大肠杆菌功能启动子筛选过程

大肠杆菌功能启动子筛选过程

强启动子对于基因工程操作中外源基因的表达效率有显著的影响，因此他的筛选具有重要的意义。

大肠杆菌的启动子位于-10区和-35区，常见的原核生物在启动子上虽然没有较大差别，但是为了能高效表达，还是应从大肠杆菌自身的基因组中选择强启动子，因为这也和外源启动子稳定性和大肠杆菌RNA聚合酶结合的倾向性有感（优先结合与自身）；另外还要考虑载体的拷贝数，多拷贝载体和单拷贝在形成产物的量上是有差别的，当然，如果能够通过载体把外源基因整合到宿主（这里指大肠）上，这样就能防止在传代是质粒不稳定或丢失的现象。

筛选步骤：

（1）大肠杆菌基因的分离：去垢剂溶解细胞，酚和蛋白酶去除蛋白质，核糖核酸酶去除RNA，乙醇沉淀等步骤，得到大肠杆菌基因组、

（2）DNA分子的切割：用限制性核酸内切酶进行切割；限制酶产生的黏性末端、末端转移酶合成的同聚物接尾以及合成的人工接头等。酶切后的片段中就含有想要得到的启动子片段，片段进行PCR扩增。

（3）载体选择：能在大肠杆菌中自主复制，对某些限制酶来说只有一个切口，并在酶作用后不影响其自主繁殖能力。从细菌核酸中易于分离和纯化。在宿主中能以多拷贝形式存在，有利于插入的外源基因表达，能在宿主中稳定地遗传。进入宿主细胞的载体主要有：a质粒：重组DNA以转化的方式进入宿主细胞；bλ噬菌体：重组DNA以转染的方式进入宿主细胞；c柯斯质粒：以转导的方式进入宿主细胞。我们这里选择以来自大肠杆菌的含有氨苄青霉素抗性基因的不含启动子的PBR322质粒作为载体（常用的质粒载体，能在基因公司很容易买到因为题目要求要以氨苄青霉素抗性基因作为报告基因）。酶切质粒（选与2中一样的酶来切，这样就能得到相同的粘性末端，容易将质粒与DNA片段结合），PCR扩增至一定量。

（4）质粒片段与DNA片段结合，导入受体细胞（这里是大肠）。

（5）将得到的大肠杆菌在液体培养基中进行培养。

（6）制作青霉素梯度平板或者是添加有青霉素的梯度ＬＢ液体培养基。

（7）将5中得到的菌体稀释为菌悬液，在6中涂布培养或液体发酵培养。（8）含有强启动子菌体的检出。因为能在青霉素中生长大肠是经过了质粒导入后的氨苄青霉素抗性基因的表达引起的（当然，也有一些是野生型大肠杆菌发生了突变，所以在选择报告基因时我们更应倾向于选择双报告基因作为标记），而他的表达则证明了启动子的存在。（大多数情况下，在高浓度青霉素环境中生长的都是成功导入质粒载体的菌体，且能在越高浓度青霉素环境生长的为能高效表达的，即含有强启动子的基因）

（9）将8中检出的菌体在一定量青霉素培养中培养，扩大培养，淘汰不能稳定遗传的菌体，破壁，收集质粒。收集到的质粒继续以同一种酶切割。

（10）切割后得到的片段以探针（大肠杆菌-30区和-10区启动子为CAAT和TATA，探针就是由他们的互补链在固定相上做成，可以买的）吸附，富集，得到大肠杆菌的强启动子。

在成绩统计Excel中的数据筛选功能

在成绩统计Excel中的数据筛选功能 朱丽芬 关键词：excel筛选 用Excel对学校期中和期终成绩分数统计运用中，人们一般采用排序或者是运用条件格式的方法。排序是重排数据清单，将符合条件的数据靠在一起；条件格式是将满足条件的记录以特殊格式显示。这两种查询方法的缺点是不想查询的数据也将显示出来，从而影响查询的效果。 有没有一种更为方便的查询方法呢?有，那就是筛选。筛选与以上两种方法不同，它只显示符合条件的数据，而将不符合条件的数据隐藏起来。就会用到数据的筛选操作，Excel中提供了两种数据的筛选操作，即“自动筛选”和“高级筛选”。 但大家往往弄不明白，什么情况下要使用“自动筛选”和“高级筛选”？究竟可以实现数据的哪些筛选操作？怎样才能熟练地掌握数据的筛选呢？本人通过平常运用中，掌握一部分，化解了此部分运用中的难点。 一、自动筛选 “自动筛选”一般用于简单的条件筛选，筛选时将不满足条件的数据暂时隐藏起来，只显示符合条件的数据。在数据区域中单击任一单元格，然后单击“数据”菜单，选择“筛选”→“自动筛选”命令，则每一列数据顶端的项目名称右侧会出现一个下拉列表按钮。根据需要从中选择需要显示的数据要求后，符合条件的数据就被显示出来了。 自动筛选

