房，用广谱抗生素、美达佳、钙、碳酸氢钠、糖盐水治疗，并根据实验室结果选择对细菌敏感的抗生素治疗)。 (3)如果查不到原因(无名热)：采用子宫收缩药、美达佳、广谱抗生素(辉瑞速解灵、易速达)、补液治疗。体温正常后还要巩固1～2天。 2. 非正常产犊 (1)胎衣不下：a.产犊后12～18h，美达佳、广谱抗生素(辉瑞速解灵、易速达)、抗炎药、退热的，气温32度以上的，第二天注射美达佳、广谱抗生素(辉瑞速解灵、易速达)、抗炎药、退热的、补液、碳酸氢钠治疗。 (2)难产、胎儿过大、双胞胎、助产过度：新产牛疼痛感表现：踢腹，收腹，呻吟，烦躁不安，眼睛无神，拱背。 (3)观察有无恶露排出(没有恶露用PG（氯前列烯醇）5ml，雌二醇2mg注射;检查子宫有无破裂。使用广谱抗生素(辉瑞速解灵、易速达)、补液、碳酸氢钠、美达佳治疗)。体温正常 1. 正常产犊：连续10天体温监控，如果体温升高的按体温升高方案处理。 2. 非正常产犊：第一天用子宫收缩药注射，第2～10天连续体温监控，观察牛只精神，食欲变化。体温正常食欲废绝(检查代谢病) 1. 正常产犊：a.检查酮体，补充葡萄糖，糖皮质激素。b.检查消化系统，胃肠蠕动音弱(健胃药灌服，促反刍液、碳酸氢钠、糖钙治疗)，皱胃变位手术治疗，补充能量。 2. 非正常产犊：(难产、胎衣不下、产道拉伤，双胞胎)头孢噻呋(海正)25ml，连续3天，有疼痛现象非甾体药物肌注。产后瘫痪采血样检测Ca、P水平，根据情况补充钙，效果不明显的，8h后重复一次，硝酸士的宁25ml百会穴注射，或者看哪个牛肢体无力就在那个牛肢体皮下注射。产后保健方法 1. 产后汤灌敷(30kg)：丙二醇300ml，红糖500g，酵母20g，益母草膏500g，食盐30g。温度20～30度。这样能迅速补充能量、填充腹腔的空虚减少四胃疾病的发生。 2. 补钙(博威钙)的投服：产后投服一枚，体质差牛只在12小时后重复投1次 3. 对产道损伤、难产、助产、胎衣不下，双胞胎牛只每天1次头孢噻呋(海正)25ml，连续3天 4. 有疼痛的牛只注射非甾体药物(美达佳)，3天1次。

羧甲基纤维素酶测定原理

纤维素酶活力的测定一、目的学习和掌握3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定纤维素酶活力的原理和方法，了解纤维素酶的作用特性。二、原理纤维素酶是一种多组分酶，包括C1 酶、CX 酶和β-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素，CX 酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖，β-葡萄糖苷酶的作用是将纤维寡糖水解成葡萄糖。纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在540nm 波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料（1）纤维素酶制剂 500mg （2）新华定量滤纸 50mg / 份× 4 （3）脱脂棉花 50mg / 份× 4 （4）羧甲基纤维素钠（CMC） 510mg （5）水杨酸苷 500mg 2．主要仪器（1）722 型或其他型号的可见分光光度计（2）恒温水浴2 台（3）沸水浴锅（4）电炉子（5）剪刀（6）万分之一分析天平（7）恒温干燥箱（8）冰箱（9）试管架（10）胶头滴管（11）具塞刻度试管20mL×24 （12）移液管或加液器0.5 mL×3；2mL×7 （13）容量瓶100 mL×6；1000 mL×3 （14）量筒50 mL×2；100 mL×1；500 mL×1 （15）烧杯100 mL×6；500mL×3；1 000 mL×1 3．试剂（均为分析纯）

