2008-CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究

中国农业科学 2008,41(11):3691-3697

Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.033 CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究

毛伟华1,2，龚亚明3，宋兴舜1，夏晓剑1，王彦杰1，周艳虹1，师 恺1，李亚丹1,4，喻景权1

（1浙江大学园艺系/农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室，杭州 310029；2浙江大学分析测试中心，杭州310029；

3浙江省农业科学院蔬菜研究所，杭州 310021；4河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016）

摘要：【目的】研究黄瓜花叶病毒病（CMV）侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达和代谢途径响应。【方法】在结合气体交换和叶绿素荧光参数及抗性相关酶活性测定的基础上， 应用农业部园艺植物生长发育与品质调控重

点开放实验室自主开发的黄瓜cDNA芯片研究黄瓜在CMV侵染胁迫下的基因表达谱变化，并对其中5个具有代表性

的基因通过实时荧光定量PCR（QRT—PCR）进行检测，以验证cDNA芯片杂交结果的可靠性。【结果】共获得67

个差异表达显著的基因，其中42个基因下调表达，25个基因上调表达。这些差异表达的基因涉及了许多重要代

谢途径。许多与光合作用、氮同化相关的基因受到明显的抑制；而一些防御相关基因和信号传导相关基因则诱导

表达；同时，也发现了一些与CMV胁迫相关的功能未知基因或未有任何功能信息的基因。【结论】CMV胁迫引发

了黄瓜代谢发生一系列复杂的适应性变化，PR1-1a等基因可能在黄瓜防御CMV侵染过程发挥着重要作用。

关键词：黄瓜；CMV；cDNA芯片；基因表达谱

Expression Analysis of Important Functional Genes and Pathways in Cucumber Leaves in Response to CMV Stress

MAO Wei-hua1,2, GONG Ya-ming3, SONG Xing-shun1, XIA Xiao-jian1, WANG Yan-jie1, ZHOU Yan-hong1,

SHI Kai1, LI Ya-dan1,4, YU Jing-quan1

(1Department of Horticulture, Zhejiang University/The Ministry of Agricultural Laboratory of Horticultural Plant Growth Development and Biotechnology, Hangzhou 310029; 2Center of Analysis and Measurement , Zhejiang University, Hangzhou 310029; 3Institute of Horticulture, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021; 4College of Life

Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016)

Abstract: 【Objective】The aim of this paper is to study on the expression of important functional genes and pathways in cucumber leaves in response to CMV stress.【Method】On the basis of study of photosynthesis and activities of defence-related enzymes, the changes of gene expression profiles was analyzed by microarray in cucumber (Cucumis sativus L.) after CMV infection.

In order to validate the microarray result, five representative clones induced or repressed from microarray analysis were selected for

real-time quantitative PCR analysis. 【Result】Significant changes in transcript abundance were observed for 67 genes, among them,

42 showed down-regulated expression and 25 showed up-regulated expression. Analysis of these CMV-responsive genes showed that

they belong to wide range of functional categories. Many genes for photosynthesis and nitrogen assimilation were strongly repressed

while some defense-related genes, on the other hand, were found to be up-regulated. In addition to these expression changes, some functions unknown or unreported novel genes that respond to CMV stress were also identified.【Conclusion】A complex set of metabolic adaptation appears to occur during CMV stress and some genes, such as PR1-1a might play an important role in defence.

Key words: Cucumis sativus L.; CMV; Microarray ; Gene expression profiling

收稿日期：2007-08-25；接受日期：2007-10-15

基金项目：国家重点基础研究发展计划资助项目（2009CB119000），国家自然科学基金资助项目（30400297，30671257，30800763，3050044）和浙江省自然科学基金资助项目（Y307168）

作者简介：毛伟华（1970-），女，浙江温岭人，博士，研究方向为蔬菜分子生物学。Tel：0571-********; E-mail：whmao@https://www.wendangku.net/doc/221430115.html,。通讯作者喻景权（1963-），男，浙江义乌人，教授，研究方向为设施园艺学。E-mail：jqyu @ zju. https://www.wendangku.net/doc/221430115.html,