如果列表框中缺少需要的条件，可以选择“自定义”项，弹出“自定义自动筛选方式”对话框，然后在该对话框中进行条件设置。 自动筛选 如果想取消筛选，可再次选择“数据”→筛选”→“自动筛选”命令，即可取消。 二、高级筛选 “高级筛选”一般用于条件较复杂的筛选操作，其筛选的结果可显示在原数据表格中，不符合条件的记录被隐藏起来。也可以在新的位置显示筛选结果，不符合条件的记录同时保留在数据表中而不会被隐藏起来，这样就更加便于进行数据的对比了。 高级筛选用于根据多个条件来查询数据。我们先把筛选的条件输入到表格中的一个空白区域中。然后选择“数据”→筛选”→“高级筛选”命令，在弹出的“高级筛选”对话框进行相应设置。区域的输入可以单击输入框右侧的“拾取”按钮，然后在工作表中拖动鼠标进行选择进行即可。 高级筛选

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[1]

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍 相互关系 大肠菌群（总大肠菌群） >粪大肠菌群&耐热大肠菌群> 大肠杆菌 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。 二、总大肠菌群

所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较 北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。 耐热大肠菌群的卫生学意义 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。 作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。

肠易激综合征发病机制简述

UEGW“六解”肠易激综合征发病机制 来源：中国医学论坛报 上海交通大学医学院附属瑞金医院袁耀宗钱爱华 2010年10月23-27日，第18届欧洲消化疾病周（UEGW）在西班牙巴塞罗那举行。在本届年会上，关于肠易激综合征（IBS）的最新研究主要涉及其发病机制方面的基础研究及临床治疗方面的新进展。本期D2~D3版将其中关于IBS发病机制方面的研究主要内容介绍如下。 图 IBS发病的相关机制示意图神经肽S受体1（NPSR1）使肠屏障透过率增加，使肠上皮内分泌细胞释放的5-羟色胺（5-HT）的再吸收受到影响；肠上皮通透性增加，导致肠腔内细菌等可以大量通过肠黏膜。 1. 细菌过度生长

在IBS患者中，小肠细菌过度生长的发生率为45.5%，而在非IBS患者中，该发生率仅为 12.5%。目前，小肠细菌过度生长仍是IBS发病机制中的一个存在争议的问题。在本届年会上，希腊学者报告了1项关于小肠细菌过度生长与IBS发病关系的队列研究结果。 该研究自2009年起连续纳入150例接受上消化道内镜检查的患者，其中IBS患者55例（符合罗马Ⅲ诊断标准）和非IBS患者95例。所有患者均无艾滋病病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染，也无肝硬化及胃肠道出血。经内镜采集所有患者十二指肠第二部的肠液，并在体外需氧环境下进行细菌定量培养。采用API20E系统鉴定革兰阴性菌。小肠细菌过度生长的定义为肠源性细菌量达到103个菌落/毫升。 结果显示，在纳入的150例患者中，有37例（24.7%）患者存在小肠细菌过度生长。在55例IBS患者中，有25例（45.5%）存在小肠细菌过度生长，而在95例非IBS患者中，仅12例 （12.5%）存在小肠细菌过度生长（P<0.0001）。IBS患者发生小肠细菌过度生长的比值比（OR）为5.76（P<0.0001）。 对十二指肠液进行细菌培养及菌种鉴定的结果显示，在IBS患者中，大肠杆菌感染有7例 （12.7%），肠球菌属6例（10.9%），其他肠杆菌科10例（18.2%）。在非IBS患者中，大肠杆菌感染3例（3.1%），肠球菌属6例（6.1%），其他肠杆菌科6例（6.1%）。IBS 患者与非IBS患者间存在显著差异（P<0.0001）。多元回归分析显示，IBS与小肠细菌过度生长间存在较强的相关性（OR=6.09，P& lt;0.0001）。研究者认为，IBS患者具有较高的小肠细菌过度生长发生率，IBS与小肠细菌过度生长之间可能存在紧密联系。 2. 肠道屏障功能改变 IBS患者肠上皮细胞紧密连接蛋白表达明显降低；肥大细胞类胰蛋白酶介导了肠上皮通透性的增加。最近，越来越多证据表明肠道通透性的改变和肠屏障功能的缺陷在IBS发病中起一定作用，但具体机制还不是很明确。 IBS患者紧密连接蛋白表达显著降低 在正常情况下，肠上皮细胞间的间隙是由连接复合物封闭，其中最重要的是紧密连接。紧密连接由多种紧密连接蛋白分子组成，包括跨膜蛋白occludin、claudin、连接黏附分子（JAM）和胞质带状闭合蛋白ZO等（见图）。 肠道通透性增加是IBS重要的病理生理机制，而肠道通透性增加可能与肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的改变密切相关。在本届UEGW上，法国学者交流了1项比较IBS患者和健康对照组结肠黏膜紧密连接蛋白表达差异的前瞻性研究。

