北京地区2009_2010年流感_省略_测季乙型流感病毒HA基因特征分析_吕燕宁(1)
流感防治培训测试试题及答案
流行性感冒防治知识培训测试试题 姓名：分数： 一、多选题（每小题3分，共15分） 1.关于流感的叙述下列正确的是（ABCDE） A.患者、隐性感染者为主要传染源 B.病初2~3天传染性最强 C.某一时期的流行多由单一血清型引起 D.少数重症病例病情进展快，可因急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和/或多 脏器衰竭而死亡 E.咳嗽明显，食欲减退，可有鼻塞、流涕、胸骨后不适等 2.下列哪些是典型流感的主要临床表现（ABCD） A.突起畏寒、寒战和高热 B.全身酸痛明显，尤以背部和腿部最为明显 C.部分以呕吐、腹痛、腹泻为特点，常见于感染乙型流感的儿童 D.可有咽喉刺痛、胸骨下烧灼感、干咳 E.头疼及中毒症状明显 3.关于流感患者的肺炎，下列描述正确的是（ABCE） A.流感病毒本身可引起病毒性肺炎 B.病程中若持续或反复发热，呼吸道症状加重，提示可能并发细菌性肺 炎 C.并存慢性心、肺疾病和免疫功能低下者，容易迅速致死 D.都必须尽早应用抗生素 E.护理上应密切观察患者的体征
4.流感需与下列疾病鉴别（ABCDE） A.伤寒、麻疹 B.肺炎支原体肺炎 C.钩端螺旋体病 D.急性细菌性扁桃体炎 E.肺炎球菌性肺炎和流脑的早期 5.出现以下情况之一者为危重病例（ABCDE） A.呼吸衰竭； B.急性坏死性脑病； C.脓毒性休克； D.多脏器功能不全； E.出现其他需进行监护治疗的严重临床情况 二、单选题（每小题2分，共20分） 1.关于流行性感冒下列哪项是错误的( D ) A甲型流感易发生变异 B由流行性感冒病毒引起 C临床表现以上呼吸道症状较重 D全身中毒症状较重 2.关于流行性感冒病毒下列哪项是正确的( B ) A流行性感冒病毒属副粘液病毒 B甲、乙、丙、丁四型 C甲型不变异
9.流感病毒的快速检测方法
流感病毒的快速检测方法 一、RT-PCR快速诊断方法 （一）生物安全要求 （二）病毒核酸提取 （三）RT-PCR （四）PCR 产物纯化 （五）流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 （一）原理 （二）标本处理 （三）间接免疫荧光法 （四）结果判断 三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测 （一）基本原理 （二）实验试剂 （三）实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。 流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA，即为cDNA。逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。 （一）生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。
流行性感冒诊断与治疗指南
流行性感冒诊断与治疗指南 （2011年版） 第一章病原学 流感病毒属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），为单股、负链、分节段RNA病毒。常为球形囊膜病毒，直径80-120nm，丝状体常见于新分离到的病毒，长度可达数微米。根据核蛋白(nucleocapside protein，NP)和基质蛋白(matrix protein，MP)分为甲、乙、丙三型。甲、乙型流感病毒都带有8个不同的RNA节段，丙型流感病毒只有7个RNA节段，少一个编码神经氨酸酶蛋白的节段。甲、乙型毒株基因组分别编码至少10和11种蛋白。由于基因组是分节段的，故易产生同型不同株间基因重配，同时流感病毒RNA在复制过程中不具有校正功能，其发生突变的频率要高于其它病毒。甲型流感病毒根据其表面血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）蛋白结构及其基因特性又可分成许多亚型，至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型（H1-16），神经氨酸酶有9个亚型（N1-9）。甲型流感病毒的命名规则：类型、分离宿主（如果宿主是人则可以省略）、分离地点、分离序列号和分离年份（血凝素和神经氨酸酶亚型）[如A/Brisbane/10/2006(H3N2)]。乙型和丙型流感病毒命名法和甲型流感病毒相同，但无亚型划分。甲型流感病毒在动物中广泛存在，目前已知所有亚型包括16种血凝素亚型和9种神经氨酸酶亚型的甲型流感病毒都可以在鸟类特别是在水禽中存在，甲型流感病毒还可以感染其它动物，如猪、马、海豹以及鲸鱼和水貂等。目前为止，乙型流感病毒除感染人之外还没有发现其它的自然宿主。丙型流感病毒除感染人之外还可以感染猪。流感病毒很容易被紫外线和加热灭活，通常56℃ 30min可被灭活。流感病毒在pH 值＜5或＞9，病毒感染性很快被破坏。流感病毒是包膜病毒，对于所有能影响膜的试剂都敏感，包括离子和非离子清洁剂、氯化剂和有机溶剂。 第二章流行病学 流感在流行病学上最显著的特点为：突然暴发，迅速扩散，从而造成不同程度的流行。流感具有一定的季节性（我国北方地区流行高峰一般发生在冬春季，而南方地区全年流行，高峰多发生在夏季和冬季），一般流行3-4周后会自然停止，发病率高但病死率低。 国家流感中心网站（https://www.wendangku.net/doc/208935722.html,）提供每周更新的我国流感流行病学和病原学监测信息。 