习题2核酸分子杂交技术
第二章核酸杂交技术
（一）名词解释
1．原位杂交
2．核酸分子杂交技术
3．探针
4．反向点杂交
5．缺口平移标记法
6．随机引物标记法
7．末端标记法
8．Southern blot杂交
9．荧光原位杂交
10．菌落杂交
（二）选择题
【A型题】
1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）
A G－C含量
B A－T含量
C A－G含量
D A－C含量
E T－G含量
2．液相杂交是下列哪一种（）
A Southem印迹杂交
B Northem印迹杂交
C Dot印迹杂交
D Slot印迹杂交
E RPA实验
3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）
A 菌落杂交
B Southern杂交
C Northern杂交
D 液相杂交
E 原位杂交
4．Southern杂交通常是指（）
A DNA和RNA杂交
B DNA和DNA杂交
C RNA和RNA杂交
D 蛋白质和蛋白质杂交
E DNA和蛋白质杂交
5．最容易降解的核酸探针是( )
A cDNA探针
B dsDNA探针
C ssDNA探针
D gDNA探针
E: RNA
6．探针基因芯片技术的本质就是（）
A 核酸分子杂交技术
B 蛋白质分子杂交技术
C 聚合酶链反应技术
D 基因重组技术
E 酶切技术
7．DNA探针的长度通常为( )
A 1000 ～ 2000个碱基
B 500 ～ 1000个碱基
C 400 ～ 500个碱基
D 100 ～ 400个碱基
E. <100个碱基
8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）
A 杂化分子稳定
B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列
C 易标记
D 易合成
E 易分解
9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛
B 乙醛
C 氢氧化钠
D 碳酸钠
E 盐酸
10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）
A 脆性大
B 本底低
C 共价键结合
D 非共价键结合
E 高结合力
11．最常用的DNA探针标记方法是( )
A 随机引物
B 切口平移
C 3′ -末端标记
D 5′ -末端标记
E PCR法
12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）
A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过
B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过
C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过
D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过
E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过
13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )
A T4多聚核苷酸激酶
B 末端转移酶
C AKP
D DNA polⅡ
E DNA pol
14．血友病是一种（）
A 染色体病
B X连锁遗传病
C 先天性代谢缺陷病
D 先天畸形
E 常染色体隠性遗传病
15．预杂交中最常用的封闭剂是( )
A Denhavdt's溶液
B 5×TBE
C 1×TBE
D 1×TAE
E 1×TPE
16．检测目标是RNA的技术是（）
A Southern杂交
B Western杂交
C Northern杂交
D Eastern杂交
E 杂交淋巴瘤
17．检测靶序列是DNA的技术是（）
A Southern杂交
B Western杂交
C Northern杂交
D Eastern杂交
E 杂交淋巴瘤
18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）
A 变性
B 复性
C 复杂性
D 杂交
E 探针
21．点/狭缝杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测
22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )
A -70℃
B -30℃
C -20℃
D -10℃
E 4℃
23．Southern印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
B 检测的目标是RNA
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测
24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )
A Tm=4(G+C)+2(A+T)
B Tm=2(G+C)+4(A+T)
C Tm=6(G+C)+4(A+T)
D Tm=2(G+C)+6(A+T)
E Tm=6(G+C)+2(A+T)
25．Northern印迹杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定
的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息
C 检测的目标是RNA
D 用于基因定位分析
E 阳性菌落的筛选26
26．荧光原位杂交可以用于（）
A 快速确定是否存在目的基因
B 检测的目标是RNA
C 用于基因定位分析
D 阳性菌落的筛选
E 蛋白水平的检测
27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）
A 正常人
B 杂合体患者
C 纯合体患者
D 携带者
E 不能确定
28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )
A pH为3～5
B pH为4～5
C pH为5～6
D pH为5～9
E pH为8～11
29．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）
A 2-10bp
B 17-50bp
C 60-100bp
D 100-200bp
E 200-300bp
30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )
A 甲酰胺
B 氢氧化钠
C 浓盐酸
D 稀盐酸
E 甲醇
31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针
B cDNA探针不包含内含子
C cDNA探针不包含大量的高度重复序列
D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题
E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )
A 15～25℃
B 10～15℃
C 5～10℃
D 30～40℃
E 40～50℃
33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm 值( )
A 30～40℃
B 20～30℃
C 15～30℃
D 10～15℃
E 5℃
34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )
A 90
B 80
C 75
D 68
E 58
35．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )
A 70
B 65
C 55
D 42
E 35
36．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )
A 0.5℃
B 1～1.5℃
C 2～2.5℃
D 3～3. S℃
E 4～4.5℃
37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )
A 1～5℃
B 5～10℃
C 10～15℃
D 15～20℃
E 20～25℃
38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )
A l倍
B 1～3倍
C 3 ～5倍
D 5～8倍
E 10倍以上
39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )
A ssDNA
B 1×SSC
C 10×SSC
D 5×TBEC
E 50×TAE
40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )
A 4个
B 6个
C 8个
D 10个
E 12个
【X型题】
41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )
A DNA浓度
B DNA的分子量
C 温度
D 碱基组成
E DNA的来源
42．DNA探针的优点有（）
A 制备方法简单
B DNA探针易降解
C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择
D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽
E 单链，不存在竞争性的自身复性
43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）
A DNA加尾法
B DNA切口平移标记法
C 随机引物标记法
D 末端标记
E 尾端标记
44．关于DNA变性的描述正确的是( )
A 二级结构破
B 一级结构破坏
C 黏度降低
D 生物活性丧失
E 浮力密度增加
45．以下哪些因素可以使DNA变性（）
A 增加溶液的浓度
B 加热
C 改变溶液的pH值
D 有机溶剂
E 冷藏
46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )
A ssDNA
B BSA
C 小牛胸腺DNA
D 脱脂奶粉
E DTT
47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）
A 粘度下降
B 沉降速度增加
C 浮力下降
D 紫外光吸收增加
E 紫外光吸收减少
48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )
A AKP
B ACP
C 生物素
D 地高辛
E 荧光素
49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )
A 特异性高
B 可依赖氨基酸序列推测其序列
C 分子量小
D 可用于相似基因顺序差异性分析
E 可用末端转移酶进行5′端标记
50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）
A 采用大片段探针
B 少量的反应体积
C 高反应温度
D 不断的振摇
E 大量的反应体积
51．关于切口平移法下述正确的是( )
A 可标记线性DNA
B 可标记松散螺旋DNA
C 可标记超螺旋DNA
D 可标记存在缺口的双链DNA
E 可标记随机引物
52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）
A 毛细转移
B 真空转移
C 负压转移
D 电泳转移
E 冷冻转移
53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )
A 可标记单链DNA
B 可标记双链RNA
C 可标记单链RNA
D 比活性高达108cpm／μg DNA以上
E 常经过SephadexG-50纯化才可使用
54．可以采用哪些方法来标记探针（）
A 杂交标记法
B 切口平移标记法
C 5’-末端的标记
D 3’-末端的标记
E 化学法延长标记55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）
A 预杂交
B 杂交
C 洗脱
D 固定
E 转移
56．放射自显影可以被分为（）
A 直接放射自显影
B 氧化显影
C 封闭显影
D 间接放射自显影
E 固定显影
57．关于电转移下列描述正确的是( )
A 快速、高效
B 需要特殊设备
C 缓冲液用TAE或TBE
D 可产生高温
E 常用NC膜作为支持介质
58．预杂交的主要目的是（）
A 平衡滤膜
B 封闭非特异性杂交的位置
C 提高杂交信号的检测效率
D 便于从滤膜上除去探针
E 清除用于杂交反应检测的显色物质
59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )
A 对人体危害小
B 需要特殊设备
C 可长时间使用
D 灵敏度不如放射性探针
E 重新杂交新探比较容易
60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致
限制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（）
A PCR扩增
B RAPD
C Southerm印迹杂交
D Northern印迹杂交
E 以上都不是
61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）
A 菌落印迹杂交
B Northern印迹杂交
C Western印迹杂交
D 原位杂交
E 斑点杂交
62．关于RNA探针的描述下列正确的是( )
A 可用于随机引物标记
B 特异性高
C 灵敏度高
D 可用非同位素标记法标记
E 不易降解
63．下列哪些可以作为核酸探针使用（）
A microRNA
B 单链DNA
C 寡核苷酸
D mRNA
E 双链RNA
64．关于核酸探针的描述下列正确的是( )
A 可以是DNA
B 可以是RNA
C 可用放射性标记
D 可用非放射性标记
E 必须是单链核酸
（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？
2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3．试述Northern blot杂交的操作步骤？
4．什么是肽核酸？并简述其应用？
5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。
6．请叙述杂交探针标记方法的种类。
7．简述直接放射自显影的原理。
参考答案
（一）名词解释
1．原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。
2．核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3．探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核苷酸被称为探针。
4．反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品DNA又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知序列。
