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碱性磷酸酶米氏常数的测定

碱性磷酸酶米氏常数的测定
碱性磷酸酶米氏常数的测定

碱性磷酸酶米氏常数的测定

[目的与要求]

通过碱性磷酸酶米氏常数的测定,了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性,加深对酶促反应动力学的理解。

[原理]

在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度,反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时,反应速度会达到一个极限值,即最大反应速度(V max),如图37所示。

底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。

V = V max[S]/(K m+[S])

上式中V max为最大反应速度,[S]为底物浓度,K m为米氏常数(Michaelis constant),而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时,K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol/L)表示。

K m是酶的最重要的特征性常数,测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法,大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。

酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定,K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程,推导出如下方程式,即:

1/V = (K m +[S])/ V max[S]或1/V = K m/ V max·(1/[S])+1/ V max

此式为直线方程,以不同的底物浓度1/[S]为横坐标,以1/V为纵坐标,并将各点连成

一直线,向纵轴方向延长,此线与横轴相交的负截距为-1/ K m,由此可以正确求得该酶的K m 值,如图38所示。

图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法

本实验以碱性磷酸酶为例,测定不同底物浓度的酶活性,再根据Lineweaver-Burk法作图,计算其K m值。

可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多,底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物,由碱性磷酸酶催化水解,生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化,生成红色的醌衍生物,颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性,也可以从标准曲线上查知酚的含量,进而算出酶活性的大小。反应式如下:

[操作步骤]

1.底物浓度对酶促反应速度的影响

(1)取6支试管,作好标记。按下表操作。

试剂(mL)管号

1 2 3 4 5 6

0.04mol/L 基质液 0.10 0.20 0.30 0.40 0.80 0.0

pH10,0.1mol/L碳酸盐缓冲液 0.70 0.70 0.70 0.70 0.70 0.70

蒸馏水 1.10 1.00 0.90 0.80 0.40 1.20

37℃水浴中保温5分钟

血清 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10

最终基质浓度 2.00 4.00 6.00 8.00 16.00 0.00

(2)加入血清后,各管混匀并且立即记录时间,将上述各管置37℃水浴中准确保温15 分钟。

(3)保温结束,立即加碱性溶液1.1mL终止反应。

(4)各管分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.OmL,0.5%铁氰化钾2.0mL,充分混匀,放置10分钟,以6号空白管作对照,于510nm波长处比色测定,根据酚标准曲线计算酶活性。

(5)以各管基质浓度的倒数1/[S]为横坐标,以各管吸光度的倒数或者以酶活性单位的倒数1/V作纵坐标,作图求出K m值。

2. 酚标准曲线的绘制

(1)取洁净干燥试管6支,按下表依次加入试剂。

试剂(mL) 1 2 3 4 5 6

0.1mg/mL 酚标准溶液 0.0 0.05 0.10 0.20 0.30 0.40

蒸馏水 2.0 1.95 1.90 1.80 1.70 1.60

37℃水浴保温5min

碱性溶液 1.10 1.10 1.10 1.10 1.10 1.10

0.3% 4-氨基安替比林 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

0.5% 铁氰化钾 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0

(2)混匀后室温放置15分钟,于510nm波长处比色。

(3)以酚含量(μg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制酚标准曲线。

[结果与计算]

在37℃保温15分钟,每生成1mg酚为一个酶活性单位,以标准曲线查出释放酚量(μg)即可算出酶活性。

100mL血清中酶活性 = 释放的酚量×(1/0.1)×100×(1/1000)

[注意事项]

1.血清取量要准确

2.标准曲线必须是过原点的一条直线

[试剂]

1.0.04mol/L 基质液称取磷酸苯二钠10.16g或无水磷酸苯二钠8.72g,用煮沸冷却的蒸馏水溶解,并定容至1000mL,加入4mL氯仿防腐,置棕色瓶中,冰箱内保存可用一周。

2.0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH10(37℃) 称取无水碳酸钠6.36g及碳酸氢钠3.36g,溶解于蒸馏水中,定容至1000mL。

3.碱性溶液取0.5mol/L NaOH和0.5mol/L NaHC03各20mL,混合后加蒸馏水到100mL。

4.0.5%铁氰化钾取铁氰化钾5g和硼酸15g各溶于400mL蒸馏水中,溶解后二液混合,再加蒸馏水至1000mL,置棕色瓶中,暗处保存。

5.0.3% 4-氨基安替比林 4-氨基安替比林0.3g及NaHC034.2g用蒸馏水溶解,并稀释至100mL,置棕色瓶中,4℃保存。

6.酚标准液(0.1mg/mL)

a.称取结晶酚1.50g,溶于0.1mol/L HCl,定容至1000mL为贮备液。

b标定:取25mL上述贮备液,加0.1mol/L NaOH 55mL,加热至65℃。再加入0.1mol/L 碘液25.0mL,盖好放置30分钟,加浓HCl 5mL,再以0.1%淀粉作指示剂,用0.1mol/L 硫代硫酸钠滴定,反应如下:

3I2 + C6H5OH C6H2I3OH + 3HI

I2 +2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6

根据反应,3分子碘(Mw:254)与一分子酚(Mw:94)起作用,因此每毫升0.1mol/L碘液(含碘12.7mg)相当于酚的毫克数为 12.7×94/(3×254)=1.567