一、概况 流感分为散发、暴发、流行和大流行。在非流行期间，发病率较低，病例呈散在分布，病例在发病时间及地点上没有明显的联系，这种情况叫散发；一个集体或一个小地区在短时间内突然发生很多病例叫暴发；较大地区的流感发病率明显超过一般的发病水平，可称为流行；大流行有时也称世界性大流行，传播迅速，流行广泛波及全世界，发病率高并有一定的死亡。 甲型流感病毒常以流行形式出现，能引起世界性流感大流行。乙型流感病毒常常引起局部暴发，不引起世界性流感大流行。丙型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流行。 二、传染源 流感患者和隐性感染者是流感的主要传染源。从潜伏期末到发病的急性期都有传染性。成人和年龄较大的儿童患季节性流感（无并发症）期间，病毒在呼吸道分泌物中一般持续排毒3-6天。住院的成人患者可以在发病后持续一周或更长的时间散播有感染性的病毒。婴幼儿流感以及人H5N1禽流感病例中，长期排毒很常见（1-3周）。包括艾滋病在内的免疫缺陷
流感病毒的实验室检测方法及进展
·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！ 流感病毒的实验室检测方法及进展 李月越陈杭薇李兵 【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。 【关键词】流感病毒；检测方法 Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御 （乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ 【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ 流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急 性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异， 对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人 群有较高的发病率及致死率，危害很大。流感病毒 分为甲、乙、丙三型，其中变异大的、危害重的主要是 甲型和乙型流感病毒，尤以甲型为主，常可引起较大 范围的流行［１］。 流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，还需 要实验室检测来证实。病毒诊断技术大致分为４个 方面，即病毒分离、血清学诊断、现代免疫学诊断及 分子生物学诊断瞳］。现分别进行介绍。 ｌ病毒分离培养 病毒分离培养是诊断流感最可靠的方法之一。 因流感病毒能够在鸡胚中良好生长，所以早期多用 鸡胚分离流感病毒，一般用９日龄至１１日龄的鸡胚 通过羊膜腔或尿囊腔接种分离病毒，接种后２４～９６ｈ 收集鸡胚尿囊液，２４ｈ内死亡的鸡胚弃掉，用鸡的 红细胞检测尿囊液或细胞培养液的血凝活性来证实 病毒的增殖和存在，如初次分离不到病毒，可盲传２ 代再进行检测；但近年来，随着分子生物学技术的发 展，发现通过鸡胚所分离到的流感病毒，其抗原性与 原始标本有所不同，而通过马一达犬１肾细胞（ＭＤＣＫ） 作者单位；１００７００北京军区总院呼吸内科 通讯作者：陈杭薇．综述． 分离病毒的抗原性与原始标本相似，另外由于 ＭＤｃＫ细胞对“ｏ”相毒株的敏感性比鸡胚高很多， 故ＭＤＣＫ细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一 种宿主系统，现亦得到较为广泛的应用；ＭＤＣＫ分 离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产，因此 病毒分离现同时采用鸡胚及ＭＤＣＫ细胞两套系 统口］。但无论是以上哪种方法对标本中病毒采集、 运输及保存条件要求均较高，病毒样品如能在４８ｈ 分离，可在４℃保存，如果样品要存放较长时间必须 低温冻存（一７０℃）；且要求标本中的病毒含量高， 必须达到鸡胚或ＭＤＣＫ培养法所需要的病毒含量， 分离培养较为复杂、耗时且不稳定，也不能在普通实 验室进行，要确诊需要较长时间，故对流感早期诊断 及临床指导意义不大。 Ｓｈｉｈ等Ｈ３将一种新的实验室培养技术——离 心培养技术（ｓｈｅｌｌｖｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ，ＳＶＣ）应用于流感病 毒的培养，其与传统培养方法没有本质的区别，不同 点为在标本接种后进行长时间的低速离心，使标本 中含病毒的颗粒在外力作用下被压挤吸附于培养细 胞，从而大大缩短了培养时间并提高了敏感性。在 国内倪安平等口］亦采用ＳＶＣ技术快速诊断流感病 毒，结果显示该技术能在２４ｈ内获得流感病毒培养 结果，可以快速确诊流感患者。 郭元吉等［６３建立了一种流感快速诊断方法，具 体为：采集标本经成片ＭＤＣＫ细胞扩增，使细胞表万方数据
2020-2021流感防治：不同类型的流感病毒区别
2020-2021流感防治：不同类型的流感病毒区别 流感病毒有4种类型。甲型流感最为常见，其次是乙型流感。两者都具有高度传染性，症状相似。 流感是病毒性呼吸系统疾病，在秋季和冬季最为普遍。当感染者打喷嚏或咳嗽，产生的飞沫传播到另一个人的鼻腔或口腔时，可造成病毒传播。 流感不同于普通感冒。可能导致严重的疾病，并使某些慢性疾病恶化，如哮喘，心脏病和糖尿病。在某些情况下，可能导致死亡。 流感病毒的类型 鼻充血，疲劳和咳嗽都是流感的常见症状 1. 甲型流感 甲型流感可以感染人类和动物，是唯一可引起全球大流行的流感。甲型流感病毒引起禽流感和猪流感的大流行。每种流感病毒表面有两类蛋白质：血凝素和神经氨酸酶。 2. 乙型流感
