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DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)

DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)

简介：

DAB 辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western 、Southern 、Northern 、EMSA 等膜显色的试剂盒。DAB 即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下,DAB 会产生棕色沉淀，该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB 显色后, 还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。

Leagene DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测以及细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

自备材料：

1、洗涤液

2、蒸馏水

操作步骤(仅供参考)：

1、常规组织切片、细胞样品、膜与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤。

2、按(A):试剂(B):蒸馏水混合, 即为DAB 显色工作液，即配即用。

3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB 显色工作液，确保覆盖样品。

4、室温避光孵育，直至显色至预期深浅。

5、去除DAB 显色工作液，用蒸馏水清洗即可终止显色反应。

6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。编号名称 PW0073 2×3ml PW0073 2×10ml Storage 试剂(A): DAB 显色液 3ml 10ml -20℃ 避光试剂(B): DAB 氧化剂 3ml 10ml -20℃ 避光使用说明书 1份

注意事项：

1、本试剂盒给予的DAB氧化剂多于实际使用量，请按比例使用。

2、DAB氧化剂易挥发，请注意密闭保存，以免效率下降，一旦开封请尽快使用。

3、DAB氧化剂有腐蚀性，请勿直接接触于人皮肤、毛发等。

4、试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融，以免显色效率下降。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题及可能原因：

1、背景显色太深

①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封

闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。也应请注意选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

②在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。

④选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。

2、没有显色或显色太弱

①当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。

有效期：12个月有效。

PH0728 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒使用手册

1PH0728|DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒 Catalog No ：PH0728 Size ：?100mL Storage ：Store@-20℃避光保存 ◆产品简介DAB 辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA 等膜显色的试剂盒。 DAB 即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下,DAB 会产生棕色沉淀。该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。因此在DAB 显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。 ◆试剂组分试剂(A):DAB 显色液A---50mL (-20℃避光) 试剂(B):DAB 显色液B---50mL (-20℃避光) 试剂(C):DAB 显色液C---100uL (RT) 自备材料： 1、洗涤液 2、蒸馏水◆使用参考 1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。 2、按(A):试剂(B):试剂(C)=5000:5000:3的比例混合,即为DAB 染色工作液，即配即用。 3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB 染色工作液，确保覆盖样品。 4、室温避光孵育或更长时间，直至显色至预期深浅。 5、去除DAB 染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。 6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。 ◆注意事项 1、DAB 是致癌物，请注意适当防护。 2、试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 ◆常见问题 1、背景显色太深 ①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。②在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。 ③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。 ④选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。 2、没有显色或显色太弱 ①当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。 ②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。 ③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。

辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG使用说明

辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG使用说明规格：0.1ml/1ml 抗体来源：Goat 克隆类型：Polyclonal 交叉反应：Rb 产品应用：WB=1:1000-10000ELISA=1:1000-10000IHC-P=1:100-1000IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. 分子量：150kDa 性状：Lyophilized or Liquid 浓度：2mg/1ml 免疫原：Full length plasma protein 亚型：IgG 纯化方法：affinity purified by Protein A 储存液：0.01M PBS,pH7.4with10mg/mL BSA and0.1%Gentamicin 保存条件：Storage:Store at–20℃for one year.Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at-20oC.When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied,theantibody is stable for at least two weeks at2-4℃。产品介绍： Immunoglobulin G(IgG),is one of the most abundant proteins in serum with normal levels between8-17mg/mL in adult blood.IgG is important for our defence against

