(-)-Tetramisole_碱性磷酸酶的抑制剂_16595-80-5_Apexbio

碱性磷酸酶的分离纯化及比活性与米氏常数测定

碱性磷酸酶的分离纯化及比活性与米氏常 数测定 一、实验原理 (1).碱性磷酸酶的分离纯化 1. 机械破碎法制备肝匀浆 低浓度乙酸钠：低渗破膜 低浓度乙酸镁：保护和稳定AKP 2.有机溶剂沉淀法分离纯化AKP 加入不同有机溶剂重复离心 正丁醇：沉淀部分除AKP的蛋白质 33%丙酮、30%乙醇：溶解AKP 50%丙酮、60%乙醇：沉淀AKP (2).比活性测定 1.比活性的定义 *单位重量的蛋白质样品中所含的酶活性单位。 *通常用每毫克蛋白质具有的酶活性单位来表示。 *用以鉴定酶的纯化程度，是酶分离提纯完成的评价指标之一。 2.测定样品的比活性必须测定： *每毫升样品中的酶活性单位数。 *每毫升样品中的蛋白质毫克数。

3.磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶活性反应原理 (3).米氏常数测定 K m 即为米氏常数，V max为最大反应速度 ＊如上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度,因此, 米氏常数的单位为mol/L。 当反应速度等于最大速度一半时,即V = 1/2 V max, K m = [S]＊吸光度表示不同底物浓度时的酶反应速度。以吸光度的倒数作纵坐标， 以底物浓度的倒数作横坐标，按Lineweaver-Burk作图法可求出Km 值。

二. 器材 721分光光度计台式离心机恒温水浴锅微量移液器 托盘天平匀浆器试管 三. 试剂 1. 0.5mol/L醋酸镁溶液称取醋酸镁 5.3625g溶于蒸馏水中, 稀释至50ml. 2. 0.1mol/L醋酸钠溶液称取醋酸钠0.0820g溶于蒸馏水

中, 稀释至10ml. 3. 0.01mol/L醋酸镁---醋酸钠溶液取0.5mol/L醋酸镁溶液2ml 及0.1mol/L醋酸钠溶溶液10ml,混合均匀后加蒸馏水稀释至100ml. 4. 丙酮(分析纯). 5. 95%乙醇(分析纯). 6. Tris缓冲液(Ph8.8) 称取Tris 6.05g,用蒸馏水溶解成50ml,为0.1mol/L Tris液,取0.1mol/L Tris液10ml,加0.5mol/L 醋酸镁2ml,加蒸馏水80ml,再用1%醋酸调pH至8.8,然后用蒸馏水稀释至100ml. 7. 0.01mol/L基质液称取磷酸苯二钠(C6H5PO4Na2.2H2o) 0.3g, 4-氨基安替比林0.15g,分别溶于煮沸冷却后的蒸馏水中;两液混合并蒸馏水稀释至50ml,加0.2ml氯仿防腐,盛于棕色瓶中,冰箱内保存,可用一星期; 临用时与等量0.1mol/L pH10的碳酸盐缓冲液混合即可. 8. 0.1mol/L pH10的碳酸盐缓冲液称取无水碳酸钠0.318g 及碳酸氢钠0.168g溶于蒸馏水,稀释至50ml. 9. 碱性溶液量取0.5mol/L氢氧化钠溶液与0.5mol/L碳酸氢钠溶液各20ml,混合后加蒸馏水至100ml.

骨源性碱性磷酸酶

骨源性碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶即为NBAP. 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性，籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下： 正常水平≤200u/L 预防水平 250u/L 医疗水平 300u/L 你好！骨源性碱性磷酸酶是用于检测佝偻病的一个指标，当缺少维生素D和钙时，骨头钙化不好时，它会升高，但一般明显升高才有诊断意义。你孩子的结果只比参考值的上限（200）高10，可以是实验误差造成，也可以是佝偻病的早期造成，是不必过度担心，补充维生素D和钙剂，过些日子再复查一次，很可能就正常了。 追问 昨天医生给我宝宝开了龙牡浸在壮骨颗粒和复方三维右酸钙糖浆，可是我的宝宝复方三维右酸钙糖浆吃不下，有没有什么别的药让他可以吃的 回答 你好!如果我没有记错的话，龙牡壮骨颗粒中已含有维生素D和钙，你的孩子缺维生素D和钙并不重，已经够了，两种都吃恐怕不是很必要。 补维生素d 最天然的方法是，多晒太阳，晒太阳可帮助身体合成维生素d ，可以说是没副作用的补VD方法 另外，就是吃含补维生素d 多的食物做成的粥或汤， 而通过食物摄取维生素D是不会引起中毒的。含量较多的食物有大马哈鱼、红鳟鱼、鳕鱼肝油、比目鱼肝油、奶油、鸡蛋、鸡鸭肝等动物肝脏以及牛奶等，或是买回维生素d的保健品进行补VD