乙型流感病毒也可引起季节性流行，通常只影响人类。乙型流感有两种谱系：维多利亚株和山形株。 乙型流感比甲型流感变异发生的更慢。 3. 丙型流感 丙型流感病毒通常会引起轻度疾病——它们似乎不会引起流行病。 4. 丁型流感 丁型流感病毒主要影响牛，似乎不感染人类。 症状 流感症状可从轻度至严重不等，并且因人而异。 1. 常见症状包括：疲劳、鼻充血、咳嗽、头疼、咽喉痛、身体疼痛、寒冷、发热、呕吐或腹泻（多见于儿童） 2. 有些人出现严重症状，其中包括：胸痛、呼吸急促、剧痛、重度乏力、
高热、癫痫发作、重度眩晕、意识障碍。 出现任何严重症状均应及时接受医疗照护。 甲型与乙型流感比较 甲型和乙型流感的流行程度不同。 1. 患病率 据研究者称，确诊流感病例中，约75％为甲型流感，而确诊病例中，乙型流感约25％。 2. 传染性 甲型流感和乙型流感均具有高度传染性。 流感患者咳嗽或打喷嚏时，飞沫进入另一个人的鼻腔或口腔，从而引起疾病传播。根据美国疾病控制和预防中心（CDC）数据，流感病毒可在6英尺外造成感染。另外，如果人接触被流感病毒污染的物体表面，然后再接触自己的嘴巴或鼻子，则可能感染流感。
甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒
甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 使用说明书 通用名:甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名:Influenza type A Colloid gold Rapid Diagnostic Kit 汉语拼音:JIAXING LIUXINGXING GANMAOBINGDU KANGYUAN JIANCE SHIJIHE (JIAOTIJIN FA) 【生产企业】广州健仑生物科技有限公司 【产品规格】22份/盒 【使用目的】用于鼻腔抽吸液、鼻腔擦拭液和咽喉擦拭液标本中甲型流感病毒抗原的定性测定。 【试验原理】 流行性感冒是指由流感病毒引起的具有传染力的疾病，可引发肺炎或更严重的并发症。流感病毒的结构主要包括内部的核心和外部的病毒囊膜。流感病毒核心是由核蛋白卷曲包绕螺旋形核糖核酸(RNA)组成，核蛋白的抗原稳定，很少发生变异，具有型特异性。根据核蛋白抗原性的不同，可把感染人的流感病毒分为甲、乙、丙三型。本产品是利用能够特异性识别甲型流感病毒核蛋白的单克隆抗体，以免疫色谱法检测流感病毒核蛋白的试剂盒，本试剂盒仅对样品中的甲型流感病毒有反应，对乙型及丙型流感病毒均不反应，而且不能用于区分病毒感染的亚型。 本品是由样品滴下部、试剂部和展开部三部分组成的检测板，内藏长方块状的载体。其中，试剂部包含胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)(以下将简称为胶体金标记抗体A)；展开部包含固定化的抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)(以下简称为抗流感A抗体)及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体(兔)(以下简称为抗鼠免疫球蛋白抗体)。 检测板各部分的名称 样品从检测板的样品滴下部滴下后，胶体金标记抗体A被溶解，与样品中的甲型流感病毒抗原形成免疫复合体。免疫复合体因展开部的毛细管现象而移动，被判定部〔T〕中固定化的抗流感A抗体捕捉，于是在判定部[T]因胶体金的作用形成紫红色的条带。本试剂盒的这个紫红色条带可以肉眼确定，以判断样品中是否存在甲型流感病毒。 另一方面，无论样品中是否有甲型流感病毒存在，剩余的胶体金标志抗体A继续在展开部移动，在判定部[C]被固定化的抗鼠免疫球蛋白抗体捕捉，因胶体金而形成紫红色条带。这显示了胶体金标志抗体的正常移动。【主要组成成份】 1.检测板:20个，每个检测板在试剂部包被有胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)，在展开部包被有抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体(兔)。 2.样本抽提液:2瓶，11ml/瓶，为含有表面活性剂的TRIS缓冲液并添加有防腐剂，可直接使用，贮存在2～30℃可稳定至有效期。 3.灭菌棉棒20支。 4.抽提用管子20支。 5.滴头21个。 6.立架1个。 【适用仪器】 无需其他仪器，产品开封后直接使用。 【样本要求】 1)鼻腔抽吸液的采集方法 抽吸器一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。 2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮。 3)咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。采
流感病毒基础的知识