辣根过氧化物酶制作过程

过氧化物酶体与溶酶体不同，过氧化物酶体不是来自内质网和高尔基体，因此它不属于内膜系统的膜结合细胞器。过氧化物酶体普遍存在于真核生物的各类细胞中，但在肝细胞和肾细胞中数量特别多。过氧化物酶体含有丰富的酶类，主要是氧化酶，过氧化氢酶和过氧化物酶。氧化酶可作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢。过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶，它的作用主要是将过氧化氢（H2O2，Hydrogen Peroxide）水解。氧化酶与过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中，从而对细胞起保护作用。 HRP的制备 ⒈水提取：称取 10斤用水冲刷干净的鲜辣根（辣根皮中亦含有丰富的HRP），用菜刀切成小碎块，在搅肉机中搅碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水在低温下搅拌提取过夜（亦可采用高速抽提法）。次日用甩干机（或离心机）甩干，收集滤液，碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取一次，合并两次滤液，量总体积和度，0。 ⒉硫酸铵分级分离：在不断搅拌下，每升滤液中慢慢加入226克硫酸铵粉末（相当于0.40饱和度），大约在1~2 小时内加完，置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出，下面浑浊液以3000转/分离心15分钟，弃沉淀，合并上清液。再按每升上清液加258克硫酸铵粉末（0.8饱和度）随加随搅拌，当硫酸铵全部溶解后，置冷室过夜。次日，虹吸出上清液，沉淀部分在冰冻离心机中以13000转/分离心20分钟，弃去上清液，收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150毫升蒸馏水中（加水量要使沉淀全部溶解为止），分装于透析袋内，放在流动自来水中进行透析 1~2天，直到硫酸铵透析完毕为止（可用5%乙酸钡溶液或奈氏试剂进行检查）。然后改换成用蒸馏水透析，中间更换2~3次，用0.1 mol/L硝酸银溶液检查透析外液无氯离子为止。将透析液合并，在冰冻离心机中以 4000转/分离心 15分钟；去沉淀，量上清液的体积。 ⒊丙酮分级分离：将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至-15℃ 的丙酮，放置片刻，在冰冻离心机中以4，000/分离心15分钟，弃去沉淀。上清液再加入0.8体积（按原上清液体积）-15℃丙酮，（操作同上），静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除丙酮。可得Rz值近于1的酶溶液。 ⒋精制：将上步酶液适当稀释，滴加1M硫酸锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10-3M，5000转/分离心10分钟，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤，离心，洗液与清液合并，分装于透析袋内，对水透析除盐，用微孔滤膜过滤，进行真空冷冻干燥（约得20毫克），产品呈米黄色纤维状松软物，HRP产品的Rz值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。

PH0728 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒实验方法与常见问题

PH0728|DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒 DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit Catalog No：PH0728Size：?2×50mL|?2×100mL Store at-20℃ DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。 DAB，即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下，DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后，还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可以用于Western等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。组分 Component2×50mL2×100mL Storage DAB显色液A50mL100mL-20℃避光 DAB显色液B50mL100mL-20℃ 使用参考 1.对于组织切片或细胞样品或膜，在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。 2.按照1:1的比例将显色液A、B液混匀，混匀后即配制成DAB染色工作液。 3.最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保能充分覆盖样品。 4.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。 5.去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应。 6.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。注意事项 DAB对人体有害，请注意适当防护。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

ADA 酶比色法

腺苷脱氨酶（ADA ）测定试剂盒（酶比色法）使用说明书【产品用途】本试剂用于测定血清、胸腹水、脑脊液中的腺苷脱氨酶活性。【临床意义】肝脏疾病时，本酶活性往往升高，有助于黄疸的鉴别诊断。在阻塞性黄疸时，此酶活性升高很少，而在肝实质性损伤时，此酶和转氨酶往往同时升高，特别在慢性活动性肝炎和肝硬变时，转氨酶阳性率较低，增高幅度也不明显，而ADA 活性的阳性率可达90%左右，增高程度也较明显。同时ADA 检测对白血病、伤寒、出血热也有辅助诊断作用。测定胸腹水及脑脊液标本中的ADA 活性，有鉴别诊断价值。结核性胸腹水中ADA 活力显著高于癌症及炎症胸腹水中ADA 活力，对早期诊断结核性胸、腹膜炎有较高的敏感性和一定的特异性。此外，脑脊液ADA 检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎ADA 活性升高，病毒性脑膜炎不升高。【适用范围】液体双试剂，即开即用，自动化分析仪用。【产品规格】 R 1 50ml ×2 R 2 50ml ×1 【试剂成份】 R 1 Tris-HCl pH8.0 50mM 4-AA 2mM PNP 0.1kU/mL XOD 0.2kU/mL POD 0.6kU/mL 稳定剂 R 2 Tris-HCl ph4.0 50mM 腺苷 10mM EHSPT 2mM 【检测原理】腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成次黄苷，次黄苷在PNP 作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD ）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H 2O 2），H 2O 2与EHSPT 和4-氨基安替比林（4-AA ）反应生成醌色物，显色强度与ADA 活性成正比。腺苷?? ?→?ADA 次黄苷 + NH 3 次黄苷 + Pi ??→?PNP 次黄嘌呤 + 核酸-1-磷酸次黄嘌呤 + 2H 2O + 2O 2???→?XOD 尿酸+ 2H 2O 2 2H 2O 2 + 4-AA + EHSPT ??→?POD 醌亚氨染料+ H 20 【样本采集】新鲜非溶血血清或血浆，ADA 在4℃时可稳定1周。【测定方法】 1.试剂1、2在使用前恢复到37℃。 2.180μl R 1与5μl 血清（浆）样品混合，在37℃孵育3min-5min 。 3.加入90μl R 2孵育3min ，在540nm 或546nm 处测2分钟，计算每分钟平均光度变化△A/min 。【参考范围】血清：4~24U/L 胸腹水：0~35 U/L 脑脊液：0~6 U/L 各实验室应建立自己的参考范围; 【产品性能】 1.试剂空白吸光度：A 340nm(1cm) ≥0.800 2.本试剂线性范围：0-150 U/L 3.精密度：批内CV ≤5% 批间相对极差CV ≤8% 4.准确度：相对偏差≤±10% 【试剂保存】 R 1、R 2为液体试剂，直接使用。2-8℃避光稳定1年。【注意事项】 1.本方法特异测定ADA ，其它核苷与本方法不发生反应。 2.血清胆红素达20mg/dL ，血红蛋白100mg/dL ，甘油750mg/dL ，抗坏血酸4mg/dL 对实验无干扰。【单位意义】在37℃条件下，每分钟用于产生1 umol 次黄苷的量定义为一个单位的ADA 。【生产许可证】【注册标准号】【注册证号】