25mL碘液中被硫代硫酸钠滴定者为xmL,则25mL酚溶液中所含酚量为:1.567mg×(25-x)。

c. 应用时,按标定结果用蒸馏水稀释至0.1mg/mL作为标准液。

[器材]

1.37℃水浴 2.可见光分光光度计

骨源性碱性磷酸酶

骨源性碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶即为NBAP. 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一,它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来,当骨头中钙盐沉淀不足时,该酶分泌增多,骨中钙盐充足时就分泌减少,所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性,籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下: 正常水平≤200u/L 预防水平 250u/L 医疗水平 300u/L 你好!骨源性碱性磷酸酶是用于检测佝偻病的一个指标,当缺少维生素D和钙时,骨头钙化不好时,它会升高,但一般明显升高才有诊断意义。你孩子的结果只比参考值的上限(200)高10,可以是实验误差造成,也可以是佝偻病的早期造成,是不必过度担心,补充维生素D和钙剂,过些日子再复查一次,很可能就正常了。 追问 昨天医生给我宝宝开了龙牡浸在壮骨颗粒和复方三维右酸钙糖浆,可是我的宝宝复方三维右酸钙糖浆吃不下,有没有什么别的药让他可以吃的 回答 你好!如果我没有记错的话,龙牡壮骨颗粒中已含有维生素D和钙,你的孩子缺维生素D和钙并不重,已经够了,两种都吃恐怕不是很必要。 补维生素d 最天然的方法是,多晒太阳,晒太阳可帮助身体合成维生素d ,可以说是没副作用的补VD方法 另外,就是吃含补维生素d 多的食物做成的粥或汤, 而通过食物摄取维生素D是不会引起中毒的。含量较多的食物有大马哈鱼、红鳟鱼、鳕鱼肝油、比目鱼肝油、奶油、鸡蛋、鸡鸭肝等动物肝脏以及牛奶等,或是买回维生素d的保健品进行补VD

碱性磷酸酶米氏常数的测定

碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定,了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性,加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度,反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时,反应速度会达到一个极限值,即最大反应速度(V max),如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度,[S]为底物浓度,K m为米氏常数(Michaelis constant),而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时,K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol/L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数,测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法,大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定,K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程,推导出如下方程式,即: 1/V = (K m +[S])/ V max[S]或1/V = K m/ V max·(1/[S])+1/ V max 此式为直线方程,以不同的底物浓度1/[S]为横坐标,以1/V为纵坐标,并将各点连成 一直线,向纵轴方向延长,此线与横轴相交的负截距为-1/ K m,由此可以正确求得该酶的K m 值,如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例,测定不同底物浓度的酶活性,再根据Lineweaver-Burk法作图,计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多,底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物,由碱性磷酸酶催化水解,生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化,生成红色的醌衍生物,颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性,也可以从标准曲线上查知酚的含量,进而算出酶活性的大小。反应式如下:

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测,记录患儿两种检测结果,给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后,骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%,显著高于血钙检测准确率73.75%,对比结果具有统计学意义(P<0.05)。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据,但血钙误诊率较高,而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高,临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断,从而提高患儿诊断正确率及治疗效果,保障其预后及生活质量。 标签:骨源性碱性磷酸酶;血钙;对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病,发病原因主要为机体中钙营养严重丢失,目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日~12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究,从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果,为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据,现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例,年龄1~6岁,平均年龄( 2.98±1.02)岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织(WHO)制定的佝偻病诊断标准;②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病;③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病;④体温正常,无骨折、强直性骨关节炎等疾病;⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测,记录患儿两种检测结果,给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本,骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法,由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒,以检测结果不大于200U/L为阴性,反之为阳性;血钙采用偶氮砷法检测,由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂,以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性,反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析,计量资料采用t检验(由x±s表示),计数资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

过氧化氢酶米氏常数的测定

过氧化氢酶米氏常数的测定 傅璐121140012 一、实验目的 1. 了解米氏常数的测定方法 2. 学习提取生物组织中的酶 二、实验原理 1.米氏反应动力学 (Michaelis-Menten Equation): 米氏方程 2.米氏常数的意义: ①反映酶的种类:Km是一种酶的特征常数,只与酶的种类有关,与酶浓度、 底物浓度无关。 ②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。其数值大 小反映了酶与底物之间的亲和力:Km值越大,亲和力越弱,反之Km值越小,亲和能力越强。 ③Km可用来判断酶(多功能酶)的最适底物:Km值最小的酶促反应对应底物 就是该酶的最适底物。 3.米氏常数的求法: 该方法的缺点是难以确定最大 反应速度Vmax。

该作图法应用最广。但在低浓度是v值误差较大,在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。因此在设计底物浓度时,最好将1/[S]配成等差数列,这样可使点距较为平均,再配以最小二乘回归法,就可以得到较为准确的结果。 此法优点是横轴上点分布均匀,缺点是1/v会放大误差,同时对底物浓度的选择有要求。[S]<>Km时直线将在原点附近与轴相交。 4.氧化酶:生物体内重要的三种氧化酶类,其作用均是消除体内自由基: ①POD:过氧化物酶 ②SOD:超氧化物歧化酶 ③CAT:;过氧化氢酶 5.过氧化氢酶的作用: 植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧,可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子,并且有非常高的速度常数,破坏性极强,可使细胞膜遭受损害,加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶(catalase,CAT)可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基,保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活,因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一,其活性高低与植物的抗逆性密切相关。 6.过氧化氢酶活力的测定方法:

碱性磷酸酶米氏常数测定

碱性磷酸酶米氏常数测定 P60 【实验原理】 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时,酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时,酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度,反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时,反应速度会达到一个极限值,即最大反应速度(V max),如图所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度,[S]为底物浓度,K m为米氏常数(Michaelis constant),而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时,K m=[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol/L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数,测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法,大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定,K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程,推导出如下方程式,即:1/V = (K m +[S])/ V max[S]或1/V = K m/ V max·(1/[S])+1/ V max 此式为直线方程,以不同的底物浓度1/[S]为横坐标,以1/V为纵坐标,并将各点连成一直线,向纵轴方向延长,此线与横轴相交的负截距为-1/ K m,由此可以正确求得该酶的K m值,如图所示。

本实验以碱性磷酸酶为例,测定不同底物浓度的酶活性,再根据Lineweaver-Burk法作图,计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多,底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物,由碱性磷酸酶催化水解,生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化,生成红色的醌衍生物,颜色深浅和酚的含量成正比。故可以从标准曲线上查知酚的含量,从而计算化学反应速度。反应式如下: 【实验方法】 一.底物浓度对酶促反应速度的影响 (1) 取6支试管,作好标记,按下表操作。 管号123456 0.04mol/L 基质液/mL0.10 0.20 0.30 0.40 0.80 0.0 0.1mol/L碳酸盐缓冲液/mL0.70 0.70 0.70 0.70 0.70 0.70 蒸馏水/mL 1.10 1.00 0.90 0.80 0.40 1.20 37℃水浴5min 血清/mL0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 最终基质浓度/mmol?L-1 2.00 4.00 6.00 8.00 16.00 0.00 (2) 加入血清后,各管混匀并且立即记录时间,将上述各管置37℃水浴中准确保温15 分钟。 (3) 保温结束,立即加碱性溶液1.1mL终止反应。 (4) 各管分别加入0.3%4-氨基安替比林1.0mL,0.5%铁氰化钾2.0mL,充分混匀,放置10分钟,以6号空白管作对照,于510nm波长处比色测定,根据酚标准曲线计算酚含量。 (5) 以各管基质浓度的倒数1/[S]为横坐标,以各管反应速度的倒数1/V(μmol.L-1.min-1为单位)作纵坐标,作图求出K m值。 二.酚标准曲线的绘制 (1) 取洁净干燥试管6支,按下表依次加入试剂。

骨型碱性磷酸酶

骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源:医学网发表时间:2007-07-04 09:51:00 关键字:磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP,EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶,包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点,后者基因定位于染色体的1q36-34之间,其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶,为糖蛋白,分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化,再通过高尔基体转运到细胞膜表面,通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下,骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯,为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸;同时,水解焦磷酸盐,解除其对骨盐形成的抑制作用,有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测

人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分,而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难,因为这两种同工酶来源于同一基因,其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似,且相互间有交叉免疫反应,目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类:电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为:醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体,用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶,避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90~4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物,该复合物在电场中不泳动或泳动很慢,从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便,重复性好,骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2%和5.2%。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关,其最适浓度随电泳条件而异。因此,采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。

米氏常数的测定

底物浓度对酶促反应速度的影响 ——米氏常数的测定 一.目的要求 1.1了解底物浓度对酶促反应的影响。 1.2掌握测定米氏常数K m 的原理和方法。 二.实验原理 酶促反应速度与底物浓度的关系可用米氏方程来表示: 式中: v ——反应初速度(微摩尔浓度变化/min ); V ——最大反应速度(微摩尔浓度变化/min ); [s]——底物浓度(mol/L ); K m ——米氏常数(mol/L )。 这个方程表明当已知K m 及V 时,酶促反应速度与底物浓度之间的定量关系。K m 值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度,是酶的特征常数之一。不同的酶,K m 值不同,同一种酶与不同底物反应K m 值也不同,K m 值可以近似地反应酶与底物的亲和力大小:K m 值越大,表明亲和力小;K m 值小,表明亲和力大。则测K m 值是酶学研究的一个重要方法。大多数纯酶的K m 值在0.01~100mmol/L 。 Linewaeaver-Burk 作图法(双倒数作图法)是用实验方法测K m 值的最常用的简便方法: 实验时可选择不同的[s],测定对应的v ,以 对 作图,得到一个斜率为V K m 的直线,其截距 ][1s 则为m K 1,由此可求出K m 的值(截距的负倒数)。 本实验以胰蛋白酶消化酪蛋白为例,采用Linewaeaver-Burk 双倒数作图法测定双倒数作图法。胰蛋白酶催化蛋白质中碱性氨基酸(L-精氨酸和L-赖氨酸)的羧基所形成的肽键水解。水解时有自由氨基生成,可用甲醛滴定法判断自由氨基增加的数量而跟踪反应,求得初速度。 ] [][s K s V v m += V s V K v m 1 ][1.1+ =v 1][1s

