绣球组织培养技术的研究
文章编号:1002-2724(2002)02-0020-03
绣球组织培养技术的研究
李际红,孟凡志,张有朋
(山东农业大学职业技术学院,泰安 271000)
摘要:通过对绣球的组培快繁试验,研究了绣球嫩茎在不同激素种类、浓度条件下对芽诱导及增殖的影响。筛选出适宜的启动培养基、分化培养基及生根培养基配方。
关键词:绣球;组织培养;繁殖率;分化率
中图分类号:S723.1+32 文献标识码:A 绣球Hydrangea macrophylla 亦叫八仙花,属虎耳草科落叶灌木。原产我国中部和南部,现南北都有栽培,喜半阴、温暖、湿润的环境,要求富含腐殖质,湿润、排水良好的酸性土壤,pH4.0～4.5。其花色与土壤的酸碱度有密切联系。落叶灌木、丛生,高1～4m ,伞房花序,顶生呈球形,初开时白色,后转蓝色,将谢时粉红色,花期5～7月,花期长,花大饱满,现广泛栽培,市场需求量很大,仅依靠扦插远远不能满足市场的需求,同时由于栽培管理措施不当,性状易发生退化。利用组织培养可对其进行快速繁殖推广,出苗整齐,可周年生产,不受季节限制,实现工厂化育苗。
1 材料与方法
1.1 试材处理
从绣球植株上剪取约2.0～3.0cm 长的嫩茎,去掉叶子,先用自来水冲洗,再用毛刷擦上肥皂反复擦
洗,然后放在水中冲洗。在无菌条件下,依次用70%的酒精浸泡10～20s ,0.1%的升汞溶液浸泡6～8min ,无菌水冲洗5～6次,最后将处理好的嫩茎切
成约0.5～1.0cm 长的带芽茎段,接种在预先配制好的启动培养基上。1.2 试验方法
侧芽诱导采用MS 培养基,加不同浓度的细胞分裂素6-BA 和不同浓度的生长素NAA 。芽增殖采用不同浓度的6-BA 和NAA 搭配;不同浓度的细胞分裂素6-BA 、K T 和生长素NAA 0.1搭配;生根采用不同浓度的生长素I BA 进行试验。激素使用量见表1～6。每个试验设置重复3次,每重复接种30瓶。1.3 培养条件
培养基pH 调至5.8～6.0,以琼脂为固定剂,外加蔗糖2.5%～3.0%,接种材料置于20～40W 的日光灯下,光照时间12h ,光强2000～2500lx ,温度控制在25℃～28℃。
2 结果与分析
2.1 不同浓度的6-BA 和NAA 组合对绣球侧芽诱
导的影响
以MS 为基本培养基,添加不同浓度的细胞分
收稿日期:2002-02-01
(筒状花)数量存在极显著差异。随着枝角的加大,
有效花增多,当枝角大至60°时,有效花最多,当枝角大于90°时,枝势减弱,有效花减少(见表3)。
表3 开角对石榴有效花数量的影响
枝角直立
>90°30°90°60°有效花(个)0.360.70 4.0 5.9 6.1差异情况
A
A
B
C
C
注:字母不同者为差异显著。
3 小结
石榴幼旺树拉枝开角,有利于提高花器质量,有利于形成结果枝,合理的枝条角度为60°～90°。
拉枝开角对于缓和石榴幼旺树新梢生长有显著效果,在一定范围内,角度越大,新梢生长量越小,但对于生长势弱的石榴树,需在树体复壮的基础上,拉枝整形。
?
02?2002年第2期总139期 山东林业科技Shandong F orestry Science and T echnology
2002
N o.2
裂素6-BA和不同浓度的生长素NAA对侧芽诱导,试验结果见表1。
表1 不同浓度的6-BA和N A A组合对绣球侧芽诱导的影响
6-BA(mgΠL)NAA(mgΠL)接种数诱导个数平均诱导率(%)
1.00.130824
2.00.1302480
3.00.13030100
4.00.130930
3.00.01301030
3.00.05302480
3.00.13030100
3.00.2302583
3.00.530824
外植体接种2周后调查,腋芽膨大萌动,长出叶片。为了筛选出合适的激素配比和浓度,首先固定NAA0.1,对不同的6-BA进行试验,从表1可以看出,6-BA
3.0
诱导效果最好,达100%,浓度过高、过低诱导效果均不理想。6-BA选定后再选NAA,从表1可以看出,NAA对诱球的启动是个限制因子,当NAA浓度超过0.2mgΠL,诱导率显著降低,同时腋芽停止生长,因此NAA在诱导启动过程中起决定作
用。所以绣球的启动培养基上应以6-BA
3.0、NAA0.05-0.2为宜,根据试验结果,认为6-BA3.0+ NAA0.1为最适浓度配比。
2.2 不同浓度的6-BA和NAA组合对绣球分化出苗的影响
MS为基本培养基,3种浓度的6-BA和5种浓度的NAA组合,对绣球分化出苗、生长的影响,见表2。
表2 不同浓度的6-BA和NAA组合对绣球繁殖系数
和嫩梢长度的影响(培养35d调查)
6-BA浓度(mgΠL)
NAA浓度(mgΠL)
0.010.050.10.20.5
1.02Π0.454Π0.516Π0.835Π0.862Π0.48
2.04Π0.526Π0.616Π1.104Π1.054Π0.55
3.08Π0.4614Π0.5212Π1.3510Π1.206Π0.62
注:表中数字为繁殖芽数Π嫩梢长度(cm)。
从表2可以看出,芽的增殖和丛生芽的生长,不仅取决于6-BA和NAA的绝对数量,而且决定于两者的相对比例。随着6-BA浓度的增加,繁殖系数增加,然而可以看出,对于丛生芽的生长量来说, NAA是限制因子。低浓度的NAA,丛生芽的生长极其缓慢,高浓度的NAA又限制丛生芽的生长。由表中可以看出,6-BA的适宜浓度2.0～3.0mgΠL,NAA 的适宜浓度0.1～0.2mgΠL,此时丛生芽增殖最好,新梢的生长量最大,丛生芽增殖在10倍以上,新梢生长在1.2cm以上。
2.3 继代增殖
将上述获得的无菌芽转接到分化培养基上,进行增殖培养,扩大它的繁殖系数。为确保获得最佳的繁殖系数,进行分化培养基的筛选,同时在转接过程中,由于酚类物质的产生,造成继代培养污染率增高,又采用了不同浓度的抗生素及活性碳进行试验探讨。
2.3.1 不同浓度的6-BA和NAA配比对芽增殖的影响
MS为基本培养基,在各种培养基中均添加G A0.5,蔗糖25gΠL,琼脂6.0g,培养35～45天,统计结果见表3。