辣根过氧化物酶在纤维材料生物整理中的应用研究进展

第40卷一第4期2019年4月纺一织一学一报Journal of Textile Research Vol.40,No.4Apr.,2019DOI :10.13475/j.fzxb.20180300407 辣根过氧化物酶在纤维材料生物整理中的应用研究进展周步光,王一平,王一强,范雪荣,袁久刚 (生态纺织教育部重点实验室(江南大学),江苏无锡一214122) 摘一要一针对化学法整理纤维材料存在能耗高二纤维损伤大的缺陷,提出借助酶法在温和条件下对纤维材料进行生物整理加工三介绍了辣根过氧化物酶/双氧水/β-二酮类引发剂乙酰丙酮(HRP /H 2O 2/ACAC)三元催化体系的氧化机制,综述了该体系在淀粉二黄麻和丝蛋白生物改性中的应用,包括:通过酶促反应使丙烯酸甲酯与淀粉接枝共聚,提高淀粉浆料对疏水性纤维的成膜性;通过催化黄麻与丙烯酰胺或甲基丙烯酸六氟丁酯接枝,实现黄麻亲水或疏水化整理;通过酶促反应使丝素与丙烯酸接枝共聚,提升丝素材料的仿生矿化效果;通过催化丝胶与甲基丙烯酸甲酯接枝共聚,改善丝胶基生物材料的成型性三指出HRP 在纤维整理及生物材料制备中具有潜在的应用前景三关键词一辣根过氧化物酶;三元催化体系;乙烯基单体;淀粉;黄麻;丝蛋白;生物材料中图分类号:TS 195.5一一一文献标志码:A一一一 Research progress of horseradish peroxidase in bio-finishing of fiber materials ZHOU Buguang,WANG Ping,WANG Qiang,FAN Xuerong,YUAN Jiugang (Key Laboratory of Eco-Textiles (Jiangnan University ),Ministry of Education ,Wuxi ,Jiangsu 一214122,China )Abstract 一Considering the defects that chemical finishing on fiber materials has large energy consumption and potential fiber damages,enzymatic finishing of fiber materials under mild treating conditions were suggested.The oxidation mechanism of the ternary catalyst system of horseradish peroxidase (HRP ),hydrogen peroxide (H 2O 2)and β-diketone initiator acetylacetone (ACAC)were introduced,and its applications in bio-modifications of starch size,jute,silk protein were reviewed as follows.Methyl acrylate was graft copolymerized with starch to improve its film forming property onto the hydrophobic fibers.Acrylamide and hexafluorobutyl methacrylate were applied to modify jute fiber by enzymatic graft-copolymerization,respectively,realizing the hydrophilic or hydrophobic modification of jute fiber.Acrylic acid was used to enzymatically graft copolymerized onto silk fibroin to enhance the biomimetic mineralization effect of fibroin-based biomaterial.Furthermore,HRP-mediated graft copolymerization of methyl methacrylate onto silk sericin was also investigated to improve the formability of sericin-based biomaterials.In conclusion,HRP exhibits potential applications in bio-finishing of textile fibers and preparation of biomaterials.Keywords 一horseradish peroxidase;ternary catalyst system;vinyl monomer;starch;jute;silk protein;biomaterial 收稿日期:2018-03-01一一一修回日期:2018-12-12 基金项目:国家自然科学基金项目(51373071,31771039);青蓝工程资助项目(苏教师[2016]15号);中央高校基本科研业务费专项资金项目(JUSRP51717A );高等学校学科创新引智计划项目(B17021) 第一作者:周步光(1994 ),男,硕士生三主要研究方向为纺织品生态加工技术三通信作者:王平(1971 ),男,教授,博士三主要研究方向为纺织生物技术三E-mail :wxwping@https://www.wendangku.net/doc/1618863221.html, 三一一由于淀粉分子结构本身的特点,使得淀粉浆料对疏水性纤维的黏附力不足[1]二成膜性差,为改善淀粉浆料对经纱的上浆性能,需要对淀粉进行接枝改性三黄麻纤维存在刚度大二刺痒二易成褶二染色深度不高二染鲜艳色难等缺点,并且植物纤维与非极性二疏水性树脂间的界面黏结性差,使其应用受到很

DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒

DAB 辣根过氧化物酶显色试剂盒简介： DAB 辣根过氧化物酶显色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western 、Southern 、Northern 、EMSA 等膜显色的试剂盒。DAB 即3,3N-Diaminobenzidine T ertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。组成：操作步骤(仅供参考)： 1、常规组织切片、细胞样品、膜与辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次。 2、按(A):试剂(B):试剂(C)=5000:5000:3的比例混合, 即为DAB 染色工作液，即配即用。 3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB 染色工作液，确保覆盖样品。 4、室温避光孵育或更长时间，直至显色至预期深浅。 5、去除DAB 染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。 6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。注意事项： 1、 DAB 是致癌物，请注意适当防护。 2、试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。编号名称 PW0072 2×50ml Storage 试剂(A): DAB 显色液A 50ml -20℃ 避光试剂(B): DAB 显色液B 50ml -20℃ 避光试剂(C): DAB 显色液C 100ul RT 使用说明书 1份

影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施

影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。 1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。 2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。 3操作过程的影响因素 3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。 3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。 3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。 3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。 3.5 显色液的量不可过多，加样的工作环境不能阳光直射，加显色液后避光反应，显色液量要合适。 4试剂的影响因素应选用有国家批准文号，质量保证的产品。试剂要妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先恢复至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂打开后要在一周内用完，剩余试剂下次用时先检查是否变质，显色剂如被污染变化将造成全部显色，导致错误结果。过期试剂不宜，应做好双份质控品的监测，确保结果的可靠性。 5采取措施，避免差错事故的发生创造一个良好的工作环境，实验室工作人员应团结友爱，互相关心，互相学习自然心情舒畅，工作情绪高涨。再就是建立完善的质量保证体系，以书面的形式发给每位成员以及临床科室，做到人人熟悉，人人重视影响实验结果的因素，并在操作过程中时刻注意，将质控贯穿到整个实验过程中。制定一系列的制度，用制度管人，明确责任，这样才能提高质量，避免错误结果的发生。

卫生专业技术资格考试真题

卫生专业技术资格考试真题精选一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E 五个备选答案。请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 1.下列哪种方法不属于血糖检测方法 A.氧化酶法 B.已糖激酶法 C .邻甲苯胺法 D上匕浊法 E. 干化学法答案：D 2.下列何种情况干扰血清总蛋白的双缩脲法测定 A.血清呈乳糜状 B.高血糖 C.高血钾 D.高血钠 E.高血钙答案：A 3.紫外法测定蛋白含量的波长应为 A.280nm或215/225nm B.280nm或340nm C.15/225nm 或405nm D.340nm或405nm