流感的危害 流行性感冒简称流感，是由流行性感冒病毒引起的呼吸道疾病，具有传染性强、流行面广、潜伏期短、发病率高等特点，在儿童、老人及高危人群中的死亡率很高。有数据表明，每年冬季流感爆发期会使全球人口近10％感染致病。 流感病毒简介 流行性感冒病毒（influenza virus）简称流感病毒，是引起流行性感冒（流感）的病原体，属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae）。(是与粘液蛋白有特殊亲和性病毒中的1科)粘病毒是指对人或某些动物红细胞表面的黏蛋白有亲和力的病毒。正、副粘病毒的区分以其核酸是否分节段为标准，分节段者为正粘病毒，不分节段者为副粘病毒，正粘病毒科只有流感病毒一个种。 （一）形态与结构 流感病毒具有多形态，一般为球形，也有的呈丝状或杆状，病毒直径为80-120nm。流感病毒的结构主要包括内部的核心、衣壳（核衣壳）和外面的包膜（附图）。 Fig. (1) Schematic representation of the influenza A virus (Reference [22]) 1、核心（core）流感病毒的核酸为分节段、负链单股RNA，称为分节段基因组（segmented genome）。其中甲型和乙型流感病毒的核酸分为8个节段，而丙型流感病毒的分为7个节段。每一基因节段分别编码不同的蛋白，决定流感病毒的遗传特性。第1~6基因节段分别编码RNA多聚酶（RNA polymerase）PB 2、PB1、PA、血凝素（hemagglutinin，HA）、核蛋白（nucleoprotein, NP）、神经氨酸酶（neuraminidase, NA）；第7基因节段编码包膜蛋白，包括内膜基质蛋白（M1）和膜蛋白（M2）；第8节段编码非结构蛋白（nonstructural protein, NS）NS1和NS2。流感病毒各基因节段复制后，组装入子代病毒体中，但在组装过程中极易发生基因重组而导致新病毒株的出现，这是流感病毒容易发生变异而出现大流行的主要原因。 2、衣壳（caspid）核蛋白是流感病毒的主要结构蛋白，构成病毒衣壳卷曲包绕在RNA外，并与3种RNA多聚酶（PB1、PB2、PA）一起与RNA节段形成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），即螺旋对称的核衣壳。RNA多聚酶PB1、PB2、PA与RNA的转录有关，核蛋白的抗原性稳定，很少发生变异，具有型特异性。 3、包膜（envelop）流感病毒包膜由内向外，可分为内膜基质蛋白（matrix protein, MP）和脂蛋白（lipoprotein，LP）两层。内膜基质蛋白M1，是包围在病毒核心外的一层膜结构，介于核蛋白与脂质双层膜之间，与组成脂质双层膜的类脂紧密结合，在维持病毒形状与完整性上起重要作用，具有型特异性。脂蛋白层是脂质双层膜的结构成分，来源于宿主细胞膜或核膜。基质蛋白M2为镶嵌其中的膜蛋白，形成膜通道，有利于病毒脱壳及血凝素的生成。 流感病毒包膜上镶嵌的两种糖蛋白向外突出形成刺突（spike），一种是血凝素（hemagglutinin，HA），另一种是神经氨酸酶（neuraminidase, NA）。HA的数量是NA的4~5倍。
甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明(胶体金)-Alere BinaxNOW
甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用说明书 【产品名称】 通用名称：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法） 英文名称：Alere BinaxNOW? Influenza A＆B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种体外免疫层析试验，用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原，可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染，它属于传染病范畴，可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强，造成的病情也更严重，并且大多数严重的流感也都是由它引起的，而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数，减少抗菌素的使用，而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法，使用方便，结果快速，在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型，有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感（H5N1，主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型），此后，在人群中出现了H5N1病例，使人们对H5N1关注起来，H5N1的变异使得它更易在人群间传播4，由于备案的禽流感感染病人比例很低，快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）使用的是薄膜免疫层析技术，它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上，形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理：用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来，将标本加到检测条顶端，闭合检测卡，15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中，蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料
