ellman测巯基

埃尔曼的试剂，5,5'二硫代双- （二硝基苯甲酸），5克

分子量：396.35

CAS号：69-78-3

使用半胱氨酸标准精确量化巯基程序

材料的制备

1 反应缓冲液：0.1M的磷酸钠，pH 8.0，含有1 mM的EDTA

半胱氨酸标准品，分子量136.2 ：配成一定浓度梯度

3 Ellman试剂溶液：1mL反应缓冲液4毫克溶解DTNB

程序

1用反应缓冲液配制一定浓度的半胱氨酸工作液

2 取若干试管，每管含50μL Ellman试剂和2.5mL的反应缓冲液。

3在各试管中加入250μL各浓度的标准工作液或待测物溶液

注：对于未知的样品需要稀释，以便使其浓度标准曲线的工作范围之内（理想的浓度为0.1-1.0）。

4在室温混合和反应15分钟。

在412 nm处测量吸光度。

根据得到数值生成一个标准曲线，测定待测样品由标准曲线计算SH含量

摩尔吸光系数的程序精确量化的巯基的

材料的制备

1 反应缓冲液：0.1M的磷酸钠，pH 8.0，含有1 mM的EDTA

Ellman试剂溶液：1mL反应缓冲液4毫克溶解DTNB

测量吸光度

去若干试管，每管加入50μL的Ellman试剂溶液和2.5mL反应缓冲液。

加入250μL待测样品,空白添加250μL反应缓冲液

在室温混合和反应15分钟。

分光光度计412nm测定吸光度。

根据TNB的摩尔消光系数(14,150)计算巯基含量

该国能在412nm的合成，有一个相对比较激烈的吸光度

同时二硫化物。由于蛋白质的巯基，以国能形成化学计量

为1:1，国能形成可以用来评估硫醇数目。

在变性剂的情况下，唯一能够找到的硫醇的反应，而

残留的chaotropic代理人在场的总数减少胱氨酸

目前可以衡量的。经处理后减少的蛋白质

与chaotropes及DTNB能够产生的半胱氨酸总数（半胱氨酸巯基

加半胱氨酸-β-半胱氨酸）。

- -

反应是敏感的碱性pH值（俄亥俄州）与RS竞争），

酸性pH值（二硫化物可以打破），氧（R的巯基再氧化），以及

温度（热致变色）。因此，通常的反应是

进行了过多的DTNB的蛋白质，在中性pH值固定的温度，

erature，有时在厌氧条件。此外，国能是

敏感的各种离子的缓冲，所以采用消光系数

硫醇数量计算必须正确匹配的反应

条件。这也是进行了存在的真实反应

尿素或盐酸胍的变性剂（盐酸胍）。下表概述

在DTNB的和国能在各种条件下的一些有用的数据：

-------------------------------------------------- ------------------------

复方最大的lambda（pH值?7）灭绝：（以磷酸盐）（以磷酸三）（以盐酸胍）--------- ----------------- -------------------- ---- ------ ----------

DTNB的324纳米17780 16600 ----

国能---- 412纳米14,150 13,700

-------------------------------------------------- ------------------------

消光系数以每摩尔每厘米长度的路径，30degC单位

国能在降低盐酸胍存在的灭绝是由于在移位

拉姆达从412到422最大纳米。在DTNB的灭绝是在412纳米212/M/cm，

规模虽小但可衡量的。

=-=-=-=-=-=-=-=

=协议=

=-=-=-=-=-=-=-=

联合解决方案：

蛋白质溶液（本地或以前减少，脱盐）

（?5 - 0.1M的磷酸钾缓冲液，pH值7.4 40uM）DTNB的股票（20毫米0.1M的KPO4，pH值7.4，分子量396.35; 7.93毫克/mL）

（DTNB的很慢进入的解决办法;涡定期

在2-3小时内实现完整的解决方案，

这将是很轻，颜色黄色）

尿素或盐酸胍（高纯度，结晶固体）

主要设备：

双光束分光光度计动力学模式设置在412nm

恒温细胞，30degreesC

程序：

示例1 = 1.0mL细胞蛋白质溶液+ 50μL20毫米DTNB的

引用单元1 = 1.0mL+ 50μL DTNB的缓冲区

记录吸光度前，DTNB的除了“零”。跟随

在412 nm的反应在30degC不断。记录过去的时候，

反应达到最大值。如果任何被视为重要的下坡

最大吸收后到达，这将需要更正

为了获得可访问硫醇的正确数目。

在第二个实验中，添加结晶盐酸胍到您的

蛋白质溶液，以达到最终浓度约4米。请注意

体积变化以及由此产生的蛋白显着的稀释

解决方案！

示例2 = 1.0mL细胞蛋白质溶液（4 M盐酸胍）+ 20 mM的DTNB的50μL 引用单元2 = 1.0mL缓冲液（4 M盐酸胍）+ 50μL20毫米DTNB的

同样，在30摄氏度的纪录外径412纳米，跨越高峰吸收。

本实验将产生硫醇总数减少。

样品细胞3 = 1.0mL预变性，减少，蛋白质和透析

+ 50μL20毫米DTNB的

引用单元3 = 1.0mL缓冲液（4 M盐酸胍）+ 20 mM的DTNB的50μL

同样，记录OD值随时间在30degC 412 nm到峰值吸收和超越。

本实验将产生的蛋白质的半胱氨酸残基的总数。

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

数据分析= =

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

计算硫醇数修改（或浓度除外）使用

在412 nm的最大吸收测量（或修正值除外）

啤酒的法律，以及适当的消光系数;鸿沟这个值

由精确已知的摩尔反应蛋白浓度比色皿

三个实验的每一个。这将使你获得硫醇，

总半胱氨酸巯基，总半胱氨酸巯基以及半胱氨酸-β-半胱氨酸。这样做，每个实验中

重复或一式三份，平均分别复制。如果您的

数字统计整数，你就大功告成了。如果不考虑重复

该议定书，但采用厌氧（脱气）缓冲区的所有反应。

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

一些参考= =

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

“甲硫醇为确定低浓度比色法”

