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柱前衍生化高效液相色谱法分析淫羊藿多糖中单糖的组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析淫羊藿多糖中单糖的组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析淫羊藿多糖中单糖的组成

收稿日期:2006206205; 修订日期:2006210229

作者简介:饶金华(19792),男(汉族),安徽合肥人,现为中国药科大学药

物分析室在读硕士研究生,学士学位,主要从事色谱分析的研究工作.

柱前衍生化高效液相色谱法

分析淫羊藿多糖中单糖的组成

饶金华,刘文英,江佳峪

(中国药科大学,江苏南京 210009)

摘要:目的测定淫羊藿多糖(EPS )中单糖的组成及其摩尔比。方法将淫羊藿多糖样品用1mol/L 硫酸溶液降解成单

糖后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(P M P )衍生,通过简化衍生方法,优化分析条件,采用反相高效液相色谱250n m 紫外检测和使用梯度洗脱,分离测定各单糖。结果淫羊藿多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖6种单糖组成,其物质的量之比为0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43。结论该改进后的衍生化方法以及优化的高效液相色谱法具有简单、快速、重现性好等特点,可用于淫羊藿多糖中单糖组成的测定。

关键词:高效液相色谱法; 淫羊藿多糖; 衍生化; 单糖中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:100820805(2007)022*******

Ana lysis of M onos acchar i de Com positi on s i n Ep i m ed i um Polys acchar i de by Precolumn D er i va ti on HPLC

RAO J in 2hua,L I U W en 2ying,J I A NG J ia 2yu

(D epart m en t of Phar m aceutical A nalysis,Chinese Phar m aceu tical U niversity,N anjing 210009,China )

Abstract:O bjecti ve To deter m ine the monosaccharides in the Ep i m ediu m polysaccharide (EPS )and their molar rati o .M ethods

The Ep i m ediu m polysaccharide were hydr olyzed int o monosaccharides with 1mol/L sulfuric acid .The monosaccharide derivatives obtained with 1-Phenyl -3-methyl -5-pyrazol one (P MP )were separated by reverse -phase HP LC using a devel oped gradi 2ent eluti on p r ocess,and monit ored by ultravi olet detect or at 250n m.Results Six monosaccharides derivatives were is olated with high sensitivity,good res oluti on by HP LC .The Ep i m ediu m polysaccharide is composed of mannose,rha mnose,galactur onic acid ,glucose,galact ose,and arabonose,with a molar rati o of 0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43.Conclusi on This method has accurate result and good rep r oducibility and can be used t o deter m ine the monosaccharides in Ep i m ediu m polysaccharide .

Key words:HP LC; Ep i m ediu m Polysaccharide; Derivati on; Monosaccharide

淫羊藿多糖(EPS )是从小檗科植物淫羊藿Ep i m ediu m 中分离得到的一种酸性杂多糖,含量约占生品的2%[1]。淫羊藿多糖具有广泛的药理学活性,有免疫调节作用以及刺激骨髓DNA 合成、增强血小板聚集等作用[2]。目前有关淫羊藿多糖的研究报道大多为药理活性研究以及传统的硫酸-苯酚法、蒽酮-硫酸

法测定含量[3]

,其单糖组成迄今未见报道,而多糖的单糖组成分析是进行多糖质量控制和获取多糖基本信息的重要环节。

多糖样品的单糖组成分析常用的方法包括薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法微量成分显色不明显而且重现性不好;气相色谱法操作繁杂、费时;液相色谱法操作简单快速。本实验采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(P MP )柱前衍生,高效液相色谱分离方法,对淫羊藿多糖中的单糖进行了组成分析。1 仪器与试药

Agilent 1100Series 高效液相色谱仪,Che mStati ons 色谱工作站。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(P MP,甲醇重结晶两次,上海化学试剂采购供应站试剂厂);乙腈(色谱纯,MERCK 公司)。单糖对照品:葡萄糖(Glc,上海惠兴生化试剂有限公司)、阿拉伯糖(A rab,Sig ma 公司)、半乳糖(Gal,Am resco 公司,北京经科公司分装)、鼠李糖(Rham,England B.D.H Laborat ory Chem i 2cals Gr oup )、甘露糖(Mannose,Supelco 公司)、岩藻糖(Fuc,Fluka 公司)、半乳糖醛酸(Gal U A,Fluka 公司),其余试剂均为国产分析

纯。淫羊藿多糖(EPS )由本实验室分离纯化,经紫外光谱分析,

不含蛋白质和核酸类物质,红外光谱具有多糖特征吸收。2 方法2.1 色谱条件色谱柱为Phenomenex C 18(250mm ×4.6mm,5μm );流动相为溶剂A,15%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙酸铵水溶液,溶剂B,40%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙酸铵水溶液;梯度模式:时间梯度为0m in →25m in,相应浓度梯度为0%→50%溶剂B 。检测波长250n m;流速1.2m l/m in;进样体积20μl;柱温为室温。2.2 多糖的水解称取20mg 淫羊藿多糖置于安瓿管中,加入浓度为1mol/L 硫酸溶液2.0m l,封管后于100℃水解6h,得水解样品溶液。用2mol/L 氢氧化钠水溶液中和至pH 值为7.0,并以纯化水稀释到5.0m l,离心,取上清液待衍生化。2.3 单糖标准品的衍生化取浓度分别为1.0mmol/L 的甘露糖(Man )、鼠李糖(Rham )、半乳糖醛酸(Gal U A )、葡萄糖(Glc )、半乳糖(Gal )、阿拉伯糖(A rab )和内标岩藻糖(Fuc )的混合单糖对照品水溶液80μl,置于具塞离心试管中。加入0.25mol/L 的P MP 甲醇溶液80μl 和0.2mol/L 的氢氧化钠溶液80μl,涡旋30s 后置于70℃水浴中反应30m in,取出。冷却至室温后,加入0.2mol/L 的盐酸溶液80μl 中和,涡旋30s 后用0.5m l 乙酸异戊酯萃取,涡旋3m in,离心,小心弃去上层有机层,再萃取1次得下层水层,加0.5m l 氯仿同法萃取1次,取上层水层20μl 进行HP LC 分析。结果见图1。

2.4 样品的衍生化取淫羊藿多糖水解液80μl 进行衍生化反

应,步骤同“2.3”节。结果见图2。

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663?时珍国医国药2007年第18卷第2期L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.2 

