UV-C照射诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立
生理学报,1999年4月,51(2),229～233 229 Acta Physiologica Sinica
胍基丁胺对大鼠血流动力学
的影响及其细胞机制
李晓滔 何瑞荣3
(河北医科大学基础医学研究所生理室,石家庄050017)
摘 要 在麻醉大鼠研究静注胍基丁胺(AG M)对血流动力学的影响,并初步探讨其机制。结
果如下:(1)静注AG M(10mg/kg)后,HR,M AP,LVP,±LV dp/dt max,CI和TPRI均明显下降;(2)
预先静注NOS抑制剂L2NNA(15mg/kg)或腹腔内注射鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲基蓝(50mg/
kg),均不能阻断AG M的降压作用;(3)预先静注咪唑啉受体和α22肾上腺素能受体阻断剂ida2
zoxan(2mg/kg)则可明显阻抑AG M的降压效应。以上结果表明,AG M对麻醉大鼠的降压机制,
在于显著抑制心肌收缩性而使心输出量降低,以及舒张外周血管致使总外周阻力下降;此效应
似主要由IR和/或α22AR所介导。
关键词:胍基丁胺;血流动力学;咪唑啉受体;α2受体
学科分类号:Q463
早在1984年,Atlas和Burstein从小牛脑组织分离和部分纯化了一种物质,分子量为588Da,它能完全置换脑组织膜制备结合位点的[3H]可乐定,因而被命名为可乐定置换物质(clonidine displacing substance,C DS)[1]。Li等[2]首先从牛脑中分离纯化了此物质,鉴定为胍基丁胺(agmatine,AG M),它像可乐定一样,是咪唑啉受体(imidazoline recepter,IR)的激动剂和α22肾上腺素能受体(α22AR)的非儿茶酚胺配基。AG M是精氨酸的代谢产物,在哺乳动物体内有精氨酸脱羧酶,可将精氨酸脱羧生成AG M。现已知脑和血管中均能合成和贮存AG M,从而提示其可能对神经中枢及心血管系统有作用。Regunathan等[3,4]研究证实,血管平滑肌细胞不仅有α22AR,而且有IR。AG M对血压等的影响因不同给药途径而异。在麻醉大鼠和清醒兔小脑延髓池内注射AG M时,血压和交感神经活动呈剂量依赖性地增高[5,6]。在麻醉大鼠静注AG M则引起血管扩张,血压下降[7]。关于AG M对血压影响的作用机制,目前尚无定论。本研究旨在观察静注AG M的血流动力学效应,进而探讨其降压作用的可能机制。
动物为雄性S prague2Dawley大鼠(300～350g bw),氨基甲酸乙酯(015g/kg)和氯醛糖(50mg/kg)腹腔内麻醉。经麻醉后,颈部正中切口,右颈总动脉插管,连于压力换能器(M UP2015),输入载波放大器(AP2620)监测血压。左股静脉插管以备注射药物。气管插管,连于人工通气机(680A型,Harvard;115ml/100g,50breaths/min)。沿胸骨中线纵行开胸,暴露心脏,剪开心包,于心尖部行左心室插管,通过压力换能器监测左心室内压(LVP)。将LVP信号输入微分器(E D2600G),测定LVP的一阶导数(LV dp/dt)。用LV dp/dt
1998203225收稿 1998205211修回
3联系作者.Phn:862311260424121,ext.5566.Fax:862311260428177.E2M ail:syho@sjz1col1com1cn
信号触发心率计(AT2600G),计数心率。仔细游离升主动脉,将大小合适的电磁流量计探头垂直套于升主动脉,再连至电磁流量计(MFV21200,Nihon K ohden)测量主动脉流量,以此作为心输出量(C O)。用RM26000型生理多道仪记录上述各项血流动力学参数。由C O计算心指数(CI=C O/100g bw)。再根据平均动脉压(M AP)和CI计算总外周阻力指数(TPRI= M AP/CI)。手术操作于1h内完成,待各项指标稳定后进行实验观察。实验分3组:(1)静注AG M(10mg/kg,012ml)(n=6),分别记录上述参数;(2)先缓慢静注N2硝基2L2精氨酸(L2 NNA)(15mg/kg,012ml)或腹腔内注射亚甲基蓝(methylene blue,M B)(15mg/kg,012ml)(n =6),15～20min后再静注AG M,记录上述参数变化;(3)先缓慢静注idazoxan(2mg/kg, 012ml)(n=6),5min后再静注AG M,记录上述参数的变化。每组实验均给予等容积生理盐水作对照。由血气分析仪(ABL21,Radiometer)测得的动脉血P O
2
,P CO2和pH值分别为1313±013kPa,419±012kPa和7139±0102。氨基甲酸乙酯,氯醛糖,AG M和idazoxan均为Sig2 ma产品。所有药品溶于生理盐水,于实验当时配制。实验数据输入微型计算机进行统计学处理,全部数据用均数±标准误(x±s x)表示。给药前后行配对t检验。
1. 静注AG M的血流动力学效应
动物各项参数稳定后,静注生理盐水012ml,各项血流动力学参数无明显变化。静注AG M(10mg/kg,012ml)后,HR,M AP,LVP,LV dp/dt max,LV dp/dt min,CI和TPRI均明显下
降(图1,表1)。各项指标均在5s内开始变化,约在50s时作用达高峰,持续5min左右
。
图1 静注胍基丁胺所致血流动力学参数的变化
Fig.1 Changes in hem odynamic paremeters following intravenous injection of agmatine ↓:AG M.
032生 理 学 报 51卷
表1 静注胍基丁胺(10mg/kg )对大鼠血流动力学效应的影响
T able 1 Hem odynamic effects induced by intravenous injection of agmatine (10mg/kg )in
rats (n =6)
C ontrol
AG M HR/bpm
380±10358±12333M AP /kPa
1019±013811±014333LVP /kPa
1511±0161211±01533LV dp /dt max (kPa ?s )-1
606±20398±29333LV dp/dt min (kPa ?s )-1
471±22323±2233CI /ml ?min -1?100g -1
2118±0171712±018333TPRI /U ?100g -1
3174±01163154±011633P <0105,33P <0101,333P <01001vs control.