描述乳糖操纵子的作用机理

描述乳糖操纵子的作用机理？ 1.针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象，法国的Jacob和Monod等人做了一系列遗传学和生化学研究实验，于1961年提出乳糖操纵元(lac operon)学说，如图19-3所示。图19-3中z、a和b型是大肠杆菌编码利用乳糖所需酶类的基因，p是转录z、a、b所需要的启动子，调控基因i编码合成调控蛋白R，R能与o结合而阻碍从p开始的基因转录，所以o就是调节基因开放的操纵序列，乳糖能改变R结构使其不能与o结合，因而乳糖浓度增高时基因就开放，转录合成所编码的酶类，这样大肠杆菌就能适应外界乳糖供应的变化而改变利用乳糖的状况，这个模型是人们在科学实验的基础上第一次开始认识基因表达调控的分子机理。 2.操纵子(operator)是指能被调控蛋白特异性结合的一段DNA序列，常与启动子邻近或与启动子序列重叠，当调控蛋白结合在操纵子序列上，会影响其下游基因转录的强弱。以前许多书中将操纵子称为操纵基因(operator gene)。但现在基因定义是为蛋白质编码的核酸序列，而操纵序列并不是编码蛋白质的基因，却是起着调控基因表达强弱的作用，正如启动序列不叫启动基因而称为启动子一样，操纵序列就可称为操纵子。以前将operon译为操纵子则可改译为操纵元，即基因表达操纵的单元之意。 举乳糖操纵元中的操纵子为例，如图19－5所示，其操纵子(o)序列位于启动子(p)与被调控的基因之间，部分序列与启动子序列重叠。仔细分析该操纵子序列，可见这段双链DNA具有回文(palindrome)样的对称性一级结构，能形成十字形的茎环(stem loop)构造。不少操纵子都具有类似的对称性序列，可能与特定蛋白质的结合相关。 阻遏蛋白与操纵子结合，就妨碍了RNA聚合酶与启动子的结合及其后β－半乳糖苷酶等基因的转录起始，从而阻遏了这群基因的表达。最早只把与阻遏蛋白结合、起阻遏作用的序列

磷酸盐调节因子与大肠杆菌的的发病机制

磷酸盐调节因子与大肠杆菌的的发病机制摘要： 在感染过程中，细菌必须与调节基因表达相协调，以应对环境的刺激。磷酸盐调节因子被PhoBR的两个组件的调节系统所控制。PhoBR是在机体饥饿和盐酸盐调节基因处于稳态的时候被激活的调节基因，许多研究突出显示了Pho 调节因子在细菌的发病机制中起的重要作用，研究出了PhoBR基因是怎么被诱导表达的，另外调节基因参与盐酸盐的代谢系统，引导了许多细胞进程的调节。Pho调节因子有多种多样的功能，减弱毒性和改变许多病毒的特性，包括对宿主细胞的粘附力和对抗菌表位的抵抗力、酸度和氧化性的控制。这篇综述概述了Pho调节因子和大肠杆菌的致病性之间的关系，并举例说明，另外调节了磷酸盐的稳态，Pho调节因子在调节应激和毒力反应时起关键作用。 目录: 1.前言 2.Pho调节因子的诱导 3.Pho调节因子的活性和EXPEC的毒力 4.解剖对PhoBR和Pst系统有关的在特殊组织 5.氧化应激反应 6.细菌细胞表面的修饰 7.粘附素的产生和粘附 8.肠致病性大肠杆菌 9.Pst系统和肠致病性大肠杆菌菌株的粘附 10.在适应环境中出血性大肠杆菌时，Pho调节因子也被激活。 11.出血性大肠杆菌的毒力因子被PhoBR调节 12.结论 致谢 参考文献 1.前言 为了适应和在不同的微生物环境中生存，细菌必须感觉和回应细胞外的信号，对环境刺激的适当反应，可以被双组分调控的系统转导，这包括趋化现象的调节，渗透调节，新陈代谢和运输。一个典型的双组分调控系统（TCRS）由内膜组氨酸激酶传感器蛋白（HK）和一个反应调节器（RR），它作为DNA 粘合蛋白发挥作用，激活或基因表达复压。 磷，是一种细胞内容物，是细胞中第三丰富的元素，它存在于许多分子中，包括细胞膜脂，多糖和核酸。磷酸盐与能量的新陈代谢有关，也是一种转导信号，由TCRS介导。在细胞外集中的磷酸盐，由PhoR编码的HK和PhoB编码的RR双组分调控系统PhoBR运送，当细胞外聚集的磷酸盐低于4μM时PhoBR表达磷酸盐受限制，在磷酸盐受限制的条件下，PhoBR诱导基因属于磷酸盐调节子，它包含与获取能量和新陈代谢有关的不同的磷酸盐组基因。Pho调节因子的控制和跨膜信号转导很大程度上与大肠杆菌和芽孢杆菌环境中的无机磷有关，在大肠杆菌K-12中，Pho调节因子包括31个基因，除了参与磷酸盐的动态平衡，也与作为诱导结果，减弱细菌的毒性有关。 应对不同环境条件下入侵的病原体，宿主病原体相互作用是一个动态过程。病原体在宿主不同的部位生存，需要对环境中直接的不同刺激有适当的反应力。专门的调控系统控制毒力因子的表达，在许多调节水平相互作用中

