血型鉴定

ABO血型试验(正反定型)

一原理

利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。

二试剂和材料

1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。

3．受检者血清。

4．受检者5%红细胞盐水悬液。

三操作（玻片法）

1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。

2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。

四结果判定：见表1

表1 ABO血型正反定型结果

五注意事项

1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。

2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。

4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。

5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。

注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。

六血型鉴定中常见的假阳性反应

1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。

2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。

七血型鉴定中常见的假阴性反应

1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致

效价减弱是最常见原因。

2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏

感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。

3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液

液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。

4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生

溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。

5.溶解性抗原或血型物质的中和作用: 未经洗涤的红细胞悬液中，带有血浆

中的血型物质。特别是轻度溶血，部分红细胞溶解，释放出大量可溶性抗原，可将血清中对应的抗体中和，以致抗体不足，使红细胞不能凝集。克制方法：不使用溶血标本，用洗涤后的红细胞配制悬液。

6.试验时间过短：血型抗原抗体反应需要一定时间，时间不够，较弱的凝集

就不能出现。因此，玻片法不能少于15分钟。

7.反应温度不当：完全抗体作用的最适温度多在20oC左右至4oC，因此ABO

血型鉴定应在室温进行。

8.轻度凝集误认为不凝集。

9.不完全抗体遮断引起的假阴性：新生儿溶血病时，病儿红细胞的血型抗原

被母体内的不完全抗体致敏，从而遮断其与相同特异的完全抗体的反应，以致定型时出现假阴性。

RH血型试验

一原理

利用红细胞凝集试验，采用单克隆IgM/IgG抗D抗体，使用玻片法或试管法检测红细胞表面的RH（D）抗原。

二试剂

1．RH抗血清（抗D血清）

2．3~5%红细胞悬液

三操作

1．玻片法：在清洁玻片上滴加一滴抗D血清，加待检全血一滴，轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，连续5分钟，用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为RH（D）阳性；不凝集为RH（D）阴性。

2．试管法：取清洁干燥试管一支，加抗D血清一滴，再加入3~5%红细胞悬液一滴，轻轻混匀后静置1分钟，置离心机中，以3000转/分离心1分钟。用肉眼观察有无凝集反应。凝集者为RH（D）阳性；不凝集为RH（D）阴性。

四注意事项

1．待检标本应为非抗凝血，红细胞浓度以3~5%RBC等渗盐水悬液为宜。

2．试验最适温度为20~37oC，温度过低时应适当延长反应时间。

3．试剂应贮存在4oC冰箱中，避光保存。

五临床意义

我国人口绝大多数为RH阳性血型，RH阴性血型较少见，我室对RH初筛阴性者送上级医院（江门中心血站）复查。

abo血型鉴定及分析()

实验8 ABO血型鉴定及分析 1 实验原理 血型通常是指红细胞膜上特异性抗原的类型，其分类的依据是红细胞表面是否存在某些可遗传的抗原物质。若将血型不相容的两个人的血液滴加在玻片上并使之混合，则红细胞可凝集成簇，这一现象称为红细胞凝集。造成凝集的机制是抗原-抗体反应。红细胞表面还有特异性糖蛋白抗原物质统称为凝集原（Agglutinogen）。在血浆中则含有与之相应的特异性抗体，称为凝集素（Agglutinin）。其中常用血型系统有ABO系统和Rh系统。 在ABO血型系统中，红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B 凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A 的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。 2 实验结果 从下表和图1可知：人血与标准A血清（含抗B抗体）混合后不发生凝集（反应10分钟后，仍然没有发生凝集）；人血与标准B血清（含抗A抗体）混合后发生凝集（反应迅速）。因此可以判定我的血型为A型血。 图1 血型检测实验结果 表1 实验情况 标准A血清（抗B）标准B血清（抗 A） 人血凝集情况不凝集凝集

3分析与讨论 红细胞凝集的本质是抗原-抗体反应。红细胞膜上抗原的特异性取决于抗原决定簇，这些抗原在凝集反应中被称为凝集原。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素。凝集素为γ-球蛋白，存在于血浆中。发生抗原-抗体反应时，由于每个抗体上具有2～10个抗原结合位点，因此抗体可在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁，使它们聚集成簇，从而发生凝血。根据红细胞膜上是否存在A抗原和B抗原可将血液分为四种ABO血型：红细胞膜上只含有A抗原者为A型；只含B抗原者为B型；含有A与B两种抗原者为AB型；A和B两种抗原均无者为O型。不同血型的人的血清中含有不同的抗体，但不会含有与自身红细胞抗原相对应的抗体。在A型血的血清中，只含有抗B抗体；B型血的血清中只含有抗A抗体；AB型血的血清中没有抗A和抗B抗体；而O型血的血清中则含有抗A和抗B两种抗体。 表1 ABO血型中的抗原和抗体 血型红细胞膜上所含的 抗原 （凝集原）血清中所含的抗 体 （凝集素） A A 抗B B B 抗A AB A、B 无 O 无抗A、抗B 正确鉴定血型是保证输血安全的基础。常规ABO血型的定型包括正向定型和反向定型。正向定型是用抗A与抗B抗体检测来检查红细胞上有无A或B抗体；

