最终灭菌注射剂GMP检查要点

最终灭菌注射剂GMP检查要点

一、无菌药品综述

无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂，包括大容量注射剂、小容量注射剂和其它无菌药品。

注射剂系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液、乳状液或悬浮液及供临用前配制或稀释成溶液或悬浮液的粉末或浓溶液的无菌制剂。注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射剂的给药途径可分为静脉注射、脊椎腔注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射等。

为了提高注射剂的有效性、安全性与稳定性，注射剂中除主药外还通常添加其他物质，这些物质统称为“附加剂”。常用的附加剂增溶剂、湿润剂或乳化剂、缓冲剂、混悬剂、稳定剂、抗氧剂、抑菌剂、止痛剂等。

为了确保用药安全，注射剂的质量必须符合要求，检查项目包括无菌试验、细菌内毒素或热原试验、不溶性颗粒、可见异物、装量、装量差异、理化指标等。

注射剂按灭菌方式可分为最终灭菌注射剂和非最终灭菌注射剂，最终灭菌注射剂通常具有一定耐热性，能通过热处理的方式去除制品中可能存在的微生物。保证最终灭菌注射剂的无菌性的主要措施是在生产过程中有效控制生物负荷，并对内包装完毕的制品进行最终灭菌。通常采用湿热灭菌。

最终灭菌的注射剂包括大容量注射剂、小容量注射剂等，其生产工艺流程通常包括配制（浓配、稀配）、过滤、灌封、灭菌、目检、贴签和外包装等工序。

我国注射剂GMP认证检查的法律法规主要有：

《中华人民共和国药品管理法》，自2001年12月1日起施行。

《中华人民共和国药品管理法实施条例》，自2002年9月15日起施行。

《药品注册管理办法》，2007年10月1日起施行。

《药品生产质量管理规范》，自1999年8月1日起施行。

《药品生产质量管理规范》附录——总则及无菌药品部分，自1999年8月1日起施行。

《药品GMP认证检查评定标准》，自2008年1月1日起实施。

《中华人民共和国药典》，2005年版。

参考文献：

《药品生产验证指南》，国家医药管理局推行GMP.GSP委员会编，1996年4月第1版。

《药品生产质量管理规范实施指南》缪德骅主编，化学工业出版社，2001年8月第一版。

《药剂学》，人民卫生出版社，奚念朱主编，1994年7月第三版。Industrial Moist Heat Sterilization In Autoclaves，Technical Monograph No.1,2002 Revision，PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology.

下面以某企业生产的重酒石酸间羟胺注射液为例，介绍对最终灭菌的注射剂进行GMP检查的要点。

二、重酒石酸间羟胺注射液产品及其生产工艺介绍

重酒石酸间羟胺注射液为小容量注射剂，最终灭菌的无菌产品，规格为1ml：10mg间羟胺（相当于重酒石酸间羟胺19mg），贮藏要求为遮光、密闭保存。工艺处方由原料药重酒石酸间羟胺、抗氧剂焦亚硫酸钠、氯化钠组成，批量为100Kg。其生产工艺流程为：

配制：在10万级洁净区的配制罐中先加入一定量的注射用水，冷却至30℃，通CO2使之饱和，再将准备好的氯化钠溶液，重酒石酸间羟胺溶液以及焦亚硫酸钠分别加入配制罐中，加入注射用水定量，搅拌3~5分钟。用0.1N NaOH或酒石酸调节pH值至 3.4~3.6，并控制含量在98~102%。

粗滤：在100000级洁净区用0.45μm折叠式过滤芯过滤。

终端过滤：在10000级洁净区用2个0.22μm折叠式过滤芯进行终端过滤。

安瓿洗、烘及灌封：安瓿经清洗、灭菌符合要求方可灌封。正式灌

封前应检查装量、安瓿高度、残氧率以及灌封出的药液澄明度。灌封过程中每隔半小时检查一次装量，装量应为1.10-1.12ml。在10000级洁净区灌封，从配制开始到灌封开始的时间不得超过6小时。灌封实际收率在91-100%。

灭菌、检漏：灌封后的产品在10000级放入双扉安瓿检漏灭菌釜进行121℃，20分钟灭菌。灌封后的重酒石酸间羟胺注射液必须在4小时内进灭菌釜灭菌。

目检：按规定程序进行目检，安瓿泡头、瘪头、炭化等不合格品应剔除并计数。

贴标签、包装：按规定程序进行，目检安瓿外壁标签应齐整。

三、管理要点及检查重点（以重酒石酸间羟胺为例）

1、机构与人员

a)主管生产和质量管理的企业负责人、生产管理和质量管理部门负责人均应具有医药或相关专业大专以上学历，并具有药品生产和质量管理经验，并履行其职责。

b)企业负责人和各级管理人员应定期接受药品管理法律法规培训。

c)质量检验、生产、维修保养、清洁人员应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训和考核，并具有实际操作技能。