Excel数据筛选的技巧

Excel数据筛选的技巧 对于Office一族来说，最常用也是最困扰他们的工作有两个：一个是在浩如烟海的众多数据中，如何快速找到和检索出所需的信息；另一个则是如何轻松得到分类汇总的结果和统计报表数据。下面，我们将向大家介绍用Excel对数据信息进行筛选、检索的一些操作技巧和经验。 日前，在北京召开了第29届奥林匹克运动盛会，来北京参赛旅游的中外宾客络绎不绝，为了更好的了解北京的特色小吃和各式美食，所以在网络中非常流行一个“吃在北京”的文档。该文档是用Excel制作的，文档的标题行中从“店名”到“菜系”，从“地址”到“电话”，从“招牌菜”到“人均消费”可谓一应俱全。为了查询方便，该数据表还设置了“自动筛选”功能，可通过标题右侧的下拉列表来对“餐厅”、“菜系”或“消费价格”等按照条件进行筛选查看，如图1所示 这种通过下拉列表设置条件的筛选在Excel中被称作“自动筛选”，这种筛选可以将列表中的数据直接当作条件，也可以通过“自定义”条件的设置进行某个字段“与”、“或”查询，由于自动筛选的应用较为简单，在此，不再做赘述和讲解。 现在，我们要探讨的是自动筛选的兄弟——高级筛选。虽然自动筛选或高级筛选，在Excel中都可以起到根据条件查询数据的作用，是数据分析必不可少的工具和手段，但是高级筛选才是最好的数据查询方式。因为它不仅包含了所有自动筛选的操作，而且还有很多自动筛选望尘莫及的功能，如：多字段复杂条件的“与”、“或”关系查询；将查询结果复制到其他表；实现条件的“模糊查询”；与“宏”和“窗体控件”结合等等。 多字段复杂条件的“与”、“或”关系查询并将结果复制到其他数据表 用Excel的“自动筛选”功能来对数据表进行筛选查询，若对多字段设置了筛

第三讲 细菌的变异, 致病机理

第4章细菌的变异 第一节细菌遗传与变异的概念 (concept of bacterial heredity and mutation) 一,细菌的遗传性(bacterial heredity)。 二,细菌的变异性(bacterial mutation)。 第二节细菌的遗传物质 一、细菌染色体 （一）大小与形状 双链、环状，109 Dal, 2.64χ109 400kb(kilobase),1.36mm，400个基因。 （二）染色体的复制 origin 复制起点 replicating fork 复制叉 replicon 复制子 二、质粒 plasmid

(一)质粒的大小和形状 (二)质粒的复制 少数杂合质粒超过一个replicon (三)质粒的共同特性 1．具有自我复制能力 2．决定生物学效应 3．转移特性 4．相容性( compatibility) 5．自行丢失与消除( curing) 细菌接合型非接合型质粒的区别 接合型非接合型 conjugative nonconjugative 大小大，>40kb <7.5kb 拷贝数少，1-几个/每个染色体多,>10个/每个染色体 复制特性紧密型松驰型 传递后代一分为二随机分配 (四)质粒控制的性状 1．抗生素抗性 R 因子 2．毒素 3.adherence or colonization 所需的表面结构 4.细菌素 Col 5.其它 cryptic plasmid 第三节细菌的变异现象

一、细菌形态结构及菌落性状的变异 （一）菌形及结构的变异 细菌的L-型变异。 原生质体(protoplast): 革兰阳性菌，胞壁完全缺损。球形体(spheroplast)：革兰阴性菌，胞壁部分缺损。 (二),菌落性状的变异 光滑型（S型), 粗糙型(R 型), 二.细菌的毒力变异 强毒株：virulent strain 弱毒株：attenuated strain 无毒株：avirulent strain 三,细菌的耐药性变异 四,细菌的抗原变异 五,细菌的酶活性变异 第四节细菌变异的机理 一、细菌变异类型： 遗传型变异Genotypic variation: 表现型变异Phenotypic variation: （一）致死突变型 （二）条件突变型 （三）抗性突变型 （四）营养缺陷型 二,基因突变机制 突变(mutation)

乳糖操纵子

14 原核生物基因的表达调控 生物体在其生命活动中，基因的表达严格有序，任何影响到基因开启与关闭、转录和翻译等基因表达程序的调节作用，都属于对基因表达的调控。原核生物是单细胞生物，没有核膜和明显的核结构。它们与周围环境关系密切。在长期进化过程中产生了高 度的适应性和应变能力，这是它们赖以生存的保证。由此可见，原核生物的基因表达既 与自身的遗传结构相适应，又体现了它们对环境的应变能力。 原核生物基因表达调控主要发生在转录水平上，这可以最经济地在基因表达的第一 步实行最有效的控制。原核生物以操纵子为单位的调控系统即体现了这一特点。然而， 转录调控的方式多种多样，如噬菌体基因表达的时序调控；大肠杆菌色氨酸合成代谢的 衰减调控，即是转录调控的明显例证。此外，也有许多翻译水平上的调控机制，如核糖体 蛋白质合成的自身调节；反义RNA或小RNA对mRNA翻译的调控作用等等。有时， 原核生物甚至还能从DNA水平上对基因表达进行调节，如沙门氏杆菌的相变过程，就 是以基因重排的方式调控基因转录。