21 L 2NNA 和MB 对AG M 血流动力学效应的影响
静注L 2NNA 或腹腔内注射M B 后,M AP ,LVP ,LV dp/dt max ,LV dp/dt min 和TPRI 均升高,而CI 降低。然后分别在L 2NNA 或M B 后15～20min 静注AG M ,除TPRI 无明显变化外,其它血流动力学参数依然显著下降(P <0101),与单独应用AG M 时引起的参数变化相比无显著性差异。
31 Idazoxan 对AG M 血流动力学效应的影响
静注idazoxan 后,各项血流动力学参数无明显变化。5min 后再静注AG M 时,HR ,M AP ,TPRI 与静注AG M 前相比无差异(P >0105)(表2),其中HR 和M AP 的下降值与单用AG M 组HR 和M AP 的下降值(表1)分别进行组间比较,差异十分显著(P <01001)。
表2 Idazoxan (2mg/kg )对胍基丁胺(10mg/kg )血流动力学效应的影响
T able 2 E ffect of iv idazoxan (2mg/kg )on agmatine (10mg/kg )2induced hem odynamic
changes (n =6)
C ontrol
Idazoxan Idazoxan +AG M HR/bpm
381±11382±10378±11M AP/kPa
1016±0121013±0121010±012LVP/kPa
1318±0161311±0131112±0153LV dp/dtmax (kPa ?s )-1
587±50560±46482±3433LV dp/dt min (kPa ?s )-1
493±44488±40432±373CI/ml ?min -1?100g -1
2014±1122014±1131819±1113TPRI/U ?100g -1
3197±01153188±01233196±01203P <0105,33
P <0101vs idazoxan. 本研究表明,静注AG M 可引起HR ,M AP ,LVP ,±LV dp/dt max ,CI 和TPRI 均显著下降。由此提示,静注AG M 可通过某种机制对心脏发挥负性频率和负性肌力作用,以及舒血管效应,其明显的降压效应在于心输出量减少和外周阻力降低。据报道[2],AG M 可特异性地与α22AR 和IR 结合而发挥作用。
中枢神经系统特别是对心血管活动有重要调节作用的脑干区,以及外周血管上,均存在α22AR 和IR 。
至于心肌上是否存在IR ,除有个别学者报道1
322期 李晓滔等:胍基丁胺对大鼠血流动力学的影响及其细胞机制
232生 理 学 报 51卷
外,目前尚无定论[8]。M orrissey和K lahr[9]提出,AG M可与血管内皮细胞表面的IR结合,引起细胞内Ca2+增加,进而激活NOS而使NO生成,再通过cG MP系统引起血管舒张。G onza2 lez等[10]则认为,AG M可与血管上的α22AR结合而激活NOS使NO合成增加,进而产生舒血管作用。上述诸学者的实验结果似表明,AG M的舒血管作用是间接通过NO而起作用。我们在实验中分别应用NOS抑制剂L2NNA和鸟苷酸环化酶抑制剂M B,阻断了AG M所致的TPRI降低,但未影响其降压作用。应指出的是,我们实验中所检测的TPRI是根据M AP和CI计算所得,未直接测定AG M对外周血管张力的影响;鉴于AG M引起心肌活动的明显抑制招致心输出量减少,即使外周血管阻力不变,仍将导致血压降低。
我们在应用IR和α22AR阻断剂idazoxan后[10],AG M对HR,M AP和TPRI的抑制作用即被阻断。由此表明,静注AG M的降压效应是由IR和/或α22AR机制介导的。问题是:静注AG M的心血管效应是作用于哪些部位的受体机制或通过何种方式而起作用,值得加以探讨。我们认为有下列可能性:(1)阻断外周交感神经节的活动,使突触后末梢释放去甲肾上腺素减少,心血管活动因而受到抑制[10];(2)直接作用于心脏和血管的IR和/或α22AR对心血管活动起抑制作用[8]。静注的AG M是否有可能通过血脑屏障,作用于脑干中枢的IR 和/或α22AR,进而影响交感中枢活动,值得进一步研究。
参 考 文 献
[1] Atlas D,Burstein Y.Is olation and partial purification of a clonidine2displacing endogenous brain substance.Eur
J Biochem,1984,144:287～293.
[2] Li G,Regunathan S,Barrow C J,et al.Agmatine:an endogenous clonidine2displacing substance in the brain.
Science,1994,263:966～969.
[3] Regunathan S,Y oungs on C,Raasch W,et al.Imidazoline receptors and agmatine in blood vessels:a novel sys2
tem inhibiting vascular sm ooth muscle proliferation.J Pharmacol Exp Ther,1996,276:1272～1287.
[4] Regunathan S,Reis D.Imidazoline receptors and their endogenous ligands.Ann Rev Pharmacol Toxicol,1996,
36:511～544.
[5] Sun MK,Regunathan S,Reis D J.Cardiovascular responses to agmatine,a clonidine2displacing substance,in
anesthetized rats.Clin Exp Hypertens,1995,17:115～128.
[6] S zabo B,Urban R,Limberger N,et al.Cardiovascular effects of agmatine,a“clonidine2displacing substance”,
in conscious rabbits.Naunyn2Schmiedeberg′s Arch Pharmacol,1995,351:268～273.
[7] G ao Y,G umusel B,K oves G,et al.Agmatine:a novel endogenous vas odilator substance.Life Sci,1995,57:
83～86.
[8] Fuder H,Schwarz P.Desensitization of inhibitory prejunctional alpha222adrenoceptors and putative imidazoline
receptors on rabbits heart sympathetic nerves.Naunyn2Schmiedeberg′s Arch Pharmacol,1993,348:127～133.
[9] M orrissey JJ,K lahr S.Agmatine activation of nitric oxide synthase in endothelial cells.Proc Assoc Am Physi2
cians,1997,109:51～57.
[10] G onzalez C,Regunathan S,Reis D J,et al.Agmatine,an endogenous m odulator of noradrenergic neurotransmis2
sion in the rat tail artery.Br J Pharmacol,1996,119:677～684.
Acta Physiologica Sinica 233 Apr.1999,51(2),229～233
HEMODYNAMIC EFFECTS OF AG MATINE AN D ITS CE LL U LAR MECHANISM IN ANESTHETIZED RATS
LI X I AO2T AO, HE R UI2R ONG3
(Department o f Physiology,Institute o f Basic Medicine,H ebei Medical Univer sity,Shijiazhuang050017)
ABSTRACT
The hem odynamic effects of intravenous injection of agmatine and their cellular mechanism were investigated in anesthetized rats.The results obtained are as follows.