2、厂房设施的管理要点及检查重点

a)洁净区：

我国《药品生产质量管理规范》（1998年修订）对最终灭菌的无菌药品生产厂房洁净度级别的要求是：

浓配或采用密闭系统的稀配应在100000级洁净区内进行；

稀配、滤过、小容量注射剂的灌封、直接接触药品的包装材料的最终处理等操作应在10000级洁净区内进行；

大容量注射剂的灌封应在100级或10000级背景下的局部100级区内进行。

物料、中间品应经过物流缓冲间或传递柜进、出洁净区。称量配料间如产尘应与洁净走廊呈相对负压，必要时设捕尘设施。

中国药典（2005年版）规定：微生物限度检查、无菌检查应在100级或10000级背景下的局部100级区内进行，并与生产区分开。

微生物限度检查与无菌检查用的实验室和空气净化系统最好彼此分开，以尽可能减少对无菌检查的干扰。

b)空气净化系统

应能确保洁净区的洁净度级别、温湿度、压差等符合生产工艺要求并经过验证。

初效、中效过滤器应明确清洗/更换周期，高效过滤器应定期检测其完整性，如有泄漏或阻塞应及时更换。

空气净化系统应每天24小时运行，停用后再次运行应进行清洁、消毒并经过再验证，符合要求的方可开始生产。

c)与产品直接接触的压缩空气、氮气、二氧化碳等辅助设施

这些气体因与产品直接接触，不得对产品带来污染。应对系统进行验证。PQ测试项目包括洁净度级别、含水量、含油量等。

d)注射用水(WFI)系统

以纯化水为原水，经多效蒸馏制得。制水系统应能提供足够量的符合质量要求的注射用水。

注射用水制备和分配系统材质应无毒、耐腐蚀，设计和安装应避免死角和盲管；

储罐应密闭，并安装有经完整性检查合格的无菌级别的疏水性过滤器，设有保温装置；

管道通过卡箍连接，有一定的倾斜度，最地位出水，阀门用隔膜阀而不是球阀；

注射用水的储存应采用80o C以上保温或65o C以上保温循环，应有温度控制和指示装置；

设有必要的取样口包括注射用水储罐的入水口、总出水口和总回水口，并便于取样；

储罐、增压泵、管道可以排空便于清洁、消毒或灭菌。

e)纯蒸汽系统

纯蒸汽通常用于与产品接触物品的灭菌及产品的最终灭菌，质量应符合要求，纯蒸汽系统应经过验证并定期监测。

f)实验动物房

应与其他区域严格分开，实验动物应符合国家有关规定。

3、设备

a)配制系统

称量用秤的精度应符合物料的称量要求，并定期校验，贴有合格标

志。

配制罐体积应与生产批量相匹配，材质应符合要求，禁用铁类容器或露铁搪瓷桶，配有搅拌、降温等装置，可定容。配制罐宜自带称量系统或液位电极、或液位标尺，如采用玻璃液位管应能拆卸，以便清洗。

因配制需要在低于30℃、 CO2饱和的注射用水溶解原辅料，应有有效的控温装置，CO2输送管道终端应连有0.45 μm或精度更高的疏水性过滤器。

配有粗滤所需要的0.45μm 过滤器。

配有终端过滤所需要的2个0.22μm过滤器及过滤器完整性测试设备。过滤器的安装应符合工艺要求，一个0.22μm的过滤器应可能接近灌封机（欧盟无菌药品附录要求），与产品直接接触的过滤器材质应不得吸附药液组分和释放异物（应有验证数据支持）。

反复使用的过滤芯应灭菌干燥后保存，并规定有灭菌有效期和使用次数。

配制系统宜采用密闭系统，并配有自动清洗、消毒或灭菌装置。管

道通过卡箍连接，使用结束应能排空。

b)洗、烘、灌封联动线

洗瓶机：应安装在100000级洁净区。洗安瓿能力应能满足工艺需要，洗净后安瓿的清洁度符合要求。

隧道烘箱：应安装在100000级洁净区，分为预热、高温、冷却三个部分，应有温度记录装置，应有传送速度显示仪，温度控制仪与温度记录装置应分开。传送带不得穿越十万级与万级区域，应分段。

定期检测隧道烘箱内洁净度和风速，如：尘埃粒子、沉降菌等数据。高效过滤器应定期或根据两端压差的变化情况进行更换，更换后应进行检漏试验。

灌封系统：应安装在10000级洁净区，能有效控制装量，灌装过程中药液无溅壁现象，安瓿封口完好。重酒石酸间羟胺灌装过程要充入氮气防止产品被氧化，氮气质量应符合要求，充入氮气后安瓿内残氧量应

符合工艺要求。

灌装头、灌装管道等灌装器具应按规定的程序清洁、消毒或灭菌。

控制与显示关键参数的仪表如：温度，传送速度应经过定期校验，并贴有合格校验标签。

c)灭菌设备

用高压灭菌釜对产品进行湿热灭菌的方法包括冷空气重力置换法、预真空法、脉冲真空法、蒸汽-空气和蒸汽-水-空气灭菌法、过热水浸没灭菌法。

企业应根据产品特性选择合适的灭菌设备，能满足产品的最终灭菌和生产用器具的灭菌要求。

灭菌设备应具灭菌温度、时间自动监测、记录装置，其能力应与生产批量相适应。仪表经过校验，并贴有校验合格标志。

直接与产品接触的器具和产品的灭菌应用纯蒸汽。检漏用色水宜经过灭菌处理。

d)文件

每台主要设备都应建立设备使用标准操作程序（SOP）、清洁、消毒或灭菌标准操作程序、维护保养标准操作程序、使用记录和设备档案。

4、物料的管理要点及检查重点

a)物料的采购

应由具有产品专业知识的人员负责，从企业质量审计合格的供应商处采购。

重酒石酸间羟胺注射液所用原辅料（重酒石酸间羟胺、焦亚硫酸钠、氯化钠）在中国药典二部（2005年版）均有收载，其质量标准应符合现行药典要求和企业内控标准。

内包装材料为低硼硅玻璃安瓿，应符合国家药用包装容器（材料）标准，标准号：国家药用包装容器（材料）标准（试行）YBB00332002。

b)原辅料的检验、贮存及分发

物料应保存于企业规定的适宜的环境中并有明确的标识，质控部门应按批取样、检验、签发。取样应具有代表性，样品应按企业内控标准进行检验。原辅料应经质量部门签发后在有效期内使用。不合格的原辅料不得用于生产。

c)包装材料

低硼硅玻璃安瓿经检验合格后方可投入使用。药品标签和说明书应与药品监督管理部门批准的内容、式样、文字相一致，经企业质量管理部门校对无误后印制、发放、使用。标签发放、使用、销毁应有记录。

d)不合格品

不合格物料、产品应专区存放，应有易于识别的明显标志，并按有关规定及时处理，并有记录。对不合格产品应查明原因并采取必要的纠正措施。

e)退回产品、收回产品

应按相关程序处理并作适当记录。

5、验证的管理要点及检查重点

a)HVAC系统及洁净室的验证

新车间应进行前验证，包括IQ、OQ和PQ，车间运行一定时间或停止运行后再次使用前应进行再验证。

验证测试项目应重点检查洁净度级别（尘埃粒子、微生物）、高效过滤器完整性（DOP）、压差、温、湿度（应能满足生产工艺要求）、局部100级区的气流流型、洁净室的清洁及消毒措施等。

b)压缩空气、氮气、二氧化碳等辅助系统的验证

新系统应进行前验证，包括IQ、OQ和PQ，系统运行一定时间后应进行再验证。

气体储存及分配系统材质应无毒，并设终端过滤器。

验证测试项目应包括洁净度级别（尘埃粒子、微生物）、含水量、含油量等。

c)注射用水系统的验证

新的注射用水系统应进行前验证，包括IQ、OQ和PQ。

注射用水储罐和分配系统选用材质应无毒、耐腐蚀，管道的设计和安装应避免了死角、盲管，储罐应安装有疏水性过滤器，储罐和管道应能排空，注射用水及分配系统的保温效果应能达到设计要求（80o C以上保温或65o C以上保温循环）。

