侧孢短芽孢杆菌S629产抗菌物质的分离纯化及部分特性的研究
万方数据
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７６
河北农业大学学报第３３卷
工作台上放置２ｈ；置于３７℃下进行培养１２ｈ，用游标卡尺测量抑菌圈直径（ｍｍ）。１．３．３抗菌物质部分特性的研究
（１）抗菌物质的温度敏感性。取等量样品，分别在２０、６０、８０、１００和１２１℃保持２０ｒａｉｎ，用冰冷却后做抑菌试验，按１．３．２方法检测活性。
（２）ｐＨ稳定性研究：取等量样品，分别用
１ｍｏｌ／ＬＨＣＩ和１ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＯＨ分别调ｐＨ值２～
１２，３７℃下温育１ｈ，做抑菌试验，按１．３．２方法检测活性。
（３）抑菌谱的研究。选取有代表性的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌做指示菌，取样品按１．３．２方法进行抑菌试验。２
结果与分析
２．１抗菌物质的浓缩与初步提纯
抗菌物质发酵液经旋转蒸发仪减压分馏浓缩
后，抑菌直径为２０．４１ｍｍ，比初始发酵的上清液的抑菌圈直径扩大了１９．５％。之后经硫酸铵沉淀，除去的主要是杂蛋白。
２．２柱层析及纯度鉴定
经减压分馏浓缩，硫酸铵盐析，脱盐后，用ＤＥ－
ＡＥ—ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ
５２纤维素离子交换柱层析进行分离，
结果显示，第１个蛋白峰表现出抑菌活性，其他蛋白峰无抑菌活性（见图１）。抗菌物质的洗脱离子强度在０．１＂－－０．１８ｍｏｌ／ＬＮａＣＩ范围，所得活性部分进一步经ＳｅｐｈａｅｒｙｌＳ－１００分子筛层析，得到１个蛋白吸收峰（见图２），抑菌活性峰与蛋白峰有较好的重合。浓缩后，经毛细管电泳鉴定其纯度，为单一吸收峰（见图３）。对初始发酵的上清液，减压分馏浓缩液，盐析沉淀液，离子交换层析活性部分，分子筛层析活性部分，分别测定总活力，结果见图４。
２０
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管号
ＴｕｂｅＮｕｍｂｅｒ
图１￥６２—９产抗菌物质的ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ５２层析图谱
Ｆｉｇ．１
ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｐａｔｔｅｒｎｏｆ
ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｓａｂｓｔａｎｅｅ
ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙＳ６２－９
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管号
ＴｕｂｅＮｕｍｂｅｒ
图２￥６２－９产抗菌物质的ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００层析图谱
Ｆｉｇ．２
ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ｐａｔｔｅｒｎ
ｏｆ
ａｎｔｉｍｉｃｒｂｉａｌ
ｓｎｂｓｔａｎｃｅ
ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ￥６２－９
Ｍｉｎｕｔｅｒ
图３￥６２－９产抗菌物质毛细管区带电泳鉴定图谱
Ｆｉｇ．３
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｐａｔｔｅｒｎ
ｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｓｕｂｓｔａｎｃｅ
ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ￥６２—９ｂｙｕｓｉｎｇｃａｐｉｌｌａｒｙ
１．初始七清液，２．分馏液Ｉ３．盐析沉淀；４．透析脱盐；５．ＤＥＡＥ－ｃｅｌＩｕｌｏｓｅ５２合并液１６．Ｓ－１００合并液．
图４各纯化步骤抑菌效果
Ｆｉｇ．４
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｉｏｎｏｆ
ｅｖｅｒｙ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｐｈａｓｅ
２．３抗菌物质的温度敏感性
由图５可知，在２０～１００℃条件下保温２０
ｒａｉｎ
抗菌物质的抑菌活性没有太大变化，在１００℃以上其活性略有下降，１２１℃时抑菌直径与２０℃时的相比仅下降了１１．０８％，结果表明该抑菌物质热稳定性强，在微生物学上常用的杀菌温度是１２１℃，在这个温度下该抗菌物质仍能保持良好的抑菌活性。
８７６５４
３２ｌＯＯＯＯ００ＯＯＯ
万方数据
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精馏分离的特点
精馏是在汽液两相(或汽液液)逐级(或连续)流动和接触时进行穿越界面的质量和热量传递，并实现混合物分离纯化的化工单元操作过程。精馏技术已经过100多年的发展，并成为目前应用最广泛的一种分离技术，它具有如下特点： (1)通过精馏分离可以直接获得所需要的产品，而其它一些分离方法，如吸收、萃取等，由于有外加的溶剂，需进一步使所提取的组分与外加组分再行分离，因而精馏操作流程通常较为简单。 (2)精馏分离的适用范围广，它不仅可以分离液体混合物，而且可用于气态或固态混合物的分离。例如，可将空气加压液化，再用精馏方法获得氧、氮等产品；再如，脂肪酸的混合物，可用加热使其熔化，并在减压下建立汽液两相系统，用精馏方法进行分离。 (3)精馏过程适用于各种浓度混合物的分离，而像吸收、萃取、结晶、膜分离等操作，只有当被提取组分浓度较低时才比较经济。 (4)精馏操作是通过对混合液加热建立汽液两相体系的，所得到的汽相还需要再冷凝液化。因此，精馏操作耗能较大。 (5)精馏技术经过多年的发展及广泛的使用，目前已具有相当成熟的工程设计经验与一定的基础理论研究，并发展出了以精馏为基础的许多新型复合传质分离技术。 (6)精馏过程操作简单，易于工程化。