埃尔曼，吉尔（1958）拱。生化。Biophys。74，443-450。

“重新评估埃尔曼的试剂”谜语，密码，布莱克利，汤顿和泽纳，

二（1983）方法酶学。91，49-60。

对兔血红素结合半胱氨酸残身份“研究

肝微粒体细胞色素P - 450同工酶2“黑色，SD和库恩，美兆

（1985）生物化学，Biophys。水库。Commun。128，82-89。

Hi All,

I had a couple of folks ask for my opinion and method for use of Ellmen's

reagent (DTNB) in the detemination of protein thiols (Cys-SH). Below, I've included a protocol, references, and general information that should be

helpful to all who anticipate using this method. Best Regards, Shaun

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

= Use of Ellman's Reagent for Determination of Protein Thiols =

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

=-=-=-=-=-=-=-=

= Background =

=-=-=-=-=-=-=-=

Ellman's reagent or 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoate) (DTNB) is a symmetrical

aryl disulfide which readily undergoes the thiol-disulfide interchange

reaction in the presence of a free thiol:

- - -

COO COO COO

\___ ___/ \___

/ \ / \ | - / \ |

O N- O -S-S- O -N O + Cys-S ----> O N- O -S-S-Cys (Mixed

2 \___/ \___/ 2 | 2 \___/ | disulfide)

(Excess) +

-

COO

\___

/ \ -

(2-nitro-5-

O N- O -S thiobenzoate)

\___/

(TNB)

The TNB dianion has a relatively intense absorbance at 412nm compared to

both disulfides. Because the stoichiometry of protein thiol to TNB formed

is 1:1, TNB formation can be used to assess the number of thiols present.

In the absence of denaturants, only accessible thiols will react, whereas

in the presence of chaotropic agents the total number of reduced Cys residues present can be measured. Reduction of the protein followed by treatment

with chaotropes and DTNB can yield the total number of cysteines (Cys-SH

plus Cys-S-S-Cys).

-

-

The reaction is sensitive to alkaline pH ( OH) competes with R-S ),

acidic pH (disulfides can be broken), oxygen (reoxidation of R-SH), and temperature (thermochromism). Consequently, the reaction is usually

carried out with an excess of DTNB to protein, at neutral pH, fixed temp- erature, and sometimes under anaerobic conditions. Furthermore, TNB is sensitive to various buffer ions, so the extinction coefficient used to

calculate number of thiols must be properly matched to the reaction

conditions. This is also true of reactions carried out in the presence of

the denaturants urea or guanidine (GuHCl). The following table summarizes some useful data on DTNB and TNB under various conditions:

--------------------------------------------------------------------------

Compound lambda max (pH~7) Extinction: (in PO4) (in Tris) (in GuHCl) --------- ----------------- -------------------- ---------- ----------

DTNB 324 nm 17,780 16,600

----

TNB 412 nm 14,150 ----

13,700

--------------------------------------------------------------------------

Extinction coefficients are in units of per Molar per cm path length, 30degC

Decreased TNB extinction in the presence of GuHCl is due to a shift in the lambda max from 412 to 422 nm. The extinction of DTNB at 412 nm is 212/M/cm, small but measurable.

=-=-=-=-=-=-=-=

= Protocol =

=-=-=-=-=-=-=-=

Stock Solutions:

Protein solution (native or previously reduced and desalted)

(~5-40uM in 0.1M potassium phosphate buffer, pH 7.4) DTNB stock (20 mM in 0.1M KPO4, pH 7.4; MW 396.35; 7.93 mg/ml)

(DTNB is very slow to go into solutions; vortex periodically

over the period of 2-3 hours to achieve complete solution,

which will be very light yellow in color)

Urea or Guanidine-HCl (high purity, crystalline solids)

Major Equipment:

Dual beam spectrophotometer set in kinetic mode at 412nm

Thermostated cells, 30degreesC

Procedure:

Sample cell 1 = 1.0 mL protein solution + 50 uL 20mM DTNB

Reference cell 1 = 1.0 mL buffer + 50 uL DTNB

Record the absorbance before addition of the DTNB as "zero". Follow the reaction at 412 nm at 30degC continuously. Record past the time when

the reaction reaches a maximum. If any significant down slope is seen

after the maximum absorbance is reached, this will need to be corrected for

in order to get the correct number of accessible thiols.

In the second experiment, add crystalline Guanidine-HCl to your

protein solution to achieve a final concentration of about 4M. Note the

volume change and the resulting significant dilution of your protein

solution!

Sample cell 2 = 1.0 mL protein solution (+4M GuHCl) + 50 uL 20 mM DTNB

Reference cell 2 = 1.0 mL buffer (+4M GuHCl) + 50 uL 20mM DTNB

Again, record OD 412 nm at 30 degC up to and beyond peak absorbance. This experiment will yield the total number of reduced thiols.

Sample cell 3 = 1.0 mL pre-denatured,reduced, and dialyzed protein

+ 50 uL 20mM DTNB

Reference cell 3 = 1.0 mL buffer (+4M GuHCl) + 50 uL 20 mM DTNB

Again, record OD 412 nm at 30degC vs time to peak absorbance and beyond. This experiment will yield the total number of Cys residues in the protein.

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

= Data Analysis =

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

Calculate the number of thiols modified (or concentration thereof) using

the maximum absorbance at 412 nm measured (or the corrected value thereof), Beer's Law, and the appropriate extinction coefficient; divide this value

by the accurately known molar protein concentration in the reaction cuvette

for each of the three experiments. This will give you accessible thiols,

total Cys-SH, and total Cys-SH plus Cys-SS-Cys. Do each experiment in duplicate or triplicate and average the respective replicates. If your

numbers are statistically integers, you're done. If not, consider repeating

the protocol, but using anaerobic (degassed) buffers for all reactions.

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

= Some References =

=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=

"A colorimetric method for determining low concentrations of mercaptans" Ellman, G.L. (1958) Arch. Biochem. Biophys. 74, 443-450.

"Reassessment of Ellman's reagent" Riddles, P.W., Blakeley, R.L., and Zerner, B. (1983) Methods Enzymol. 91, 49-60.

"Studies on the identity of the heme-binding cysteinyl residue in rabbit

liver microsomal cytochrome P-450 isozyme 2" Black, S.D. and Coon, M.J. (1985) Biochem, Biophys. Res. Commun. 128, 82-89.

