噬菌体效价及转导实验
噬菌体效价测定及转导
姓名
学号：
系别：生命科学学院生物科学专业
班号：
实验日期：4月26日、5月3日
同组同学：
实验目的
1.学习噬菌体效价测定的方法
2.了解转导原理、学习转导实验方法
实验材料
菌种：E. coli K12 F、E. coli K12S、噬菌体裂解液
培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基、 EMB培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基
实验原理
1.噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑
2.噬菌体的悬浮液是由双重溶源菌（内含一个λ及一个λdg两种噬菌体）裂解而来的，因此λ及λdg两种噬菌体是等量的。
3. λ噬菌体能够侵染大肠杆菌并能使其裂解，因此能够形成噬菌斑；λdg噬菌体能够侵染大肠杆菌但不能使其裂解，因此不能够形成噬菌斑
4.噬菌体效价/噬菌体数/ml=每皿平均噬菌斑数*稀释倍数/0.5ml*2 （λdg不能够形成噬菌斑且其数量与λ相等，因此计算时乘以2）
5. λdg是缺陷型噬菌体，其基因组上带有宿主菌的发酵半乳糖的基因。当λdg侵染S菌的时候，就能够使得S菌具有发酵半乳糖的能力，因此菌落也会显现出发酵半乳糖的特征（菌落有金属光泽）。
6.转导子数/ml=每皿平均转导子数*稀释倍数/0.1ml*2 （因为裂解液为0.5ml，所以要乘以2）；转导频率=转导子/ml./噬菌体效价*100%
实验步骤
一、噬菌体效价的测定
1）熔化100mlEMB固体培养基、100ml牛肉膏蛋白胨固体培养基
2将熔化的EMB培养基中加入6.5ml的0.1%的美蓝和2ml的2%的伊红
3）用100ml熔化的EMB培养基倒六个平板。编号EMB1-EMB6
4）用100ml熔化的牛肉膏蛋白胨固体培养基倒4个平板。编号牛固1-牛固
5）水浴加热5管素琼脂，溶解后置于50摄氏度下保温。
6）稀释裂解液：取0.5ml裂解液，加入到4.5ml牛肉膏蛋白胨液体培养基，稀释成了10^-1的稀释液，以此方法，再稀释到10^-2、10^-3、10^-4.并做好标记。
7）向每支素琼脂中接入0.5ml K12S，混匀，再分别取噬菌体裂解液0.5ml（10^0、10^-2、10^-4），加入到素琼脂中，摇匀后立刻倒在牛肉膏蛋白胨平板上。
8）培养待平板凝固后于37 ℃，培养24hr
9）观察实验现象，并数出噬菌斑的多少，根据噬菌斑数量计算噬菌体效价
二、转导
1.点滴法
1）如上图，取两个EMB平板按照上图的轮廓添加试剂，注意接种的裂解液是未经稀释的裂解液。
2）在37 ℃下培养24h，然后置于室温下培养6d
3）观察实验结果
2.转导频率的测定
1）将S菌取0.5ml于空试管中，37℃预热10min,加入0.5ml噬菌体裂解液， 37℃继续保温10min。
2）用牛肉膏蛋白胨液体培养基稀释到10^-4，并注意编号
3）取0.1ml的稀释液（10^-3、10^-4）涂布在EMB平板（每种浓度对应两个EMB平板）。
37℃培养24h，并在室温下培养6d
4）观察实验结果
注意事项
1.素琼脂一定要保持在50 ℃水浴中，防止凝固
2.转导频率测定时一定要稀释到合适浓度后才能涂平板，保证培养后长出单菌落
实验结果及分析
一、噬菌体效价的测定
10^0的牛肉膏蛋白胨固体培养基中长出了霉菌、2个细菌、及1个放线菌。没有出现噬菌斑
10^-2的牛肉膏蛋白胨固体培养基中什么也没长。没有出现噬菌斑
10^-4的牛肉膏蛋白胨固体培养基中长出了霉菌、没有出现噬菌斑
实验分析：实验失败，实验平板遭到污染，可能原因是，在倒平板、涂布及接种过
程中没有严格的按照规定来操作，导致了污染，也可能是接种的噬菌斑或或s菌本身就被污染了。没有长出噬菌斑，可能原因是裂解液的浓度出了问题，问了下其他组的情况，都没有长出噬菌斑，说明很可能是噬菌体裂解液出了问题，不然何以所有的组都没有长出噬菌斑呢。
二、转导实验
1.点滴法
裂解液区域没有长出任何东西，F菌区域也什么都没有长（其他组也是这样的结果），s菌区域长出了紫色的光滑菌落，在与裂解液的交界处，仍然是紫色，没有任何变化。
实验分析：此次实验做得阳性对照F菌什么也没长，说明是老师准备的F菌液本身出现了问题，而S菌与裂解液的交界没有出现不同，由上一个实验分析可以知道，是裂解液出了
问题，因此肯定不会出现转导成功的现象。
2.转导频率的测定
所有平板长的都是紫色的菌落，对光旋转也没有发现哪一个菌落有金属光泽。
实验分析：实验失败，没有发现有金属光泽的菌落，说明长的肯定不是F菌，说明没有
转导成功，由第一个实验分析，我们就知道是噬菌体的裂解液出现问题，所以没有出现预期的实验现象。
实验讨论
本次试验，全部失败，究其原因有如下：
1.实验过程中，无菌操作不当，使得平板受到污染。
2.噬菌体裂解液有问题
3.F菌出现了问题
避开失败，我们讨论了其他问题。
1．噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑。
2. 噬菌体的悬浮液是由双重溶源菌（内含一个λ及一个λdg两种噬菌体）裂解而来的，因此λ及λdg两种噬菌体是等量的。
3. λ噬菌体能够侵染大肠杆菌并能使其裂解，因此能够形成噬菌斑；λdg噬菌体能够侵染大肠杆菌但不能使其裂解，因此不能够形成噬菌斑
4.噬菌体效价/噬菌体数/ml=每皿平均噬菌斑数*稀释倍数/0.5ml*2 （λdg不能够形成噬菌斑且其数量与λ相等，因此计算时乘以2）
5. λdg是缺陷型噬菌体，其基因组上带有宿主菌的发酵半乳糖的基因。当λdg侵染S菌的时候，就能够使得S菌具有发酵半乳糖的能力，因此菌落也会显现出发酵半乳糖的特征（菌落有金属光泽）。
6．素琼脂一定要保持在50 ℃水浴中，防止凝固
7．转导频率测定时一定要稀释到合适浓度后才能涂平板，保证培养后长出单菌落
效价检测方法