过氧化氢酶米氏常数的测定

过氧化氢酶米氏常数的测定一、实验目的 了解并掌握米氏常数的意义和测定方法 二、实验原理 H 2O 2 被过氧化氢酶分解出H 2 O和O 2 ,未分解的H 2 O 2 用KMnO 4 在酸性环境中滴 定,根据反应前后H 2O 2 的浓度差可求出反应速度。 2H 2O 2 = 2H 2 O + O 2 2KMnO 4 + 5H 2 O 2 + 3H 2 SO 4 = 2MnSO 4 + K 2 SO 4 + 5O 2 ↑ + 8H 2 O 本实验由马铃薯提供过氧化氢酶。在保持恒定的条件下,用相同浓度的过 氧化氢酶催化不同浓度的H 2O 2 分解。在一定限度内,酶促反应速度与H 2 O 2 浓度 成正比。用双倒数作图法(即以1/v对1/[S]作图)可求得过氧化氢酶的Km值。三、实验器材 锥形瓶(6个) 吸管、酸式滴定管 四、实验试剂 1、0.02mol/L 磷酸缓冲液(pH=7) 2、0.004 mol/L KMnO 4 (需标定) 3、0.05 mol/L H 2O 2 (需标定) 4、25% H 2 SO 4 五、实验操作 1、酶液的提取:称取马铃薯(去皮)5克,加0.02mol/L 磷酸缓冲液10mL,再加少量海砂,研磨成匀浆,离心(3000r/ min,10min),上清液即为酶液。 2、滴定:取干燥锥形瓶6只,按下表顺序加入试剂:

先加好0.05mol/L H 2O 2 及蒸馏水,加酶液后立即混合,依次记录各瓶的起 始反应时间。各瓶时间达5min时立即加2.0mL 25% H 2SO 4 终止反应,充分混 匀。用0.004 mol/L KMnO 4滴定各瓶中剩余的H 2 O 2 至微红色,记录消耗的KMnO 4 体积。 六、实验计算 分别求出1─5瓶的底物浓度[S]和相应的反应速度v。 C 1V 1 10 [S] = 5 ∕2C2V2 C 1V 1 – v = 式中 [S]:为底物物质的量浓度(mol/L) C 1:为H 2 O 2 物质的的量浓度(mol/L)

血清骨型碱性磷酸酶质量的测定

如对您有帮助,可购买打赏,谢谢 血清骨型碱性磷酸酶质量的测定 导语:当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定,很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个 当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定,很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个到底是测量什么的,事实上呢,这个血清骨型碱性磷酸酶质量啊是看看小孩子有没有佝偻病的,下面来具体的讲一讲吧。 你好,碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。单独升高一点并没有关系,要结合其他的检察才能确诊。 碱性磷酸酶升高主要见于: 1.肝胆疾病:阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等。 2.由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等血清碱性磷酸酶会升高。 3.白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高。 如果有条件可以做一下碱性磷酸酶同功酶,或者要求医院用热稳定试验鉴别是来自肝脏还是来自骨骼. 维生素D缺乏病(vitamin D deficiency)是由于日晒少(皮肤经紫外线照射后,可使维生素D前体转变为有效的维生素D)、摄入不足(奶、蛋、肝、鱼等食物)、吸收障碍(小肠疾病)及需要量增加(小儿、孕妇、乳母)等因素,使体内维生素D不足而引起的全身性钙、磷代谢失常和骨骼改变。同时影响神经、肌肉、造血、免疫等组织器官的功能,严重影响儿童的生长发育。 现在的食物什么的都有那么多的毒素农药什么的,小孩子们因为缺少了应该的要得到的营养元素很容易就会得上佝偻病的,很多家长们 预防疾病常识分享,对您有帮助可购买打赏

碱性磷酸酶测定

碱性磷酸酶测定 一、试剂配制 1、甲苯 2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液:称取20g纯氯化铵,溶于 少量水(我配200ml,用一百多毫升水溶40g氯化铵), 然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml,用pH试纸测 pH,pH为10即可,不用刻意调pH。(氨水很臭,需要带 口罩在通风橱配) 3、8%铁氰化钾溶液(只能用一周,放冰箱保存):取8g铁氰 化钾,用水定容至100ml。 4、2%4-氨基安替比林(只能用一周,放冰箱保存):取2g4- 氨基安替比林,用水定容至100ml。 5、0.5%磷酸苯二钠溶液(用pH9.4硼酸缓冲液配) (1)先配制pH9.4硼酸盐缓冲液:称取4.768g硼砂(十 水合四硼酸钠)和0.44g纯氢氧化钠,用蒸馏水定容至 1000ml。(硼砂需要用电炉加热配制,硼砂用称量纸称量, 氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH,pH试纸测为9) (2)称取5.05g磷酸苯二钠,用pH9.4硼酸缓冲液定容 至1000ml。 6、酚标准溶液: 酚溶液:称取1g苯酚用水溶至1L,保存于暗色瓶中。(苯酚还是需要水浴加热,详细配法看脲酶测定,但由于1g很难准确称量,

并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚,但测量后不影响标线的准确程度,R值为三个9) 酚工作液:取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL) 二、测定过程 1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶(每个样需要3个 重复,前两个重复和第三个重复分开放,第三个重复为 无基质重复,每天做两个无土样重复,此重复加甲苯、 磷酸苯二钠溶液),加5滴甲苯(用滴管加5滴),盖盖 盖子后用震荡机低速震荡15min(我选择160的速度), 然后给第三个重复加入20ml蒸馏水,给前两个重复加入 20ml磷酸苯二钠,盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒 温箱培养2小时。 2、培养结束后过滤,过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶(用 5ml枪加,由于过滤液体没那么多,每加一个样用两遍蒸 馏水润洗枪),加水至大概20ml,再加0.25ml氯化铵-氢 氧化铵缓冲液,0.5ml4-氨基安替比林液,0.5ml铁氰化钾 溶液(用1ml枪加),每加一种都要充分摇匀。立即显色, 立即定容。 3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液,移至50ml容 量瓶,加水加水至大概20ml,再加0.25ml氯化铵-氢氧 化铵缓冲液,0.5ml4-氨基安替比林液,0.5ml铁氰化钾溶 液。(和第二条同步)