(完整版)流行性感冒诊疗方案(2019年版)
流行性感冒诊疗方案（2019年版） 流行性感冒（以下简称流感）是流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，甲型和乙型流感病毒每年呈季节性流行，其中甲型流感病毒可引起全球大流行。全国流感监测结果显示，每年10月我国各地陆续进入流感冬春季流行季节。 流感起病急，虽然大多为自限性，但部分患者因出现肺炎等并发症或基础疾病加重发展成重症病例，少数危重症病例病情进展快，可因急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、急性坏死性脑病或多器官功能不全等并发症而死亡。重症流感主要发生在老年人、年幼儿童、肥胖、孕产妇和有慢性基础疾病者等高危人群，也可发生在一般人群。 为进一步规范和加强流感临床诊治工作，减少重症流感发生，降低病死率，在《流行性感冒诊疗方案（2018年版修订版）》的基础上，结合近期国内外研究成果及我国既往流感诊疗经验，制定本诊疗方案。 一、病原学 流感病毒属于正粘病毒科，为单股、负链、分节段RNA 病毒。根据核蛋白和基质蛋白不同，分为甲、乙、丙、丁四型。 目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的Victoria和Yamagata系。
流感病毒对乙醇、碘伏、碘酊等常用消毒剂敏感；对紫外线和热敏感，56℃条件下30分钟可灭活。 二、流行病学 （一）传染源患者和隐性感染者是主要传染源。从潜伏期末到急性期都有传染性，病毒在人呼吸道分泌物中一般持续排毒3～7天，儿童、免疫功能受损及危重患者排毒时间可超过1周。 （二）传播途径流感病毒主要通过打喷嚏和咳嗽等飞沫传播，经口腔、鼻腔、眼睛等黏膜直接或间接接触感染。接触被病毒污染的物品也可通过上述途径感染。在特定场所，如人群密集且密闭或通风不良的房间内，也可能通过气溶胶的形式传播，需引起警惕。 （三）易感人群人群普遍易感。接种流感疫苗可有效预防相应亚型/系的流感病毒感染。 （四）重症病例的高危人群下列人群感染流感病毒后较易发展为重症病例，应给予高度重视，尽早进行流感病毒核酸检测及其他必要检查，给予抗病毒药物治疗。 1.年龄＜5岁的儿童（年龄＜2岁更易发生严重并发症）； 2.年龄≥65岁的老年人； 3.伴有以下疾病或状况者：慢性呼吸系统疾病、心血管系统疾病（高血压除外）、肾病、肝病、血液系统疾病、神经系统及神经肌肉疾病、代谢及内分泌系统疾病、恶性肿瘤、
甲型乙型流感病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)sop
甲型乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）操作规程 1 目的：规范操作流程，确保检测结果的准确性可靠性。 2 范围：甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法） 3 操作人：甲型/乙型流感病毒核酸检测人员对此规程负责 4 内容： 4.1 核对本次实验所有标本与申请单对应的编号，统计本次实验标本总数，确定所需实际量。实际检测数量为所需检测样本数量和阴阳对照品总和。 4.2 试剂准备： 4.2.1 进入试剂准备区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。 4.2.2 打开照明灯，从冰箱中取出本次实验所需试剂。 4.2.3 打开超净工作台，在废液缸中加入新鲜配置的10%的次氯酸钠溶液。 4.2.4 取出本次实验所需耗材，如离心管、离心管架、吸头。将试剂盒中的核酸扩增反应液、酶混合液、检测液、阳性对照、空白对照、DNA提取液取出，置于离心管架上。待室温溶解后，瞬时离心，备用。 4.2.5 根据样本量计算需准备检测试剂人份数N（N=样本数+阳性对照+空白对照）。 4.2.6 按比例（核酸扩增反应液7.5μl/人份+酶混合液5μl/人份+甲型/乙型流感病毒反应液4μl/人份+去RNA酶水 3.5μl/人份）将各组分在离心管中混匀后瞬时离心，配置成PCR-mix，并按20μl/管依次分装到对应编号PCR八连管中。 4.2.7 将分装好的PCR-mix盖上PCR板盖，放到传递窗，收拾好试验台，将垃圾桶内的废弃物丢弃到医疗垃圾桶中并用10%的次氯酸钠溶液清洗干净，将移液器调回最大量程，换下本区工作服。 4.3 样本处理： 4.3.1 进入样本处理区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。 4.3.2 开启生物安全柜照明灯，将样本、试剂、分装好的PCR-mix放入生物安全柜内，在废液缸中加入新鲜配置的10%的次氯酸钠溶液。 4.3.3 取200μl的待测样本、阳性对照、弱阳性对照和空白对照用病毒核酸提取试剂盒提取核酸。 本试剂盒的阳性对照、弱阳性对照、空白对照参与提取，用于对环境的监控和试剂的质控。 4.3.4 小心打开PCR八联管盖，每份待测样本核酸溶液、阳性对照、弱阳性对照和空白对照按照5μl/管依次加入对应编号的PCR八联管中，总体积为25μl/管。 4.3.7 盖紧PCR八联管盖，做好标记，低速短暂离心，置于反应管架上，放到去检测室的传递窗。 4.3.8 收拾好生物安全柜，将垃圾桶内的废弃物丢弃到医疗垃圾桶中并用10%的次氯酸钠溶液清洗干净，将移液器调回最大量程，换下本区工作服。 4.4 PCR扩增检测 4.4.1 进入样本处理区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。 4.4.2 将反应管和管架带入核酸扩增区，按《ABI7500荧光定量PCR仪的使用维护标准操作程序》的相关程序操作。 4.4.3 循环参数设定 注：ABI7500实时荧光PCR仪不选 ROX 校正，淬灭基团选 None。