注射用水质量应不低于中国药典（2005年版）注射用水质量标准，验证测试时间应不少于3周，并应监测季节变化对水质的影响。

企业应根据验证结果规定注射用水系统的清洗、灭菌周期。

企业应制定注射用水系统监测计划，包括对微生物、内毒素、理化指标，并按计划对水质进行监测并有完整记录，鼓励企业做趋势分析、年度回顾。

d)洗、烘、灌封联动机组的验证

新系统应进行前验证，包括IQ、OQ和PQ，系统运行一定时间后应进行再验证。

洗瓶机清洗安瓿后的洁净程度（清洗后往安瓿中加入注射用水，振摇后检查澄明度和不溶性颗粒）。

隧道烘箱高效过滤器的完整性和隧道烘箱内洁净度级别、隧道烘箱空载热分布、负载热穿透试验以及微生物挑战试验。

灌装机装量准确性、灌装后安瓿熔封效果等。

e)湿热灭菌工艺的验证

中国药典（2005年版）要求，对热稳定的产品，可采用过度杀灭法，其无菌保证水平（SAL）应≤10-12，热稳定较差产品的标准灭菌时间F0一般不低于8分钟，此情况下，应在生产全过程中，对产品中污染的微生物严加监控，并采取各种措施降低微生物污染水平，确保被灭菌产品达到无菌保证要求。

重酒石酸间羟胺注射液生产中，产品的最终灭菌和与产品直接接触的器具如过滤器的灭菌等采用湿热灭菌。该产品最终灭菌的工艺参数为

121°C20分钟。进行灭菌验证时，被灭菌物品的数量和装载方式、灭菌温度和时间或F0必须在验证方案中明确规定，至少进行3次空载热分布试验，每种装载方式都至少进行3次负载热穿透试验，并选用合适的生物指示剂。

空载热分布试验和负载热穿透试验至少用12个热电偶，应有热电偶分布示意图，热电偶在每次使用前后均应进行校正。

121°C蒸汽灭菌通常选用中嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂。

验证过程中应考虑灭菌参数的上限和下限，保证灭菌效果和产品质量。

f)工艺验证

工艺验证应在洁净室系统、压缩空气及氮气系统、工艺用水系统、热力灭菌系统、检测方法等验证合格且人员经相关培训考核合格后进行。

应连续3批产品验证合格。验证的批量应与工艺规程规定的相同，关键工艺控制参数如配制工序中的pH值、温度、搅拌时间、隧道烘箱灭菌温度及安瓿输送带速度、灌装工序中的装量、最终灭菌的温度及时间等是应在工艺规程规定的范围之内。

采集的用于检验的样品应足够，能反映整批产品的质量。如检查安瓿是否清洗干净时，应在清洗安瓿的前、中、后期取样对安瓿的洁净度进行检查；检查装量时，应在灌装的前、中、后期采集了足够的样品并分别进行检验；成品应按灭菌柜次取样并分别作无菌试验等。

工艺验证应包括最差条件，如从配制到灌装或灭菌的时间间隔要求、灌装期间进入灌装间人员的数量、设备出现故障时进行必要的检修等。

灌装期间应对灌装间进行微生物监测，监测结果应作为产品放行审核的一部分。

变更控制和偏差管理应符合规定，对出现的偏差应进行了调查和记录等。

g)清洁验证

不同产品共用生产设备，或产品不稳定生成了降解产物，或清洁过

程引入了外来物质如清洁剂等，应进行清洁验证。清洁验证是对某一具体的清洁程序进行验证。

重点检查清洁程序的可操作性、清洁过程中是否引入了外来物质、允许残留量计算的依据、化学残留量检测方法的灵敏度、是否考虑了所有共用设备、管道中的残留等。

清洁验证判断标准应包括目测、漂洗液取样检验和棉签擦拭取样检验。棉签擦拭取样检验应做回收率试验作为取样、检测方法的依据。

清洁验证通常与工艺验证同时进行，并应包括最差条件如产品批量、生产完成后到清洁的时间间隔、清洁液用量等。

h)检验方法验证

采用药典未收载的检验方法时，应进行检验方法验证。检验方法验证内容应包括准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性等。微生物限度检查和无菌试验方法的验证过程和内容应符合《中国药典》的指导原则。

i)验证文件

验证文件应包括验证主计划、验证方案、SOP、验证报告。验证计划应明确验证项目、验证顺序、组织机构职责等，验证方案应包括验证目的、范围、职责、方法、接受标准、相关文件、变更控制及再验证等，SOP应具体，具有可操作性，验证报告应汇总验证全过程、结果、结论及建议等。

6、生产管理

a)配制及粗滤过程

原料含量换算及称量过程应有记录并有第二人复核。

配制工艺参数如溶液的温度、通入CO2的时间、搅拌速度及时间等应在验证过的工艺规程规定的范围之内，如有偏差应有记录并进行调查。

配制好的药液质量如PH值、含量等应符合要求。不合格的中间产品不得进入下一道工序。

配制完成后，按要求用0.45μm折叠式过滤芯对药液进行了过滤。

设备清洁、消毒或灭菌应按规定的程序进行，并有录。清洁后的设备宜干燥保存，不应有积水。

物料、中间品、设备应有明确的状态标识。如配制的药液应标明产品名称、批号、批量、工序名称（待粗滤或已粗滤）、日期/时间、操作人员等。

b)精滤及灌封过程

安瓿经洗瓶机清洗，洁净度符合要求。

隧道烘箱运转正常，灭菌/去热原温度、传送带传送速度等参数控

制在验证的范围内，应有灭菌/去热原应有自动监测记录。安瓿灭菌后在规定的时间范围内使用。

应按程序对粗滤后的药液用0.22μm过滤芯进行了精滤。精滤前、后应对过滤器进行完整性试验并合格。

应按规定程序进行灌封。正式灌装前应检查装量、安瓿高度、残氧率以及灌封出的药液澄明度。灌装过程中应按规定定期取样检查装量、外观。

从配液开始到灌封开始的时间间隔不应超过6小时。灌装过程应在规定时间内完成。

操作人员应按标准操作程序进行灌装操作，操作应熟练，符合规范。

应按规定程序及时清场并有记录。

洁净区内消毒剂宜临用新配，并轮换使用消毒剂以避免产生耐药菌株。

c)产品灭菌

配药操作从溶解开始到灭菌结束需控制在24小时内完成，药液从灌装封到灭菌结束应控制在4小时完成。

灭菌温度应为121℃，保温时间应为20分钟。产品灭菌的批量与装载方式应与验证时一致。现场核对产品灭菌釜灭菌参数的设定与相应的文件规定是否一致。应有灭菌柜自动监测记录。