（1）浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液将葡萄糖在恒温干燥箱中105℃下干燥至恒重，准确称取100mg 于100mL 小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容至100mL，充分混匀。4℃冰箱中保存（可用12～15 天）。（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）溶液准确称取DNS 6.3g 于500mL 大烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入2mol/L NaOH 溶液262mL，再加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠（C4H4O6KNa · 4H2O，MW=282.22）的热水溶液中，再加5g结晶酚（C6H5OH，MW=94.11）和5g无水亚硫酸钠（Na2SO3，MW=126.04），搅拌溶解，冷却后移入1 000mL 容量瓶中用蒸馏水定容至1 000mL，充分混匀。贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。（3）0.05 mol/L pH4.5 的柠檬酸缓冲液A 液（0.1 mol/L 柠檬酸溶液）：准确称取C6H8O7 · H2O （MW=210.14）21.014g 于500mL大烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，移入1 000mL 容量瓶中用蒸馏水定容至1 000mL，充分混匀。4℃冰箱中保存备用。

纤维素酶活力测定

山东大学实验报告2011年4月20日姓名张行润系年级2009级生科4班学号200900140177 同组者于潜科目生物化学实验题目纤维素酶活力测定—3,5-二硝基水杨酸法仪器编号105 一、实验目的 1、学会并掌握用3、5—二硝基水杨酸法测定酶活力方法 2、巩固使用分光光度计二、实验原理纤维素酶是一种多组分酶，包括C1酶、CX酶和β-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素，CX酶的作用是将无定形纤维素继续水解成纤维寡糖，β-葡萄糖苷酶的作用是将纤维寡糖水解成葡萄糖。纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成棕红色的氨基化合物，在550nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。酶活力（enzyme activity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。本实验中酶活力定义：1mg酶每分钟水解生成1微克葡萄糖的量定义为一个活力单位。由此定义我们可以计算本实验中的纤维素酶活力。三、实验器材（1）722型分光光度计（2）恒温水浴（3）沸水浴锅（4）电炉子（5）剪刀（6）分析天平（7）试管架（8）胶头滴管（9）具塞比色管（25mL×10）（10）移液管（2mL；5mL）（11）烧杯（500mL×3）（12）洗耳球四、实验材料（1）纤维素酶：0.05g酶溶解定容至50ml，取1ml再定容至100ml待测（用PH4.5乙酸-乙酸钠缓冲液配制）；（2）3、5—二硝基水杨酸显色液；（3）0．5%羧甲基纤维素钠水溶液（CMC）：用0.1mol/LPH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液配置；（4）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）；（5）蒸馏水。五、实验操作 1.空白管的测定：

奶牛临床型乳房炎的类型及治疗

奶牛临床型乳房炎类型及防治技术部赖利兄一、前言：乳房炎是奶牛泌乳期发病率最高的一种疾病，奶牛乳房炎是一种世界性疾病，据统计，全世界奶牛乳房炎的发病率在48%，我国奶牛奶牛乳房炎的发病率较高，在50-70%。美国奶牛乳房炎的发病率在16-27%，每年造成的经济损失在25亿美元以上。二、奶牛临床型乳房炎主要的几种类型 1、坏疽性乳房炎乳房出现紫斑，肿胀，发热现象，触摸乳房有痛感，乳上淋巴结肿胀，产奶量急剧下降，严重者停奶，乳汁内含浓汁或血液，病牛精神沉郁，食欲减退，体温升高40℃以上，倒地不起，乳房肿胀、发热、呈不规则的现象。严重的溶血性金黄色葡萄球菌感染为主。防治: 5%葡萄糖溶液1000ml+头孢噻呋钠静注。每日2次。连用5-7天。乳房的每个乳区内注入头孢噻呋钠20ml。每日2次，连用5-7天。肌注安乃近:一次4-5支，每日一次。连用5-7天。 10%葡萄糖溶液1000ml+V C 3支+地米2支静注。每日1次，连用5-7天。 2、急性性乳房炎奶牛开始有乳房肿胀、发热、不规则现象，乳汁内含有絮片或凝块，触摸乳房有痛感，乳上淋巴结肿胀，产奶量急剧下降，病牛精神沉郁，