E.260nm或280nm 答案：A 4.下列关于血气分析质控物的叙述中哪项不对 A.质控物在室温平衡后，再用力振摇两三分种才能开瓶使用 B.开启安瓿后，应立即注入仪器中检测 C.检测质控数据如偏离参考范围，应检查原因 D.过期的质控物不能使用 E.质控物中的物质在气液两相中的平衡受温度影响小答案：E 5.钙测定的参考方法是 A.火焰光度法 B.原子吸收分光光度法 C.邻甲酚肽络合酮法 D.过锰酸钾测定法 E.EDTA络合滴定法答案：B 6.门冬氨酸和a -酮戊二酸可以作为下列哪种酶的反应基质物 A.ALT B.AST C.ALP D.GGT E.AMY

答案：B 7.不与碱性苦味酸试剂反应的有 A.胆红素 B.乙酰乙酸和丙酮 C.丙酮酸 D.氨基酸 E.维生素C和葡萄糖答案：D 8.目前全自动生化分析仪测定尿素最常用的方法是 A.尿素酶-谷氨酸脱氢酶偶联法 B .酚-次氯酸盐显色法 C .纳氏试剂显色法 D.二乙酰一钙法 E.脲酶一波氏比色法答案：A 9.胆红素分子量为584,在453nm时摩尔吸光度为60700,如果有一胆红素溶液浓度时5mhg/L，以453nm，光径为1cm条件测定时，其吸光度应是多少 A.1.04 B.0.52 C.0.13 D.0.06 E.0.01 答案：B

辣根过氧化物酶

辣根过氧化物酶（HRP）一种糖蛋白，由于在辣根中该酶的含量很高，故名。它以铁卟啉为辅基，在过氧化氢存在时能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。通常用做光学和电子显微镜的组织化学示踪物。简介：过氧化物酶，通常来源于辣根（因此称辣根过氧化物酶），是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。RZ值越小，非酶蛋白就越多。用途： 1) RZ>3 活性 >250u/mg，主要应用于免疫学，是高纯度的过氧化酶。采用特殊色谱纯化技术以除去会影响免疫学反应的同工酶B . 2) RZ>2 活性>180u/mg ，主要应用于临床化学，我们的客户也有将这个规格的产品应用于免疫学研究的。此时，一个标准化的分析方法就变得尤为重要。 3) RZ>1 活性>100u/mg，主要应用于血糖试纸和尿液分析试纸。 4) RZ>0.6 活性>60u/mg ，主要应用于尿液分析试纸。实验原理：过氧化物酶催化以下反应： 2 H2O2 ─→ O2+2H2O

酶联免疫

分子生物学与生物化学课程论文酶联免疫（ELISA）检测方法学院:山西农业大学信息学院系部:农业与生命科学系专业:生物技术班级:102班

学号:2010010229 姓名:高淼时间:2013年5月5日

酶联免疫（ELISA）检测方法摘要：酶联免疫法简称ELISA，是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。关键词：ELISA基本方法抗体抗原前言： 1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA 由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。一、基本原理将抗原或抗体结合到某种固相载体，并保持其免疫活性，将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留酶的活性，也不会改变抗体的免疫学特性。而常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP)、碱性磷酸酶（AKP)等。①在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体反应；滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。二、其原理的免疫学基础

辣根过氧化物酶标记 Streptavidin

辣根过氧化物酶标记Streptavidin 产品简介：本辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-labeled Streptavidin)也称HRP-Streptavidin、Streptavidin-HRP或辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，为进口分装，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白或其它生物素标记分子的检测。具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。本HRP-Streptavidin用高纯度的Streptavidin和超纯的辣根过氧化物酶交联而成，确保产生最低的本底和最高的灵敏度。本产品的浓度为1mg/ml。 Streptavidin的分子量为66kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为K d=10-15M。 Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidinii 中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI= ~10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin 和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。辣根过氧化物酶即horseradish peroxidase (HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化ECL类试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光，可以在ELISA时催化TMB产生蓝色，也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot 检测时催化DAB产生棕色沉淀。本辣根过氧化物酶标记Streptavidin用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表，实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节辣根过氧化物酶标记Streptavidin的稀释比例。对于Western，推荐的稀释范围为1:2000-10000。本产品如果用于常规的Western检测，以每次检测需10毫升1:2000稀释的本产品计，可以检测40次。保存条件： -20℃保存，一年有效。注意事项：叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性，在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠氮钠。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1.Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。使用本产品的文献： 1. Liu H, Jiang C, Xiong C, Ruan J. DEDC, a new flavonoid induces apoptosis via a ROS-dependent mechanism in humanneuroblastoma SH-SY5Y cells. Toxicol In Vitro. 2012 Feb;26(1):16-23. 2. Liu J, Qian X, Chen Z, Xu X, Gao F, Zhang S, Zhang R, Qi J, Gao GF, Yan J. Crystal structure of cell adhesion molecule nectin-2/CD112 and its binding to immune receptorDNAM-1/CD226. J Immunol. 2012 Jun 1;188(11):5511-20. 3.P Xiao, X Lv. Immobilization of Chymotrypsin on Silica Beads Based on High Affinity and Specificity Aptamer and Its Applications.