抗菌肽检测方法 1、LB培养基配制 NaCl：1% 胰蛋白胨：1% 酵母浸粉：0.5% 葡萄糖：0.5% 技术琼脂粉：2 % 将上述培养基配比，以水为溶剂，调pH值7.0，121度30分钟，灭菌备用。 2、大肠杆菌菌液制备 2.1 菌液制备：将大肠杆菌（K12D31）从斜面上刮一环转接于装液量50ml的250ml摇瓶中，置于180rpm、37℃的摇床上培养16-24h。 2.2 分光光度计测定其消光值（OD600nm）：将上述大肠杆菌菌悬液用无菌生理盐水稀释，用无菌生理盐水做空白对照，调整菌液吸光值为1.0。于4度冰箱中储存备用（菌液储存时间不得超过4天）。 3、试验菌培养基制备 将无菌LB培养基置室温待其冷却至48-50度时，按100ml无菌LB培养基中加入100μl菌液（OD600nm =1.0），摇匀。吸取含菌LB培养基10ml，使在90mm培养皿底内均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。 4、样品制备 4.1 精密称定待测的试样1.0000g，倒入精准9ml水中震荡溶解，放入100度水浴中温浴10分钟，拿出移入离心管中10000rpm离心15分钟，倒出上清液，用针筒吸取上清液，备用。 4.2 将上述3中制备好的检测培养基上用灭菌的打孔器（2.7mm）打孔，每孔中分别加入5ul 的抗菌肽测试样品溶液，取3个平板每板1空重复3板，置于37度培养箱中培养16-20小时后，测定抑菌圈直径，取平均值。 5、抗菌肽效价测定 计算公式：U（单位/克）=2X×1000×稀释倍数；X=（y -2.7）/2.1，其中： Y：抗菌肽抑菌圈直径（mm）取平均值； 2.7：孔穴直径（mm）； 2.1：抗菌肽浓度与抑菌圈直径的比值常数。 使用时间: 2013年9月26日起
P1噬菌体转导敲除基因的实验步骤
P1噬菌体转导基因敲除操作步骤 实验室常用大肠杆菌基因敲除方法为P1噬菌体转导敲除。 大肠杆菌利用噬菌体为媒介，将供体细胞DNA转移给受体细胞，从而使受体细胞的基因型 和表现型发生改变，这一过程称为转导。P1噬菌体的DNA分子量为5.8×107Da，在复制过程中， 头部包装时容易发生错误包装，可将其宿主菌（供体菌）的基因组DNA误包入蛋白质衣壳内。 当用这一噬菌体裂解液侵染新的宿主菌（受体菌）时，供体菌的DNA片段可随P1噬菌体进入受 体菌内，并可以与受体菌基因进行同源重组，从而永久性的存在于受体菌基因组上。P1转导的频 率一般很低，需要选择性标记进行转导子筛选，本实验中为卡那霉素抗性基因（KmR）。 准备材料 LB液体试管，LB半固体培养基，LB固体培养基，20%（w/v）葡萄糖溶液，1M CaCl2溶液，1M MgSO4溶液，氯仿，1M柠檬酸三钠溶液； 效价109-1010（pfu/mL） P1噬菌体储液，大肠杆菌溶源性供体菌，大肠杆菌受体菌； TM buffer：10mM Tris-HCl（pH7.4）buffer加入10mM MgSO4； P1盐溶液：10mM CaCl2与5mM MgSO4的混合溶液； 实验步骤 平板培养法 准备野生菌种子液 自保存甘油管或划线培养平板上，转接到3mL LB液体试管中，37℃，250rpm，培养过夜 （12hr）。 制备野生型P1噬菌体 1.将野生型菌株的过夜种子液，按1%（v/v）转接5mL LB液体试管，摇床培养至对数中期 （~2*108细胞/mL，OD600=0.2~0.3）。 2.加入5mM CaCl2，继续培养至菌体细胞OD600=1。 3.取出野生菌培养液，低温聚菌，加入2倍体积的TM buffer重悬菌体。 4.倒下层平板，LB固体培养基中加入5mM CaCl2。 5.取2.5mL半固体LB培养基，加入0.25mL重悬菌液，混合均匀后倒在下层平板上，轻柔 地倾斜平板使其均匀地覆盖在下层培养基表面。（注意培养基的温度不可过高，以手触摸时感觉温度舒适，建议先分别分装到15mM无菌离心管内，待凉到温度适宜后加入菌液，迅速混匀倒平 板。） 6.待琼脂凝固后，点10ul P1噬菌体储液在上层细胞琼脂表面。待噬菌体储液被上层琼脂吸 收后，将平板正置放置37℃培养过夜。对照板只有细胞，同样正置培养。（spot方法获得 的噬菌体效价虽然高，但量太少，可能无法满足后续实验需求，可在步骤5中与上层细胞琼脂同时 混合后倒平板，亦可获得高效价噬菌体） 7.计算效价，刮取噬菌体。 转导大肠杆菌供体菌（keio collection） 1.准备供体菌种子液，同野生型菌体。 2.接种100uL至5mL LB液体试管中，接种前在LB液体中加入0.1%（w/v）葡萄糖。需接 种两支试管，一支做对照用。振荡培养约1.5hr，至菌体达到对数生长期 （OD600=0.2~0.3）。
血型抗体效价测定
血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法 试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。 4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。 估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8 估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。 4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待 用。取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加 入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组 加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液 20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖， 倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管，检 查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。 凝固程度标准： ①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。 ②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。 ③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。 ④1∕4凝固：少量溶液凝固。 ⑤0凝固：溶液悟凝固现象。 若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为 V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1) (S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。) 待检样品效价计算公式： 4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5 注意事项： 4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。 4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ，盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域5min，5min后检查血浆是否凝固，如血浆凝固则可使用，未凝固则不能使用。 4.2.2.6.3 如在检测过程中，标样的1∕2凝固点高于200ul，则需重新调整羊血浆的1∕2凝固点。方法如下：取3组各10只试管 组一： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul 0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml 羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
噬菌体效价及转导实验
噬菌体效价测定及转导 姓名 学号： 系别：生命科学学院生物科学专业 班号： 实验日期：4月26日、5月3日 同组同学： 实验目的 1.学习噬菌体效价测定的方法 2.了解转导原理、学习转导实验方法
实验材料 菌种：E. coli K12 F、E. coli K12S、噬菌体裂解液 培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基、 EMB培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基 实验原理 1.噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑 2.噬菌体的悬浮液是由双重溶源菌（内含一个λ及一个λdg两种噬菌体）裂解而来的，因此λ及λdg两种噬菌体是等量的。 3. λ噬菌体能够侵染大肠杆菌并能使其裂解，因此能够形成噬菌斑；λdg噬菌体能够侵染大肠杆菌但不能使其裂解，因此不能够形成噬菌斑 4.噬菌体效价/噬菌体数/ml=每皿平均噬菌斑数*稀释倍数/0.5ml*2 （λdg不能够形成噬菌斑且其数量与λ相等，因此计算时乘以2） 5. λdg是缺陷型噬菌体，其基因组上带有宿主菌的发酵半乳糖的基因。当λdg侵染S菌的时候，就能够使得S菌具有发酵半乳糖的能力，因此菌落也会显现出发酵半乳糖的特征（菌落有金属光泽）。 6.转导子数/ml=每皿平均转导子数*稀释倍数/0.1ml*2 （因为裂解液为0.5ml，所以要乘以2）；转导频率=转导子/ml./噬菌体效价*100% 实验步骤 一、噬菌体效价的测定 1）熔化100mlEMB固体培养基、100ml牛肉膏蛋白胨固体培养基 2将熔化的EMB培养基中加入6.5ml的0.1%的美蓝和2ml的2%的伊红 3）用100ml熔化的EMB培养基倒六个平板。编号EMB1-EMB6 4）用100ml熔化的牛肉膏蛋白胨固体培养基倒4个平板。编号牛固1-牛固 5）水浴加热5管素琼脂，溶解后置于50摄氏度下保温。 6）稀释裂解液：取0.5ml裂解液，加入到4.5ml牛肉膏蛋白胨液体培养基，稀释成了10^-1的稀释液，以此方法，再稀释到10^-2、10^-3、10^-4.并做好标记。
噬菌体效价实验
中国典型培养物保存中心 China Center for Type Culture Collection (CCTCC) 噬菌体效价实验 实验材料： 菌株：CCTCC AB 2013329（λ噬菌体溶原株）Escherichia coli K12 WK 6 λCCTCC AB 2013330（λ噬菌体敏感株）Escherichia coli C600 CR34 培养基：肉汤培养基；软琼脂：肉汤培养基中加入0.5%琼脂10ml/管 培养条件：NA培养基或LB培养基，37℃ 实验步骤： 7.5ml 新鲜E.coliλ菌液（CCTCC AB 2013329）离心 菌沉淀用1ml无菌水悬浮 菌悬液加在无菌平皿中央，开皿盖，在安全柜的紫外灯下照射15秒 （0.15mJ/cm2） 加入NA培养液5ml 37℃暗培养3小时 吸取以上菌液-培养液混合物，加1 - 0.5ml氯仿震荡后离心12000rpm2分钟 上清十倍稀释至10-7 选择10-5、10-6、10-7上清稀释液100ul 与100ul受体菌（CCTCC AB 2013330） 混合 37℃温浴20分钟 混合菌液加入到NA软琼脂（不烫手）中震荡混匀倒NA平板 实验结果： 稀释度为10-4的平板：布满噬斑不可数 稀释度为10-5的平板：噬斑346个 稀释度为10-6的平板：噬斑37个 稀释度为10-7的平板：噬斑4个
图1. 上一排为平板背面照片，下一排为平板正面照片。 教学建议： 噬菌体液体放置在室温下两周会导致数量下降一个数量级。 宿主菌必须是噬菌体敏感菌株CCTCC AB 2013330，教学用普通大肠菌和噬 菌体溶原菌株不能产生噬菌斑。 琼脂的浓度（1.5%-2.0%），过高或过低的琼脂含量均不能达到好的效果。 噬菌体与细胞的比例，测定噬菌体效价应采用低感染复数。 指示菌密度是在平板上获得清晰噬菌斑效果的重要因素之一，其细胞密度不 宜过高。一般控制在1ⅹ107个细胞/ml为宜。 实验教材： 沈萍，陈向东《微生物学实验》4版. 高等教育出版社.2007, 35-39. 王建波，方呈祥《遗传学实验教程》武汉大学出版社. 2004, 111-114.
