小鼠经口染毒急性毒性评价

亚硝酸盐的急性毒性评价

摘要：此次试验主要是研究亚硝酸钠的急性毒性评价，通过对健康小鼠的选择，有毒性资料可查得亚硝酸钠的急性经口染毒LD50值，依据霍恩氏法LD50计算的设计原则按照随机数分组的方法将动物分成4个染毒组，每组4只小白鼠。一次灌胃给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，分析中毒死亡的原因，必要时进行解剖，观察受试物毒性反应与剂量的关系，采用霍恩氏法求出亚硝酸钠的半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将亚硝酸钠进行急性毒性分级，从而外推到人，推测亚硝酸钠的毒性对人的影响。

关键词：小鼠、亚硝酸钠、急性毒性、LD50、霍恩氏法

1．前言

亚硝酸钠（NaNO2），是亚硝酸根离子与钠离子化和生成的无机盐。亚硝酸钠易潮解，

亚硝酸钠有咸味，又是被用来制造假食盐。亚硝酸钠暴露于空气中会与氧气反应生成硝酸钠。若加热到320℃以上则分解，生成氧气、氧化氮和氧化纳。接触有机物易燃烧爆炸。由于其具有咸味且价钱便宜，常在非法食品制作时用作食盐的不合理替代品，因为亚硝酸钠有毒，含有工业盐的食品对人体危害很大，有致癌性。亚硝酸钠是国家规定允许添加的食品添加剂。肉类制品加工中用作发色剂，可用于肉类罐头、肉类制品。在肉制品中对抑制微生物的增殖有一定作用(对肉毒梭状芽孢杆菌有特殊抑制作用)，能提高腌肉的风味，而且亚硝酸钠还可作杀菌剂，抑制肉制品中微生物的生长。

亚硝酸钠虽然应用于多方面的工业用途途中，但在食品方面，中国食品添加剂使用卫生标准规定: 食品级亚硝酸钠用作食品添加剂时，最大使用量为0.15g/kg，残留量：肉类罐头≤0.05g/kg，肉制品≤0.03g/kg,因为如果人体摄入过多的亚硝酸钠就会导致机体致癌和后代畸变，过多的使用对人体的危害非常巨大。因此，对亚硝酸钠的急性毒性评价的研究就非常有必要。

2．材料与方法

2.1材料

实验动物：选取健康成年小鼠（30g左右），试验前要对动物饲养观察2~3天，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物。

2.2仪器与试剂

2.2.1器材：

注射器，灌胃针，普通天平，电子天平，吸管，吸球，容量瓶，玻璃棒，烧杯，试剂瓶；

2.2.2试剂：

亚硝酸钠，蒸馏水。

2.3实验方法

2.3.1实验动物与分组：

选健康成年小鼠(30g左右)，同性别实验动物个体间体重相差不得超过平均体重的10%，且此次试验所用的小鼠均为雄性小鼠，所得出的结论只能代表单一性别的实验情况。试验前动物要在试验环境中至少适应2~3d时间，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物本次试验取体重28.0~34.0的小鼠，试验时，将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，按随机分组表将实验动物分成4组，每组4只。

16只小鼠的完全随机分配表如下

2.3.2剂量选择：

经过预试或查资料得到LD50 的大致范围，经查资料得口服-小鼠LD50为:200mg/kg；

各剂量组的间距可根据LD50计算方法要求按等比级数或等差级数安排。本实验用霍恩氏发法计算LD50，各组间计量递增公比为10^(2)，，由于温度越低亚硝酸钠的毒性越大，且实验室的温度较低，因此将LD50为:200 mg/kg设为第三剂量组，则染毒剂量组剂量分别为46.4mg/kg、100mg/kg、215mg/kg、464mg/kg。

2.3.3受试化学物配制与稀释

1、亚硝酸钠溶液以蒸馏水为溶剂配制成溶液

2、受试物的配制（等容量稀释）：根据计算结果精确量取需要的受试物的量，稀释成需要的浓度。

配制步骤：

又每组实验动物都为四只，且计算其灌胃量由平均体重计算出来的，即每只小鼠所灌胃的体积是一样的，都为0.2ml，所以均用100ml容量瓶配置的四个不同浓度的亚硝酸钠溶液，根据上面表格数据得每组称取亚硝酸钠的克数为0.7273、1.5413、3.3567、7.2210，分别溶于100ml水中即可（若因溶解度限制可更据实验情况调整溶剂体积，但浓度不变）。