(1)F ollowing intravenous injection of agmatine(10mg/kg),HR,MAP,LVP,±LV dp/dt max,CI and TPRI were significantly decreased.(2)Pretreatment with N2nitro2L2 arginine(15mg/kg)or methylene blue(50mg/kg),did not affect the hypotensive effect of agmatine.(3)The hem odynamic effects induced by agmatine could be inhibited by prior intravenous injection of idazoxan(2mg/kg),anα22adrenoceptor(α22AR)and imi2 dazoline receptor antag onist.The results indicate that the hypotensive effect induced by iv agmatine may be attributed to the decrease in cardiac output resulting from depression of my ocardial contractility,as well as to the reduction in total peripheral resistance resulting from vas odilatation.These effects of agmatine may be mediated by imidazoline receptor and/orα22AR.
K ey w ords:agmatine;hem odynamics;imidazoline receptor;α22adrenoceptor
3C orrespondence to Prof.HE Rui2R ong.Phn:862311260424121,ext.5566.Fax:862311260428177.E2Mail: syho@sjz1col1com1cn
小鼠脑动脉血管平滑肌细胞使用说明
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常用疾病动物模型 上海丰核可以为广大客户提供各种疾病动物模型定制服务，同时提供相关疾病模型的药物敏感性实验分析服务。 客户只需要提供疾病模型的用途及建模方法的选择，我们会根据客户的具体要求量身定做各种动物模型服务。
小鼠或裸 鼠 加贴近实际（八）心血管疾病模型 1. 动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+维生素D喂养）兔高脂、高胆固醇饲喂兔造模，成 膜后血脂变化显著，为伴高血脂 症的动脉粥样硬化 4月血管组织病 理切片染色 2. 主动脉粥样硬化（高脂高胆固醇+主动脉球囊损伤）兔此模型用大球囊损伤加高脂饲 养方法成功建立兔主动脉粥样 硬化狭窄的动物模型，为相关基 础研究提供可靠模型。 2月动物实验模型病理切片展示 一、CCl4诱导的肝脏纤维化 简介：肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应，是诸多慢性肝脏疾病发展至肝硬化过程中的一个中间环节。肝纤维化的形成与坏死或炎症细胞释放的多种细胞因子或脂质过氧化产物密切相关。CCl4为一种选择性肝毒性药物，其进入机体后在肝内活化成自由基，如三氯甲基自由基，后者可直接损伤质膜，启动脂质过氧化作用，破坏肝细胞的模型结构等，造成肝细胞变性坏死和肝纤维化的形成。通过CCl4复制肝纤维化动物模型通常以小鼠或大鼠为对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。 动物模型图. 经过3个月的CCl4注射造模，小鼠的肝脏在中央静脉区形成了比较明显的肝纤维化，中央静脉之间形成了纤维桥接。（Masson染色） 二、CXCL14诱导的急性肝损伤动物模型
简述：CCl4是最经典的药物性肝损伤造模毒素之一，其在肝内主要被微粒体细胞色素P450氧化酶代谢，产生三氯甲烷自由基和三氯甲基过氧自由基，从而破坏细胞膜结构和功能的完整性，引起肝细胞膜的通透性增加，可溶性酶的大量渗出，最终导致肝细胞死亡，并引发肝脏衰竭。根据CCl4代谢和肝毒性机制可复制不同的肝损伤模型，其中给药剂量和给药方法是其技术关键。对于复制急性肝衰竭动物模型，往往采用大剂量一次性灌胃或腹腔注射给药。 图. (A) CCl4注射后0.5 d的HE染色表明CXCL14过表达增加了肝脏组织的嗜酸性变性面积(在照片中用虚线标记)(p < 0.05)。 (B) 1.5天组织样本的HE染色表明CXCL14过表达造成了比对照组更大面积的细胞坏死(p < 0.05)。 (C)同时还造成了中央静脉周围肝细胞中明显的脂肪滴积累。图中P和C分别表示动物模型的门静脉和中央静脉。KU指凯氏活性单位。 细胞凋亡检测结果 TUNEL标记没有显示CXCL14免疫中和小鼠和对照小鼠在凋亡细胞数量上的差异。C0, C1和C2分别是对照组0 d，1 d,和2 d样本，T1
血管平滑肌细胞表型转换的机制
血管平滑肌细胞表型转换的机制 基础医学院07级临床一班陈依然90701114 摘要 由血管平滑肌异常增殖导致的血管重构是PCI术后再狭窄的重要原因之一。血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转换密切相关。本文讨论了血管平滑肌细胞表型转换的特点、机制和相关信号传导途径。 关键词 血管平滑肌细胞表型转换信号传导途径 正文 自1977年冠心病介入治疗技术问世以来，其术后再狭窄（RS）一直是一个影响其远期疗效的重要问题。虽然RS的具体机制尚不明确，但目前已经公认血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell, VSMC）异常增殖、迁移及大量合成细胞外基质是其主要原因。而VSMC增殖的首要条件就是表型转换。 VSMC的表型可分为分化程度较高的收缩型（分化型）和分化程度较低的分泌型（未分化型或去分化型），我将就其特点和两者之间相互转换的相关信号传导途径进行探讨。 1. 表型转换的特点 VSMC来自胚胎发育时期的中胚层，逐渐分化为不同的细胞群并获得具有成年特征的分化表型，即收缩型。但与骨骼肌、心肌细胞不同的是，VSMC在分化成熟后仍可在某些因素的刺激下去分化成为分化程度较低的分泌型。有报告称，这两种表型可能代表了共存于血管壁内一系列不同表现型的两个极端类型，且表
达不同的基因和蛋白。正常成人动脉血管的VSMC以收缩型为主，其主要功能是维持血管的弹性和收缩血管。收缩型VSMC增殖、迁移能力差或无，胞体呈梭形或带状，含大量肌丝和结构蛋白含，合成细胞器如粗面内质网、高尔基复合体含量较少，合成基质的能力差或无，体积较小。分泌型VSMC主要存在于胚胎中期血管和病理血管中，其主要功能是增殖、迁移入内膜以及合成细胞外基质蛋白。形态上类似成纤维细胞，肌丝和结构蛋白含量较少，合成细胞器增多，合成和分泌基质蛋白的能力较强，体积较收缩型大。 根据VSMC两种表型表达蛋白的不同可以找到表型转换时相应的标志物。其中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）在收缩型细胞中优势表达而在分泌型细胞中表达甚微，它是VSMC分化的早期特异性标志物，也是应用最多的收缩型标志蛋白。而骨桥蛋白（osteopontin, OPN）则作为应用较多的合成型标志物。有实验显示OPN mRNA在正常的动脉中并不存在，而在动脉粥样硬化中的表达程度则随粥样硬化程度的增加而增加。 下表列VSMC表型转换的主要标志物。