从试验结果可看出,适宜的NAA和6-BA的配比,分化效果就好,不仅分化芽的数量多,且苗木粗壮,叶色浓绿,当6-BA用量从2.2mgΠL增加到3.0 mgΠL时,对芽的作用效果明显,6-BA用量继续增加分化率降低;从NAA用量看,NAA
0.1-0.2适宜,超过0.5mgΠL芽的增殖减少。因此,激素用量不宜过多。
表3 6-BA和NAA不同浓度搭配对芽增殖的影响
6-BA(mgΠL)NAA(mgΠL)平均分化率(%)
2.0020
0.150
0.260
2.2050
0.1100
0.280
3.0035
0.1100
0.290
4.0030
0.160
0.270
继代增殖适宜的培养基为:
(1)MS+6-BA
2.2
+NAA0.1+G A0.5
(2)MS+6-BA
3.0
+NAA0.1+G A0.5+活性碳1.0gΠL
(3)MS+6-BA
3.0
+NAA0.2+G A0.5+活性碳1.0gΠL
在以上3种培养基上,表现为新梢生长迅速,苗
?
1
2
?
第2期 李际红等:绣球组织培养技术的研究 2002年
高达2～3cm ,5～8个节,叶色浓绿,叶片大,长势旺,转接的茎段上的每个芽可以分化4～6个丛生芽,增殖倍数可达10倍,35d ～45d 继代1次,1年可继代10次,增殖数量较大。2.3.2 不同细胞分裂素对芽增殖的影响不同浓度的细胞分裂素6-BA 、K T 与生长素NAA 0.1搭配,培养35d ,观察分化的芽数及芽生长状况,见表4。
表4 不同浓度的6-BA 、K T 对芽增殖的影响
激素浓度(mg ΠL )分化率(%)芽生长状况
6-BA
2.050芽粗壮,分化率低
2.2
90
芽粗壮,分化率高,每个芽产生了4-6个丛生芽,生长良好
3.095
芽粗壮,分化率高,每个芽产生了5-8个丛生芽,生长良好
K T 2.060芽小,生长弱,分化较好,叶子发黄2.270芽小,生长较好,分化较好,叶色正常3.0
50
芽小,生长弱,分化较差
由表4可以看出,6-BA 增殖的效果优于K T ,
而且6-BA 价格低廉,在生产上常用6-BA 。2.3.3 防止酚类物质对转接污染的影响
在继代繁殖过程中,发现绣球无菌苗的茎段,易形成酚类物质,造成转接时污染率增加。因此,采用不同浓度的抗坏血酸和活性碳进行处理,结果见表5。
表5 不同浓度的Vc 降低分化培养中的污染率
Vc (mg Πl )污染率(%)
Vc Π活性碳(mg ΠL Πg ΠL )
污染率(%)
105020Π0.55203020Π1.0 1.530
40
20Π2.0
1.8
根据试验结果,单独加Vc 效果不明显,污染率
比较高,达30%～40%,加入活性碳效果明显,尤其
是Vc20mg ΠL Π活性碳1.0g ΠL ,使污染率大大降低,仅为1.5%,活性碳2.0g ΠL 抗污染效果也很好,但是苗木生长受到一定程度的影响。因此,在分化培养基中添加20mg ΠL 的Vc ,1.0g ΠL 的活性碳,可使污染率降低到1.5%,及时吸收了酚类物质,加速了绣球的快速繁育。2.4 生根培养
分化增殖到3～4cm 高时,进行生根培养,以1Π2MS 作基本培养基,添加琼脂6.0g ΠL 、蔗糖15g ΠL ,采用不同浓度的I BA 进行生根试验,选出最佳的生根培养基,结果见表6。
表6 不同浓度的I BA 对生根的影响(培养25d 结果)
I BA (mg Πl )生根率(%)
根数Π株平均根长(cm )开始生根天数(d )
0.160.3 3.4 2.4120.25
95.512.1 2.1100.590.68.5 1.2101.0
55.2
5.6
0.8
8
表6结果可以看出,随着I BA 浓度的加大,开始生根的天数缩短,I BA 浓度从0.25～0.5mg ΠL ,随浓度加大,生根率、每株的根数均增加,I BA 1.0生根率下降,且多形成粗短的大根。表明,I BA 0.25-0.5生根的效果最好,生根快,根数多,根系分布均匀、生长正常。
3 结论
3.1 通过对6-BA 和NAA 不同浓度的搭配试验,
绣球启动培养基中以6-BA 3.0+NAA 0.1较为适宜;分化培养基中6-BA 的适宜浓度2.0～3.0mg ΠL ,
NAA 的适宜浓度0.1～0.2mg ΠL ;继代增殖适宜的培养基是(1)MS +6-BA 2.2+NAA 0.1+G A 0.5;(2)MS +6-BA 3.0+NAA 0.1+G A 0.5+活性碳1.0g ΠL ;(3)MS +6-BA 3.0+NAA 0.2+G A 0.5+活性碳1.0g ΠL 。3.2 针对绣球无菌苗继代繁殖时酚类物质的产生,
在分化培养基中添加20mg ΠL 的Vc ,1.0mg ΠL 的活性碳,可大大降低继代培养时的污染率。
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22?第2期 山东林业科技 2002年
花烛组织培养的研究
文章编号:100724961(2000)0120069206 花烛组织培养的研究 Ξ 王进茂,郑均宝,高秀丽,徐振华,张法勇 (河北农业大学林业生物技术实验室,保定 071000) 摘要:为了找出一条适合花烛工厂化生产的最佳组织培养程序,以茎尖、叶、根等作为外植体诱导愈伤组织发生,进而诱导不定芽的发生。结果表明:黑暗有利于花烛愈伤组织的诱导和生长,其最佳培养基为MS +6-BA 017mg/L +K T 013mg/L 。光照有利于芽的发生,其最佳培养基为MS +6-BA 015mg/L +K T 015mg/L 。生长素不利于花烛愈伤组织和芽的诱导及增殖培养。花烛增殖培养合适的代数以20次为宜。生根培养基为1/2MS +I BA015mg/L 。关键词:花烛;愈伤组织;不定芽增殖;生根中图分类号:Q94311 文献标识码:A 花烛(Anthuriun andreanum Lind.)又名火鹤、灯台花、安祖花,为天南星科花烛属多年生草本植物,是世界名贵的切花及观赏植物。其原产地为哥伦比亚,因此又名哥伦比亚安祖花。