9.流感病毒的快速检测方法
一、RT-PCR快速诊断方法 （一）生物安全要求 （二）病毒核酸提取 （三）RT-PCR （四）PCR 产物纯化 （五）流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 （一）原理 （二）标本处理 （三）间接免疫荧光法 （四）结果判断 三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测 （一）基本原理 （二）实验试剂 （三）实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。 流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA，即为cDNA。逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。 （一）生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。 （二）病毒核酸提取 1.实验材料及仪器
标准操作规程(SOP)——流感病毒的鸡胚分离方法
一、目的 流感病毒的鸡胚分离方法是流感病毒分离方法之一，常用于流感病毒的分离、培养。本SOP 是为确保鸡胚分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。 二、范围 适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行流感病毒的鸡胚分离。 三、程序 （一）生物安全要求 H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的鸡胚分离实验室生物安全级别：BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护，具体详见“生物安全个人防护SOP ”。H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的鸡胚接种和病毒培养液的收获操作必须在BSL-3级实验室的生物安全柜中进行。 其余流感病毒的鸡胚分离实验室生物安全级别：BSL-2。实验操作人员需进行BSL-2防护，具体详见“生物安全个人防护SOP ”。其余流感病毒的鸡胚接种和病毒培养液的收获操作必须在BSL-2级实验室的生物安全柜中进行。 （二）材料 1．9～11日龄SPF 鸡胚 2．照卵灯 3．70%～75％酒精 4．一次性注射器 5．鸡蛋开孔器 6．蜡或医用胶布 7．液体石蜡 8．15mL 无菌离心管、试管架 标准操作规程（SOP ）——分离方法
9．10mL无菌移液管 10．无菌镊子。 （三）实验步骤 1．验卵 （1）用照卵灯检测鸡胚，标记出鸡胚的气室与尿囊的界限、胚胎的位置。 （2）如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全或表面有好多渗水孔，应弃掉。 （3）如何判断鸡胚状态 1）血管：活胚血管清晰，死胚模糊，成淤血带或淤血块 2）胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动。 3）绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限。 2．鸡胚接种 （1）将鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，标记每个鸡胚，通常每个样本接种3个鸡胚。 （2）用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10×6mm裂口。 （3）用注射器吸200μL处理过的临床标本，装上16号针头。 （4）从裂口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让液体石蜡在鸡胚壳膜内层（脏层）铺开，此时在照卵灯下即可清楚的看到鸡胚胎的位 置。将注射针头刺入胚胎的鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿，当进 入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而动，即可注射100μL临床标 本。将针头退出至1/2寸，将另外100 μL临床标本注入鸡胚尿囊腔。 （5）用同一注射器将同一标本依上法接种另外的两枚鸡胚。 （6）用注射器反复吸取2‰次氯酸钠消毒液2~3次后，将针头放于毁形器中销毁，注射器针筒弃于锐器桶中。 （7）用蜡或者消毒过的医用胶布封口。 （8）35℃或37℃温箱（哺乳动物流感病毒35℃培养）培养鸡胚2～3天。 鸡胚进行病毒分离培养时，每天检查鸡胚生长情况，24h内死亡的鸡胚，认为是非特异死亡应弃去。
甲型和乙型流感病毒抗原快速检测结果分析