即可连续操作，也可间歇操作，可应用于各种批量的操作中。 因而在直到现在，在考虑混分物分离和产品精制时，精馏仍为首选方案，特别是在精细化学品的生产时更为明显。 精细化学品的生产历来受到国内外的重视，在许多欧美发达国家，均将精细化工作为重要、优先的发展方向。我国长期以来，也将精细化工作为重点发展的产业之一。精细化工是现代化学工业的重要组成部分，也是衡量一个国家化工水平高低的重要依据。目前发达国家的精细化工率已超过60％，有的甚至超过80％，而我国只有40％左右。造成我国精细化工相对落后的原因很多，这其中技术的落后是重要原因之一。 精馏技术广泛应用于各类精细化学品的生产中，它不仅用于最终产品的精制，还用于原料的提纯、所用溶媒(剂)和废料的回收等各方面，而且在某些精细化学品的生产中，还直接应参与反应过程。一般而言，精馏作为常用的分离方法，占整个化工生产能耗的大部分，有的比例超过了80％以上，因而提高精馏水平，对于降低化工过程的能耗，提高生产效率有重要意义。同时先进的精馏技术，还可大幅度提高产品的质量，减少生产过程中的废品率，提高原料的利用率，并可极大促进绿色精细化工的发展。 我国精馏技术的研究水平已接近或达到国际先进水平，许多先进技术也在大型化工中得到了应用，但在精细化工生产中，所使用的精馏技术大都很原始，技术含量低。这一方面是因为精细化工生产的多样性与复杂性造成的，但更重要的是因为精馏作为分离手段，还没有引起足够的重视，往往只是作为一个附属过程，而且由于精细化工的生产特点，企业也不重
紫茎泽兰致病型链格孢菌毒素(TeA)在病原体侵染寄主过程中的作用机制研究
紫茎泽兰致病型链格孢菌毒素（TeA）在病原体侵染寄主过程中 的作用机制研究 链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissler)是自然界三大致病植物真菌之一。来自外来恶性杂草紫茎泽兰(Ageratina adenophora)致病型链格孢菌能够产生一种毒素——细交链格孢菌酮酸(TeA),该毒素在较低的浓度下能够迅速杀死紫茎泽兰以及其它多数单双子叶杂草,具有开发成生物除草剂的潜力。 TeA杀草的主要机理是与光系统Ⅱ的D1蛋白结合,抑制光系统Ⅱ受体侧QA 到QB之间光合电子的传递,引起过能量化,导致在叶绿体中活性氧爆发,引起叶绿体结构破坏,大量活性氧扩散到整个细胞中,进一步引起膜脂过氧化、细胞膜破裂、细胞器解体、细胞核浓缩和DNA断裂,导致细胞死亡和组织坏死,最终杀死杂草。本研究利用通过限制性内切酶介导整合法(REMI)获得的弱毒突变体001和野生型为研究材料来阐明TeA在病原体入侵寄主叶片阶段的作用机理。 利用野生型和缺毒突变体(菌丝体)为材料接种寄主紫茎泽兰叶片,突变体接种时结合加入TeA.研究结果表明TeA是链格孢菌病原体侵染寄主引起病害的主要毒理因子。来自Imaging-PAM结果显示:野生型菌丝接种寄主紫茎泽兰叶片1 8h后,植物的PSII活性降低,36小时,病害开始出现;而对应时间下,突变体菌丝处理紫茎泽兰叶片并没有引起明显的PSII活性降低和病害出现,但在突变体菌丝中加入一定浓度的TeA后可以得到与野生型相似的结果,突变体的致病能力得到一定程度的恢复。 同时,添加毒素也能恢复部分突变体菌丝扩展的能力。通过监测孢子萌发和生长、附着胞形成与否、菌丝在细胞和叶片中生长和扩散情况、病斑产生情况,发现毒素在病原体侵入叶片组织和菌丝扩张、病害的发展过程中都发挥作用,是
芽孢杆菌属
第一、芽孢杆菌属的分类 一、芽孢杆菌属微生物特性 芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，需氧或兼性厌氧，产生芽孢，大多数无荚膜，以周生鞭毛运动。细胞呈直杆状，常以成对或链状排列，具圆端或方端。由于芽孢杆菌属的微生物能够形成芽孢的特性使得他们能够抵抗各种极端环境如高温、极酸、极盐，而且对各种杀菌剂具有抵抗力，因此，他们在各种自然环境中都能被分离到。芽孢杆菌属微生物具有共同的特性，都能够形成带有芽孢的生物膜，且代谢产物相似，都能产生环肽、抗生素、酸（多聚谷氨酸、聚天冬氨酸）和聚多糖等。 二、芽孢杆菌的分类方法 分类学是研究生物分类的原理、方法和实践的科学，包括分类、命名、描述和鉴定等内容。目前细菌分类主要是采取多项分类技术。多项分类的概念是Colwell于1968年提出的，原理是利用微生物多种不同的信息，包括表型、基因型和系统发育的信息，综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。概括的讲，多项分类是传统的表型分类、数值分类和分子分类等方法的综合应用，因而可以更客观地反映生物间的系统进化关系。目前，多项分类法被认为是研究各级分类最有效的手段，可用于所有水平上分类单位的描述和定义。 2、1经典分类（表型特征） 表型是由于基因和环境因素相互作用引起的，在细胞、器官和整体水平上能检测和观察到的特征。一般，原核生物的表型特征能区分不同菌种但不能区分菌株。表型特征包括形态学特征、生理生化特征、抗生素的敏感性、噬菌体分型、血清学分析。表型特征虽然不能说明物种之间的亲缘关系，但它却是人们认识微生物实际重要性和研究生物进化的基础，仍然是分类研究的基础。 芽孢杆菌，菌体杆状，直或近直，0.3~2.2×2.1~7.0um,多数运动，鞭毛典型侧生，形成抗热内生孢子，严格好氧或兼性厌氧。由于实验条件的限制，传统芽孢杆菌的分类主要是根据形态学特征即好氧或厌氧和有无芽孢形成。Gibson和Gorden依据芽孢的形状（卵形或球形）以及它们在菌体或芽孢囊中的位置，提出芽孢形态群体概念，将芽孢杆菌分为三个类群。由于这个种的分离方法是以群体来划分的，它对芽孢杆菌分类鉴定有着非常重要的作用。群1、孢囊不显著膨大，芽孢椭圆或柱形，中生到端生，革兰氏阳性 A、生长在葡萄糖洋菜上的淡染细胞的原生质中有不着色的球状体 1、严格好氧；不产生乙酰甲基甲醇................................................巨大芽孢杆菌 2、兼性厌氧；产生乙酰甲基甲醇....................................................蜡状芽孢杆菌 B、生长在葡萄糖洋菜上的淡染细胞的原生质中没有不着色的球状体 1、7%氧化钠中生长；石蕊牛奶不产酸 a、在pH5.7生长；产生乙酰甲基甲醇 （1）水解淀粉；硝酸盐还原到亚硝酸盐 ①兼性厌氧；利用丙二酸盐..............................................