5．缺口平移标记法：该法是利用低浓度DNase I 在DNA双链上随机切开若干个切口，然后利用E. coli DNA聚合酶I的5’→3’外切酶活性和5’→3’聚合酶活性，使DNA链上的核苷酸不断被切除，而带放射性核素标记的dNTP不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。
6．随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNase I降解物。随机引物在较低的退火温度下，能与各种单链DNA模板结合。首先使双链DNA分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的4种dNTP中有一种带放射性核素标记时，在DNA 聚合酶催化下合成新的带标记的DNA链。反应结束后经纯化即可得到标记的DNA探针。
7．末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要DNA分子的末端带有羟基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将[γ-32P] ATP分子上7位磷酸基转移至寡核苷酸链的5’末端，末端标记也可在3’端进行。
8．Southern blot杂交：是研究DNA图谱的基本技术，在遗传诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的方法是将标本DNA用限制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分离各酶切片段，接着，使酶切片段DNA发生变性并转印到一固相支持物(通常是硝酸纤维素薄膜或尼龙膜)上，经固定后和标记探针进行杂交。这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。
9．荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依
据。
10．菌落杂交：用于重组细菌克隆筛选的固相杂交，称菌落杂交，主要步骤包括：①菌落平板培养；②滤膜灭菌后放到细菌平板上，是菌落粘附到经适当饱和的吸水纸上；③菌斑溶解产生单练的DNA 、固定DNA ，用
32
P 标记的探针与菌落进行杂交；④杂
交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于X 线胶片进行放射自显影；⑤将自显影胶片、滤膜、培养平板相比较，就可以确 定阳性菌落。 （二）选择题 【A 型题】
1．A 2．E 3．D 4．B 5．E 6．A 7．C 8．B 9．C 10．B 11．A 12．A
13．A 14．B 15．A 16．C 17．A 18．A 19．B 20．D 21．A 22．A 23．A 24．A
25．C 26．C 27．D 28．D 29．B 30．A 31．E 32．A 33．E 34．D 35．D 36．B 37．E 38．B 39．A 40. B 【X 型题】 41．ABCD 42．ACD 43．BC 44．ACDE 45．BCD 46．ABCD 47．ABD 48．ACDE 49．ABCD 50．BCD 51．ABCD 52．ABD 53．ABCD 54．BCD 55．ABC 56．AD 57．ABCD 58．AB
59．ABCD 60．AC
61．ADE
62．ABCD 63．BCD 64．ABCD
（三）问答题
1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？
①根据杂交核酸分子的种类，可以分为DNA 与DNA 杂交，DNA 与RNA 杂交，RNA 与RNA 杂交；②根据杂交探针标记的不同，可以分为同位素杂交和非同位素杂交；③根据杂交介质的不同，可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交；其中固相杂交又可以分为菌落杂交、Southern 杂交、Northern 杂交、点杂交和狭缝杂交。
2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围
反义核酸技术是近几年发展起来的一项新的生物技术。它是根据碱基互补的原理，设计出能特异地同相应靶基因结合的RNA 或DNA ，从而影响靶基因的转录和翻译，以达到调控靶基因表达的目
的。反义核酸技术包括反义RNA 技术，反义DNA 技术及核酶技术。
3．试述Northern blot 杂交的操作步骤？ ①RNA 的变性琼脂糖电泳；②将硝酸纤维薄
膜放在含有RNA 电泳条带的凝胶上；③转印盘中的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的吸水纸吸收，从而利用④毛细作用将胶中的变性RNA 分子转移到硝酸纤维薄膜上；⑤转印完成后，使RNA 分子固定到膜上；⑥膜上的RNA 分子与探针杂交；⑦经放射自显影或其他检测技术显示出杂交区带。
4．什么是肽核酸？并简述其应用？ 肽核酸是一种全新的DNA 类似物，在20世纪90年代由丹麦科学家发明。肽核酸中以中性的肽链
酰胺2-氨基乙基苷氨酸键取代了DNA 中的戊糖磷酸二酯键，其余结构与DNA 相似。PNA 可以通过碱基互补配对的形式识别并结合DNA 或RNA 序列，形成稳定的双螺旋结构。由于PNA 不带电荷，与DNA 和RNA 之间不存在静电斥力，因而结合的
稳定性和特异性都大为提高；PNA与DNA或RNA 的杂交能力远远优于DNA、DNA或DNA、RNA 杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鉴于上述诸多优点，近年来，PNA被广泛应用在许多高科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的研究和应用。特别是PNA可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升级产品。PNA还可用于定量PCR分析。随着对PNA研究的不断深入，PNA将显示出更大的优越性和更为广阔的应用前景。
5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用
在临床检验科，杂交技术最常用于基因诊断的例子是镰状细胞贫血病的基因诊断。
镰状细胞贫血是一种单基因遗传性疾病，病因是编码血红蛋白的基因发生点突变导致编码β链第6位的谷氨酸被缬氨酸取代，表示为β6(A 3)谷→缬。在血红蛋白基因的碱基序列上表现为第6位密码子GAA突变为GTA，也就是在这一位点发生了A到T的点突变。由于这一突变导致基因内部一个Mst II 限制性酶切位点丢失，因而针对这一情况，可以设计与β-珠蛋白基因杂交的核酸探针。先扩增靶片断，并用Mst II消化扩增的DNA片断，电泳分离消化的DNA片断。将DNA片断转印到硝酸纤维素薄膜上，采用Southern杂交技术检测DNA片断。以此将正常人、携带者和患者区分开来。
此外, 还可以用凝血因子Ⅸ基因探针检测B型血友病，凝血因子ⅩⅢ基因探针检测A型血友病，用胰岛素基因探针检测糖尿病，用苯丙氨酸羟化酶基因探针检测苯丙酮尿症。以上都是杂交技术在临床检验科进行基因诊断的例子。
6．请叙述杂交探针标记方法的种类
探针的标记方法可分为放射性核素标记法和非放射性核素标记法两大类。
(1) 放射性核素标记的探针，灵敏度高、特异性强，主要缺点是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期较短，必须随用随标。
标记手段主要有：缺口平移法、随机引物合成法和末端标记法。
(2)非放射性核素标记法：非放射性核素标记法无放射性污染，探针标记后可保存较长时间(2年以上)，但灵敏度和特异性尚不如核素标记。常用的标记物有生物素、地高辛配基和辣根过氧化物酶。标记手段类似于放射性核素标记。