【米氏常数】 米氏常数测定实验报告.docx

【米氏常数】米氏常数测定实验报告 此人姓米,单名兰,却没有米兰那种碧绿盎然,幽香沁人的素雅。她的身高同十几年前参军时,相差无几—1.55米。3号军装穿在身上,仍旧如长袍加身,宽大得令人忍俊不禁。第一个对米兰发表看法的,是化验科的金云。金云姑娘,确如行于天穹的云霞,轻盈高挑的身材,朗若明月的脸庞,使她这只“鹤”,高立于我们这所医院的所有兵姑娘之中。姑娘对自己的美都是敏感的,“大兵”也不例外。更何况金云的仰慕者不计其数。不知何故,却一概吃了闭门羹,落得个没趣。这个金云啊,美丽使她的嘴变得尖酸起来。于是乎,米兰也逃不出她那双带着讥讽的笑盈盈的大眼睛。从医校毕业分到化验科的第2周,金云在医学论文宣读会上,见到了比讲台高不了多少的米兰。“米兰?嘻嘻!”她一眨黑白分明的眸子,咬着身边另一位护士的耳朵,“米氏常数。嗯?”“米氏常数?”“酶的底物浓度取决于米氏常数。它在同等条件下是恒定的。你瞧,她多恒定,永远只比讲台高半尺。咯咯!”周围的姑娘们八成听见了。否则,各种无法揣测的眼神,为什么都聚向站在讲台后面,涨红了脸的米兰?金云矜持地向周围扫了一眼,她为自己的想象力而暗暗自得。这位以全优成绩毕业的姑娘,连头发梢都是高傲的。“……是个沉痛的教训。”米兰颤动着嘴角,向幻灯投影机插进一张照片。金云低呼了一声,礼堂里那些抄录笔记的大夫们,也交头接耳起来—幕布上一张奇丑无比的脸。严重烧伤使患者分不清男女,辨不全五官。变形的脸上爬满了蚯蚓似的斑痕。又是一张照片,仍旧是一张奇丑的脸。“手术没有获得预期效果。主要教训是……”金云无心去关心那位没有恢复容貌的患者,也不再留神米兰那些专科术语了。她痴呆呆地盯住米兰—“真是太一般啦!”五官似乎是符合解剖位置,但安在米兰宽大的脸庞上,总那么别扭。又黑又硬的头发从无沿帽下“炸”开来,象一道狭窄的帽檐。金云下意识地拂拂自己额前那蓬微微弯曲、浓密地偏向一侧的刘海。她的天生的卷发,足以使她在那些煞费苦心,用塑料发筒修饰发型的姑娘面前,不以为然地眯上眼睛。“是个整型外科大夫,她怎么不替自己整整?起码割个双眼皮吧?”金云注意地瞧了一眼米兰有点搭下的眼皮,“谢天谢地,我可是永远不会去找她的。”她庆幸地一笑,悄悄从口袋里掏出一本装潢精美的外语单词本,不再注意米兰说什么了。“小金,到我宿舍坐会儿?”金云带着几分惊诧,小心翼翼地跨进米兰的屋子。那是个光怪陆离的迷宫。我的妈呀!肖像陈列室么?当今中国影坛上红极一时的影星们,几乎都被米兰请到这儿了。还有那些金发碧眼的欧美人,顶着一头螺蛳似的卷发的黑人,眉间挂着钻石披着头巾的阿拉伯人。神态各异,维妙维肖。金云黑亮的眉毛堆了起来,小嘴撅得高高:“她不知道美对她是多么大的揶揄?”她开始可怜米兰,甚至有些懊悔“米氏常数”的绰号,起得太损了。米兰知道么?这几天,她似乎很注意金云,那双小眼睛,一遇到金云便熠熠发光。似乎要吞食金云脸上那片动人的红晕。“喜欢么?”“嗯。”“我能为你画一幅肖像么?”“啊?!”那些水粉,油画,炭条的人物肖像,真的出自米兰的手么?金云注意到屋角的油画箱和写生板,还有一大瓶松节油。难怪一进屋便嗅到了一股姑娘屋里少有的怪味,原来是它!“你不相信我的艺术造诣?”米兰不等金云回话,拖过一张靠椅笑嘻嘻地说,“坐啊!”自己朝后退几步,眯起细小的眼睛,“我不是外光派。”她迅速地铺开“家伙”,往小马扎上一坐,“你脸上的色彩很丰富,线条很好。”太诱惑人了!一幅油画肖像!金云有3册厚厚的粘胶影集。有些姑娘翻起她的像册,总是喷嘴,露出羡慕又妒嫉的神色。尽管都是清一色的国防绿军装,清一色的“2块5”,可穿在金云身上,却使她越发象雨后新竹般秀丽挺拔。但金云却腻了。横竖就那样,没什么艺术价值。她端坐在椅子上,乜斜着米兰:“这个怪人。试试吧。”她想:只要米兰的笔稍有不忠实的描写,她立刻逃离这个肖像陈列馆。“你不要紧张。拿出平时最轻松的姿态,比方说,去见你的妈妈、爱人、朋友。你可以随意走动,和我交谈。”米兰滔滔不绝地说着。金云发觉,她射向自己的眼神那么怪。似乎金云不是一位漂亮的姑娘,

骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用

检验科开展骨型碱性磷酸酶(BALP)测定骨型碱性磷酸酶(BALP)是成骨细胞分泌的一种糖蛋白,在成骨过程中水解磷酸酯,为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸;同时,水解焦磷酸盐,解除其对骨盐形成的抑制作用,有利于成骨过程。 临床应用: 1.用于亚临床佝偻病、骨代谢障碍及高转化骨质疏松的诊断。 2.指导补钙或维生素D治疗:易患低钙人群或疾病主要包括儿童、孕产妇、老年人、佝偻病、骨质疏松、肝肾甲状腺疾病等,当人体缺钙或维生素D时,血钙下降,甲状旁腺激素分泌,促进肾脏合成大量1,25(OH)2维生素D3生成,后者可使静止的成骨细胞转化成活跃的成骨细胞,合成大量的BALP释放入血,BALP活性与活性成骨细胞的数量成正比,是反映成骨细胞活性和数量的专一标志物。补钙或维生素D治疗后4周后复查BALP,发现BALP活性无变化应更换钙剂和避免长期服用导致的维生素D中毒。 3.BALP活性的检测以及动态观察可为骨代谢异常疾病早诊、疗效监测、病情预后等提供有效依据:骨密度的改变太慢不能作为临床监测骨代谢异常疾病(骨质疏松、骨软化症、佝偻病、Paget病、早期甲亢、慢性肾衰、肾移植病人等)治疗效果的早期反应。BALP参与成骨过程并且其活性在血清中稳定没有昼夜变化,因此可作为观察骨形成变化率,为临床提供有效治疗的监测手段。 4.生长激素缺乏的儿童,使用生长激素后生长速率加速,BALP活性增加,并且与生长激素治疗所诱导的高SD分数正相关,能有效地监测对生长激素治疗的反应性。 5.慢性肾功能衰竭病人在接受肾移植后,常发生持续性的甲状旁腺机能亢进,BALP活力与甲状旁腺激素呈明显正相关,与骨皮质的密度呈负相关。 标本采集:抽静脉血2ml置红色盖非抗凝管送检,或安排患者来检验科取手指血。 项目信息:血清骨型碱性磷酸酶(BALP)编码250305013-1,参考值<200U/L,收费50元/次。 检验科2008.4.10

骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项

骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项 血浆中骨源性碱性磷酸酶(BAP)活性测定,首先是血球和血浆的分离,这一过程是基于全血样品经血浆分离器将血球截留在分离器的血球容纳膜上,而血浆渗滤穿过转运膜到达反应膜的特定区域,血浆分离完成后,将血浆分离器从反应装置上取下。 第二步是BAP与血浆中其它组分,包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同,分别选择相应的亲和素,我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白,预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。当血浆经过此区域渗滤时,BAP即被结合,而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉,从而完成特异性亲和反应。 第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。反应膜固定在反应滑板上,待亲和反应完成后,将反应滑板推动,使反应膜到达反应孔正中,将显色液滴加到反应孔内的反应膜上,在37℃反应一定时间,酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比,对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。作为干化学分析技术,结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。其中,标准色板的色阶印刷在说明书上,不同批次的产品使用同一标准色板,如何使每批次的产品使用同一标准色板,如何使每批产品酶促显色的深浅都能与标准色板一致呢?这是通过每批产品出厂前的校正实现的。校正是用已知NBAP(活性为200U/L,250U/L,300U/L)和ABAP(活性为150U/L,200U/L,250U/L)的血清(17μl)进行的,在37℃进行反应,使显色强度与标准色板上相应色强相一致,确定所需的反应时间为每批产品说明书上填写的反应时间(多少分钟)。可见,在影响酶促反应的诸多因素(底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度、PH值、反应温度、激活剂等辅助因子)一定的前提下,样品中BAP催化反应产物的多少(显色强度)只决定于反应时间的长短。 从上述校正过程可见,欲使测定结果可靠而且重复性好,需要严格掌握的操作环节,一是反应温度应控制在37℃±0.1℃范围内;二是反应时间严格按照说明书上给定的时间;三是如果不用全血分析,直接用血清作为样品分析时,应定量加人17μl 。 另外,对照说明书上的每步操作,BAP活性测定的质量控制还应包括: 第1步:在反应装置的加样孔中,均匀滴加两滴洗涤液。待其渗入,目的在于加随后的全血样品滴加后渗滤顺利,血球和血浆分离较快,其渗入一般较快,如渗入缓慢,可用手轻压一下血浆分离器,即可迅速渗入。如漏加洗涤液,则有可能使样品血浆分离缓慢且不均匀,将影响下一步亲和反应及显色反应,最后人为地使显色斑点均一性差。 第2步:试剂盒要求使用新鲜全血,不能使用抗凝血。因某些抗凝剂会抑制BAP的活性。采血时试剂盒是配套的30μl定量采血管,手持有黄线的一端,用另一端吸取血液标本恰好至黑色刻度线,然后用吸球迅速将其均匀加入加样孔中,注意勿产生气泡。如用血清分析,则需加17/J 1。加样后,血液一般在30秒内可全部渗入。如渗透较慢,可用手轻压一下分离器。 第3步:待血液全部渗入后,再逐滴加入两滴洗涤液。由于此时膜表面已截留了血球。所以此时洗涤液渗滤较慢,一般约需1—2分钟。如个别又出现渗入较慢的,也可用手轻压分离器,即可加快渗入速度。 第4步:待洗涤液渗入后,此时样品中血浆已完全转运到亲和膜上,将血浆分离器从反应装置上取下,即可见反应滑板上的圆形反应膜。注意膜上不能附着有其它膜片,如有可能为分离器上的过渡膜松动脱落而成,此时应用镊子或分离器一角将其挑去。 第5步:为了除去血浆中其它物质的干扰,在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物,在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型),此时液体渗入较快。 第6步;推动反应滑板,使反应膜定位在反应孔的正中,此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行,以避免亲和反应对显色反应的干扰,提高检测灵敏度和特异性。