2.3.4灌胃：

1、灌胃实验试验前实验动物应禁食（一般6~8小时），不限制饮水。然后对各组动物用经口灌胃法一次染毒或24h多次染毒。一次灌胃液体积为小鼠0.2~1ml，染毒后继续禁食1~2h，本实验灌胃液体积统一为0.2ml（以蒸馏水作为溶剂）。

2、灌胃方法

小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑入食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深入至胃部，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。一般进针深度小鼠2.5~4cm。

2.4检测/检测指标

3.结果分析

3.1实验结果

第一组：染毒剂量为46.4mg/kg，1号和2号小鼠死亡，其它两只正常；第二组：染毒剂量为100mg/kg，没有小鼠死亡，四只均正常；第三组：染毒剂量为215mg/kg，四只小鼠在前期出现萎靡症状，行动迟缓，但最后都正常，未出现死亡；第四组：染毒剂量为

464mg/kg，四只小鼠全部死亡。即四组的死亡数为2、0、0、4，但是在霍恩表上查不到对应的LD50值。

3.2结果分析

第一剂量组也是最低剂量组的小鼠01号和06号死亡，经后来解剖发现，它们的胃出现肿胀，其中06号小鼠在后期有吐血现象，故其死亡原因可能是在灌胃过程中是由于由同一个人操作，因为操作不当导致小鼠的食管破裂或者伤害了胃组织。而两只小鼠体重均出现过度下降，而本身耐受性较差以及对外界环境抵抗力较低，最终01号和06号小鼠死亡。

第二小组也是次低剂量组所有小鼠表现正常，在饲喂后期并未出现任何有异常的情况。

第三小组也是半数致死剂量组都表现正常并未出现死亡可能是因为这四只小鼠对外源合化物不敏感，有较强的耐受性，对外界不良环境有较强的抵抗力，而且第三组小鼠在后期观察中发现进食量比其他小鼠都多且体重下降不明显，说明这组小鼠的抵抗力稍强。

第四组四只全部死亡是因为染毒剂量远远大于小鼠的半数致死量。

由于第一组和第三组死亡情况不正常，导致在霍恩表上查不到相应的LD50值，其原因可能是在操作上的误差、试剂在配置过程中的误差和对小鼠选择的偏差等，最终导致实验的失败。