详细介绍碱性磷酸酶分离纯化的过程及采取的技术

1、详细介绍碱性磷酸酶（SOD、木瓜凝乳蛋白酶、精氨酸激酶）的提取、分离纯 化方案及采用每种技术（如：如果采用阴离子交换层析，那为什么不采用阳离子交换层析呢，要解释清楚）的原因，在分离纯化过程中怎样检测纯度？ 一、精氨酸激酶的介绍 无脊椎动物的精氨酸激酶类似于脊椎动物中的肌酸激酶，是细胞代谢中的磷酸激酶，它将Mg2+和ATP上的磷酸基转移到精氨酸上，产生磷酸精氨酸、Mg2+和ADP，是无脊椎动物体内能量代谢的关键调控酶[1]。它不仅在对墨鱼的能量代谢过程中具有重要作用，而且在墨鱼体内的表达量也很高。因此，对精氨酸激酶深入研究十分必要。本实验主要对墨鱼肌肉组织的精氨酸激酶进行分离、纯化及部分酶学性质的鉴定。对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降；pH8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用。 二、工艺路线

三、研究内容与方案 1.对虾精氨酸激酶的提取、分离 取10g于-20℃贮存的新鲜对虾肌肉,高速组织捣碎机2000r·min-1匀浆5min,加入40mL预冷的缓冲液A(0.1mmol·L-1Tris-HCl,10mmo l·L-1巯基乙醇,5mmol·L-1叠氮化钠,20mmo l·L-1苯甲基磺酰氟(PMSF),pH8.0),搅拌均匀,把悬液放置于预冷的离心管中,4℃,5000×g离心20min后保存上清。＊选择使用巯基乙醇和PMSF的原因： 巯基乙醇可以防止蛋白酶在分离提取过程中的氧化、 PMSF是蛋白酶抑制剂，可以防止蛋白酶水解 ＊注意事项 该步骤完成后，要对粗酶液进行酶活力的测定 2.对虾精氨酸激酶的纯化 1）DEAE-纤维素柱层析 装柱直接取商品DEAE cellulose DE-52装柱(2.5x40cm)装柱前，先在柱中加入一定量的层析柱平衡液（约10cm高），然后倒入凝胶，打开柱底部的出口，使其自然沉降，当柱中形成明显分界面时，放入两层大小合适的滤纸片与凝胶顶部，接上恒流泵，流速选用2.5ml/min，当柱不再进一步压缩时，保持柱顶部缓冲液1-2cm高[4]。平衡使用DEAE cellulose DE-52阴离子交换层析柱平衡液洗脱2-3个柱体积，平衡12h。加样打开柱顶，用吸管吸出多余的缓冲液至柱床上薄薄一层，然后加入酶液，加样量一般不超过约2-3ml。洗脱采用NaCl浓度梯度洗脱法，将DEAE cellulose DE-52层析柱洗脱液A液和B液分别加到梯度混合仪两容器内，将B液150ml加入左杯，A液150ml加入右杯，打开梯度混合仪两容器内，流速1.5ml/min，通过波长280nm的核酸蛋白检测仪后，由自动收集器收集。 ＊选择阴、阳离子交换层析的原则： 蛋白质等生物大分子通常呈两性，它们与离子交换剂的结合与它们的性质及pH有较大关系。以用阴离子交换剂分离蛋白质为例，在一定的pH条件下，等电点pIpH的

碱性磷酸酶偏高的原因

碱性磷酸酶偏高的原因 当受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、、继发性肝癌、性等时，过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。 有何影响 碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、、、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、、、时，血清碱性磷酸酶亦可升高，所以对人体的危害是比较大的。 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于，定位于溶酶体内。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。

