恙瞒染色体制备方法的探讨

实验十人类染色体g显带技术及g带核型分析

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析 实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml，配成％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和的磷酸缓冲液）

骨髓细胞染色体的制备与观察

实验七骨髓细胞染色体的制备与观察 [实验目的] 1.小白鼠等骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。 2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。 [实验原理] 骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次是要能够清楚的观察染色体的形态。为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。制备优良的标本可获得满意的观察效果。利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。 [实验用品] 1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。 2. 试剂：0.02﹪秋水仙素、0.075mol/l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。 3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。

染色体 实验报告

染色体标本的制备及组型实验 生命科学学院张瀛 【实验目的】 1．掌握染色体标本的制作方法。 2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验用品】 小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。 【实验原理】 染色体标本制作的原理 细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为 染色体标本制作的四大要点 1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。 2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素） 3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。 4）空气干燥：使细胞和染色体展开。 5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细

胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 染色体标本制作的意义 根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。 染色体标本制作的应用 1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。 染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。 2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。 因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。 染色体组型 把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。 染色体核型 染色体组型是染色体核型的模式表达。 染色体组型及分群依据 主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。 描述染色体的四个参数 相对长度：可用来表示每条染色体的长度。 臂指数：可用来确定臂的长度。 为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan 提出划分标准： 1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M ） 1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 7．0以上：端部着丝粒染色体（T ）

染色体标本的制作及组型观察

染色体标本的制备及组型观察 【实验目的】 1. 掌握染色体标本制作的基本方法； 2. 认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。 【制作染色体标本的意义】 了解染色体的特征（形态、大小、数目）一一绘制染色体组型图 【染色体组型图的应用】 ①生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条; 鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条 ②临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究： 十21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴” J卵巢退化症：45 XO,外貌表现为女性，卵巢发育不全或无， 1.5米以下，不能生育。 .睾丸退化症：47 XXY，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房， 智力低下或超常，不能生育，发声尖高。 因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型） 【染色体标本制作的原理】 ------------------ 选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠“ 细胞具有旺盛尸 _________________ 的分裂能力卞 制作染色体标彳J施加药物使细胞分裂：PHA 本的先决条件 设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素 1. PHA促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。 2. 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。 3. 空气干燥：使细胞与染色体展开。 4. 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。 5. 固定：用Camoy s solution,作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增力口，保持了染 色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢 和丢失。 【实验用品】

染色体标本的制作及组型观察

染色体标本的制作及组型 观察 Revised by Jack on December 14,2020

染色体标本的制备及组型观察 【实验目的】 1.掌握染色体标本制作的基本方法； 2.认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。 【制作染色体标本的意义】 了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图 【染色体组型图的应用】 ①生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类：兔44条；小鼠40条；大 鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；人46条；马64条 ②临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断和研究： 21三体综合症：是21对常染色体多一条，此种人“先天愚型”，或称“伸舌样白痴” 卵巢退化症：45 XO，外貌表现为女性，卵巢发育不全或无，米以下，不能生育。 睾丸退化症：47 XXY ，外貌为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房，智力低下或超常，不能生育，发声尖高。 因此，染色组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽羊水做组型） 【染色体标本制作的原理】 施加药物使细胞分裂：PHA