3692 中国农业科学41卷

0 引言

【研究意义】黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）是雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）典型成员，其寄主范围十分广泛，能侵染85科1 000多种植物[1]。其中包括许多重要的经济作物，如引起番茄的坏死、香蕉的心腐、豆科和瓜类植物的花叶等，对这些作物的生产造成了巨大的经济损失。【前人研究进展】关于CMV 致病机制的研究历来受到重视，但以往对CMV的研究主要着重于对CMV基因组和病毒复制的生物学研究[2]，而关于CMV-寄主互作机理的研究相对较少。已有研究表明病原菌侵染植物后，常引起植物光合下降、碳水化合物代谢途径发生变化[3~5]，与此同时，植物在感知病原菌入侵后也会作出一定的反应，如产生信号分子，并通过关键调控基因传递和放大，最终诱导一系列防卫反应基因的表达和代谢的变化而产生抗性[6]。可见植物对病毒的响应是一个十分复杂的过程，涉及多种代谢途径和基因的协作。目前，基因芯片技术因具有微型化、集约化和标准化的优点，在病原菌-寄主互作机理研究上显示出了极为广阔的应用前景。运用基因芯片技术研究病原菌与拟南芥等模式植物的互作已获得了可喜的结果[7,8]。【本研究切入点】黄瓜（Cucumis sativus L.）是一种深受人们喜爱的重要的设施园艺作物，在栽培过程中极易受黄瓜花叶病毒侵染，但目前对CMV-寄主互作机理研究主要集中于西葫芦[3]、拟南芥[8]、烟草[9]，而有关黄瓜-CMV互作分子机理的研究罕有报道。【拟解决的关键问题】本研究在结合气体交换和叶绿素荧光参数及抗性相关酶活性测定的基础上，利用农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室自主开发出的首张黄瓜cDNA基因芯片研究黄瓜在CMV侵染这一生物胁迫下的代谢响应及基因表达谱变化，为寄主-CMV互作机理的深入研究和基因功能的分析与验证提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料培养及处理

供试黄瓜品种为‘津研3号’（Cucumis sativus L. cv Jinyan 3）。精选一定数量的种子播种于草炭中，两片子叶充分展开时移入Hoagland和Arnon配方营养液中，在12 h 600 μmol·m-2·s-1 PPFD和28℃/18℃条件下培养。期间每隔5 d更换1次营养液。

黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus，CMV）侵染。试验设两个处理：（1）CK（不接种CMV）；（2）CMV（接种CMV）。待幼苗第1片真叶展开时，以接种缓冲液浓度（0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液，pH 7.0）制备的CMV侵染西葫芦粗汁液摩擦接种供试黄瓜子叶和第1片真叶，并以健康西葫芦粗汁液同样处理的供试植株为健康对照, 每个处理40株。接种后第12天，取上部第1片完全展开叶进行各种指标的测定。此时，接种CMV的黄瓜叶片已经表现出典型的花叶症状。

1.2 方法

1.2.1 气体交换与叶绿素荧光参数的测定 应用LI-6400型光合仪（美国LI-COR公司生产）在测定光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）和胞间CO2浓度（Ci），应用FMS2脉冲调制式荧光仪（英国Hansatech公司生产）测定荧光参数天线色素光能转化效率Fv’/Fm’、光化学猝灭系数qP、PSⅡ光合电子传递量子效率ΦPSⅡ和PSⅡ最大光化学效率Fv/Fm，测定光强为600 μmol·m-1·s-1，温度为25℃， CO2浓度为350 μl·L-1，参照Zhou等[5]的方法进行有关光合作用和叶绿素荧光参数的测定和计算，测定叶片均为上部第1片完全展开叶，测定重复3次。立即采取经光合参数测定后的叶片于液氮中冷冻后，－76℃低温保存，用于酶活性测定及总RNA提取。

1.2.2 酶活性的测定 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性测定：取0.3 g待测叶组织与预冷的0.25 mol·L-1硼酸缓冲液（pH 8.8，含5 mmol·L-1巯基乙醇）在冰浴上研磨，匀浆液于20 000×g下低温离心20 min。取上清液按Hyodo等［10］的方法测定酶活性，测定所有样品在波长为290 nm时的光吸收值A，以A