浙江临床医学2019年5月第21卷第5期·689· 【摘要】目的?探讨本地区甲/乙型流感病毒在不同流行季节的变化趋势，分析流感病毒阳性患者外周血细胞中白细胞（WBC）、中性粒细胞（Neu）、淋巴细胞（Lym）、嗜酸性细胞（Eos）、血小板（PLT）和C反应蛋白（CRP）等感染性指标的变化。了解季节因素对流感病毒传播的影响，为流感病毒的临床治疗及疾病预防提供流行病学依据。方法利用胶体金标记免疫层析技术进行流感抗原的检测，对2017年3月至2018年2月检测的1648份流感病毒抗原筛查结果进行统计学分析，分析其流行病学特征，包括季节、年龄段分布特点。同时分析流感病毒阳性病例的相应血常规和CRP等感染性指标的变化。结果?与正常对照组比较，流感组CRP明显升高，WBC、Eos、Lym、PLT则明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。2017-2018年度，本地区流感高峰期在2018年1~2月，且以乙型流感为主，其余月份为散发低流行。年度甲型流感和乙型流感病毒检出率比较，差异有统计学意义（χ2=20.615，P<0.05）。不同年龄组的流感病毒抗原检出率比较差异有统计学意义（χ2=27.174，P<0.05）。结论?流感病毒的流行与季节有着密切的关系，本地区流感的类型在不同的流行季节存在着一定的变化趋势。甲型/乙型流感病毒抗原胶体金法具有快速、简单准确和无污染等优点，适合基层医院广泛筛查使用。 【关键词】胶体金免疫层析法?白细胞?C反应蛋白?甲型、乙型流感病毒抗原?季节性流行病? 【Abstract】Objective To?discuss?the?trend?about?influenza?antigen?in?different?seasonal?in?Shaoxing?area，meanwhile?to?detect?and?analyze?the?variety?about?WBC，NEU，LYM，EOS，PLT?and?CRP?in?patients?which?infected?by?influenza.?To?master?and?understand?the?influence?about?seasonal?factor?to?influenza?virus?transmission，and?in?order?to?provide?the?epidemic?foundation?for?clinical?treatment?and?disease?prevention.?Methods?The?immunochromatogragphic?assay?was?used?to?detect?the?1648?patient's?influenza?virus?antigen?from?March?2017?to?February?2018?which?were?diagnosed?and?detected?in?our?hospital.?The?data?were?analysis?using?SPSS，the?epidemiological?characteristic?and?the?factor?such?as?seasonal?and?age?were?also?analyzed.?Results Compared?with?the?normal?group，the?CRP?in?the?influenza?group?were?higher?than?the?normal?group，and?WBC，EOS，LYM，PLT?were?significantly?decrease（P<0.05）.From?2017?to?2018，the?peak?period?of?influenza?was?in?January?and?February?in?2018，and?the?mainly?type?was?influenza?B，the?other?months?were?low?epidemic?period.?Compared?with?the?influenza?virus?type?A?and?B?in?the?total?year，there?was?statistical?significance?between?them（χ2=20.615，P<0.05）.?The?influenza?virus?antigen?prevalence?in?different?age?group?were?also?showed?statistical?difference （χ2=27.174，P<0.05）.?Conclusions?The?epidemic?of?influenza?virus?is?closely?related?to?the?season.?The?types?of?influenza?in?this?region?have?a?certain?change?trend?in?different?epidemic?seasons.?Colloidal?gold?assay?for?influenza?A/B?virus?antigen?has?the?advantages?of?rapidity，simplicity，accuracy?and?non-pollution.?It?is?suitable?for?extensive?screening?in?grass-roots?hospitals. 【Key words】Immunochromatogragphic?assay?White?blood?cell?C-reactive?protein?Influenza?virus?A&?B?antigen?Seasonal?epidemics? 