小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良解读
小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 [ 08-10-30 13:48:00 ] 作者：吴建芳编辑：studa20 【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法改良酶消化法。结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98% 以上，足以满足各种细胞试验需求。结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 1．1 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 1．2 试剂：鼠抗SMC-α -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgG［H/L］，戊巴比妥钠注射液。 1．3 培养基：在DMEM 培养基中添加１５％胎牛血清、１％青霉素、链霉素、１％谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 1．4 酶消化液：Collagenase TypeⅡ 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)，过滤除菌即用。
人脑血管平滑肌细胞培养
1100 Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells 人脑血管平滑肌细胞 血管平滑肌细胞是许多动脉疾病的细胞水平的根源。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1 和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关.人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息. 细胞培养说明 注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少操作。 经过以下步骤后开始培养细胞 1.准备多聚赖氨酸包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向T-75瓶内加入10ml 无菌水，然后加入15μl多聚赖氨酸原液(10mg/ml,ScienCell cat. no. 0413).将培养瓶放入培养箱中过夜(至少在37°C中过一小时) 2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。 3.用无菌水冲洗多聚赖氨酸包被的培养瓶两次并向瓶内加入20 ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。 4. .将小瓶放入37°C水浴中，轻轻地握住并旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面。用1ml eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。 5.将管中内含物放入均匀的，多聚赖氨酸包被的培养瓶中。推荐接种密度为5,000 cells/cm2。注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。血管平滑肌细胞接种在多聚赖氨酸包被的培养瓶中能促进细胞帖壁。 6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。 7.将培养容器放入培养箱中。 8.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第天天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现纺锤体形，通常细胞呈均匀的丛状或板状而不是单个分散的细胞，并且细胞数量在培养2-3天后会加倍。 维持培养
Galectin-3对oxLDL诱导血管平滑肌细胞表型转化的调控
目录 绪论 (01) 第一部分：oxLDL通过galectin-3介导了人脐动脉血管平滑肌细胞表型转化 (03) 1.1材料与方法 (04) 1.2结果 (12) 1.3讨论 (15) 第二部分：Galectin-3通过Wnt信号通路介导了人脐动脉血管平滑肌细胞表型转 (18) 2.1材料与方法 (19) 2.2结果 (22) 2.3讨论 (25) 全文结论 (28) 参考文献 (29) 致谢 (32) 发表论文 (33)
绪论 随着人均期望寿命的延长，生活水平的不断改善和膳食结构的改变，冠心病已成为导致人类死亡的主要疾病之一。在一些欧美国家，随着一级预防和二级预防策略的采用和不断改进，冠心病的发生率和死亡率均开始呈现下降趋势。但在我国，冠心病的发病率和死亡率仍呈现不断上升趋势。动脉粥样硬化作为导致冠心病的重要病理生理基础，其具体发病机制仍未阐明；而导致动脉粥样硬化的危险因素仍不断被发现。因此，研究各种危险因素在冠心病及动脉粥样硬化发病机制中的作用具有重要意义。 目前可以解释动脉粥样硬化发病机制比较公认的学说主要有：脂质浸润学说，血栓形成学说，单克隆学说和损伤反应学说。血管平滑肌细胞作为动脉中层重要的组成细胞，在形成动脉粥样硬化的多种假说中均扮演重要角色。在动脉粥样硬化形成的病理过程中，平滑肌细胞的增殖、迁移和脂质吞噬能力增强，并由动脉中膜转移至动脉内膜，进而转化为泡沫细胞[1]。平滑肌细胞由收缩型转变为合成型是动脉粥样硬化病变进展的重要标志[1]。虽然在血管平滑肌细胞表型转化方面已经进行了大量的研究，但有关血管平滑肌细胞表型转化的具体分子机制目前仍不清楚。 半乳糖凝集素-3（galectin-3）是一种分子量介于29和37之间的蛋白[2]。它主要有C端的碳水化合物识别区、胶原样的中间区以及可以促进凝集素低聚化的N端组成[2]。N段在所有的哺乳动物中高度保守，其对于维持gal-3的外分泌功能和抗凋亡作用具有重要作用；C段具有与相应配体结合的功能，如AGEs，层粘连蛋白等[2]。虽然该蛋白分布在人体诸多器官，但在不同的器官中含量却存在很大差异；gal-3与人类绝大多数肿瘤的发生、发展及恶变有关[2]。Gal-3广泛存在于内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞等诸多细胞中，并且可以调控细胞的增殖、迁移[2-4], 参与氧化应激、心肌纤维化、动脉硬化、炎症反应等病理生理过程[2]。 氧化低密度脂蛋白（oxLDL）在动脉粥样硬化中的作用已经得到广泛的证实，它可以促进巨噬细胞吞噬脂质后转化为泡沫细胞[5]，也可以增强平滑肌细胞的表型转化，增殖和迁移能力[6]。基于oxLDL对于动脉粥样硬化的重要作用, 因 1