地衣芽孢杆菌 ②好氧；不利用丙二酸盐..................................................枯草芽孢杆菌 （2）不水解淀粉；硝酸盐不还原到亚硝酸盐........................短小芽孢杆菌 b、在pH5.7不生长；不产生乙酰甲基甲醇................................坚强芽孢杆菌 2、7%氯化钠中生长；石蕊牛奶产酸...............................................凝结芽孢杆菌 群2、椭圆形芽孢使孢囊膨大，芽孢中生到端生，革兰氏阳性、阴性或可变 A、从碳水化合物产气 1、产生乙酰甲基甲醇；从甘油形成二羟基丙酮............................多粘芽孢杆菌 2、不产生乙酰甲基甲醇；不形成二羟基丙酮................................浸麻芽孢杆菌
高一物质的分离与提纯练习题及答案
物质的分离与提纯 补充习题 一、选择题 1．下列分离混合物的操作中，必须加热的是（） A. 过滤B．分液C．结晶D．蒸馏 2．用天然水制取纯度较高的水通常采用的方法是( ) A.煮沸并加入石灰纯碱 B. 加明矾搅拌 C. 进行多次过滤 D.蒸馏 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39％的乙醇溶液⑧氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是（） A . 分液、萃取、蒸馏 B. 萃取、蒸馏、分液 C . 分液、蒸馏、萃取 D. 蒸馏、萃取、分液 4下列从混合物中分离出其中的一种成分，所采取分离方法正确的是（）A．由于碘在酒精中的溶解度大，所以，可用酒精把碘水中的碘萃取出来。 B．水的沸点是100℃，酒精的沸点是78.5℃，所以，可用加热蒸馏方法使含水酒精变成无水酒精。 C．氯化钠的溶解度随着温度下降而减少，所以，用冷却法从热的含有少量氯化钾浓溶液中得到纯净的氯化钠晶体。 D．在实验室中，通常采用加热氯酸钾和二氧化锰的混合物方法制取氧气。我们可以用溶解、过滤的方法从反应产物中得到二氧化锰。 5．下列化学实验操作或事故处理方法不正确的是（）A．不慎将酸溅到眼中，应立即用水冲洗，边洗边眨眼睛 B．不慎将浓碱溶液沾到皮肤上，要立即用大量水冲洗，然后涂上硼酸 C．酒精灯着火时可用水扑灭 D．配制硫酸溶液时，可先在量筒中加入一定体积的水，再在搅拌条件下慢慢加浓硫酸 6．在“粗盐提纯”的实验中，蒸发时正确的操作是（）A．把浑浊的液体倒人蒸发皿内加热
B．开始析出晶体后用玻璃棒搅拌 C．蒸发时液体不超过蒸发皿容积的1/3 D．蒸发皿中出现大量固体时即停止加热 ＊7．过滤后的食盐水仍含有可溶性的CaCl2、MgCl2、Na2SO4等杂质，通过如下几个实验步骤，可制得纯净的食盐水：①加入稍过量的Na2CO3溶液；②加入稍过量的NaOH溶液；③加入稍过量的BaCl2 溶液；④滴入稀盐酸至无气泡产生；⑤过滤正确的操作顺序是（）A．③②①⑤④B．①②③⑤④ C．②③①④⑤D．③⑤②①④ 二、填空题 8．粗食盐中除含有钙离子、镁离子、硫酸根离子等可溶性杂质外，还含有泥砂等不溶性杂质。我们食用的精盐是用粗食盐提纯而得到的。通过教材中“粗盐的提纯”及你做过的该实验回答下列问题。 （1）实验室进行NaCl溶液蒸发时，一般有以下操作过程①放置酒精灯； ②固定铁圈位置；③放上蒸发皿（蒸发皿中盛有NaCl溶液）；④加热搅拌;⑤停止加热。其正确的操作顺序为 （2）如何运用最简方法检验溶液中有无SO42－离子？。如果有，应该如何除去SO42－离子？。 （3）在粗盐经过溶解→过滤后的溶液中滴加饱和Na2CO3溶液，直至不再产生沉淀为止。请问这步操作的目的是。 （4）将经过操作（3）后的溶液过滤。请问这一操作能除掉哪些杂质？ 。 （5）实验室里将粗盐制成精盐的过程中，在溶解、过滤、蒸发三个步骤的操作中都要用到玻璃棒，分别说明在这三种情况下使用玻璃棒的目的：溶解时：。 过滤时: 。 蒸发时：。 9．就有关物质的分离回答下面的问题 （1）分离沸点不同但又互溶的液体混合物，常用什么方法？试举例说明。
空心莲子草致病菌假隔链格孢菌原生质体的制备与再生
第41卷第2期2014年4月 植物保护学报 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA Vol．41No．2Apr．2014 基金项目：安徽省农业科学院院长青年创新基金项目（12B1122） 作者简介：周凤艳，女，1982年生，助理研究员，研究方向为杂草抗性机制与生物防治，E-mail ：zhoufy1982@163．com 收稿日期：2013－09－03 空心莲子草致病菌假隔链格孢菌原生 质体的制备与再生 周凤艳 1 张勇 1 周振荣 2 刘小林 1 （1．安徽省农业科学院，植物保护与农产品质量安全研究所，合肥230031； 2．当涂县农业技术推广中心，安徽当涂243100） 摘要：为建立空心莲子草致病菌假隔链格孢菌Nimbya alternantherae 的原生质体提取体系，以其强致病性野生型菌株N．alternantherae 11-2为供试菌株，研究了不同菌龄、酶系统、酶解时间及稳渗剂等对假隔链格孢菌原生质体制备及再生的影响，并采用聚乙二醇PEG 介导转化法，构建了随机插入突变体库。结果表明，在酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中培养2d 的假隔链格孢菌丝体，以0.7M 山梨醇为稳渗剂，同时使用2%裂解酶、2%崩溃酶和2%蜗牛酶3种酶的混合液，在30?下酶解3h 能获得足量的原生质体，且其再生率也可满足后继转化试验的要求。 关键词：假隔链格孢菌；原生质体；突变体 Preparation and regeneration of protoplasts for alligator weed pathogen Nimbya alternantherae Zhou Fengyan 1 Zhang Yong 1 Zhou Zhenrong 2 Liu Xiaolin 1 （1．