骨碱性磷酸酶参考值

骨碱性磷酸酶参考值 骨碱性磷酸酶全称叫:骨源性碱性磷酸酶即为NBAP.骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一,它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来,当骨头中钙盐沉淀不足时,该酶分泌增多,骨中钙盐充足时就分泌减少,所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性,籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他病因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下: 正常水平≤200u/L 预防水平250u/L 医疗水平300u/L 骨碱性磷酸酶检测意义

佝偻病的发病过程是一个慢性过程,初期症状表现没有特异性,直至出现明显的骨骼改变时在进行治疗。将错过治疗的最佳时期.对儿童生长发育造成不利影响,因此.在临床工作中,需要有一个指标来衡量治疗水平。防止治疗不足或过量。单纯依靠症状和体征容易造成误诊和漏诊。以往的血钙、磷、全血碱性磷酸酶及X线检测灵敏度低,特异性差。不应用于早期诊断。 25(OH)D3是国际公认的反映体内vitD营养状况可靠的指标.是作为早期诊断的指标。只有血清25-(OH)D水平可反映人体维生素D营养状况。但该实验操作步骤繁琐,不适合在基层医疗保健机构中开展。而小儿骨源性碱性磷酸酶的检测,具有简便、快速、特异、敏感等优点对早期发现佝偻病提供了参考依据。 需要注意的是,任何检查项目都不是孤立来看待的。需要与症状表现、其他检查化验综合分析才有意义。婴幼儿体内骨碱性磷酸酶水平都有些偏高,此指标反映新生组织增长状况。婴幼儿本身就处于生长旺盛阶段,偏高的骨碱性磷酸酶不能作为佝偻病的诊断依据,而应化验血中1,25-羟维生素D3的水平,并以此考虑补充维生素D3。母乳喂养期间婴儿需摄入每天400IU的维生素D,不需额外补钙。 更多精彩内容请上妈淘网查看:https://www.wendangku.net/doc/2915053014.html,

分光光度法测定蔗糖酶的米氏常数

实验报告解析 (目的要求、基本原理、仪器试剂和实验步骤四个部分可参阅实验预习或者实验内容部分,数据处理部分参见数据处理) 一、实验重点 1、掌握本实验的基本原理。 2、掌握实验中用到仪器的操作方法,并能熟练使用。 3、了解实验中的注意事项并能解释为什么。 二、实验难点 1、葡萄糖标准曲线的绘制 2、反应实验条件的控制 三、注意事项 1、分光光度计使用注意事项: (1)使用前,使用者应该首先了解本仪器的结构和原理,以及各个旋钮之功能。 (2)仪器接地要良好,否则显示数字不稳定。

(3)如果大幅度改变测试波长时,在调整“00.0”和“100”后稍等片刻(因光能量变化急剧,光电管受光后响应缓慢,需一段光响应平衡时间),当稳定后,重新调整“00.0”和“100”即可工作。 (4)仪器左侧下角有一只干燥剂筒,应保持其干燥,发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。 (5)当仪器停止工作时,关掉电源,电源开关需同时切断,并罩好仪器 2、葡萄糖标准曲线的绘制要精确 3、反应条件要严格安要求控制 四、思考题回答 1、为什么说米氏常数是一个特征性常数,而且最大反应速度不是? 米氏常数是酶的特征性常数,可用来表示酶和底物亲和力的大小。米氏常数与底物浓度和酶浓度无关,而受温度和pH值的影响,竞争性抑制剂米氏常数增大,最大反应速度不变;非竞争性抑制剂米氏常数不变,最大反应速度减小;反竞争性抑制剂米氏常数减小,最大反应速度减小。 Km:米氏常数,是研究酶促反应动力学最重要的常数。它的意义如下:它的数值等于酶促反应达到其最大速度Vm一半时的底物浓度〔S〕,图示以及公式推导。