①生物素标记探针：生物素(biotin)是一种水溶性维生素，可与dUTP的C－5位共价结合，用其标记的dUTP可代替dTTP掺入DNA探针。这种标记探针能与抗生物素蛋白(avidin)特异结合，而抗生物素蛋白上结合的碱性磷酸酶可使反应中的底物显色，从而指示出探针所在位置。
②地高辛配基标记探针：地高辛配基(digoxigenin)可与dUTP共价结合，用其标记的dUTP也可代替dTTP掺入DNA探针，可用与酶或荧光色素结合的抗地高辛配基抗体直接检测，或间接使用免疫荧光法进行检测。
③辣根过氧化物酶标记探针：首先将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)与带正电荷的聚乙烯亚胺(polyethylene imine)交联结合，然后由这种带正电荷的复合物与带负电荷的单链或双链DNA结
合，在戊二醛稀溶液作用下，HRP与DNA形成共价键，产生酶标记探针。杂交后利用酶促反应使底物显色即可指示探针位置。该法是利用化学反应直接将酶连接在核酸上，而不需要将酶先连接于dNTP再掺入DNA分子，因此更为简便。
7．简述直接放射自显影的原理
直接放射自显影是在暗室巾将含放射性杂化分子的滤膜与X胶片紧密的贴在一起，放入不透光的盒子，同位素衰减会释放β射线感光胶片上的银颗粒，产生稳定的潜影，胶片经冲洗后产生可见的图像。图像的位置与胶片上杂化分子的位置一致，图像的深浅反应了杂化分子的含量。X线胶片常常为弹性塑料片，在其两面均覆盖了照相感光乳胶和白明胶，白明胶覆盖在照相感光乳胶的外层以防止其被刮脱。32P、35S、14C元素放射的β射线会穿透X线胶片，少部分作用于X线胶片的照相感光乳胶。
核酸分子杂交精彩试题(全
实用标准文案 核酸分子杂交试题 一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交 二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的
核酸分子杂交技术
核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交:由Southerm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，进行杂交反应，以鉴定基中特定mRNA分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法，可推臬出癌基因的表达程度。 差异杂交（differential hybridization） 是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上，用两种混合的不同cDNA探针（如：转移性和非转移性癌组织的mRNA逆转录后的cDNA）分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。 cDNA微点隈杂交（cDNA microarray hybridization） 是指将cDNA克隆或cDNA的PCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上（如：尼龙膜或
核酸分子杂交精彩试题(全,打印)
核酸分子杂交试题 一. 名词解释: 1. 核酸分子杂交 2. DNA复性 3. Southern杂交 4. Northern杂交 5. 斑点印迹 6. 原位杂交 二. 单项选择题: 1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。 A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 2.DNA变性的本质是（）的断裂。 A. 盐键 B. 氢键 C. 离子键 D. 共价键 3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。 A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃ 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。 A. A260吸收值 B. A280吸收值 C. A320吸收值 D. A360吸收值 5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。 A. 0.1μg B.0.1—0.5μg C.0.5--1μg D.1.0—1.5μg 6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。 A. 50—300bp B. 20—200bp C.300—400bp D.200—500 7.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。 A.10℃ B.15℃ C.20℃ D.25℃ 8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。 A.5℃ B.10℃ C.15℃ D. 25℃ 9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。 A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇 10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。 A. 1Kb B. 2 Kb C. 3 Kb D. 4 Kb 11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。
第五章-分子生物学常用技术-习题
第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为
第八章核酸分子杂交技术习题
第八章核酸分子杂交技术 习题 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII
第八章核酸分子杂交技术 一．选择题 【A型题】 1.DNA链的Tm值取决于核酸分子的 A.G-C含量 B.A-T含量 C.A-G含量 D.A-C含量 E.T-G含量 2.研究得最早的核酸分子杂交种类是 A.菌落杂交 B. Southern杂交 C. Northern杂交 D.液相杂交 E.原位杂交 3.Southern杂交通常是指 A．DNA和RNA杂交 B．DNA和DNA杂交C．RNA和RNA杂交 D．蛋白质和蛋白质杂交 E．DNA和蛋白质杂交 4.基因芯片技术的本质是 A.核酸分子杂交技术 B.蛋白质分子杂交技术 C.聚合酶链反应技术 D.基因重组技术 E.酶切技术 5.寡糖苷酸探针的最大的优势是 A.杂化分子稳定 B.可以区分仅仅一碱基辑差别的靶序列 C. 易标记 D.易合成 E.易分解 6.血友病是一种 A.染色体病 B.X链锁遗传病 C.先天性代谢缺陷病 D.先天 畸形 E.常染色体隐性遗传病
7.检测的靶序列是RNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 8. 检测的靶序列是DNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 9.DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 10.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 11.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 12.标记的参与杂交反应的核酸分子，称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 13.点/缝杂交可以用于 A.快速确定是否存在目的基因 B.不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C.用于基因定位分析