(1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对的诊断较ACP敏感，二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病：白血病、、匹克病、、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。[1] (5)其他：，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。 是一种糖酵解酶。存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。是能催化乳酸脱氢生成的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。乳酸脱氢酶大于300，属于增高，600，高出1倍，有参考价值。如果排除急性心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后，首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断，但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义，最好做进一步检查，防患于未然。 糖的吸收途径： 小肠绒毛吸收小肠内葡萄糖的方式为二级。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛内的钠离子浓度，因而两者之间存在钠离子浓度差的，通过该钠离子的浓度差，葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛；

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比

骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后，骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%，显著高于血钙检测准确率73.75%，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据，但血钙误诊率较高，而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高，临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断，从而提高患儿诊断正确率及治疗效果，保障其预后及生活质量。 标签：骨源性碱性磷酸酶；血钙；对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病，发病原因主要为机体中钙营养严重丢失，目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日～12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究，从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果，为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据，现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例，年龄1～6岁，平均年龄（ 2.98±1.02）岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织（WHO）制定的佝偻病诊断标准；②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病；③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；④体温正常，无骨折、强直性骨关节炎等疾病；⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本，骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法，由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒，以检测结果不大于200U/L为阴性，反之为阳性；血钙采用偶氮砷法检测，由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂，以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性，反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验（由x±s表示），计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

实验名称-碱性磷酸酶的分离纯化实验报告

实验名称碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析 实验日期2011年10月25号实验地点生化实验室 合作者指导老师 总分教师签名批改日期 碱性磷酸酶（AKP或ALP）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。AKP具有磷酸基团转移活性，能将底物中的磷酸基团转移到另一个含有羟基的接受体上，如磷酸基团的接受体是水，则其作用就是水解。AKP最适ＰＨ范围为８.６－１０，动物中AKP主要存在于小肠粘膜、肾、骨骼、肝脏和胎盘等组织的细胞膜上。血清AKP主要来自肝，小部分来自骨骼。 AKP可从组织中分离纯化，也可以采用基因工程表达的方式获得：将碱性磷酸酶基因克隆到重组载体，转入宿主菌中进行重组表达，并从表达菌提取，并进行酶动力学分析。 一实验原理 1、碱性磷酸酶的分离纯化 AKP分离纯化的方法与一般蛋白质的分离纯化方法相似，常用中性盐盐析法、电泳法、色谱法、有机溶剂沉淀法等方法分离纯化。有时需要多种方法配合使用，才能得到高纯度的酶蛋白。本实验采用有机溶剂沉淀法从兔肝匀浆液中提取分离AKP。正丁醇能使部分杂蛋白变性，过滤除去杂蛋白即为含有AKP的滤液，AKP能溶于终浓度为33%的丙酮或30%的乙醇中，而不溶于终浓度为50%的丙酮或60%的乙醇中，通过离心即可得到初步纯化的AKP。 2、碱性磷酸酶的比活性测定 根据国际酶学委员会规定，酶的比活性用每毫克蛋白质具有的酶活性来表示，单位（U/mg?pr）来表示。因此，测定样品的比活性必须测定：a每毫升样品中的蛋白质毫克数；b每毫升样品中的酶活性单位数。酶的纯浓度越高酶的比活性也就越高。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。于510nm 处比色，即可求出反应过程中产生的酚含量，而碱性磷酸酶的活性单位可定义为：在37摄氏度保温15min每产生1mg的酚为一个酶活性单位。样品蛋白质含量测定用Folin-酚法测定。 3、底物浓度对碱性磷酸酶活性的影响 在环境的温度、ＰＨ和酶的浓度一定时，酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现为反应开始时。酶促反应的速度（Ｖ）随底物浓度（Ｓ）的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度就会达到一个极限值，即最大反引发速度（Vmax）。底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用米氏方程式表 示： 式中：Vmax为最大反应速度；[S]为底物浓度；Km为米氏常数；V代表反应的起始速度。 ①当ν=Vmax/2时，Km=[S]。因此，Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物