现世界各地均有栽培。我国从80年代开始大批引进,在香港、广州、福建偶有露地栽培,多在温室中培养。其繁殖方法除分株外,也可以种子繁殖,但从授粉到种子成熟需6～7个月,甚至更长,且种子不能储藏。播种后历经2～3a 才能长到产花、分株的大小,另外 种子繁殖有较大的变异[1]。早在70年代,国外就开始了花烛组织培养的研究,并已取得较大成功[2,3,4]。国内也已开始了这方面的研究[5,6]。我国北方温室培养的切花用花烛及盆栽花烛,也多用组织培养法繁殖,本文意在找出一条适合花烛工厂化生产的较好的培养程序。 1 材料与方法 111 材料 盆栽花烛植株及花烛无菌生根试管小植株。112 方法 11211 盆栽花烛叶片的灭菌和接种 盆栽花烛叶片按发育状态分为幼叶(叶片紫红色,未 展开)、初展叶(叶片刚展开,叶片开始变绿)、中龄叶(叶片生长发育到最大,呈黄绿色)、老龄叶(已停止生长的叶子,呈深绿色)。从盆栽花烛植株上取不同叶龄的叶片,用清水冲洗干净。在无菌条件下,先用75%的酒精漂洗2min ,接着用无菌水冲洗1次,再用1‰的氯化汞溶液漂洗5min ,然后用无菌水冲洗4～5次,切成约015cm ×015cm 的方块接种到培养基中。 Ξ 收稿日期:1999-04-09;修改稿收期:1999-07-06 王进茂:男,1970年生,讲师,主要从事组织培养研究工作。 第15卷第1期河 北 林 果 研 究 V ol 115N o 112000年3月HEBEI JOURNAL OF FORESTR Y AN D ORCHAR D RESEARCH Ma r.2000
月季组织培养技术研究
月季组织培养技术研究 摘要：以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA）和生长素(NAA)， 以及用不同外植体部位筛选出最适合月季腋芽萌发的培养基和最佳外植体部位。 实验结果表明：诱导侧芽萌发以MS+6-BA2.0mg/L培养基效果最好，外植体部位 以中部枝条发芽率最佳,为80%。 关键词：月季；组织培养；快速繁殖 Abstract: Use MS as basic medium ,with different concentration of cytokinin and auxin,a nd use different part of the stem as explant for tissue culture to select the suitable medium and best explants site for the induction of Rosa chinensis. The results showed that MS +6B A2.0mg / L is the suitable medium for bud germination, and the middle part of the stem ist he best explant. Keywords: Rosa chinensis, tissue culture, rapid propagation 月季（Rosa chinensis）是蔷薇科落叶或半长绿灌木，其花色艳丽、香味浓郁，是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。由于其分布极广、适应性良好、栽培容易等优点，加之月季四季常青、花期长、花色多等特点，使得在园林和路带绿化以及庭院居室的盆栽美化和切花等方面都得到广泛的应用。月季在观赏植物中具有很高的地位。月季花型大、美丽、幽雅、高贵，深爱各国人民喜爱，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。被誉为“花中皇后”之美称，深受人们喜爱。 月季通常采用扦插和嫁接繁殖，一些名贵品种扦插不易生根，主要是靠芽接繁殖[1]。而芽接速度慢，因而造成优良品种苗木供不应求。应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期，达到快速繁殖优良品种的目的。近年来随着生物技术的不断发展与更新，用植物组织培养的方法快速繁殖各种花木技术得到了普遍重视和广泛应用，关于月季的离体培养、根诱导及移栽问题，以有了不少报道[1、2、8、9、10]。由于受基因影响，不同品种之间的组织培养特性表现出一定的差异[2]。因此讨论不同品种组培快繁的培养条件，特别是培养基中适宜的不同激素配比仍具有重要价值，另外选择适合接种的外植体不同部位也会影响其发芽率。本实验以月月红月季品种为材料进行了侧芽的诱导和筛选出适合月季组织培养最佳外植体部位的组织培养特性研究，试图找出适合月季品种的组培快繁的最佳激素配比的培养基和最适合培养的外植体部位。 1 材料与方法
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
国内外植物组织培养技术的差距
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
植物组织培养
植物组织培养作业姓名： 班级： 学号： 学院：
植物组织培养在花卉生产上的应用 摘要：植物组织培养在花卉产业中应用非常广泛, 组织培养技术促进了花卉的快速繁殖和生产脱毒苗及其在花卉产业中的应用，具有广泛的应用前景。 植物组织培养（tissue culture）是指在无菌条件下将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工配制的培养基上,给予适当的培养条件,使其增殖、生长、分化形成小植株的一种新型繁殖方法。是当前快速繁殖植物新品种的最重要方法。植物组培育苗技术在我国已得到广泛应用,其研究的深度和广度在国际上都居先进水平,但其产业化程度不高,据不完全统计,目前我国花卉组培苗的年产量约为0.5亿株，发展空间广阔。 1 、花卉组培育苗概况 传统的花卉生产大多采用播种、扦插、分株等方法进行繁殖,其繁殖系数低、苗木质量差、繁殖周期长、品种推广慢,且易受季节和自然条件的限制,严重阻碍了花卉业在我国的迅速发展。