设法得到大量的分裂中期细胞：秋水仙素 1.PHA：促进细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变成淋巴母细胞。 2.秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停在分裂中期。 3.空气干燥：使细胞与染色体展开。 4.低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离变大，易于染色体分散开。 5.固定：用Camoy’s solution,作用使蛋白变性，对染色体内的组蛋白讲，变形后硬度增加，保 持了染色体的“即时形态”对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 【实验用品】 1.实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、 离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯 2.实验药品：蒸馏水、% NaCl溶液、% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸 =3:1）、秋水仙素 3.实验材料：小鼠 【实验步骤】 1.取雄性小鼠，以每克体重4微克注射秋水仙素（约1mL），14-16h后，用断头法处死小鼠，取 出睾丸用生理盐水（% NaCl溶液）洗去血污，置于解剖盘中。 2.将睾丸放入装有1mL % KCl溶液的小烧杯中剪碎（液体呈乳白色）。 3.用铜网过滤到刻度离心管中，再加% KCl溶液至4mL。 4.37℃静置30mins，进行低渗处理。 5.以800-1000r/min离心8分钟。 6.弃上清液，加入2mL甲醇·冰醋酸固定液。用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8mins。 7.再以800-1000r/min离心8分钟。 8.弃上清液，加入1mL甲醇·冰醋酸固定液，再制成细胞悬液，固定5mins。 9.取去洁净的低温预冷载片，距载片10-15cm的高度滴下2-3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻 轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 10.用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥或文火干燥。 11.用染液染色20——30分钟，细水冲洗玻片背面，去除多余染液，气干。 12.镜检：低倍镜下寻找分散良好，染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。【实验结果】 精子头部 精子鞭毛分裂中期的染色体未破碎的细胞

小鼠染色体的制备观察染色

生命科学学院 Life Science College 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班 学号：同组者：曾玮璠 山东大学实验报告2015年6月1日 姓名：柳伟雄系年级：生科一班2013级同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验题目：小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求 1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操 作步骤的原理。 2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。 二、原理 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实

验选用小鼠的精巢为实验材料。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。 三、试剂和器材 1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲 醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液 Giemsa染液的配制： 吉姆萨粉(Giemsa stain) 甘油(AR) 甲醇(AR) 将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗 粒为止，然后再分批加入甘油，放56℃温箱中2h后，分批 加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃ 保存)。使用前，将母液用PBS稀释后使用。 2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、离心 机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等 3.材料：小白鼠 四、实验步骤 制片 1.取雄性小鼠以每克体重4μg注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小 鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl溶液）洗去血污。 2.将睾丸放入装有1ml 0.3%KCl低渗溶液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 3.用铜网过滤到玻璃刻度离心管中，再加0.3%KCl缓冲溶液至4ml。 4.静置30min，进行低渗处理。 5.以800～1000r/min的转速离心8min。 6.取出离心管，弃去上清液，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），并用吸管 至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8min。 7.再以800～1000r/min转速离心8min。 8.弃上清，加入1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5min。 9.取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片 一边向另一边轻轻吹气，同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。 染色

人类染色体的识别及核型分析

生命与环境科学学院实验报告 实验课名称遗传学实验实验名称人类染色体的识别及核型分析成绩______________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别一时间2015.温度6℃ 实验原理及目的 实验目的 1、学习并掌握染色体核型的分析方法； 2、熟悉人类染色体的特征； 3、了解人类染色体结构畸变的表示方法。 实验原理 1．染色体组型（核型）的基本含义 含义：生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。 包括：染色体的总数，染色体组的数量，每个染色体组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。 2．人类染色体特征 Denver体制 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，成为识别人类各种染色体病的基础。 3.染色体显带标本 显带技术（banding technique）：用各种不同方法，以及用不同染料处理染色体标本后，每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术。 每条染色体带纹相对固定，可用于鉴别。 显带技术种类：Q带、G带、C带、R带、T带. G带是目前被广泛应用的一种带型。主要是被Giemsa染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 4.遗传学中一些常用于对染色体和核型分析的指标描述 界标(landmark)：稳定、明显标记的指标.包括末端、着丝粒和带. 区（region）：两相邻界标之间. 带（band）：着色处.（浅、深；亮、暗）. 臂（arm）：p、q 实验材料、仪器及试剂 1.人类染色体标本——非显带标本和显带标本 2.直尺，剪刀，计算机等。 实验步骤 ①染色体制片 制片方法：植物染色体——压片法（酸解、酶解） 动物染色体——滴片法（骨髓细胞、外周血细胞）标本种类：非显带染色体；显带染色体 图片要求：染色体分散；数目全；形态好 ②选择最佳图象拍照 ③测量、计算 ④配对 ⑤剪贴 ⑥排列 排列原则：从大到小；短臂向上；着丝粒在一条线上；性染色体单排。

