难易生根桉树多酚氧化酶_吲哚乙酸氧化酶活性及其同工酶的比较研究_李明

收稿日期:1999-07-15;修回日期:1999-11-12

基金项目:广东省重点攻关项目(99M 04201G)及广东省林业厅和雷州林业局资助项目(950023)的一部分

作者简介:李明(1963-),女,黑龙江五常人,现为甘肃中医学院讲师.

文章编号:1001-1498(2000)05-0493-08

难易生根桉树多酚氧化酶、吲哚乙酸氧化酶

活性及其同工酶的比较研究

李　明1,黄卓烈1,谭绍满1,莫晓勇2,林海球2,龙　腾2

(1华南农业大学,广东广州　510642; 2.国家林业局雷州林业科学研究所,广东湛江　524348)

摘要:尾叶桉的M L A 无性系(简称M L A)是难生根无性系,尾叶桉的U 6无性系(简称U 6)、刚果12号桉W 5无性系(简称W 5)为易生根无性系。M L A 各器官的多酚氧化酶(PPO )活性比U 6、W 5的

低,而M L A 各器官的吲哚乙酸氧化酶(I AAO )活性比U 6、W 5的高。各树种的P PO 活性、I A AO 活性及P PO 同工酶均具有器官的特异性。讨论了P PO 和I AAO 与不定根的发生和发展的关系。

关键词:桉树无性系;多酚氧化酶;吲哚乙酸氧化酶;扦插生根

中图分类号:S 718.43;　Q 946 文献标识码:A

多酚氧化酶(po lyphenol oxidase,PPO)、吲哚乙酸氧化酶(indo acetic acid ox idase,IAAO)普遍存在于高等植物中,在植物的生长、发育中起重要的作用。PPO 是一种含铜的酶,能催化各种酚类氧化。IAAO 能降解吲哚乙酸(IAA),调节植物体内的IAA 水平,从而影响植物的生长发育。据研究,植物体内的PPO 活性与植物的不定根的形成有着非常密切的联系。Kieliszew ska-Rokicha [1]的研究指出,黑松(Pinus thunbergii Parl)在生根过程中,IAAO 的活性升高。Bag atharia 等[2]的研究指出,在菜豆(Phaseolus sp.)的胚根生长过程中,体内的IAAO 活性的变化与根的生长有着密切的联系。Devi 等[3]在用阿魏酸处理玉米(Zea mays L.)苗时发现,随着根的伸长速度减小,体内IAAO 活性上升,而PPO 活性下降。B ha ttacharya 等、Frenkel 等、Al Bara zi 等

[4～6]人的研究指出,PPO 的存在对不定根的形成是十分重要的。Haissig [7]和Bo uillenne 等[8]的研究结果都表明,PPO 与植物根的形成有着非常密切的联系。

桉树(Eucalyptus spp .)是我国南方的重要经济树种,有极大的开发价值。由于桉树是异花授粉植物,其有性繁殖的后代变异太大,难以保持原种的优良性状,因而在生产上往往采用无性繁殖。但利用桉树枝条进行扦插繁殖时,其插条难以生根。对于桉树的扦插生根机理国内外研究甚少,而对于PPO 和IAAO 与桉树不定根形成的关系的研究就更少。本试验通过测定难易生根桉树的PPO 、IAAO 活性及PPO 同工酶在不同器官中的分布情况,以揭示难易生根树种的PPO 、IAAO 与生根能力大小的内在联系,以便为桉树的扦插生产实践提供部分理论依据。林业科学研究　2000,13(5):493～500Forest Res earch

494林业科学研究 第13卷

1　材料与方法

1.1　供试材料

本试验的供试桉树树种为尾叶桉(Eucalyptus urophylla S.T.Blade)M LA无性系(以下简称M LA)、尾叶桉U6无性系(以下简称U6)、刚果12号桉(Eucalyptus ABL.12)W5无性系(以下简称W5)。供试材料均由国家林业局雷州林业科学研究所提供。

1.2　研究方法

1.2.1　不同桉树的扦插生根难易的比较试验　本试验用的扦插基质是用黄心土和泥炭土混合,体积比为2∶1,用0.1%的KM nO4消毒。以各种供试树种在大田栽培8～9个月的组培苗的萌芽条嫩梢作插条。插条长8～12cm,保留2对健康叶片。将剪取后的插条立即浸入水中保湿,分别用0.1%的吲哚丁酸(IBA)溶液浸其基部2cm,浸泡1min。然后将处理好的插条直接插于已消毒的育苗基质上,深度为2～3cm。插条随采随处理随扦插。遮荫棚内相对湿度保持在85%～95%。插后一周内频繁喷雾,保持插条叶面常有水珠,一周后逐渐减少喷雾次数,延长每次喷雾相隔时间。每隔10d喷500倍的百菌清或敌克松杀菌剂一次,以预防病害的发生。插后20d开始调查,统计生根数和根长度。

1.2.2　聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离PPO同工酶　酶的提取使用0.1mol·L-1的Tris-Gly 缓冲液(p H8.3)。内含0.2g·L-1的二巯基苏糖醇,蔗糖200g·L-1。取样时分别以未经IB A 处理过的插条的根(新根、老根混合)、茎上部(0～3节)、茎中部(3～6节)、茎下部(6～10节)、叶(叶肉组织)作为测定位点。将样品用自来水冲洗后再用蒸馏水冲洗,然后用滤纸吸干,称质量。称取根样品0.5g加酶提取液3m L;茎(上段)1g加酶提取液 3.5m L;茎(中段)1g加酶提取液4m L;茎(下段)1g加酶提取液 4.5m L;叶1g加酶提取液3m L;分别将样品置研钵中于冰浴上研磨,匀浆于4～5℃离心15min(10000r·min-1),取上清液作为电泳样品液。

PPO同工酶电泳　试验采用聚丙烯酰胺不连续凝胶缓冲系统垂直板电泳。分离胶浓度为7.5%,浓缩胶浓度3%,电极缓冲液为0.005mol·L-1的Tris-Gly(p H8.3)溶液。每样品孔点样30μL。以0.05%溴酚蓝为前沿指示剂。电泳开始30min,溴酚蓝前沿在浓缩胶位置时,用100V电压,当溴酚蓝前沿进入分离胶时,改用150V恒压。在4℃电泳5h。每个样品重复分析3次。

同工酶检测　PPO显色液为A液:取2g对苯二胺加入预热的18m L醋酸中溶解。B液:取1%的间苯二酚 1.5m L,2%的H2O20.3m L,加双蒸H2O60m L。临用前,取1m L A液混于B液中,摇匀。电泳结束后取下凝胶板,放入PPO显色液中染色。在室温下显色2h。显色完毕后,用蒸馏水冲洗,然后拍照,并用日本产的CS-930型凝胶薄层扫描仪在580nm下扫描同工酶峰。

1.2.3　多酚氧化酶活性测定　取样品1g,加不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PV P)0.1g(事先用蒸馏水浸洗,再过滤以除去杂质),磷酸缓冲液(0.1mol·L-1,pH6.5)5m L,在冰浴下研磨成匀浆,用4层纱布过滤,得滤液。滤液中加入硫酸铵至30%饱和度,离心除去沉淀。上清液再加硫酸铵至60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于少量0.01m ol·L-1的磷酸缓冲液(pH6.5)中,用以测定PPO活性。PPO活性测定根据Archer等[9]的方法进行修改。酶反应体系包括2m L磷酸缓冲液(0.1mo l·L-1,p H6.0),1m L儿茶酚(0.1mo l·L-1),0.1m L酶

液,以煮过失活酶液为对照。反应体系加入酶液后,于37℃保温10min ,迅速放入冰浴中,立即加入2m L 20%的三氯乙酸,10000r ·min -1离心15min,收集上清液,并适当地稀释。于525nm 波长下测定其吸光度,并计算酶活性。以每毫克蛋白质每分钟改变一个OD 525单位为一个酶活力单位。

1.2.4　吲哚乙酸氧化酶活性的测定　称取1g 样品,加20mmo l ·L -1的磷酸缓冲液(pH 6.0)5m L,加少量石英砂,置冰浴中研磨成匀浆,再按100m g 鲜质量材料加1m L 提取液的比例,用磷酸缓冲液稀释之,离心(10000r ·min -1)15min,取上清液测定IAAO 活性。