实验动物在心血管系统疾病研究中的应用
实验动物在医学研究中的应用 姓名：盛会雪专业：影像学与核医学 学号：100190 班级：六班 摘要：实验动物是生命科学研究的重要基础和支撑条件；动物实验是生命科学必不可少的基本手段，是基础理论研究向临床应用研究转化的实验技术平台。在医学研究中实验动物和动物实验起着不可替代的作用。实验是医学研究的重要环节，医学研究是不可能也不允许在人身上直接做实验，只能在动物身上进行研究，然后推用于人体。〔1〕20世纪大约70%的生理、药理奖项都用到动物实验。哈佛大学医学研究通讯的统计更是表明，过去五年间人类健康的51项成果，有22项通过动物模型得到。 关键词：实验动物医学研究应用发展 医学是一门古老的科学，医学科学家以人类本身为对象，利用实验动物进行人类生命现象讨论，为削除疾病、保证健康、达到长寿，寻找医学研究的新突破。细菌、病毒、真菌的发现，抗生素抗毒素的发现与应用；胰岛素的获得以及血液循环的发现、巴甫洛夫神经学说的创立、麻醉术的发明、疫苗的发现及应用等都是通过许许多多的实验动物而获得的。一、实验动物的选择 医学科学研究的根本目的是要探索人类疾病的发病机制，寻找预防及治疗方法。因此实验动物应尽量选择结构、功能、代谢方面与人类相近的动物做实验。选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物。不同种系实验动物对同一因素的反应有其共同的一面，但有的也会出现特殊反应，在动物选择时，不同的品种、品系也应考虑在内。另外，要根据实验的质量要求进行先择、符合实验动物选择的一般要求、要考虑相应的经济因素。 二、实验动物的应用 概括地说，实验动物在医学研研究中主要应用于以下方面：〔2〕分离和鉴定病原菌的毒性；鉴定药物的疗效和毒性；生殖生理与胚胎发育的研究；生理现象与病理机理的探讨；制造生物制品；癌症的研究；脏器移植；免疫学研究。此外，实验动物在基础医学教育中还充当着活的“教材”。 1、分离和签定病原菌的毒性 小鼠对病原体和毒素敏感一般用于流感、脑炎、狂犬病、支原体、沙门菌等疾病的研究。在对病原菌毒性的研究中，豚鼠的应用较为广泛，因其对很多的致病菌和病毒敏感，可复制各种感染病理模型，常用于结核、鼠疫、钩端螺旋体病、沙门菌、大肠杆菌、布氏杆菌、班疹伤寒、炭疽杆菌、淋巴脉络丛性脑膜炎、脑脊髓炎、疱疹病毒等疾病的研究。豚鼠对结核
血管平滑肌细胞表型转换的机制
血管平滑肌细胞表型转换的机制 基础医学院 07级临床一班陈依然 90701114 摘要 由血管平滑肌异常增殖导致的血管重构是PCI术后再狭窄的重要原因之一。血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转换密切相关。本文讨论了血管平滑肌细胞表型转换的特点、机制和相关信号传导途径。 关键词 血管平滑肌细胞表型转换信号传导途径 正文 自1977年冠心病介入治疗技术问世以来，其术后再狭窄（RS）一直是一个影响其远期疗效的重要问题。虽然RS的具体机制尚不明确，但目前已经公认血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell, VSMC）异常增殖、迁移及大量合成细胞外基质是其主要原因。而VSMC增殖的首要条件就是表型转换。 VSMC的表型可分为分化程度较高的收缩型（分化型）和分化程度较低的分泌型（未分化型或去分化型），我将就其特点和两者之间相互转换的相关信号传导途径进行探讨。 1. 表型转换的特点 VSMC来自胚胎发育时期的中胚层，逐渐分化为不同的细胞群并获得具有成年特征的分化表型，即收缩型。但与骨骼肌、心肌细胞不同的是，VSMC在分化成熟后仍可在某些因素的刺激下去分化成为分化程度较低的分泌型。有报告称，这两种表型可能代表了共存于血管壁内一系列不同表现型的两个极端类型，且表达不同的基因和蛋白。正常成人动脉血管的VSMC以收缩型为主，其主要功能是维持血管的弹性和收缩血管。收缩型VSMC增殖、迁移能力差或无，胞体呈梭形或带状，含大量肌丝和结构蛋白含，合成细胞器如粗面内质网、高尔基复合体含量较少，合成基质的能力差或无，体积较小。分泌型VSMC主要存在于胚胎中期血管和病理血管中，其主要功能是增殖、迁移入内膜以及合成细胞外基质蛋白。形态上类似成纤维细胞，肌丝和结构蛋白含量较少，合成细胞器增多，合成和分泌基质蛋白的能力较强，体积较收缩型大。
血管平滑肌细胞及内皮细胞的体外培养
高尿酸血症对内皮细胞损伤及血管平滑肌细胞增殖的影响（体外培养部分） 背景：关于高尿酸血症致肾脏损害的机制，既往的研究认为：当体内pH＜5.5或脱水时，可引起尿酸盐结晶沉积在肾小管间质部位，通过经典途径或替代途径激活补体、血小板、炎性细胞和巨噬细胞，引起细胞因子、转化生长因子（TGF-β）和活性氧的表达增多，刺激纤维母细胞向肌纤维细胞转化，激活胶原交联，最终导致纤维化或肾功能衰竭。新近国外的研究发现高尿酸血症导致肾脏损伤的原因有：①内皮细胞的损伤作用：Sanchez-Lozada等发现，尿酸可通过抑制NO（一氧化氮）产生和刺激内皮细胞增殖而导致内皮细胞损伤。中度的高尿酸血症就可以抑制NO的产生。②高尿酸血症诱导产生严重的肾小球血管病变，并且这种病变并非继发于高血压。高尿酸血症能直接刺激血小板衍生因子（PDGF）的表达和血管平滑肌的增殖，诱导产生严重的肾小球血管病变，而且这种病变并非继发于高血压，即在血压控制良好的情况下，高尿酸血症大鼠出现肾小球入球小动脉增厚，肾皮质血管收缩，肾小球内高压和肾小球肥大，最终导致肾小球硬化。因可溶性尿酸刺激单核细胞产生IL-2β、IL-6、IL-18及TNFa，因此推测尿酸对血管平滑肌的损伤作用可能是通过炎症样反应完成的。尿酸诱导大鼠平滑肌细胞炎症途径是经由有机离子转运系统进入血管平滑肌细胞，增加单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和环氧化酶2（COX2）的表达而实现的。MCP-1是一种非常重要的血管疾病和粥样硬化的化学趋化因子，而COX2是可导致炎症反应的重要蛋白之一。上述两种物质加重肾小球纤维化，肾小球肥厚，导致高血压、蛋白尿和肾功能恶化。目的：通过细胞体外培养，从
小鼠肺血管平滑肌细胞使用说明