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一. 原理 根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、 AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。 二. 试剂和材料 1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注） 2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注； 3.受检者血清； 4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三. 方法 1 .试管法 （1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。 （2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。 （3）立即以 1000r ／min 离心 1mino

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、 B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 (1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管

ABO血型鉴定操作规程-9页文档资料

ABO血型鉴定操作规程 111.01.0.0.0 原理原理原理原理 根据红细胞上和血清（或血浆）中有无A 抗原和（或）B 抗原及其抗体，将血型分为 A 型、 B 型、AB 型及 O 型。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定 ABO 血 型。正定型正定型正定型是指用已知抗正定型 -A、抗-B血清来检测受检红细胞上有无相应的A 抗原和（或） B 抗原；反定型反定型是指用已知反定型反定型 A1 型、B 型红细胞来检测受检血清（或血浆）中有无相 应的抗-A和（或）抗-B。 222.02.0.0.0 原始样品要求原始样品要求原始样品要求原始样品要求 5 mL静脉全血。 333.03.0.0.0 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂 真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。 444.04.0.0.0 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求 温度：18℃～27℃，湿度：30%～70%。 555.05.0.0.0 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备

5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。 5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水 （NS）、干净空试管。 666.06.0.0.0 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程 6.1 将受检标本以 1000g离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用 NS 洗涤三次后，配成 3%～5%红细胞悬液。 6.2 取 6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。 6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各 50μL ，其余管加入受检血浆/血清各 100μL 。 6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者 3%～5%红细胞悬液各 50μL ，摇匀。 6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O红细胞试剂各 50μL ，摇匀。 6.6 1000g离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。 6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。

血型鉴定

ABO血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。

4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。 注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏 感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。 3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液 液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。 4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生 溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。

ABO血型鉴定(生理盐水法).

ABO血型鉴定（生理盐水法） 1. 原理 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。 2. 标本采集 2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 2.2 标本要求： 2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。 2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 冻疮，则主张采耳垂血。 3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 保存不超过48小时。 4. 标本运输：室温运输 5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 6. 试剂 6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂 6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司 6.3 试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓

ABO血型鉴定操作规程

主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页 1 目的 指导工作人员进行ABO血型实验。 2 适用范围 血型检验岗位工作人员 3 职责 负责送检标本ABO血型的检测工作。 4 【原理】 ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。 【标本】 1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。 【器材】 载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。 【试剂】 1.1 抗-A、抗-B试剂 1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液 1.3 受检者血清 1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液 1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管 【操作步骤】 2.1 试管法 2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。 2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。 2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。 2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。

ABO血型鉴定操作规程

ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴

于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏

血型自我鉴定

血型自我鉴定 篇一：血型鉴定 人类血型与血型鉴定 一、目的 1、了解人类血型的遗传特性及其遗传方式；掌握人体血型（aBo型）的检验方法。同时了解自己的血型。 2、观察红细胞凝集现象，掌握aBo血型鉴定的原理。二、原理1、血型 通常所说的血型就是红细胞的血型，是根据红细胞表面的抗原特异性确定的。已知人类的红胞有15个主要血型系统，其中最主要的是aBo 血型系统（1901年Landsteiner发现的第一个血型系统），其次Rh血型系统。 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定血型，以确保安全输血。通常输血反应中大多数注意aBo 血型系统。 2、aBo血型系统 人类aBo血型抗原是根据红细胞膜上有无特异性抗原（凝集原）a或