流行性感冒病毒（Flu）是引起全球性流行性感冒的病原体，病毒为正粘病毒科，单负股RNA病毒，通过飞沫传播［1］。人类流感病毒主要分为甲、乙、丙三种类型。对于甲型和乙型流感病毒检测具有较大临床意义，而丙型流感病毒主要侵袭婴幼儿，且以散发出现，一般不引起流行［2］。为了解近期本地区流感病毒随不同季节的流行情况，作者对1648例疑似患者进行流感病毒抗原的筛查检测，现报道如下。 1?资料与方法 1.1?临床资料?2017年3月至2018年2月本院发热 甲型和乙型流感病毒抗原快速检测结果分析 钱亚琼茅利明章海峻张利群 作者单位：312030?浙江省绍兴市中心医院 and?malignant?adnexal?masses.?J?Ovarian?Res,?2016,9(1):43. ［2］ N agy?B?Jr,?Krasznai?ZT,?Balla?H,?et?al.?Elevated?human?epididymis?protein?4?concentrations?in?chronic?kidney?disease.?Ann?Clin? Biochem,2012,49(Pt4):377-380.? ［3］ S tevens?PE,?Levin?A,?Kidney?Disease:?Improving?Global?Outcomes?Chronic?Kidney?Disease?Guideline?Development?Work?Group? Members.?Evaluation?and?management?of?chronic?kidney?disease:? synopsis?of?the?kidney?disease:?improving?global?outcomes?2012? clinical?practice?guideline.Ann?Intern?Med,2013,158(11):825-30.［4］ Gündüz?UR,?Gunaldi?M,?Isiksacan?N,?et?al.?A?new?marker?for?breast?cancer?diagnosis,?human?epididymis?protein?4:?A?preliminary? study.?Mol?Clin?Oncol,2016,5:?355-360.?［5］ F an?Q,?Luo?G,?Yi?T,?et?al.?Diagnostic?value?of?urinary?to-serum?human?epididymis?protein?4?ratio?in?ovarian?cancer.?Biomed? Rep,2017,7(1):67-72. ［6］ L evey?AS,?Stevens?LA,?Schmid?CH,?et?al.?CKD-EPI(Chronic?Kidney?Disease?Epidemiology?Collaboration):?A?new?equation? to?estimate?glomerular?filtration?rate.?Ann?Intern?Med,2009,150:? 604-612. ［7］ L v?YW,?Yang?L,?Zhang?M,?et?al.?Increased?human?epididymis?protein?4?in?benign?gynecological?diseases?complicated?with?chronic? renal?insufficiency?patients.?Genet?Mol?Res,2015,14:?2156-2161.［8］ L armour?KE,Maxwell?AP,Courtney?AE.?Improving?early?detection?of?chronic?kidney?disease.?Practitioner,2015,259(1779):?19-23,2-3. ·流行病学调查·
2016年最新流行性感冒诊断及治疗标准流程
流行性感冒（2016年版） 一、流行性感冒标准住院流程 （一）适用对象。 第一诊断为流行性感冒患者（ICD－10：J11-101）。 （二）诊断依据。 根据《流行性感冒诊疗方案》（卫生部，2000.10.13）及根据卫生部“十二五”规划教材、全国高等学校教材《传染病学》（人民卫生出版社，2013，第8版，李兰娟、任红主编）。 1.发病前7天内与传染期流感确诊病例有密切接触，并出现流感样临床表现。或发病前7天内曾到过流感流行的地区，出现流感样临床表现。 2.出现高热、头痛、周身酸痛等临床表现，同时有以下一种或几种实验室检测结果： （1）流感病毒核酸检测阳性（可采用real-time RT-PCR 和RT-PCR方法）； （2）分离到流感病毒； （3）双份血清流感病毒的特异性抗体水平呈4倍或4倍以上升高。
（三）治疗方案的选择。 根据《流行性感冒诊疗方案》（卫生部，2000.10.13）及根据卫生部“十二五”规划教材、全国高等学校教材《传染病学》（人民卫生出版社，2013）。 1.呼吸道传染病隔离。 2.一般治疗：适当休息，清淡饮食，多饮水。 3.对高热、头痛者给予解热止痛等对症治疗。 4.抗病毒治疗：奥司他韦。 （四）标准住院日为7-10天。 （五）进入路径标准。 1.第一诊断必须符合流行性感冒ICD－10：J11-101诊断编码。 2.当患者同时具有其他疾病诊断时，但在住院期间不需要特殊处理也不影响第一诊断的临床路径流程实施时，可以进入路径。 （六）住院期间的检查项目。 1.必需的检查项目： （1）血常规、尿常规、大便常规； （2）血生化：包括电解质，肝肾功能、心肌酶谱； （3）流感病毒抗原检查、流感病毒核酸检测； （4）胸片、心电图。