小鼠肺血管平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞产品说明： 为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠肺血管平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 小鼠肺血管平滑肌细胞注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠肺血管平滑肌细胞其他相关小鼠原代细胞： 小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞 小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞 小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞 小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞 小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞 小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞 小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞 小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞 小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞 小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
脐动脉血管平滑肌细胞的分离与培养
脐动脉血管平滑肌细胞的分离与培养 材料 1) 培养基和维持平滑肌细胞生长的溶液 a) 培养基: DMEM /F12 b) 基本培养基的添加剂(final concentrations): 100 U/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin 10% (v/v) FBS. 通常消毒冷冻储备。完全培养基4°C可达1 个月，常规细胞培养使用前预温到37°C。分离过程用无FBS 的培养基。 c) Hanks’平衡盐溶液(HBSS, Sigma)：用于组织标本的收集培养基。下面的添加剂在使用之前加入储备液 中(final concentrations): 100 μg/mL Gentamicin 0.025 M HEPES 20 mM bicarbonate 0.001% phenol red HBSS 可分装储存于4°C最多2周。 d) Bicarbonate (4.4%, 0.52 M)-Phenol red (0.03%) solution: 44 g NaHCO3 +30 mg phenol red in 1000 mL组织培养级的去离子水, 高压灭菌消毒10 min at 115°C. 15 mL分装4°C储存可达6 mo，2 aliquots used in 400 mL of medium. 2)Penicillin and streptomycin stock solution (80X concentrate): 480 mg penicillin+1.5g streptomycin sulfate in 200 mL组织培养级的去离子水 0.5 μm滤膜预过滤，0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，1 aliquot used in 400 mL of medium. 3)Gentamicin solution (80X concentrate): 750 mg gentamicin sulfate in 100 mL组织培养级的去离子水 0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，1 aliquot used in 400 mL of HBSS. 4)HEPES solution (1 M): 47.6 g of HEPES in 200 mL组织培养级的去离子水 0.22 μm滤膜过滤消毒。 5 mL分装，–20°C储存，2 aliquots used in 400 mL of HBSS. 5)胰蛋白酶溶液(2.5 %): Trypsin from porcine pancreas (Sigma) is dissolved (2.5 g/100 ml) in PBS-A 0.22 μm滤膜过滤消毒。 10 mL分装，–20°C储存 6)乙二胺四乙酸(EDTA) solution (1%): EDTA disodium salt is dissolved (500mg/ 50 mL) in 组织培养级的去离子水
表型血管平滑肌细胞平滑肌22αα-平滑肌肌动蛋白论文
表型血管平滑肌细胞平滑肌22αα-平滑肌肌动蛋白论文 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】目的：既往研究发现平滑肌22α(smooth muscle22alpha,SM22a)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,a-SMA)特异性的表达于血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell. VSMC)胞质中,是VSMC发生细胞表型转化的重要标志,在维持细胞正常形态及收缩运动中具有重要的作用。本次研究的目的是检测下肢静脉曲张组织中SM22a及α-SMA的表达情况,并探讨其在下肢静脉曲张发生发展中的作用。方法：(1)应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction)检测SM22a mRNA在曲张静脉组织及正常静脉组织标本中的表达。(2)应用免疫组织化学技术检测SM22a和α-SMA蛋白在曲张静脉组织及正常静脉组织标本中的表达。(3)应用电镜观察免疫组化片子中曲张静脉组织及正常静脉组织在组织形态结构上的改变。结果：(1) RT-PCR结果显示：密度扫描半定量示SM22a mRNA在静脉曲张组织和正常静脉组织中分别为0.2614±0.1168和0.5114±0.1554,差异有统计学意义 (t=5.020P<0.01)。(2)免疫组组织化学法化结果显示：SM22α和a-SM A均主要表达于血管平滑肌细胞质中。图像分析软件测阳性蛋白染色的累计吸光度(integrated opticaldensity. IOD)值示SM22α阳性蛋白IOD值在静脉曲张组织和正常静脉组织中分别为10054.79±3584.07和16226.05±3378.16,具有显著统计学差异 (t=4.991P<0.01),与RT-PCR结果基本一致。α-SMA阳性蛋白IOD值
心血管疾病如何选择动物