△每分钟增加0.01为1个酶活性单位。

愈创木酚过氧化物酶（GPOD）活性的测定：取0.3 g待测叶组织加25 mmol·L-1 HEPES缓冲液（含1%PVP，0.2 mmol·L-1 EDTA）于冰浴中研磨，匀浆液于20 000×g下低温离心20 min。取上清液按Cakmak 等[11]的方法测定过氧化物酶活性，取其中10 s的动力学变化计算酶促反应速率。

1.2.3 荧光探针的制备、杂交及芯片扫描、数据分析 用于杂交的芯片为本实验室根据GenBank已发布的生物代谢途径中的关键酶基因序列，以黄瓜叶片为材料，采用RT-PCR法扩增这些酶的相应基因片段，在完成432个基因片段的克隆分离、测序和生物信息学分析工作的基础上所研制的黄瓜cDNA芯片。该芯片含有9个质控cDNA片段和423个cDNA探针。

11期毛伟华等：CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究 3693

按TRIzol?试剂说明书分别抽提对照和CMV处理样本总RNA各90 μg。其中每个处理的10 μg总RNA 用于QRT-PCR试验，80 μg总RNA用于芯片荧光探针的制备。荧光探针标记采用CyScribe First-Strand cDNA Labeling kit （Amersham）标记，处理组以Cy5 dCTP标记，对照组以Cy3 dCTP标记。按照毛伟华等[12]的方法进行芯片制备、荧光探针标记、芯片杂交、清洗、扫描及数据分析。每个处理设置3次独立试验，基因差异表达判断标准为：（1）Ratio值＞2为明显上调表达基因，Ratio值＜0.5为明显下调表达基因，0.5＜Ratio值＜2视为该基因表达无明显变化；（2）重复间试验结果一致，即都有相同的上调和下调表达趋势，且程度相似，计算基因点的平均Ratio值为重复间Ratio值的平均值。

1.2.4 QRT-PCR 验证芯片分析结果 根据芯片分析结果，选择有代表性的2个下调的基因（光合相关基因SSU和RCA）及3个上调的基因（抗性相关基因PAL、PR1-1a和HPL）作为QRT-PCR验证的对象。首先分别以处理和对照的10 μg总RNA逆转录成cDNA第一链，然后通过所选基因的特异性引物参照试剂说明书（BioRad）在BioRad 的iCycle定量PCR 仪进行实时定量PCR。PCR反应参数为94℃预变性3 min，然后94℃ 15 s，56 30 s

℃，72 30 min

℃，40个循环后作熔解曲线（94℃～56℃，0.5℃·s-1）以鉴定反应的特异性。每个点3次重复。选用actin基因为内参照，按照2-??C T（Livak）法[13]计算出待测基因相对表达量，最终确定基因表达水平变化趋势，以验证芯片杂交结果的可靠性。QRT-PCR引物如下：actin上游引物序列5′-TGGACTCTGGTGATGGTGTTA-3′，下游引物序列5′-CAATGAGGGATGGCTGGAAAA-3'；SSU 上游引物序列5′-ATGGGTTCCCTGCGTTGA-3′，下游引物序列5′-CCTGAGATGAGTCGGTGC-3'；RCA上游引物序列5′-GCTGACAACCCAACCAA-3'，下游引物序列5′-CATCCGACCATCACGAA-3'；PAL上游引物序列5′-ACGGTTTGCCTTCTAAT-3'，下游引物序列5′-CATCCTGGTTGTGTTGC-3'；PR1-1a上游引物序列5′-AACTCTGGCGGACCTTAC-3'，下游引物序列5′-GACTTCCTCCACACTACT-3'；HPL上游引物序列5′-CTCCTTTCTCGCTTCTCACC-3'，下游引物5′- TCAAACGACACGGCATCACT-3'。

2 结果与分析

2.1 CMV侵染对黄瓜气体交换和叶绿素荧光参数的

影响

在接种CMV后12 d分别测定黄瓜植株接种叶片及对照叶片的相关气体交换和叶绿素荧光参数（表1）。结果表明CMV侵染的植株中，伴随着Pn和Gs 显著降低，胞间CO2却反而上升，但Fv/Fm却没有明