食欲减退，体温升高39.5℃以上，倒地不起，乳房肿胀、发热。一般是嗜酸性金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的混合感染。防治： 5%葡萄糖溶液1000ml+头孢噻呋钠静注。每日2次。连用5-7天。乳房的患病乳区内注入头孢噻呋钠20ml。每日2次，连用5-7天。公英散250g灌服，每日一次。连用7天为一个疗程，视痊愈情况，可再做一个疗程。 3、产后水肿性乳房炎奶牛产后，乳房肿胀，乳头红肿，乳房发热，初乳出现脓汁或血乳，奶牛体温升高39.5℃以上，食欲不振。一般是乳房链球菌和大肠杆菌的混合感染。防治： 5%葡萄糖溶液1000ml+头孢噻呋钠静注。每日2次。连用5-7天。鱼石紫涂擦乳房，每日1次。连用5-7天。公英散250g灌服，每日一次。连用7天为一个疗程，视痊愈情况，可再做一个疗程。八正散250g灌服，每日一次。连用7天为一个疗程。 4、慢性乳房炎奶牛乳房内有肿块，发硬，乳房有肿胀、不规则现象，乳汁内含有絮片、凝块，乳汁变稀薄，奶牛体温正常，食欲正常。产奶量逐步下降。一般是产酸克雷伯氏杆菌、大肠杆菌的混合感染。防治

乙二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丁二醇发展状况

全国玉米深加工产业交流展示会－论文集菌１，３嚣二薅产量３６９／Ｌ，质量转化率７０％。通过了江苏省科技厅鉴定。本研究起始原料淀粉，经糖化、甘油发酵、发酵液除蘸体酵母、含甘油发酵液配料灭菌。最ｐ进入１，３丙二醇发酵，比用提取甘油后发酵，畿节约粮耗和成本，扣合发酵液中甘油每吨耗粮２．５吨。四、１。４丁二醇（ｂｕｒｙｌｅｎｅｇｌｙｃ０１）２００３年全球１，４一丁二醇生产能力超过１５０万吨／年。主要用于工程塑料、合成纤维、制药等。１，４丁二醇的生产方法，几经发展，从过去炔醛法、苯法．一直到ＤａｒｙＭｃｋｅｅ公司开发的顺酐酯化加氢法，因采用廉价的顺酐为原料，是国际公认投资费用低，最有竞争力的方法。其工艺第一步是顺酐与乙醇进行酯化反应生成马来酸单乙酯；第二步单乙酯在离了交换树脂催化剂作用下得到双醮；第三步是马来酸二乙酯加氢，先是成丁二酸二乙酯，然后再氢解成１，４一丁二醇。我国目前用合成法生产１，４丁二醇原有装置并不少，但规模较小，采用以乙炔和甲醛为原料的Ｒｅｐｐｅ法工艺，缺乏竞争力。山东东营东港化工股份有限公闭，引进ＤａｒｙＭｃｋｅｅ公司的顺酐酯化加氢技术，建成１万吨／年工业装置，并于透期投产。随着下游产晶的快速发展，１，４丁二醇缺明日益扩大，建设大型的１，４丁二醇企业是国内的发展趋向。２００３年出酉三维集团引进美国ＩＳＰ技术，建成年产２５０００吨１，４丁二醇装置。２００４年１０月中国蓝星集团决定采用英国戴维公司技术，将在天津建设年产ｌ，４丁二醇５．５万吨项目。图前１，４丁二醇价格（纯度９９．５％）。进口产品每吨１８０００—１８２００元（墨本产）、２０５００元（德国产）。未来５年全球１，４一丁二醇需求的年均增长率为４５％。２０００年我国１，４一Ｔ二簿ＢＤＯ需求量为４．１万吨．其中对苯二甲酸丁二醇酯（ＰＢ∞为１．５万吨，聚氨酯０．６万吨、卜丁内酯０。６万吨、圜氢呋喃０。７５万吨、其他用途０．６５万吨。２００４年中国ＢＤＯ消费量就达到１２．３万ｔ，其中进口９万多ｔ。２００５年国内ＢＤＯ市场将有ｌＯ万吨左右的缺口；２００５。２００９年，我国ＢＤＯ需求年均增长率高达１５％，到２００９年ＢＤＯ需求量将达到２５万吨以上。届时我国将超过日本成为豫洲最大的ＢＤＯ消费圈。预计到２００９年我国１，４一丁二醇生产能力将达到２７。６万吨，以开工率９０％计，产量可基本满足国内市场需求。 ?２６５?