1.甘露糖

2.鼠李糖

3.半乳糖醛酸

4.葡萄糖

5.半乳糖

6.阿拉伯糖

7.岩藻糖 图1

单糖对照品衍生化产物的色谱图1.甘露糖 2.鼠李糖 3.半乳糖醛酸 4.葡萄糖

5.半乳糖

6.阿拉伯糖

图2 淫羊藿多糖水解样品衍生化产物的色谱图

2.5 多糖样品中的糖组成分析和计算方法按式(1)计算校正

因子f x =(m x /A x )/(m fuc /A fuc )。(1)式中A x 、A fuc 分别为对照

品单糖x 衍生物峰面积和内标衍生物峰面积,m x 、m fuc 分别为对

照品溶液中单糖x 和内标的浓度(mmol/L )。

按式(2)计算样品中各种单糖的比例。(2)m 1:m 2:m 3:m 4:

m 5:m 6=(A 1×f 1):(A 2×f 2):(A 3×f 3):(A 4×f 4):(A 5×

f 5):(A 6×f 6)式中m 1,m 2,m 3,m 4,m 5,m 6分别为样品溶液中单

糖的量,A 1,A 2,A 3,A 4,A 5,A 6分别为单糖的衍生物峰面积,f 1,f 2,

f 3,f 4,f 5,f 6为式(1)计算的单糖对内标相应的校正因子。

3 结果

3.1 标准曲线取5组不同浓度的标样混合溶液按2.3项下方

法进行分析,记录色谱图,其浓度与峰面积积分值呈很好的线性

关系,各单糖适用的浓度范围在0.25~2.5mmol/L 之间。结果

见表1。

表1 6种单糖的标准曲线

单糖标准曲线相关系数校正因子

甘露糖Man Y =0.8426X -0.02240.99500.5900

鼠李糖Rha m Y = 1.3945X -0.03410.99600.9964半乳糖醛酸Gal U A Y =0.6342X -0.00220.99700.4688

葡萄糖Glc Y = 1.1436X +0.00820.99980.8227

半乳糖Gal Y =0.5305X +0.03540.99970.3894阿拉伯糖A rab

Y =0.5962X -0.01660.9994

0.4660

n =5

3.2 精密度取标准单糖混合溶液,依前述衍生化和色谱条件,连续进样5次,甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖与岩藻糖峰面积之比的进样精密度(RSD ,n =5)分别为0.41%,0.43%,0.70%,0.48%,0.24%,0.34%。3.3 稳定性实验取淫羊藿多糖水解液衍生化后的溶液分别在0,2,4,8,12,24h 进样,记录峰面积,结果甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖峰面积的RSD (n =5)分别为1.61%,2.18%,5.00%,

4.19%,2.36%,3.30%,表明样品溶液在24h 内稳定。3.4 重复性实验取淫羊藿多糖,依前述衍生化和色谱条件,重复测定该样品溶液6次,结果甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖峰面积的RSD (n =5)分别为0.77%,

0.21%,2.44%,3.87%,2.70%,2.80%。

3.5 多糖样品分析将混合单糖标准品图谱与淫羊藿多糖的图谱对照,可以确定淫羊藿多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖5种中性单糖和半乳糖醛酸1种酸性单糖组成,采用校正因子计算单糖组成比例,样品可不加内标进行衍生化HP LC 分析。根据分析和计算方法,求得淫羊藿多糖中甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖之间的摩尔比为0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43。4 讨论

4.1 衍生化条件的改进Honda 等[4]首次将具有强紫外吸收的

1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(P MP )用于糖类物质的衍生。与已有文献不同,本文没有对衍生化中和后的水相进行干燥。该步骤的简化并没有影响衍生物的性质,也没有产生任何影响分离的杂质,而且在一定程度上缩短了反应时间,降低了反应产物在多个步骤中的损失。P MP 色谱峰位在10.5m in,而保留最弱的甘露糖色谱峰位于13m in,P MP 与各单糖组分离良好,不影响单糖的测定。4.2 缓冲液的选择与色谱梯度模式的优化本实验以如下3种分离条件为基础:(1)溶剂A,15%(V /V )乙腈+pH7.0磷酸盐缓冲液,溶剂B,40%(V /V )乙腈+pH7.0磷酸盐缓冲液;梯度

模式:时间梯度为0m in →9m in →28m in,相应浓度梯度为0%→10%→65%溶剂B [5]

。(2)溶剂A,15%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙酸铵水溶液,溶剂B,40%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙酸铵

水溶液;梯度模式:时间梯度为0m in →20m in,相应浓度梯度为

0%→60%溶剂B 。(3)溶剂A,15%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙

酸铵水溶液,溶剂B,40%(V /V )乙腈+20mmol/L 乙酸铵水溶

液;梯度模式:时间梯度为0m in →25m in,相应浓度梯度为0%→

50%溶剂B 。

将以上梯度程序用于考察单糖混合对照品的分离。在实验

中发现:在条件(1)磷酸盐缓冲液作流动相时,鼠李糖(Rha )峰

形不好,半乳糖(Gal )和阿拉伯糖(A rab )不能达到基线分离,经

过梯度优化后,无明显改善;在条件(2)时,甘露糖(M an )和P MP

不能达到基线分离,说明梯度变化过快,不利于出峰最早的甘露

糖分离;在条件(3)醋酸盐缓冲液作流动相时,通过合适的梯度

洗脱,各单糖组得到较好的分离,分析时间在22m in 以内。结果

表明在本单糖体系中,醋酸盐缓冲液优于磷酸盐缓冲液系统。

4.3 在单糖分析方法中气相色谱法分离单糖繁琐费时,易出现色谱峰异构化裂分;高效液相色谱法测定单糖可用糖分析柱和氨基键合相柱,但其价格昂贵,分析成本高[6]。本实验室采用价格较低的C 18色谱柱,紫外检测器,通过对色谱条件的优化,可同时分离测定5种中性单糖,1种酸性单糖和1种内标单糖。本方法不仅可提供淫羊藿多糖的单糖组成的基本信息,且可推广应用到

其他多糖组成的分析。参考文献:

[1] 杨武德,胡高翔.粗毛淫羊藿及其不同炮制品中多糖的测定[J ].

中草药,2005,36(4):543.[2] 郭宝林,罗崇念,肖培根.淫羊藿多糖研究进展[J ].中国中药杂

志,1998,23(7):436.[3] 陈鸿英,朱永智,吴乃居,等.朝鲜淫羊藿多糖的含量测定[J ].

中草药,2003,34(9):810.