实验五 人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2 3 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高

小白鼠染色体标本的制作染色与观察

小白鼠染色体标本的制作、染色与观察 姓名：学号：实验时间： 1.实验目的 （1）初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。（2）了解常用实验动物染色体的数目及特点。 （3）认识不同生物染色体的特征。 2.实验原理 凡处于活跃增殖状态或者经过各种处理，任何动物组织的细胞都可进入分裂时期，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：①用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处；②用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。3.实验材料和用品 （1）材料：小白鼠 （2）试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液 （3）器材：解剖盘、解剖镊、解剖剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等 4.实验步骤 （1）小白鼠染色体标本制作 ①取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。 ②放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 ③用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。 ④37℃静置30分钟，进行低渗处理。 ⑤以800～1000转/分离心8分钟。 ⑥弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。 ⑦再以800～1000转/分离心8分钟。 ⑧弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。 ⑨取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。

实验四__人类染色体的识别与核型分析

实验四人类染色体的识别与核型分析 一、实验目的 1.学习染色体核型的分析方法； 2.了解人类染色体的特征。 二、实验原理 1．染色体组型(核型)是指生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。包括：染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。组型分析能进行染色体分组外，还能对染色体的各种特征做出定量和定性的描述，是研究染色体的基本手段之一。利用这一方法可以鉴别染色体结构变异、染色体数目变异，同时也是研究物种的起源、遗传与进化，细胞遗传学，现代分类学的重要手段。 2．人类的单倍体染色体组(n=23)上约有30000-40000个结构基因。平均每条染色体上有上千个基因。各染色体上的基因都有严格的排列顺序，各基因间的毗邻关系也是较为恒定的。人类的24种染色体形成了24个基因连锁群，所以，染色体上发生任何数目异常、甚至是微小的结构变异，都必将导致许多获某些基因的增加或减少，从而产生临床效应。染色体异常常表现为具有多种畸形的综合征，称为染色体综合征，其症状表现为多发畸形、智力低下和生长发育异常，此外还可看到一些特征性皮肤纹理改变。染色体畸变还将导致胎儿死产或流产。染色体病已成为临床上较常见的危害较为严重的病种之一，染色体病的检查、诊断已经成为临床实验室检查的重要内容。 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型(karyotype)的基本特点即Denver体制，并成为识别人类各种染色体病的基础。按照Denver 体制，将待测细胞的染色体进行分析和确定是否正常，以及异常特点即为核型分析。人类染色体分组及形态特征见表1。 表1 人类染色体分组及形态特征（非显带标本） A组：1-3号，可以区分。1号，最大，M，长臂近侧有一次缢痕；2号，较大，SM；3号，较大，比1号染色体段1/3-1/4）。 B组：4-5号，体积较大，SM，短臂相对较短，两者不容易区分。 C组：6-12，X。中等大小，SM，较难区分。6、7、8、11和X染色体的着丝粒略近中央，短臂相对较长，9、10、12染色体的着丝粒偏离中央。9号染色体长臂有较大次缢痕。

实验七染色体核型分析

实验七染色体核型分析

【实验项目】染色体核型分析 实验室名称显微分析实验室实验室地 点 学时2 实验 类型 验证每组 人数 2-4 选做 或必 做 必做 实验目的通过几种生物染色体标本的观察，掌握染色体核型分析的方法 内容提要生物染色体标本的观察；染色体核型的分析 重点难点染色体核型的分析方法 主要 仪器 及耗 材 显微镜、尺子、剪刀 实验七：染色体核型分析 〖实验目的和要求〗 观察分析细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征；学习染色体组型分析的基本方法和技能。 〖实验原理〗 染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、型态与功能之间的关系所不可缺少的重要手段。染色体组是指二倍体生物配子中所含的染色体总称，常以“Ｘ”表示。同一物种的同一染色体组内各染色体的形态、结构和连锁群是彼此不同的，但它们却相互协调，共同决定生物性状的发育。 研究染色体组型的方法，一是靠有丝分裂时染色体的形态特征，另一是靠减数分裂时染色体的形态和