链霉素效价测定方案
链霉素效价测定方案 试验目的： 1、设计链霉素效价测定方案 2、 熟悉并掌握抗生素效价测定方法 试验器材： 双碟 陶瓦盖 钢管、钢管放置器、玻璃容器 、毛细滴管 、灭菌刻度吸管 、称量瓶 、恒温培养箱 、万分之一天平、干燥箱、恒温水浴箱 、显微镜、抑菌圈测量仪或游标卡尺 、超净工作台 、冰箱、酒精灯、接种环 供试品称量量：50mg 缓冲液： 磷酸盐缓冲液（ph7.8）取磷酸氢二钾5.59g 与磷酸氢二钾0.41g,加水使成1000ml,摇匀滤过。121℃蒸汽灭菌30min 备用。 培养基制备数量 营养琼脂培养基：100ml,作为菌种活化用。 双碟数量：8套（供试品效价测定）+8套（预试验）。共16副 小钢管：32个（供试品效价测定）+32个（预试验），共64个，每个双碟中放置4个。 1个 供试品效价测定 4个 用于预试验 5个每瓶100ml 1个 用于预试验 1个供试品效价测定 2个 每瓶250ml 7个三角瓶
操作步骤 菌种 1）枯燥芽孢杆菌【Bacillus subtilis CMCC(B) 63 501】 2）枯燥芽孢杆菌菌悬液的制备 菌液制备 取枯燥芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，加灭菌水2ml冲下菌苔，制成悬液，用吸管将此悬液接种于营养琼脂培养基上，均匀摊布，在37℃培养7天，取菌苔少许涂片，用革兰染色镜检，应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，65℃水浴内加热30min，将菌体杀死，待冷后放冰箱储藏为浓菌液。 供试品溶液的制备 供试品估计效价1000000U/g.精密称取样品50.0mg，加水50ml，稀释制成1000U/ml溶液，吸取2ml加入100ml容量瓶中，加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成20U/ml溶液，吸取7ml加入100ml 容量瓶中，制成1.4U/ml溶液, 吸取25ml加入50ml容量瓶中，制成0.7U/ml溶液,作为滴碟用供试品及标准品溶液。 培养基Ⅰ 胨5g 牛肉浸出粉3g 磷酸氢二钾3g 琼脂20g 水1000ml 除琼脂外，混合上述成分，调节ph值使比最总的ph值略高0.2，加入琼脂，加热溶化后滤过，调ph值使灭菌后为7.8～8.0，在115℃灭菌30min。
标准血清效价测定
标准血清效价测定 （一）凝集效价的测定 1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明 A ，后排标明 B ，再将各排由左而右注明号码。 2．各管均加生理盐水0．2 ml 。 3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，从第一管 中吸出0．2 ml 加入第2 管中，依次稀释至第10 管，从第10 管吸出 的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两 排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶ 64 、1∶128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。 4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型 2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。 5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而 又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见下表。 表 A 型标准血清(抗B)效价测定
表 B 型标准血清(抗A)凝集效价测定 如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述 （二）标准血清的质量要求 A 型（抗B）效价应在1∶64 以上， B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜1∶4 。 （三）亲和力的测定 所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下： 取待测血清0．1ml 放于玻片或瓷板上，取对应的10 ％红细胞生理盐水悬液0．05 ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转动玻片或瓷板，至3 分钟时观察凝集块的大小。标准血清亲和力的质量要求，在15 ～30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪（脂肪可使效价迅速降低），不可污染细菌。
实验十二 噬菌体效价的测定
实验十二噬菌体效价的测定 一、实验目的 1、学习并掌握噬菌体效价的测定原理。 2、学习并掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效价。 二、实验原理 噬菌体属于细菌病毒，它不具备完整的细胞结构，只能通过寄主细胞完成自我复制。因此人类只有通过电子显微镜才可观察到它们的形态结构。但由于噬菌体侵染细菌细胞后，可导致寄主细胞裂解死亡，并在琼脂培养基表面形成是菌斑，所以人们可以此来判断噬菌体的存在。 当烈性噬菌体侵染敏感细菌后,会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，结果就会在菌苔上形成一个具有一定形状、大小、边缘和透明度的肉眼可见噬菌斑(plague)。 噬菌体的效价：１mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。其测定常用双层琼脂平板法。由此得到的噬菌斑形态、大小较一致且清晰度高，计算准确。