色胺酮对小鼠急性和亚急性毒性实验

2012年11月第9卷第32期 ·论著· CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报色胺酮（TRYP ）为吲哚喹啉类生物碱，其化学名称为吲哚[2，1-b]喹唑啉-6，12-二酮（6，12-dihydro-6，12-dioxoindo lo-[2，1-b]-quinazoline ），主要存在于马蓝（Strobilanthes cusia ）、蓼蓝（Polygonum tinetorium Lour ）、菘蓝（Isatis tinctoria L.）等产蓝植物中，现也可通过微生物发酵或人工合成得到[1]。近年来药理研究表明其具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗疟和杀虫作用，特别是可以通过多种途径对肿瘤细胞增殖具有抑制作用[1-9]。经文献报道和本课题组研究发现，色胺酮对K562白血病细胞有突出的抑制和诱导凋亡的作用[2-3]。为了评价其成药的安全性，为进一步制剂的剂量设计提供参考，笔者对其极性毒性进行了研究，现将结果报道如下：1仪器与试药 ABX MICROS 60三分类细胞计数仪（西京医院儿科）；COBAS INTEGRA 400Plus 全自动生化分析仪；分析天平（德国赛多利斯）。 色胺酮（TRPY ）粉末由西北大学生命科学院提供，经HPLC 法检测其含量高于95%，其他试剂均为分析纯，临用前配制成混悬液用以灌胃。 昆明种小鼠，雄性，体重（20±2）g ，使用许可证号：SCXK （军）字第2007-007号。2方法与结果2.1急性毒性实验 取适应性饲养3d 后的小鼠10只，禁食不禁水12h ，每组于 1d 内按50mg/kg 剂量灌胃给药3次，每8小时给药1次。给药 后仔细观察小鼠的外观、行为、活动、精神、食欲、皮毛、呼吸和鼻、眼、口及大小便等。结果连续观察3d ，体重略有减轻，但未见死亡，其他未见异常，无法测出半数致死量（LD 50）。对小鼠进行大体解剖，发现胃肠道有明显的黄色粉末状物体，推测是未被完全吸收的色胺酮粉末，其他未见明显异常。2.2亚急性毒性实验 2.2.1日常行为观察取小鼠40只，随即分为对照组和高、中、低三个剂量组。根据药代动力学研究[10]定其剂量分别为：高剂量组80mg/kg 、中剂量组50mg/kg 、低剂量组25mg/kg ，对照组给同体积生理盐水，连续给药30d 。每日观察动物的精神、活动、毛色状态、记录摄食量及体重变化。见表1、2。结果表明各剂量组体重和进食量与对照组比较差异均无统计学意义（P >0.05）。 2.2.2血常规检查末次给药后2h 眼球取血，进行血常规和生化指标测定，即红细胞（RBC ）、白细胞（WBC ）计数、血红蛋白（HGB ）、平均血红蛋白（MCH ）等。见表3。 2.2.3脏器系数检测末次给药2h 后摘眼球取血，取血后解剖大鼠，观察各组织脏器均无明显异常，摘取心、肝、脾、肺、肾和脑等组织，用生理盐水清洗，滤纸吸干多余水分后称重，按以下公式计算脏器系数，脏器系数（‰）=脏器重量（g ）体重（g ）×100‰， 结果见表4。用SPLM 3.0版软件进行统计学检验和方差分析显示，其结果差异无统计学意义（P >0.05）。3讨论 白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤。当前，白血病的临床治疗仍采用传统的大剂量联合化疗，但此 色胺酮对小鼠急性和亚急性毒性实验研究 李捷缪珊王四旺王剑波谢艳华 第四军医大学天然药物学教研室，陕西西安 710032 [摘要]目的观察色胺酮灌胃后小鼠产生的急性毒性反应，以评价色胺酮原料药的安全性。方法将色胺酮设定3个剂量组，灌胃给药，小鼠未出现死亡，故以高、中、低三个给药剂量进行亚急性毒性研究。连续喂养观察体态行为，30d 后摘眼球取血作血常规检测。结果试验小鼠的行为未出现异常，无小鼠死亡。各组小鼠的体重及其增重、进食量、食物利用率与对照组比较差异均无统计学意义（均P >0.05）；各计量组血常规指标与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论色胺酮具有较好的安全性。[关键词]色胺酮；安全性；急性毒性试验；小鼠[中图分类号]R282.71[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）11（b ）-0013-02 Acute and sub-acute toxicity test of TRYP in mice LI Jie MIAO Shan WANG Siwang WANG Jianbo XIE Yanhua Department of Nature Medicine,the Fourth Military Medical University,Shaanxi Province,Xi ′an 710032,China [Abstract]Objective To evaluate the safety of TRYP by observing the acute toxic reaction of mice after oral administra -tion.Methods The mice were oral administrated with TRPY at three different dosages.No death of mice was found.So three doses of the high,middle and low for subacute toxicity study were given.After feeding for 30days,the blood hema -tology was detected.Results Dreg-treated mice had no behavior anomaly and death in the observation period.The differ -ence of body weight,weight increased,food in-take and utilization ratio in each group was not significant (P >0.05).The hematology in each dose group had no significant difference compared with control group (P >0.05),either .Conclusion TRYP is relatively safe. [Key words]TRYP;Safety;Acute toxicity;Mice [基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（项目编号：2011ZX09401-308）。 [作者简介]李捷（1983-），女，硕士研究生，助教；研究方向：中药药理学。[通讯作者]王四旺（1958-），男，教授，博士生导师；研究方向：中药新药开发。 13

经口急性毒性试验方法改良寇氏法

急 性 毒 性 试 验 方 法 ――改良寇氏法 K?rber 法由K?rber 于1931提出，后经Finney 改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD 50及全部有关参数与正规概率单位法相近。 改良寇氏法（K?ber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。 一、剂量选择及分组 1、剂量选择 剂量设计是否合理是急性毒性试验能否成功的关键。 探求外源化学物的急性毒性，测定其LD 50或LC 50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD 50的计算方法，然后设计剂量。 2、预试验： 总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b ）和全部不致死的最大剂量（a ），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r ），其比值为1.2~1.5。进行正式实验。 用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g ，小鼠18~22g ，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg ，犬10~12 kg 。用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD 50。 通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。 按下式设计剂量组： 1n a b r -= 式中：r —相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5， b —最低全致死剂量量， a —最高不致死剂量， n —设计的组数。 分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出LD 50。 3、根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为： 第一组：a 第二组：a r