羟基自由基的测定方法

羟基自由基(.OH)是最活跃的一种活性分子，也是进攻性最强的化学物质之一，几乎可以与所有的生物分子、有机物或无机物发生各种不同类型的化学反应，并伴有非常高的反应速率常数和负电荷的亲电性。羟基自由基是目前所知活性氧自由基中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基，可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化损伤，使细胞坏死或突变，羟基自由基还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关。羟基自由基由于其寿命短，反应活性高，存在浓度低，目前尚未有专一、有效的方法可以精确测定羟基自由基的含量，其测定方法也成为一项国际性的难题。本文对近几年出现的羟基自由基检测方法进行了综述。 1电子自旋共振法 电子自旋共振法或电子顺磁共振法主要研究对象为未成对的自由基或过渡金属离子及其化合物。自旋捕捉(spin trapping)技术的出现为化学反应中自由基中间体及生命活动过程中短寿命自由基的检测开辟了新的检测途径[[1]]。此方法是利用捕捉剂与自由基结合形成相对稳定的自旋加合物(spin adducts)，然后进行ESR测定。 2HPLC法 HPLC法可用于间接测定自由基。测定过程中必须先选择合适的化合物捕集被测体系中的自由基，使之生成具有一定稳定性，且能被液相色谱分离与检测的产物，然后用HPLC进行测定。1）、采用二甲基亚砜捕集羟基自由基的HPLC测 2）、采用水杨酸捕集羟基自由基的HPLC测定方法 3化学发光法 化学发光法是一种灵敏、准确的检测自由基的方法，其原理是利用发光剂被活性氧自由基氧化成激发态，当其返回到基态时放出大量光子，从而对发光起放大作用。且自由基产生越多，发光值就越大。通过函数换算间接反应系统中自由基的量。与ESR和HPLC法相比，具有操作简便、设备成本较低、测定快速等优点。4氧化褪色光度法 6极谱法 7毛细管电泳-电化学检测法 8胶束电动毛细管色谱法

理化检验(全)

第一章绪论 食品理化检验概念：是卫生检验专业中的一门重要专业课程，是以分析化学、营养与食品卫生学、食品化学为基础，采用现代分离、分析技术，研究食品营养成分与食品安全有关成分的理化检验原理和方法的一门科学，也是一门学科交叉、应用性很强的学科。 第二章食品样本的采集、保存和处理 **1 食品样本的采集原则及方法。 ①所采集样品对总体有充分的代表性； ②采样过程中应设法保持食品原有的理化性质，防止待测成分的损失和污染。 注意：首先样本容量应达到一定的要求；此外，采样时应尽量使处于不同方位、不同层次的个体样品都有均等的被采集的机会。 **2 食品样品的保存原则。 ①稳定待测成分 ②防止污染 ③防止腐败变质 ④稳定水分 即净、密、冷、快。 3 食品样品的前处理方法。 原则： ①消除干扰因素； ②完整保留被测组份； ③使被测组份浓缩，以获得可靠的分析结果。 主要内容： ①除去非食用部分 ②除去机械杂质 ③均匀化处理

**4 湿法消化中常用的氧化性强酸有哪几种？这几种强酸各自有何特点？ ①高氯酸：冷的高氯酸无氧化性，加热后是强的氧化剂。氧化性比硝酸和硫酸强，对还原性较强的有机物如酒精、甘油、脂肪、糖类和次磷酸及其盐因反应剧烈而发生爆炸，几乎可以分解所有有机物，但一般不宜单独使用。 ②硝酸：沸点较低，易挥发，氧化能力不持久，常与其他酸配合使用。 ③硫酸：沸点高(338℃)，热的浓硫酸具有一定的氧化性，对有机物有强烈的脱水作用，并使其碳化，进一步氧化成二氧化碳和水。 5 何谓湿消化法和干灰化法？有何特点？（无机化处理的主要方法） 湿消化法：指在适量的食品样品中，加入氧化性的强酸，然后在一定温度条件下反应，破坏食品中的有机物，使待测的无机成分释放出来，形成不挥发的无机化合物的方法。 优点：有机物分解速度快，加热温度较干灰化法低，可减少待测成分的挥发损失。 缺点：试剂用量大，有时空白值比较高，消化过程中会产生大量有害气体。 干灰化法：食品样品放在坩埚中，先在电炉上加热使样品脱水、炭化，再置于500-600℃的高温炉中灼烧灰化。使样品中的有机物氧化分解成二氧化碳、水和其他气体而挥发，留下无机物供测定。 优点：能处理较多的样品，提高检出率；不加试剂，空白值较低；适用范围广，操作简单。缺点：灰化时间长、敞口高温导致被测成分挥发（通常550～600℃4h）；坩埚对被测成分的吸留致使某些成分的回收率低。 6 提高干灰化法回收率的措施 ①采用适宜的灰化温度。 500～550℃，不超过600℃ 低温灰化技术（抽真空，＜150 ℃），成本高 ②加入助灰化剂（如KOH，MgO等）: ③还可采用促进灰化和防止损失的措施：如加盐酸或水溶解灰分，解除对炭粒的包裹；加 硫酸稳定铅、镉等金属；加硝酸提高灰分的溶解度等。但需注意酸的量不可过多，以防酸雾损坏灰化炉。 7 干扰成分的去除的主要方法 第三章食品的营养成分分析 1掌握恒重、粗蛋白、粗脂肪、总脂肪、还原糖、膳食纤维、灰分的概念；