特征。本实验着重介绍有丝分裂的染色体组型分析。 细胞有丝分裂中期是识别染色体个性特征的最佳时期，而染色体组型分析就是进行染色体特征的鉴别和描述，其形态的鉴别主要依据染色体的长度、着丝粒位置、付缢痕的有无和位置、随体的有无、形状和大小等资料进行分析。现分别介绍如下： 1.染色体长度，同一染色体组内各染色体的长度是不 一致的，其绝对长度可在显微镜上测量，或用放大照片测量后换算。由于染色体制片过程中使用的药剂及方法不同，另外供观察的细胞分裂不可能保证同一时期，故染色体的收缩有差异而导致绝对长度在同一物种或个体不同细胞间发生差异，针对这种情况，在分析中常用染色体的相对长度来表示。 在染色体长度测量中，对染色体的两条臂要分别测量，一般随体不计入染色体长度内。 2.着丝粒的位置：每条染色体都有一着丝粒，其位 置可因不同染色体而异。由于着丝粒把染色体分为两个染色体臂：长臂和短臂，它们的比率（即臂比）便可确定着丝粒的位置。 3.付缢痕的有无和位置：有些染色体上除着丝粒， 还另有一不着色或缢缩变细的区域称符缢痕。 4.随体的有无、形状和大小：有些染色体在短臂的 末端有一棒状小体称为随体，随体和染色体臂之间常以付缢痕相隔，具随体的染色体称SAT染色体。 〖材料和方法〗 细胞有丝分裂永久制片或其中期染色体图象的放大照

人类核型分析

实验四 人类核型分析 1．实验目的 了解人类染色体的形态特征，掌握其核型分析的基本方法。 2．材料 人正常和异常的染色体标本，人显带染色体标本 3．试验内容与方法： 核型：指某种生物个体或某一分类群(种、亚种或变种、居群)的一个体细胞全部中期染色体的数目、大小和形态等特征的总和。用来表述物种的特点和亲缘种属之间的关系。核型分析：将待测细胞的染色体按照该生物固有的染色体形态特征和规定，进行配对、编号和分组，并进行形态分析的过程过程。 Denver体制：按照Denver会议(1960年)提出的染色体命名和分类标准，将人类体细胞的46条染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分成七组(A、B、C、D、E、F、G、)23对的排列，并将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。人类染色体核型分析标准是丹佛（Denver）体制（人类有丝分裂染色体的标准命名体制）。该体制规定：每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别；

非显带染色体：染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。

人中期细胞染色体（数目2N=46） 结构特点 G显带染色体：G带技术是其中最常用的技术，由Pardue和Gall（1970）建立。中期染色体经胰酶处理及Giemsa染色后，能在其长轴上显示出明暗交替的横纹，每个染色体都有特定的带纹，可应用染色体分带技术，来准确地辨别每个染色体。一个细胞中期分裂相的G显带技术，每个染色体被染成深浅相间的带纹，浅的部分称为明带或浅带，深的部分称为暗带或深带。G带反映了染色体DNA上A -T的丰富区，在人类中约 有2000条G带可被鉴别，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一。有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区，Giemsa染料在G 带区是与DNA结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。G带区位于染色体的两臂上，和Q带区相对应，而与Ｒ带区相反。人类细胞染色体共分24种不同的带纹（22对常染色体和X、Y染色体） （一）人类正常染色体及其带型的识别 1. 非显带染色体的识别：根据染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分 ①A群：包括第1、2、3对染色体，体积大，彼此易于区别，有中央着丝粒，第二对染色体的着丝粒略偏离中央。 ②B群：包括第4、5对染色体，较大，均为亚中部着丝粒，彼此不易区分。 ③C群：包括6-12对常染色体和X性染色体，中等大小，为亚中部着丝粒染色体，彼此间难以区分，第6对的着丝粒染色体靠近中央，X染色