实验名称-碱性磷酸酶的分离纯化实验报告

实验名称-碱性磷酸酶的分离纯化实验报告

实验名称碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析 实验日期2011年10月25号实验地点生化实验室 合作者指导老师 总分教师签名批改日期 碱性磷酸酶（AKP或ALP）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。AKP具有磷酸基团转移活性，能将底物中的磷酸基团转移到另一个含有羟基的接受体上，如磷酸基团的接受体是水，则其作用就是水解。AKP最适ＰＨ范围为８.６－１０，动物中AKP主要存在于小肠粘膜、肾、骨骼、肝脏和胎盘等组织的细胞膜上。血清AKP主要来自肝，小部分来自骨骼。AKP可从组织中分离纯化，也可以采用基因工程表达的方式获得：将碱性磷酸酶基因克隆到重

组载体，转入宿主菌中进行重组表达，并从表达菌提取，并进行酶动力学分析。 一实验原理 1、碱性磷酸酶的分离纯化 AKP分离纯化的方法与一般蛋白质的分离纯化方法相似，常用中性盐盐析法、电泳法、色谱法、有机溶剂沉淀法等方法分离纯化。有时需要多种方法配合使用，才能得到高纯度的酶蛋白。本实验采用有机溶剂沉淀法从兔肝匀浆液中提取分离AKP。正丁醇能使部分杂蛋白变性，过滤除去杂蛋白即为含有AKP的滤液，AKP能溶于终浓度为33%的丙酮或30%的乙醇中，而不溶于终浓度为50%的丙酮或60%的乙醇中，通过离心即可得到初步纯化的AKP。 2、碱性磷酸酶的比活性测定 根据国际酶学委员会规定，酶的比活性用每毫克蛋白质具有的酶活性来表示，单位（U/mg ?pr）来表示。因此，测定样品的比活性必须测定：a每毫升样品中的蛋白质毫克数；b每毫升样品中的酶活性单位数。酶的纯浓度越高酶的比活性也就越高。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚

碱性磷酸酶米氏常数的测定

碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定，了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性，加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(V max)，如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度，[S]为底物浓度，K m为米氏常数(Michaelis constant)，而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时，K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol／L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数，测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法，大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定，K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程，推导出如下方程式，即： 1/V = （K m +[S]）/ V max[S]或1/V = K m/ V max·（1/[S]）+1/ V max 此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标，并将各点连成 一直线，向纵轴方向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ K m，由此可以正确求得该酶的K m 值，如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性，也可以从标准曲线上查知酚的含量，进而算出酶活性的大小。反应式如下：

骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒(凝集素亲和法)产品技术要求北京中生金域诊断

骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒（凝集素亲和法） 适用范围：用于体外半定量检测人体全血或血清中骨源性碱性磷酸酶催化活性。 1.1 产品型号：JY–Color–BAP NB；JY–Color–BAP AB。 1.2 产品规格 1.2.1 包装规格：20人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。 1.2.2产品组成：产品主要组成成分见表1、表2。 表1 试剂盒配置表 注：试剂盒中一次性定量取血管为外购有医疗器械证书的产品。

表2试剂配方和浓度

2.1 外观 2.2.1 反应装置为白色塑料制品，结构应完整、表面光洁、无缺失、无折损、无脱落； 2.2.2 测定用液体外观要求： a) 显色液为浅黄色液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物； b) 洗涤液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物； c) 终止液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物。 2.2配置及装量 液体试剂的净含量应不少于标示值。 2.3 pH值 a) 显色液的pH值：10.10~10.20； b) 洗涤液的pH值：5.90~6.10； c) 终止液的pH值：4.60~4.80。 2.4特异性 测定以下干扰物样本，在下列干扰物浓度时结果应满足表3的要求： 表3 干扰物浓度及检测结果要求

2.5 重复性及准确性 2.5.1 取同一批NB型试剂盒，分别测定BAP300U/L、BAP250U/L、BAP200U/L、BAP150U/L样本各20次，检测结果与相应比色板色标比对，显色结果应符合表4的要求。 2.5.2 取同一批AB型试剂盒，分别测定BAP200U/L、BAP150U/L、 BAP100U/L、BAP50U/L样本各20次，检测结果与相应比色板色标比对，显色结果应符合表4的要求。 表4 重复性及准确性显色结果要求