纤维素CMC酶、FPA酶和半纤维素酶测定

纤维素CMC酶、FPA酶和半纤维素酶测定 1.纤维素CMC酶 1.0标题用3.5一二硝基水杨酸法测定纤维素CMC酶活性单位。 2.0范围生产分析和质量控制部门适用。 3.0原理纤维素CMC酶（EC3.2.1.4）水解羧基纤维素分子中β－1.4葡萄糖苷键,释放出的还原糖(以葡萄糖计)与3.5二硝基水杨酸(DNS)反应,产生颜色变化,这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。 4.0试剂 4.1无水醋酸钠(分析纯) 4.2冰醋酸(分析纯) 4.3 3.5－二硝基水杨酸 4.4无水葡萄糖 4.5四水酒石酸钾钠(分析纯) 4.6氢氧化钠(分析纯) 4.7重蒸苯酚(分析纯) 4.8无水亚硫酸钠(分析纯) 4.9叠氮化钠(分析纯) 4.10羧甲基纤维素钠 5.0仪器 5.1水浴锅(恒温)50±1℃ 5.2电热干燥箱80±1℃ 5.3 722型分光光度机计 5.4分析天平感量0.1㎎ 5.5一级玻璃制品 5.6电冰箱 6．0试剂的准备 6．1乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH=4.8）溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。溶液B：称取8.2g醋酸钠，溶解后容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。以A：B=4：6的比例混合，低温冷藏备用。 6.2 DNS试剂: 溶液A:称分析纯NaOH 104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml热水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。将A、B溶液混合，定容至5000ml，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。 6.3 CMC溶液：用羧甲基纤维素钠（CMC）以PH4.8醋酸缓冲液配成1%的溶液。 7．0标准曲线制作： 7.1无水葡萄糖80℃烘干至恒重。 7.2准确称取1.000g溶于1000ml水中，加10mg叠氮化钠防腐，4℃冷藏备用。 7.3标准葡萄糖曲线制作

牛发烧类型及处理

牛发烧类型及处理? 一、牛发烧的类型 1、持续不退的高烧：指持续数日高烧不退、体温日差在1℃以内的高热，称为稽留热。多见于牛瘤，大叶性肺炎，犊牛副伤寒和牛败血症等。 2、呼吸困难性发烧：牛发烧后伴有呼吸困难，口腔黏膜发紫，心跳过速，表明病牛心肺功能受损，是一种病理性呼吸障碍所致。如肺原性呼吸困难、心原性呼吸困难及中毒性呼吸困难等，多为病危信号，急需从速救治，不可久托。 3、爬卧不起的高烧：牛突然增加运动量，连续负重，全身出汗，体温升高，可引起心肺机能障碍。病牛肌肉痛疼，四肢颤抖，常卧地不起，心力衰竭而死。 4、牛泰氏焦虫病和犊牛副伤寒等病，体温也可升高到40℃以上。 5、神志不清的发烧：是中枢神经严重抑制的一种症状，表明病情严重，已影响到脑部功能。如治疗不及时可导致昏迷。多见于脑炎濒死期、肝昏迷及严重的各种中毒性疾病等。 6、尿量减少性发烧：如发烧病牛尿量减少，常为牛肾炎。肾脏有痛疼反应，叩击肾区痛疼不安，常出现水肿，严重时可出现尿闭，以至尿毒症等，多有恶心呕吐病状，表明肾脏已受到损害，病情严重。 7、消瘦性发烧：有些病牛发烧后，伴有慢性进行性消瘦或异常消瘦，明显揭示牛体内有病理性较重的病变，病情严重。比较典型的是牛肺疫和牛结核病。

8、体温驰张性发烧：牛体温升高后，日温差超过1℃以上，但不回落到正常温度，常见于牛支气管肺炎，脊髓炎等。 9、发热间歇性发烧：病牛发热期后降至常温，但以后又重复出现发烧。即有热期和无热期交替出现，中间有间歇，如牛焦虫病等。 10、贫血性发烧：贫血性发烧即为黄胆病状疾病，体温高，可视黏膜有黄染排出血、红蛋白尿等病状。如牛的焦虫病、牛巴氏焦虫病、牛钩端螺旋体病，牛弗氏焦虫病，牛边虫病、牛泰氏焦虫病等。 11、皮肤病性发烧：发烧病牛全身长有疥疮，皮肤出现蚕豆大至核桃大结节。肉眼可见，用手能摸到。如牛块状皮肤病，俗称牛结节性疹病。 12、神经症状性发烧：是一种有神经症状的急性传染病，主要表现为脑脊髓炎，如牛李氏杆菌病，日射病（中暑）。 13、皮肤肿胀性发烧：牛在皮肤不同部位肌肉发生水肿、气肿或肿胀，伴有发烧的症状，如牛流行性感冒，牛恶性水肿，气肿疽，牛巴氏杆菌病（牛出血性败血病）、炭疽病等。 14、口腔黏膜病变性发烧：牛突然发病后发烧，口腔等部黏膜发生糜烂、烂斑、溃疡等病变，伴有发烧，如牛瘟、口蹄疫、牛恶性卡他热等。 15、非感染性发烧：