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析.docx

实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30 天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、 香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸 馏水、 Giemsa 原液、 Giemsa 稀释液、 1／ 15mol ／ L 磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出 现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪 70 年 代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（ Q带、G带、C 带、R 带、T 带）， G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa 染料染色后而显带，故称之为 G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、 Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用 Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的 G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以 G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee 等（ 1973）认为染色体上与 DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和 DNA结合牢固的区段可被染成深 带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的 结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带 的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT 多的染色体节段，相反，含 GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理 2 小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7 天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml ，配成％的工作液并用NaHCO3 调 pH 值至7 左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理 1～ 2 分钟（精确的时 间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa 染液（ 1:10 的 Giemsa 原液和的磷酸缓冲液） 中染色 10 分钟左右。

实验八 植物染色体标本的制备与观察

实验八 植物染色体标本的制备与观察 一、实验目的 1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。 二、实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。 植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。 三、实验仪器、材料和试剂 （一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。 （二）材料：蚕豆(Vicia faba , 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale , 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum , 2n=2x=42)、玉米(Zea mays , 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum , 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa ，2n ＝16）等根尖。 （三）试剂 1、 Carnoy 固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。 2、苯酚品红染色液。 四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本： (1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h ，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h 后幼根长至1—2cm 左右，于上午9—11时剪下根尖。 (2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h 。 (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy 固定液中固定2-4h ，转入70％乙醇中，4℃保存备用。 (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl 中60℃解离8－10min ，再用蒸馏水洗净。 (5) 染色：改良苯酚品红 染色5—10min 。 (6) 压片：把根尖放在载玻片上、切取分生区部分、加一滴45 %醋酸，盖上盖玻片，用力垂直猛压，盖玻片上放上一滤纸，用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 （7）镜检 五、实验结果

染色体标本制作和观察实验报告

【实验题目】 染色体标本制作与观察 【实验目的】 1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。 2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验材料与用品】 1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、 小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等 2.材料：小鼠 3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、 秋水仙素 【实验原理】 一、制作染色体标本的先决条件 ①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使 细胞分裂（PHA） ②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素 二、染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。

染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析 描述染色体的四个参数： ①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以 用来表示每条染色体的长度。 ②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。 ③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位 置。 ④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。 三、操作原理 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本次实验通过前处理、低渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。

人外周血染色体标本制备

人外周血染色体标本制备 一、培养基的选择与接种 培养基主要的作用是为培养的细胞提供营养，以让其更好的生长。其基本成分有双抗（青霉素和链霉素）、水、PHA、小牛血清、酚红等。小牛血清和植物血凝素偏高或偏低，以及PH值均会影响染色体的分裂。反复冻融的培养基对培养的效果也不好，一因PHA随着不断的解冻其效价也不断降低，二是因为含有细胞DNA生长必须的氨基酸，而此氨基酸会随不断的解冻而消失。培养基颜色改变及浑浊均不能再用。 接种血液时，视不同年龄群的人而异。小孩或者新生儿接种量比成人少，因为小孩和新生儿的白细胞比成人的高很多。血液太少，细胞稀薄并且生长速度减慢；血液太多，会造成培养细胞生长时营养成分不够，影响细胞的生长状态。 二、秋水仙素 其作用是阻断纺锤体拉向两级，使正在分裂的细胞停留在分裂中期，以便获得大量中期的分裂相以分析染色体之用。使用秋水仙素时应注意使用时间、作用时间、浓度、量等。一般而言，在收获细胞前1.5-2h加入。加入过多，染色体太短；反之，染色体瘦长或无中期分裂相。 三、低渗 这是染色体制备中关键的环节，目的是使淋巴细胞吸收水分而膨胀和中期染色体分散铺展。低渗效果与处理的时间、低渗的温度，低渗时吹打混匀细胞的力度有关。一般用 0.075mol/L的KCL。低渗时间不够，染色体分散不好，细胞粘连，呈团状；低渗时间过长，可是细胞破碎，染色体丢失，甚至会因染色体胀大得过分和使其形态结构模糊不清，变得难以消化及染色。一般加入8毫升，于37度水浴箱中低渗20-30min为好。 四、固定 为了维持染色体的固有形态。固定液可使细胞脱水，蛋白变性而使染色体粗大适中。注意：固定液需要现配现用，因为固定液所含的水分与固定效果有关。吹打细胞时，要注意用力，以免细胞丢失过多，因为低渗后的细胞很脆弱。 五、滴片 先制成细胞悬液，浓度适中，随个人喜好。但不因太浓，因其会使染色体分散程度受限。也不宜太淡，以免滴片时细胞分裂相稀少。一定要注意好温度、湿度的关系，这是要点。一般制片两张，然后置于75摄氏度烤箱中烘烤3h。