组培技术的研究几乎涉及到了所有重要的花卉,其中,兰花是最早运用该技术也是最成功的花卉。目前,国际上80%~85%的兰花都是用植物组织培养法进行脱毒和快速繁殖的。组培技术为花卉的快速繁殖和无病毒苗的获得提供了一条经济有效的途径。 植物组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一,经组织培养,可增加繁殖系数,加快繁殖速度,生产出种性纯、品质好、产花量高的生产性用苗。有的花卉植物靠分株来增加数量是非常难的,利用组织培养可在短期内迅速而且大量的繁殖与母株一模一样的种苗。还有一些花卉本身是三倍体或多倍体,很难产生种子,因此就无法进行有性繁殖。利用组织培养技术还可以迅速的繁殖苗木,满足生产的需求。利用植株的病害传递给子代,从而达到脱毒的目的。如今,脱病毒技术已被部分花卉所应用。利用组织培养技术保存种质资源还有诸多优点: (1)占空间小; (2)可防止病虫; (3)可以迅速大量繁殖; (4)费用低; (5)便于交流。 此外，组织培养还具有产生单倍体植株、缩短育种周期、改良品种、不受季节限制、有利于工厂化生产等优点。 2、花卉组培育苗技术的产业化应用现状 到20世纪90年代,组培育苗技术在花卉生产中的应用得到了迅猛发展,为种苗的工厂化生产提供了可靠的技术保障,产业化应用已遍及到花卉生产的多个领域。特别在鲜花的规模化生产上,主要以香石竹、满天星、情人草、月季、蝴蝶兰、非洲菊、勿忘我、菊花等种类为主,这些鲜切花种苗的大多是组培苗或以组培苗为母本的扦插苗,其组培苗生产量占植物组培苗总量的20%左右;观叶植物中主要是一些热带雨林类花卉，如红掌、绿巨人、红宝石、龟背竹、花叶芋、蕨类等,其组培苗数占植物组培苗总量的11。7%左右;球根花卉组培苗产业发展较快的主要有百合和唐菖蒲,马蹄莲的组培苗也正在向产业化方向发展,但规模较小,郁金香的组培目前尚以研究试验为主;肉质多浆类花卉主要是解决生长速度慢、增殖率低的问题,除芦荟等少数种类形成产业化生产外,其他如仙人球类植物,其组培研究及应用都较少;兰花的组培育苗早在上世纪70~ 80年代就风靡世界,其组培苗数占植物组培苗总量的比例几乎达到40%。在我国台湾省和泰国早已形成了洋兰组培育苗的产业化,随着国内外的科技交流日趋频繁,洋兰的组培生产在国内也迅速发展起来,我国近年新建了一批专业化的兰花种苗公司,从事组培苗生产及其温室栽培,据报道其效益和前景都很不错,中国兰由于其种子繁殖率低、叶片诱导启动困难以及移栽技术不过关等原因,其工厂化规模生产目前尚处于研究和探索阶段。
月季组织培养技术研究开题报告
一、选题依据 1、论文题目及研究领域 （1）论文题目：月季茎段组织培养技术研究 （2）研究领域：组织培养在月季繁殖上的应用 2、论文研究的理论意义和应用价值 月季在我国应用非常广泛，因此繁殖方法也非常多，但是常规繁殖技术很难对其品种进行更新。虽然自l875年人工杂交技术产生后，经过长期的杂交和选择，获得了许多理想品种，但月季育种目前存在着以下几个问题：（1)传统杂交方法具有局限性。表现在基因资源有限，染色体数目及倍性差异使远缘杂交难以成功；生长一致性、开花同时性等多基因控制性状难以改良等。此外月季作为多年生灌木，育种所需时间较长。（2）只注重对外观性状的改良，而忽视了对内在性状的改良。在过去的育种史中，育种家们只注意芽形、花形、花径、瓣数和茎长等外观性状的改良，并且选择的标准也趋于一致，造成资源流失，而内在性状，如生活力、瓶插寿命以及对病虫害的抵抗能力等未得到相应的提高。（3)遗传背景相对狭窄。据统计蔷薇属的100多个物种中只有8个种对现代月季做出过突出贡献，因此这种近亲杂交现象严重影响月季的生活力[1]。 90年代发展起来的以组织培养为基础的转基因技术无疑为月季育种提供了一条新途径。这种方法不但使品种在外源基因所控制的性状上发生改变，其性状保持相对稳定，还可利用来自其他生物类型的基因，创造更优良的品种。目前，月季的组织培养已有了较深入的研究，基因的分离、克隆以及载体构建等技术在重要的农作物及模式植物上已积累了较多的经验，皆可应用于月季的基因工程育种中[2]。运用这项技术不断培育出新品种以满足人们对月季求新求异的需求。 3、目前研究的概况和发展趋势 月季传统的栽培方法是用嫁接和扦插法进行繁殖，但繁殖速度较慢。自20世纪60年代组培技术在生产中应用以来，许多研究者在月季的组培方面做了大量的研究工作，在月季组培苗的利用方面也取得了很大的进展，对加速新品种的推广和运用起到了积极作用。我国的研究者从20世纪80年代以后便开始进行切花月季组培种苗的生产，在组培的各大领域取得了很好的成绩。 目前，植物组织培养已经向基因的分离、克隆以及载体构建方向发展。在当前再生体系不够完善仍然是制约月季转基因的主要因素，直接再生不定芽途径虽然再生高，需时短，适应范围广，但转化困难；胚性愈伤组织或次级体细胞胚易于转化，但体细胞胚再生体系的建立相对困难，需要在诱导出初级体细胞胚后经过长时间的继代和选择，目前具备该再生体系的品种还非常有限。植株再生是进行遗传转化的必要前提，只有具备了成熟的再生体系才能有效的进行基因转化。现在组织培养技术在很大程度上仍是已经验为基础的，广泛开展月季组培的研究仍是解决问题的最佳途径，在我国尤其如此。随着经验的累积，月季再生体系将不断完善，为转基因提供前提条件。此外，人们对环保的日益重视，对新奇花朵的需求日益增加，以组织培养为基础的技术必将在月季育种中发挥重要作用[3]。 二、论文研究的内容
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
木本植物组织培养技术研究进展