表1 CMV对黄瓜叶片气体交换和叶绿素荧光参数的影响

Table 1 Effects of CMV infection on gas exchange characteristics and chlorophyll fluorescence parameters in cucumber leaves

处理Treatment 净光合速率Pn

(μmolCO2·m-2 ·s-1)

气孔导度Gs

(molH2O·m-2 ·s-1)

胞间CO2 浓度

Ci(μmol·mol-1)

天线色素光能转

化效率Fv’/Fm’

光化学猝灭

系数qP

PSⅡ光合电子传

递量子效率ΦPSⅡ

PSⅡ最大光化

学效率Fv/Fm

CK 17.07±0.21a 0.27±0.08a 231.33±5.43a 0.84±0.04a 0.61±0.03a0.37±0.02a 0.84±0.04a CMV 5.02±0.37b 0.14±0.09b 261.33±5.23b 0.50±0.04b 0.45±0.05b0.20±0.08b 0.85±0.02a 数值后不同字母表示经Tukey法多重检验在0.05水平上差异显著

Values followed by different letters are significantly different according to Tukey test at 5% level

显的变化；同时，CMV侵染导致了qP和Fv’/Fm’的下降，从而也引起了ΦPSⅡ的下降。

2.2 CMV侵染对黄瓜叶片GPOD和PAL活性的影响

CMV侵染植株的GPOD与PAL活性显著提高（图1）。与对照相比，CMV侵染使侵染植株的GPOD、PAL活性分别增加了66.7%、50.2%。

2.3 黄瓜cDNA芯片杂交结果分析

提取CMV处理和对照样本的总RNA，制备成荧光探针进行芯片杂交。经数据提取分析后获芯片杂交有效数据1 127个，占总数87.9%。其中受诱导差异表达的基因67个，下调表达的有42个，上调表达的有25个。序列分析表明，受诱导表达差异基因中已知功能的基因有27个，上调8个，下调19个。表2列出已知功能的上调和下调基因。从表2可知，CMV 侵染后，黄瓜生物代谢途径中许多酶的基因表达发生明显的变化：（1）10个与光合作用相关的基因的表达受到了抑制，其中4个基因（叶绿素a/b结合蛋白Ⅰ、Ⅲ、光系统ⅡPsbP蛋白、铁氧还蛋白NAPD+还原酶）与植物光反应相关，6个基因（包括5个Calvin 循环的关键酶和与运输CO2有关的关键酶碳酸酐酶）

3694 中 国 农 业 科 学 41卷 表2 CMV 胁迫下黄瓜表达显著差异的基因

Table 2 Genes showing significant differential expression in cucumber after CMV infection

功能分类Category 基因注释Annotation

比值Average ratio

叶绿素a/b 结合蛋白Ⅲ Chlorophyll a/b binding protein type Ⅲ 0.141 光系统ⅡPsbP 蛋白 PsbP

0.128 铁氧还蛋白NAPD +还原酶Ferredoxin NADP + reductase 0.284 Rubisco 活化酶 RCA

0.292 碳酸酐酶Carbonic anhydrase isoform 2

0.289

转酮酶Transketolase 0.021 天庚酮糖1,7-二磷酸酶Sedoheptulose-1,7-bisphosphatase precursor 0.192 叶绿素a/b 结合蛋白I Chlorophyll a/b-binding protein type I

0.419

Rubisco 小亚基SSU 0.235 光合作用相关基因 Photosynthesis

磷酸甘油酸激酶Phosphoglycerate kinase

0.108

原叶绿素酯氧化还原酶NADPH-protochlorophyllide oxidoreductase 0.007 叶绿素合成相关基因 Chlorophyll synthesise 谷胺酰- tRNA 还原酶Glutamyl-tRNA reductase 0.232 肌醇半乳糖苷合成酶Galactinol synthase