小鼠的急性毒性试验

五种农药对小鼠的急性毒性试验 绪论 随着现代农业的飞速发展，农药的应用越来越广泛，在农林作物的病虫防治中,农药一直发挥着巨大作用,尤其是本世纪60-70年代,人们大量使用农药,几乎使粮食产量增长一倍,但随着农药长期的、大量的、不合理的使用,导致了对环境的严重污染并对人体健康产生极大的影响。它们对动、植物和人类的危害越来越严重。一方面它们可以直接进入生物体内引起急性、慢性中毒和畸变，同时还通过径流、排污、挥发等途径进入土壤、大气和水体，引起各种生态环境下生物的死亡，并通过食物链的富集影响人类的食品安全。目前，因农药使用与管理失控而引发的一系列水域环境污染以及食品安全等问题，已引起政府相关部门和业内学者的广泛重视。当前，随着有机氯农药的禁用，菊酯类和有机磷类等成为我国目前使用较广泛的农药。 《中华人民共和国农药管理条例》指明，农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成物或者几种物质混合物及其制剂。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药及其衍生物和杂质的总称。动植物在生长期间、食品在加工和流通中均可受到农药的污染，导致食品中农药残留。 相关报道表明，农药利用率一般为10%，约90%的残留在环境中，过多地使用农药，大量未被利用的农药经过降雨、农田渗滤和水田排水等进入水体，同时，还有大量散失的农药挥发到空气中，最后汇入水域，沉降积淀在土壤中，通过农作物吸收和食物链进入人体进行累积，并对人体健康造成危害。目前中国一些食品，如茶叶、大米、肉、蛋等食品中农药残留量常超过规定标准，过多的残留量对人体健康会造成危害。为此，论述农药残留对人体健康的危害效应及其毒理机制和防治措施，以期对防治食品中农药残留对人体健康的危害提供理论依据。 在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。 本文以百草枯、甲氰菊酯、乐果、草甘膦和敌敌畏五种常用农药为实验材料, 检测了它们对

小鼠的急性毒性试验之欧阳家百创编

五种农药对小鼠的急性毒性试验 欧阳家百（2021.03.07） 绪论 随着现代农业的飞速发展，农药的应用越来越广泛，在农林作物 的病虫防治中,农药一直发挥着巨大作用,尤其是本世纪60-70年代,人们大量使用农药,几乎使粮食产量增长一倍,但随着农药长期 的、大量的、不合理的使用,导致了对环境的严重污染并对人体健康产生极大的影响。它们对动、植物和人类的危害越来越严重。 一方面它们可以直接进入生物体内引起急性、慢性中毒和畸变， 同时还通过径流、排污、挥发等途径进入土壤、大气和水体，引 起各种生态环境下生物的死亡，并通过食物链的富集影响人类的 食品安全。目前，因农药使用与管理失控而引发的一系列水域环 境污染以及食品安全等问题，已引起政府相关部门和业内学者的 广泛重视。当前，随着有机氯农药的禁用，菊酯类和有机磷类等 成为我国目前使用较广泛的农药。 《中华人民共和国农药管理条例》指明，农药是指用于预防、消 灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有 目的地调节植物、昆虫生长的化学合成物或者几种物质混合物及 其制剂。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中 的农药及其衍生物和杂质的总称。动植物在生长期间、食品在加 工和流通中均可受到农药的污染，导致食品中农药残留。

相关报道表明，农药利用率一般为10%，约90%的残留在环境中，过多地使用农药，大量未被利用的农药经过降雨、农田渗滤和水田排水等进入水体，同时，还有大量散失的农药挥发到空气中，最后汇入水域，沉降积淀在土壤中，通过农作物吸收和食物链进入人体进行累积，并对人体健康造成危害。目前中国一些食品，如茶叶、大米、肉、蛋等食品中农药残留量常超过规定标准，过多的残留量对人体健康会造成危害。为此，论述农药残留对人体健康的危害效应及其毒理机制和防治措施，以期对防治食品中农药残留对人体健康的危害提供理论依据。 在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。 本文以百草枯、甲氰菊酯、乐果、草甘膦和敌敌畏五种常用农药为实验材料, 检测了它们对小鼠的单一和联合急性毒性效应，来评价各种农药的的毒性强弱以及对环境的危害。 1 材料与方法 1.1动物 SPF 级昆明小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，通过腹腔注射药物给药，给药后密切观察小鼠的反应，观察4小时。给药前禁食不禁水十二小时。