灭菌结束后应进行检漏并有记录。

d)目检及包装

目检人员的视力应符合要求并按文件规定对产品进行目检。

标签及其上面打印的批号、生产日期、有效期应有人员核对并有记

录。

e)文件

生产工艺应与注册批准工艺一致。工艺规程应完整包括：品名、剂型、处方和确定的批量、生产工艺的操作要求、物料、中间产品、成品的质量标准和技术参数及贮存注意事项、物料平衡的计算方法、成品容器、包装材料的要求。

批生产记录应能反映生产的全过程，特别是关键的数据及参数不得遗漏。记录应真实、准确、完整、及时，修改数据应保留原始数据仍可辨认。

批记录审核应包括物料的批号及用量、关键的工艺参数如产品灭菌的温度、时间及自动监测记录、产品精滤用滤芯的规格及完整性测试记录、从配制到灌装、灌装过程以及从灌装到灭菌的时间间隔、物料平衡计算及记录、偏差调查及处理记录等。

7、质量管理

a)质量管理部门根据需要设置的实验室应与药品生产区分开。生

物检定、微生物限度检定应分室进行。

b)应有与药品生产规模、品种、检验要求相适应的场所、仪器、设备

以及足够数量的经过培训、考核合格的质量管理和检验人员。

c)企业应有经过批准的书面的物料、中间品、成品的质量标准和

检验操作规程。

d)用于配料的物料应经检验合格，配料用的注射用水使用点，在

配料进行前应取样作内毒素检查。

e)应按文件规定及时完成中间产品取样检测，如粗滤前应对配制

的药液取样进行pH 与含量等，不合格中间品不得进入下一道工序。如采用特殊处理方式，如某些产品因中间品检验需要较长时间，未等检验结果就进入下一道工序，应有相应文件规定，并经过验证。

f)无菌产品应按灭菌柜次取样并分别做无菌试验，应包括灭菌釜

内冷点取样，取样数量与检验用量应符合中国药典要求。

g)无菌检验供试品处理方法应经过方法学验证。检验用培养基至

少应按干粉批号每批进行灵敏度试验，试验用检定菌品种应符合中国药典要求。

h)无菌试验结果判断：阳性对照管培养48~72小时应生长良好，

阴性对照不得有菌生长。若供试品管中任何一管显浑浊并确认有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效（参照中国药典2005年版第二部，附录92），即生长的微生物非供试品所含。无菌试验经确认无效后方可重试。

i)内毒素检测每批鲎试剂应做灵敏度复核试验，测试应按药典规

定的方法进行检验。

j)对超出规定范围的测试结果，应调查原因并采取纠正措施，避

免再次发生。

k)质量管理部门应按规定行使了对物料、中间产品的使用、成品

放行的决定权。

l)质量管理部门应按规定行使了对不合格产品的处理程序。

m)质量管理部门应进行药品放行审核并有记录。审核内容应包括：

配料、称重过程中的复核情况；各生产工序检查记录；清场记录；中间产品质量检验结果；偏差处理；成品检验结果等。符合要求并有审核人员签字后方可放行。不合格产品不得出厂。

无菌检查方法学验证

无菌检查方法学验证 1. 概述 将规定量的供试品按无菌检查法中的薄膜过滤法进行操作,并接种小于100cfu 的试验菌,同时设置阳性对照,按规定温度培养3~5 天,与各相应的阳性对照管比较: 如含供试品各管中的试验菌均生长良好,则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用,可按此法进行供试品的无菌检查;如含供试品的任一管中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量或使用中和剂等方法消除供试品的抑菌作用,并再重新进行验证试验。 2. 验证前提条件 供试品的选择原则:相同配方,不同规格的制品,选择其中装量最大的制品进行验证。种类相同,含量不同的制品,选择含量最高的制品进行验证。照此原则,多规格制 品按下表选择供试品进行验证。 3. 验证方法 3.1菌液制备 3.1.1细菌菌液制备程序 ①取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的冻干菌种管各一支，分别在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后，吸出滴入营养琼脂斜面上,使均匀分布，置30~35C培养18h~24h。用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于营养琼脂培养基斜面上，于30~35C培养18h~24h o 同法操作,培养得第3代培养物。 ②取生抱梭菌的冻干菌种管一支,在无菌操作下打开,以毛细吸管加入适量营养 肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入胃酶肉肝疱斜面上,使均匀分布,置30~35C培养18h~24h o用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于胃酶肉肝疱斜

面上，于30~ 35°C培养18h~24h。取生抱梭菌的第二代新鲜培养物至硫乙醇酸盐流 体培养基中,30~35C培养18h~24h,得第3代培养物。 ③分别取金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的第3代营养琼脂斜面新鲜培养物，用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后用5.0ml吸管将洗液移至另一无菌试管中,用电动混合器混合20s或在手掌上振敲80次,以使细菌悬浮均匀,得初步菌悬液。 ④取初步制成的上述菌悬液和生抱梭菌第3代新鲜培养物,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至不高于标准比浊管的浓度，即得每1ml含菌数小于100cfu验证细菌菌液。 3.1.2抱子悬液制备程序 ①取白色念珠菌和黑曲霉的冻干菌种管各一支,分别在无菌操作下打开,以毛细 吸管加入适量营养肉汤,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散后,吸出滴入改良马丁琼脂斜面上，使均匀分布，置23~28C培养5~7天。用接种环取适量第1代培养菌苔，划线接种于改良马丁琼脂斜面上,同上述条件培养得第2代培养物。取第2代培养物,同法操作,得第3代培养物。 ②用5.0ml吸管吸取3.0ml~5.0ml0.9%无菌氯化钠溶液加入上述第三代新鲜斜 面试管内,反复吹吸,洗脱抱子,用管口带有薄的无菌棉花或纱布的毛细吸管吸出抱子悬液至无菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至不高于标准比浊管的浓度,即得每1ml含菌数小于100cfu验证抱子悬液。 3.2 薄膜过滤 3.2.1 供试品试验组 取规定量供试品,按《无菌检查标准操作细则》薄膜过滤后,如为不含防腐剂供试品，则往其中一只滤筒内接入100ml改良马丁培养基，往另一只滤筒内各接入100ml 的硫乙醇酸盐流体培养基,用5ml灭菌注射器抽取1ml验证菌液，从集菌培养器胶管处注入培养基中;如为含防腐剂供试品,则待供试品过滤完后,连续 3 次用