作者简介:张红晓(1974-),女,河南洛阳人.收稿日期:2003-01-12 文章编号:1008-4673(2003)03-0066-04 木本植物组织培养技术研究进展 张红晓1,经剑颖2 (1.河南科技大学林业职业学院,河南洛阳471002;2.洛阳大学环化系,河南洛阳471002) 摘要:从培养基、外植体及培养条件等方面介绍了木本植物组织培养技术的研究进展,讨论了木本植物组织培 养过程中存在的褐变、生根难及玻璃化等问题及可能解决的途径。对木本植物的愈伤组织及胚状体的培养也 进行了初步探讨。 关键词:木本植物;组织培养;培养基;外植体 中图分类号:S722.3文献标识码:A 随着植物组织培养研究工作的不断深入,木本植物组织培养技术不仅促进了果树和观赏树木的脱毒及组织培养快速繁殖的迅速发展,而且在维持生态平衡、改造沙荒土壤以及在都市和居民区的绿化等方面均起着重要作用。至今世界上已有多种木本植物离体培养后得到了完整植株,有不少试管苗已应用于生产实践。 木本植物具有生命周期长、遗传杂合几率高、经济效益显著等特点。此外,许多木本植物组织培养过程中存在着难以解决的外植体褐变、试管苗玻璃化和生根难等现象[1~4]。因此,对影响木本植物组织培养的有关因子进行研究,有利于木本植物组织培养工作的进一步开展。 1 影响木本植物组织培养研究的有关因子及进展 1.1 培养基成分 (1)基本培养基。在器官组织培养中,一般采用固体培养,而在细胞和原生质体培养中,则采用液体培养基。培养基中的盐浓度对外植体褐变和试管苗玻璃化均有一定影响。对某些植物来说,初代培养时培养基中无机盐浓度过高可引起酚类外溢物质的大量产生,导致外植体褐变,降低盐浓度则可以减少酚类外溢,从而减轻褐变[5]。此外,培养基中的某些离子会增加酚类合成与氧化酶的活性,降低盐浓度则可起到一定的抑制作用[6]。对于玻璃化的试管苗来说,提高培养基中Ca 2+的浓度,增加培养基中Mg 、 Mn 、K 、P 、Fe 、Cu 元素含量,降低N 和Cl 元素比例,特别是降低铵态氮浓度,可降低玻璃化[7~11]。 (2)生长调节物质。在组织培养过程中,激素的种类及浓度对培养结果有重要影响。在以杨树为材料的试验中发现,愈伤组织在芽分化阶段如果不降低生长素浓度,则很容易永远失去分化能力。而植物的生根多数都是用生长素单独实现的,IB A 有较好促进生根的作用[8]。用幼年状态的材料在低浓度生长素的培养基中一步生根,生根效果明显优于含有高浓度生长素的培养基;当他尝试用不含生长素的培养基一步生根时,仍观察到幼年状态的材料有一定生根效果。这说明生长素完成诱导作用后,它们在培养基中存在对新根发生有抑制作用。因此,对木本植物的生根培养采用两步法:即先在富含生长素的培养基上进行根的诱导,尔后转接到无任何生长调节物质的培养基上进行根的伸长生长。这样不仅可提高生根率和有效根的数目,而且可限制芽苗基部愈伤组织的生成。 (3)碳源。糖的使用浓度多在2%~3%,但不同植物材料对糖类的反应不完全相同。杨树培养基中糖的使用浓度若超过3%,则易使愈伤组织变黑老化;另一方面,糖浓度太低也不宜于愈伤组织的诱导和分化[9]。对于已发生玻璃化的试管苗来说,适当提高培养基中蔗糖含量,降低培养基中的渗透势,可以降低玻璃化[10,11]。 第23卷第3期 2003年 9月河南科技大学学报(农学版)Journal of Henan Universi ty of Science and Technology (Agricultural Science)Vol.23No.3Sep. 2003
植物组织培养实验设计及.doc
植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护 一．实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备 二．实验原理 植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。 三．实验步骤 1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌 2.实验室的组成及功能 实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室 实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡
池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
红掌组培
二、任务分析 在红掌原产地热带雨林，红掌可用种子繁殖，但进入开花时间长。分株繁殖是红掌以前繁殖的主要方式。红掌植株基部长出吸芽，产生根系后可分株，每年可分3～4株，繁殖系数较低，很难满足规模化生产所需的种苗。现在红掌种苗生产主要通过组织培养进行种苗的快速繁殖，也就是红掌的克隆技术。这样可以在比较短的时间内生产整齐一致的优质种苗，供应生产的需要。通过组织培养技术生产红掌种苗主要有再生体系的建立、增殖培养、壮苗生根、移栽和温室育苗等技术环节。 三、相关知识 红掌（Anthurium andraeanum）植物界、被子植物门、单子叶植物纲、天南星科（Araceae），花烛属（Anthurium Schott），多年生常绿草本植物，别名花烛、安祖花、火鹤花、红鹅掌、鹅掌红、红苞芋、幸运花等，原产中美洲，特别适合室内观赏，兼作鲜切花，为当前国际流行的名贵花卉。在全球热带花卉贸易中，红掌销量居第二位，欧洲、美国、日本是红掌主要消费市场，栽培自动化程度很高，栽培面积不断扩大，我国红掌商业化生产，尤其是工厂化组培快繁，还处于起步阶段。 （一）形态特征与生物学习性 红掌为宿根草本，株高30～70cm，叶自短茎中抽生，革质，长心脏形，全绿，叶柄坚硬细长，长30～40厘米，宽约10厘米。花顶生，长约50厘米，佛焰苞心脏形，长10～20厘米，宽8～10厘米，表面波皱，佛焰苞具有明亮蜡质光泽，肉穗花序圆柱形，直立、长约6厘米，黄色，初看好像人造假花，花姿奇特美妍，切花寿命长达30天以上，为插花高级花材。同类品种繁多，花色有红、桃红、朱红、白、红底绿纹、绿、橙等色，花期持久，全年均能开花。 喜空气湿度高而又排水通畅的环境，喜阴、喜温热。在白天温度不高于28℃，夜间不低于20℃的环境中可终年开花结果，高于35℃将产生日灼，低于14℃则生长受影响，低于0℃的持续低温将冻死植株。