辣根过氧化物酶直接电化学传感器检测过氧化物的研究

第38卷第3期2019年3月分析测试学报 FENXI CESHI XUEBAO(Journal of Instrum ental Analysis) Vol.38 N o.3 345-349 doi: 10. 3969/j.issn.1004 -4957. 2019. 03. 015 辣根过氧化物酶直接电化学传感器检测过氧化物的研究曹嫱，杨绍明*，杨杰，张小荣，柏朝朋，滕澈 (华东交通大学材料学院，江西南昌330013) 摘要：该文以高比表面积的泡沫镍电极（N f o m)为基础，通过电沉积碳纳米管（CNT S)制备了C N T s/N i f o m。然后在十六烧基三甲基溴化铵（C T A B)的辅助下，通过一步法电沉积纳米金（A u N P s)将辣根过氧化物酶（H R P)固定到电极表面，制备了H R P-A u N P s/C N T s/N i f o m直接电化学酶传感器。并采用SEM、能谱 (E D S)和电化学方法对该电极进行了表征，优化了测试电位和p H值，将该传感器对过氧化氢及2种有机过氧化物进行了检测。结果表明，该传感器性能良好，对过氧化氢、过氧化氢异丙苯、2-过氧化丁酮具有良好的催化检测性能，其检出限分别为1.2X10—7、4.5X10—7、2.5x l0_7m〇l/L。关键词：过氧化物；辣根酶；碳纳米管；传感器中图分类号：0657.1文献标识码：A文章编号：1004 -4957(2019)03-0345-05 R e s e a r c h o n D e t e c t i o n of P e r o x i d e s w i t h H o r s e r a d i s h P e r o x i d a s e Direct E l e c t r o c h e m i c a l S e n s o r C A O Q i a n g，Y A N G S h a o-ming*，Y A N G J i e，Z H A N G Xiao-rong，BAI Chao-peng，T E N G Y u (School o f Materials Science and Engineering，East China Jiaotong U niversity，Nanchang 330013，China) Abstract:Based on the surface of nickel foam electrode(Ni foam)with high specific surface area，a carbon nanotubes(CNTs)/Ni foam was prepared t hrough the electrodeposition of C N help of cetyltrimethylammonium bromide(C T A B)，horseradish peroxidase(H R P)was immobilized onto the surface of CNTs/Ni foam by one - step electrodeposition of A u nanoparticles(A u N P s)，and an H R P - A u NPs/CNTs/Ni foam direct electrochemical enzyme sensor was prepared.S E M，electron dispersive spectroscopy(E D S)and electrochemical methods were adopted to characterize the modified electrode，and the t est conditions for p H value and work potential were also optimized.The sensor was applied in the detection of hydrogen peroxide and two organic peroxides.Re sensor has a good c atalytic detection performance toward hydrogen peroxide，cumene hydroperoxide and 2-butanone peroxide with the d etection limits of 1. 2 X10 7， 4. 5 X10 7and 2. 5 X10 7mol/L， respectively. K e y w o r d s:peroxides；horseradish peroxidase；carbon nanotubes；sensor 过氧化物广泛应用于化工、造纸、医药等领域，对人们的生产生活造成很大影响[1-2]，如过氧化氢异丙苯溶于水后，不仅污染环境，若被生物体吸入，则会引起中毒，破坏正常的生物机理，阻碍正常的生物代谢[3]。目前，过氧化物检测的方法主要有分光光度法[4]、化学发光法[5]、荧光法[6]和酶传感器法[7-8]等，而基于辣根过氧化物酶的电化学传感器法，以灵敏度高、选择性好和仪器设备简单等优点，受到广大研究者的密切关注。辣根过氧化物酶电化学传感器检测过氧化物一般通过电子介体的中介作用，或酶的直接电化学法实现酶与电极之间的电子传递。直接电化学法的酶传感器法无需电子介体，可简化电极制备，但由于酶的电活性中心被蛋白质本体包覆，一般难以实现与电极之间的直接电化学。因此，纳米材料如碳纳米管[9]、石墨烯[10]、金纳米粒子[11]及复合纳米材料[12]等常被用来修饰电极表面以促进酶与电极之间的电子传递。如Yagati等[13]先将石墨稀/金纳米粒子复合物修饰到氧收稿日期：2018-08-14;修回日期：2018 -09-15 基金项目：国家自然科学基金项目（21465012);江西省自然科学基金项目（20171BAB203017) *通讯作者：杨绍明，博士，教授，研究方向：电分析化学及生物传感器，E-m a il: yangsm79@https://www.wendangku.net/doc/1618863221.html,