根据不同稀释度平板上出现的噬菌斑数目，即可算出原液噬菌体的效价。 双层琼脂平板的配制：底层平板（1.5~2％琼脂的LB培养基10ml)，将适当稀释的噬菌体与培养至对数期的受体菌混合，保温吸附，加入45°左右的半固体琼脂糖，迅速混匀铺平板作为上层。 计算公式：噬菌体效价(pfu/ml)=噬菌斑数×稀释倍数×10；（这里的10为换算单位，即实验中用到100μl噬菌体原液，换算成1000μl，即1ml时，要乘以10） 三、操作步骤 流程图 流程步骤目的 1、制备9套LB 固体培养基底层平板将融化并冷却至45℃左右的LB培养基倒入 无菌培养皿，每皿约10~12ml.水平放置，凝 固后做好稀释度标记。 1、提供细菌生长营养物质 2、提供更加平整的平面 2、制备噬菌体稀释液取0.5mL噬菌体原液于4.5mL无菌水中得到 10-1稀释液。再取0.5ml10-1稀释液于4.5ml 缓冲液中得到10-2稀释液。同理再制备10-3 稀释液，并在试管上标记备用。（稀释过程应 充分混匀） 通过连续稀释使单个噬菌 体吸附一个大肠杆菌细 胞。 3、制备受体菌细胞将感受态大肠杆菌接种于50ml LB培养液，经 过夜培养，离心收集菌体细胞，悬浮于20ml 10mM MgSO4中备用。 由实验员制备。 4、吸附用取样器分别取100μl 10-1、10-2、10-3噬菌 体稀释液和100μl受体菌细胞液，充分混合 后置于37℃恒温箱保温25min.并在离心管上 做好标记。 —— 5、制备上层平板用枪分别取350μL受体菌菌悬液和噬菌体稀 释液，加入到冷却至45℃左右的0.7%琼脂糖 中，迅速混匀，倒在有相应标记的底层平板， 边倒边摇匀。 防止琼脂糖凝固结块儿。 6、培养37℃倒置培养15~18h，检查结果。——
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法 测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。 生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。 抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。 稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。 比浊法原理及操作大致与稀释法相同。比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。 扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。扩散法有几种，或中一种叫管碟扩散法（筒称管碟法）为国际上常用的方法，在我国也作为法定的抗生素检定法。 下面我们将详细地讨论管碟法的原理和实验方法。 一、管碟法测定的设计原理及计算方法 管碟法所用的管子系用瓷、铝或玻璃制成，较好的用不锈钢制成，它是内径为6+0.1毫米、外径为8+0.1毫米、高10+0.1毫米的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。 摊布固体培养基的容器可用双碟，亦可用平底下班盘。管子放在混有菌种的固体培养基上时，可用人工放臵，也可用特定的管子放臵器放臵。
2012浙江工商大学研究生入试微生物学真题
浙江工商大学2011年硕士研究生入学考试试 卷（B）卷 招生专业：食品科学与工程、生物化工、环境工程、工程硕士 考试科目：827微生物学总分： 150分考试时间：3小时1、 判断题（每小题1分，共15分，答案写在答题纸 上。） 1. 真菌在进行准性生殖时，通过有丝分裂进行基因。 2. 一切好氧微生物都含有超氧化物歧化酶（SOD）。 3. 低剂量照射紫外线，对微生物几乎没有影响，但以超过某一阈 值剂量的紫外线照射，则会导致微生物的基因突变。 4. 溶源性细菌在一定条件诱发下,可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。 5. 吸器和假根都是营专性寄生吸收营养的菌丝的特殊形态。 6. 链霉菌是霉菌，其有性繁殖形成接合孢子。 7. 共生固N菌的防氧保护靠根瘤细胞中的豆血红蛋白，而自生固N 菌的防氧保护靠菌体的呼吸保护，蓝细菌固N靠异型胞两端的特殊构造控制氧气的进入。 8. 微生物分解蛋白质,核酸和其它含氮有机物为NH3的过程称为氨化作用。 9. 地衣是藻类和真菌的共生体是微生物之间典型的互惠共生关系。 10. 大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。 11. 酒精的浓度越高，杀菌能力越强。 12. 在10 分钟内杀死某微生物的最低温度称为该微生物的致死温度。 13. 一分子葡萄糖经正型乳酸发酵可产2个ATP, 经异型乳酸发酵可产1个ATP。 14. 一种细菌只能被一种噬菌体感染。 15. 与单独处理相比，诱变剂的复合处理虽然不能使微生物的总突
A. 孢囊 B. 芽孢 C. 伴孢晶体 D. 子实体 5.苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的化学成分是：（ ） A. 脂多糖 B. 磷脂 C. 蛋白质 D．核糖 6. Staphylococcus aureus是下列那种微生物的学名：（ ） A. 金黄色葡萄球菌 B. 黑曲霉 C. D. 酿酒酵母 7. ） A.青霉 B.曲霉 C.根霉 D.毛霉 8. 新陈代谢研究中的核心问题是（ ）。 A.分解代谢 B.合成代谢 C.能量代谢 D.物质代谢 9. 艾姆氏试验的原理是利用鼠伤寒沙门氏菌的（ ）缺陷型的回复突变。 D.his 10. 现发现一种只含不具侵染性RNA成分的分子病原体，它属于（ ）。 A.病毒 B.类病毒 C.拟病毒 D.朊病毒 11. 参与沼气发酵的微生物有：（ ） A. 产酸细菌 B. 产甲烷细菌 C. 好氧菌 D. A. B 二者皆是 12. 人类最先发现的抗生素产生菌是：（ ） A. 点青霉 B. 产黄青霉 C. 灰色链霉菌 D.降红小单孢菌 13. 细菌对抗生素的抗性决定于细菌细胞中的（ ） A. F质粒 B. R质粒 C. col 因子 D. 染色体 14. 硝酸盐在反硝化细菌的作用下能被还原为：（ ） A. NO2- B. NH3 C. N2 D. A，B，C 15 1克种植多年的菜园土中的微生物数量可以达到：（ ） 3 B. 10 4 C. 10 5 D. 106 A. 10 16. 空气并不是微生物良好的栖息繁殖场所因为：（ ） A. 缺乏营养 B. 高pH C. 夏季高温 D. 无固