[4] Honda S,Akao E,Suzuki S,et al .H igh -perfor mance liquid chr oma 2

t ography of reducing carbohydrates as str ongly ultravi olet -abs orbing and electr oche m ically sensitive 1-phenyl -3-methyl -5-pyraz ol one derivatives[J ].Anal .B i ochem.,1989,180:351.

[5] 马定远,陈 君,李 萍,等.柱前衍生化高效液相色谱法分析多

糖中的单糖组成[J ].分析化学,2002,30(6):702.[6] 袁忠海,吴道澄,赵 燕,等.高效液相色谱法测定魔芋精粉中葡

甘露聚糖的含量及单糖组成[J ].中国中药杂志,2003,28(7):621.

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763?L I SH I Z HE N MED I C I N E AND MATER I A ME D I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.2

时珍国医国药2007年第18卷第2期

高效液相色谱习题和答案解析

高效液相色谱法习题 一、思考题 1.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。2.液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3.在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 4.液相色谱有几种类型? 5.液-液分配色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?6.液-固分配色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 7.化学键合色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 8.离子交换色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 9.离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么? 10.空间排阻色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?11.在液-液分配色谱中,为什么可分为正相色谱及反相色谱? 12.何谓化学键合固定相?它有什么突出的优点? 13.何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱?试述它们的基本原理 14.何谓梯度洗提?它与气相色谱中的程序升温有何异同之处?15.高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处? 16.以液相色谱进行制备有什么优点? 17.在毛细管中实现电泳分离有什么优点? 18.试述CZE的基本原理 19.试述CGE的基本原理 20.试述MECC的基本原理 二、选择题 1.液相色谱适宜的分析对象是()。 A 低沸点小分子有机化合物 B 高沸点大分子有机化合物 C 所有有机化合物 D 所有化合物 2.HPLC与GC的比较,可忽略纵向扩散项,这主要是因为()。 A 柱前压力高 B 流速比GC的快 C 流动相钻度较小 D 柱温低 3.组分在固定相中的质量为MA(g),在流动相中的质量为MB(g),而该组分在固定相中的浓度为CA(g·mL -1),在流动相中浓度为CB(g·mL-1),则此组分的分配系数是( )。 A mA/m B B mB/mA C CB/CA D CA/CB。 4.液相色谱定量分析时,不要求混合物中每一个组分都出峰的是_。 A 外标标准曲线法 B 内标法 C 面积归一化法 D 外标法 5.在液相色谱中,为了改善分离的选择性,下列措施()是有效的? A 改变流动相种类 B 改变固定相类型 C 增加流速 D 改变填料的粒度 6.在分配色谱法与化学键合相色谱法中,选择不同类别的溶剂(分子间作用力不同),以改善分离度,主要是()。 A 提高分配系数比 B 容量因子增大 C 保留时间增长 D 色谱柱柱效提高 7.分离结构异构体,在下述四种方法中最适当的选择是()。 A 吸附色谱 B 反离子对色谱 C 亲和色谱 D 空间排阻色谱 8.分离糖类化合物,选以下的柱子()最合适。 A ODS柱 B 硅胶柱 C 氨基键合相柱 D 氰基键合相柱 9.在液相色谱中,梯度洗脱适用于分离()。 A 异构体 B 沸点相近,官能团相同的化合物 C 沸点相差大的试样 D 极性变化范围宽的试样 10.在高效液相色谱中,采用254 nm紫外控制器,下述溶剂的使用极限为()。 A 甲醇210 nm B 乙酸乙醋260 nm C 丙酮330 nm 11吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用()。 A 液一液色谱法 B 液一固色谱法 C 键合相色谱法 D 离子交换法 12.当用硅胶为基质的填料作固定相时,流动相的pH范围应为()。

石斛中多糖含量的测定

题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日

石斛中多糖含量的测定 高换楼 (陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班,陕西汉中723001) 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材,有养阴清热、益胃生津的功效,石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定,并采用正交试验得到最佳实验方案,在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次,每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛;多糖;蒽酮-硫酸法;抗氧化性;测定; Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou (Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi) Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;

铁皮石斛多糖的功效

铁皮石斛多糖的功效 了解过铁皮石斛的朋友,都知道铁皮石斛的功效卓著,可以滋养阴津、提高免疫、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、清虚热、强筋壮骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤、延年益寿等等令人诱惑的功效。 很多朋友也听说过,铁皮石斛之所以能有如此多的功效,是因为含有石斛多糖。 糖? 最近不是报道说,糖不利身体健康吗?! 此多糖,非彼糖。 糖尿病的人不可以吃糖,但是可以吃石斛多糖。 石斛多糖属于活性多糖的一种。在国内,活性多糖的提法比较新,应用也很少。但在国外,特别是日本,普遍多了。活性多糖是功能性食品的一种,在保健范畴之内。 活性多糖的生理功能 (一)多糖的免疫调节功能 免疫调节作用是大多数活性多糖的共同作用,也是它们发挥其他生理和/或药理作用(抗肿瘤)的基础。活性多糖可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明,活性多糖不仅能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞,还能活化补体,促进细胞因子的生成,对免疫系统发挥多方面的调节作用。 (二)抗肿瘤的功能 据文献报道,已有50个属178种的提取物都具有抑制S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应,明显促进肝脏蛋白质及核酸的合成及骨髓造血功能,促进体细胞免疫和体液免疫功能。 (三)活性多糖的抗突变作用

在细胞分裂时,由于遗传因素或非遗传因素的作用,会产生转基因突变。突变是癌变的前提,但并非所有突变都会导致癌变,只有那些导致癌细胞产生恶性行为的突变才会引起癌变,但可以肯定,抑制突变的发生有利于癌症的预防。多种活性多糖表现出较强的抗突变作用。(四)降血压、降血脂、降血糖的功能 冬虫夏草多糖对心律失常、房性早博有疗效;灵芝多糖对心血管系统具调节作用,可强心、降血压、降低胆固酵、降血糖等。试验结果表明,蜜环茵多糖(AMP)能使正常小鼠的糖耐量增强,能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高;研究也发现,蘑菇、香菇、金针菇、木耳、银耳和滑菇等13种食用茵的子实体具有降低胆固醇的作用,其中尤以金针菇为最强。腹腔给予虫草多糖,对正常小鼠、四氧嘧啶小鼠均有显著的降血糖作用,且呈现一定的量效关系。云芝多糖、灵芝多糖、猴头菇多糖等也具降血糖或降血脂等活性。活性多糖可降低血脂,预防动脉粥样硬化斑的形成。 (五)活性多糖对多种病毒,如艾滋病毒(HIV-1)、单纯泡疹病毒(HSVl,HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、囊状胃炎病毒(VSV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)和反转录病毒等有抑制作用。香菇多糖对水泡性口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有治疗作用,对阿拉伯耳氏病毒和十二型腺病毒有较强的抑制作用。 (六)活性多糖的抗氧化作用 已发现许多活性多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性,起到保护生物膜和延缓衰老的作用。 (七)活性多糖的其它功能 除具有上述生理功能外,活性多糖还具有抗辐射、抗溃疡和抗衰老等功能。具有抗辐射作用的活性多糖有灵芝多糖、猴头多糖等。具有抗溃疡作用的活性多糖有猴头多糖、香菇多糖等。具有抗衰老作用的活性多糖有香菇多糖、铁皮石斛多糖、虫草多糖、灵芝多糖、云芝多糖和猴头菌多糖等。