327　 14畅1　大肠杆菌乳糖操纵子的调控机制 14畅1畅1　大肠杆菌对乳糖的利用和酶诱导 早在20世纪初期就发现，酵母细胞只有在某种底物存在时才产生相应的酶。这种由底物诱导而产生酶的效应，称为诱导作用（i nducti on ）。酶诱导普遍存在于细菌中，如大肠杆菌（E 畅co li ）的乳糖利用 系统便是诱导过程的典型例证。大肠杆菌的乳糖代谢需要有β半乳糖苷酶（βgalactosidase ）的催化，该酶能把乳糖水解为半乳糖（gal acto se ）和葡萄糖（g l u co se ）（图141）。如果在大肠杆菌的培养基中所用的碳源不是乳糖，而是其他种类的糖（如葡萄糖），那么细胞内的β半乳糖苷酶的分子极少，平均只有0畅5～5个分子。可是，一旦培养基的碳源完全用乳糖取代葡萄糖，则在2～3m i n 内，细胞中就合成了大量β半乳糖苷酶分子，数量骤增，分子数可达1000～10000个。当从培养基中除去半乳糖，细菌很快就停止合成β半乳糖苷酶。显然，新合成的β半乳糖苷酶是在底物乳糖诱导下产生的。可见，乳糖是合成β半乳糖苷酶的诱导物，而β半乳糖苷酶是可诱导酶（i n duci b l e enzym e ）。这个系统称为可诱导系统（i nduci b l e system ）。 大肠杆菌对乳糖的分解利用，除了需要β半乳糖苷酶外，还需要半乳糖苷透性酶（gal acto si de permease ）。半乳糖苷透性酶是一种膜蛋白，可协助乳糖分子穿膜进入细胞。除上述两种酶外，还产生了硫代半乳糖苷转乙酰基酶（thi ogal acto si de transacetyl ase ）。 14畅1畅2　大肠杆菌乳糖操纵子的负控制 为解释上述现象，1961年法国分子生物学家F 畅Jacob 和J 畅M onod 通过对大肠杆菌乳糖代谢系统的一系列研究，根据其基因的活动和表达的调节提出了操纵子学说（operon hypo thesis ）。实验证明，3种蛋白质：β半乳糖苷酶（Z ）、半乳糖透性酶（Y ）和硫代半乳糖苷转乙酰基酶（A ）的编码基因l a cZ 、l acY 图141　乳糖操纵子的结构 （引自G riffiths 等，2005） 和l acA 依次连接在一起，形成了一个转录单位。操纵子学说主张，该转录单位的转录是从启动子 14畅1　大肠杆菌乳糖操纵子的调控机制

肠道病原性大肠杆菌关系

江西农业大学学报2010，32（1）：0141－0143http：//https://www.wendangku.net/doc/2916964421.html, Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E－mail：ndxb7775@https://www.wendangku.net/doc/2916964421.html, 肠道病原性大肠杆菌 和宿主细胞间的相互作用 李正平，杨倩* （1.南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室，江苏南京210095） 摘要：肠道病原性大肠杆菌（EPEC）属于胞外菌，主要通过粘附在肠上皮细胞上引起宿主的发病。EPEC形成基座、产生粘附和脱落（A/E）损伤的细菌因子、导致宿主信号转导改变的途径及其发病机制的遗传基础都已经得到广泛的研究。对近年来关于EPEC和宿主细胞间的相互作用的研究进展进行总结，并着重论述EPEC对于肠上皮细胞紧密连接的影响。 关键词：肠道病原性大肠杆菌；肠上皮细胞；紧密连接；肠上皮细胞屏障 中图分类号：S852文献标识码：A文章编号：1000－2286（2010）01－0141－03 The Interaction between Enteropathogenic Escherichia coli and Host Cells LI Zheng-ping，YANG Qian* （Key Laboratory of Animal Physiology and Biochemistry，Minstry of Agriculture，Nanjing Agricultural Uni-versity，Nanjing210095，China） Abstract：Enteropathogenic Escherichia coli（EPEC）is an extracellular bacteria，primarily through ad-here to host intestinal epithelial cells caused pathogenesis.EPEC can produce pedestals，and the bacterial fac-tors involved in attaching and effacing（A/E）lesion formation，modulates several signal transduction pathways within the host cells and the genetic basis of EPEC pathogenesis have been widely studied.This review de-scribes the recent studies of enteropathogenic（EPEC）interact with host cells，and intensively discusses the influence of EPEC to tight junctions between cells. Key words：EPEC；intestinal epithelial cells；tight junctions；intestinal epithelial cells barrier 肠道病原性大肠杆菌（EPEC）是引起发展中国家儿童水样腹泻的一个重要原因，目前已对人类的健康构成了一个重大的危害。EPEC虽然是胞外菌，但是可以和肠上皮细胞紧密粘附，产生特征性的粘附和脱落（A/E）损伤［1］，然后影响到上皮细胞的吸收。在体外EPEC也可以粘附宿主上皮细胞导致细胞异常［2］，包括细胞凋亡和与紧密连接损失有关的黏膜屏障的破坏。然而，一项最近的报告提出EPEC 很少在老鼠肠内定植，与致病性相比，EPEC和宿主之间更像是共生的关系［3］。 人和动物主要通过呼吸道、消化道和生殖道与外界接触。这些黏膜表面都覆盖着一层高度极化的上皮细胞，其游离面位于腔面，直接与外界环境相接触；基底面与富含肠相关淋巴样组织的固有层相接；侧面与毗邻的细胞接壤。这层上皮细胞构成了机体与外界的第一道屏障。相邻上皮细胞连接起来的紧密连接可以封闭细胞间隙，阻止管腔物质的自由进出，是上皮细胞选择性通透作用的物质基础。紧密连接也可以用来评价黏膜屏障的功能。跨肠上皮渗透的主要途径是细胞旁通路，而紧密连接是细胞旁通 收稿日期：2009－11－27修回日期：2009－01－05 基金项目：国家自然科学基金（30871858）、教育部博士点基金（B200606）和江苏省支撑计划（BE200830155）资助作者简介：李正平（1986－），女，硕士生，主要从事动物免疫和分子免疫学研究，E－mail：lizp1986@https://www.wendangku.net/doc/2916964421.html,；*通讯作者：杨倩，教授，博导，E－mail：zxbyq@https://www.wendangku.net/doc/2916964421.html,。