医学检验本科班分子生物学检验技术试卷
医学检验本班《分子生物学检验技术》试卷 一. 选择题（在备选答案中选择一个最佳答案,每题2分,共20分）: 1. 在核酸提取时,常需要使用氯化钠,醋酸钠等盐溶液,真正的目的是（） A. 中和核酸的负离子,使其易于沉淀 B. 调节PH值 C. 保持核算的完整性 D. 提高核酸的浓度 E. 无特定目的 2. 在一个DNA分子中,如G所占摩尔比为17.2%,则A所占摩尔比为（） A. 82.8% B. 32.8% C. 17.2% D. 65.6% E. 无法计算 3.下列那项不是扩增反应所必需的?（） A. 引物和模板 B. dNTP C. Mg++ D .DNase E. 缓冲液 4. 下列那项是分子生物学技术形成的理论基础?（） A. 基因结构与功能的关系 B. 基因结构变异与疾病的关系 C. 病原微生物的基因结构特征 D. 基因的表达.调控与疾病的关系 E. 以上皆是 5. 分子生物学检验技术主要包括那些技术?（） A. 核酸分子杂交技术 B. DNA测序技术 C. PCR技术 D. DNA重组技术 E. 以上全是 6. 下列哪项检测需应用分子生物学检验技术?（） A. 肝功能检测 B.乙肝两对半检测 C. 乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测 D. 肿瘤细胞培养 E. 病原微生物培养 7. 在核酸的分离纯化过程中,为保证其一级结构的完整性,应采取（） A. 尽量简化分离步骤,缩短提取时间 B. 适当延长提取时间 C. 在37摄氏度条件下进行 D. 加入Mg++,Ca++等二价金属离子 E. 以上全是 8. 有一核酸样品,测得A260/A280=2.0,请问该样品属于哪类核酸样品?（） A. DNA B. RNA C. 是DNA,但有蛋白质污染 D. 是RNA,但有蛋白质污染 E. DNA和RNA 9. 在RNA提取和纯化过程中,为避免Rnase污染而导致RNA的降解,应采取（）
习题2核酸分子杂交技术
第二章核酸杂交技术 （一）名词解释 1．原位杂交 2．核酸分子杂交技术 3．探针 4．反向点杂交 5．缺口平移标记法 6．随机引物标记法 7．末端标记法 8．Southern blot杂交 9．荧光原位杂交 10．菌落杂交 （二）选择题 【A型题】 1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（） A G－C含量 B A－T含量 C A－G含量 D A－C含量 E T－G含量 2．液相杂交是下列哪一种（） A Southem印迹杂交 B Northem印迹杂交 C Dot印迹杂交 D Slot印迹杂交 E RPA实验 3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（） A 菌落杂交 B Southern杂交 C Northern杂交 D 液相杂交 E 原位杂交 4．Southern杂交通常是指（） A DNA和RNA杂交 B DNA和DNA杂交 C RNA和RNA杂交 D 蛋白质和蛋白质杂交 E DNA和蛋白质杂交 5．最容易降解的核酸探针是( ) A cDNA探针 B dsDNA探针 C ssDNA探针 D gDNA探针 E: RNA 6．探针基因芯片技术的本质就是（） A 核酸分子杂交技术 B 蛋白质分子杂交技术 C 聚合酶链反应技术 D 基因重组技术 E 酶切技术 7．DNA探针的长度通常为( ) A 1000 ～ 2000个碱基 B 500 ～ 1000个碱基 C 400 ～ 500个碱基 D 100 ～ 400个碱基 E. <100个碱基 8．寡核苷酸探针的最大的优势是（） A 杂化分子稳定 B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列 C 易标记 D 易合成 E 易分解 9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛
核酸化学2
教案 20010～2011学年第二学期 课程名称生物化学 院（部）医学院 教研室(实验室) 生物化学与分子生物学 授课班级09级药学理论 主讲教师刘广超 职称教授 使用教材《生物化学》（6版）吴梧桐主编人民卫生出版社 生物化学实验指导》石渊渊主编河南大学出版社 河南大学教务处制 二○○八年二月
教学过程
四 DNA与基因组织 一、DNA与基因 基因是一段含有特定遗传信息的核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。 基因分为结构基因和调节基因 结构基因（structural gene）：有实际表达产物, 为特定的RNA和多肽编码的基因 调节基因或调节顺序（regulatory sequence）：DNA分子中只起调节功能的非转录和非翻译序列 ●基因组(genome): 某生物体所含全部基因的总和 ●基因组学（genomics）：研究生物体的基因组的 大小、组织和基因组成的学科 ★可见：基因是实体, 其物质基础是DNA(或RNA); 基因是遗传信息传递和性状分化发育的依据；基因(类型)是可分的。 二、原核生物基因组的特点 1. 除调节序列和信号序列外, DNA的大部分为结构基因，每个基因出现频率低。 2. 功能相关的基因常串联在一起, 并转录在同一mRNA中（多顺反子）。 3. 有基因重叠现象。 三、真核生物基因组的特点 1. DNA分子中有重复序列 单拷贝序列：在整个DNA中只出现一次或少数几次， 主要为编码蛋白质的结构基因。 中度重复序列：在DNA中可重复几十次到几千次。 高度重复序列：或称简单序列DNA，可重复几百万次 高度重复序列一般富含A-T对或G-C对。富含A-T对的在密度梯度离心时在离心管中形成的区带比主体DNA更靠近管口，富含G-C对的更靠近管底，故称为卫星DNA（satellite DNA） 2. 有断裂基因（split gene）由于基因中内含子的存在 内含子（intron)：基因中不为多肽编码，不在mRNA中出现的居间序列。 外显子（exons）：为多肽编码的基因片段。 内含子(intron)指大多数真核结构基因中的居间序列(intervening sequence)或不编码序列。它们可以转录，但在基因转录后，由这些居间序列转录的部分经加工被从初级转录本中准确除去，才产生有功能的RNA。 内含子常比外显子长，且占基因的更大比例。真核基因所含内含子的数目、位置和长度不尽相同，如鸡卵清蛋白基因的外显子被7个内含子隔开(图)，鸡卵伴清蛋白基因有17个内含子，α-珠蛋白基因有2个内含子，胶原蛋白基因含50多个内含子等。 例外：组蛋白基因(histongene)和干扰素基因(interferon gene)无内含子。 内含子的功能－－－－ ●可能含有调节信号，调控基因的表达； ●将基因分割成“可交换的单位”，有利于重新组合出新的基因 五RNA的结构与功能 ——RNA分子是含短的不完全的螺旋区的多核苷酸链。 一、RNA的结构 （一）RNA分子主要碱基：A、U、G、C （二）连接方式：3′,5′－磷酸二酯键 （三）单链:自身回折,局部双螺旋(与A-型DNA 结构相似) （有些病毒为双链RNA） （四）RNA的高级结构特点
核酸检测考核试题和答案大全
1.临床实验室若对检测系统进行性能核实,需要进行以下哪组实验(单项该题正确答案: A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案 探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D 以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案 C.Tm减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项)