单糖的结构:葡萄糖的构象

单糖的结构→ 葡萄糖的构象 己醛糖和己酮糖的开链结构及其相对构型己醛糖和己酮糖的环状结构 糖的哈武斯(Haworth)透视式葡萄糖的构象 哈武斯透视式比费歇尔投影式能更合理地表达葡萄糖的存在形式,但是吡喃氧环式仅简单地以一个平面表示还是不够的。从环己烷的构象分析中我们已经知道,环己烷实际上不以平面六元环存在,而是有船式和椅式两种构象,其椅式的内能较低,比较稳定。糖的吡喃环型就相当于环己烷的一个亚甲基被氧原子取代,其构象式应该是类似的,所不同是:(1)氧原子代替了一个碳原子的位置,六元环不再是均匀的环,而且氧原子的电负性大,与环上取代基的作用比碳原子更强烈,对构象稳定性影响较大;(2)环己烷碳原子上连接的都是氢,而在糖分子中环上取代基是不相同的,取代基相互之间的空间效应和电性效应更加显著。由于这两点,糖和环己烷的构象有所不同。糖的船式构象极不稳定,不能存在,只有椅式构象能稳定存在。 糖的椅式构象可能有两种,即N式(Normal form,正常式)和A式(Alternative form,交替式)存在。 对于D-系的糖来说,连在C-5上尾端羟甲基是最大的取代基,它如果处在a键则与其他C-1、C-3位置的取代基相互排挤,很不稳定。相反,此尾端羟甲基都处于e键则有利。所以D-系吡喃糖只能以N-式存在,为优势构象,而不以劣势的A-式存在,故D-吡喃葡萄糖的优势构象应取N-式。

当我们再进一步观察葡萄糖的α-和β-端基异构体的差别时,我们发现在构象式中,α-体的C-1位上羟基取a键,它与C-3和C-5位上的氢原子(a键),有空间排斥作用(1,3-干扰)。而β-体的C-1位上羟基取e键,没有这种作用。而且β-体环上所有比较大的基团都处在e键,相互之间距离最远,没有空间排斥作用,如下所示: 因此,对于α-及β-两个异构体来说,又以β-异构体占优势构象,故在平衡体系中存在量也较多,这就可以解释我们在前面说过的,葡萄糖在水溶液中达到平衡时β-体占64%而α-体占36%的原因。 从上述可知,D-系吡喃糖比较稳定的构象是其中体积最大的基团(—CH OH)占有e键位置的那种构象。例如:

高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量

河北医科大学学报 JOURNAL OF HEBEI MEDICAL UNIVERSITY 1999年第20卷第4期Vol 20No.41999 高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量 颜京霞 宋秀君 卞小芸 勾凌燕 王仁杰 张亚超 摘 要 目的 探讨高效液相色谱柱前衍生法测定血、房水、晶状体中牛磺酸含量的价值。方法 采用2种流动相,流动相A为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(pH=6.5)-甲醇-四氢呋喃(80∶20∶0.8),流动相B为0.05 mol/L柠檬酸缓冲液(pH=6.5)-甲醇(20∶80);色谱柱为necleos ODSΦ4.6 nm×150 nm。Wistar大鼠的血浆、房水、晶状体经处理和衍生后进样分析。结果 该方法最低检出限为10 μg/ml,氨基酸浓度与相对响应值之间平均相关系数为0.998±0.002,回收率为91.07 %~96.79 %,牛磺酸峰面积变异系数在进样量3μl时为10.75 %,进样量5 μl时为3.12 %。结论 高效液相色谱柱前衍生法可使血、房水、晶状体中的牛磺酸与其它氨基酸很好地分离,是测定牛磺酸含量的好方法。 主题词 牛磺酸/分析;白内障/病因学;色谱法,高压液相/方法;大鼠 中图号 R493.2;R776.1 DETERMINATION OF TAURINE CONTENT BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Yan Jingxia Song Xiujun Bian Xiaoyun Department of Ophthalmology,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051) Gou Lingyan Wang Renjie Zhang Yachao Shijiazhuang Medical College of PLA ABSTRACT Objective To explore the method for determination of taurine in plasma, aqueous and lenses of rate by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods Two mobile phase were used:0.05 mol/L sodium acetate buffer (pH=6.5)-methanolfourhydrofuran(80∶20∶0.8) and 0.05 mol/L sodium citrate butter (pH=6.5)-methanol(20∶80);the analytical column was Φ4.6 nm×150 mm necleos ODS.The Wistar rat's plasma,aqueous and lenses samples were determined after derivation.Results Using this method,the minimum detected limit was 10 μm/ml;the mean related coefficient between concentration of amino acids and reaction valus was 0.998±0.002;the rate of recovery were 97.07 %~96.79 %;the coefficient of variation of taurine's peak area was 10.75 % when the analysed sample was 3 μl and was 3.12 % when the analysed sample was

薄层快速分析多糖的单糖组成概要

干扰物质NaCl KCl Ca(NO 32 葡萄糖麦芽糖果糖蔗糖酒石酸柠檬酸倍数 200 200 200 100 100 100 100 100 100 表 1 干扰物质的影响Table 1 Effect of foreign species 样品编号 加入 (×10-5mol/L 检出a (×10-5mol/L 10.550.5420.760.7330.790.824 0.97 0.98 表 2 样品测定结果