缺铁性贫血与骨源性碱性磷酸酶相关性分析

缺铁性贫血与骨源性碱性磷酸酶相关性分析 发表时间：2016-08-06T15:19:54.893Z 来源：《医师在线》2016年6月第11期作者：周芳静[导读] 分析并研究缺铁性贫血和骨源性碱性磷酸酶的相关性。 桐乡市第四人民医院检验科（浙江桐乡）314502 【摘要】目的分析并研究缺铁性贫血和骨源性碱性磷酸酶的相关性。方法选择我院在2015年1月到2016年3月收治的78例缺铁性贫血患儿作为本研究得研究对象，同时选择我院的健康幼儿80例设为对照组，采用全自动血细胞计数仪对本研究组所有研究对象进行血液测定，研究缺铁性贫血和谷原性碱性磷酸酶的相关性。结果通过本研究的调查可以得出，对照组当中，骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的6例，占7.5%，观察组中骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的24例，占30.77%，缺铁性贫血患儿的血红蛋白和顾源性碱性磷酸酶的含量具有直线关系，呈负相关。结论缺铁性贫血患儿的顾源性碱性磷酸酶在250U/L的数量明显高于正常组，而且缺铁性贫血患儿的血红蛋白和顾源性磷酸酶含量具有负相关。 【关键词】缺铁性贫血；骨源性碱性磷酸酶；相关性 预防婴幼儿出现缺铁性贫血和佝偻病能够有效地提高婴幼儿的营养水平，也可以有效地增强儿童的体质。是因为患者体内铁缺乏而导致血红蛋白合成减少[1]，这是一种小细胞低色素的贫血症状，能够对患儿的健康产生较大的危害。而骨源性碱性磷酸酶能够反映古代些状况，它是一种较好的系列化指标[2]，骨源性碱性磷酸酶主要通过骨细胞合成，当人体存在盖因营养不良的时候，人体的血该会下降，都会使得甲状旁腺激素的PTH明显上升，能够有效地促进肾脏的合成。本研究主要据此分析缺铁性贫血和骨源性碱性磷酸酶的相关性，同时选择我院在2015年1月到2016年3月收治的78例缺铁性贫血患儿进行研究，并与80例正常幼儿进行对照分析，结果取得较为满意的成效，现将主要研究情况汇报如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 2015年1月到2016年3月，在我院收治的缺铁性贫血患儿当中，抽取78的患儿作为本研究的研究对象，对所有患者的一般资料进行分析，其中有男性患儿34例，女性患儿44例，患儿的最大年龄为5岁，最小年龄为2岁，平均年龄为（3.2±1.2）岁；同期来我院进行身体检查的80例健康幼儿中，男性38例，女性42例，最大年龄为7岁，最小年龄为1.5岁，平均年龄为（3.4±1.3）岁。本研究两组研究对象除病情以外，在性别、年龄等方面无明显差异，不具有统计学意义，具有可比性。 1.2方法 对本研究所有研究对象进行检验，采用全自动血细胞计数仪进行检测，所采用的试剂由于厂家配套，每日开机时对其进行质量控制。分析评判标准，血红蛋白＜110g/L，平均红细胞体积在80fl以下，平均红细胞蛋白量在27pg以下，平均红细胞血红蛋白浓度在320g/l以下，红细胞体积的分布宽度在14.5%以上。