核酸的分子杂交技术及其应用
核酸的分子杂交技术及其应用 1概述 核酸的分子杂交(molecular hybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA或RNA(单链)并在一定离子强度和温度下保温(复性)，若异源DNA或RNA之间的某些区域有互补的碱基序列，则在复性时可形成杂交的核酸分子。 在进行分子杂交技术时，要用一种预先分离纯化的已知RNA或DNA序列片段去检测未知的核酸样品。作为检测工具用的已知RNA或DNA序列片段称为杂交探针(probe)。它常常用放射性同位素来标记。 虽然核酸分子杂交技术的应用仅有二十多年的历史，但它在核酸的结构和功能的研究中作出了重要贡献，在基因的表达调控和物种的亲缘关系研究中也发挥重要作用。而且，随着核酸探针制备及标记技术的丰富和完善以及以不同材料为支持物的固相杂交技术的发展，使核酸分子杂交技术在分子生物学领域中的应用更加广泛。这里我们将就分子杂交技术的几个主要过程及其应用进行介绍。 2核酸探针的制备 核酸分子杂交的灵敏性主要依赖杂交探针的放射性比活度。比活度高就可提高反应的灵敏性，减少待测样品的用量。目前一般所用的是体外标记，这里介绍几种最常用的方法： 2.1DNA的切口平移 双链DNA分子的一条链有切口时，大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ可把核苷酸残基加到切口处的3’端，同时由于此酶具有5’→3’外切核酸酶活性，它还可从5’端除去核苷酸。这样5’端核苷酸的去除与3’端核苷酸的加入同时进行，导致切口沿着DNA链移动，称切口平移(nicktranslation)。常用于在双链DNA 上打开切口的酶为胰DNA酶Ⅰ。由于高放射性比活度的核苷酸置换了原有核苷酸，就有可能制备比活度大于108计数/(分.μg)的32P标记的DNA探针。 2.2单链DNA探针的制备 与传统的双链探针相比，单链探针由于不存在互补链，因此可以消除由探针的两条链重退火形成无效杂交体的可能。最常用的是以M13噬菌体载体合成单链DNA探针的方法。其主要原理是用人工合成的寡核苷酸引物(其序列与载体上固定区段的序列相互补。可从生物试剂公司直接购买)与来自重组M13噬菌体的单链DNA退火，然后以此寡核苷酸作为引物在大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow大片段催化下合成互补的放射性标记DNA。 2.3单链RNA探针的制备 首先将感兴趣的DNA序列到带有SP6噬菌体或T7及T3噬菌体的启动子的重组载体质粒中。由于这些重组质粒带有的强启动子能被噬菌体的依赖DNA的RNA聚合酶所识别。因此，当把线状质粒与适当的依赖DNA的RNA聚合酶及4种rNTP(核糖核苷三磷酸)在体外混合并温育时，就可在噬菌体启动子处开始合成RNA。 单链RNA探针除具有单链DNA探针的优点之外，还具有：①合成效果高(模板可反复被转录)；②
(完整版)现代分子生物学试题答案
1．SD序列：起始密码子AUG上游5-10个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA(也有说是AGGAGG)，此序列称 SD序列(Shine-Dalgarno sequence) 2．顺式作用元件：cis-acting element是指对基因表达有调控活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同处于一个DNA 分子上的基因 3．核小体nucleosome构成真核染色质的一种重复珠状结构，是由大约200 bp的DNA区段和多个组蛋白组成的大分子复合体。其中大约146 bp的DNA区段与八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两分子)的组蛋白组成核小体的核心颗粒，核心颗粒间通过一个组蛋白H1的连接区DNA彼此相连。 基因产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。 冈崎片段Okazaki fragment 在DNA不连续复制过程中，沿着后随链的模板链合成的新DNA片段， 模板链DNA双链中其序列与编码链或信使核糖核酸互补的那条链。在DNA复制或转录过程中，作为模板指导新核苷酸链合成的亲代核苷酸链。 基因家族真核生物的基因组中有很多来源相同、结构相似、功能相关的基因，将这些基因称为基因家族 蛋白质内含子其DNA序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的aa序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。 翻译内含子mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列 Northern blot过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段 Sorthern blot 蛋白激酶C protein kinase丝氨酸/苏氨酸激酶的家族成员。在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油和钙离子所激活。 原癌基因proto-oncogene调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。突变后转化成为致癌的癌基因。 多顺反子mRNA两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸(mRNA)。多顺反子mRNA一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。 Alternative splicing在高等真核生物中，内含子通常是有序或组成型地从mRNA前体分子中被剪接，然而，在个体发育或细胞分化时，可以有选择地越过某些外显子或某个剪接点进行变位剪接，产生出组织或发育阶段特异性mRNA，成为内含子的可变剪接。 端粒酶端粒酶是一种含RNA链的逆转录酶，通过识别并结合于富含G的端粒末端，以所含的RNA为模板，逆转录合成端粒。 X染色体失活人和鼠的Xist（ Xi-specific transcript）基因只在失活的X染色体上表达，编码一功能性RNA分子，此分子能与Xic位点相互作用，引起后者构象变化，更容易与各种蛋白因子相结合，最终导致X染色体失活 锌指结构指的是在很多蛋白中存在的一类具有指状结构的结构域，这些具有锌指结构的蛋白大多都是与基因表达的调控有关的功能蛋白由一个含有大约30个氨基酸的环和一个与环上的4个Cys或2个Cys和2个His配位的Zn构成， 反式作用因子trans-acting factor是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。 染色质chromatin chromosome 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。 所谓C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。 一般高等生物的C值均大于低等生物,但某些植物或两栖动物的C值比人高出几十倍,这种C值与进化复杂性不一致的现象称为C值反常现象或称为C值矛盾（C-value paradox） 断裂基因或不连续基因（interrupted/discontinuous genes） 所谓断裂基因就是基因的编码序列在DNA分子上是不连续的，为不编码的序列所隔开。编码的序列称为外显子（exon），不编码的序列称为内含子（intron）。 寡核苷酸（oligonucleotide）：一般是指二至十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。 回文序列是指沿同一方向(如5’→3’)序列相同的结构，即碱基序列的反向重复(inverted repeats) 核酸的变性：是指核酸双螺旋区的氢键断裂，DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象 变性的DNA在适当的条件下，两条彼此互补的DNA单链可以重新缔合形成双螺旋结构，这个过程称之为复性 DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制