Table 2 Results of the determination of samples 注:a 10次检测的平均值。 误差控制在±5%之内时。因此,该电极应用于蔬菜和水果中抗坏血酸的测定将具有很好的选择性。2.3.2 样品测定 为了验证该修饰电极能否在实际样品中抗坏血酸含量进行正确的测量,我们自制了几种样品。自制样品组成为:1.0×10-4 mol/L NaCl 、KCl 、Ca(NO 32、葡 萄糖、麦芽糖、果糖、蔗糖、酒石酸及柠檬酸及0.5×10-5~1×10-5mol/L 抗坏血酸。其测定结果如表2所示。由表2可知,测定的抗坏血酸含量与已知含量基本一致。3 结论 该新型的修饰电极具有极高的化学稳定性,且对溶液中的抗坏血酸具有良好的电催化作用,已成功地应用于水果中抗坏血酸含量的测定,获得了比较满意的结 果,可望成为能满足不同需要的抗坏血酸传感器。 参考文献: [1] D W Martin Jr. Harper's Review of Biochemistry, 19th ed Eds: D W Martin Jr, P A Mayes, V W Rodwell. Lange, Los Altos, CA, 1983. 112.[2]胡慰望, 谢笔钧. 食品化学[M]. 北京: 科学出版社, 1992. 243.[3]黄伟坤, 等. 食品检验与分析[M]. 北京: 中国轻工业出版社, 1989.96.[4] A H Ensminger, M E Ensminger, J E Konlande, 等. 食品与营养百科全书[M]. 王淮洲, 王惟球, 王模善, 等译. 北京:农业出版社, 1989.

多糖结构的分析

多糖结构分析 多糖在生物学上的重要意义,尤其是在医药学上的重要意义决定了多糖研究的迅速发展,多糖构效关系的研究已成为多糖研究的热点。但由于多糖结构的复杂性和多样性,其结构测定远远落后于蛋白质和核酸,本实验选择天然多糖(半乳葡萄甘露聚糖)作为实验材料,对其一级结构做初步的分析。 多糖一级结构的分析包括:纯度鉴定,分子量测定,单糖组成测定和糖链的序列测定。糖链的序列测定包括:单糖残基在糖链中的次序,单糖残基间连键的位置,链的分支情况等诸多方面。 【实验目的】 1.了解多糖结构分析的内容及方法。 2.了解多糖一级结构分析的基本原理。 3.掌握多糖一级结构分析的基本方法。 一、糖含量测定 【实验原理】 苯酚—硫酸试剂与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应,己糖在490nm 处有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。 【实验材料】 1. 实验器材 721型分光光度计。 2. 实验试剂 (1)98%的浓硫酸。 (2)80%苯酚:80g苯酚加20ml水使之溶解,可置冰箱中避光长期贮存。 (3)6%苯酚:临用前用80%苯酚配制。 (4)标准葡萄糖溶液(0.1 mg/ml):取100mg葡萄糖,用蒸馏水溶解,定容至1L。 (5)多糖样品:半乳葡萄甘露聚糖溶液(0.1 mg/ml)。 【实验操作】 1. 制作标准曲线: 取9支干燥试管,按下表操作 横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,绘制标准曲线。 2. 样品含量测定: 取样品液1.0ml,按上述步骤操作,测光密度。

3.计算: 糖含量(%)=C /(C0× V)×100% C: 由标准曲线查得的糖微克数 C0:样品溶液的浓度(0.1 mg/ml) V:测定时用的样品溶液体积(1.0ml) 二、单糖组成分析 【实验原理】 多糖在浓硫酸中保温一定时间可完全水解为单糖,通过纸层析分离,特定试剂显色后与已知糖的标准混合物作对比,可以鉴定多糖水解产物中单糖的组成。 【实验材料】 1. 实验器材 水解管;滤纸;玻璃毛细管;层析缸;喷雾器。 2. 实验试剂 ⑴标准糖溶液: 称取一定量的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖,用蒸馏水溶解,得标准糖混合溶液(每种糖的点样量为20微克~30微克)。 ⑵展层剂:正丁醇:乙酸:水=4:l:5 (上层)。 ⑶显色剂:苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液(邻苯二甲酸1.6g溶于水饱和的正丁醇100 ml,加苯胺0.93g(相当于0.9 ml)。 ⑷BaCO3;1mol/L硫酸。 【实验操作】 l.完全酸水解: 称取20 mg多糖样品,加入1mol/L H2S04 2ml;封管,l00℃水解8小时,然后加入BaC03中和,定量滤纸过滤,滤液留作分析。 2.纸层析: 将层析滤纸剪成7cm×40cm的纸条,距层析滤纸一端2cm处画一横线作为点样线,在点样线上画两个点分别作为标准糖溶液和多糖水解液的点样位置。用玻璃毛细管点样,斑点尽可能小,而且每点一滴,待点样点干燥后,在同一位置再点第二滴。然后将滤纸条悬挂于层析缸中进行层析,展层时间约为36小时。 3.显色: 将滤纸取出,自然干燥,喷上苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液,100℃条件下15分钟即可显色。标准单糖混合物色斑在滤纸上由下而上的顺序是:半乳糖-葡萄糖-甘露糖-阿拉伯糖。与标准单糖混合物色斑比较,即可判断多糖样品的单糖组成。 三、糖链的序列测定 (一)高碘酸氧化 【实验原理】 高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处,生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行,每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量,可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。 【实验材料】

高效液相色谱柱后衍生(pickering)测定氨基甲酸酯类农药

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.wendangku.net/doc/3b1668007.html, 服务热线:86-22-87890415 86-22-87890416 传真:86-22-87890417 高效液相色谱柱后衍生技术应用在农药残留氨基甲酸盐杀虫剂 (Carbamate Pesticide)方面的分析分析 1. 氨基甲酸盐杀虫剂分析柱 Pickering Labs 氨基甲酸盐分析柱利用EPA 和AOAC 的指定方法,保证了氨基甲酸盐残余物的良好分离。对于C18柱,两种水/甲醇梯度模式可以用来分别对甲醇中和水中的样品进行分析。扩展的分析法采用C8柱结合水/甲醇或水/氰甲烷梯度洗脱可以将23种氨基甲酸盐进行分离。甲醇与氰甲烷之间选择性的不同可以分别被用来对各自的出峰进行鉴定。 杀虫剂分析的柱后条件: 衍生试剂1:加水分解衍生试剂CB130 衍生试剂2:100mg of OPA, 2g Thiofluor ? in 950 mL of CB910 反应器1:100℃,0.5mL 反应器2:环境温度,0.1mL 衍生试剂流速:0.3mL/min 检测: 荧光检测器:λex 330nm, λem 465nm 氨基甲酸盐柱1846250 (4.6×250mm ) , C18, 5um