拉曼光谱的原理及应用.doc

拉曼光谱的原理及应用 拉曼光谱由于近几年来以下几项技术的集中发展而有了更广泛的应用。这些技术是：CCD检测系统在近红外区域的高灵敏性,体积小而功率大的二极管激光器,与激发激光及信号过滤整合的光纤探头。这些产品连同高口径短焦距的分光光度计,提供了低荧光本底而高质量的拉曼光谱以及体积小、容易使用的拉曼光谱仪。 （一）含义 光照射到物质上发生弹性散射和非弹性散射. 弹性散射的散射光是与激发光波长相同的成分.非弹性散射的散射光有比激发光波长长的和短的成分, 统称为拉曼效应 当用波长比试样粒径小得多的单色光照射气体、液体或透明试样时,大部分的光会按原来的方向透射,而一小部分则按不同的角度散射开来,产生散射光。在垂直方向观察时,除了与原入射光有相同频率的瑞利散射外,还有一系列对称分布着若干条很弱的与入射光频率发生位移的拉曼谱线,这种现象称为拉曼效应。由于拉曼谱线的数目,位移的大小,谱线的长度直接与试样分子振动或转动能级有关。因此,与红外吸收光谱类似,对拉曼光谱的研究,也可以得到有关分子振动或转动的信息。目前拉曼光谱分析技术已广泛应用于物质的鉴定,分子结构的研究谱线特征 （二）拉曼散射光谱具有以下明显的特征： a.拉曼散射谱线的波数虽然随入射光的波数而不同,但对同一样品,同一拉曼谱线的位移与入射光的波长无关,只和样品的振动转动能级有关； b. 在以波数为变量的拉曼光谱图上,斯托克斯线和反斯托克斯线对称地分布在瑞利散射线两侧, 这是由于在上述两种情况下分别相应于得到或失去了一个振动量子的能量。 c. 一般情况下,斯托克斯线比反斯托克斯线的强度大。这是由于Boltzmann分布,处于振动基态上的粒子数远大于处于振动激发态上的粒子数。 （三）拉曼光谱技术的优越性 提供快速、简单、可重复、且更重要的是无损伤的定性定量分析,它无需样品准备,样品可直接通过光纤探头或者通过玻璃、石英、和光纤测量。此外 1 由于水的拉曼散射很微弱,拉曼光谱是研究水溶液中的生物样品和化学化合物的理想工具。 2 拉曼一次可以同时覆盖50-4000波数的区间,可对有机物及无机物进行分析。相反,若让红外光谱覆盖相同的区间则必须改变光栅、光束分离器、滤波器和检测器 3 拉曼光谱谱峰清晰尖锐,更适合定量研究、数据库搜索、以及运用差异分析进行定性研究。在化学结构分析中,独立的拉曼区间的强度可以和功能集团的数量相关。 4 因为激光束的直径在它的聚焦部位通常只有0.2-2毫米,常规拉曼光谱只需要少量的样品就可以得到。这是拉曼光谱相对常规红外光谱一个很大的优势。而且,拉曼显微镜物镜可将激光束进一步聚焦至20微米甚至更小,可分析更小面积的样品。 5 共振拉曼效应可以用来有选择性地增强大生物分子特个发色基团的振动,这些发色基团的拉曼光强能被选择性地增强1000到10000倍。（四）几种重要的拉曼光谱分析技术 1、单道检测的拉曼光谱分析技术 2、以CCD为代表的多通道探测器用于拉曼光谱的检测仪的分析技术 3、采用傅立叶变换技术的FT-Raman光谱分析技术 4、共振拉曼光谱分析技术 5、表面增强拉曼效应分析技术 (五) 拉曼频移,拉曼光谱与分子极化率的关系 1、拉曼频移：散射光频与激发光频之差,取决于分子振动能级的改变,所以它是特征的,与入射光的波长无关,适应于分子结构的分析 2、拉曼光谱与分子极化率的关系 分子在静电场E中,极化感应偶极矩P为静电场E与极化率的乘积 诱导偶极矩与外电场的强度之比为分子的极化率 分子中两原子距离最大时,极化率也最大 拉曼散射强度与极化率成正比例 （六）应用激光光源的拉曼光谱法 应用激光具有单色性好、方向性强、亮度高、相干性好等特性,与表面增强拉曼效应相结合,便产生了表面增强拉曼光谱。其灵敏度比常规拉曼光谱可提高104~107倍,加之活性载体表面选择吸附分子对荧光发射的抑制,使分析的信噪比大大提高。已应用于生物、药物及环境分析中痕量物质的检测。共振拉曼光谱是建立在共振拉曼效应基础上的另一种激光拉曼光谱法。共振拉曼效应产生于激发光频率与待测分子的某个电子吸收峰接近或重合时,这一分子的某个或几个特征拉曼谱带强度可达到正常拉曼谱带的104~106倍,有利于低浓度和微量样品的检测。已用于无机、有

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键审批稿

E L L M A N试剂法测定 自由巯基和二硫键 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

ELLMAN试剂测定自由巯基试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 S S NO2NO2 -OOC-OOC + SH S- S NO2 NO2 -OOC -OOC + S DTNB TNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在*103M-cm-~*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限来计算（吸光系数取*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=（*103LM-cm-*1cm）=*10-5mol/L *10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为*10-5mol/L*18790g/mol=L=ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有：

1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm 的吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对 SDS很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在，其降解速度为%/h，在 5.pH值，其降解速度为%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH 12 时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF 批号：080229 浓度ml G-CSF 批号：080126 浓度ml 10k超滤膜 PALL 2.试剂 Sequencing Grade Modified Trypsin,Promega，lot#237826。20 ug/小瓶。 加入20 ul 50mM NH4HCO3，溶解，配成1 ug/ ul的酶液。 1M DTT 刘春凤提供 TFA（三氟乙酸）：TEDIA Lot# 705114 乙腈：Fisher Scientific Lot# 055848 Starter kit for MALDI-TOF MS：BRUKER DALTONICS，Lot NO 2007-208241-001(including α-Cyano-4-hydroxycinnamic

自由基及检测方法

ESR 电子顺磁共振（EPR）或称电子自旋共振（ESR）现象最早发现于1944年。它利用具有未成对电子的物质在磁场作用下吸收电磁波的能量使电子发生能级间的跃迁的特征，对顺磁性物质进行检测与分析。 自旋捕集方法是将不饱和的抗磁性化合物（自旋捕集剂）加入反应体系,与反应体系中产生的各种活性高、寿命短的自由基结合形成相对稳定的自旋加合物,以适于ESR检测其原理是利用适当的自旋捕捉剂与活泼的短寿命自由基结合,生成相对稳定的自旋加合物,可以用电子自旋共振波谱法检测自旋加合物的数量,利用自旋加合物的数量来计算原来自由基的多少。 H： V： ESR测自由基是怎么被检测的（细胞，组织，溶液？体内，体外？） (MGD)2 - Fe2 +,是含有10mmol·L- 1MGD 和2mmol·L- 1FeSO4的溶液。 体外捕集：处死后取组织（血液、细胞），加入捕集剂，ESR测定 体内捕集：腹腔注射捕集剂，处死取组织（血液、细胞），ESR测定 腹腔注射几乎没有检测到自由基信号，或者信号很弱，而处死后样品加捕获剂则可以检测到自由基信号。 通用捕获剂 典型的自旋捕捉剂是亚硝基化合物或氮氧化合物，把足够量的自旋捕捉剂加入到产生自由基的体系中，自旋捕获剂就会快速地和任何出现的自由基反应，最后给出稳定的可检测的氮样氧自由基加合物。所形成的自由基加合物的ESR 谱上有被捕自由基基因给出的超精细分裂,可鉴别被捕自由基通用自旋捕获剂所形成的自由基加合物对自由基结构变化相当敏感， ESR 技术检测O-2 O-2可以与1，2-二羟基苯-3，5-二磺酸钠(Tiron)(钛铁试剂)快速反应生成一种称之为“Tiron 半醌自由基”的自旋加合物，比较稳定，可在室温下应用电子顺磁共振波谱仪(EPR)进行检测，从而解决了生理条件下水溶液中寿命极其短暂的O-2·的定性和定量问题 ESR 技术检测·OH DMPO作自由基捕获剂对自由基结构变化相当敏感,可以提供自由基结构的详细信息。它与·OH产生的自旋加合物的ESR谱表现出特别容易识别的特征谱线。在溶液中容易形成的自我捕集产物二聚体自由基不会干扰实验结果。 ESR 技术检测血红蛋白结合的一氧化氮 在组织或血液中，一氧化氮大多与氧或过渡金属反应生成了硝酸盐或亚硝酸盐以及一氧化氮与金属的配合物。一氧化氮与血红蛋白的结合速率常数非常高，而且能够得到有特征的ESR 波谱。利用这一性质，我们可以用血红蛋白作为一氧化氮的捕集剂检测一氧化氮自由基。但是，HbNO 极易氧化，这就限制了这种方法在富氧条件下的应用。 ESR 技术检测生物体系产生的一氧化氮 一氧化氮与含金属蛋白反应产生的亚硝酰的金属配合物，往往会抑制细胞中许多重要的酶，对细胞产生毒害作用。目前应用较多的捕集剂的有Fe2+- (DETC)2，它可与一氧化氮形成稳定的单亚硝酰-铁配合物MNIC，给出特征的ESR 波谱。但由于Fe2+-( DETC)2不溶