各种食源性致病菌的致病机理

各种食源性致病菌的致病机理，产毒条件，治理措施能够通过食物传播疾病的常见细菌主要有，革兰阳性菌，如：芽孢杆菌，链球菌属，李斯特菌属，丹毒丝菌属和分枝杆菌属；格兰阴性菌，如：沙门菌属，志贺菌属，大肠杆菌等 沙门氏菌引起的中毒及防治措施：沙门氏菌多数存在于动物的排泄物中，可通过水和食物传播，中毒食品主要是肉类、奶类、蛋类食品，常由于食物存放不当，使用前未烧煮熟透所致，肉类、食物较易受到污染。 危害：①肠热型(伤寒、副伤寒)：开始出现发热不适、全身疼痛，此后患者出现持续高热、相对脉缓、肝脾肿大，外周白细胞下降、皮肤出现玫瑰疹。严重肠局部坏死和溃疡，有出血、穿孔等并发症。②急性胃肠炎型(食物中毒)：潜伏期12～24小时，突然恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热，如果细菌已产生毒素，可引起中枢神经系统症状，出现体温升高、痉挛等；重者有寒战，惊厥，抽搐与昏迷，病程3～7天，预后良好。③其他类型：类霍乱型，类伤寒型，类感冒型，败血症型。 防止措施:1.控制细菌污染源，防治动物生前感染、宰后污染和食品孰后重复污染，加强食品卫生检验，在肉类检疫、加运输、销售等各个环节严格把关；2.防止食品污染沙门菌。控制好各类食品储存的适宜条件，防护食品中沙门菌的生长繁殖。高热杀菌，对污染沙门菌的食品加热灭菌，彻底杀死沙门菌。

大肠杆菌常见于人、动物肠道内；许多类型不致病，在肠道内有有益功能；致病性大肠杆菌是通过环境污染进入食品中的；症状为：腹部痉挛、水性或血性腹泻、发烧、恶心和呕吐。染病剂量：几个至上百万个肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)：具有特定O、K抗原血清型，可引起婴幼儿腹泻产肠毒素性大肠埃希氏菌( ETEC)：在小肠定位繁殖，产生肠毒素，引起霍乱样腹泻。毒素包括：不耐热肠毒素LT—60C，10min灭活；耐热肠毒素ST—100C，10min不灭活。肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)：为志贺痢疾样大肠埃希氏菌，症状象痢疾，带有血便，痢疾菌试验呈阳性，具有与痢疾杆菌同样的毒力，可侵入大肠上皮细胞，形成局部炎症及溃疡。 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。?当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。?作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50% 以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。?传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。被污染的食物在室温20℃-22℃放置5 小时以上时，病菌能够通过食物传播疾病的常见细菌。

乳糖操纵子

一、简述乳糖操纵子的结构和诱导机制（英文）-（大题） Functional and regulatory components of the lac operon(作用) Lac R = Regulatory gene，that encodes for the lac Repressor protein that is concerned with regulating the synthesis of the structural genes in the operon. Lac R is adjacent to the Promoter site of the operon. The lac repressor is inactivated by lactose, and is active in the absence of lactose. O = Operator，specific nucleotide sequence on DNA to which an active Repressor binds. P = Promoter，specific nucleotide sequence on DNA to which RNA polymerase binds to initiate transcription. If the Repressor protein binds to the operator, RNAp is prevented from binding with the promoter and initiating transcription. Under these conditions the enzymes concerned with lactose utilization are not synthesized. Structual gene Lac Z, Y and A = Structural Genes in the lac operon. Lac Z encodes for Beta-galactosidase; Lac Y encodes the lactose permease; Lac A encodes a transacetylase.（lac = lactose），the inducer molecule. When lactose binds to the Repressor protein, the Repressor is inactivated; the operon is derepressed; the transcription of the genes for lactose utilization occurs. Response to lactose（作用机制） ①Lack of inducer: the lac repressor binds to operator and blocks all. This prevents binding RNAp to promoter subsequent transcription of lac genes but a very low level of trans-cription of lacZYA . ②Lactose is present, the low basal level of permease allows its uptake, andβ-galactosidase catalyzes the conversion of some lactose to allolactose. ③Allolactose acts as an inducer, binding to the lac repressor and inactivate it. RNAp initiates transcription of lac structual genes. 二、Microbes are preferred to plants and animals as sources of enzymes because：（英文）1）they are generally cheaper to produce. 2）their enzyme contents are more predictable and controllable, 3）plant and animal tissues contain more potentially harmful materials than microbes, including phenolic compounds (from plants), endogenous enzyme inhibitors and proteases. 三、固定化酶的优点（Advantages of Immobilized Enzymes）（英文） Immobilised enzymes are very important for commercial uses as they possess many benefits which include: ①Convenience: Minuscule amounts of protein dissolve in the reaction, so workup can be much easier. Upon completion, reaction mixtures typically contain only solvent and reaction products. ②Economical: The immobilized enzyme is easily removed from the reaction making it easy to recycle the biocatalyst. ③Stability: Immobilized enzymes typically have greater thermal（热的）and operational stability than the soluble form of the enzyme.