效价测定方法
沈阳药科大学 硕士学位论文 诺西肤发酵工艺的研究 姓名:韩果红 专业:微生物与生化药学 导师:何建勇教授 二00四年五月 P24 诺西肚的定性与定量测定 2.2，2.1生物效价测定法 1.检定菌菌悬液的制备 加40一5Oml无菌水到培养好的枯草芽抱杆菌茄形瓶斜面上[枯草芽抱杆菌斜面培养基(%):蛋白陈1.0·NaCI0.5,牛肉膏0.5,琼脂粉1.5.,pH7.8(灭菌前)蒸馏水配制].用接种环刮下芽抱和菌体，摇匀，65℃水浴保温3Om加，杀死营养细胞，保留芽抱，即为检定菌菌悬液。 2.生测平板的制备 将生物检定培养基[生物检定培养基(%):牛肉膏0.3蛋白陈0.5,K2HPO4 0.3,琼脂粉1.5， pH8.0-8.2(灭菌前)蒸馏水配制] 2OOml灭菌后自然冷却到50一60℃后，倒入20x3Ocm的生物检定盘中，自然凝固，作为生测平板的下层。 将生物检定培养基100ml灭菌后自然冷却到50一60℃，向培养基中加入一定量的检定菌(枯草芽抱杆菌)菌悬液，混匀，然后倒入检定盘内己凝固的下层培养基上，自然凝固。 3.点样 用无菌小镊子取中Sunll的无菌圆滤纸片，按一定规律摆放在上层培养基的表面。每个待测样品应点样2一3个滤纸片，以其抑菌圈的平均值进行计算。盘内同时摆放加有不同剂量诺西肤标准溶液(IO00u/m)l的圆滤纸片，每个剂量点2一3个滤纸片，以其抑菌圈的平均值进行计算。每个纸片上的加样量不超过5ul。 4.培养 将点好样的检定盘倒置于4℃冰箱中扩散10小时左右，然后于37℃恒温箱中培养16一18小时，不同点样量的诺西肤在检定盘中产生的抑菌圈大小不同，根据标准品的剂量及相应抑菌圈直径之间的对应关系得标准曲线方程，根据样品的抑菌圈直径通过标准曲线方程计算出对应的效价。 P35 高产菌株选育方法的建立 由于出发菌株的产量极低，为了加快高产菌株的筛选进度，为以后的菌种选育打下基础，需要建立一种简便、快捷的菌种选育方法。为此，用琼脂块初筛的方法进行试验。将经过自然分离(或诱变)后在分离平板上生长好的单菌落先目测筛选，挑选菌落丰满抱子量大的菌株用牙签点种至准备好的琼脂块上，28℃保湿培养5一6天，待菌落长好后用扩散法测定各个琼脂块的抑菌活性，根据抑菌圈的大小初步确定菌株的生产能力，挑选抑菌圈大的菌株，再通过摇瓶液体复筛初步确定高产菌株。因为诺西肤属于脂溶性抗生素，在检定培养基中的扩散速度较慢，加上出发菌株的产量较低，所以37℃培养16一18小时后看不到抑菌圈。 为了解决这一问题，将待测活性的固体琼脂块在生测培养基上先扩散一段时间(4℃，12一16小时，该条件下对链霉菌本身无影响)，此时检定菌不能生长，诺西肤在此期间逐渐扩散到检定培养基中。之后再将检定盘置于37℃培养16一18小时，则可以看到清晰的抑菌圈，从而建立了一种快速的高产菌株筛选方法(如图3一3所示)，并利用此方法挑选出了出发菌株YM4一2(发酵单位为61ou/ml)。
噬菌体效价
噬菌体的分离纯化及效价的测定 1 目的 1.1 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 1.2 学会检查噬菌体的方法。 1.3 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 2 原理 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规 微生物计数法无法测得其数量。 当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解， 释放出 大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞， 最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变 清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速 检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。 检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，可以用无菌 水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培养，使样品中的噬菌体 数量增加。 因而不能及时判断是否有噬菌体污染。 采用生物测定法进行噬菌体检查， 约需 12h左右， 通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染， 以采取必要的防治措施。 根据正常发酵 （培养） 液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮； 而侵染有噬菌体的发酵 （培养） 液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因而在 光线照射下出现丁达尔效应而不清亮。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准 确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液也往往 不适用。 