Institute of Plant Protection and Aro-Product Safety ，Anhui Academy of Agricultural Sciences ， Hefei 230031，Anhui Province ，China ；2．Dangtu County Agriculture Technology and Popularization Center ，Dangtu 243100，Anhui Province ，China ） Abstract ：Nimbya alternantherae is a pathogenic fungus of the invasive alligator weed ，Alternanthera philoxeroides （Mart．）Griseb．In this study ，a highly pathogenic and wild-type strain of N．alternantherae 11-2was selected to establish a protoplast extraction system．The influences of age ，enzyme system ，enzymolysis time and osmotic stabilizer on the preparation and regeneration of fungal protoplasts were examined．In addition ，the polyethylene glycol-mediated transformation method was used to establish a randomly inserted mutant library．The results showed that sufficient protoplasts could be produced when N．alternantherae hyphostroma were cultivated in a liquid medium of yeast extract peptone dextrose for 2days and then underwent 3hours of enzymolysis at 30?，with 0．7M sorbierite as the osmotic stabilizer along with a mixture of 2%lyase ，2%driselase ，and 2%snailase．Furthermore ，the regeneration rate of N．alternantherae protoplasts could also meet the requirements of subsequent transformation experiments．Key words ：Nimbya alternantherae ；protoplast ；mutant 空心莲子草Alternanthera philoxeroides 因其具有繁殖迅速、适应性强等特点，于20世纪50年代被引 入我国江苏和浙江等地作为牲畜饲料植物栽培，随 后相继传入全国各地并引起草害，与农作物争夺水
高一必修1物质的分离与提纯练习题及答案
物质的分离与提纯 一、选择题 1．下列分离混合物的操作中，必须加热的是（） A. 过滤B．分液C．结晶D．蒸馏 2．用天然水制取纯度较高的水通常采用的方法是( ) A.煮沸并加入石灰纯碱 B. 加明矾搅拌 C. 进行多次过滤 D.蒸馏 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39％的乙醇溶液⑧氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是（） A . 分液、萃取、蒸馏 B. 萃取、蒸馏、分液 C . 分液、蒸馏、萃取 D. 蒸馏、萃取、分液 4下列从混合物中分离出其中的一种成分，所采取分离方法正确的是（）A．由于碘在酒精中的溶解度大，所以，可用酒精把碘水中的碘萃取出来。 B．水的沸点是100℃，酒精的沸点是78.5℃，所以，可用加热蒸馏方法使含水酒精变成无水酒精。 C．氯化钠的溶解度随着温度下降而减少，所以，用冷却法从热的含有少量氯化钾浓溶液中得到纯净的氯化钠晶体。 D．在实验室中，通常采用加热氯酸钾和二氧化锰的混合物方法制取氧气。我们可以用溶解、过滤的方法从反应产物中得到二氧化锰。 5．下列化学实验操作或事故处理方法不正确的是（）A．不慎将酸溅到眼中，应立即用水冲洗，边洗边眨眼睛 B．不慎将浓碱溶液沾到皮肤上，要立即用大量水冲洗，然后涂上硼酸 C．酒精灯着火时可用水扑灭 D．配制硫酸溶液时，可先在量筒中加入一定体积的水，再在搅拌条件下慢慢加浓硫酸 6．在“粗盐提纯”的实验中，蒸发时正确的操作是（）A．把浑浊的液体倒人蒸发皿内加热 B．开始析出晶体后用玻璃棒搅拌 C．蒸发时液体不超过蒸发皿容积的1/3
D．蒸发皿中出现大量固体时即停止加热 ＊7．过滤后的食盐水仍含有可溶性的CaCl 2、MgCl2、Na2SO4等杂质，通过如下几个实验步骤，可制得纯净的食盐水：①加入稍过量的Na2CO3溶液；②加入稍过量的NaOH溶液；③加入稍过量的BaCl2 溶液；④滴入稀盐酸至无气泡产生；⑤过滤正确的操作顺序是（）A．③②①⑤④B．①②③⑤④ C．②③①④⑤D．③⑤②①④ 二、填空题 8．粗食盐中除含有钙离子、镁离子、硫酸根离子等可溶性杂质外，还含有泥砂等不溶性杂质。我们食用的精盐是用粗食盐提纯而得到的。通过教材中“粗盐的提纯”及你做过的该实验回答下列问题。 （1）实验室进行NaCl溶液蒸发时，一般有以下操作过程①放置酒精灯； ②固定铁圈位置；③放上蒸发皿（蒸发皿中盛有NaCl溶液）；④加热搅拌;⑤停止加热。其正确的操作顺序为 （2）如何运用最简方法检验溶液中有无SO42－离子？。如果有，应该如何除去SO42－离子？。 （3）在粗盐经过溶解→过滤后的溶液中滴加饱和Na2CO3溶液，直至不再产生沉淀为止。请问这步操作的目的是。 （4）将经过操作（3）后的溶液过滤。请问这一操作能除掉哪些杂质？ 。 （5）实验室里将粗盐制成精盐的过程中，在溶解、过滤、蒸发三个步骤的操作中都要用到玻璃棒，分别说明在这三种情况下使用玻璃棒的目的：溶解时：。 过滤时: 。 蒸发时：。 9．就有关物质的分离回答下面的问题 （1）分离沸点不同但又互溶的液体混合物，常用什么方法？试举例说明。 答：。 （2）在分液漏斗中用一种有机溶剂提取水溶液里的某物质时，静置分