Excel提供了数据库的筛选功能

Ｅｘｃｅｌ提供了数据库的筛选功能，它可以把满足条件的数据筛选出来，这在需要从较大的数据库中查找数据时很有用。筛选有自动筛选和高级筛选两种，下面具体介绍它们的使用方法。 １．自动筛选 如果要从成绩表（如图一）中查找“计算机”成绩大于９０和小于７０的男生。具体操作如下： ①将单元格光标移动到表内任何位置，在“数据”菜单上选择“筛选”命令； ②选择“自动筛选”命令，系统自动在每列表头（字段名）上显示筛选箭头； ③单击表头“性别”右边的筛选箭头，打开下拉式列表，选择“男”，此时性别为“男”的记录已筛选出来； ④单击表头“计算机”右边的筛选箭头，在下拉式列表中选择“自定义”选项，打开“自定义自动筛选方式”对话框； ⑤在对话框里单击等式符框右边的向下箭头，从等式列表中选择“大于”后在筛选条件框中输入９０；然后选择“或”，再从对话框里单击下一个等式符框右边的向下箭头，从等式列表中选择“小于”后在筛选条件框中输入７０； ⑥单击“确定”按扭，满足条件的记录就被筛选出来了； ⑦若要把筛选结果抽取出来，可鼠标拖动选定筛选结果，在选定范围内单击右键，弹出下拉菜单，在菜单中选取“拷贝”，然后将光标移至存放结果的工作表中的预定位置上，单击右键，在下拉菜单中选取“粘贴”即可； ⑧如果要恢复原有的全部数据，可在“筛选”子菜单中选择“全部显示”命令。 #3２．高级筛选 如果还是从成绩表中查找“计算机”成绩大于９０和小于７０的男生。具体操作如下： ①从“数据”菜单上选取“筛选”命令，在筛选子菜单中选择“高级筛选”子命令，如图二； ②在“高级筛选”对话框中选择“将筛选结果复制到其他位置”选项；（不选定此项，筛选结果将在原有区域中显示，此时可用“复制”、“粘贴”的办法来抽取数据）； ③在“数据区域”框中指定要筛选的数据区域：若单元格光标在表内，默认整个表；若单元格光标不在表内，必须选定区域，可用拖动鼠标选取，也可直接输入区域：＄Ａ＄２：＄Ｇ＄６，意思是从Ａ列的第２行到Ｇ列的第６行范围内（这种方法可随意选取表中的某一部分进行筛选）； ④指定“条件区域”：预先在条件区域录入条件（Ａ８：性别，Ａ９：男，Ａ１０：男，Ｂ８：计算机，Ｂ９：＞９０，Ｂ１０：＜７０），然后，鼠标在“高级筛选”对话框中“条件区域”框里拖动，使之成为更新状态，再用鼠标选取条件区域，或直接在“条件区域”内输入条件：＄Ａ＄８：＄Ｂ＄１０，如图二； 特别注意：如果某一字段有两个条件，它们的逻辑关系是“或”（Ｏｒ）时，第二个条件应放在同一列的下一行，条件区域如图一中“条件单元区域⑴”；它们的逻辑关系是“与”（Ａｎｄ）时，第二个条件应放在同一行的下一列，假如我们要从成绩表中查找“计算机”成绩小于等于９０和大于等于７０的男生，条件区域如图一中“条件单元区域（２）”。 ⑤在“复制到”框内指定筛选结果的目标区域：＄Ａ＄１７；（若不在本工作表，必须指明所在的工作表，同样可用鼠标选取） ⑥单击“确定”按扭，满足条件的记录就被筛选出来了； ⑦如果第②步选择“在原有区域显示筛选结果”，要恢复原有的全部数据，可在“筛选”子菜单中选择“全部显示”命令。