心血管疾病如何选择动物 学号：11311031 姓名：裴知超 班级：11中药（1）班 关键词：心血管疾病，选择动物 摘要 ：目前，全球心血管疾病正进入缓慢增长时期，患心血管疾病的人群日益增多，随着心血管疾病发病率日益增高，为了研究人类心血管疾病的发 病机制.寻找有效的诊断和防治方法,筛选防治心血管疾病的有效药物,近 年来, 国内在心血管病动物模型研究方面做了许多工作,摸索出一些较好 的动物造型方法,有许多动物模型已广泛应用于各种心血管疾病的研究中。 正文：据世界心脏联盟统计, 全世界范围内每死亡 3 人中, 就有1 人的死因是心血管病症。[1]心血管疾病，又称为循环系统疾病、循环系统疾病，是 一系列涉及循环系统的疾病，循环系统指人体内运送血液的器官和组织， 心血管疾病的发生发展不是孤立存在的，而是多因素协同作用的结果。[2] 心血管疾病包括：心脏病、低血压、高血压、高血糖症、中风、心肌梗 塞、血栓、动脉硬化等.我国在心血管疾病上实行了许多动物模型来研究 这些心血管疾病。 国内在心血管病动物模型研究方面做了许多工作,摸 索出一些较好的造型方法,有许多模型已广泛应用于各种心血管疾病的研 究中。[3] 一，高血压病如何选择动物 高血压是最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素。 不仅致残"致死率高“，而且严重消耗医疗和社会资源!给家庭和国家造 成沉重负担。我国人群高血压患病率仍呈增长态势，每2个成人中就有 1人患高血压.[4]老年人群中高血压的治疗率和控制率分别为32.12%和 71.6%,虽然高于全国人群的平均水平,但与发达国家比较仍处于低水平, 存在很大差距。[5]由此可见，为了我国的高血压患者不在增加，治疗高 血压病迫在眉睫，如今，为了防治高血压疾病，专业人员在高血压动物 模型研究中做了许多工作。高血压在选择动物模型上，一般选用犬、猫 或大鼠，不宜使用兔，因为兔外周循环对外界环境刺激极敏感，血压波 动大。肾性高血压动物模型,被认为符合中医“阴虚阳亢”的病机,滋阴 药可以改善此证动物模型的高血压。[6]大鼠是复制肾血管性高血压模型 的良好动物。SHR有许多特征与人类原发性高血压极其相似,以SHR为代 表实验动物模型必将对人类原发性高血压发病机制的研究和防治起到非 常重要的作用。[7] 二,动脉粥样硬化如何选择动物 随着心脑血管疾病发病率逐年增高的势头,动脉粥样硬化已成为我国医学研究的重点和热点领域。[8]动脉粥样硬化是一组动脉硬化的 血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始。
平滑肌细胞培养实验步骤
原代平滑肌细胞培养Protocol 实验准备： 器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉球，乳胶手套 试剂：平滑肌细胞专用培养基，生理盐水，D-hank’s 液，鼠尾胶原，戊巴比妥钠（麻醉用），75%酒精 步骤： 1. 高压灭菌实验所需器材，超净台紫外照射30mins，吹风； 2. 配制鼠尾胶原应用液，一般1:15-1:19稀释，六孔板中每孔加入1mL稀释液待用（可省去）； 3. 大鼠（200g左右，一百五六十克较好）腹腔注射一定体积戊巴比妥钠（0.5mL/100g）麻醉，麻醉好后将大鼠全身（尤其是胸腹部）用酒精棉球擦拭干净，放入托盘置于超净台中紫外照射15mins左右，开始试验； 4. 用已消毒的剪刀将大鼠腹部表皮剪开，充分暴露出整个胸部，再换用干净的剪刀打开胸腔。将肝脏及肺脏等组织拨开（小心操作以避免伤到血管）。用小弯镊及小直镊分离胸主动脉外壁贴附的结缔组织及外膜等。分离干净后，用眼科剪小心剪断血管，去除血管中的血，置于干净玻璃培养皿中； 5. 用生理盐水多次冲洗分离出来的血管。冲洗干净后，将血管剪开，小心刮除血管内膜，去掉内皮细胞； 6. 将处理好的血管放入平滑肌细胞专用培养基（约200μL）中，用眼科剪将组织尽量剪碎成1mm3大小的小块，用细脚吸管吹匀后，均匀种入加了鼠尾胶原的六孔板中； 7. 用黄枪头小心吸弃多余的液体（避免将组织块吸起来），然后将六孔板盖好颠倒放在培养箱中约2h（待组织块粘牢培养板底）后，再加入培养基； 8. 过3-4d后拿出细胞在显微镜下观察，看其是否已长出。
血管平滑肌细胞原代培养经验
兔血管平滑肌细胞原代培养 我是某医学院的硕士研究生，课题涉及到兔血管平滑肌细胞的原代培养，实验开始非常不顺利，进行了几次实验均一无所获。后来我在丁香园上发帖提问 （https://www.wendangku.net/doc/202552449.html,/bbs/topic/16215850?tpg=1&ppg=1&age=0#0），得到了丁香园网友的热情帮助，在网友的帮助下，经过不断尝试改进，最后我终于得到了想要的血管平滑肌细胞，完成了实验并顺利毕业。鉴于网上还有很多网友在提有关血管平滑肌细胞原代培养的问题，我现在将自己的毕业论文中细胞培养的部分共享，由于论文还没发表，部分图片不能公开，请见谅！欢迎转载。 ①DMEM培养基的配制： 在新购进的500ml DMEM/F12培养基内加入5ml双抗及适当比例的FBS(原代20%，3代后5%)，配制成完全培养基，4℃保存备用。 ②兔SVMCs的原代培养： 体重2kg～3kg的雄性日本大耳白兔，耳缘静脉注射空气栓塞处死后，置于操作台。从腹部切开，分离腹部血管，暴露腹主动脉，无菌条件下切下约5cm长的动脉，装入含双抗的PBS中备用。在超净台内将取材的血管在DMEM中漂洗数次，小心将外膜剥去，用双抗浸泡数分钟后，直接加入胰酶，在胰酶双抗混合液中用眼科剪将组织块剪碎，将双抗和胰酶混合后用1ml移液枪吸去，加入3ml培养基,用吸管吹打后将组织块和培养液吸入25cm2细胞培养瓶中，直接用移液器将液体大部分吸出，盖紧瓶口后瓶口向上竖立放入培养箱，约1.5h后加入DMEM/F12培养基(含20%FBS, 1%双抗)，每个培养瓶约2.0ml，缓慢将瓶身翻转，使培养基覆盖组织块，将瓶口拧松，放入CO2养箱，静置3d～4d观察。
人血管平滑肌细胞的原代培养及其钙化模型的建立
[作者简介] 程孝中,男,安徽大学生命科学学院在读硕士研究生,主要从事细胞生物学研究 [作者单位] 1.安徽大学生命科学学院,合肥 230039;2.军事医学科学院生物工程研究所,北京 100850 [通讯作者] 钟 辉,Te:l 010-********,E-m ai:l t ow all @yahoo . co m;黄 蓓,E-m ai:l b ei huang @163.co m #安徽大学生命科学学院和军事医学科学院生物工程研究所共同为第一单位 人血管平滑肌细胞的原代培养及其钙化模型的建立 程孝中 1,2# ,宋 婷2,黄 蓓1,钟 辉 2 [摘要] 目的 利用B -甘油磷酸盐处理人血管平滑肌细胞(hu m an vascu l ar s m ooth m uscle ce lls ,HV S M Cs )制备体外血管钙化模型。方法 用组织贴壁法从人胚胎脐带动脉中分离原代人主动脉平滑肌细胞,原代细胞通过抗体A -s m-ac tin 染色鉴定,将传4~6代的细胞分为钙化组和对照组,对照组用正常D M EM 培养基培养,钙化组加入10mm o l/L B -甘油磷酸盐诱导细胞钙化,连续培养10d 。茜素红S 染色及碱性磷酸酶法鉴定。结果:分离的原代细胞经S -P 染色鉴定为阳性,呈淡黄色。钙化组细胞诱导钙化后,细胞增殖缓慢,并形成囊泡结构,茜素红S 染色形成红色的钙化结节,钙化组碱性磷酸酶活性较对照组在不同时间点(4,6,8,10d)都有所增加(P <0.01)。结论:B -甘油磷酸盐体外能够诱导HV S M C 钙化,此方法诱导的钙化模型是一种良好的研究血管疾病方面的体外模型。