美瑞泰克有限公司中国代表处 https://www.wendangku.net/doc/3b1668007.html, 服务热线:86-22-87890415 86-22-87890416 传真:86-22-87890417 1. 涕灭威亚砜(Aldicarb sulfoxide ) 2. 涕灭威砜(Aldicarb sulfone ) 3. 杀线威(Oxamyl ) 4. 灭多威(Methomyl ) 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威(Aldicarb ) 7. 残杀威(Propoxur ) 8. 克百威(Carbofuran ) 9. 西维因(Carbaryl ) 10. 1-萘酚(1-Naphthol ) 11. 甲硫威(Methiocarb ) 12. BDMC (内部标准) 氨基甲酸盐柱1846150 (4.6×150mm ) , C18, 5um 1. 涕灭威亚砜(Aldicarb sulfoxide ) 2. 涕灭威砜(Aldicarb sulfone ) 3. 杀线威(Oxamyl ) 4. 灭多威(Methomyl ) 5. 3-Hydroxycarbofuran 6. 涕灭威(Aldicarb ) 7. 残杀威(Propoxur )

几种市售枫斗的多糖含量测定

几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月~ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)

3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍

单糖的结构

一、单糖的结构 (一)葡萄糖的开链结构和构型 葡掏糖是己醛糖,分子式是C6H12O6。实验已经证明葡萄糖具有开链的2,3,4,5,6-五羟基己醛的基本结构。 上述结构式中C2、C3、C4、C5都是手性碳原子,每个碳原子上的原子和原子团都可有不同的空间排布。经过研究,存在于自然界的葡萄糖中,四个手性碳原子上的空间排布除C3上的-OH在左边外,其它三个手性碳原子上的羟基都在右边。葡萄糖的费歇尔投影式如下: 单糖的构型仍沿用D,L衷示构型的方法,这种方法只考虑与羰墓相距最远的一个手性碳原子的构型。即根据与羰基相距最远的那个手性碳原子上的羟基在右边的为D-型,羟基在左边的为L-型。 自然界存在的单糖都属于D-型。 (二)变旋光现象和葡萄糖的环状结构 葡萄糖有两种结晶,一种是从乙醇中结晶出来的,熔点146℃,新配制的溶液经测定比旋光度﹝α﹞D为+112℃,此溶液经放置后比旋光度逐渐下降,达+52.5℃以后维持不变。另一种是从吡啶中结晶出来的,熔点150℃,新配制的溶液比旋光度﹝α﹞D为+18.7℃,此溶液经放置后比旋光度逐渐上升,也达到+52.5℃后维持不变。为了区别两种结晶,前者叫做α-D-(+)-葡萄糖,后者叫做β-D-(+)-葡萄糖。这种糖的晶体溶于水后,比旋光度自行转变为定值的现象称为变旋光现象。显然,葡萄糖的开链结构不能解释此现象。 经过物理及化学方法证明结晶状态的单糖并不是链状结构,而是以环状结构存在的。在前面第八章醛和酮的性质学习过,醛与一分子醇加成生成半缩醛,通常把半缩醛反应新形成的羟基称为半缩醛羟基。在单糖分子中同时存在羰基和羟基,因而在分子内便能由于生成半缩醛而构成环:即羟基中的氢原子加到羰基的氧上,而羟基中的氧与羰基中的碳原子可连接成环。对于葡萄糖来说,分子中有五个羟基,究竟哪一个羟基与羰基生成环状的半缩醛?由

201011298银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较

银耳多糖单糖组成分析的三种色谱方法比较 韩威1,姜瑞芝2,陈英红2,高阳3,高其品3* (1.延边大学,吉林延吉133002;2.吉林省中医药科学院,吉林长春130012;3.长 春中医药大学,吉林长春130117) 摘要:为选择一种准确快捷的方法测定银耳多糖的单糖组成,对薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)三种色谱方法进行比较。结果表明,前两种方法的测定结果均不理想,而HPLC法,操作简便,灵敏度高,分离效果好,信息完整。测定结果为由葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、岩藻糖组成,其摩尔比为0.24:1.00:0.06:0.29:0.25。HPLC法对酸性杂多糖组成糖分析是一种比较理想的选择。 关键词:银耳多糖;单糖组成;TCL;GC;HPLC Comparison of three kinds of chromatographic methods for monosaccharide composition analysis of Tremella polysaccharide Han Wei1, Jiang Rui-zhi2, Chen Ying-hong2, Gao Yang3, G ao Qi-pin3* (1. Yanbian University, Yanji 133002, China; 2. Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical of Jilin Province, Changchun 130012, China; 3. Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China) Abstract:To find an accurate and fast method to determine the monosaccharide composition of Tremella polysaccharide, thin layer chromatography (TLC), gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) was compared. The results of TLC and GC were not significant. However, HPLC was a simple method, showed high sensitivity, good resolution and integrity information. The result of HPLC analysis showed that the monosaccharide composition were Glc, Man, GlcA, Xyl and Fuc, with the mole percentage of 0.24:1.00:0.06:0.29:0.25. Consequently, HPLC is the most suitable method for monosaccharide composition analysis. Key words:Tremella polysaccharide; monosaccharide composition; TLC; GC; HPLC 银耳(Tremella fuciformis Berk)是真菌类银耳科银耳属植物,也叫白木耳, 基金项目:十一五国家科技重大专项(No. 2009ZX09103-333);国家自然科学基金(No. 30873370) *通讯作者Tel:(0431)86172070;E-Mail:gaoqipin@https://www.wendangku.net/doc/3b1668007.html,

高效液相色谱仪LC2000-技术标书(全检测器+自动进样器+柱后衍生)

液相色谱仪 技术标书 1. 总则: 1.1 提供相应货物的技术规格文件,在应答的品目标题下,表明货物的型号、商标名称及生产厂家。 1.2 货物的制造和检验,必须是按照现行的中国国家标准,或通用国际标准。 1.3 仪器设备如需特殊工作条件(如:水、电源、磁场强度、特殊温度、湿度、振动强度等),应在相关文件中加以说明。 1.4 所提供的货物的技术规格应与响应品目所要求相符。应根据产品的正式出版样本(原本)和说明书如实逐项填写技术规格响应表。 1.5 在价目表上应分别列出每台(套)设备的单价及每台(套)设备的配置清单,每个包的总价应是该包中各设备单价的总和,如在统计上有差错,则以单价为准,总价由买方更正。 2. 工作条件 除该品目在技术要求中另有说明外,所有仪器、设备和装置,均应适合以下条件: 能在电源电压220V(±10%),50Hz,5~35℃。 3.技术参数 3.1 输液泵 3.1.1 液体输送原理:双柱塞串联往复式,自动脉冲抑制系统; 3.1.2 流速范围:0.001mL/min~9.999mL/min; 3.1.3 最大输出压力:39MPa; 3.1.4 *流速准确度:±2μL/min(0.01~0.1mL/min); ±2%(0.101~8.01mL/min); ±4%(8.01~9.999mL/min); 3.1.5 *流速精密度:SD<0.02min 或RSD<0.075%(流速为1.0mL/min时的保留时间); 3.1.6 润湿部分材料:SUS 316,陶瓷,氟树脂。 3.2 梯度系统 3.2.1 混合液体数:4种液体;