GMP质量检验员培训讲义

GMP质量检验员培训讲义 药品标准中国药典国家标准进口药品注册标准 药品标准的结构 2.1原料药 2.1.1药名中文名汉语拼音英文名 2.1.2结构式分子式分子量 2.1.3含量限度同药品本身的性质，含量测定的方法有关。 2.1.4性状包括外观性状、溶解度、理化常数。 外观性状按凡例的讲明，是对样品色泽和外表感观的描述。 溶解度为物理常数，是样品纯度的指标，药典凡例对溶解性有详细的描述。 理化常数包括熔点、比旋度、相对密度、吸取系数（E1%1cm）、折光率等。为药品的纯度指标。 2.1.5鉴不通常为反映药品的化学、物理性质和生物活性，不代表对药品化学结构的确证。 一样有化学鉴不、光谱鉴不和色谱特性等。 化学鉴不为加入一种试剂，产生颜色、沉淀、气味为鉴不的指标。 光谱鉴不通常是指紫外吸取光谱和红外光吸取图谱。紫外吸取光谱是在一定的波长范畴内的最大吸取波长或吸光度的比值为鉴不的指标。红外光吸取图谱是在规定的试验条件下同时测定样品与对比品的红外光吸取图谱进行比较，或与对比的图谱（标准图谱）比较。 色谱特性是指薄层色谱、气相色谱和液相色谱。薄层色谱是在同一时刻、同一条件样品斑点与对比品或对比药材斑点比较，是以斑点的位置与颜色为鉴不的指标。气相色谱和液相色谱均是以主峰保留时刻为鉴不的指标。 2.1.6检查指检查杂质，杂质又分为无机杂质和有机杂质。硫酸盐、氯化物、重金属、铁盐、砷盐等为无机杂质，有机残留溶剂和有关物质为有机杂质。

2.1.7含量测定方法有容量分析法和仪器分析法。 2.2制剂 2.2.1药名中文名汉语拼音英文名。制剂的命名原则一样是以原料名加剂型名。 2.2.2含量限度可因剂型、剂量、检测方法的不同而不同。 2.2.3性状通常是对样品的外观描述。 2.2.4鉴不采纳与原料药相同的鉴不。通常是对要紧的鉴不，在复方制剂中对每一个主成分都要作鉴不。 2.2.5检查通用的检查项有残留溶剂和有关物质的检查，另外是按照不同的剂型、不同的剂量采纳不同的检查项。如片剂会检查片重差异、溶出度或崩解时限等。注射剂会检查装量差异、可见异物等。 2.2.6含量测定方法有容量分析法和仪器分析法。含量限度通常以相当标示量的百分数表示。

2019年GMP现场检查注意事项及应对技巧

2019年GMP现场检查注意事项及应对技巧 ?现场决不允许出现的问题： 1、各种现场存放的物料，出现帐、卡、物不符或没有标签或没有定置定位； 2、现场演示无法操作或操作不合规、不能说清如何工作； 3、现场（包括垃圾桶、垃圾站）存在废旧文件（受控或非受控），或有撕毁记录，随意涂改 以及提前或明显滞后填写现象； 4、专家面前推卸责任、争辩、训斥下属或有阻挠、干扰检查工作的现象； 5、环境温湿度、压差、洁净区密封等方面存在问题； 6、穿着洁净服行走在不同洁净级别区域之内； 7、现场设备设施表面存在明显的锈迹、油污或粉尘。 8、车间、仓库存在啮齿类动物尸体、粪便或其他活动痕迹。 ?各部门车间指定负责回答问题的人员素质要求： 1、有能力可胜任； 2、沉稳自信； 3、放心可靠、能信任的（以防故意捣乱）； 4、有经验及专业有知识； 5、不该说的别乱说，以免节外生枝。 ?各部门必须注意的问题： （一）设备设施方面必须避免出现的问题 1、不合理安装（设计缺陷，可能引起操作不便及清洁不彻底情形，继而怀疑验证确认的合理 性）； 2、管道连接不正确（存在交叉或较多盲端以及流通不畅、倾斜角度不对等）； 3、缺乏清洁（设备内表面有残留，清洗SOP的有效性）； 4、缺乏维护（现场存在跑冒滴漏的痕迹或正在进行）； 5、没有使用或运行记录； 6、使用不合适的称量设备或检测设备； 7、设备、管道无标志，未清楚地显示内容物名称和流向； 8、有故障和闲置不用的设备未移走或标识不清楚。 9、压差表不回零或指示不准确。 （二）生产现场检查时避免出现的问题或关注点 1、人流、物流、墙壁、地面、交叉污染； 2、每个区域，每次只能生产一个产品，或者必须没有混淆、交叉污染的危险；

无菌检查法验证方案

XXX无菌检验方法学验证方案 编号：VP.SV.039.00

目录 验证方案的审批 验证小组名单 验证实施进度 技术性文件 引言 1．概述 2．验证目的 3．职责 无菌检查方法学的确认 再验证周期

验证方案审批

验证小组名单 验证实施进度 技术性文件

引言 1.概述 1.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH规定，当建立药品的无菌检查方 法时，需进行方法学的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的检测。当药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检测方法应重新验证。 2.验证目的： 2.1根据2010版《中华人民共和国药典》二部附录ⅪH无菌检查方法要求，通过试验， 寻找合适的材料、条件和方法，最终确定氧氟沙星滴眼液的检验方法，并将其定为日常检测的正式方法。 3.职责 3.1验证办 3.1.1负责验证方案的审批。 3.1.2负责验证的协调工作，以保证验证方案规定项目的顺利实施。 3.1.3负责验证数据及结果的审核。 3.1.4负责验证报告的审核。 3.1.5负责再验证周期的确认。 3.2质量监控部 3.2.1负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。 3.2.2负责仪器、仪表、量具的校正。 3.2.3负责取样及样品检验。 3.2.4负责收集各项验证、试验记录，对结果进行分析，起草验证报告，报验证办。 3.2.5负责拟订验证方案。 3.2.6负责组织试验所需设备。 3.2.7负责按照验证方案里各项操作步骤进行操作。 3.2.8负责保证设备的正常运转。