B来划分的血液类型系统，将血型分为a型、B型、aB型、o型四种。 a、B抗原的特异性决定于糖蛋白上所含的糖链。在人类的血液里含有凝集原（又称抗原）a、B和凝集素（又称抗体）a、B。凝集原附着在红细胞表面，凝集素存在于血浆（或血清）中。同名的凝集原和凝集素相遇（如凝集原a和凝集素B）会发生红细胞凝集现象（凝血反应）。所以在人体的血液中，所含的凝集原和凝集素的类型不同,可分为a、B、aB、o四种血型。所谓a型指红细胞膜上只存在a抗原，其血清中存在抗B抗体（凝集素），B型指红细胞膜上只存在B抗原，其血清中存在抗a抗体,aB型指红细胞膜上同时存在a和B抗原，其血清中没有抗a或抗B抗体，o型则红细胞膜上没有a和B抗原，血清中同时存在抗a抗B抗体。 父母的血型与子女的血型关系： 人类血型有数十亿种之多。人类除同卵双生子女外，再也找不到两个血型完全相同的人。Rh是恒河猴（Rhesusmacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。 凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称d抗原）的，称为Rh阴性。这样就使已发现的红细胞a、B、o及aB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和阴性两种。 随着对Rh血型的不断研究，认为Rh血型系统可能是红细胞血型中最为复杂的一个血型系。Rh血型的发现，对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病的实验诊断和维护母婴健康，都有非常

血型鉴定操作规程教学文案

血型鉴定操作规程

血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；

5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可 以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A 型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管

ABO血型鉴定操作规程(试管法)

宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程 一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型） 二．方法试管法 三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 四．试剂上海血液生物医药有限公司 抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体） 五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作 1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。 2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。 3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。 4 用离心机3400离心15秒。 5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞 再悬浮。 6 观察凝集情况，并记录结果。必要时借助显微镜。 7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。 8 检验结果的解释 ABO血型反应格局表 正定型 血型抗A试剂抗B试剂 + - A - + B - - O + + AB 七．检验方法的局限性 与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。 八．注意事项 1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3 次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。 2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。同时可能含有母亲血液中的抗A 或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。 3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。

血型鉴定

A B O血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。 2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 注：+ =凝集；- =不凝集

五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。 4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致效价减弱是最常见 原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏感性下降,或红细胞

血型测定实验报告

. ..血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。

血型鉴定操作规程(20200722174956)

血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 . 原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和0型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABC血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。2 . 标本采集： 用EDTA抗凝管米集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可米集末梢血。 3. 标本运送与储存： 米集好的标本与申请单同期尽快（一般 2 小时内）送往输血科。标本米集后和检测后，应置于2~8°C环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 . 仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（lgM）血型定型试剂（单克隆抗 体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A B D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂； 5.3 再各加1 滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是 悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4 用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm勺面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1 凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2 细胞混匀2min 后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 . 原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B 型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 . 标本米集： 用EDTA抗凝管米集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤 一.血型鉴定 1.排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型 试管、患者RhD定型试管。 2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者2%-5%红细胞悬 液。 3.加样 ABO正定型：1滴（50ul）抗A、抗B试剂加1滴（50ul）患者红细胞悬液。 ABO反定型：1滴（50ul）患者血清加1滴（50ul）反定型试剂红细胞。 RhD定型：1滴（50ul）抗D血清加1滴（50ul）患者红细胞悬液。 4. 结果判断 离心（2档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。 二.不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法） 1.排管标记01、02、03及自身对照管 2.加样各试管分别加入相应的患者血清2滴（100ul）及筛选细胞1滴（50ul）。 3.结果观察 离心（2档），观察结果 先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。 各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书） 各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心 先观察上清液有无溶血 弃去上清液，留约0.1ml，轻轻混匀 肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验） 各试管分别加入重悬液2滴（100ul），轻轻混匀 肉眼观察凝集是否在1min内消失 显微镜检查 三.交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法） 1.标本准备 分离供血者血浆与红细胞 三次洗涤，制备供血者2%-5%红细胞悬液 2.排管标记 排管，主侧、次侧及自身对照管 3.加样 各试管分别加入相应的备检血清2滴（100ul）及2%-5%备检红细胞悬液1滴（50ul）4. 结果观察 离心（2档），观察结果 先看上清液有无溶血 轻轻混匀，肉眼观察有无凝集 结果判断并记录 各试管分别加入低离子介质0.65ml，轻轻混匀（参照试剂说明书） 各试管再分别加凝聚胺溶液2滴（100ul）混匀，离心 先观察上清液有无溶血 弃去上清液，留0.1ml，轻轻混匀

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

一.原理 根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。 二.试剂和材料 1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注） 2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清； 4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三.方法 1．试管法 (1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。 (2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。 (3)立即以1000r／min离心1min。 (4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有

无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 （1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