3.2.2 *混合原理:用比例阀的开关时间编程进行梯度比例控制,流动相只在泵前合流,泵后直接混合; 3.2.3 *混合准确度:±1%; 3.2.4 *混合精密度:0.2%; 3.2.5 四元连续在线脱气(选配)。 3.3 紫外检测器 3.3.1 光源:进口氘灯; 3.3.2 光学系统:比例双光束,凹面光栅,1200线/mm; 3.3.3 波长范围:190~600nm; 3.3.4 波长精度:≤±2nm; 3.3.5 波长重复性:≤0.2nm; 3.3.6 光谱带宽:≤8nm; 3.3.7 *噪音水平:不超过±0.00001AU (254nm,流通池充满空气,时间常数2.0秒); 3.3.8 *漂移水平:不超过0.00025AU/hr (254nm,室温恒定,稳定的工作状态); 3.3.9 自动调零范围:-0.3~2 AU; 3.3.10 补偿范围:0~2AU,每步0.001AU; 3.3.11 响应时间:0.1 , 0.5 , 2.0 , 4.0 秒; 3.3.12 波长时间程序:有。 3.4柱温箱 3.4.1 操作简便; 3.4.2 控温精度:≤±0.1℃; 3.4.3 控温范围:室温+5℃~80℃。 3.5 Primaide自动进样器 3.5.1 *进样方法:全部体积直接进样方式(高压进样); 3.5.2 *样品数:≥200个(标准1.5ml样品瓶); 3.5.3 *扩展样品数: 4mL×128; 3.5.4 标准进样体积:0.1-50μL(100μL标准注射器);

铁皮石斛功效大全

铁皮石斛功效大全 1、滋养阴津 《中国药学大词典》称铁皮石斛“专滋肺胃之气液,气液冲旺,肾水自生”,善于养阴生津,治疗阴虚津亏诸症。 2、增强体质 铁皮石斛具有滋阴养血的功能。清代《药性论》说:铁皮石斛能补肾积精、养胃阴、益气力。含有丰富的多糖类物质,具有增强免疫功能的作用。 3、补益脾胃 铁皮石斛是益胃生津药。《神农本草经》、《本草再新》中均有记载,称谓“肠胃药”,是治疗胃脘痛、上腹涨痛的常用药物。现代医学实验证实:铁皮石斛对脾胃病中常见的致病菌幽门螺杆菌有较好的抑制作用,有助于治疗萎缩性胃炎、浅表性胃炎、十二指肠溃疡等幽门螺杆菌阳性的病症;同时,口服铁皮石斛煎液能够促进胃液的分泌,增强胃的排空能力,帮助消化。 4、护肝利胆 铁皮石斛有较好的利胆作用。历代医家都认为“铁皮石斛”具有滋养肝阴的作用,是治疗各种肝胆病的要药,可用于治疗肝炎、胆囊炎、胆结石等肝胆疾病。 5、强筋降脂 人进入中年以后,阴津开始衰弱,筋骨功能逐渐减退,铁皮石斛能够滋养阴液、润滑关节,从而达到强筋健骨、流利关节、增强抗风湿的效果。现代药理研究还表明:铁皮石斛能提高应激能力,具有良好的抗疲劳、耐缺氧作用;可促进循环、扩张血管、降低血胆固醇和甘油三脂。 6、降低血糖 铁皮石斛功能养阴清热润燥,自古以来就是治疗糖尿病的专用药。临床研究表明,铁皮石斛不仅可以增强胰岛素活性,同时能显著降低血糖水平,使血正常。 7、抑制肿瘤 铁皮石斛对肺癌、卵巢癌和早幼粒细胞性白血病等恶性肿瘤的某些细胞有杀灭作用,具有较强的抗肿瘤活性。临床用于恶性肿瘤的辅助治疗,能改善肿瘤患者的症状,减轻放、化疗的副作用,增强免疫力,提高生存质量,延长生存时间。 8、明亮眼睛 石斛具有滋阴养目的功能,被历代医家作为养护眼睛的佳品。现代药理学研究证实:石斛对防治老年白内障和保护少儿视力有明显效果。 9、滋养肌肤 人体进入中年后,由于体内的阴液日益减少,从而加速了皮肤老化,使之变黑或变皱。铁皮石斛含有的黏液质,对人体皮肤有滋润营养作用。 10、延年益寿 《神农本草经》将铁皮石斛列为具有“轻身延年”作用的圣药。现代药理学研究证实:铁皮石斛含有多种微量元素,对于人体的健康长寿有着密切的关系,对人体的抗衰老作用比一般的药物更广泛、更全面。

柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述

柱前衍生和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法的进展与评述 美瑞泰克有限公司中国代表处整理 柱前和柱后衍生高效液相色谱分析氨基酸方法进展与评述 以下主要对两种类型的七种应用广泛的氨基酸分析方法进行介绍,讨论和研究。 1、柱前衍生技术和反向色谱分离 氨基酸à衍生物à色谱分离 1.1 AQC(6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯)法 优点:能同时检测一级二级氨基酸,检出现1pmole 缺点:pH值和洗脱温度要求控制准确。 1.2 PITC(异硫氰酸苯酯)法 缺点:PITC试剂进入柱子使柱填料过早的老化,柱子寿命降低,因此过量的衍生剂需要真空干燥除掉,为此,仪器要附设衍生及真空干燥装置。(主要用在生物饲料及食品分析中应用) 1.3 OPA (邻苯二甲醛-巯基乙醇) 缺点:OPA只能与伯氨反应,使二级氨不能同时被检测。由于反向柱分离过程中会有部分衍生物发生裂解,致使OPA-氨基酸的稳定性很差,尤其是胱氨酸和赖氨酸衍生物信号衰减较快,灵敏度低。 1.4 DANSYL-Cl(丹磺酰氯)法 优点:同时可以检测1,2级氨基酸同时能够准确的测定样品中的胱氨酸。 缺点:衍生物在紫外光下不稳定,特别是蛋氨酸对紫外光十分敏感,收率很低,因此衍生反应必须避光进行,而且反应最好要在室温下进行40min左右,如果温度高于45度降低衍生物的产率。 1.5 FMOC-Cl(芴甲氧羟基氯)法 2 柱后衍生技术和阳离子交换色谱分离 2.1 OPA(邻苯二甲醛-巯基乙醇)法 优点:程序化柱后衍生,OPA以极快的速度于氨基酸反应成发荧光团物质,又在很短的时间内进入灵敏度很高的荧光检测器检测,消除了柱前手动衍生是衍生物不稳定的因素,该方法具有较高的分辨率和灵敏度。 2.2 Nin-hydrin(茚三酮)法 优点:程序化衍生,衍生反应速度快(60S),衍生物稳定性好,衍生试剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测。 缺点:衍生物只能用紫外检测器检测,使灵敏度较低而不适合微量氨基酸测定;衍生反应条件要求较高,需要附设加温衍生装置,仪器造价高;流动相与衍生液同时泵入体系,体系平和时间较长长。 综上所述:经过改进和完善的柱后衍生,离子交换色谱法,仪器已具备很高的自动化水平,被分离出来的氨基酸在特有的诸侯氧化剂衍生设备中按固定程序与衍生剂迅速反应并被检测,消除了个样品由于衍生时间,衍生温度等因素的差异带来的测试误差,实践证明该方法是继稳定性分辨率,分离度具佳的可靠的氨基酸分析方法,而衍生试剂不直接计入色谱柱,使柱寿命延长时柱后衍生法的一明显优势。 柱前——柱后衍生对照表 自动化程度衍生物的稳 定性柱子的损害前处理氨基 酸 分析的种类一次性设备 投入 柱前衍生法低低大繁琐18-26种小柱后衍生法高高小简单22-45种大

柱前衍生化_高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化

68 柱前衍生化—高效液相色谱法测定牛磺酸的条件优化 黄晓杰1,李京华2,王俊德2* 1.辽宁医学院 食品学院 (锦州 121001); 2.大连化物所 (大连 116023) 摘要采用自行制备的反相高效液相色谱柱,以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,色谱条件为:流动相醋酸钠缓冲溶液-乙腈(体积比875∶125),检测波长360 nm,外标法定量。得到最佳衍生条件为4.36 μmol牛磺酸和0.4% DNFB 0.1 mL,pH=7。对鲍鱼样品进行了测定,测得鲍鱼中牛磺酸含量1.12 g/100 g,此方法回收率与精密度试验结果较好。 关键词反相高效液相色谱法;柱前衍生化;2,4-二硝基氟苯;牛磺酸;鲍鱼 Precolumn Derivatization—Optimization on Determining Taurine by High Performance Liquid Chromatogramphy Huang Xiao-jie 1, Li Jing-hua 2,Wang Jun-de 2 1.Liaoning Medical university (jinzhou 121001; 2.Dalian Institute Of Chemical Physics (Dalian 116023) Abstract Taurine was determined by reverse phase high performance liquid chromatographic method. Derivatized with 2,4-dinitro-? uorobenzene, NaAc-Methanol(V:V=875:125) as mobile phase, with wavelength 360 nm. The external standard method was used. Get the best derivatized condition: 4.36 μmol taurine and 0.4% DNFB 0.1 mL, pH=7. This method was used for abalone, the content of taurine in abalone was 1.12 g/100 g. This method has better recovery and precision. Keywords reversed-phase high performance liquid chromatography ;pre-column derivatization ;2,4-dinitro-? uorobenzene ;taurine ;abalone 牛磺酸又称牛胆碱(taurine),化学名为2-氨基乙磺酸,是人体条件性必需氨基酸,以游离形式存在,不参与蛋白质代谢。常见的牛磺酸检测方法有氨基酸分析仪法和高效液相色谱法[1]。氨基酸分析仪法需要通过泵和反应器以保证洗脱液与柱后衍生试剂均匀混合,使仪器局限于一类分析。柱前衍生反相高效液相色谱法常用的衍生剂有OPA和DNFB等。OPA衍生法具有样品制备简单、衍生反应迅速等特点,但其衍生物不够稳定[2];DNFB可以克服衍生物不稳定的缺点,但会产生衍生干扰物。 试验对高效液相色谱柱前DNFB衍生法的衍生条件进行优化,以克服衍生干扰物的影响,获得最优衍生条件。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 法国吉尔森GAD-LN007 型高效液相色谱仪、305型高压输液泵、Gilson715色谱软件、116型可编程序紫外吸收检测器。色谱柱:本实验室自行研制的KF-AA05型反相氨基酸专用分析柱,(4.6×250) mm。飞利浦搅拌机(型号HR 2860/60/A)。 牛磺酸标样:生化试剂,北京奥博星生物技术责任有限公司,纯度98%;衍生剂2,4-二硝基氟苯(DNFB):德国Merck公司;离子对试剂N,N-二甲 基甲酰胺(N,N-DMF):沈阳市联邦试剂厂,分析纯;乙腈为色谱纯(TEDIA),鲍鱼样品为市售鲜样。1.2 色谱条件 流动相:30 mM NaAc缓冲溶液-乙腈(体积比85∶15),含1%N,N-二甲基甲酰胺,pH=6.20。经0.45 μm滤膜过滤,超声脱气待用。流速1.0 mL/min;检测波长360 nm;进样量10 μL。1.3 溶液的配制 NaAc缓冲溶液:称取NaAc 2.46 g,加5 mL N,N-二甲基甲酰胺,重蒸馏水825 mL,乙腈175 mL,稀醋酸调pH至6.2。 标准溶液:称取牛磺酸标准品10.9 mg,置10 mL 量瓶中,加重蒸馏水至刻度,即得到1.09 mg/mL的标准溶液。 衍生缓冲溶液:配制不同p H 值的N a H C O 3和KH 2PO 4缓冲溶液(均为0.5 mol/L)。 衍生溶液:准确称取2,4-二硝基氟苯(0.2~1) g置于100 mL量瓶中,用乙腈稀释至刻度,得到0.2%~1%浓度的衍生溶液。 平衡溶液:配制0.1 mol/L pH=7.0的KH 2PO 4缓冲溶液。 1.4 牛磺酸标准的衍生化 准确吸取标准溶液0.1 mL,0.2 mL,0.4 mL,0.6 分析检测

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