急性、慢性和亚慢性毒性实验(20201111083305)

急性毒性试验 (-)经典的急性致死性毒性试验 通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50) 1、实验动物 常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。 2、染毒剂量设计 首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按几何级数)染毒，找出找出10%、90% (或0%~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1)或：i=(lgLD100-lgLD0)/ (n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。 有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。 3、观察 染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50o在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。 观察内容包括： (1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。 (2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。 (3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、 循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、 惊厥、腹泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或 竖毛。 (4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进 行组织病理学检查。 4、LD50计算 (1)霍恩氏法 (2)简化寇氏法 M=X - i (S p - 0. 5) 式中:m―logLD50, X—最高剂量组剂量对数值，

亚硝酸钠急性经口毒性试验设计

亚硝酸钠急性经口毒性试验设计 一、实验目的 1、急性经口毒性试验是评估化学物毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。试验结果可作为化学毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。 2、此实验为设计性实验，通过此试验应学会化学物急性毒性评价试验的基本程序，并且掌握进行试验设计时应考虑的各种因素与试验条件。 3、熟悉实验动物的饲喂技术及基本要求，掌握实验动物灌胃的技能，学会LD50及其可信限的计算方法。 4、通过本试验获得受试化学物的半数致死剂量，并描述试验过程中实验动物的各种反应及可能的靶器官。 二、实验器材与试剂 实验试剂: 苦味酸, 酸性品红,水，动物饲料 实验动物与仪器：小白鼠、灌胃针、天平、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、手术剪、托盘、镊子等 三、实验步骤 1.实验动物选择与管理：选择50只，2-3月龄，体重在 18-22g的健康小鼠，小鼠重量相差在10%以内。 2.实验管理: 实验前动物先适应饲料和环境4d。适应期 间和试验期间雌雄分笼饲养，染毒前4小时小鼠必须 空腹，染毒后继续禁食2-4h，染毒期间饮水不限。

3.实验条件：饲养室温度控制在22±3oC,相对湿度在 30%-50%之间，无对流风，昼夜各半。 4.实验动物染色与分组：用黄色3%-5%苦味酸，0.5%酸 性品红对动物进行染色标记，黄色和红色分别代表个位和十位。动物分为左、中、右三区，左上肢、左中部和左下肢分别表示1、2、3或者10、20、30，以此类推。50只动物分成随机分5组，分别为A、B、C、 D、E每组10只，且雌雄各半。 5.剂量设计与剂量分组（见下表）：查阅文献得知小鼠 LD50为200mg\kg.亚硝酸钠为白色至淡黄色粒状结晶或粉末，无味，易潮解，有毒，水溶液呈碱性，在水中溶解度为82g/100ml。相对密度（水=1g/cm3）：2.17g/cm3；熔点：271℃；沸点320℃（分解）。将亚硝酸钠溶于水中，动物按10ml\kg给药，得到的受试物浓度C=剂量/10（ml/kg）。

小鼠经口染毒急性毒性评价

亚硝酸盐的急性毒性评价 摘要：此次试验主要是研究亚硝酸钠的急性毒性评价，通过对健康小鼠的选择，有毒性资料可查得亚硝酸钠的急性经口染毒LD50值，依据霍恩氏法LD50计算的设计原则按照随机数分组的方法将动物分成4个染毒组，每组4只小白鼠。一次灌胃给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，分析中毒死亡的原因，必要时进行解剖，观察受试物毒性反应与剂量的关系，采用霍恩氏法求出亚硝酸钠的半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将亚硝酸钠进行急性毒性分级，从而外推到人，推测亚硝酸钠的毒性对人的影响。 关键词：小鼠、亚硝酸钠、急性毒性、LD50、霍恩氏法 1．前言 亚硝酸钠（NaNO2），是亚硝酸根离子与钠离子化和生成的无机盐。亚硝酸钠易潮解， 亚硝酸钠有咸味，又是被用来制造假食盐。亚硝酸钠暴露于空气中会与氧气反应生成硝酸钠。若加热到320℃以上则分解，生成氧气、氧化氮和氧化纳。接触有机物易燃烧爆炸。由于其具有咸味且价钱便宜，常在非法食品制作时用作食盐的不合理替代品，因为亚硝酸钠有毒，含有工业盐的食品对人体危害很大，有致癌性。亚硝酸钠是国家规定允许添加的食品添加剂。肉类制品加工中用作发色剂，可用于肉类罐头、肉类制品。在肉制品中对抑制微生物的增殖有一定作用(对肉毒梭状芽孢杆菌有特殊抑制作用)，能提高腌肉的风味，而且亚硝酸钠还可作杀菌剂，抑制肉制品中微生物的生长。 亚硝酸钠虽然应用于多方面的工业用途途中，但在食品方面，中国食品添加剂使用卫生标准规定: 食品级亚硝酸钠用作食品添加剂时，最大使用量为0.15g/kg，残留量：肉类罐头≤0.05g/kg，肉制品≤0.03g/kg,因为如果人体摄入过多的亚硝酸钠就会导致机体致癌和后代畸变，过多的使用对人体的危害非常巨大。因此，对亚硝酸钠的急性毒性评价的研究就非常有必要。 2．材料与方法 2.1材料 实验动物：选取健康成年小鼠（30g左右），试验前要对动物饲养观察2~3天，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物。 2.2仪器与试剂 2.2.1器材：