IAAO 活性测定根据张志良[10]的方法进行修改。以每毫克蛋白质在1h 内分解破坏IAA 的微

克数表示酶活力大小。

1.2.5　可溶性蛋白质含量的测定　采用Bradfo rd [11]的方法测定。

2　结果与分析

2.1　3种桉树扦插生根能力比较

本试验于1998年11月进行,试验结果

(表1)表明,尾叶桉M LA 无性系的扦插发根

能力最低,而尾叶桉U 6无性系和刚果12号

桉W 5无性系的扦插发根能力较高,分别为

89.33%和90.00%,比M LA 高出219.0%

和221.4%。由此结果得出,M LA 是较难生

根的树种,U 6和W 5是较易生根树种。表1　3种桉树无性系扦插生根能力比较树　种平均发根率/%平均根长/(cm ·株-1)M L A 28.00b 11.20a U 689.33a 3.84b W 590.00a 3.78b 注:表中数据为3次重复的平均值,每重复用插条50枝。纵行数据的末尾的字母是邓肯氏新复极差检验结果,具有相同字母表示差异不显著,具有不同字母表示差异显著

(P =0.05)。

2.2　3种桉树无性系不同器官的PPO 活性比较

表2结果表明,各植物不同器官的PPO 活性各异。同一树种中,插条茎的上、中、下各段的PPO 活性依次增高,即随着组织成熟度的增强,PPO 活性也升高。这在3种桉树中均相同。难生根的M LA 各器官中以根的PPO 活性为最强,茎上部的PPO 活性为最弱。而在容易生根的U 6和W 5中,则以叶片的PPO 活性为最强。在3种桉树中,难生根的M LA 各器官的PPO 活性都比易生根的U 6和W 5的低。其中叶的差异较大,U 6和W 5叶的PPO 活性分别比难生根的M LA 叶的PPO 活性高151.1%和127.1%。对茎的上中下混合样品的数据进行邓肯氏新复极差检验结果,难生根的M LA 茎内PPO 活性显著地低于容易生根的U 6和W 5的PPO 活性。

表2　3种桉树不同器官多酚氧化酶活性

u ·min -1·mg -1 树　种

根叶茎(上)茎(中)茎(下)茎(上中下混合)M LA

5.87±0.05 4.08±0.04 3.87±0.03 4.11±0.05 4.80±0.02 3.86±0.04b U 6

7.02±0.0210.25±0.03 5.02±0.02 5.32±0.07 6.77±0.04 6.31±0.03a W 57.86±0.049.27±0.02 5.88±0.09 6.04±0.04 6.68±0.03 6.56±0.03a 注:测定时间为5月,数字是3次重复的平均值。表中字母为邓肯氏新复极差检验结果,字母相同表示差异不显著,字母不同表示差异显著(P =0.05)。

2.3　3种桉树无性系不同器官IAAO 活性比较

表3显示了各种桉树无性系不同器官的IAAO 活性。结果表明,不同器官的IAAO 活性不同。在同一树种茎的上、中、下各段的IAAO 活性依次增高。IAAO 活性与PPO 活性分布相似,随着组织成熟度升高而增强。各树种的IAAO 活性以根部最高,而以茎尖的为最低。难生495第5期 李明等:难易生根桉树多酚氧化酶、吲哚乙酸氧化酶活性及其同工酶的比较研究

根的M LA 各器官的IAAO 活性均比容易生根的U 6和W 5的高。叶是酶活性相差较明显的器官,M LA 叶的IAAO 活性分别比易生根植物U 6和W 5叶的IAAO 活性高57.7%和33.4%。对茎的上中下混合样品的数据进行邓肯氏新复极差检验结果,M LA 茎内的IAAO 活性显著地高于U 6和W 5的IAAO 活性。

由此可见,PPO 、IA AO 两种酶活性在桉树根、茎、叶不同器官是不同的,且都随着器官的成熟度升高而增加,难生根树种M LA 的IAAO 活性较易生根树种U 6和W 5的高,而M LA 的PPO 活性则较易生根树种U 6和W 5的低。

表3　3种桉树无性系不同器官I AAO 活性比较

μg ·mg -1·h -1 树　种

根叶茎(上)茎(中)茎(下)茎(上中下混合)M LA

5.87±0.08 5.02±0.06 3.80±0.02 4.02±0.04 4.87±0.09 4.95±0.04a U 6 4.92±0.07 3.18±0.05 2.88±0.04 3.21±0.05 4.32±0.07 2.07±0.05c

W 5

4.69±0.04 3.76±0.03 2.56±0.03 2.88±0.04 3.32±0.05 2.79±0.05b 注:取样部位同上,测定时间为5月,数字是3次重复的平均值。表中字母为邓肯氏新复极差检验结果,字母相同表示差异不显著,字母不同表示差异显著(P =0.05)。

2.4　MLA 各器官的PPO 同工酶图谱的分析

从图1可知,M LA 各器官的PPO 同工酶的酶峰数不同。根的酶峰数与叶的明显不同。茎上、茎中、茎下部的酶峰数也有差异。由此可见,M LA 各器官的PPO 同工酶存在器官的特异性

。

a .根

b .叶

c .茎下

d .茎中

e .茎上

图1　M L A 各器官的PPO 同工酶图谱

2.5　U 6各器官的PPO 同工酶图谱分析

由同工酶扫描图2中可看出,U 6各器官的PPO 同工酶扫描峰数不同。根、叶、茎上、茎中、茎下部的PPO 同工酶扫描峰数差异较大。可见,在U 6中,各器官的PPO 同工酶也表现出明显的器官特异性。

2.6　W 5各器官的PPO 同工酶图谱分析

从图3中可看出,W 5各器官的PPO 同工酶扫描峰数也不同。根、叶、茎上、茎中、茎下部的PPO 同工酶扫描峰数也有明显的差异。也表现出明显的器官特异性。

496林业科学研究 第13卷

a.根

b.叶

c.茎下

d.茎中

e.茎上

图2　U 6各器官的PPO

同工酶扫描峰图

a .根

b .叶

c .茎下

d .茎中

e .茎上

图3　W 5各器官的PPO 同工酶扫描峰图

3　讨　论

PPO 、IAAO 是普遍存在于植物体内的两种酶。在许多植物体内的分布和活性高低随器官组织的不同而不同。本试验结果证实了这个观点。通过测定M LA 、U 6和W 5根、茎、叶的PPO 、IAAO 的活性,发现在不同器官内这两种酶的活性均不同。这可能与不同器官的生理功能和代谢方式不同有关。这两种酶在植物体内参与多种生理反应,故在不同的植物器官中表现不同的活性。本试验结果还表明,在植物茎的不同部位这两种酶也呈现不同的活性,都随着茎的成熟度的提高而上升。Gonzaleze 等[12]研究表明在榛子子叶的组织培养中,木质部的形成与PPO 活性增加相联系,这两种酶被用作木质素合成的标志。Sriv astara 等[13]发现,IAAO 、PPO 两种酶之间具有密切的关系。本试验的研究结果表明,难生根的M LA 各器官的IAAO 活性均比易497

第5期 李明等:难易生根桉树多酚氧化酶、吲哚乙酸氧化酶活性及其同工酶的比较研究

498林业科学研究 第13卷

生根的高,在叶中表现得更为明显。嫩枝扦插带有叶子,而叶是制造营养的器官,同时又能合成生长素等激素。已知IAA的一个非常重要的生理功能就是促进不定根的形成。体内的IAAO 可以氧化IAA[14～18]。难生根植物叶的IAAO活性高,降解IAA的作用强,IAA被破坏较多,向下输送的IAA含量就很少,对诱导生根不利。反之,易生根植物叶中IAAO活性低,其降解IAA能力较低,而输送到茎基部的IAA就较多,对诱导根原基的形成有利。从本试验结果可得出,根据植物叶的IAAO活性高低也许可作为判定植物生根难易的指标之一。当然,不能只简单根据植物叶的IAAO活性高低作为判定植物生根的难易,因为生根还受植物体内生长素之间的相对比例[19]、生长抑制剂的存在与否[20]等因素的综合影响。IAA的存在对不定根的起源和生长是无可否定的。因此,任何影响IAA含量变化的因素的存在势必影响不定根的发生与发展。因而IAAO活性高低直接影响不定根的形成是顺理成章的。