它可以表示E与S之间的亲和能力,Km值越大,亲和能力越强,反之亦然。它可以确定一条代谢途径中的限速步骤:代谢途径是指由一系列彼此密切相关的生化反应组成的代谢过程,前面一步反应的产物正好是后面一步反应的底物,例如,EMP途径。限速步骤就是一条代谢途径中反应最慢的那一步,Km值最大的那一步反应就是,该酶也叫这条途径的关键酶。它可以用来判断酶的最适底物,某些酶可以催化几种不同的生化反应,叫多功能酶,其中Km值最小的那个反应的底物就是酶的最适底物。 Km是一种酶的特征常数,只与酶的种类有关而与酶的浓度无关,与底物的浓度也无关,这一点与Vm是不同的,因此,我们可以通过Km值来鉴别酶的种类。但是它会随着反应条件(T、PH)的改变而改变。 2、为什么测定酶的米氏常数要采用初始速度法? 米氏方程式是根据中间产物理论推导出来的。即在酶催化反应中,酶(E)和底物(S)首先生成中间产物(ES),然后分解成产物(P)和游离酶(E): (1) 、、代表反应各步的速率常数。当反应以恒态进行时,ES的生成速率等于分解速率,即 (2) 式中、和分别代表酶、底物和中间产物的浓度。令

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法) 简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法,其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。通过分光光度比色法测定510nm 处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 操作步骤(仅供参考): 1、 配制标准品工作液:。按照下表稀释系列标准品溶液。 2、 准备样品: ① 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离 心取上清,-80℃冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的 测定,尿液通常也可以直接用于测定,-80℃冻存,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品:如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或 编号 名称 TE0007 50T TE0007 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 显色基液 75ml 150ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml 2ml RT 试剂(E): ddH 2O 5ml 10ml RT 使用说明书 1份 0 1 2 3 4 5 Phenol(0.05mg/ml)(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 ddH 2O(ml) 0.55 0.45 0.35 0.25 0.15 0.05 相当于金氏单位(U/L) 10 20 30 40 50

血清骨型碱性磷酸酶的参考标准物

《国外医学.临床生物化学与检验学分册》1994年06期 加入收藏投稿 血清骨型碱性磷酸酶的参考标准物 龚丽洁 【摘要】:正骨型碱性磷酸酶(Alp)是成骨细胞的胞外酶,对骨的形成和矿化起重要作用,血清中骨型Alp活性是骨形成速率的指标。人血清中含小肠型,胎盘型(妊娠时),骨型,肝型四种Alp同工酶,后两种由一对基因产生,仅在翻译后的糖基化过程有差别,较难 【关键词】:血清骨型碱性磷酸酶参考标准沉淀法标准物成骨细胞热灭活法同工酶人血清ConA结合形成速率 【分类号】:R446.1 【正文快照】: 骨型碱性磷酸酶(Alp)是成骨细胞的胞外酶,对骨的形成和矿化起重要作用,血清中骨型Alp活性是骨形成速率的指标。人血清中含小肠型,胎盘型(妊娠时),骨型,肝型四种Alp同工酶,后两种由一对基因产生,仅在翻译后的糖基化过程有差别,较难分离。常用的分离方法有电泳法,热灭活性,液相 下载全文更多同类文献团体订阅中心 PDF全文下载 CAJ全文下载 (如何获取全文?欢迎:购买知网充值卡、在线充值、在线咨询) CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式,AdobeReader仅支持PDF格式 《国外医学.临床生物化学与检验学分册》1996年03期 加入收藏投稿 血清骨型碱性磷酸酶的放免法与电泳法比较 乔文涛 【摘要】:正碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种膜结合金属酶,为一组至少由四个基因位点编码的同工酶。人血清中两种主要的与临床密切相关的同工酶是骨和肝碱性磷酸酶。骨AL P较总ALP更好地反映成骨细胞活性,在生理或病理状态下都能更准确地反映骨代谢状况。定量骨ALP有区带电泳、等电聚焦电泳、高效液相色谱(HPLC)及热处理、植物血凝素沉淀等法;其中电泳、HPLC和等电聚焦电泳 【关键词】:血清骨型碱性磷酸酶电泳法等电聚焦电泳放免法同工酶相关性成骨细胞植物血凝素区带电泳HPLC 【分类号】:R817.4 【正文快照】:

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求beihua

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法) 适用范围:本试剂盒用于体外定量检测人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格: 试剂1:80ml×1;试剂2:20ml×1。试剂1:80ml×2;试剂2:20ml×2。 试剂1:80ml×3;试剂2:20ml×3。试剂1:80ml×4;试剂2:20ml×4。 试剂1:60ml×1;试剂2:15ml×1。试剂1:60ml×2;试剂2:15ml×2。 试剂1:60ml×3;试剂2:15ml×3。试剂1:60ml×4;试剂2:15ml×4。 试剂1:40ml×1;试剂2:10ml×1。试剂1:40ml×2;试剂2:10ml×2。 试剂1:40ml×3;试剂2:10ml×3。试剂1:40ml×4;试剂2:10ml×4。1.2组成成份: 试剂1:AMP缓冲液0.8mmol/L,pH 8.9±0.1,氯化镁10.5mmol/L; 试剂2:4-NPP 100mmol/L。 2.1 外观:均为澄清溶液,外包装完整。 2.2 净含量:不少于标示值。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度:A≤0.6(波长405nm,光径10mm)。 2.3.2试剂空白吸光度变化率:△A/min≤0.005(波长405nm,光径10mm)。 2.4 分析灵敏度:浓度为120U/L时,吸光度变化率△A/min≥0.03。 2.5 线性区间 2.5.1线性相关系数:[25,750]U/L范围内,线性相关系数r≥ 0.990。 2.5.2线性偏差:[25,100] U/L时,绝对偏差不超过±10U/L;(100,750] U/L 时,相对偏差不超过±10%。

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