药典三部(2015版)-通则-异常毒性检查法

精品文档 . 1141 异常毒性检查法 异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引入或其他 原因所致的毒性。 本法系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。 供试品溶液的制备按品种项下规定的浓度制成供试品溶液。临用前，供试品溶液应平衡至室温。 试验用动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。做过本实验的动物不得重复使用。 非生物制品试验 除另有规定外，取小鼠5只，体重18～22g，每只小鼠分别静脉给予供试品溶液0.5ml。应在4～5秒内匀速注射完毕。规定缓慢注射的品种可延长至30秒。除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48小时内不得有死亡。 生物制品试验 除另有规定外，异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验，试验中应设同批动物空白对照，观察期内，动物全部健存，且无异常反应，到期时每只动物体重应增加，则判定试验成立。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。 ⑴小鼠试验法除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称体重，应为18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5ml，观察7天。观察期内，小鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。 ⑵豚鼠试验法除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只小鼠称体重，应为250～350g。每只豚鼠腹腔注射供试品溶液5.0ml，观察7天。观察期内，豚鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只豚鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，可用4只豚鼠复试1次，判定标准同前。

实验二经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物： (1)动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g?22g (2)样品来源：首都医科大学实验动物部 2、器材：注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物 秤。 3、试剂：敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠(健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。) 肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物)，每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液 标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 (1)确定灌胃量：0.1ml/10g (2)确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 (1)毒性体征的观察： 染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min

(2) LD50的计算： a 实验各组剂量的确定：设 5组，每组雌雄动物各10只 剂量组距d 为： lg LD 100 一 lg LD 0 组数-1 d 为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d ,取反对数，即可得出各组剂量 b 、LD50的计算(见附件)： 1 lg LD 50 = X k d' (P i P i 1) Xk:最大剂量的对数 d :相邻两组对数剂量之差 数 Pi :各组死亡率 i :组数 C 、求半数致死量的95%可信区间 标准误公式： S lg LD 50 = d ni :实验动物数。 ?1 lg (lg LD 50 - 1 .96 S lg LD 50 ) 四、实验过程 1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A 组和B 组)，分别在不同实验室。每大 组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组 10只动物。 集体活动：1、2、3、4、5组各1人，进行受试物配制。 P i (1 - P i ) ni - 1 95% 可信区间:

小鼠急毒实验标准操作LD50 SOP

标准操作规程(Standard Operating Procedure) 小鼠LD50毒性试验 编号： 制定日期： 起草人： 审核人：

BALB/c 小鼠LD50毒性试验 1.实验目的 衡量化合物的毒性，寻找安全剂量范围，为进一步体内活性评价提供数据支持。 2.实验原理 经口一次性给予或24 h 内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD50来表示。 3.实验内容 (1) 探测化合物的LD50剂量范围。 (2) 确定组数并计算各组剂量。 (3)正式实验：给不同组的小鼠灌胃不同剂量的药物，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。 (4)记录实验结果，并计算LD50。 4.实验材料 试剂：化合物，生理盐水。 材料：电子天平，注射器，灌胃针。 实验动物：动物品系：BALB/c小鼠；性别：雌性；级别：SPF级；年龄：7周龄，实验周期内的动物年龄约为8-10周龄；体重，20±2g，实验前禁食12h。 5.实验方法与步骤 1．预实验：取小鼠20只，以3只为一组，分成5组。单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选取一组剂量，进行化合物溶液灌胃给药。 给药前禁食不禁水12小时，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围。