植物细胞染色体标本制备实验方法改进

植物细胞染色体标本制备实验方法改进 郭团玉 （宁德师范学院生物系，福建宁德352100） 摘要：结合多年生物实验教学实践，对植物的细胞染色体标本制备的实验取材、操作步骤、药品试剂等实验 方法进行改进，增进学生对实验原理的理解、 简化实验过程、节约实验经费，提高实验效果.关键词：植物细胞；染色体；标本；实验方法；优化 中图分类号：G642.423文献标识码：A 文章编号：2095-2481（2012）01-0062-03 植物细胞有丝分裂染色体标本的制备与观察实验，属于验证性实验类型.该实验对学生学习和理解植物的生长、发育、遗传等起奠基性作用.中学生物课程开设《观察根尖分生组织细胞的有丝分裂》实验[1]，大学生物专业的植物学、遗传学、细胞生物学课程也都开设有“植物细胞染色体标本制备与观察”实验[2].但是，不同学习阶段、不同课程，其实验的目的要求有不同侧重，而实验方法中实验步骤、取材、选用试 剂、 操作方法等各教材根据实验需要而有所差异，实验效果也不相同.笔者在查阅相关资料和长期实验教学实践的基础上，通过对比实验，对该实验方法进行了改进. 1实验方法 （1）取材.水仙鳞茎（3n =30）剔除包土、褐色老皮、老根，整个鳞茎用清水浸泡1d 后，改用水仙鳞茎基部浸水，16-18℃水培发根，隔天换水至根长2-2.5cm. （2）预处理.取材当天上午8：00-10：00，剪取0.5-1cm 根尖部分，室温下，用饱和樟脑丸溶液浸泡4-6h. （3）固定保存.取出预处理根尖，投入Carnoy 液（无水乙醇：醋酸=3：1）固定8-12h ；用70%酒精浸洗2次，并隔天换洗2次，而后密封存放长期使用. （4）解离.取预处理过的根尖放入解离液(95%乙醇和浓盐酸等量混合)中解离，使根尖变软，至夹取易断状态为宜，解离约7-8min. （5）第一次压片.取解离后的根尖用清水冲洗10s 后，置于载玻片中间，用刀片切去根冠及伸长区部 分，只留1-2mm 分生区， 另取载玻片与其交叉成“十”字型扣压，将材料压成薄层，而后小心分开两载玻片.如此，两载玻片中间区域皆附有一薄层材料. （6）染色.用石炭酸品红染色液，染色 3min. （7）第二次压片.盖上盖玻片再履吸水 纸，用拇指轻压，亦可用铅笔的橡皮头在盖 玻片上轻敲数下，使根尖细胞扩散呈云雾状. （8）镜检观察.用OLYM PUS 生物显微镜 镜检观察、摄照（×400），细胞分裂各期染色 体成像，见图1（水仙根尖各分裂相细胞染色 体）. 收稿日期：2011-12-12 通讯作者：郭团玉（1968-），女，高级实验师.E-mail ：szmxp2003@https://www.wendangku.net/doc/3f5869931.html, 基金项目：宁德师范学院校级教改资助项目（2011109） .图1水仙根尖各分裂相细胞染色体图注：图a.前期；图b.中期；图c.后期；图d.末期 宁德师范学院学报(自然科学版)Journal of Ningde Normal University (Natural Science)第24卷第1期 2012年2月Vol.24№.1Feb.2012