第八章 核酸分子杂交技术习题
第八章核酸分子杂交技术 一．选择题 【A型题】 1.DNA链的Tm值取决于核酸分子的 A.G-C含量 B.A-T含量 C.A-G含量 D.A-C含量 E.T-G含量 2.研究得最早的核酸分子杂交种类是 A.菌落杂交 B. Southern杂交 C. Northern杂交 D.液相杂交 E.原位杂交 3.Southern杂交通常是指 A．DNA和RNA杂交B．DNA和DNA杂交C．RNA和RNA杂交D．蛋白质和蛋白质杂交E．DNA和蛋白质杂交 4.基因芯片技术的本质是 A.核酸分子杂交技术 B.蛋白质分子杂交技术 C.聚合酶链反应技术 D.基因重组技术 E.酶切技术 5.寡糖苷酸探针的最大的优势是 A.杂化分子稳定 B.可以区分仅仅一碱基辑差别的靶序列 C.易标记 D.易合成 E.易分解 6.血友病是一种 A.染色体病 B.X链锁遗传病 C.先天性代谢缺陷病 D.先天畸形 E.常染色体隐性遗传病
7.检测的靶序列是RNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 8. 检测的靶序列是DNA的技术是 A. Southern杂交 B. Western杂交 C. Northern杂交 D. Eastern杂交 E.杂交淋巴瘤 9.DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 10.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 11.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 12.标记的参与杂交反应的核酸分子，称 A.变性 B.复性 C.复杂性 D.杂交 E.探针 13.点/缝杂交可以用于 A.快速确定是否存在目的基因 B.不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C.用于基因定位分析
完整版分子生物学期末复习试题及答案
一、名词解释 二、分子生物学：包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与功能，以及从分子水平研究生命活动 RNA组学：RNA组学研究细胞中sn mRNA啲种类、结构和 功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下sn mRNA啲表达具有时间和空间特异性。增色效应：DNA变性时其溶液OD260曽高的现象。 减色效应：DNA复性时其溶液OD260笔低的现象。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%寸的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm) 。其大小与G+C含量成正比。 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260 (absorbanee , A, A260代表溶液在260nm处的吸光率) 值作图，所得的曲线称为解链曲线。 DNA复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 核酸分子杂交：在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件(温度及离子强度) 下，就可以在不同的分子间形成杂化双链，这种现象称为核酸分子杂交。 基因：广义是指原核生物、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位。狭义指能产生一个特定蛋白质的DNA序列。 断裂基因：不连续的基因称为断裂基因，指基因的编码序列在DNA上不连续排列而被不编码的序列所隔开。 重叠基因：核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因，或称嵌套基因。 致死基因：删除后可导致机体死亡的基因。 基因冗余：由于一基因在个体中有若干份拷贝，当删除其中一个时，个体的表型不发生明显变化。 DNA重组：DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合， 又称为遗传重组或基因重排。 同源重组：发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。 接合作用：当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)的DNA转移称为接合作用(conjugatio n)。 转化作用：通过自动获取或人为地供给外源DNA使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，称为转化作用(transformation) 。 转导作用：当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、再次感染另一 (供体) 细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用位点特异重组：位点特异重组(site-specific recombi natio n) 是由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。 12-23规则：重组发生在间隔为12bp到23bp的不同信号序列之间，称为12-23 规则。 转座子： ( transposon )在基因中可以移动的一段DNA 序列。 转座：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition) 。 克隆：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon) ，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 基因工程：(genetic engineering) 实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组DNA X艺学。限制性核酸内切酶：(restriction endonuclease, RE) 是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的—类内切酶。 同功异源酶：来源不同的限制酶，但能识别和切割同一位点，这些酶称同功异源酶。 同尾酶：有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称为同尾酶。 载体：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 复制：(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA 为模板合成子链DNA的过程。 半保留复制： ( semi-conservative replication )DNA 生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template) 按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。 子代细胞的DNA 一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DN 碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 复制子：(replicon ) DNA分子中能独立进行复制的单位称为复制子。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子。 复制眼：(replication eye ) DAN正在复制的部分在电 镜下观察起来犹如一只眼睛，称为复制眼。 复制叉： ( replication fork )复制一开始，复制起始点要形成一个特殊的叉型结构，是复制有关的酶和蛋白质组装成复合物