据认为,PPO的存在对不定根的形成又是十分重要的。在体内,酚类物质对不定根的起源和发育起着极其重要的作用[21,22]。用外源的酚类化合物处理菜豆的插条后大幅度提高了插条的发根量[23]。PPO的一个重要作用是催化酚类物质与IAA缩合而形成一种“IAA-酚酸复合物”[7,8],这种复合物是一种生根的辅助因子,具有促进不定根形成的活性[24]。有证据表明,高浓度的酚类物质可以在枝条内积累,从而形成促进生根的物质,促进愈伤组织的分化[22]。有人认为,难生根的枝条与容易生根的枝条之间有一个重要的差别就是其体内酚类物质的含量不同,难生根的枝条含有较少的酚类物质,容易生根的枝条则含有较多的酚类物质[25]。在不定根形成时,体内的酚类物质含量就会下降,据认为这是由于酚类物质在PPO的作用下转变的结果。酚类物质被PPO作用后的产物就能促进不定根的形成[23]。Foo ng等[26]发现,在易生根的Rhododendron ponticum体内的PPO活性就较高,而在难生根的R.Jan Dekens中PPO活性就要低得多。本试验的结果表明,难生根的M LA插条内PPO活性较低,因而可能催化形成的“IAA-酚酸复合物”较少,导致对生根不利。而U6和W5体内的PPO活性较高,可能其合成的这种复合物较多,因而就能较大幅度地提高扦插生根率。可见本试验结果与上述观点是相符的。这也说明PPO在生根中确有可能主要起着催化这种复合物形成的作用。试验结果证明, PPO的活性的高低确实与不定根的发生有关。Bhattacha ry a[27]就曾经证明PPO催化生长素代谢,促进不定根的起源与发育。Molnar等[28]曾经发现,在Hydrangen macrophylla的茎组织产生不定根时,体内的PPO活性剧烈地上升。Habaguchi[29]用胡萝卜的愈伤组织进行培养时,伴随着根点的出现,PPO活性也急剧上升。Upadhyay a等[30]用多效唑处理菜豆的插条时,发现在其生根量大大升高的同时,体内的PPO活性也大幅度上升。在本试验中,利用桉树插条作为研究材料,不仅成功地进一步证实前人用其它植物研究所得的理论,而且为揭示桉树的扦插生根机理提供了新的论据。

本试验的结果还表明了同一植物不同器官的PPO同工酶谱不同,同一器官不同树种的PPO同工酶谱也不同。说明PPO同工酶不但在同一树种中存在器官的特异性,而且在不同植物的同一器官中也存在特异性。同工酶在更精细程度上调节代谢类型,由此控制分化与形态构成。

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Comparison on the Activities and Isoenzymes of Polyphenol

Oxidase and Indoleacetic Acid Oxidase of Difficult-and

Easy-to-root Eucalyptus Species

LI Ming1,HU AN G Zhuo-lie1,TAN Shao-man1,MO X iao-yong2,

L IN Hai-qiu2,LON G Teng2

(1.South China Agricultural University,Guang z h ou　510642,Guangd ong,China;

2.Leiz h ou Fo res try Institute of State Fores try Administration,Zhanjiang　524348,Guangd ong,China)

Abstract:Eucalyptus urophylla M LA clo ne(M LA)w as difficult-to-ro ot species.Eucalyptus urophylla U6clo ne(U6)and Eucalyptus ABL.12W5clone(W5)were relativ ely easy-to-roo t species.The activities o f poly phenol o xidase(PPO)in M LA is low er tha n tha t of U6and W5, but the activity of indo leacetic acid oxidase(IAAO)in M LA was higher than that of U6and W5.The activities of PPO and IAAO and the isoenzym es of PPO in ev ery species had their specificity in ev ery o rgan.The rela tio nship betw een the forma tion and dev elo pment of adv entitio us ro ots a nd PPO and IAAO was discussed.

Key words:Eucalyptus clone;poly phenol oxidase;indoleacetic acid oxidase;roo ting of cutting s

植物生长调节剂3-吲哚乙酸的合成

植物生长调节剂3-吲哚乙酸的合成 一、实验目标 1．掌握利用Fe/HCl 体系将-NO2氧化成-NH2的方法； 2．掌握减压蒸馏中真空泵的使用方法； 3．初步掌握利用氮气置换空气的操作方法； 4．初步掌握压热釜的操作方法。 二、产品特性与用途 3-吲哚乙酸的英文名称：3-Indoleacetic acid ，化学式：C10H9NO2，相对分子质量：175.19。 本品为无色结晶，见光后迅速氧化成红色而活性降低，应放在棕色瓶中贮藏。熔点167～169℃，微溶于水、甲苯，易溶于乙酸乙酯。在酸性介质中不稳定，在无机酸作用下能迅速失去活性。其水溶液也不稳定，但其钠、钾盐比游离酸稳定。通常以粉剂或可湿性粉剂使用。 市售3-吲哚乙酸为人工合成产品，其LD50 = 150 mg / kg （小白鼠腹腔注射）。3-吲哚乙酸可以经茎、叶和根系被植物吸收。它对植物生长有刺激作用，可影响细胞分裂、细胞伸长和细胞分化，也影响营养器官和生殖器官的生长、成熟和衰老，可促进植物生根，提高产量，是一种植物生根调节剂。当用于插枝生根的木本植物、草本植物时，可以加速根的形成；当用于处理甜菜种子时，可提高块茎产量与含糖率，也可以促进胡萝卜的生长。 吲哚乙酸由于见光容易分解，在植物体内容易被吲哚乙酸氧化酶分解，并且价格较贵，所以在生产上应用受到限制，主要用于组织培养，诱导愈伤组织和根的形成。 三、实验原理 1．邻甲苯胺的合成 2．N-甲酰基邻甲苯胺的合成 3．吲哚的合成 4．3-吲哚乙酸的合成 CH 3NO 2Fe H-Cl CH 3 NH 2 CH 3NH 2HCOOH CH 3 NHCHO H -OH CH 3NHCHO ( t - C H ) OK N H CH 3 NH 2CO

实验1：园林树木的扦插繁殖

实验 1 园林树木的扦插繁殖 一实验目的 1 了解扦插的实验原理。 2 掌握扦插的一般实验技术。 二实验材料 枝剪、扦插基质、水壶、盆、锄头等 三实验原理： 利用植物的营养器官的再生能力，产生不定根，不定芽，取根、茎、叶、芽等插在土壤中和其它生根基质中，使其生根、抽枝成为一株完整、独立的新植株。 四扦插的条件： 1 品种：选择易生根植物（杨树，柳树，榕树，黄杨，夹竹桃，爬山虎，月季，蔷薇等）。不易 生根，需要技术处理（松柏类植物） 2 枝条生理年龄：一般取一年生枝条为好。（枝条健壮，均匀，无病虫害、发育情况较好） 3 湿度：扦插后要切实注意使扦插基质保持湿润状态，但也不可使之过湿，否则引起腐烂。 同时，还应注意空气的湿度，可用覆盖塑料薄膜的方法保持湿度，但要注意在一定时间内通气。 4 扦插时间：露地扦插在春秋两季进行，落叶树宜在早春，芽刚萌动前扦插。常绿树发根需要较高 温度，相对可以拖后。 5 温度： 温度对扦插生根快慢起决定作用，最适土壤温度为15-20 度。温度过低生根慢，过高则易引起插穗切口腐烂。所以，如果人为控制温度的条件，一年四季均可扦插。自然条件下，则以春秋两季温度为宜。 6 光照，不宜日光直射。 7 扦插基质：要求基质多孔，通气良好，能保持湿润，为插穗提供水分。同时考虑基质的PH 值 （4---7 ）。常用基质可以是自然砂质土壤、河沙，蛭石（含硅、铝等）矿物质、珍珠岩、腐叶土等。 五扦插一般方法 1 选取生长良好无病虫害的一年生枝条，截去梢部没有木质化的部分和截去过粗的茎干，取枝条 中段部分，长度保留在15 厘米左右，切取的部分保留2—3 个芽，节间距离不宜太长，插穗切口要光滑，上端切口在芽上（ 1 —1.5 ）CM左右，切口面一般呈斜面，防积水。 下端切口面积尽量大，以便生根。常绿树枝条上枝保留1—2 枚叶片。 2. 生长调节剂处理： （1）萘乙酸（NAA稍有毒性，浓度过高对植物有毒害，但萘乙酸盐效果与丁酸相似， 成本较低。一般草本及灌木浓度为5~25 PPm,木本植物处理浓度为25~ 100 PPm, 浸渍时间大约12 小时。 (2) ABT生根粉：推广最多的生根剂是中国林业科学院林研所研制的ABT生根粉，对林 木生根有良好效果。ABT生根粉一般用于浸泡插穗，使用浓度为50?100ppm配 制方法是：