无菌检查方法学的确认 1.验证环境、设备及实验前准备： 1.1无菌室内（无菌检查应在环境洁净度B级下的局部洁净度A级的单向流空气区域或 隔离操作器内完成。由QA人员定期按国家相关要求进行环境监控。 1.2仪器和设备：①GSP-9080MBE型隔水式电热恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗 设备厂）；②生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；③AL204型电子天（梅 特勒—托利多仪器有限公司）；④GZX-9070MBE型电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实 业有限公司医疗设备厂）；⑤YXQ-LS-50SI型高压蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公 司医疗设备厂）；⑥HTY-2000A集菌仪、全封闭集菌培养器可重复使用集菌培养器（杭 州高得·泰林医疗器械有限公司）；⑦超净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备 厂)；。⑧微孔滤膜（孔径0.45μm直径50mm）… 1.3供试品： 1.4所需培养基： 1.4.1硫乙醇酸盐流体培养基（细菌培养）；批号：050104；灵敏度：应符合定 厂家：北京三药科技开发公司； 改良马丁培养基（真菌培养）；批号：050106 ；灵敏度：应符合规定 厂家：北京三药科技开发公司； 营养琼脂培养基（分离单个菌落及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司； 改良马丁琼脂培养基（培养真菌及传菌种）；厂家：北京三药科技开发公司； 1.5稀释液、缓冲液： 0.9%氯化钠溶液；PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 (配制方法参照chp2005附录—90页) 1.6验证用菌种：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]；大肠埃希菌[CMCC（B）44 102] 生孢梭菌[CMCC（B）64 941]；枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]；黑曲霉[CMCC（F） 98 003]；白色念珠菌[CMCC（F）98 001]。（以上菌种均由湖北省药品检验所提供）1.7培养基的无菌检查：培养基配制好并采取验证合格的灭菌程序灭菌后随机取 5瓶 (管)，培养 14 天，结果应无菌生长。 2.方法学验证: 2.1简要方法说明：本品为喹诺酮类抗生素，通过抑制细菌的DNA旋转酶和DNA复制而发

无菌检查法验证要点

浙江红雨医药用品有限公司 无菌检验方法验证 方案及报告 验证方案申请人:验证方案审核人:验证方案审批人:日期: 日期: 日期: 年 年 年 月 月 月 日 日 日

浙江红雨医药用品有限公司 1 概述 无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。它是根据用于 实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品 受微生物的污染。基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。检验方法的 验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。 2 验证目的 对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。 3 实验原理 直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。 本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。 4 验证范围 实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。 5 6 职责 7 验证内容 建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比 较观察菌落的生长状况，得出结论。 8 验证指示物 本实验所用菌种为购于浙江省食品药品检验研究所标准菌株:金黄色葡萄球菌、白色 念球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌。

GMP质量检验员培训讲义(药监局)

培训讲义 1.药品标准中国药典国家标准进口药品注册标准 2.药品标准的结构 2.1原料药 2.1.1药名中文名汉语拼音英文名 2.1.2结构式分子式分子量 2.1.3含量限度同药品本身的性质，含量测定的方法有关。 2.1.4性状包括外观性状、溶解度、理化常数。 外观性状按凡例的说明，是对样品色泽和外表感观的描述。 溶解度为物理常数，是样品纯度的指标，药典凡例对溶解性有 详细的描述。 理化常数包括熔点、比旋度、相对密度、吸收系数（E1%1cm）、 折光率等。为药品的纯度指标。 2.1.5鉴别通常为反映药品的化学、物理性质和生物活性，不代表对药品化学 结构的确证。 一般有化学鉴别、光谱鉴别和色谱特性等。 化学鉴别为加入一种试剂，产生颜色、沉淀、气味为鉴别的指标。 光谱鉴别通常是指紫外吸收光谱和红外光吸收图谱。紫外吸收光 谱是在一定的波长范围内的最大吸收波长或吸光度的比值为鉴别的 指标。红外光吸收图谱是在规定的试验条件下同时测定样品与对照 品的红外光吸收图谱进行比较，或与对照的图谱（标准图谱）比较。 色谱特性是指薄层色谱、气相色谱和液相色谱。薄层色谱是在同 一时间、同一条件样品斑点与对照品或对照药材斑点比较，是以斑 点的位置与颜色为鉴别的指标。气相色谱和液相色谱均是以主峰保 留时间为鉴别的指标。 2.1.6检查指检查杂质，杂质又分为无机杂质和有机杂质。硫酸盐、氯化物、 重金属、铁盐、砷盐等为无机杂质，有机残留溶剂和有关物质为有 机杂质。 2.1.7含量测定方法有容量分析法和仪器分析法。

2.2.1药名中文名汉语拼音英文名。制剂的命名原则一般是以原料名加剂 型名。 2.2.2含量限度可因剂型、剂量、检测方法的不同而不同。 2.2.3性状通常是对样品的外观描述。 2.2.4鉴别采用与原料药相同的鉴别。通常是对主要的鉴别，在复方制剂中对 每一个主成分都要作鉴别。 2.2.5检查通用的检查项有残留溶剂和有关物质的检查，另外是根据不同的剂 型、不同的剂量采用不同的检查项。如片剂会检查片重差异、溶出 度或崩解时限等。注射剂会检查装量差异、可见异物等。 2.2.6含量测定方法有容量分析法和仪器分析法。含量限度通常以相当标示量 的百分数表示。

无菌检查方法的验证

无菌检查方法的验证 无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要项目。因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重要，而检查方法的验证是保证检查结果的公正、科学和准确的基础，因此各个主要国家的GMP或药典都对无菌检查方法的验证提出了严格的要求，2010版中国药典对分析方法验证和检查的要求也有大幅度的提高，同时也是GMP检查中检查的重点和容易发现问题的区域。 验证要求与方法 无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。 前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。 再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。 通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。 这里，验证的重点环节包括： 前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。 供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。 具体的验证方法如下： 菌种的选择 无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌[CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌[CMCC(F)98 003]代表霉菌。 菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，

无菌检查法验证要点

浙江红雨医药用品有限公司 无菌检验方法 验证方案及报告 验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日