辣根过氧化物酶的色原底物

辣根过氧化物酶的色原底物 HRP最常用的色原底物有邻苯二胺(OPD)、2，2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2， 2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)，ABTS](杂环吖嗪)、四甲基联苯胺(TMB)和4—氨基安替比林：苯酚耦联底物对等。上述色原底物受HRP作用主要有两种形式的反应：①氧化还原底物的氧化作用，如OPD、ABTS等；②一个氨基芳香剂与另一个芳香基化合物的氧化耦联，如4—氨基安替比林：苯酚等。 (一)氧化还原色原底物 OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的作用下，由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成2，2’—二氨基偶氮苯(DAB)。在pH5．0左右时，DAB在波长450nm处有广范围的最大吸收，当pH值降为1．0时，最大吸收波长移动至492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深(图4—2)。因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。实际工作中，用强酸尤其是盐酸终止反应后，显色并不稳定，常随时间增长而颜色加深，这是由于反应后剩余的过氧化氢继续氧化OPD而产生非酶催化的DAB的结果。有人在强酸反应终止液中加入还原剂如亚硫酸钠，因还原剂可迅速完全地将剩余的过氧化氢还原而阻止了OPD 的非酶氧化，结果显色稳定，数十小时内不变，而且无需避光。OPD的缺点是其对机体具有致突变作用。由于OPD的不稳定性，现在的商品试剂盒中，OPD均以片剂或粉剂供应，临用时再溶解于相应的缓冲液。在ELISA测定时，OPD色原底物的具体配方为①显色底物溶液：在0．1mol／L枸橼酸盐缓冲液(pH5．0)中含20 mmol／L OPD和12 mmo!／L H202，或10 mmol／L OPD和5．5mmol／L H202；②终止液：2 mol ／L硫酸(含0．1 mol／L亚硫酸钠)；③测定波长：492nm。 TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，如果HRP量少，过氧化氢溶液和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌(图4—3)。使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min，但随后本底显色就不断加深，国内有人认为使用1％SDS作为终止剂，可使鲜蓝色24h内保持不变，阴阳性对比十分明显，但在我们实验室发现1％SDS对上述显色有较强的褪色作用，目前仍以硫酸作为终止剂较为理想。ELISA中，底物反应显色后，常选择其具最大吸收的波长450nm比色测定结果。而’Madersbacher和Berger等为提高以TMB作底物的ELISA测定的敏感性，选择显色呈指数加深时的波长405nm比色测定。他们首先测定一系列已知浓度的标准品在450nm和405nm的值，证实A450nm／A405nm之比为3．2，然后在使用波长405nm测定含低浓度待测物的标本得到的OD值再乘以常数3．2，即为待测标本在波长450nm处的真值。该种双波长测定方法可使ELISA测定范围提高3倍。TMB的显色反应虽与OPD一样同属氧化还原反应，但前者的反应是可逆的，如终止液中存在还原剂(维生素C及亚硫酸钠、SDS等)，则可反应显色迅速消退。TMB虽然溶解度相对较低，但由于其高检测敏感性及无致突变作用，现已基本上取代了OPD而成为HRP最为常的色原底物。