硫醇是环氧树脂固化剂

硫醇是环氧树脂固化剂的最要品种，主要用于胶粘剂领域。环氧树脂固化剂品种繁多，包括常温和加热固化剂2大类，能满足大部分场合使用要求。但在低温速固化领域，只有硫醇较适用，它在快速修补胶及冬季作业场合有很大优势，其他同化剂无法替代。由于硫醇同化剂的生产技术要求较高，国内尚无生产，一般为进口产品，如美国的3-800牌号应用较为普遍。为填补国内空白，广州川井电子材料有限公司采用制备多元硫醇酯并进而扩链的方法，制备出了硫醇固化剂，并在固化性能方面作了应用研究。 一、实验部分 1、主要原料 β-巯基丙酸：工业品，德国Brunobock公司；季戊四醇：工业品，瑞典柏斯托公司；甲苯和对甲苯磺酸：化学纯，广东西陇化工厂；环氧树脂828(EEW：190)，工业品，shell 公司；1，8-二氮杂-双环十一烯-7(DBu)：工业品，日本Appollo公司；苄基二甲胺及DMP-30：工业品，台湾长春树脂厂。 2、固化剂的合成 (1)反应原理 β-巯基丙酸与季戊四醇反应如下： 此处的关键点在于控制A(SH)4用量，尽可能的使A(SH)4分子上有1个巯基与环氧基反应；专家强调：否则容易造成凝胶使扩链反应失败。 a.在装有机械搅拌、温度计、回流冷凝管的2000mL三口烧瓶中，加入136g(1.0mol)季戊四醇，466g(4.4mol)β-巯基丙酸，300mL甲苯和1.90g对甲苯磺酸，回流反应5h自然冷却，用去离子水洗涤到中性，减压蒸馏得无色油状液体季戊四醇四巯基丙酸酯以A(SH)4表示)，重427g，产率96.7%。 b.取78gA(SH)4和22g环氧树脂828置于烧瓶中，加热到100℃反应4h冷却，得黏稠状

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M A N试剂法测定自 由巯基和二硫键 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012

E L L M A N试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 DTNBTNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在13.6*103M-cm-~14.25*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在0.2-0.7之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限0.2来计算（吸光系数取14.15*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=0.2/（14.15*103LM-cm-*1cm）=1.4*10-5mol/L(1.4*10-8mol/ml)，需要蛋白浓度为 1.4*10-5mol/L*18790g/mol=0.2631g/L=0.2631mg/ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm的 吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对SDS 很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为 0.02%/h，在 5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在 pH12时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料：

超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)

超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法) 简介： 超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。 Leagene 超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子清除能力检测试剂盒，其检测原理是利用羟胺氧化的方法可以检测生物体系中超氧阴离子自由基(O 2-)，即超氧阴离子自由基(O 2-)与羟胺反应生成NO 2-，在一定范围内颜色深浅与超氧阴离子自由基(O 2-)成正比，根据NO 2-反应的标准曲线将A 530换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出O 2-浓度。该试剂盒主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子清除能力。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 蒸馏水 2、 实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等 3、 研钵或匀浆器 4、 离心管或试管 5、 低温离心机 6、 恒温箱或水浴锅 7、 比色杯 8、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 编号 名称 TO1123 50T Storage 试剂(A): NO 2-标准(1mM) 1ml RT 试剂(B): O 2- Lysis buffer 125ml RT 试剂(C): 羟胺溶液 30ml RT 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 30ml 4℃ 避光 试剂(E): 萘胺显色液 30ml 4℃ 避光 使用说明书 1份

1、准备样品： ①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取预冷的O2-Lysis buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃离心，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。 ③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用O2- Lysis buffer 进行恰当的稀释。 2、配制系列NO2-标准溶液：取出NO2-标准(1mM)恢复至室温后，以NO2-标准(1mM) 按下表继续稀释： 加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 NO2-标准(1mM)0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸馏水0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60 3、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意 避免产生气泡。如果样品中的超氧阴离子自由基浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。 加入物(ml) 空白管标准管测定管 蒸馏水1—— 系列NO2-标准(1-6号管) — 1 — 待测样品——0.25 O2- Lysis buffer ——0.25 羟胺溶液——0.5 混匀，25℃水浴孵育。 氨基苯磺酸显色液0.5 0.5 0.5 萘胺显色液0.5 0.5 0.5 混匀，30℃水浴孵育。 4、O2-测定：以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯)检测标准管、测定管530nm处吸光度(A标准、A测定)。 计算： 以系列NO2-标准(1-6号管)含量(μM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算NO2-含量。根据如下公式计算具体样品中超氧阴离子