1 概述 无菌检查法是为了检查药典要求无菌的医疗器械产品是否无菌而建立的检查法，是作 为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。它是根据用 于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样 品受微生物的污染。基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制 约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。检验 方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组 成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。 2 验证目的 对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本 公司产品的无菌检查。 3 实验原理 直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作 用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。 本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得 出直接接种法无菌检验的有效性。 4 验证范围 实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。 5 执行程序 文件编码文件名称存放部门 HY-QC-012 无菌检验操作规程品管部 6 职责 姓名职务职责 刘传杰经理负责验证方案的批准实施、验证报告的批准 周德标QC 验证方案、验证报告的起草并负责验证过程中现场的监控及取样张思东QC 负责按制订无菌检验规程实施检验和验证实验 7 验证内容 建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比 较观察菌落的生长状况，得出结论。 8 验证指示物 本实验所用菌种为购于浙江省食品药品检验研究所标准菌株:金黄色葡萄球菌、白色 念球菌、大肠埃希菌及生孢梭菌。

省第三期药品GMP检查员培训学习心得体会

省第三期药品GMP检查员培训学习心得 体会 省第三期药品gmp检查员培训学习心得体会 20xx年8月18日，参加了省第三期药品gmp检查员培训。此次培训共历时5天，上课4天，最后一天检查企业。 。8月18日上午孙老师讲授了质量风险管理和药品质量体系的量身定制；8月18日下午和8月19日上午梁老师分别讲授了生产过程管理与风险控制、物料管理风险及控制、验证管理及风险评估；8月19日下午崔老师讲授了中药饮片gmp要求、gmp文件管理和空气净化系统及工艺制水系统；8月20日上午闫老师讲授了中药制剂gmp基本要求及厂房设施设备；8越0日下午马老师讲授了质量控制实验室管理要求；8月21日上午闫老师讲解了药品检察原则探讨；8月21日下午于老师讲授了飞行检查有关规定及要求；8月22日，我所在第五小组赴市培丰中药材生态种植加工有限公司进行模拟检查。 本次培训老师是国家级检查员，拥有专业的理论知识和丰富的实践经验。通过五天的学习，我受益匪浅，回顾所记所学，总结起来是以下几个方面： 1、gmp是技术与法规的结合，是生产者遵循的最低的游戏规则。李克强总理曾经提出：“药品是监管出来的”，

习主席更说要“严谨标准”。20xx年修订版的gmp规范，增加了很多新内容，有不少是在学习借鉴国外规范后推出的新理念，如：偏差及超限的处理、变更控制、质量风险管理、验证设计、供应商审计、批准及质量回顾分析、持续稳定性考察计划等。绝大多数gmp检查中表现出的缺陷可归因于药品质量体系的缺陷，因此新版gmp将过去十多年来执行gmp 的具体要求更加规范化、合理化。 2、gmp文件及文件管理的重要性。gmp文件管理和记录贯穿药品生产和质量管理的整个过程，与公司各部门的设置相适应，因此文件的制定和执行的好坏体现企业的管理水平和规范程度，所以正确的文件记录是制药行业所有岗位和所有员工必须具备的技能之一。gmp的文件包括技术标准（ts）、管理标准（smp）、工作标准（sop）以及记录、凭证和报告、归档这几个内容，并且了解到每个标准细化下的具体标准，涵盖了质量生产、厂房的设施设备、岗位人员职责、质量控制部（qc）实验室管理、库房和物料、市场销售及采购、安全环保这些方面，主要做好四个防范：污染，交叉污染，混淆和差错。gmp文件管理是企业遵循国家各种有关法规，让一切活动有章可循、责任明确、照章办事、有案可查。 3、风险的评控和验证管理的重要性。##风险被定义为危害出现的可能性和危害严重性的结合。用质量风险管理

无菌检查方法验证告报告2015课件

编号：FAL-YZ-003.1 无菌检查方法 验证报告 科技发展有限公司

目录

无菌检查方法验证报告 1.目的 通过对培养基无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。 2.范围 适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。 3．依据 中国药典（2015年版） GB/T14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学实验方法 4. 职责权限 5. 验证方法 实验前的准备 a仪器设备

b操作环境 微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空 气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 c稀释液和试剂： PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 d器具无菌注射器仪液器 YT－603集菌仪 5.1培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆胨肉汤培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 培养基：硫乙醇酸盐批号20140408 生产厂家：青岛日水生物技术有限公司胰胳大豆胨肉汤培养基批号20151023 生产厂家：青岛尼赛欣合生物技术有限公司

5.1.1无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。 5.1.2灵敏度检查 菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第 0 代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕 5.1.3菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上震荡混匀,制成10-100 cfu/0.1ml菌悬液,3-5天内用完。 5.1.4培养基接种取每管装量为12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100 cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1支不接种作为空白对照，培养3 天；取每管装量为9ml的胰胳大豆胨肉汤培养基7支,分别接种小于100 cfu 的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养5 天。逐日观察结果。

无菌检查方法验证方案

. 安徽捷众生物化学有限公司 无菌检查方法（薄膜过滤法） 验证方案 文件编号：QY·TS·05·007-00

. 批准日期：年月日实施日期年月日 . .

. . 分发单位： . . 安徽捷众生物化学有限公司 无菌检查方法（薄膜过滤法）验证方案 目录 1．验证目的 2. 验证频次

3. 验证操作内容与要求 3.1. 验证操作试验 3.2 试验菌要求验证方法步骤3.3.验证准备3. 4. 3.5验证试验操作．验证结果评价分析4．附件5 . . ．验证目的1确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。验证频次2. 建立药品的无菌检查法时2.1. 修订检验方法时2.2. 2.3. 供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 3. 验证操作内容与要求： 3.1. 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定要求进行验证

操作试验：对每一试验菌应逐一进行验证。3.1.1. 硫乙醇酸盐流体培养基—金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生3.1.2. 孢梭菌。 3.1.3. 改良马丁琼脂培养基—白色念珠菌、黑曲霉。试验菌要求： 3.2 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保验证试验所用的菌株传代次数不得超过3.2.15 证试验菌株的生物学特性。验证试验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。当同时进3.2.2. . 行时，若验证试验失败，则供试品的无菌检查结果是不成立的 3.3验证方法步骤：.3.31验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照无 菌检查方法（薄膜过滤法）进.行平行试验，通过计算回收率来判断无菌检查方法（薄膜过滤法）是否对产品有影响。 3.32试验结果可接受标准用无菌标准评价方法“0.9％氯化钠注射液(三层共挤膜.袋)的无菌检查”对检品中无菌检查试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。 3.4. 验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。 3.4.1. 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基备注： 3.4.1.1 培养基应注明来源；如采用市售干粉培养基，应按说明配制。 3.4.1.2 配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的适用性检查”项下检验无菌性和灵敏度。 3.4.2 仪器设备 3.4.2.1. 净化工作台 3.4.2.2. 生物洁净安全柜 3.4.2.3. 集菌仪