番茄对AAL-toxin和链格孢菌抗性的调控机制研究
番茄对AAL-toxin和链格孢菌抗性的调控机制研究腐马素(fumonisin)和AAL-toxins是一种神经鞘脂类似类真菌毒素(sphinganineanalogymycotoxins,SAMTs),它们通过竞争性抑制神经酰胺合成酶,使植物细胞中神经鞘氨醇的含量上升,从而诱发细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)。腐马素能够提高镰刀菌属真菌对玉米等粮食作物的致病性,而AAL-toxins是番茄链格孢菌(Alternaria alternata f.sp.lycopersicp.AAL)的致病因子,除此之外,两者对动物和人的健康造成严重威胁。 因此研究植物对SAMT及其产毒病原菌的抗性机理,挖掘调控该过程的关键基因,不仅有助于加深对植物防御体系的理解,而且为通过遗传工程手段提高植物对SAMT产毒菌的抗性,减少农业中SAMT的污染奠定基础。本研究在克隆拟南芥FB1(fumonisin B1)抗性基因Fumonisin B1resistant 41(FBR41)的基础上,进一步探究FBR41在拟南芥和番茄中防御SAMT的作用及其机理,以及在番茄中对产毒菌AAL的抗性机制;同时,首次探究了植物激素油菜素甾醇(brassinosteroid,BR)信号转导途径在番茄对AAL-toxin及AAL抗性中的作用。 主要研究结果如下:1、拟南芥突变体fbr41在FB1处理后,没有出现明显的PCD表型。FBR41突变位点发生在拟南芥SPT(serine palmitoyltransferase)的LCB2b(long chainbase 2b)亚基上。 通过对FBR41和AtLCB2b氨基酸序列的比对发现,FBR41上缺少SPT必需的赖氨酸催化位点;荧光素酶互补实验证明,FBR41可以与AtLCB1亚基结合;进一步对SPT下游产物神经鞘氨醇的含量进行分析发现,在FB1的处理下,fbr41中神经鞘氨醇的含量明显减少,而神经鞘氨醇对于诱导PCD具有重要的作用。由以上结果可知,FBR41可能通过影响SPT的功能,缓解FB1诱导的神经鞘氨醇的积累,从
芽孢杆菌代谢产物研究进展(479)
芽孢杆菌代谢产物研究进展 方晓翠（2009123479） 摘要： 本文通过高效液相色谱、硅胶柱、凝胶柱、硫酸提取等方法，对芽孢杆菌代谢产物进行了定性与定量分析，测定其中的主要成分极其有效成分的作用，探究芽孢杆菌在医药、饲料、生防等各个方面的利用价值和潜在的经济效益。本文在专业知识的基础之上，基于对芽孢杆菌属真菌研究现状的宏观了解和把握，所做出的总结性的概述。 前言： 对微生物研究利用的步伐从未停止过，微生物具繁殖快、体微小、好培养等突出的优点。因此，人类竭尽全力让微生物为己所用，为人类谋福利。 对微生物极其代谢产物几十年研究中，科研人员发现了一些具有利用前景的微生物，芽孢杆菌便是其中的一种。芽孢杆菌属(Bacillus) 是一类好氧或兼型厌氧、可以产生抗逆性内生芽孢的杆状细菌。多数是腐生菌,分布在植物体的表面、土壤及水体中,由于它们能够产生对热、紫外线、电磁辐射和某些化学物质有强抗性的芽孢,因此能忍受多种不良环境［8］。芽孢杆菌中存在很多特殊功能的菌株，可产生许多种活性物质，如多肽，环肽，氨基酸，蛋白酶及香豆素等。［7］由于具有以上特性，目前芽孢杆菌属的各类细菌已被广泛应用于工业、农业、军事、畜牧业、医学等多个领域。 正文： 1.芽孢杆菌在农业方面的研究情况 对于芽孢杆菌的研究利用在农业上较全面也较广泛。农业上，主要应用芽孢杆菌产生蛋白质伴孢晶体，其作用机理主要是产生几丁质酶使鳞翅目、鞘翅目 等幼虫的肠道损坏致死，还可溶解真菌细胞壁防治病害的发生［20］。从1905年 从家蚕体内分离出苏云金芽胞杆菌( Bacillus thuringiensis)，到现在苏云金芽孢 杆菌被制成多种生物农药。多次实验证实，其制剂针对线虫在内的4个门、节 肢动物门的9个目的生物有杀伤活性［9］。其形成的蛋白晶体毒素（Insecticidal crystal poteins,ICPs）能够对鳞翅目（lepidoptera）、膜翅目（Ｈymenoptera）、 双翅目（Ｄiptera）、鞘翅目（Ｃoleoptera）、食毛目（Ｍallophaga）、直翅目（Ｏrthoptera）等９个目５００多种害虫具有毒害作用[25]，现今已发现的具有杀虫
_管办分离_模式引发争议
中国医药报/2004年/06月/29日/ 苏州医改探索变通新路 管办分离 模式引发争议 李秡 江苏将组建内地首家医院管理中心,试行公立医院管办分离!!!6月中旬,江苏卫生系统传来的这则消息,打破了梅雨天的沉闷。 6月14日,江苏省卫生厅宣布,江苏将通过组建或向社会公开招标选择非盈利医院管理机构,将医院管理权交予医院管理法人,实行政府监管下的医院自主管理,由政府购买公共服务。首家非盈利医院管理中心将于9月份在苏州成立。这意味着江苏决心彻底打破公立医院管理中的 大锅饭 、 铁饭碗 ,建立起权责明确、富有生机的医院管理新体制。 拟议中的医院管理中心并不是江苏省自上而下的改革任务;相反,它是苏州市政府作为苏州医改的方案向省里提出的。2004年春节前,苏州市委、市政府基本形成了统一意见,要对市属公立医院这类大型公益性事业单位 动刀子 。4月底,市里出台了全市卫生系统上下皆知的 第70号文件 !!!?关于市属医院实行管办分离改革的试行意见#,对改革的各主要环节予以具体规定。据悉,苏州市属公立医院改革很快将全面展开。 ?叫好:医院人事分配权力落到实处 据介绍,这次苏州医改将采取 管办分离 的模式,在市属医院现有固定资产的所有权保持国有性质不变的前提下,由市卫生行政主管部门与医院管理中心签订授让管理权合同,由管理中心按合同要求对医院进行管理,合同年限暂定35年。合同期内,管理中心如违约、违规运作,政府有权中止合同、收回管理权;合同期满后,管理运作良好的中心则可以优先受让管理权。 根据拟议中的改革方案,医院管理中心成立后,各医院的日常运转资金由中心自行解决。