2．正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1:0.7或1:0.8）和生理盐水溶媒对照组，各组动物数为10只，分别用marker笔标记。 动物的体重和性别随机分配，完成动物分组和剂量计算后灌胃给药最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。 6.观察与记录 首日给药后4小时内每小时密切观察小鼠活动状态和死亡情况，每天对各组小鼠进行称重，统计死亡数量。连续观察1-2周。 7.LD50的计算 1.改良寇氏法计算[2]

实验二 经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目得 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LＤ５０得试验设计原则 3、小鼠得经口灌胃技术 二、试剂与材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年IＣR小鼠,体重18g～22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ｍｌ)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物得选择与性别鉴定 选择健康得雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号与随机分组 选择体重在1８-22 g得小鼠,采用随机分组得方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色得苦味酸饱与液标号１ ~9,10号小鼠不标记、 3、受试化学物溶液得配制 (1)确定灌胃量:0、１mｌ/10ｇ (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突得距离。 5、毒性体征得观察与LＤ５０计算 (１)毒性体征得观察: 染毒后注意观察小鼠中毒得发生、发展过程及死亡数与死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为３0 min （2）ＬD５０得计算: ａ、实验各组剂量得确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: ｄ为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD０依次加d,取反对数,即可得出各组剂量。 b、LD5０得计算(见附件):

动物急性毒性试验-小鼠

动物急性毒性试验(Acute toxicity test,Single dose toxicity test),研究动物一次或24小时内多次给予受试物后,一定时间内所产生的毒性反应.拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1].急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段,对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义.急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值,并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息 [实验目的] 通过实验，培养学生科研设计能力，提高学生科研思维素质；学习药物急性 毒性实验的测定方法（统计方法）及观察方法。 1、计算敌百虫半数致死量。 [实验材料] 小白鼠（雌雄均可，18-22 g）、鼠笼、1ml注射器、苦味酸溶液、敌百虫等。（计算机仿真实验） [实验方法] 1. 预试验：取小鼠24只，以4只为一组分成6组，选择组间距较大的一系列剂量，各组分别灌胃给药敌百虫，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围。 2. 正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量，相邻剂量之间的比例为1：0.7。将小鼠随机分组，每组10只小白鼠灌胃给药敌百虫。 3. 观察纪录给各种反应：潜伏期，中毒现象，开始出现死亡的时间，死前的现象，各组死亡的只数等。通常药后要观察3-7天。根据各组动物的死亡率，用改良寇氏法（Korbor）或简化机率单位法算出LD50和可信限。 [实验结果] 在给药后1 小时内，随药物剂量的增加，小鼠中毒的潜伏期逐渐缩短，中毒症状随药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐加重（口吐泡沫→大小便失禁→肌肉僵直→兴奋→死亡）。给药后3 小时内各组小鼠死亡情况见下表：

(完整版)急性毒性试验

试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。 一、啮齿类动物单次给药的毒性试验 （一）试验条件 1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。 2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。 3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。 （二）试验方法： 由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。 1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。 2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。 3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应，那就用下一个挡次的剂量进行预试，如该动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物，雌雄各半。根据预试的结果，由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量；如预试结果表明，50mg/kg引起死亡，则降低一个剂量档次试验。

急性经口毒性实验

实验二 急性经口毒性实验 一、实验目的： （一）通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。 （二）通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。 二、测定方法： 本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV 的半数致死量（经口LD50=50～92mg/kg ）。 （一）实验仪器、动物及分组： 1. 健康成年小鼠(18g ～25g)，雌雄各半。动物秤、灌胃针、烧杯、编号笔、解剖剪、小磁盘、鼠笼。 2. 实验前动物要在实验环境中适应3～5 d 时间，以了解其正常活动情况和健康状 况，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物 。 3. 本次实验取体重18-25 g 的小鼠，实验时，将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，将实验动物分成6组，每组24只，雌雄各半。 （二）剂量选择： 1. 首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预期毒性中值，即中间剂量组，再上下各推1-2 个剂量组，进行预实验。 2. 各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等比级数或等差级数安排。 3. 本实验用机率单位法计算LD50，要求按等比级数排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg ，其次剂量组为125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg 五个剂量组。 （三）受试化学物配制与稀释 1. 溶剂： 水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液。 脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、植物油等配制。 2. 受试物的稀释 等容量稀释法，各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物，按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同的浓度的受试物溶液。 例如本次实验五个剂量组: 各剂量组动物给予相同单位体重体积受试物均为10ml/kg 。 等容量稀释法 D ：设计的染毒剂量， mg/kg V ：动物给药量（相同单位体重体积）均为 10ml/kg X ：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml ） 如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg ，动物按V= 10ml/kg 体重给药，配制的受试物浓度为X=51.2mg/10ml 依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为 第一组：51.2mg/10ml 第二组： 64mg/10ml 第三组： 80mg/10ml 第四组： 100mg/10ml 第五组： 125mg/10ml 另设一个阴性对照组 各剂量组小鼠灌胃容量计算: V D X