无菌检查法标准操作程序要点

1目的 建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。 2范围 适用于原料、辅料及成品的无菌检查。 3职责 微生物检验员遵照执行。 4内容 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是

否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 4.1 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。 4.1.1 培养基的制备及培养条件 培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2?25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 硫乙酵酸盐流体培养基4.1.1.1 胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g 酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天 无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0ml L-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g 硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml (或硫乙醇酸）（0.3ml) 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不释过2 0分钟），迅速冷却只限加热一次，并防止被污染。 除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30? 35C培养。 4.1.1.2 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪胨 1 7 . 0g 氯化钠 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3. 0g 磷酸氢二钾 2. 5g 葡萄糖/无水葡萄糖 2. 5g/2. 3g 水1000m l 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节p H 使灭菌后在2 5℃的p H 值为7. 3±0. 2，加入葡萄糖，分装，灭菌。 胰酪大豆胨液体培养基置20?2 5 ℃培养。 4.1.1.3 中和或灭活用培养基 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。 4.1.1.4 0.5% 葡萄糖肉汤培养基(用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查） 胨 1 0 . 0g 氯化钠 5 . 0g 牛肉浸出粉 3 . 0g 水1000m l 葡萄糖 5. 0g 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH使灭菌后在25℃的p H 值为7. 2士0.2，分装，灭菌。

(完整版)无菌检查法-药典2010第三部-附录XIIA

附录XII A 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基 培养基的制备：培养基按以下处方制备，亦可用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2~25℃避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般可在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在1年内使用。 1、硫乙醇酸盐流体培养基 酪胨（胰酶水解）15.0g 酵母浸出粉 5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g L-胱氨酸0.5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0mL 硫乙醇酸钠0.5g （或硫乙醇酸0.3mL） 琼脂0.75g 水1000mL 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值为弱碱性，煮沸，滤清，加入水葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH值使灭菌后为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2，灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经1000℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）后，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。 2、改良马丁培养基 胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g 酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁0.5g 葡萄糖20.0g 水1000mL 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值约为6.8，煮沸；加入putaotang 溶解后，摇匀，滤清，调pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，灭菌。 3、选择性培养基 按上述硫乙醇盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验。 4、营养肉汤培养基 胨10.0g 氯化钠 5.0g 牛肉浸出粉 3.0g 水1000mL 取上述成分混合，微温溶解，调pH值为弱碱性，煮沸，滤清，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。 5、营养琼脂培养基 按上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。

无菌检查方法验证

无菌检查方法验证： 取本品，分别加灭菌注射用水1ml溶解，采用薄膜过滤法依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪH），应符合规定。 1、供试品处理 将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注入1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。 2、检查 阳性对照：将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或改良马丁液体培养基管中，在相应的温度下培养。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培

养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。 阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。 样品（薄膜过滤法）：每种实验菌取10支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。其中：试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的滤膜接种至液体硫乙醇酸盐培养基管中；试验菌为白色念珠菌、黑曲霉菌的滤膜接种至改良马丁液体培养基管中。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。

表中接种管数中1代表用薄膜过滤法接种管；2代表各试验菌不加供试品的阳性对照管。 3、实验结论：含供试品的培养管中微生物生长无微弱、缓慢或不生长，表明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用。 附：试生产三批注射用胸腺五肽（规格10mg）无菌检查原始记录

药典附录无菌检查法

药典2010版附录无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基 培养基的制备培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2 一25 ℃ 避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般可在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在1 年内使用。 1 ．硫乙醇酸盐流体培养基 酪胨（胰酶水解）15.0g 酵母浸出粉5.0g 葡萄糖 5.0g 氯化钠2.5g

L-胱氨酸 0.5g 新配制的1 . Oml 0.1％刃天青溶液 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂0.75g （或硫乙醇酸）(0.3ml）水1000ml 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调pH 值为弱碱性，煮沸，滤清，加人葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH 值使灭菌后为7.1士0.2 。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2 , 灭菌．在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5 ，否则，须经100℃ 水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟）后，迅速冷却，只限加热1次，并防止被污染。 2 ．改良马丁培养基 胨5.0g 磷酸氢二钾1.0g 酵母浸出粉2.0g 硫酸镁0.5g 葡萄糖20.0g 水l000ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH 值约为6.8 ，煮沸；加人葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调pH值使灭菌后为6.4士0.2 ，分装，灭菌。 3 ．选择性培养基 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验。

新版中国药典中关于无菌检查法的要点

新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点 7月2日，国家药品监督管理局、国家卫生健康委发布公告，正式颁布2020年版《中国药典》，新版药典将于今年12月30日起正式实施。新版药典对环境监测、无菌检查方法、微生物检测、灭菌验证等都做出了相关要求。本文结合了《医疗器械无菌试验检查要点指南》中的检查内容，对新版《中国药典》中关于无菌检查法的要点进行了整理，供大家参考。 1、无菌检查要求 （1）无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 （2）单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 （3）日常检验需对试验环境进行监测。 注意：“受控环境”主要的关注指标应该是悬浮粒子、浮游菌和 沉降菌受控，其他如压差、温湿度等的指标和监测频度也应满足《药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》的要求。 2、培养基的制备及培养条件 （1）培养基可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或商品化的预制培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 （2）制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25°C 、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。 注意：新版药典将“成品培养基”调整为“商品化的预制培养基”。新版药典不再强调“非密闭-三周”、“密闭-一年”的规定，便于企业实

践掌握；但企业应最好具备稳定的验证过程和结果，以支持封闭条件和保存周期。 3、培养基的适用性检查 无菌性检查每批培养基一般随机取不少于 5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养14 天，应无菌生长。 注意：应考虑实践中用于无菌性检查培养的试管装灭菌培养基与无菌检验用的三角瓶装培养基在灭菌方法验证时的两种包装的温度、F0等结果。 4、菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存和确认，以保证试验菌株的生物学特性。 5、菌液制备 （1）接种金葡、铜绿、枯草的新鲜培养物至胰酪大豆陈液体培养基中或胰酪大豆陈琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35°C培养18~24小时。 （2）接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20~25°C培养2~3天，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。 （3）接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，20~25°C培养5~7天或直到获得丰富的孢子，加入适量含0. 05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7. 0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。