构树的栽培技术

构树的栽培技术 繁殖方式：用种子或扦插繁殖。为克服雌株多浆的果实在成熟时大量落果，影响环境卫生，可利用雄株作接穗，培育嫁接苗种植。 育苗：每年10月份采集成熟的构树果实，装在桶内捣烂，进行漂洗，除去渣液，便获得纯净种子，稍晾干即可干藏备用。由于种粒小，种壳坚硬，吸水较困难，播种前必须用湿细砂进行催芽。春季条播，行距25~30cm，播种时，将种子和细砂混合均匀后撒入2cm深的条沟内，覆土以不见种子为宜，播后盖草，待3周后种子即发芽出土。做好出苗前期管护工作，防止鸟类及鼠害，保证种子的安全越冬。当年生苗木可达到80~90cm，即可出圃造林。 播种：选择背风向阳、疏松肥沃、深厚、不积水的壤土地作为圃地。在秋季翻犁一遍，去除杂草、树根、石块。在播种前1个月进行整地和施肥，整地要做到三犁三耙，深度达到30cm以上，土壤细碎、平整。结合整地每667m2施入粉碎的饼肥150kg或厩肥1000~1200kg。播种床宽1.0m，长8~10cm，床高约15cm，排水沟宽30cm。 播种时间一般在3月中、下旬。播种前要将种子用清水浸泡2~3h，捞出晾干后用倍于种子的细沙混合均匀，堆放于室内进行催芽，要定期查看，保持湿润，当种子有30%裂嘴时，即可进行播种。采用条播方法，行距25cm，播种量每667m20.15kg左右，播种时，将种子和细沙混合均匀后撒入条沟内，覆土以不见种子为度，播后盖草以防鸟害和保湿。当30%~40%幼苗出土时，应在下午分批揭除盖草。 造林：构树造林不受条件和地形地貌的限制，既可集中连片造林也可见缝插针，在沟、塘、库岸、溪流两侧，房前屋后都可种植。种植密度根据营林目的不同而有差别，一般造林密度以株距1.5m，行距2m，每亩约200株为宜；以营造水土保持林和薪炭林为目的，每亩分别以330~660株为宜。定植2年后，要从主干30~50cm处截掉，以促其萌枝条，3~5年即可进入产皮产叶的盛期。 抚育管理：构树幼林地易生杂灌，影响林木生长，为使林相整齐，生长健壮，提高树林的产量和质量，因此，砍杂除灌是林地抚育管理的必要工作，每年要进行1~2次，必要时可进行林地中耕除草和施肥。另外，对散生和成龄老树，要进行适时截干更新，促其抽发枝条，提高单位面积产量，同时也便于采叶取皮。 病虫防治：主要病虫害为烟煤病和天牛。防治方法：烟煤病用石硫合剂每隔15天喷1次，连续2～3次即可。天牛用敌敌畏和敌百虫合剂800倍液喷杀，或用脱脂棉团沾放敌畏原液，塞入虫孔道，再用黄泥等将孔口封住毒杀。 主要价值：构树能抗二氧化硫、氟化氢和氯气等有毒气体，可用作为荒滩、偏僻地带及污染严重的工厂的绿化树种。也可用作行道树，造纸。构树叶蛋白质含量高达20%～30%，氨基酸、维生素、碳水化合物及微量元素等营养成分也十分丰富，经科学加工后可用于生产全价畜禽饲料。 饲用价值：嫩叶可喂猪。采用构树叶为主要原料发酵制成，不含农药、激素。利用生物技术发酵生产的构树叶饲料具有独特的清香味，猪喜吃，吃后贪睡、肯长。根据饲养牲猪品种的不同和生长阶段的不同，饲料消化率达80%以上。 药用价值：中医学上称果为楮实子、构树子，与根共入药，功能补肾、利尿、强筋骨。主治：补肾、明目、强筋骨。构树以乳液、根皮、树皮、叶、果实及种子入药。夏秋采乳液、叶、果实及种子；冬春采根皮、树皮，鲜用或阴干。 性味：子甘、寒；叶甘、凉；皮甘、平。 功能主治 子：补肾，强筋骨，明目，利尿。用于腰膝酸软，肾虚目昏，阳痿，水肿。 叶：清热，凉血，利湿，杀虫。用于鼻衄，肠炎，痢疾。

扦插的种类及方法

扦插的种类及方法 扦插繁殖扦插繁殖的方法有：叶插、茎插、根插、芽插等。 ⑴、叶插 ①全叶插： 以完整叶片为插条。一是平置法，即将去叶柄的叶片平铺沙面上，加针或竹针固定，使叶片下面与沙面密接。落地生根的离体叶，叶缘周围的凹处均可发生幼小植株(起源于所谓的叶缘胚)。海棠类则自叶柄基部、叶脉或粗壮叶脉切断处发生幼小植株。二是直插法，将叶柄插入基质中，叶片直立于沙面上，从叶柄基部发生不定芽及不定根。如大岩桐从叶柄基部发生小球茎之后再发生根及芽。豆瓣绿、球兰、海角樱草等均可用此法繁殖。 将叶片分切为数块，分别进行扦插，每块叶片上形成不定芽，如大岩桐、豆瓣绿、千岁兰等。 ⑵、茎插 硬枝扦插： A、扦插时间 春秋两季均可进行，春季扦插易早，秋季扦插在落叶后，土壤封冻前进行。 B、插穗的采集与贮藏：一般应选优良的幼龄母树上发育充实、已充分木质化的1～2年生枝条作插穗。 贮藏的方法有：室内堆藏和室外沟藏。 C、插穗的剪制：一般长穗插条15～20cm 长，保证插穗上有2～3个发育充实的芽。单芽插穗长3～5cm。剪切时上切口距顶芽1cm左右，下切口在节下1cm左右。 D、扦插：按一定的株行距，将插穗插于基质中，一般株距为10～20cm，行距为20～40cm。 E、扦插后管理：扦插后第一次浇足水，以后经常保持土壤和空气的湿度，做好松土除草工作。 嫩枝扦插： （1）采条 在一日的早晚或阴天采条，主要保鲜，最好随采、随截、随插。 （2）制穗 插穗一般长10～15cm，带2～3个芽，保留叶片的数量可根据植物种类与扦插方法而定。（3）扦插 用生根粉和植物激素处理后扦插，扦插时间最好在早晨和傍晚。扦插深度为插穗长度的1/2。（4）扦插后管理 扦插后保持空气湿度在95%左右，温度最好控制在18～28℃.最好采用全光照自动间歇喷雾系统。 芽叶插： 插条仅有1芽附1片叶，芽下部带有盾形茎部1片，或1小段茎，插入沙床中，仅露芽尖即可，插后盖上薄膜，防止水分过量蒸发。叶插不易产生不定芽的种类，宜采用此法，如山茶花、橡皮树、桂花等。 （3）、根插 利用根上能形成不定芽的能力扦插繁殖苗木的方法。用于那些枝插不易生根的种类。果树和宿根花卉可采用此法，如牛舌草、秋牡丹、肥皂草、毛恋花、剪秋罗、芍药、补血草、牡丹、博落回等花卉。一般选取粗2mm以上，长5-15cm的根段进行沙藏，也可在秋季掘起母株，贮藏根系过冬，翌年春季扦插。冬季也可在温床或温室内进行扦插。根抗逆性弱，要特别注意防旱。 四、影响扦插的因素