核酸检测考核试题和答案大全
A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案 探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案 D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案 减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于 Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将管放入加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项) 该题正确答案
第八章 核酸分子杂交技术
第八章核酸分子杂交技术 主要用途：①核酸定性或定量检测；②基因克隆、突变及其表达研究；③疾病的临床诊断。 第一节核酸杂交概述及基本原理 一、核酸杂交概述 ?1961年Hall等建立核酸杂交技术，探针与靶序列溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体； ?60年代中期Nygaard 等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素(NC)膜上的DNA序列奠定了基础； ?70年代末期到80年代早期，分子克隆技术的出现，各种质粒和噬菌体DAN载体系统的构建，使特异性DNA探针的来源变得十分丰富； ?80年代中期，PCR技术的发明与核酸分子杂交有机的结合，又使得核酸分子杂交技术的灵敏度大大提高； ?90年代，基因芯片技术的出现使得一次性对大量样品序列进行检测和分析成为可能，从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、 检测效率低等不足。 核酸的结构：一级结构：核苷酸的排列循序，稳定键为磷酸二酯键； 二级结构：双螺旋结构，稳定键为氢键、碱基堆积力、疏水键； 高级结构：染色体 二、核酸变性 核酸变性(nucleic acid denaturation)：在某些理化因素的作用下，维系DNA分子二级结构 的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双螺旋变成单链过程。 ?化学键变化：维持双螺旋稳定的氢键和疏水键发生断裂，断裂可以是部分的或全部的，可以是可逆的或是非可逆的。 ?化学结构变化：DNA变性改变了其空间结构，不涉及到其一级结构的改变。 DNA的变性因素：凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件。 如加热；极端的pH；有机试剂(甲醇、乙醇、尿素、甲酰胺等) 变性DNA的性质：变性能导致DNA的一些理化性质及生物学性质发生改变 ①溶液黏度降低---DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构，变性后代之以“柔软”无规则单股线性 结构，DNA黏度明显下降。 ②溶液旋光性发生改变---变性后DNA分子的对称性及局部构型改变。 ③紫外吸收增加---DNA变性后，DNA 溶液的紫外吸收增强，双链DNA＜单链DNA＜单核苷酸。变性DNA的增色效应 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 ?DNA分子在250-280nm 波长具有吸收紫外光的特性，其吸收峰值在260nm。 ?增色效应可以作为DNA变性的指标。 ?不同来源DNA的变化不一，如大肠杆菌DNA经热变性，其260nm的吸光度值可增加40%以上，其它不同来源的DNA溶液的增值范围大多在20-30%之间。 解链曲线：通常利用DNA变性后在波长260nm处吸光度(A260)的增加来监测DNA变性的过程。如果以温度对A260的关系作图，所得的曲线称为解链曲线。典型DNA变性曲线呈S型。
核酸分子杂交技术与应用综述
核酸分子杂交技术与应用综述 摘要核酸分子杂交技术是20世纪70年代发展起来的一种崭新的分子生物学技术。它是基于 DNA分子碱基互补配对原理，用特异性的核酸探针与待测样品的DNA/RNA形成杂交分子的过程。分子杂交实验依据其形式的不同可以分为液相杂交、固相杂交、原位杂交，而固相杂交又可以分为菌落杂交、点/狭缝杂交、Southern印迹杂交和Northern印迹杂交。各类型杂交稻基本原理和步骤是基本相同的，只是选用的杂交原材料、点样方法有所不同。 关键字核酸分子杂交液相杂交固相杂交原位杂交应用 本文是对分子杂交技术的原理和类型分类及其应用的一篇综述。旨在了解各种杂交类型的应用方向，即在生物、医学上的应用。 一、核酸分子杂交原理 DNA分子是由两条单链形成的双股螺旋结构，维系这一结构的力是两条单链碱基氢键和同一单链上相邻碱基间的范德华力。在一定条件下，双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成无规则线团，DNA分子成为单链，这一过程称作变性或融解。加热、改变DNA融解的pH值，或有机溶剂等理化因素，均可使DNA变性。变性的DNA粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外光吸收增加。在温度升高引起的DNA变性过程中，DNA的变性会在一个很狭窄的温度范 围内发生，这一温度范围的重点被称作融解温度T m 。T m 值得大小取决于核酸分子的G-C含量， 核酸分子的G-C含量越高，其T m 值越高。因为G-C碱基之间有三个氢键，而A-T碱基之间只有两个氢键。变性DNA只要消除变性条件，具有碱基互补的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称作复性。根据这一原理，将一种核酸单链标记成为探针，再与另一种核酸单链进行碱基互补配对，可以形成异源核酸分子的双链结构，这一过程称作杂交（hybridization）。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补序列就可以形成杂交体。 二、核酸分子杂交类型 （一）固相杂交 固相杂交是把欲检测的核酸样品先结合到某种固相支持物上，再与溶解于溶液中的杂家探针进行反应，杂交结果可用仪器进行检测，但大多数情况下直接进行放射自显影，然后根据自显影图谱分析杂交结果。 1、菌落杂交 用于重组细菌克隆筛选的固相杂交，称作菌落杂交。主要步骤包括菌落平板培养、滤膜灭菌后放到细菌平板上，使菌落粘附到滤膜上，将滤膜放到经适当溶液饱和度吸水纸上，菌斑溶解产生单链的DNA，固定DNA用32P标记的单链探针与菌落DNA进行杂交。杂交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于X线胶片进行放射自显影。将自显影胶片、滤膜、培养平板比较就可以确定阳性菌落。