适宜生长昼温为26～32℃，夜温为21～32℃。光强以16000～20000Lx为宜，空气相对湿度(RH)以70%～80%为佳。要求空气湿度达80%，土壤pH值为5.5，Ec值在1.2为宜。要求土壤疏松、肥沃，最好进行无土栽培。 （二）红掌的组织培养 1.取材和处理 红掌组织培养主要有两条途径：一是利用芽增殖培养的方法，将自然条件下产生的小芽切下，经杀菌处理后接种在芽增殖培养基上，经过一段时间培养后许多不定芽便直接从接种的原始芽的基部产生；二是利用自然条件下生长的红掌植株的幼嫩叶片或叶柄作外植体，通过细胞脱分化和再分化，形成再生芽的途径。 取红掌幼苗刚展开的叶片、叶柄和顶芽，放人一容器内，先用自来水冲洗，再用加0.02％餐洗净的自来水浸泡10min，浸泡过程中经常摇动容器，目的是为了比较彻底地清除材料表面的尘土和菌物。浸泡后，用自来水冲洗10min以上，冲洗后将其转入一干净的三角瓶。以下操作在超净工作台完成。往三角瓶中加入75％酒精，浸泡杀菌30～60s。倒掉酒精，用无菌蒸馏水漂洗1次，将材料转入经高压消毒的三角瓶中，加入0.1％升汞(HgCl2)液，浸泡杀菌8min，浸泡过程中经常摇动三角瓶。倒掉升汞液，用无菌蒸馏水冲洗4～6次。将材料从三角瓶中取出，在灭过菌的滤纸上用解剖刀将顶芽的生长点连同2～3个叶原基切出，将幼嫩叶片和叶柄剪成小块或小段，叶片切成0.5～1.0cm见方的小块，叶柄切成0.3～0.5cm
组织培养技术
第五章组织培养技术 第一节植物组织培养 所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。 一、概述 （一）概念 1.植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。 2.外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。 3.愈伤组织（Callus）：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 （二）组织培养类型 1.根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养； 2.根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养； 3.根据培养过程不同分：初代培养；继代培养； （三）植物组织培养历史 植物组织培养是20世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段； 1902年德国植物学家Haberlandt提出了细胞全能性概念。 1939年White报道了烟草组培成功。并提出植物细胞全能性学说。同年，Gautheret与Nobecourt 培养胡萝卜成功。三人被誉为植物组培奠基人。
罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一 （四）植物组织培养的应用 ⒈植物的快速繁殖： ⑴园艺、花卉植物的大规模快速繁殖； ⑵抢救濒危珍稀植物 ⑶进行某些植物的种质资源保存 ⒉培育无病毒的植物，如脱病毒草莓等； ⒊制造人工种子。 4突变体的筛选培育 5药用植物的工厂化生产 6花药培养和花粉单倍体育种 7基因工程的应用等 二、实验室设计和设备 （一）实验室设计一般具有： 1.准备室器皿洗涤，培养基配制、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行 . 2.缓冲室进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。最好安装1盏紫外灯，用以灭菌。 3.无菌操作室也称接种室。主要有超净工作台、空调机、医用小平车等 4.培养室具备适宜的温度、湿度、光照、通风等条件。有培养架子和灯光；通风设施；边台； 5.驯化室和温室 （二）常用设备 1．超净工作台 2.无菌箱 3．空调机 4．除湿机 5．恒温箱又称培养箱 6．烘箱
植物组织培养技术
第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课
一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。
（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。
红掌生长特性及苗期无土栽培技术要点浅析
红掌生长特性及苗期无土栽培技术要点浅析作者：连翠飞贺为国郝东旭贺峰郭志敏 来源：《南方农业·下旬》2020年第03期 摘要红掌作为一种热带花卉，在花卉市场中广受消费者欢迎，销售量很大。其叶片形态优雅，花型独特，是人们购买花卉时优先选择的花种。面对庞大的市场需求，采用无土栽培技术进行红掌栽培，可实现红掌的规模化栽培，为花农和社会经济创造更多效益。基于此，阐述红掌生长特性，并就红掌苗期无土栽培技术要点进行简要分析。 关键词红掌;生长特性;无土栽培技术 中图分类号：S682 文献标志码：B DOI：10.19415/https://www.wendangku.net/doc/2a17807578.html,ki.1673-890x.2020.09.027 当前，我国红掌栽培主要为设施栽培。随着科学技术的提高，红掌无土栽培技术的应用也有了一定发展。目前正是花卉产业快速发展的时代，采用无土栽培技术进行红掌栽培，可进一步推动红掌向规模化栽培方向发展。 1 红掌生长特性 红掌又被称为火鹤花、安祖花等，原产地在南美洲等一些热带雨林地区，大多时期依赖于树木、岩石或土壤生长。红掌属于多年生常绿草本花卉，喜温热多湿，同时要求有良好的排水环境，害怕干旱以及强光曝晒，适合生长温度为日间26～32 ℃、夜间21～32 ℃，能够耐受的最高温度为35 ℃，最低温为14 ℃，适宜其生存的光强度为16 000～20 000 lx，空气相对湿度为70%～80%。 