医院的用人权、分配权,限额以下项目建设和设备采购决定权将归医院管理中心。这样一来,政府就退出 游戏 而成为纯粹的监管者,其监管考核的主要内容是:合同期内医院发展的目标;公共卫生突发事件的应急处理、医疗急救、重大活动医疗保障等政府指令性任务完成情况;平均每门诊人次收费水平、平均每出院人次收费水平、单病种医疗费用等诊疗收费和药品价格水平和药品收入占业务收入的比例、平均住院天数、质量控制综合评定、社会综合满意度等医疗服务质量指标等。 改革把医院的用人、分配权给了院长和医院管理中心,这让也在进行大改革的南京市卫生系统同行羡慕不已, 有了这些实在的权力,管理者能做不少事情。 苏州市第三人民医院院长高志昕对此也毫不讳言,他在接受苏州当地媒体采访时就表示, 以前我常跟上级讲,只要能放权给我每年1%的职工淘汰率,也就是700名员工中7名员工的人事任免权,我就敢打包票,能把三院管好,但上级无此政策。改革以后就好了,实行岗位聘用制,谁也别想捧%铁饭碗&。 这次改革的力度由此可见一斑。 此外,由管理中心统一掌管医院的运行、人事的任免以及相关的采购、分配事宜,对于整合现有资源、提高效率的好处也是不言而喻的。 ?质疑:社团法人如何管理公共部门
物质的分离与提纯测试题及答案
第2单元课时1 物质的分离与提纯 补充习题 一、选择题 1．下列分离混合物的操作中，必须加热的是（） A. 过滤B．分液C．结晶D．蒸馏 2．用天然水制取纯度较高的水通常采用的方法是( ) A.煮沸并加入石灰纯碱 B. 加明矾搅拌 C. 进行多次过滤 D.蒸馏 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39％的乙醇溶液⑧氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是（） A . 分液、萃取、蒸馏 B. 萃取、蒸馏、分液 C . 分液、蒸馏、萃取 D. 蒸馏、萃取、分液 4下列从混合物中分离出其中的一种成分，所采取分离方法正确的是（）A．由于碘在酒精中的溶解度大，所以，可用酒精把碘水中的碘萃取出来。 B．水的沸点是100℃，酒精的沸点是78.5℃，所以，可用加热蒸馏方法使含水酒精变成无水酒精。 C．氯化钠的溶解度随着温度下降而减少，所以，用冷却法从热的含有少量氯化钾浓溶液中得到纯净的氯化钠晶体。 D．在实验室中，通常采用加热氯酸钾和二氧化锰的混合物方法制取氧气。我们可以用溶解、过滤的方法从反应产物中得到二氧化锰。 5．下列化学实验操作或事故处理方法不正确的是（）A．不慎将酸溅到眼中，应立即用水冲洗，边洗边眨眼睛 B．不慎将浓碱溶液沾到皮肤上，要立即用大量水冲洗，然后涂上硼酸 C．酒精灯着火时可用水扑灭 D．配制硫酸溶液时，可先在量筒中加入一定体积的水，再在搅拌条件下慢慢加浓硫酸 6．在“粗盐提纯”的实验中，蒸发时正确的操作是（）
A．把浑浊的液体倒人蒸发皿内加热 B．开始析出晶体后用玻璃棒搅拌 C．蒸发时液体不超过蒸发皿容积的1/3 D．蒸发皿中出现大量固体时即停止加热 ＊7．过滤后的食盐水仍含有可溶性的CaCl2、MgCl2、Na2SO4等杂质，通过如下几个实验步骤，可制得纯净的食盐水：①加入稍过量的Na2CO3溶液；②加入稍过量的NaOH溶液；③加入稍过量的BaCl2 溶液；④滴入稀盐酸至无气泡产生；⑤过滤正确的操作顺序是 （） A．③②①⑤④B．①②③⑤④ C．②③①④⑤D．③⑤②①④ 二、填空题 8．粗食盐中除含有钙离子、镁离子、硫酸根离子等可溶性杂质外，还含有泥砂等不溶性杂质。我们食用的精盐是用粗食盐提纯而得到的。通过教材中“粗盐的提纯”及你做过的该实验回答下列问题。 （1）实验室进行NaCl溶液蒸发时，一般有以下操作过程①放置酒精灯； ②固定铁圈位置；③放上蒸发皿（蒸发皿中盛有NaCl溶液）；④加热搅拌;⑤停止加热。其正确的操作顺序为 （2）如何运用最简方法检验溶液中有无SO42－离子？。如果有，应该如何除去SO42－离子？。 （3）在粗盐经过溶解→过滤后的溶液中滴加饱和Na2CO3溶液，直至不再产生沉淀为止。请问这步操作的目的是。 （4）将经过操作（3）后的溶液过滤。请问这一操作能除掉哪些杂质？ 。 （5）实验室里将粗盐制成精盐的过程中，在溶解、过滤、蒸发三个步骤的操作中都要用到玻璃棒，分别说明在这三种情况下使用玻璃棒的目的：溶解时：。 过滤时: 。 蒸发时：。
微生物降解霉菌毒素的研究进展
微生物降解霉菌毒素的研究进展 张高娜*，张建梅，谷巍 （山东宝来利来生物工程股份有限公司，山东泰安271000）摘要：霉菌毒素（mycotoxin）是霉菌在生长过程中产生的次级代谢产物，具有高毒性和强致癌性，对畜牧业生产造成严重的危害。本文就畜牧生产过程中常见的几种霉菌毒素的种类、毒性机理及生物脱毒等方面作一综述。 关键词：霉菌毒素；微生物；生物降解；毒性机理 Research Progress on microbial degradation of the mycotoxin Zhang Gao-na Zhang Jian-mei Gu Wei (Bora Lee Shandong to bio-engineering Co., Ltd., Tai'an, Shandong, 271000) Abstract: Mycotoxin are fungal secondary metabolites produced in the process of growth, highly toxic and carcinogenic, caused serious harm to the livestock production. In this paper, livestock production process of several common species of mycotoxins, toxic mechanism and biological detoxification of reviewed. Key words: mycotoxin; microorganism; biodegradation; toxic mechanism 1.引言 霉菌毒素是由霉菌产生的次生代谢产物，分子量在几百到几千道尔顿，没有抗性，但有热稳定性，不因加热而被破坏。因物理和化学的去毒方法存在一些弊端，故生物降解法作为一种安全、高效、环保的方法倍受畜牧生产者的关注。