0.168 高尔基体苹果酸脱氢酶Glyoxysomal malate dehydrogenase 0.083 棉子糖合成酶Raffinose synthase

0.165 液泡3-磷酸甘油醛脱氢酶Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase

0.296

碳水化合物代谢相关基因 Carbohydrate metabolism

磷酸果糖激酶Phosphofructokinase 2.081

硝酸还原酶Nitrate reductase 0.232 谷氨酸脱羧酶Glutamate decarboxylase 0.206 转氨酶 2 Aminotransferase 2 0.107 25S 核糖体蛋白25S ribosomal RNA 2.682 氮，蛋白代谢相关基因 Nitrogen, protein metabolism

天冬氨酸蛋白酶Aspartic proteinase

3.477

过氧化物酶Peroxidase 2.054 苯丙氨酸解氨酶Phenylalanine ammonia lyase 1 (PAL1) 2.304 PR 蛋白1-1a Pathogenesis-related protein 1-1a 2.183 脂氢过氧化物裂解酶Fatty acid hydroperoxide lyase 6.102 逆境相关基因 Stress

细胞色素P450 90 C1 Cytochrome P450 90 C1 (CYP90 C1)

5.945

数据至少为3次重复的平均数Data are the mean of at least three replicates with standard errors shown by vertical bars

图1 CMV 侵染对GPOD 与PAL 活性的影响

Fig. 1 Effects of cucumis mosaic virus infection on activities

of GPOD and PAL in cucumber leaves

与暗反应相关。（2）3个氮同化关键酶硝酸还原酶（NR ）、谷氨酸脱羧酶、转氨酶2的表达受到抑制。（3）2个叶绿素合成代谢途径中的相关基因谷胺酰-tRNA 还原酶、原叶绿素酯氧化还原酶表达发生下调。（4）一些碳水化合物代谢相关酶的基因下调表达，包括液泡3-磷酸甘油醛脱氢酶、高尔基体苹果酸脱氢酶，肌醇半乳糖苷合成酶，棉子糖合成酶等。（5）与此同时，CMV 侵染也使一些基因表达发生明显的上调，功能明确的有：磷酸果糖激酶、过氧化物酶（POD ）、苯丙氨酸解氨酶（PAL ）、PR1-1a 、25S 核糖体蛋白、天冬氨酸蛋白酶、细胞色素P450 90 C1（CYP90 C1）、脂肪酸羟过氧化物解氨酶（HPL ）。 2.4 黄瓜cDNA 芯片杂交结果验证

为了验证芯片的结果，笔者进一步对3个上调的

11期 毛伟华等：CMV 侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究 3695

基因（PAL ，PR1-1a ，HPL ）、2个下调基因（SSU ，RCA ）进行实时定量PCR 检测。结果发现QRT-PCR 的结果与芯片的结果具有一致性, 即芯片中上调的基

因在定量PCR 中也上调，芯片中下调的基因在定 量PCR 中也下调（图2）。这说明芯片试验结果是可靠的。

A. 在芯片中检测出的CK 和CMV 胁迫下基因的相对表达量；

B. QRT-PCR 中检测出的CK 和CMV 胁迫下基因的相对表达量

A. Showing the relative expression level of gene in microarray for control and CMV stress;

B. Showing the relative expression level of gene in RT-PCR for control and CMV stress

图2 cDNA 芯片和QRT-PCR 检测结果比较 Fig. 2 Comparison of microarry and QRT- PCR results

3 讨论

大量资料表明，病毒侵染后会引起植物光合效率明显下降，已有一些研究认为植物感染TMV 、CMV 病毒后，病毒外壳蛋白CP 积累于叶绿体和类囊体膜，从而抑制了光系统Ⅱ（PS Ⅱ）电子传递[14]，导致了光合下降。另一方面，包括本试验对马铃薯Y 病毒(PvY)侵染有关的工作在内的很多研究表明，病毒感染导致与CO 2同化、