促进扦插枝条生根快的东西有哪些

促进扦插枝条生根快的东西有哪些 一、柳枝浸出液柳条中含有较多的生根素，因而用柳条浸出液处理扦插枝条、果树接穗等能促进生根，使接穗成活。具体作法是：选当年生柳条剪成10厘米长的小段，放在水里浸一周左右，待枝条皮层与木质部分离后取出留液备用。把需要扦插的花木枝条剪好扎成小捆，将基部浸在浸出液中一两天，到插条削面形成愈伤组织时再取出，插入培养土中。经过这种办法处理的月季、桂花、石榴、桃树等发根早、成活率高，比对照组高30％左右。在桂花、月季、桃树嫁接时如用柳皮套在嫁接处，成活率达100％，比用其他包扎物成活率高20％以上。具体方法是：选比砧木粗1／3的柳条，抽出中间木质部，留下圆筒皮套，按需要剪成二三厘米长，先套入砧木嫁接位置的下部，待削好的接穗插入砧木后，把柳条皮套向上拉到嫁接处，盖住切口。如不紧可在皮套外用塑料带扎紧，既可保持接口部位不失水，又可提供所需的生长素，促其成活。 二、食糖溶液选用蜂蜜、蔗糖为好，取较易生根的插穗，用5％的糖液浸没基部15至18厘米4至6小时左右，或将插穗在10％的糖液中稍浸片刻，浸透的插穗取出即用。处理生根较慢的插穗时，糖液的浓度按需要加倍即可。 三、米醋溶液用质量较好的米醋，醋与水的配比为1∶100，先按比例配好米醋水溶液，再将葡萄等插条基部浸泡12小时后扦插，成活率大大提高，小苗长得既快又好。 此外，在空中压条时，压条部位环状剥皮1厘米宽，用塑料袋套上，先将下端扎紧，从上口放进培养土，再把上口扎紧。用针筒把柳条浸出液注射进去，1个月注射1次，樱桃、葡萄、月季等品种使用该方法成活率可达100％ 22222 促进插条生根的物理方法主要有哪些？ 取枝宜早剪取枝条以早晨进行为好。早晨花木枝条含水量充足，扦插后伤口愈合快，易生根，成活率高。 选花后枝扦插花后枝养分含量较高，而且粗壮饱满，扦插成活后生根快，易成活。 带踵扦插从新枝与老枝接合处下部2～3厘米处剪下的枝条即为带踵插穗。带踵插穗节间养分多，组织紧密，生根容易，扦插后成活率高，幼苗长势强。适用于桂花、山茶花、无花果等的扦插育苗。 机械处理剥皮：对较难生根的花木品种，扦插前先将插穗表皮木栓层剥去，可增强插穗吸水能力，促进生根。纵刻伤：用刀在插穗上刻2～3厘米长、深至

杂交构树组培快繁技术概况

1发展背景 杂交构树[Broussonetia papyrifera （L ·）Vent ·]为 桑科（Moracea e ）构树属（Broussonetia ）落叶乔木，是中国科学院植物研究所通过现代生物技术和传统杂交育种方法利用光叶楮培育出来的，具有突出抗逆性的速生丰产树种。光叶楮即日本构树，喜光、速生、适生性强，是特用纸（如钱币纸等）的造纸原料，同时具有多种生态保健功能，也是较为优良的园林绿化树种。另外，其树叶中粗蛋白的含量高，Ca 、P 、Zn 等微量元素和氨基酸的含量丰富，是动物和鱼的优质饲料原料，发展前景广阔。我国是世界上最大的纸和造纸原料贸易净进口国，特别是木浆等纤维原料进口量巨大。近年来从日本引进光叶楮作为制浆造纸专用树种，但光叶楮为引进树种，资源有限，一般种植2～3代以后就会退化。目前光叶楮苗木主要靠常规的无性扦插繁殖，但由于材料来源不足，扦插成活率不高，费时费工，难以满足当前大面积栽培及推广的需要。 近两年来，构树组织培养快繁技术发展较快，主要是针对1997年从日本引用的纸浆材专用树种四倍体光叶楮的研究。李际红等采用光叶楮母株茎段为外植体，探讨了不同消毒处理方法对其离体培养的影响，发现在常规消毒剂中加入吐温能取得良好的灭菌效果。孙天洲等利用光叶楮顶芽进行优代再生，探索了其快繁和生根的最佳培养条件。由于光叶楮为新引进树种，顶芽数量有限，孙天洲等进一 步以侧芽为外植体诱导培养，通过调节培养基中激素含量，使不定芽的分化速度大大加快，繁殖系数达 6～7倍，在短期内能够提供大量的优质种苗，加快了 光叶楮推广应用的速度。郁蒙蒙等初步建立了光叶楮叶片和叶柄的高效再生体系，并探索了硝酸银在减轻光叶楮外植体褐化方面的作用，该体系的建立不仅为实现其无性快繁、扩大种源生产提供了一种途径，也为外源基因导入该树种，进行分子育种方面的研究，实现其种质资源的改良打下坚实的基础。但对于改良品种杂交构树的组培快繁的研究报道较少。 杂交构树组培快繁研究不仅可以解决构树种苗大量需求问题，为造纸、饲料等相关产业提供充足苗木来源，还为优良品种的保存、遗传转化和转基因品种培育与筛选打下坚实的理论基础。然而关于构树人工繁殖研究报道较少、起步较晚，加强其繁殖方面的研究，尤其是构树高效再生体系的建立和遗传转化是今后研究的重点。 2组培快繁技术介绍 通过对杂交构树茎段的离体培养和繁殖，探讨 了杂交构树茎段萌发、分化、不定芽生长分化及生根的最佳培养基。为实现其快速无性繁殖、扩大种源生产、保存优良品种提供了一种行之有效的方法，也为杂交构树的遗传转化及转基因品种改良打下了坚实的试验基础。 杂交构树组培快繁技术概况 作者简介：张伟（1984-），女，硕士，主要从事蝴蝶兰、凤梨、红掌、竹芋等花卉组织培养及栽培应用的研究。 张 伟 （山东省聊城市农业科学研究院 聊城252000） 摘要：杂交构树是中国科学院植物研究所通过现代生物技术和传统杂交育种方法利用光叶楮培育出来的，具有突出抗逆性的速生丰产树种。目前光叶楮苗木主要靠常规的无性扦插繁殖，但由于材料来源不足，扦插成活率不高，费时费工，难以满足当前大面积栽培及推广的需要。近两年来，构树组织培养快繁技术发展较快，通过对杂交构树茎段的离体培养和繁殖，探讨了杂交构树茎段萌发、分化、不定芽生长分化及生根的最佳培养基。为实现其快速无性繁殖、扩大种源生产、保存优良品种提供了一种行之有效的方法，也为杂交构树的遗传转化及转基因品种改良打下了坚实的试验基础。关键词：构树；茎段；组织培养；规模化生产 295--

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定

吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理 1、吲哚乙酸产品概述: 吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。 2、试验原理: 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 二、准备仪器及药品 T6新悦型分光光度计离心机 恒温水浴锅天平 研钵试管 移液管烧杯 20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。

1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。 1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。 22 1mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约 90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。 吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一): 试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。用时1ml样品中加入试剂4ml。 试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。用时于样品中加入试剂。试剂B较试剂A灵敏。 三、操作步骤 1(将大豆或绿豆种子于30?温箱中萌发3梍4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。 2(取0.5g下胚轴，置研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液5ml，置冰浴中研磨成匀浆。再按100mg鲜重材料加0.5ml磷酸缓冲液的比例，用磷酸缓冲液洗涤研钵。离心(4000r/min)10分钟，所得上清液即为粗酶液。 3(取试管2支，于一试管中加入氯化锰1ml，二氯酚1ml，IAA2ml，酶液1ml，磷酸缓冲液5ml，混合均匀。另一试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于30?恒温水浴中，保温30分钟。 IAA(175ug磷酸缓冲液处理 MnCl2 2、4-二氯酶液 /mL) (pH6.0) 酚 实验组 1 1 2 1 5 对照组 1 1 2 0 6 4(吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂B 4ml，摇匀，置于30?的黑暗处保温30分钟，使显色。