关于红掌的植物形态，其植株高度在50～80 cm，具体高度取决于品种，没有茎，叶子在生长过程中逐渐从红掌苞片根茎中抽出，外表形状呈心形，颜色鲜綠，叶脉处于凹陷状态，花腋生，佛焰苞蜡质，呈正圆至卵圆形，颜色主要有红、橙红以及白色，肉穗花序，呈圆柱形状，直立挺拔。从整体上来看，红掌四季都可开花，其叶子以及枝茎外形比较奇特，叶子颜色为深绿，手感厚实，其花蕊部分又长又尖，颜色有鲜红、白色以及绿色，全部含有毒素。生长花期一般为10～20 d，开花时间主要在4—6月。 2 红掌无土栽培技术概述 无土栽培就是在进行红掌栽培时，不使用天然土壤，主要以基石、岩棉等为种植基质，也可以通过一种比较浅的营养液进行红掌种植。无土栽培时使用的肥料主要为无机肥，其营养成分比较全面，是根据多种类型的无机盐按照相应比例调配的;除无机肥之外也可选择腐熟或者无臭无味的有机肥料。当前进行红掌无土栽培的技术主要有两种。1）水培。这种栽培方式操
第五章 植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术 一、植物组织培养中的基本概念 (1) 植物组织培养技术: 在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。 (2) 理论依据： 植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。 (3) 外植体： 从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。 (4) 分化： 在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。 (5) 脱分化： 已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 (6) 愈伤组织： 在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。（具有细胞分裂能力）。 (7) 再分化： 已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。 (8) 不定芽： 在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 (9) 胚状体： 在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 二、植物组织培养过程（菊花为例） 1、培养基的配制: 方法：培养基干粉配制法 称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。 （其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml） 用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。 2、菊花接种与培养：
红掌组培技术
红掌组培快繁技术的方法 技术报告
红掌组培快繁技术的方法 红掌为当前国际流行的名贵花卉,受到人们的广泛喜爱,然而其实生苗需4年以上才能开花,分株或组织培养苗只需2-3年就会开花,因此本文着重介绍了红掌组培快繁技术,以大大缩短其第一次开花前的培育时间,以带来更多地经济效益,以满足市场的需求。 一红掌简介 1 红掌的科属 红掌属于植物界被子植物门、单子叶植物纲、天南星科,花烛属,多年生常绿宿根草本植物。 2 红掌的形态特征 ①、红掌的根为半肉质气生根,非常发达,有白色、红色两种；②、茎为气生短根茎,随着植株的生长,向上伸长,并长出短缩气生根,具有吸收功能。品种不同茎的长短和生长量也不同,一般较长的作为切花用；较短的作为盆花用；③、叶着生于茎顶端叶鞘内,正常条件下生长的新叶比原叶高而大。④、花着生于茎顶端叶鞘内,实生苗4年以上开花,分株或组培苗2-3年开花。花于叶轮流长出,为佛焰苞,颜色有红、粉、白、绿、咖啡、复色等,成花周期为1.5-2.5个月。 3 红掌的生物习性 红掌性喜高温多湿,常附生于树干、岩石或地表。在温度方面,以19-22℃为最适温度,18-28℃生长良好,其根际温度15-20℃为宜。在湿度方面,空气相对湿度为70-80％,苗期为85-90%。在光强度方面,
喜散射光,强度为7500-15000Lx为宜。其次根际环境还要求基质透气保水,含水量保持在50-75%,pH 5.5-6.5,EC 0.5-1.5ms/cm。总之要想培养高品质的红掌,必须合理的协调环境因子和水肥的供应关系[1]。 4红掌的盆花品种 按生产用途可分为盆花和切花品种。国内红掌栽培的品种主要来自于荷兰种苗公司,常见的盆花品种有红国王、红皇后、北京成功、莱妮、皇冠、马都拉、特伦萨、红胜利、粉爱、神秘的爱、真爱、爱的幻想、西部的爱、西部维他等。 5 红掌的繁殖方法 红掌的繁殖主要以分株和组织培养为主。分株可全年进行,以4-5月份和9-10月份为宜,其存在的问题是分株苗大小不齐,且容易发生退化。 组织培养是红掌商品化栽培的主要种苗来源。组培苗具有繁殖系数大、质量好、移栽后易成活、生长快、易调控等优点[2]。 二红掌的组织培养 1 取材和处理 红掌组织培养主要有两个途径：一是利用芽增殖培养的方法,将自然条件下产生的小芽切下,经杀菌处理后接种在芽增殖培养基上,经过一段时间培养后许多不定芽便直接从接种的原始芽的基部产生；二是利用自然条件下生长的红掌植株的幼嫩叶片或叶柄作外植体,通过细胞脱分化和再分化,形成再生芽的途径。下面以第二条途径为例进行介绍：
植物组织培养新技术与应用的研究进展及发展趋势