实验二 经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 1、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物： （1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g （2）样品来源：首都医科大学实验动物部 2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。 3、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。） 肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 （1）确定灌胃量：0.1ml/10g （2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积 （3）药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 （1）毒性体征的观察：

染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min （2） LD50的计算： a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为： d为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d，取反对数，即可得出各组剂量。 b、LD50的计算（见附件）： C、求半数致死量的95%可信区间 4、实验过程 1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A组和B组)，分别在不同实验室。每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。 集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。 各小组活动： 每小组1人（共4人），进行动物标记。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行体重记录。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行灌胃。（1-10号） 每小组1人（共4人），根据体重吸取受试物（0.1ml/10g）

急性、慢性和亚慢性毒性实验

急性毒性试验 (一)经典的急性致死性毒性试验 通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50) 1、实验动物 常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物 毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备， 也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。 2、染毒剂量设计 首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解 度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质 近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的 LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按 几何级数)染毒，找出找出10%~90%(或0% ~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范 围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要 求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0) / (n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n 为设计的剂量组数。 有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时， 一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。 3、观察 染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。 观察内容包括： (1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。 (2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。 (3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、 自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、惊厥、腹 泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或竖毛。 (4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进 行组织病理学检查。 4、LD50计算 (1)霍恩氏法 (2)简化寇氏法 M = X - i(工p - 0.5) 式中：m —log LD50, X —最高剂量组剂量对数值， p —死亡率(用小数表示)， 工p—死亡率总和， i —相邻两组剂量对数之差。

小鼠急性毒性实验及文献资料讲解学习

小鼠急性毒性实验及 文献资料

苏贝止咳颗粒小鼠急性毒性实验 【摘要】 苏贝止咳颗粒组方来自民间验方，该方在临床使用多年，疗效确切，安全可靠。具有散寒宣肺，祛痰、止咳、平喘之功，用于急性气管、支气管炎（风寒袭肺证）所致的咳嗽、咳痰稀薄、咽痒、气急等症状。根据该方的功能主治、各味药材的理化性质和验方汤剂的临床应用实践，我们对其进行了止咳、祛痰、抗炎、解热、抗病毒、抗菌等主要药效学实验和急性毒性实验研究。 苏贝止咳颗粒经国家食品药品监督管理总局药品审评中心技术审评，发补充资料通知（药审补字[2014]第1030号），其中药理毒理方面要求为：本品进行的急毒试验未提供剖检结果，建议补充。如果没有观察该方面的内容，建议补充规范的急性毒性试验。针对该问题，该项目研究在前期的申报材料中的确没有详述相关内容，因此按照中心老师的发文内容和相关规定对该品种的急性毒性实验重新进行规范性实验，对实验所有动物进行大体解剖、并对相关重要脏器进行病理形态学观察。 实验结果显示，苏贝止咳浸膏小鼠口服急性毒性实验测不出LD50，从而进行小鼠ig最大给药量实验，单次最大给药剂量164g生药/kg，单次最大给药容积为0.8mL/20g，24h内给药3次，连续观察13天，所观察的各项指标均正常，未见动物死亡，实验观察期结束时对所有动物大体解剖和相关重要脏器进行病理形态学观察，未见与药物相关性病变。 因此苏贝止咳浸膏小鼠一日口服最大给药剂量为492g生药/kg，相当于临床拟用量的424.1倍。表明苏贝止咳浸膏急性毒性较低，提示苏贝止咳浸膏在临床上急性用药具有一定的安全性。 【实验目的】观察苏贝止咳浸膏的小鼠急性毒性。 【供试品】 1.名称：苏贝止咳浸膏（本实验采用苏贝止咳颗粒为浸膏，实验代号：SB-补1），含量规格及配置：4.1g生药/每毫升浸膏，人用临床拟用剂量81g生药 /d。采用小鼠灌胃给药，以最大给药剂量164g生药/kg，最大给药容积为