微生物学实验报告

2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11

一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。

让枝条生根的简易办法

让枝条生根的简易办法 1、米醋水溶剂：选质量较高的米醋，与凉开水按1∶100比例配成米醋水溶液，适宜浸泡如葡萄等果木插穗，使用时将插条下部置溶液内浸泡8～12小时后取出扦插，能显著提高成活率，使扦插苗长得更快更壮。 2、阿司匹林溶剂：用0.01%的阿司匹林溶液浸泡插条，发芽率可明显提高，用0.05%的阿司匹林溶液浸泡移栽苗木，能缩短缓苗期，防止苗木干枯，提高成活率。 3、维生素B12溶剂：取医用维生素B12针剂加凉开水1倍稀释，将插条剪口下部置于稀释液中浸泡5分钟再扦插。既可促进根系生长，又可促进组织愈合。 4、柳枝浸出剂：将抽绿展叶的柳枝嫩条，去叶剪成4～8厘米 的短枝，1公斤柳枝用1.5～2公斤的清水浸泡10天左右，即为柳枝生根液。使用时将花卉插穗浸泡其中5～6小时， 然后扦插。经此处理后的扦插苗一般7～10天即可生根，成活率高且生长健壮。5、蔗糖溶剂：取蔗糖用开水冲成5%～10%的蔗糖溶液，自然冷却后，将较易生根的月季、无花果、枸杞、一品红等花卉插穗基部浸入糖液4～6小时后扦插。 处理生根较慢的插条糖溶液浓度还需加倍（糖液浓度越高，浸泡时间越短）。6、蜂蜜水溶剂：花卉无性繁殖时，通常 应用生长激素促进扦插生根。如没有生长素，可将插条在蜂蜜中蘸一下，然后扦插，能提高成活率，促进生根。7、高

锰酸钾溶剂：将插枝基部放在0.1%～0.5%的高锰酸钾溶液中浸泡10～12小时，取出后立即扦插。8、激素溶剂：有些插枝容易流胶，应在采后立即放入水中，再用激素处理。常用的激素有蔡乙酸、生根剂等。处理前插条基部纵刻伤，效果更好。硬枝一般采用5～10ppm稀释液，插穗基部浸渍12～24小时；嫩枝一般采用10～25ppm溶液，浸12～24小时。另外，将生长素配成2000～4000ppm高浓度溶液进行5秒钟速蘸，生根效果也很好。可以去化学**店买一些奈乙酸,吲哚丁酸或者吲哚丁酸，建议使用吲哚丁酸，这种药剂比较耐储存，这次用不完可以留到下次，而前两种相对比后者容易氧化。然后配上一些水就可以了。在种植前泡生根剂。

生长素

生长素 29.（16分） 向光性是高等植物中广泛存在的生理现象，是植物适应环境变化的一种体现。研究表明，单侧光照射下水稻的根会发生背光弯曲即“负向光性”。为研究IAA对水稻根负向光性运动的影响及有关作用机理，研究人员进行了相关的实验。 （1）已知Ca2+作为信号分子，在植物的多种信号转导及生长发育过程中起着重要的作用。为探究Ca2+是否会影响稻根中IAA的分布，研究人员用加入H2O、CaCl2溶液、LaCl2溶液（Ca2+通道阻断剂）以及后两者混合液的四组培养液分别培养水稻秧苗刚长出的根，在单侧光的照射24h后，四组稻根均出现负向光性，每组根中IAA的分布结果如下图。 由结果可知，在单侧光照下对照组中IAA的分布情况是，而Ca2+作为信号分子。与对照组相比，后两组实验的结果表明Ca2+能，从而进一步证明Ca2+在根负向光性运动中对IAA 分布的影响。 （2）目前已知cpt1基因编码的CPT1蛋白是水稻胚芽鞘向光性运动过程中IAA横向运输的重要载体。为探究cpt1基因是否与水稻根负向光性运动有关，研究人员对水稻秧苗刚长出的根分别进行不同处理，24h后测量稻根弯曲度（处理条件及结果见下表）。同时研究人员还测定了各组稻根中cpt1基因表达量（结果如下图）。 上图中的1～4表示黑暗条件下cpt1基因的表达量，7表示H2O处理组的表达量，5、6、8应分别是处理的结果。由此可知，外源施加的四种试剂对稻根中cpt1 基因表达量的影响与它们对稻根弯曲度的影响是一致的。在此实验结果基础上，并结合科研人员测定的单侧光照下cpt1 基因缺失突变体水稻根的向光侧和背光侧IAA均匀分布这一事实，推测CPT1蛋白在根中也是。 （3）综合上述实验结果推测，在Ca2+信号作用下，单侧光照射下水稻根内的IAA通过 ，导致IAA在向光侧与背光侧分布不均匀；由于根对IAA浓度，使得两侧的生长速度表现为，

吲哚乙酸氧化酶活性的测定

植物生理学模块实验指导 李玲主编 科学出版社 吲哚乙酸氧化酶的测定方法 【实验目的】 学习用比色皿法测定吲哚乙酸氧化酶 【实验原理】 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶懂得作用下，被氧化破坏失去活性。吲哚乙酸氧化酶活力的大小可通过其破坏吲哚乙酸的速度表示，用比色法测定吲哚乙酸的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 分光光度计、离心机、恒温水浴锅、天平、研钵、试管、移液管、烧杯 2.实验试剂 1mmol/L 2,4-二氯酚：称取16.3mg 2,4-二氯酚，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L氯化锰：称取19.8mg MnCl2·4H2O，用蒸馏水溶解并定容至100ml。 1 mmol/L吲哚乙酸：称取17.5mg IAA，用少量乙醇溶解，用蒸馏水定容至100ml。 吲哚乙酸试剂：10ml 0.5 mol/L FeCl3，500ml 35% 过氯酸，使用前混合即可，不光保存。用时将1ml样品加入2ml试剂。 20 mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0） 3.实验材料 同过氧化氢酶 【实验步骤】

1. 称取植物组织材料鲜重1.0g，置于研钵中，加5ml预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆，再加入1ml磷酸缓冲液稀释，4000r/min离心20min，上清液为粗酶提取液。 2. 取试管2支，于1支试管中加入氯化锰1ml、2,4-二氯酚1ml、IAA2ml、粗酶提取物1ml、磷酸缓冲液5ml，混合。 3. 吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂4ml，摇晕。在黑暗条件下，置于30℃恒温水浴中20min，使显色。 4. 将显色的反应液与分光光度计中测定530nm处的OD值。根据读数从标准曲线上查出相应的吲哚乙酸残留量。 5. 配制浓度从0~30μg/ml的吲哚乙酸浓度，按照上述方法，分别测定OD值，绘制标准曲线或计算直线回归方程。 【实验报告】 按照下列公式，计算不同处理的材料吲哚乙酸氧化酶的活力（μg IAA/g鲜重·h）。 式中，C1为反应液中残留的酶IAA量（μg/ml）；C2为无酶提取液中的IAA量（μg/ml）；V1为样品制得的粗酶提取液体积（ml）；V为反应液中粗酶提取物体积（ml）；W为测试材料鲜重（g）；t为反应时间；10为反应液体积（ml）。 【注意事项】 制作标准曲线时，OD值在0.2~0.6时，测量的误差最小，所以当反应液浓度测定的OD 值大于0.6且接近1时，需要稀释后才能进行测定。 【思考题】 反应混合液与吲哚乙酸试剂混合后，为什么要在暗条件下对IAA进行显色反应？