光同化物运输相关的一些酶受到了抑制，可能是造成光合作用下降的主要原因[4,5,15,16]。和前人的结果一致，本研究结果也表明CMV 侵染后黄瓜叶片光合效率明显下降。通过气体交换和叶绿素荧光参数分析表明，CMV 侵染叶片伴随着Pn 和Gs 显著降低，Ci 却反而上升（表1），但Fv/Fm 却没有明显的变化。这说明在CMV 处理后，黄瓜叶片光合作用的下降，并不是气孔导度下降而使CO 2供应减少所致，而是由于非气孔因素阻碍了CO 2的利用，因而造成细胞间隙CO 2积累[17]。并且由于无论是对照或者CMV 处理，其Fv/Fm 都保持在0.85左右，这说明CMV 处理并没有受到光抑制，即CMV 处理后并不是因为破坏了PSII 才导致光合作用下降的。因此推测CMV 侵染胁迫所引起的光合作用下降更多的是由于暗反应速率的下降所引起的。同时许多研究表明，任何改变碳同化的因子均会减少对ATP 和NADPH 等的需求，以减少电子传递速率，即“下游”调节机制，从而对

光合机构起着光保护作用[18]。荧光测定结果表明，伴随qP 和Fv’/Fm’的下降，CMV 导致了ΦPSII 明显下降。通过芯片杂交（表2），笔者鉴定到了6个与暗反应相关基因（包括5个Calvin 循环的关键酶和与运输CO 2有关的关键酶碳酸酐酶）的表达发生下调；4个与植物光反应相关基因（叶绿素a/b 结合蛋白Ⅰ、Ⅲ，光系统ⅡPsbP 蛋白，铁氧还蛋白-NAPD +还原酶）和两个叶绿素合成关键酶（谷胺酰- tRNA 还原酶，原叶绿素酯氧化还原酶）的表达也受到了抑制。其中叶绿素a/b 结合蛋白Ⅰ、Ⅲ，谷胺酰- tRNA 还原酶，原叶绿素酯氧化还原酶与天线色素光能传递有关，而光系统ⅡPsbP 蛋白，铁氧还蛋白-NAPD +还原酶与电子传递有关。因此推测CMV 侵染所引发的暗反应关键酶基因在转录水平的抑制是引起光合效率下降的主要原因，从而在一定程度上引起CMV 侵染植株产量下降；与光合电子传递相关的这些基因在转录水平的下调则可能是对光合效率下降的一种适应性响应，从而保护光合机构。

PR-1、POD 、PAL 通常被认为与植物抗病性有着密切的关系，并且PR-1的产生是系统获得抗性的标志[19]，和前人结果一致，笔者的芯片杂交结果表明CMV 胁迫下PR-1a 、PAL 、POD 明显上调。同时酶活性测定也表明GPOD 和PAL 活性明显高于对照，因此推测在黄瓜PR-1a 、PAL 、POD 在转录水平的上调表达对于防御CMV 起着重要作用。

3696 中国农业科学41卷

值得注意的是，在为数不多的基因中，笔者发现CMV胁迫下黄瓜两个细胞色素P450基因——HPL和CYP90 C1表达量发生了明显的增加。HPL属于CYP74 B的亚家族，催化脂氢过氧化物裂解生成短链醛和含氧酸等Oxylipin，其产物六碳醛不仅具有植保素功能以防御细菌、真菌、原生动物的侵染，而且是一系列防御基因产生的信号分子[20]。另外最近研究表明，CYP90 C参与油菜素内酯（BRs）的合成[21]，而BR 对真菌细菌以及病毒病害具有广谱抗性。因此，推测这两个细胞色素P450基因的上调表达，是调控黄瓜合成各种抗病原物有关的物质以抵抗CMV胁迫的一种重要途径。

除以上所讨论的基因外，还有为数不少的这一类与CMV和植物互作无确切关系、或该方面研究报道较少、但在笔者试验中受CMV诱导明显的基因，这表明存在着一些并没有引起重视但在CMV和植物互作有重要作用的基因，尽管难以在短时间内探明这些基因在植物CMV胁迫中的功能和相互之间联系，然而这为进一步研究CMV和植物互作机理提供了丰富可靠的研究线索。

4 结论

CMV侵染胁迫引发了黄瓜代谢发生一系列复杂的适应性变化，CMV侵染从转录水平抑制了碳、氮同化途径，同时CMV侵染也诱导了PR-1a、PAL、POD、HPL和CYP90 C等防御基因的表达，推测这些基因在黄瓜防御过程发挥着重要作用。

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（责任编辑曲来娥）