奶牛产前产后护理方案

奶牛产前产后的护理方案北京邦士富生物科技有限公司技术部赖利兄我们发现，如果不注重奶牛产前产后饲养管理的实施，或者实施了错误的护理方法，奶牛的产科和代谢类疾病就会接踵而至，例如，乳房炎，乳房恶性水肿，乳热症（产后瘫痪），酮血病，酸中毒，瘤胃积食，胎衣不下，真胃移位，真胃积食，真胃炎，奶牛产后综合症等，轻则花费巨大的治疗费用，造成奶牛产奶量下降，影响经济效益，重则治疗不愈，不得不淘汰奶牛。为此，我们从饲养管理和预防措施上，提出一些产前产后的护理方法来避免和减少上述问题的发生，以保证奶牛产前产后正常的生理和代谢过程。产犊前的护理方法 1、在预产期前21天，要增加精补料的营养水平，减少精补料的喂量，每天不超过4kg，多喂优质牧草。可预防真胃移位，真胃积食，真胃炎等 2、不能喂块根、酒糟、豆腐渣等多汁类饲料。 3、产前不要再饲喂玉米青贮饲料。 4、不能饲喂苜蓿干草。 5、产犊前21天，加强运动，每天至少运动6小时。可预防和减少胎衣不下。 6、产犊前21天，奶牛的日粮中，盐、钙、磷的水平不能太高，否则会引起奶牛的乳热症（产后瘫痪）。

7、产前21天，日粮中增加维生素和微量元素的浓度，另外添加反刍动物酵母培养物。 8、要把产前21天的奶牛与其它干奶牛隔开，有条件的牧场要提前把临产奶牛放进单独的产房，注意观察奶牛的情况，一旦发现异常，及时处理。 9、产前5天到产犊，最好停喂或少喂精补料。产犊后的护理方法 1、立即给分娩后的奶牛披上薄棉被或其他覆盖物，预防感冒。 2、产房或棚圈应封闭，防止冷风直接吹在奶牛身上。 3、清理地面的胎衣和污物，然后进行环境喷雾消毒。 4、立即用聚维酮碘给奶牛的外阴清洗，消毒。 5、产后给奶牛补液，消炎，止血。方法：（1）5%葡萄糖盐水1500ml+头孢噻呋钠和甲磺酸培氟沙星混合，一次静注。（2）（10ml）安络血5支一次肌注。 6、产后4-5天内，每天给奶牛饮一次营养粥。配方是：麸皮+红塘 +扶正解毒散250g，用10-15kg开水冲开，候温饮用。连用5日。 7、产后3天内，不要饲喂精补料，3天后，根据奶牛不断上升的产奶量，逐步添加精补料，但每天不超过。 8、产后给奶牛多喂一些优质粗饲料。例如，羊草，苜蓿干草，优质青贮。

纤维素酶活力的测定

纤维素酶活力的测定 1.纤维素酶活力单位定义在37?,pH值为5.5的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u. 2.测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖.具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应.反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中纤维素酶的活力成正比.因此,通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中纤维素酶的活力. 3.试剂与溶液除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合GB/T6682中规定的三级水. 3.1葡糖糖溶液,c(C6H12O6)为10.0mg/ml: 称取无水葡萄糖1.000g,加水溶解,定容至100ml. 3.2 乙酸溶液,c(CH3COOH)为0.1mol/L: 吸取冰乙酸0.60ml.加水溶解,定容至100ml. 3.3 乙酸钠溶液,c(CH3COONa)为0.1mol/L: 称取三水乙酸钠1.36g.加水溶解,定容至100ml. 3.4 氢氧化钠溶液,c(NaOH)为200g/L: 称取氢氧化钠20.0g.加水溶解,定容至100ml. 3.5 乙酸——乙酸钠缓冲溶液,c(CH3COOH—CH3COONa)为0.1mol/L,pH值为5.5: 称取三水乙酸钠23.14g,加入冰乙酸1.70ml.再加水溶解,定容至2000ml.测定溶液的pH值.如果pH值偏离5.5,再用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节至 5.5. 3.6 羧甲基纤维素钠溶液:0.8%(w/v)