吲哚乙酸的运输详解

吲哚乙酸的运输详解 植物激素特点之一是可以广泛地在植物体内各组织和器官内移动，运输是一种天然的调节特定组织或器官内活性激素水平的手段。 游离态IAA具有极性运输的特点，在植物胚芽鞘、幼茎及幼根中，形态学上端的IAA 只能运向形态学下端，这种现象称为极性运输(po1ar transport)。IAA极性运输是由某些载体介导的主动运输。呼吸链抑制剂氰化物和解偶联剂DNP均能抑制IAA极性运输，说明IAA 极性运输需要有氧呼吸提供能量。另外，植物组织对放射性IAA的吸收受到非放射性IAA 的部分抑制，说明放射性标记与非标记的IAA竞争数量有限的载体位点。 Goldsmith(1977)提出了“化学渗透极性扩散假说(chemiosmotic polar diffusion hypothesis)” （图8-4，见e DH08-04）。该假说认为：位于某个细胞基部的IAA输出载体从细胞内单向输出IAA-，IAA-进入细胞壁空间后即被质子化为IAAH，IAAH扩散通过细胞膜，顺着其浓度梯度进入其下部相邻的细胞内。由于细胞质的pH约为7.2，IAAH进入到细胞质后，几乎所有的都被解离成阴离子IAA-的形式。IAA-不能扩散通过细胞膜，只能依靠输出载体输送至细胞壁空间。按此规律，IAA顺序通过纵向排列的细胞柱向形态学下端运输。在此过程中，位于质膜上的H+-ATPase不断地将H+从胞内泵出，以防止H+在胞内积累，并维持细胞壁酸性环境和适宜的跨膜电势梯度，以提供能量。 现已清楚，IAA-也可通过载体介导的2H+-IAA-同向共运输体进入，质膜上一个小的AUX1/LAX透酶家族是生长素的输入载体，可同时转运2个质子和IAA-同向进入细胞质。PIN家族是IAA的输出载体。 在拟南芥中，存在8个基因编码PIN蛋白，研究表明PIN1、PIN2 、PIN3 、PIN4 和PIN7 都参与了生长素极性运输，它们介导不同组织的生长素输出。PIN1是发现最早的，也是主要负责生长素的从茎顶端向根尖的极性运输。最近几年研究者还发现另外一种依赖ATP 的转运蛋白参与生长素的极性运输，它们属于多种药物抗性/ 磷酸糖蛋白家族(multidrug resistance/ P-glycoprotein，MDR/ PGP)，或ATP 结合盒(ATP-binding cassette ,ABC) 转运蛋白超级家族中的“B”亚家族（ABCB）。ABCB基因发生缺陷的拟南芥和玉米植株均表现为不同程度的矮小，改变向地性，并且生长素的输出减少。它们均匀地分布在质膜上，驱动生长素的依赖ATP的输出，PINs协同ABCBs调控生长素的极性运输。 某些化合物能够专一地抑制IAA极性运输，如2,3,5-三碘苯甲酸(TIBA, 2,3,5-triiodobenzoic acid)、9-羟基氟-9-羧酸(HFCA, 9-hydroxyfluorine-9-carboxylic acid, 又叫形态素)和N-1-萘基邻氨甲酰苯甲酸(NPA, N-1-naphthylphthalamic acid)。TIBA及NPA通过阻止生长素外流而阻止生长素的极性运输。它们的抑制作用均为非竞争性的，说明它们与IAA在输出载体上占有不同的位置，它们与载体的结合引起载体蛋白构型发生改变，抑制载体对IAA输出。

苗木扦插生根最快方法

苗木扦插生根最快方法 2015-01-30润丰园林 在苗木生产中为了促进那些扦插生根困难、生根速度缓慢的树种较快生根及提高扦插成活率。常用的方法有以下几种： 1、物理方法处理 （1 ）机械处理 常用环剥、刻伤或缢伤等方法。即在生长后期剪穗前20 ~30d, 先刻伤、环割枝条基部或用麻绳等捆扎，以截断养分向下运输的通道，使养分集中，枝条受伤处逐渐膨大，到休眠期再将枝条从基部剪下进行扦插。由于养分集中贮藏有利生根，不仅提高成活率，而且有利于苗木的生长。 （2 ）黄化处理 在进行插条剪取前，用黑色的布、纸或薄膜等遮光，使枝条在黑暗下生长一段时间后，因缺光而黄化、软化，从而促进根组织的生长，延迟芽组织的发育，促进插后生根。这种方法适用于含有多量色素、油脂、樟脑、松脂等树种，因为这些物质常抑制树体中生长细胞的活动，阻碍愈合组织的形成和根发生。 （3 ）加温法 加温法有2种方法：一是增加插床的底温；二是温水浸烫枝条。 ①一般地温高于气温3 ~5 ℃时，有利于插条生根。硬枝扦插多在早春进行，这时气温升高较快，芽较易萌发抽枝，消耗了插条中贮藏的养分，同时还增加了插条的蒸腾作用。但这时地温仍较低，没能达到生根的适宜温度，因而造成插条的死亡或降低成活率。可采用电热丝来增加土壤的温度或使用热水管道来增加底温，以促进扦插成活。 ②温水浸烫又称温汤法。就是将插穗的下端放在适当温度的温水中浸泡后，再行扦插，也能促进生根。有些裸子植物，如松、云杉等，因含有松脂，常阻碍愈伤组织的形成且抑制生根，可用温水处理2 h 后进行扦插，可获得较好的生根效果。 2、生长激素及其他药剂的处理 （1 ）生长激素的处理

生长素

生长素 生长素（auxin)是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素，英文简称IAA，国际通用，是吲哚乙酸（IAA）。4-氯-IAA、5-羟-IAA、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸等为类生长素。1872年波兰园艺学家谢连斯基对根尖控制根伸长区生长作了研究；后来达尔文父子对?草胚芽鞘向光性进行了研究。1928年温特首次分离出这种引起胚芽鞘弯曲的化学信使物质，命名为生长素。1934年，凯格等确定它为吲哚乙酸，因而习惯上常把吲哚乙酸作为生长素的同义词。 生长素在扩展的幼嫩叶片和顶端分生组织中合成，通过韧皮部的长距离运输，自上而下地向基部积累。根部也能生产生长素，自下而上运输。植物体内的生长素是由色氨酸通过一系列中间产物而形成的。其主要途径是通过吲哚乙醛。吲哚乙醛可以由色氨酸先氧化脱氨成为吲哚丙酮酸后脱羧而成，也可以由色氨酸先脱羧成为色胺后氧化脱氨而形成。然后吲哚乙醛再氧化成吲哚乙酸。另一条可能的合成途径是色氨酸通过吲哚乙腈转变为吲哚乙酸。 在植物体内吲哚乙酸可与其它物质结合而失去活性，如与天冬氨酸结合为吲哚乙酰天冬氨酸，与肌醇结合成吲哚乙酸肌醇，与葡萄糖结合成葡萄糖苷，与蛋白质结合成吲哚乙酸-蛋白质络合物等。结合态吲哚乙酸常可占植物体内吲哚乙酸的50~90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。 植物组织中普遍存在的吲哚乙酸氧化酶可将吲哚乙酸氧化分解。 生长素有多方面的生理效应，这与其浓度有关。低浓度时可以促进生长，高浓度时则会抑制生长，甚至使植物死亡，这种抑制作用与其能否诱导乙烯的形成有关。生长素的生理效应表现在两个层次上。 在细胞水平上，生长素可刺激形成层细胞分裂；刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长；促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。 在器官和整株水平上，生长素从幼苗到果实成熟都起作用。生长素控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制；当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性；当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性；吲哚乙酸造成顶端优势；延缓叶片衰老；施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落；生长素促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。 近年来提出激素受体的概念。激素受体是一个大分子细胞组分，能与相应的激素特异地结合，尔后发动一系列反应。吲哚乙酸与受体的复合物有两方面的效应：一是作用于膜蛋白，

生长素的发现(含详解)

生长素的发现 一、单选题 1.选取某种植物生长状况相同的四组枝条进行如图处理，其中甲、乙、丙切去顶芽， 丁保留顶芽．将切下的乙顶芽放回原位置，将切下的丙顶芽放置在琼脂块上一段时间后将琼脂块置于原顶芽位置．四组枝条均给予相同的单侧光照．下列叙述正确的是（） A. 最先发育为侧枝的是侧芽1和4 B. 乙组枝条在单侧光下表现为直立生长 C. 丙组枝条在单侧光下背光侧生长素多于向光侧 D. 若此实验在黑暗中进行，实验现象不变的是甲和丙 解析：A、最先发育成侧枝的是侧芽1，因为无顶芽，侧芽的生长素浓度降低，促进侧芽发育，A错误； B、乙组枝条向光弯曲生长，单侧光引起生长素分布不均，背光一侧多，生长素极性向 下端运输，使背光一侧生长快，植物表现出弯向光源生长，B错误； C、感光部位是顶芽，则单侧光刺激对琼脂块中生长素的分布没有影响，丙植株直立生 长，C错误； D、甲、丙均无尖端，所以生长素的分布与单侧光刺激无关，因而照光和不照光对其实 验结果无影响，D正确． 故选：D． 2.下图所示条件下，一段时间后，燕麦胚芽鞘生长状况一致的是 A. ③④ B. ①③ C. ②④ D. ①④ 解析：①垂直光照，燕麦胚芽鞘直立生长；②燕麦胚芽鞘尖端下部右侧放 上琼脂片，生长素可透过琼脂片，左侧光照，将向左弯曲生长；③燕麦胚 芽鞘尖端放上琼脂块，没有生长素，燕麦胚芽鞘不生长，也不弯曲；④燕 麦胚芽鞘尖端下部放上云母片，生长素无法透过云母片，燕麦胚芽鞘不生 长，也不弯曲。综上所述，A正确，BCD错误。故选A。 3.下面是生长素发现过程中的部分实验示意图，根据图中信息判断，下列说法正确的 是