经过血涂片能够明确看到红细胞的体积变小，其朝着中央的淡然区域扩大。根据病史情况和临床症状诊断为缺铁性贫血。检测骨源性碱性磷酸酶，采用小儿骨源性碱性磷酸酶试剂盒进行测定，并抽取末梢血30μl添加到样本孔当中，将血液样品经过亲和渗漏装置进行分离，分离出血浆以后，进行预处理，之后通过过来垫达到反映膜，而骨源性碱性磷酸酶和膜上固定的结合蛋白出现亲和反应，并被特异结合在反映膜之上，经过洗涤以后，将其他的组份祛除，将其加入酶底物，使骨源性碱性磷酸酶催化为BCIP 水解。其所产生的吲哚基可以却使碘硝基四氮唑紫还原显色，并且在一定的范围内，使得股圆形碱性磷酸酶能够催化活性和色斑深度形成正比，并对照标准色板的半度结果。 2.结果 通过本研究的调查可以得出，对照组当中，骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的6例，占7.5%，观察组中骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的24例，占30.77%，缺铁性贫血患儿的血红蛋白和顾源性碱性磷酸酶的含量具有直线关系，呈负相关。详细情况请参见表1所示。 3.讨论 缺铁性贫血主要是因为体内铁缺乏导致血红蛋白合成减少，进而所引起的一种小细胞低色素性贫血。而骨源性碱性磷酸主要对婴幼儿佝偻病进行评价是一项主要的指标[3]。从本研究的调查和分析能够得出，对照组当中，骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的6例，占7.5%，观察组中骨源性碱性磷酸酶在250U/L以上的24例，占30.77%，缺铁性贫血患儿的血红蛋白和骨源性碱性磷酸酶的含量具有直线关系，呈负相关。分析缺铁的主要原因，这主要是体内的铁摄入量严重不足，而且食物搭配并不合理[4]，先天性的储铁不足，在加之生长繁育较慢，铁丢失过多等都会使患者表现出一定的临床症状[5]。本研究主要分析缺铁性贫血和骨源性碱性磷酸酶的相关性，通过调查和分析能够得出，这二者之间存在着一定的关联，可以说明预防缺铁性贫血的发生，能够有效的预防小儿佝偻病发病。为了更好地预防缺铁性贫血的发生，再对拥有而进行治疗的时候，必须做好卫生宣传工作，并进行有效的喂养指导，在喂养过程中，提倡母乳喂养，要及时添加有效的营养物质，做好相关的合理搭配，稳定期的患者进行体检。所以综合上述分析，通过研究的调查研究能够得出，缺铁性贫血患儿的顾源性碱性磷酸酶在250U/L的数量明显高于正常组，而且缺铁性贫血患儿的血红蛋白和骨源性磷酸酶含量具有负相关。为有效的预防小儿佝偻病的发病，做好对缺铁性贫血的治疗和预防工作也是十分必要的一个措施。 【参考文献】 [1]高莉莉,任宪辉,富宏然.骨源性碱性磷酸酶在骨代谢疾病诊断中的应用[J].牡丹江医学院学报,2015,24(01):754-755. [2]田洪伦,邹永丽,王予川,崔玉霞,赵仁兵.250例体检儿童全血钙与骨源性碱性磷酸酶检测结果分析[J].贵州医药,2016,21(02):451-452. [3]曾新建.血液骨源性碱性磷酸酶的测定及临床应用[J].基层医学论坛,2014,27(01);575-576.