[关键词] 人胚胎血管平滑肌细胞;原代培养;钙化模型[中图分类号] R 543.5 [文献标志码] A [文章编号] 1000-5501(2010)01-0037-03 P ri m ary culture of hu m an vascular s m oot h muscle cells and their calcification m ode C HE NG X iao -zhong 1,2# ,SONG Ting 2,H UANG Bei 1*,Z HONG H ui 2* (1.L ife Sc i ence D epa rt m en t o f Anhu i U niversity ,H efe i 230039,Ch i na ;2.Be ijing Institute of B i o techno l ogy ,Be iji ng 100850,Ch i na) *C orres ponding au t hor ,Z HONG H u,i Te:l 010-********,E-m ai:l t owa l @l yahoo .co m;HUANG B e,i E -ma i :l bei huang @163.co m [Abstract] Ob jective T o establi sh a calc ificati on m ode i n vitro of hu m an vascular s mooth m uscle cells (HV S M C s)in - duced by B -GP.M ethod s P ri m ary HVS M Cs were obta i ned from hu m an embryo by p l antm et hod and confir m ed by sta i n w ith A -s m -ac tin anti body .T he ce lls after 4-6passagesw ere div i ded i nto t w o groups .The control group w as i ncubated w ith no r ma l DM E M m ed i u m w hile the ca l c ifi cati on g roup w as i ncubated w ith t he m ed i u m containi ng 10mm o l/L B -g l ycerophospha te f o r 10days .Ca lcifica tion w as confir m ed by a lizar i n red S stai n and a l kali ne phosphatase(ALP)assay s .Resu lts T he pr i m ary ce lls observed by S -P sta i n we re positi ve and the ce lls a fter be i ng stained w ere pa l e ye llo w.A fter be i ng i nduced w it h B -G P ,the ce lls of ca lcificati on g roup began concen tric gro w th and for m ed vesic l es .A lizar i n red S sta i n i ng s howed tha t the reaction o f ca lcify i ng nodu les was red ,A LP ac tiv ity w as h i gher than tha t of controls at var i ous ti m e po i nts(4d ,6d ,8d and 10d ,P <0.01).Con clusi on The HV S M Cs cou l d be i nduced i nto ca lcificati on in vitro by B -G P ,and this model contr i ba tes t o fur -t her stud i es o f vascular diseases . [K ey words] hu m an e m bryo vascu l ar s m ooth m uscle ce lls ;pri m ary cu lt u re ;calc ificati on mode 随着年龄的增长,多数老年人的主动脉都存在着渐进的钙盐沉积,即动脉钙化,其最终会导致高血压、动脉粥样硬化等血管疾病[1~3]。而血管平滑肌细胞(vascu l a r s moo t h m us -cle cells ,V S M Cs)是动脉发生钙化的主要细胞,VS M C s 体外诱导钙化是研究心血管疾病发病机制的重要细胞模型。目 前,V S M Cs 的体外原代培养主要来源于大鼠,本研究对分离自人胚胎组织的人V S M Cs(HVM Cs)进行体外原代培养,并经B -G P 诱导形成钙化,旨在为研究心血管疾病发病机制提供更准确的细胞模型。 1 材料与方法 1.1 材料 人胚胎(胎龄32周),解放军总医院提供;DM E M 培养基购自G i bco 公司;小牛血清购自杭州四季青生物工程材料公司;B -磷酸甘油酯(B -GP )、茜素红购自北京欣经科生物技术有限公司;羊抗A -S M-acti n(带HR P 标签)购自Santa Cruz 公司;碱性磷酸酶检测试剂盒购自南京建成生物工程公司;其他试剂均为国产或进口分析纯。
常见心脑血管疾病的动物模型选择与建立
常见心脑血管疾病的动物模型选择与建立 学号：11311032 姓名：钱江平 班级：11中药（1）班 摘要：目的：探讨常见心脑血管疾病的动物模型及其建立。方法：通过查 阅资料，了解常见心脑血管疾病的类型，进而再通过查阅论文等，理出常见心 脑血管疾病模型的建立方法。结论：通过对各种心脑血管疾病的动物模型的研究，可以看出不同动物在面对不同心脑血管疾病是，他们各有优缺点。我们在 选择动物时，应具体考虑。 关键词:心脑血管疾病 动物模型 动物模型建立 我国老龄化的加快老年人心血管疾病日益突出其发病率和死亡率日趋升高,提高心血管疾病的防治水平刻不容缓"随着现代医学的快速发展心血管疾病的预防!诊断和治疗等方面都取得一定的进展。我国每年因心脑血管疾病而死亡的人数大约为260万,约占总死亡比例的45%。实验动物作为生命科学研究的基础和重要的支撑条件，广泛应用于临床医学和实验医学研究[2]，通过建立实验动物模型，能为临床应用提供很多理论指导。 一、高血脂及动脉粥样硬化症动物模型 （一）概述 腹腔注射蛋黄乳液造成小鼠高血脂模型是一种适合于药物大面积初筛的高血脂 动物模型。通过在动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪，饲养一定时间后，它 的主动脉及冠状动脉处会逐渐形成粥样硬化斑块，并出现高血脂症。 高胆固醇和高脂饮食，加入少量胆酸盐，可增加胆固醇的吸收，如再加入甲状 腺抑制药--甲基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶可进一步加速病变的形成。 （二）方法: 1.小型猪： 猪在许多生物学指标上与人类非常相似,被认为是研究人类疾病最合适的实验动物模型,既经济实用,又克服了同种器官的短缺。如在比较医学中,科学家根据猪自身生理病理发生的过程研究人类衰老的机理,根据猪与人共同感染的疾病研究人的疾病在猪中的发生发展规律,从而为人类疾病的诊断、防治和治疗提供理论依据。 小型猪建高血脂模型，一般选用选用Gottigen系小型猪较为理想，用 1％～2％高脂食物饲喂6个月即可形成动脉粥样硬化病变。形成动脉粥样硬化 病变特点及分布都与人类近似。 2. 兔：