A. 实验一证明胚芽鞘尖端产生了某种刺激 B. 鲍森·詹森的实验二证明胚芽鞘尖端产生的刺激可以通过琼脂片传递给下部 C. 实验三证明胚芽鞘弯曲生长与光照无关 D. 实验四证明造成胚芽鞘弯曲的刺激是一种化学物质 解析：A.实验一自变量为尖端是否感光，尖端感光向光弯曲生长，否则直立生长，说明感受单侧光刺激的是胚芽鞘尖端，A错误； B.实验二中，无尖端的胚芽鞘不生长，尖端与下部隔断的胚芽鞘可以生长，说明胚芽鞘尖端产生的影响可以透过琼脂片传递给下部，B正确； C.实验三中，尖端产生的刺激在其下部分布不均匀，使得胚芽鞘弯向对侧生长，说明胚芽鞘的弯曲生长是尖端产生的刺激在其下部分布不均匀造成的，C错误； D.实验四中，可以证明造成胚芽鞘弯曲的原因是尖端产生了一种化学物质在其下部分布不均匀造成的，另外缺少空白对照，D错误。 故选B。 4.如图甲、乙、丙、丁为胚芽鞘的系列实验,下列有关实验现象和分析的叙述不合理的 是 A. 图丙中胚芽鞘Y的生长现象是向光弯曲 B. 图乙琼脂块中生长素的含量左多右少,主要是生长素在胚芽鞘尖端横向运输的结果 C. 图甲中的胚芽鞘向光生长 D. 图丁胚芽鞘向右弯曲,是生长素在其下端分布不均匀的结果 解析：A.实验丙中胚芽鞘Y不生长，原因是生长素只能由植物的形态学上端运输到形态学下端，A错误； B.图乙琼脂块中生长素的含量左多右少，主要是受到单侧光照使生长素横向运输的结果，B正确； C.图甲中的胚芽鞘受到单侧光照，向光生长，C正确； D.图丁胚芽鞘向右弯曲，是生长素在其下端分布不均匀的结果，D正确。 故选A。 5.如下图所示，a、b、c、d四个琼脂块中，a、c含生长素，下列不生长的胚芽鞘是 A. ① B. ② C. ③ D. ④

史上最简便最靠谱的矿泉水瓶扦插月季方法(附图) (1)

花卉知识 喜欢样月季花的朋友们都知道，月季繁殖以扦插和嫁接为主。而对于多肉植物则可以枝插和叶插。一般月季扦插在春季或初夏、早秋、梅雨季节、晚秋皆可进行。春插，剪取15厘米长的中段健实壮枝，保留3片叶子，插入土中三分之二，注意遮荫、浇水，插枝3~4周即可发芽。夏季插枝时下端的剪口须在节下，这样做有利于植株伤口愈合和生根，每天清晨要喷水，约20天后即可发芽。扦插时如能在插枝下端用500~1000毫克/升吲哚丁酸或500毫克/升的吲哚乙酸盐浸泡1~3秒，可促进植株生根。下面向大家介绍一种最简便的月季花扦插方法：矿泉水扦插法矿泉水瓶大家平时都比较常见，一般有人喝完就扔了，其实完全可以把它回收再利用用来扦插月季花，这样既环保又节约资源。大家都可以试一试这个方法哦前期准备工作：一瓶矿泉水。由于瓶装矿泉水没有病菌,还含有各种矿物质。生根粉剂，准备一袋用无菌水可以溶解的生根粉剂(花店有售)。插穗必须选当年开过花且没有长出嫩叶的枝条作插穗(长出嫩叶的枝条也行,但成活率不高)。先取插穗2～3节,插穗底下用利刀削平,上面削成45度角就行了(特别要注意不能用带病菌的枝条作插穗)。操作方法①先把生根粉剂用无菌开水溶解开,浓度0.2%。②把矿泉水瓶先用利刀割成一个个小三角口,以便扦插用。③用注射器吸一些已事先溶解好的生根粉剂溶液,注射到矿泉水瓶里。④再把备好的插穗放到矿泉水里,插穗深度约1/3就可以了。 上图中，两个环球盆里是此前瓶内水插生根后转土培的4颗法国莫奈，其中有1颗水转土时犯了大忌用营养土培养导致一开始僵苗，后转素土

才开始长。两环球盆之间的6个矿泉水瓶里有8根法国莫奈的枝条; 其中1个生根，4个又明显愈伤组织（大致半个月前水插的），另三根是刚刚水插的； 最右边那个矿泉水瓶里是红梅枝条（7天前水插的，红梅愈伤组织长的太难了） 优点：1、矿泉水是干净卫生的，可以为伤口的愈合营造较为清洁的环境，因此死亡率很低。2、矿泉水里有机物等杂质很少，瓶开口也较小，病菌、藻类的孢子不易落入，水不容易变质发霉，也不易长绿藻。个人实践证明，在整个扦插周期内，无需换水，瓶内依然清澈如故。3、蒸发的水汽使得瓶内湿度高，等效于光雾、喷水、浇水等措施。扦插之初可以保留更多的叶片，更好的光合作用有利于生根。4、瓶内高湿的环境能有效抑制红蜘蛛的生长。（红蜘蛛喜欢干燥的环境）5、瓶口小，从瓶口蒸发流失的水汽也少。反正我从5月1日-6月1日的扦插期间从未添加新水。 缺点：不适合大面积繁殖苗。 注意事项：1、太阳直射可能会造成瓶内水温上升明显。为了避免水温过高烫死枝条，可以用白色的A4纸等做遮挡。水温的控制，自己拿捏好。2、不要选择带黑斑的叶子和枝条扦插，高湿的环境可能会让病菌在枝条和叶子上蔓延3、每瓶放1-2根枝条为宜4、不要盖瓶口 醉花网在这里提醒大家一点：夏天扦插一定要控制好水温。 碧玉因其翠绿的外观而深受花友喜爱，碧玉又名豆瓣绿、椒草，为胡椒科常绿多年生肉质草本植物，是一种特别适合放于办公室、茶几，或者一些博古架上当观赏的一种小巧绿色植物，因为颜色比较的清雅，所以，给居室增添了一抹新意。碧

吲哚乙酸氧化酶活性测定

吲哚乙酸氧化酶活性的测定 一、原理 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 二、仪器及药品 T6新悦型分光光度计离心机 恒温水浴锅天平 研钵试管 移液管烧杯 20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0（见附表2）。 1mmol/L2，4—二氯酚：称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。 1mmol/L氯化锰：称取MnCl2·4H2O 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。 1mmol/L吲哚乙酸：称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。 吲哚乙酸试剂A或B（任备其中之一）： 试剂A：15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸（比重为1.84），500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。用时1ml样品中加入试剂4ml。 试剂B：10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。用时于样品中加入试剂。试剂B较试剂A灵敏。 三、操作步骤 1．将大豆或绿豆种子于30℃温箱中萌发3梍4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。 2．取0.5g下胚轴，置研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液5ml，置冰浴中研磨成匀浆。再按100mg鲜重材料加0.5ml磷酸缓冲液的比例，用磷酸缓冲液洗涤研钵。离心（4000r/min）10分钟，所得上清液即为粗酶液。 3．取试管2支，于一试管中加入氯化锰1ml，二氯酚1ml，IAA2ml，酶液1ml，磷酸缓冲液5ml，混合均匀。另一试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。一起置于