3_巯基_2_丁醇的合成

化学试剂,1999,21(5),309;317 3-巯基-2-丁醇的合成 田红玉3　孙宝国　徐理阮 (北京轻工业学院化工系,北京100037) 32巯基222丁醇是合成食用香料2,32丁二硫醇的副产物之一,同样是一种具有葱肉香的香料化合物[1],主要用于肉类、家禽类及烧烤食品中。与一般的香料化合物相比,它具有更宽的可使用质量分数范围((01002～20)×10-6)。它既可以作为一种香料单独使用,又可以作为一种组分与其他香料化合物复配使用。 32巯基222丁醇的合成可以采用2,32环氧 丁烷为原料。2,32环氧丁烷属于环氧化合物,文献[2]中较全面地论述了该类化合物的化学性质。环氧化合物在含硫的亲核试剂进攻下容易进行开环的亲核加成,这些亲核试剂包括硫化氢、硫醇、苯硫酚、硫氰酸盐、硫脲等多种含硫化合物。文献[3]报道了1,22环氧丙烷与硫氢化钾的乙醇溶液反应,得到了12巯基222丙醇。本文根据这些文献,用2,32环氧丁烷与硫氢化钠的乙醇溶液反应,生成32巯基222丁醇。反应方程式如下: C CH 3 O H CH CH 3 +N aH S C 2H 5OH C CH 3OH H C SH H CH 3 1　实验部分111　仪器与试剂 岛津I R 2400型红外光谱仪;Q P 25000型质谱仪;硫元素分析采用钡盐滴定法。 实验所用的试剂均为市售化学纯试剂。1.2　实验操作1.2.1　硫氢化钠的制备 在250mL 的四口圆底烧瓶上安装温度计、搅拌器和回流冷凝管,回流冷凝管连接氯化钙干燥管,再连接一碱液吸收装置,烧瓶的另一口安装导气管。往烧瓶中加入100mL 无水乙醇, 然后迅速加入5g 切成小块的洁净的金属钠,搅拌,使钠完全溶解,用冰水浴降温,保持温度在0～5℃。往装有硫化钠的烧瓶中滴加稀硫酸,生成硫化氢气体,经过氯化钙干燥管、安全瓶导入钠的乙醇溶液中至饱和。1.2.2　32巯基222丁醇的制备 将14g (012m o l )2,32环氧丁烷滴加至11211制备的硫氢化钠溶液中,同时搅拌,并通入硫化氢气体,保持温度在25℃,反应6h 。将反应混合物倒入3倍体积的水中,用醋酸中和至中性,用二氯甲烷(60mL ×3)萃取,合并有机相,用无水硫酸钠干燥后,常压蒸馏,除去二氯甲烷,减压蒸馏,收集41～43℃ 797.4Pa 的馏分。产品为无色液体,产率5616%。 I R ,c m -1 :3400(s ),2960(s ),2920(m ),2860(m ),2550(w ),1450(m ),1375(m ),1350～1260(m ),1150(m )。硫元素分析,实测值(计算值),%:S 30130(30119)。质谱:106(分子离子峰),91,88,73,45(基峰),62,61。2　结果与讨论 211　我们发现在2,32环氧丁烷与硫氢化钠溶 液反应过程中,导入硫化氢可以明显提高产率至5616%,与文献[3]中12巯基222丙醇的产率相比,提高了25%以上。 212　温度对2,32环氧丁烷与硫氢化钠溶液反应也有很大的影响,反应温度过高,产率会明显下降,因为温度升高会降低硫化氢在乙醇溶液中的溶解度,从而降低起反应作用的H S -的浓度。温度太低,反应速度下降,产率也略有下降,研究表明,反应温度最好控制在20～25℃,反应时间为6h 。 (下转第315页) 9 03第21卷第5期 田红玉等:32巯基222丁醇的合成

ELLM试剂法测定自由巯基和二硫键

E L L M试剂法测定自由巯基 和二硫键 Prepared on 22 November 2020

ELLMAN试剂测定自由巯基试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoicacid(DTNB)5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自由巯基进行定量分析[2]。 DTNBTNB2- 根据文献记载，TNB的吸光系数在*103M-cm-~*103M-cm-之间[3,4]。吸光度测量的最灵敏范围在之间。A=εbc，其中A为吸光度，ε是摩尔吸收光系数或消光系数，ε单位为升/（摩尔·厘米）[L/(mol·cm）]。以吸光度下限来计算（吸光系数取*103M-cm-），需要TNB的浓度为c=（*103LM-cm-*1cm）=*10-5mol/L*10- 8mol/ml)，需要蛋白浓度为*10-5mol/L*18790g/mol=L=ml. 我们的条件可以达到这个检测限度。 ELLMAN试剂法测定自由巯基主要的影响因素有： 1.EDTA的适量加入有助于TNB显色的稳定和成梯度线性关系[5]。 2.在不同缓冲液中，TNB的最大吸收波长略微不同，所以它们在412nm 的吸收也不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对 SDS很敏感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在，其降解速度为%/h，在

5.pH值，其降解速度为%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH12 时，15min之内会完全降解[7,8]。 6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF批号：080229浓度ml G-CSF批号：080126浓度ml 10k超滤膜PALL 2.试剂 SequencingGradeModifiedTrypsin,Promega，lot#237826。20ug/小瓶。加 入20ul50mMNH4HCO3，溶解，配成1ug/ul的酶液。 1MDTT刘春凤提供 TFA（三氟乙酸）：TEDIALot#705114 乙腈：FisherScientificLot#055848 StarterkitforMALDI-TOFMS：BRUKERDALTONICS，LotNO2007- 208241-001(includingα-Cyano-4- hydroxycinnamicacid(HCCA),peptidecalibrationstandard,proteincalibratio nstandardI,proteincalibrationstandardⅡ) PEG肽段反相分离流动相 A液：%TFA/H2O B液：%TFA/90%乙腈/H2O 3.仪器 质谱仪：BRUKERDALTONICSMALTI-TOF-TOFautoflexⅢ(厂内编号 KC2007-011)

拉曼光谱原理及应用简介

拉曼光谱由于近几年来以下几项技术的集中发展而有了更广泛的应用。这些技术是：CCD检测系统在近红外区域的高灵敏性，体积小而功率大的二极管激光器，与激发激光及信号过滤整合的光纤探头。这些产品连同高口径短焦距的分光光度计，提供了低荧光本底而高质量的拉曼光谱以及体积小、容易使用的拉曼光谱仪。（一）含义 光照射到物质上发生弹性散射和非弹性散射.弹性散射的散射光是与激发光波长相 同的成分.非弹性散射的散射光有比激发光波长长的和短的成分,统称为拉曼效应 当用波长比试样粒径小得多的单色光照射气体、液体或透明试样时，大部分的光会按原来的方向透射，而一小部分则按不同的角度散射开来，产生散射光。在垂直方向观察时，除了与原入射光有相同频率的瑞利散射外，还有一系列对称分布着若干条很弱的与入射光频率发生位移的拉曼谱线，这种现象称为拉曼效应。由于拉曼谱线的数目，位移的大小，谱线的长度直接与试样分子振动或转动能级有关。因此，与红外吸收光谱类似，对拉曼光谱的研究，也可以得到有关分子振动或转动的信息。目前拉曼光谱分析技术已广泛应用于物质的鉴定，分子结构的研究谱线特征 （二）拉曼散射光谱具有以下明显的特征： a.拉曼散射谱线的波数虽然随入射光的波数而不同，但对同一样品，同一拉曼谱线的位移与入射光的波长无关,只和样品的振动转动能级有关； b.在以波数为变量的拉曼光谱图上，斯托克斯线和反斯托克斯线对称地分布在瑞利散射线两侧,这是由于在上述两种情况下分别相应于得到或失去了一个振动量子的 能量。