植物组织培养新技术与应用的研究进展及发展趋势 发表时间：2012-09-04T08:13:38.717Z 来源：《时代报告》2012年第6期作者：白立伟 [导读] 传统的组织培养光源灯普遍存在寿命短、发热量大且不均以及发光效率不理想等缺点。 白立伟（西南大学园艺园林学院，重庆北碚 400715) 中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：1003-2738（2012）06-0322-01 摘要:植物组织培养是根据植物细胞具有全能性的原理而发展起来的一门生物技术。本文简要概述了植物组织培养的概念及研究进展，较全面的综述了植物组织培养新技术以及在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面的研究现状，最后展望了植物组织培养的发展趋势。 关键词：组织培养；新技术；应用现状；发展趋势 引言 植物组织培养是20世纪之初，以植物细胞全能性为理论基础发展起来的一门新兴技术，是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，在人工配制的环境里培养成完整的植株，也称离体培养或植物克隆。自1902年德国科学家Haberlandt提出植物细胞具有全能性理论, 到1934 年美国White 等用番茄根进行离体培养证实这一观点以来,植物离体培养技术在基础理论和应用研究，已广泛应用到植物生理学、病理学、药学、遗传学、育种以及生物化学等各个研究领域, 成为生物学科中的重要研究技术和手段之一[1]。近年来，随着科学技术的不断发展，植物组织培养新方法和新技术不断涌现，研究重点也由器官、细胞水平向分子、基因方向转移。21世纪，生物技术是最有生命力的一门学科，而植物组织培养作为一种基本的试验技术和基础的研究手段，被认为具有巨大的潜力。 一、植物组织培养新技术的研究 随着科学技术的发展和对植物组织培养技术的不断深入研究，一些新的培养方法和技术不断出现，为植物组织培养技术的不断优化和发展提供了新的途径。 1.新型光源的应用。 光是植物生长发育必不可少的重要因素之一，光照长短、光质、光周期对植物的生长、形态建成、光合作用、新陈代谢以及基因表达均有调控作用。传统的组织培养光源灯普遍存在寿命短、发热量大且不均以及发光效率不理想等缺点。LED作为植物组织培养光源早在1991年就有栽培试验。研究发现, 光质比例和光照强度可调的LED 光源比通常植物组织培养使用的荧光灯更能有效地促进试管苗的光合作用和生长发育。蒋要卫利用LED作为大花蕙兰组培苗光源的研究发现, LED光源可以显著改善大花惠兰试管苗的生长状况和提高其品质[2]。日本的田中道男等运用阴极荧光灯( CCFL)作为文心兰试管苗光源, 结果表明其地上部干、鲜重和试管苗的高度都有显著提高。另外田中道男等利用SILHOS作为生菜组织培养光源, 获得了高质量的组织培养苗。目前LED是组织培养中最有效的人工照明光源，而CCFL等新型光源是未来发展的主要方向。 2.开放组织培养技术。 传统的植物组织培养属于严格的封闭式培养，因而造成灭菌成本偏高、培养基易污染、外界环境调控难度大等缺点。而开放组织培养新技术是在外加抗菌剂的条件下，使植物组织培养脱离严格无菌的操作环境，在自然开放的有菌环境中进行，恰好弥补了这些不足。赵青华等采用开放式组培技术，在培养基中添加抑菌剂，克服了非灭菌条件下魔芋组织培养污染问题，有效地简化了实验步骤，降低了生产成本[3]。何松林的研究表明在添加抗菌剂的开放式组培中，文心兰试管苗可正常生长[4]。开放式组织培养突破了封闭式培养的限制，从根本上简化了组织培养环节，使将来规模化开放式组织培养成为可能。 3.光独立培养技术。 光独立培养法又称无糖培养法，是指利用CO2代替葡萄糖作为植物组织培养的碳源，人工控制组织培养苗生长所需的光、温、水、气、营养等条件，促使组织培养苗快速转变为自养型的培养方式。一方面避免了由葡萄糖引起的杂菌污染；另一方面，增强了组织培养微环境的人工调控能力。屈云慧等以虎眼万年青为对象的无糖培养研究表明万年青再生芽的生根率高, 种苗质量也优于常规培养[5]。肖玉兰、丁永前等设计的全套无糖组织培养设备培育出的苗具有抽叶多、植株健壮、节间距短、根系发达、干物重积累多、光合自养能力强等更优良的生物学性状。目前，无糖培养法还处于理论研究和应用的开始阶段，随着理论研究的不断深入及相关配套技术的不断完善，必将成为组织培养技术的一种重要手段。 4.多因子综合控制技术。 近年来，随着对植物组织培养机理的深入研究和交叉学科间的相互促进作用，多因子综合控制的环境调控设施越来越多的应用到实际生产中，大大降低了组织培养成本, 促进了组织培养苗商品化的进程。崔谨等运用CO2 监控系统对甘薯组培苗进行调控的结果表明, 在CO2监控系统方式下培养的甘薯组培苗, 具有生长迅速、光合产物积累明显、叶色深绿、根系发达等特点[6]。刘文科等设计了一种新型密闭式组培室, 并研制出一套用于该组培室的综合环境控制系统[7]。李传业等设计的一套能对组培箱内CO2 浓度、相对湿度进行调控的组织培养微环境控制系统试验结果表明, 组织培养箱内CO2摩尔分数和相对湿度达到了预期目标。 二、植物组织培养的应用研究 植物组织培养技术的应用主要理论基础有两方面。一是细胞全能性，植物修复与完善、快繁脱毒苗、育种、种子和种质资源保存、植物检疫等都是其发展和应用的成果。二是悬浮培养液，主要应用于植物次生代谢产物的提取。 1.“全能性”的应用。 植物修复与完善是模拟植物组织培养过程中器官形成和细胞增殖形成的一套全新理论，植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面，因其快速、无毒的特点，已经广泛应用于观赏植物、园艺作物、经济林木、无性繁殖作物，并已形成产业化、商品化。植物组织培养技术为培育优良作物品种开辟了新的途径，利用该技术，通过花药和花粉培养、胚胎培养与细胞融合、细胞无性系变异、基因工程及突变体筛选等手段，已经培育出一大批具有优良性状的植株。借助植物组织培养技术保存种子和种质资源，因其优于常规方法的特殊性越来越受到重视，已在1000多种植物种和品种上得到应用, 并取得很好的效果。 2.愈伤组织或悬浮培养液的应用。 植物次生代谢物如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱及其他活性化合物是许多医药、食品、香料、色素、农药和化工产品的