组织非特异性碱性磷酸酶活力的原位红外光谱检测-19届福州

收稿日期：2016-04-30 修订日期: xxxx 基金项目：国家自然科学基金委项目（21373101）、吉林省教育厅“十三五”科研项目（2016137）、吉林化工学院博士启动基金（2016002）资助。作者简介：任重远，原吉林大学博士生；现工作于吉林化工学院讲师 *通讯联系人E-mail: yqwu@https://www.wendangku.net/doc/3c9733125.html, 组织非特异性碱性磷酸酶活力的原位红外光谱检测 任重远1, 3，Saida Mebarek 2，René Buchet 2，吴玉清3* 1 吉林化工学院生物与食品工程学院，吉林，132022 2 Laboratory ODMB UMR 5246, UniversitéLyon I, Villeurbanne France 69622 3 吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室，长春，130012 摘要 本文以孵育17天的小鸡胚胎中，富含组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)的细胞外微结构——基质囊泡(MVs)作为研究模型，利用焦磷酸盐(PP i )作为TNAP 酶的天然底物，在近生理条件下，以红外(IR)光谱为监测工具，原位检测MVs 水解PP i 的反应过程，根据红外谱图特征吸收峰的变化，计算TNAP 酶活力值。 关键词：基质囊泡；生物底物；IR 光谱；原位检测；酶活力 中图分类号：O657.3 文献标识码：A 文章编号： 组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)是人体骨骼矿化形成的生物标志物，其酶活力的高低能够直接反映矿化形成能力的强弱。目前，测试TNAP 酶活力的主要方法是利用其外源性荧光底物——4-硝基苯磷酸(p -NPP)、在碱性条件下(pH=10.4)监测405 nm 处荧光强度来检测TNAP 的酶活力值。但是，这种测试条件与人体生理环境下的pH 值相距甚远。因此，开发一种在生理条件下、以生理化合物作为检测底物的快速、经济的检测碱性磷酸酶活性的方法，将作为热点研究。在骨骼中，具有矿化能力的成骨细胞、成牙细胞以及肥大的软骨细胞等，能够将含有高TNAP 活性表达的基质囊泡（MVs ）释放至细胞外环境中，并从而引发矿化形成[1]；MVs 是细胞外微观结构，能够为无机磷酸离子及钙离子提供沉积位点，是矿化产物羟磷灰石（HA ）晶体形成的场所，因此MVs 也可视为新骨骼产生矿化的基本单位[2]。本文选择孵育17天的小鸡胚胎中所提取并纯化的细胞外微结构——基质囊泡(MVs)，并将其作为研究模型，红外光谱技术为检测工具，利用焦磷酸盐(PP i )作为TNAP 酶的天然底物，在近生理条件下，监测MVs 水解PP i 的反应过程。同时，根据红外谱图特征吸收峰的变化，计算TNAP 酶活力值。 PP i 作为TNAP 酶的底物，水解过程中产生2个无机磷酸盐(P i )分子，因此，我们首先对反应过程中的反应物(PP i )及产物(P i )进行红外表征。实验结果显示，在红外指纹区(1300-900 cm -1)，相同浓度(50 mM)的PP i 与无 P i 的红外光谱谱图存在明显的差异，而且它们相互之间不发生重叠。PP i 在1107 cm -1位置存在一个明显特征峰，而P i 在1076及990 cm -1分别存在两处明显的吸收峰，这是由于磷酸盐分子中HPO 42-反对称伸缩振动与对称伸缩振动所引起的[3]。 在37 °C ，pH 8.0反应条件下，利用红外光谱技术对MVs 水解PP i 过程实时监测，每隔5min 红外扫描一次，并持续60分钟。红外光谱检测结果显示，4000-1300 cm -1的光谱范围在整个水解过程中并未明显特征峰的变化。然而，在1300-900 cm -1的红外区域内却发生了明显的特征峰的变化(Fig.1)。 Fig. 1 Difference IR spectra of MVs with PP i (spectrum recorded at the indicated time minus that recorded immediately). Significant variation in the intensity of

骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义

骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义 【摘要】目的：探讨血浆骨源性碱性磷酸酶(BAP)在骨质疏松及类风湿性关节炎（RA）诊治中的意义。方法：选择30例骨质疏松症和30例RA患者和30例健康体检者(对照组)，进行血浆BAP浓度水平测定，计算其血浆浓度并进行比较。结果：30例骨质疏松症患者与健康对照组及30例RA患者与健康对照组BAP 水平差异均有显著性意义（P<0.01），而30例骨质疏松症患者与30例RA 患者血浆BAP浓度比较，无显著性差异。结论：BAP在骨质疏松及RA患者诊断及治疗过程中有很好的临床指导意义。 【关键词】血清骨源性碱性磷酸酶；类风湿性关节炎；骨质疏松；诊断治疗。 骨质疏松和内风湿性关节炎（RA）是危害中老年人身体健康的常见病，都可造成患者骨关节骨质丢失和破坏，而且这两种疾病本身又有一定相关性，严重危害人类健康，而在其发生、发展过程中，患者大多存在不同程度骨代谢标志物骨源性碱性磷酸酶(BAP)水平的升高。现就我院2004年6月~2007年11月收治的30例骨质疏松症患者和30例RA患者BAP水平的测定情况，与同期在我院体检的30例健康人群做对比，以了解BAP在该类疾病中的临床应用价值。 1 材料与方法 1.1 对象：30例骨质疏松症患者和30例RA患者均系我院住院患者，年龄42~76岁，30例骨质疏松症患者中男14例，女16例，30例RA患者中男12例，女18例，以上病例均为确诊病例，（其中RA符合美国风湿病学院1987年制定的诊断标准；骨质疏松症经临床及放射线检查符合WHO1994年确立的诊断标准）。对照组：体检中筛选的健康人30例，年龄30~56岁，男15例，女15例。 1.2 方法：对所选病例组及健康对照组由专人负责采集空腹肘静脉血，按要求做BAP测定。标本检测使用美国Metra公司提供的试剂盒，将抗凝血以3 000 r/ min 离心15 min，取血浆检测。 1.3 统计方法：测定结果用均数±标准差表示，采用配对t 检验。 2 结果