c.一般情况下，斯托克斯线比反斯托克斯线的强度大。这是由于Boltzmann分布，处于振动基态上的粒子数远大于处于振动激发态上的粒子数。 （三）拉曼光谱技术的优越性 提供快速、简单、可重复、且更重要的是无损伤的定性定量分析，它无需样品准备，样品可直接通过光纤探头或者通过玻璃、石英、和光纤测量。此外 1由于水的拉曼散射很微弱，拉曼光谱是研究水溶液中的生物样品和化学化合物的理想工具。 2拉曼一次可以同时覆盖50-4000波数的区间，可对有机物及无机物进行分析。相反，若让红外光谱覆盖相同的区间则必须改变光栅、光束分离器、滤波器和检测器3拉曼光谱谱峰清晰尖锐，更适合定量研究、数据库搜索、以及运用差异分析进行定性研究。在化学结构分析中，独立的拉曼区间的强度可以和功能集团的数量相关。4因为激光束的直径在它的聚焦部位通常只有0.2-2毫米，常规拉曼光谱只需要少量的样品就可以得到。这是拉曼光谱相对常规红外光谱一个很大的优势。而且，拉曼显微镜物镜可将激光束进一步聚焦至20微米甚至更小，可分析更小面积的样品。5共振拉曼效应可以用来有选择性地增强大生物分子特个发色基团的振动，这些发色基团的拉曼光强能被选择性地增强1000到10000倍。 （四）几种重要的拉曼光谱分析技术 1、单道检测的拉曼光谱分析技术

ELLMAN试剂法测定自由巯基和二硫键

ELLMAN试剂测定自由巯基 试验基于的原理： 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) 5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)在412nm没有吸收，与巯基反应后，生成2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）[1]。TNB2-在412nm有很强的吸收，可以用于对肽段的自 2- 吸光度 0.2来计算-*1cm） 1.4*10 1. 2. 不 3.同，要根据选择的缓冲液来确定[5]。另外，TNB的分光光度法分析对SDS很敏 感[6]。 4.DTNB随着pH的升高，降解速度加快。在pH7.0，其降解速度为0.02%/h，在 5.pH值8.0，其降解速度为0.2%/h,随着pH值得升高，降解速度加快，在pH 12 时，15min之内会完全降解[7,8]。

6.摩尔吸收光系数在不同的温度下不同，随温度的升高而下降[4]. 试验方案 主要材料： 1.材料 PEG-G-CSF 批号：080229 浓度4.32mg/ml G-CSF 批号：080126 浓度6.9mg/ml 小瓶。 NO B液：0.1%TFA/90%乙腈/H2O 3.仪器 质谱仪：BRUKER DALTONICS MALTI-TOF-TOF autoflexⅢ(厂内编号 KC2007-011) Beckman 22R台式离心机（厂内编号AM-039） Beckman DU-800 紫外分光光度计（厂内编号KC2007-005）

恒温循环仪：JULABO F12-ED（厂内编号KC2008-003） 反相柱：Symmetry C18 5um 300à 高压液相仪器：，（UV/Visible Detector） 试验过程： 一、缓冲液替换 PEG-G-CSF和G-CSF进行缓冲液替换，超滤替换缓冲液为50mM NH4HCO3， 稀释 中加入

半胱氨酸

半胱氨酸 科技名词定义 中文名称：半胱氨酸 英文名称：cysteine;Cys 定义：学名：2-氨基-3-巯基丙酸。一种脂肪族的含巯基的极性α氨基酸，在中性或碱性溶液中易被空气氧化成胱氨酸。L-半胱氨酸是蛋白质合成编码氨基酸，哺乳动物非必需氨基酸和生糖氨基酸。 D-半胱氨酸存在于萤火虫的萤光素酶中。符号：C。 所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；氨基酸、多肽与蛋白质（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 百科名片 半胱氨酸，一种生物体内常见的氨基酸，人体必须的氨基酸之一。分子式：cysteine HSCH2CH（NH2）COOH，为含硫α-氨基酸之一，遇硝普盐（nitroprusside）呈紫色（因SH而显色），存在于许多蛋白质、谷胱甘肽中，与Ag+，Hg+，Cu+等金属离子可形成不溶性的硫醇盐（mercapti－de）。即R －S－M′， R－S－M″－S－R（M′，M″各为1价、2价金属）。 目录 基本信息 使用说明 技术指标 合成过程 代谢过程 相关产品 基本信息

半胱氨酸 cysteine(Cys) 1名称：cysteine 2缩写：Cys 3分子量：157.5 一种生物体内常见的氨基酸，可由体内的蛋氨酸（甲硫氨酸，人体必需氨基酸）转化而来，可与胱氨酸互相转化。 HSCH2CH（NH2）COOH，(C3H7NSO2)为含硫α-氨基酸之一，遇硝普盐（nitroprusside）呈紫色（因SH而显色），存在于许多蛋白质、谷胱甘肽中，与Ag+，Hg+，Cu+等金属离子可形成不溶性的硫醇盐（mercapti－de）。即R－S －M′， R－S－M″－S－R（M′，M″各为1价、2价金属）。半胱氨酸是属于非必需氨基酸。在动物体内是从蛋氨酸和丝氨酸经过胱硫醚而合成。无机硫黄（来自硫酸盐）导入到半胱氨酸，在植物和细菌中，从硫酸经过3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸和亚硫酸还原生成的硫化氢通过和O- 乙酰丝氨酸或丝氨酸反应而生成。半胱氨酸的分解是在厌氧条件下通过脱硫氢酶的作用分解成丙酮酸和硫化氢和氨，或是通过转氨基作用，经由中间产物β-巯基丙酮酸分解成为丙酮酸和硫黄，在氧化条化条件下，氧化成半胱氨酸亚硫酸后，可经转氨基作用分解成为丙酮酸与亚硫酸，以及由脱羧基作用分解成为亚牛磺酸、牛磺酸等。此外，[1] 是不稳定的化合物，容易氧化还原，与胱氨酸相互转换。还可与有毒的芳香族化合物缩合成硫醚氨酸（mercapturic acid）而起解毒作用。 半胱氨酸 半胱氨酸是一种天然产生的氨基酸，在食品加工中具有许多用途，它主要用于焙烤制品，作为面团改良剂的必需成分 半胱氨酸是一种还原剂，它可以促进面筋的形成，减少混合所需的时间和所需药用的能量，半胱氨酸通过改变蛋白质分子之间和蛋白质分子内部的二硫键，减弱了蛋白质的结构，这样蛋白质就伸展开来。 使用说明