噬菌体的效价即１mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼 脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可 根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数， 计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌 斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确，因而被广泛应用。 3 材料 3.1 菌种 敏感指示菌（大肠杆菌）、大肠杆菌噬菌体(从阴沟或粪池污水中分离)。 3.2 培养基 二倍肉膏蛋白胨培养液，上层肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基（含琼脂0.7%，试管分装， 每管５mL），下层肉膏蛋白胨固体琼脂培养基（含琼脂 2%），1%蛋白胨水培养基。 3.3 仪器和器具 无菌的试管、培养皿、三角瓶、移液管（1、5mL），恒温水浴锅，离心机等。 4 流程 4.1 噬菌体的分离纯化鉴定 4.2 噬菌体效价的测定 5 方法 5.1 噬菌体的检查 5.1.1 样品采集 将 2～3g 土样或 5mL 水样（如阴沟污水）放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感 指示菌（大肠杆菌）菌液 3～5mL，再加 20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。 5.1.2 增殖培养 30℃振荡培养 12～18h, 使噬菌体增殖。
噬菌体侵染细菌的实验
噬菌体侵染细菌的实验教学设计 王莹 一、教材内容分析 《噬菌体侵染细菌的实验》是苏教版普通高中生物必修2《遗传与进化》中第4章第1节的内容。本部分内容之前已经介绍了格里菲斯和艾弗里的“肺炎双球菌的转化实验”。“噬菌体侵染细菌”的实验是更具有说服力的实验，其设计思路科学而缜密，值得学生借鉴和学习。本内容是从分子层面上认识遗传物质的本质，为学习DNA的复制，基因的表达和基因突变打下了基础 二、学习对象分析 高中必修一也在介绍原核生物与真核生物时，也了解了病毒是一种寄生的没有细胞结构的生物。可以简要跟学生介绍大肠杆菌和噬菌体，引发回忆。高中学校没有成熟的实验条件供学生亲自做噬菌体侵染细菌的实验，因此教师应该形象直观地展示科学探索的过程，引导学生的思路再现一遍科学家的实验探究过程，达到发展学生科学思维能力的目的。根据新课程理念，高中生物学教学重在培养学生的科学思维、科学探究，因此，本节课以“自主探究科学发现的过程”为设计理念，切实落实主体性教学，提高学生的探究能力，训练学生科学的思维方法。 三、教学策略 由“格里菲斯和艾弗里肺炎双球菌转化实验”的不足之处引入新内容，让学生思考如何对这一问题进行研究，提高说服力，培养他们分析问题和解决问题的能力，激发他们了解科学家当年的研究过程和方法的兴趣。通过重温科学家的探究历程，领会实验选材的巧妙、思维的严谨和实验方法的科学；通过实验结果的分析理解DNA是主要的遗传物质根据主体性教学目标，以“自主性、探究性、合作性”为学生学习的三个基本维度，以培养学生的科学素质为指导，以侧重科学方法教育为归宿，本节课采用“引导探究”教学模式，融合讨论法、比较法、归纳法等多种教学方法，并配以多媒体辅助教学，引导学生模拟科学发现过程，进行分析、讨论、归纳和总结。 采用“设疑导入→问题引导呈现探究过程→讨论实验结果→归纳总结→反馈运用”的教学程序。 四、教学目标 1、知识与技能： （1）进行“噬菌体侵染细菌”的实验设计； （2）描述“噬菌体侵染细菌”的实验步骤 2、情感态度和价值观： (1) 探讨实验技术在证明DNA是主要遗传物质中的作用。体验科学探索的艰辛过程； (2) )领悟科学研究的过程和方法，培养学生的实验探究能力。 五、教学重点和难点 1、重点：
实验七 噬菌体效价的测定
实验七噬菌体效价的测定 杨明轩生物111 1102040128 一、实验目的 1、学习并掌握噬菌体效价的含义及其测定原理。 2、学习并掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效价。 二、实验原理 噬菌体属于细菌病毒，侵染细菌细胞后，可导致寄主细胞溶解死亡，并在琼脂培养基表面形成空斑，即为噬菌斑。人们可以根据噬菌斑来判断噬菌体的存在。 噬菌体的效价指的是每毫升培养液中含有的具感染性的噬菌体的数量。其测定常用双层琼脂平板法。由此法得到的噬菌斑形态、大小较为一致，且清晰度高，计算准确。该方法首先在无菌培养皿内倒入营养琼脂作为底层，然后将适当稀释的噬菌体与培养至对数期的受体菌混合，保温吸附后，加入冷却至45℃左右的半固体琼脂糖，迅速混匀后铺平板，作为上层，最后倒置培养。只要噬菌体具有感染力就可形成噬菌斑。根据不同稀释度平板上出现的噬菌斑数目，即可算出原液噬菌体的效价。 公式为：噬菌斑形成单位（pfu/ml）＝噬菌斑数×稀释倍数×10 （注：需要说明的是，“×10”表示换算单位，根据本实验步骤，因为加入的是100ul 噬菌体原液，换算成1000ul，即1ml，因此“×10”，如有变动更改则需另行计算）本实验选择的是λ噬菌体EA94，它是一种被改造过的烈性噬菌体。 三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）LE392； 2、噬菌体：λ噬菌体EA94； 3、培养基：300ml三角瓶中分装100ml LB培养基，15×150mm试管分装4ml 0.7%琼脂糖； 4、灭菌物品：20%麦芽糖，1mol/L MgSO4，10mmol/L MgSO4，18×180mm试管分装4.5ml 和20ml噬菌体缓冲液，100ml离心管，500μl枪头，200μl枪头，微离心管，培养皿； 5、仪器：取样器，恒温水浴锅，恒温培养箱，台式离心机。 四、实验方法 1、感受态的大肠杆菌菌悬液的制备：将活化的大肠杆菌接种于50ml牛肉膏蛋白冻培养液（内含0.5ml20% 8磅灭菌麦芽糖和500ul1mol/L灭菌MgSO4·7H20）中，经37℃过夜培养后，4000转/分，15min离心收集菌体细胞，然后悬于20ml10mmol/L MgSO4中，备用。