ABO血型鉴定操作规程

成都市青白江区人民医院 对象：全院职工 医疗药事制度文件名称：ABO血型鉴定（4.19.2.1） 编写日期：2014.1 修订日期：2017.4 执行日期：2017.4 注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科 ABO血型鉴定 【原理】人类ABO血型系统包括四种主要的表现型：A、B、O和AB。ABO血型由红细胞上A 和B抗原的有或无决定，ABO系统还以血清中存在自然发生的规则抗体为特点，即血清中含有针 对自身红细胞所缺的A或B 抗原产生的同种凝集素（也称为“天然抗体”）。人类红细胞上A和B 抗原的有或无与血浆中抗A和抗B抗体的产生存在着相反的互补关系。例如O型个体红细胞上缺 少A和B抗原，其血清中含有抗A和抗B抗体。 利用红细胞凝集试验，通过正反定型可以准确鉴定ABO血型。所谓正定型，也称红细胞定型试验，是指用标准抗A和抗B试剂来测定红细胞上的A抗原和B抗原；所谓反定型，也称血清定型试验，是指用标准A型和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。“天然抗体”的免疫原可 能是肠道及环境中的细菌，例如在大肠埃希菌的脂多糖外壳中含有ABO类似结构。 1.试管法试管法是ABO定型试验的经典方法。 【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度 皆为2%～5%。 【试剂】（1）抗A血清 （2）抗B血清 （3）2%～5%的A型、B型红细胞盐水悬液 1（4）如果需要，可增加抗A,B试剂和A血型红细胞. 2【操作】

（1）正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗 B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；④向每一支试管滴加1滴2%～5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常 （900～1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照（2）反定型：检测血清或血浆中的抗体。①取2支洁净试管，分 别标记A和B，分别向其中滴加2～13滴血清或血浆；②加1滴A试剂红细胞到标记A的试管； ③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；11④如果需要，加1滴A试剂红细胞到一支已加入2～3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混匀，2按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥检测是否有溶血现象，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。成都市青白江区人民医院 【结果判定】 （1）细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果 （2）细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果 （3）凝集强度判断标准参见表1-5-1 （4）ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-5-2 （5）如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO 血型结果 （6）混合视野凝集的情况，应进一步找出原因：例如是否混合血样标本，近期有无输血史，是否 白血病急性期或者ABO亚型等 表1-5-1凝集强度判读 4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程(1)(1)

疑难血型鉴定及交叉配血处 理流程(1)(1) -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

疑难血型鉴定及交叉配血处理流程 一、正反定型不一致 1、重复试验（严格正规操作）。 2、重新取血（以纠正污染或弄错标本造成的不符），溶血标本不能用于合血。 3、洗涤红细胞后进行以下试验（正反定型凝集低于2+的，应首先怀疑是由于亚型或抗原 抗体活降低引起。） 1）、用自身血清、红细胞做定型对照，检验自身有无完全抗体。 2）、用O型红细胞做反定型对照，确认是否存在ABO系统以外完全抗体。 3）、用抗A、抗AB、抗A1和抗H进行正定型： ①A亚型细胞与抗A、抗AB的凝集强度低于A1细胞，但与抗H的凝集强度高于A1细胞（3+ 以上）； ②A亚型（特别是A2中约有1-8%会产生抗A1），与抗A1基本不发生凝集。 ③用抗AB（O型血清或血浆）是因为它的抗A效价较高，与弱A和弱B抗原亲和力强。 4）、分别用A1型和A2型红细胞反定型检查血清中有无抗A1存在（A亚型中有部份会产生抗A1，能与A1发生凝集，但不与A2凝集。） 5）、询问病史，判断是否是由于病人抗体缺失或减弱引起反定型错误，可延长反应时间，或用灵敏度更高的血型卡做反定型。 6）、被检红细胞做直抗（观察有无被抗体致敏的情况），若为阳性，应将细胞放散至阴性后再定血型。 4、若还不能确定血型，应增加血型物质的检测（如唾液等）。 二、交叉配血不合 （一）主侧端不相合 1、血型鉴定不正确,重新鉴定血型。 2、病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。 3、供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。 4、病人血清不正常，如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状凝集，血清中存在高分子聚 合物的血浆扩容剂引起假阳性。 5、试验系统被污染。 （二）次侧端不相合 1、供血者血浆中存在针对病人红细胞抗原的抗体。 2、病人与供血者的ABO血型不相合。 3、病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。 4、抗筛阴性，而次侧不合多由自身抗体引起（此是抗人球配血不合，而聚凝胺配血通过可 输血）。 （三）配血不合的主要因素 1、血型是否正确。 2、是否有自身抗体。 3、是否有同种异体抗体。

血型鉴定操作规程

血型鉴定操作规程 Document number：BGCG-0857-BTDO-0089-2022

血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；

再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积； 缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 凝集或发生溶血为阳性结果； 细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B 抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。