二硫键检测方法

2.3.1.4 MBP-Permatin蛋白中半胱氨酸残基及二硫键数目的测定 L半胱氨酸可于5,5-二巯基双-2硝基甲苯(DTNB)发生硫醇-二硫化物交换反应,在碱性条件下反应显黄色,在412 nm处有强烈吸收峰。该反应可特异地检测-SH,从而定量检测L半胱氨酸含量。 分析MBP标签氨基酸序列可知,该标签蛋白中不含有半胱氨酸,故不影响原核表达的Permatin中半胱氨酸残基的数目。采用DTNB 方法测定样品的巯基数，其方法的主要步骤为： 1）样品先用8 M尿素37℃处理4 h； 2）游离巯基数的测定: 向未经尿素处理的1.0 ml样品(0.38 mg/ml)中加入2 ml Tris-Gly(0.086 M Tris, 0.09 M Gly, pH 8.0)，加入50μl DTNB(10 mM DTNB, 200 mM Tris-HCl, pH 8.0)，5 min后测定412 nm 处的吸光值; 3) 总的巯基数的测定: 向经尿素处理的0.5 ml样品中加入2 ml Tris-Gly，加入50μl β-巯基乙醇（β-ME），37℃温浴1h，加入10 ml 12%三氯乙酸（TCA），37℃温浴1 h，11000 rpm离心30 min，用5 ml 12% TCA重悬沉淀两次，以彻底去除β-ME，最后用2ml Tris-Gly重溶沉淀，加入50μl DTNB溶液，5 min后测定412 nm处的吸光值。 利用公式：μmol SH/g=73.53×A412×D/C进行计算。其中A412是412 nm处的吸光值, D为稀释倍数，C为蛋白浓度, 73.53是一个系数,由106/1.36 x 104得到。

王安右 2-氨基-5-己巯基-1,3,4-噻二唑的合成

分类号论文编号 本科生毕业论文2-氨基-5-己巯基-1，3，4-噻二唑的合成 姓名：王安右 院系：生物与化学 年级专业： 2010级应用化学 指导教师：李映晖（副教授） 2014年5月

诚信承诺书 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 作者签名： 日期：

关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解兴义民族师范学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学院保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兴义民族师范学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 作者签名： 导师签名： 日期：

目录 摘要................................................................ I Abstract........................................................... I I 第一章绪论 (1) 1.1主要研究内容、选题意义 (1) 1.1.1主要研究内容 (1) 1.1.2选题意义 (1) 第二章实验部分 (2) 2.1 实验原理 (2) 2.2实验药品 (2) 2.3 实验仪器 (2) 2.4实验内容 (2) 2.4.1 1-溴己烷的合成 (2) 2.4.2 2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑的合成 (3) 2.4.3 2-氨基-5-己巯基-1,3,4-噻二唑的合成 (3) 2.5 目标化合物的结构表征 (4) 第三章结果与讨论 (5) 3.1 2-氨基-5-己巯基-1,3,4-噻二唑的合成 (5) 3.2 温度对反应的影响 (5) 3.3 时间对反应的影响 (6) 第四章结论 (7) 参考文献 (7) 致谢 (8) 附录 (10)

拉曼光谱现状研究

拉曼光谱现状研究 拉曼光谱（Raman spectra），是一种散射光谱。它是1928年印度物理学家C.V. Raman发现的。对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息，并应用于分子结构研究的一种分析方法。拉曼光谱作为一种物质结构的分析测试手段而被广泛应用,尤其是60年代以后,激光光源的引入、微弱信号检测技术的提高和计算机的应用, 拉曼光谱得到了迅速的发展,出现了很多新的拉曼光谱技术,使拉曼光谱分析在许多应用领域取得很大的发展。目前,拉曼光谱已广泛应用于材料、化工、石油、高分子、生物、环保、地质等领域。 一拉曼光谱的发展 拉曼光谱又称拉曼效应,是起用发现者印度人C.V.Raman命名的。德文文献中常称之为迈克尔-拉曼(Smekal-Raman)效应,而苏联前若干年的文献中则称之为联合散射,是拉曼于1919年从水分子散射现象中发现的。拉曼光谱最初用的光源是聚焦的日光,后来使用汞弧灯由于它强度不太高和单色性差,限制了拉曼光谱的发展。60年代激光技术的兴起,以及光电讯号转换器件的发展才给拉曼光谱带来新的转机。70年代中期,激光拉曼探针的出现,给微区分析注入活力。80年代以来,一些公司相继推出了拉曼探针共焦激光拉曼光谱仪,入射光的功率可以很低,灵敏度得到很大的提高。这些性质使拉曼光谱的应用无论在广度和特异性等方面都得到了空前发展。 二拉曼光谱特点 拉曼光谱产生的原理和机制都与红外光谱不同,但它提供的结构信息却是类似的,都是关于分子内部各种简正振动频率及有关振动能级的情况,从而可以用来鉴定分子中存在的官能团。分子偶极矩变化是红外光谱产生的原因,而拉曼光谱是分子极化率变化诱导产生的,它的谱线强度取决于相应的简正振动过程中极化率的变化的大小。在分子结构分析中,拉曼光谱与红外光谱是相互补充的。因此,一些在红外光谱仪无法检测的信息在拉曼光谱能很好地表现出来。拉曼效应普遍存在于一切分子中,无论是气态,液态和固态,拉曼散射光谱对于样品制备没有特殊要求;对于样品数量要求比较少,可以是毫克甚至微克的数量级。拉曼散射最突出的优点是采用光子探针,对于样品是无损伤探测,尤其适合对那些稀有或珍贵的样品进行分析,甚至可以用拉曼光谱检测活体中的生物物质。 拉曼光谱的缺点之一是会产生荧光干扰,样品一旦产生荧光,拉曼光谱会被荧光所湮灭检测不到样品的拉曼信号。二是检测灵敏度低。 三几种常见的拉曼光谱技术 3?1共焦显微拉曼光谱技术 显微拉曼光谱技术是将拉曼光谱分析技术与显微分析技术结合起来的一种