纤维素酶活力测定方法_张瑞萍

测试与标准纤维素酶活力测定方法张瑞萍南通工学院(226007) 摘　要　用DN S 为显色剂,分别以滤纸和CM C 为底物,以滤纸糖酶活性(FP A )和羧甲基纤维素酶活性(CM C a se )表征纤维素酶活力。确定酶活测定用波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DN S 等共热的反应物;比较了两种底物的酶活力测定方法。结果表明,CM C a se 比FP A 高,说明酶对水溶性底物有较高的活力,也表明吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响;对于不同牌号的纤维素酶,织物的酶减量率与CM C 酶活力关系密切。叙　词:　测试　纤维素酶　活度中图分类号:　TS197 纤维素酶是多组分复合物,各组分的底物专一性不同。纤维素酶作用的底物比较复杂,反应产物不同,致使纤维素酶活力测定方法很多,各国的方法亦不统一。我们选择滤纸、CM C 为底物,原理系利用纤维素酶催化水解纤维素,产生纤维多糖、二糖及葡萄糖等还原糖,与显色剂反应,求出还原糖的浓度,间接求出酶的活力。由不同底物测得的酶活力分别称作FPA (滤纸糖酶活力)和CM C ase (羧甲基纤维素酶酶活力)。本文分析确定酶活力测定的主要条件,比较两种底物的酶活力测定方法的结果,探讨纤维素酶活力与织物减量率的关系,为酶在生产中的利用提供依据。 1　实验方法 1.1　化学药品、材料纤维素酶(工业品),DNS 试剂(自配),冰醋酸,醋酸钠,葡萄糖(均为分析纯),滤纸(定性),羧甲基纤维素酶CM C (试剂级),纯棉针织物半制品(南通针织厂)。 1.2　FPA 滤纸酶活力和CMC 酶活力的测定取适当稀释的酶液,分别以滤纸或1%的CM C 溶液为底物,于50℃恒温水解反应1h ;然后加入显色剂DNS,沸水浴中煮沸5min;再加入蒸馏水,于530nm 测定吸光度OD 值。酶活可定义为:每毫升酶液1min 产生1mg 葡萄糖为一个单位( )。 1.3　针织物酶减量率的测定将酶处理前后的试样在烘箱中105℃烘至恒重。减量率= 处理前织物干重-处理后织物干重处理前织物干重 ×100% 2　结果与讨论 2.1　显色剂的选择选用DNS ,在碱性条件下与还原糖反应,生成有色化合物,用分光光度计比色,确定低分子糖含量。碱性条件下DNS 与还原糖共热反应如下: O 2N OH O 2N CO OH +还原糖　H 2N OH CO OH O 2N DN S(黄色) 3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色) 生成的棕红色氨基化合物系比色法测定基础。2.2　最大吸收波长的确定选取490～580nm 波长对显色液进行比色。由图1可知,不同浓度的葡萄糖溶液在490～500nm 处有最大吸收,DNS 在此波长下也有较明显的吸收。为了排除DNS 的干扰,选择在波长 530nm 处进行测定,此波长下的葡萄糖吸收虽有所降低,然而符合“吸收最大、干扰最小”的原则。图1　D NS 与葡萄糖的吸收曲线 2.3　底物及酶本身含糖量的影响在实验过程中发现,底物特别是滤纸,也含有一定的还原糖,在碱性的DNS 试剂中也会发色。而且,试验所用的纤维素酶是一种工业级的复合酶,品种不同,其本身含糖量也不同。为了排除这类还原糖的干扰,参比溶液取失活后的酶、底物、DNS 等共热的反应物。2.4　葡萄糖标准曲线用不同浓度的葡萄糖溶液作为标准溶液,与DNS 共热反应显色后,测出其吸光度OD 值(见图2)。标准曲线的线性相关系数R 2为0.9991(见图2),线性相当好,可以用于酶活力的测定。 38 印　染(2002No .8) www .cdfn .com .cn

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