使用前分装至灭菌离心管中，1.2ml菌液/组，保存条件为4℃冰箱保存。 2、噬菌体悬浮液的制备：4℃冰箱保存在缓冲液中的噬菌体0.6ml与活化的处于感受态的E. coli菌体0.6ml混匀，在37 ℃条件下保温25min，使噬菌体吸附到E. coli上。取10块LB平板，每板加入0.1ml混合液并涂抹均匀。在37℃下培养10h。每个平板加入10ml噬菌体缓冲液，将菌及噬菌体洗下。离心后取上清液。进行效价测定预实验。达到所需要求后加1-2滴氯仿，分装为550ul/每组，并置于4℃保藏。 3、制备底层平板：将在50℃左右的LB固体培养基倒入无菌培养皿，每皿约10~12ml，共9皿（每个稀释度做3个重复）。水平放置，凝固后，做好稀释度标记备用。（作用：1、
厦门大学 微生物 考研真题(02-07)
厦门大学微生物历年考研真题02-07 厦门大学2002年微生物考研试题 一、填空题：（第8题 3分，其余1分/题） 1.用____和____糖等成分可以制成培养真菌的半组合培养基。 2.细菌产生抗药性的3种途径分别为：染色体组上发生基因突变、____的转移和____的适应性。 3.病毒的核酸类型是及其多样的，总的来说，动物病毒以____和____居多，植物病毒以____居多，而噬菌体以____居多。 4.在实验中培养化能异养型细菌时，通常以____为碳源，____为氮源，____为生长因子，以____提供矿质元素。 5.F因子是大肠杆菌等细菌中决定____的质粒，其大小为____kb，约等于____％染色体DNA，其中1/3基因（tra区）与____有关。 6.病毒大小的单位是____，多数病毒粒子的直径在____上下。 7.电子显微镜观察表明：放线菌无性孢子的形成，只有____方式，而无____方式。 8.放线菌的形态特征，以链霉菌最典型：细胞形态呈____，营养生长期菌丝内____隔，一般呈____细胞，细胞内具有为数众多的____体：根据菌丝的结构和功能把菌丝分为____、____和____3类。其中____能分化产生成串的分生孢子。 二、名次解释：（2分/题） 1．光能自养型（photoautotroph） 2．微体（microbody） 3．连续培养（continuous cultivation） 4．感受态因子（competence factor） 5．共同抗原（common antigen） 6．单细胞蛋白（single cell protein） 7．紫膜（purple menbrane） 8．活性污泥(activated sludge) 9．类毒素（toxoid） 10．Park 核苷酸（ park nucleotide ） 11．膜边体（ lomasome） 12．细菌沥滤（bacterial leaching） 三、问答题（没标注的3分/题，） 1．龋齿的形成与某些产荚膜细菌有关吗？解释你的答案。 2．为什么说病毒是一类非细胞结构的大分子生物？
干扰素常见问题回答及效价测定方法 (1)
基因工程复合干扰素与传统的白细胞干扰素有什么区别？ 白细胞干扰素是通过诱导动物血液中的白细胞获得的，该类产品中的干扰素含量低，活性不稳定；另外，由于该类产品来自动物血液，具有一定的生物安全风险，易导致交叉感染。 而基因工程干扰素是采用先进的分子生物学技术，将干扰素基因客隆入大肠杆菌表达系统，利用大肠杆菌发酵的方式获得的高纯度，高活性干扰素；该类干扰素由于采用发酵生产，所以活性稳定且批次之间差异较小；另外由于来源于无害的大肠杆菌，杜绝了交叉感染的可能。 目前，广泛应用于人类医用干扰素均采用基因工程的方法生产，其，高活性，低毒副作用的特点已被广泛认可。 本产品的基因工程复合干扰素与市场上的同类干扰素有什么区别？ 本产品将禽α和γ两种干扰素亚型进行了最优配比混合使用，使得本产品既可以用于禽病的预防，提高机体免疫力，也可以用于禽病的早期治疗。而市场上的的同类产品往往只含有一种亚型的干扰素，无法同时实现预防和早期治疗。 为什么本产品是水针剂，而其他公司产品是冻干粉？ 干扰素作为一种蛋白制剂，其不够稳定，极易失活的缺点限制了其运输和使用，于是很多企业选择了冻干以提高其稳定性的方法。但是冻干技术同样存在一系列的缺点；首先干扰素在冻干和复溶的过程中不可避免的会活性下降，直接影响使用效果。其次，使用干扰素动感制剂需要加水复溶，这不近增加了使用人员的工作量，而且增加了被污染的概率。 考虑到冻干制剂的这些缺点，我们对干扰素进行了分子改造，提高了其稳定性，并采用先进的制剂配方开发了一种稳定的蛋白保护剂，使得本产品的稳定性优于同类冻干产品。本产品在2~8℃条件可保存两年，活性不会发生明显变化，而同类冻干产品复溶后最多能保存两周。另外，水针制剂大大的简化了操作人员的工作程序，减少了被污染的概率，用药剂量也更准确。 本产品的基因工程复合干扰素可否与替他药物一起使用？ 可以一起使用，如果伴有继发性感染，建议与抗生素联合使用。 禽病毒性感染为什么必须使用干扰素？ 干扰素是目前所知道的发挥抗病毒作用最快的防御体系，可增强自然杀伤细胞的杀伤能力和激活T细胞免疫，在短时间内就能使机体处于抗病毒状态，使机体在1-3周内对病毒重复感染具有抗御作用。迄今为止，最有效而且应用最抗广泛的生物制品抗病毒制剂就是干扰素。干扰素通过抑制病毒在细胞内的复制而达到抗病毒的目的，是病毒病早起治疗和预防的首选生物制品。 本产品的基因工程复合干扰素可否用于动物免疫功能低下的治疗？ 可以，干扰素是提高动物免疫力最有效的药物之一，其提高免疫增强的效果要优于黄芪多糖和胸腺肽。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一．IgG类 1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。 二．IgM 1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 三．此类为IgM类盐水抗体可立即离心后观察。