霉菌种类繁多，其有毒代谢物也具有多样性，现已知的霉菌毒素就有200多种。本文就在动物生产过程中，常见霉菌毒素的种类、毒性机理及生物脱毒等方面进行了综述。 2. 霉菌毒素的种类、结构特征和产生条件 2.1霉菌毒素的种类 霉菌毒素是霉菌在生长过程中产生的次级代谢产物，特别是曲霉菌、镰刀霉、青霉菌、链格孢菌等真菌产生。这些霉菌毒素是由几百种化学成分不同的有毒化合物组成，目前已发现有33属164种霉菌产生200多种霉菌毒素[1]，其中最常见的霉菌毒素有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、单端孢霉烯、玉米赤霉烯酮和伏马菌素。 作者简介：张高娜（1984—），女，汉族，河南正阳人，硕士主要研究方向：单胃动物营养、环境与生产通讯地址：山东省泰安市宝来利来生物工程股份有限公司研究院山东泰安 271000 作者邮箱：gaona52@https://www.wendangku.net/doc/1d10296530.html,
税务会计与财务会计的分离模式分析
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/1d10296530.html, 税务会计与财务会计的分离模式分析 作者：宗学颖 来源：《经营者》2013年第05期 摘要：随着会计体系的不断创新与拓展，我国的会计制度处于持续的完善与发展阶段， 会计制度在发展中始终争议不断，在事实与逻辑的争论中不断检验和实践，力求寻找科学合理的融合点，这对于我国会计制度的发展具有十分重要的历史意义。本文重点从实践角度，对税务会计与财务会计分离的意义、必然性、差异性等方面进行研究和分析，为财务理论的发展做出有益的尝试。 关键词：税务会计；财务会计；分离模式 从世界范围来看，很多专家和学者从未间断对税务会计和财务会计分离模式的研究，我国最为典型的会计分离模式大多根植于对英美、法德会计安排的对照研究，无论是理论背景还是实践前提下，都进行了很多逻辑性与检验性的研究，也取得了很多丰硕的成果。但是，随着我国体制改革的不断深化，相关法律制度在企业财会计算分类项目上的不一致，导致了两种利润计算数据出现误差，如何解决这个误差是业界始终在讨论和争议的话题。 一、税务会计与财务会计分离的重要意义 在经济活动中，税法与会计法始终发挥着举足轻重的作用，经济发展势必推动制度的变化与发展，这种发展具有进步性、历史性和普适性。随着我国的会计核算体系的逐步完善，必将引起会计职能的转变，分工也将越来越细致，而如何科学合理运用税务会计和财务会计手段，是处理平衡国家、社会和企业三者之间利益的关键。 （一）丰富基本理论方法，建立更加完善的会计核算体系 通过对两者的研究，可以进一步丰富我国会计基本制度和理论，在借鉴西方国家会计核算方法的基础上，逐步形成符合我国国情和企业发展需要的会计理论方法。这种发展是立足于强大的理论研讨群体和丰富的实践经验基础之上的，比如会计核算的目标、相关的制度指标、细化分类的计算方式方法、阶段性的考核模式等等。只有通过反复不断的研究与分析，才能够形成厚重的理论基础和更加完善的会计核算体系。 （二）建立灵活的核算方式，保证核算方法的科学适用 税法和会计法的形成、发展与完善都是为了更好协调国家与纳税企业权利与义务关系，在维护法律机制的严肃性前提下，为企业提供最为合理的评价机制方法，对于两种理论的分离研究，可以更好的处理客观经营活动。客观的经营活动具有很大的灵活性、实践性和复杂性，要求其财务会计方式必须也要随之变化，以便于适应客观经营活动的需要。而税务会计是依附于
化学除杂分离和提纯的专项培优练习题含答案解析
一、中考初中化学除杂分离和提纯 1．为除去下表样品中的少量杂质（括号内为杂质），所选试剂及操作方法均正确的是 A．A B．B C．C D．D 【答案】B 【解析】 【分析】 【详解】 A、KCl易溶于水，MnO2难溶于水，可采取加水溶解、过滤、蒸发的方法进行分离除杂，故A错误； B、NH4HCO3在加热条件下生成氮气、水和二氧化碳，碳酸钠受热不分解，能除去杂质且没有引入新的杂质，符合除杂原则，故B正确； C、KNO3和NaCl的溶解度受温度的影响不同，硝酸钾溶解度受温度影响较大，而氯化钠受温度影响较小，所以可采取加热水溶解配成饱和溶液、冷却热饱和溶液使KNO3先结晶出来、再过滤、蒸发的方法；故C错误。 D、MgCl2能与氢氧化钠溶液反应生成氢氧化镁沉淀和氯化钠，但NaOH溶液是过量的，能除去杂质但引入了新的杂质NaOH，不符合除杂原则，故D错误。故选B。 2．下列除去物质中少量杂质的方法正确的是( )
A．A B．B C．C D．D 【答案】A 【解析】 【分析】 【详解】 A、铁粉能被磁铁吸引，木炭粉不能，能除去杂质且没有引入新的杂质，符合除杂原则，故选项所采取的方法正确。 B、氯化氢能与足量硝酸银溶液反应生成氯化银沉淀和硝酸，应再进行干燥，故选项所采取的方法错误。 C、碳酸氢钙、碳酸钙高温下均能分解，不但能把杂质除去，也会把原物质除去，不符合除杂原则，故选项所采取的方法错误。 D、碳酸钠能与过量硝酸钙溶液反应生成碳酸钙沉淀和硝酸钠，能除去杂质但引入了新的杂质硝酸钠、硝酸钙（过量的），不符合除杂原则，故选项所采取的方法错误。 故选：A。 【点睛】 根据原物质和杂质的性质选择适当的除杂剂和分离方法，所谓除杂（提纯），是指除去杂质，同时被提纯物质不得改变。除杂质题至少要满足两个条件：①加入的试剂只能与杂质反应，不能与原物质反应；②反应后不能引入新的杂质。 3．除去下列物质中的少量杂质，所选用的试剂和操作方法均正确的是（） A．A B．B C．C D．D 【答案】D
纳滤特性及分离过程