综述 骨代谢生化指标在乳腺癌骨转移中的意义

万方数据

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骨代谢生化指标在乳腺癌骨转移中的意义 作者：李淑兰， 李靖若， LI Shu-lan， LI Jing-ruo 作者单位：450052,郑州大学第一附属医院乳腺外科 刊名： 中国实用医刊 英文刊名：Chinese Journal of Practical Medicine 年，卷(期)：2013,40(12) 参考文献(20条) 1.Mundy GR Metastasis to bone:causes,consequences and therapeutic opportunities 2002(08) 2.Chen C An approach to the relevance between variations in hormone secretion and the incidence of hyperplasia of mammary glands and mammary cancer 2004 3.Berruti A;Dogliotti L;Gorzegno G Differential patterns of bone turnover in relation to bone pain and disease extent in bone in cancer patients with skeletal metastases 1999(8pt1) 4.Pratap J;Javed A;Languino LR The Runx2 osteogenic transcription factor regulates matrix metalloproteinase 9 in bone metastatic cancer cells and controls cell invasion[外文期刊] 2005(19) 5.Halleen JM;Alatalo SL;Janckila AJ Tartrate-resistant acid phosphatase 5 b is a specific and sensitive marker of bone resorption[外文期刊] 2003(2A) 6.Halleen JM;Alatalo SL;Suominen H Tartrate-resistant acid phosphatase 5b:a novel serum marker of bone resorption 2000(07) 7.Takahashi S Evaluation of cancer-induced bone diseases by bone metabolic marker 2006(04) 8.章火祥;谢鑫友;于小妹血清工型胶原吡啶交联终肽、骨钙素在肿瘤骨转移中的应用[期刊论文]-国际检验医学杂志 2008(11) 9.Maemura M;Iino Y;Yokoe T Serum concentration of pyridinoline cross-linked carboxyterminal telopeptide of type Ⅰcollagen in patients with metastatic breast cancer 2000(06) 10.Izumi M;Nakanishi Y;Takayama K Diagnostic value of boneturnover metabolites in the diagnosis of bone metastases in patients with lung carcinoma 2001(08) 11.Pectasides D;Farmakis D;Nikolaou M Diagnostic value of bone remodeling markers in the diagnosis of bone metastases in patients with breast cancer[外文期刊] 2005(01) 12.Bricon TL;Cay-Bellile C;Cottu P Lectin affinity electrophoresis of serum alkaline phosphatase in metastasized breast cancer 2010(01) 13.Jukkola A;Bloigu R;Holli K Postoperative PINP in serum reflects metastatic potential and poor survival in node-positive breast cancer[外文期刊] 2001(4B) 14.王抒;张军宁;乔田奎血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽、Ⅰ型前胶原羧基端前肽、Ⅰ型胶原羧基端肽在骨转移性癌诊断中的应用[期刊论文]-中国临床医学 2011(18) 15.Tu Q;Zhang J;Fix A Targeted overexpression of BSP in osteoclasts promotes bone metastasis of breast cancer cells [外文期刊] 2009(01) 16.Zhang JH;Tang J;Wang J Over-expression of bone sialoprotein enhances bone metastasis of human breast cancer cells in a mouse model[外文期刊] 2003(04) 17.Gordon JA;Sodek J;Hunter GK Bone sialoprotein stimulates focal adhesion-related signaling pathways:role in migration and survival of breast and prostate cancer cells[外文期刊] 2009(06) 18.Bellahcène A;Bonjean K;Fohr B Bone sialoprotein mediates human endothelial cell attachment and migration and promotes angiogenesis[外文期刊] 2000(08) 19.Tang Y;Nakada MT;Kesavan P Extracelluar mtrix metalloproteinase inducer stimulates tumor angiogenesis by elevating vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinases[外文期刊] 2005(08) 20.Wright LM;Maloney W;Yu X Stromal cell-derived factor-1binding to its chemokine receptor CXCR4 on precursor cells promotes the chemotactic recruitment,development and survival of human osteoclasts[外文期刊] 2005(05)

骨型碱性磷酸酶

骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源：医学网发表时间：2007-07-04 09:51:00 关键字：磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP，EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点，后者基因定位于染色体的1q36-34之间，其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，为糖蛋白，分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化，再通过高尔基体转运到细胞膜表面，通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下，骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测

人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。