乳糖操纵子

1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调节基因I。 2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。 3、CAP的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。 4、协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，互相协调、互相制约。 5、在葡萄糖存在的情况下乳糖操纵子不表达，只有在葡萄糖不存在而乳糖存在的情况下表达。 色氨酸操纵子要点 色氨酸操纵子负责色氨酸的生物合成，当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，trp基因表达，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程（而不是诱导过程）中起作用。 阻遏-操纵机制对色氨酸来说是一个一级开关，主管转录是否启动，相当于粗调开关。trp操纵子中对应于色氨酸生物合成的还有另一个系统进行细调控，指示已经启动的转录是否继续下去。这个细微调控是通过转录达到第一个结构基因之前的过早终止来实现的，由色氨酸的浓度来调节这种过早终止的频率。 当培养基中色氨酸的浓度很低时，前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行。 当培养基中色氨酸浓度较高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，3-4区自由配对形成基一环终止子结构，转录被终止，trp操纵子被关闭。

数据筛选

数据筛选 ■教材分析 《数据筛选》是初中信息技术七年级第三单元《电子表格——Excel》第十四课内容。本节课是在学生掌握了数据的计算、数据的排序等基本知识的基础上，进一步对数据进行分析的一节新授课。“数据筛选”是最基础的数据处理过程，同时也是分析数据的重要手段，是为制定方案或决策提供依据的重要一环，在实际生活中应用十分广泛。因此这节课围绕解决问题，制定方案等生活问题设计任务，提高学生的应用能力。本节主要涉及筛选操作，其中自动筛选和自定义筛选操作相对简单，以学生自学为主；高级筛选相对复杂，通过教师讲解学生练习完成任务，最终使学生掌握数据筛选的相关操作。 ■学情分析 数据筛选在学生的生活中应用十分广泛，如比赛成绩的排名等，如果能够掌握excel数据筛选，将大大地提高他们解决问题的能力，因此他们在学习时具有较大的热情。同时经过前一阶段excel软件的学习，学生已经初步熟悉了一些常用菜单、掌握了常用操作，但基于他们年龄的特征，他们对理论性强的知识点不易理解，认知较直观，而对具体操作易于接受，因此学生可以完成自学探究部分，从而掌握数据筛选的基本操作。 ■教学目标 （一）知识与技能 1、理解筛选的含义 2、掌握筛选的操作方法 3、能根据问题综合运用筛选分析数据 （二）过程与方法 1、通过自主探究，掌握筛选的操作方法 2、通过解决生活实例体验筛选在决策中的作用 （三）情感态度与价值观 1、培养学生处理信息的能力，激发学生学习数据处理的兴趣 2、培养学生自主学习、合作探究的精神和分析问题、解决问题的能力。 ■课时安排 1课时 ■重点和难点 教学重点：数据筛选的操作方法 教学难点：高级筛选的操作方法及数据筛选方法的灵活应用 ■教学方法与手段 自学探究、任务驱动、讨论探究。 ■课前准备 将学件分发到每个学生的桌面 ■教学过程 一、（一）情景激情，引入课题

大肠杆菌乳糖操纵子的结构及其调控机制

大肠杆菌乳糖操纵子的结构及其正、负调控：负控诱导型操纵子 大肠杆菌乳糖操纵子包括三个结构基因：Z、Y、A以及一个操纵序列（启动子序列P、操纵基因序列O、调节基因I）。转录时RNA聚合酶首先与P启动子区结合，通过操纵子向下游转录出Z、 Y 、A三个基因的多顺反子。转录的调控是在启动子区和操纵子区进行。 正调控机制： cAMP-CAP复合物与启动子区的DNA结合改变了此区域DNA的次级结构，促进了RNA聚合酶结合区的解链，增强了转录。cAMP-CAP 复合物的形成取决于细胞内cAMP的浓度（或活性），当细菌以葡萄糖为能源时，因为有葡萄糖降解物的效应（抑制了腺苷酸环化酶的活性），使ATP生成cAMP的浓度降低，因而cAMP-CAP复合物的量低，导致乳糖操纵子结构基因不被转录。 负调控机制： 由调节基因I表达的阻遏蛋白以四聚体的活性结构结合于操纵子基因上，阻绕了RNA聚合酶的转录。 诱导调控： 当有诱导物（异乳糖（乳糖异构体）、IPTG、TMG等）存在时，诱导物可以与调节基因I表达的阻遏蛋白结合，改变其蛋白构象后不能与操纵基因结合，RNA聚合酶可以进行结构基因的转录，也就实现了分解乳糖代谢的相关酶的基因表达，即细菌可以分解和利用乳糖。 大肠杆菌乳糖操纵子的正、负调控协调调节其结构基因的表达。总结：使大肠杆菌乳糖操纵子高效表达，必须既有诱导物又无葡萄糖效应。 大肠杆菌培养基中有葡萄糖和乳糖时，细菌为何优先利用葡萄糖？（1）培养基中有葡萄糖，无乳糖时，cAMP-CAP复合物浓度低，即CAP 不发挥作用，无诱导物存在时，阻遏蛋白与操纵基因结合，关闭了下游结构基因的表达。 （2）培养基中既有葡萄糖，又有乳糖时，虽然阻遏蛋白不能与操纵基因结合，但cAMP-CAP复合物浓度低，即CAP不发挥作用，下游结构基因的表达仍然处于关闭状态。 （3）培养基中无葡萄糖，有乳糖时，cAMP-CAP复合物浓度高，即CAP 可以发挥（分解代谢基因激活蛋白的）作用，而且有诱导物，阻遏蛋白不能与操纵基因结合，开放下游结构基因的表达。