纳滤膜分离特性及使用和维护 一，纳滤膜分离技术的特点 20世纪80年代末期，随着新的制膜方法（如界面聚合法）的出现和制膜工艺的不断改进，一批新型复合膜（如疏松型反渗透膜和致密型超滤膜）得以问世，并受到人们的极大关注，现在人们习惯上将该类膜称为纳滤膜。纳滤膜分离过程无任何化学反应，无需加热，无相转变，不会破坏生物活性，不会改变风味，香味，因而被越来越广泛地应用于超纯水的制备，食品，医药等行业中的各种分离和浓缩过程。 作为一种新型分离技术，纳滤膜在其分离应用中表现出下列两个显著特征：一个是其截留分子量介于反渗透和超滤膜之间，为200~2000。故推测表面分离层可能拥有1nm左右的微孔结构，所以称之为“纳滤”；另一个是纳滤膜对无机盐有一定的截留率，因为它的表面分离层由聚电解质所构成，对离子有静电相互作用。从结构上来看纳滤膜大多是复合型膜，由表面分离层和它的支撑层组成，两者的化学组分不同。 二．纳滤膜的分离机理 纳滤膜对无机离子的去除介于反渗透膜和超滤膜之间，它对不同的无机离子有不同的分离特性，分离规律：1）对于以下阴离子，截留率依次升高：NO3- ,CL-，OH-，SO42-，CO32-2）对于以下阳离子，截留率依次升高：H+, Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cu2+ 3) 1价离子渗透，多价离子截留． 纳滤膜对无机盐的截留可以用Donnan平衡模来解释：将纳滤膜置于含盐溶剂中时，溶液中反离子（所带电荷与膜内固定电荷相反的离子）在膜内浓度大于其在主体溶液中的浓度，而同名离子在膜内的浓度则低于其在主体溶液中的浓度．由此阻止了同名离子从主体溶液向膜内的扩散，为了保持电中性，反离子也被膜截留．纳滤膜中荷电基团大多为带负电的磺酸根及羧酸根。 纳滤膜的分离溶质的机理与反渗透膜是一样的，通过反渗透的方式进行分离：如图所示以一选择性透过溶剂水的膜将两溶液隔开，左边为纯溶剂水（A），右边为含溶质的稀溶液（B），开始时两边液面等高，即两边等压，等温。则纯水将透过膜向含溶质的稀溶液侧移动，则B溶液的液面将不断升高，这一现象称为渗透。待纯水的渗透过程达到定态后，溶液B的液位升高h不再变动，ρgh即表示B溶液的渗透压∏，渗透压也可表示为∏= C B RT （ C B为溶质在溶液中的摩尔浓度）从这可以看出渗透压与溶质的浓度是成正比关系的。若在右边加一个大于渗透压的静压力△P，使△P > ∏则纯水从右边向左边渗透，此称为反渗透。这样就可利用反渗透现象截留溶质而获得纯水，从而达到混合物分离的目的。因此进行反渗透的二个必要条件是：１，选择性透过溶剂的膜。２，膜两边的静压差必须大于其渗透压差。在实际反渗透过程中膜两边静压差还必须克服膜的阻力。 渗透平衡反渗透浓缩 三．影响纳滤膜速率主要因素 （1）膜的性能主要表现为溶剂透过系数A和溶质透过系数B的大小。显然，对膜分
链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选
第19卷第3期湖北民族学院学报(自然科学版)V ol.19 N o.3 2001年8月 Journal of Hubei Institute for Nationalities(Nat.Sci.) Aug.2001 文章编号:1008-8423(2001)03-0007-04 链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选 万佐玺1,周光来2,强 胜1 (1.南京农业大学植物科学系,江苏南京210095; 2.湖北民族学院园艺系,湖北恩施445000) 摘要:对紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum Spreng.)的自然致病菌-链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.) K eissler)的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较研究,选出501菌株产毒能力最 强;同时对501菌株的产毒培养条件进行了研究.结果表明:小麦培养基(水的质量分数40%)和PSK培 养基分别可以作为产毒的固体和液体培养基. 关键词:链格孢菌;产毒能力;产毒培养基;筛选 中图分类号:S497 文献标识码:A 紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum S preng.)是一种世界性恶性杂草,现已危害世界30多个国家和地区,寻求防除紫茎泽兰的有效措施成为世界范围关注的问题[1,2].由于紫茎泽兰是一种环境性杂草,生境十分复杂,难以用人工和化学的方法加以控制,生物防除成为理想的选择[3-5].链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.) K eissler)是紫茎泽兰的自然致病菌,有潜力发展成为防除紫茎泽兰的真菌除草剂[6].链格孢菌引起紫茎泽兰致病与其产生的毒素有关[7].因此,筛选产毒能力强的菌株作为生防真菌是非常重要的.另外,菌株的产毒能力与其培养条件关系很大,尤其是培养基的选择[8,9].为此,作者对链格孢菌的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较分析,并对产毒培养条件进行了研究. 1 材料与方法 1.1 材料 供试菌株:501、402、LS、Y N、503、AW. 供试植物:紫茎泽兰种子采自云南省昆明市;紫茎泽兰幼苗为培养2周的子叶期幼苗;紫茎泽兰成株为培养5个月的突生菌. 1.2 方法 1.2.1 菌株培养方法、无菌滤液的制备、无菌滤液和粗毒素的生测方法参见文献[10]. 1.2.2 产毒菌株的筛选 对501、402、503、LS、Y N、AW等6个菌株按1.2.1方法培养后,用4层纱布过滤,将菌丝洗净,于80℃下烘干,称重;以滤液制备无菌滤液,用种子萌发抑制法、幼苗浸渍法、离体叶片针刺法进行生测,对6个菌株的产毒能力分析比较.CK0用无菌水,CK1用无菌处理的PSK,重复3次. 1.2.3 产毒培养条件的设置 1.2.3.1 固体培养基的筛选 以大米、小麦、玉米、大豆等材料作培养基,培养501菌株,然后制备粗毒素,比较产毒差异.具体方法是:将上述4种材料各称取100g,装入500ml的三角瓶中,用清水淘净后,再浸泡10h,除去多余水分,置于灭菌锅中灭菌30min(121℃),冷却后接种501菌株,于25℃、12h L(光照)/12hD(黑暗)的条件下培养,每天摇动1 -2次三角瓶,避免结块,3周后取出培养物,80℃下烘干、粉碎,然后用乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙脂相, 收稿日期:2001-03-06. 基金项目:农业部九五高技术和基础研究项目(960205);国家教委博士点基金资助(02-03-031). 作者简介:万佐玺(1968-),男(土家族),湖北建始人,硕士,讲师,主要从事生物防治研究,现在湖北民族学院园艺系任教.