第三章 细胞 生科
细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结)
细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结) 一、消化与吹打 版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。 许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，一起讨论： 1，其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。 2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在小鼠卵母细胞成熟过程中的表达及作用 杨彩荣 魏延昌张 岩郑可佳 李 宁严云勤* (东北农业大学动物细胞与发育生物学教研室，哈尔滨150030) 摘要哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ，mTOR)是一种Ser/Thr 激酶，属于PIKK 超家族，对调节细 胞周期、蛋白质合成等具有重要作用，是细胞生长、增殖、分化、凋亡的中心调控器，但在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以小鼠卵母细胞为研究对象，采用免疫荧光为主要研究方法，对mTOR 在小鼠卵母细胞中的表达进行研究，并通过mTOR 的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin ，RAPA )对卵母细胞进行处理，对mTOR 在卵母细胞成熟过程中的作用进行研究．结果显示：小鼠卵母细胞成熟过程中，生发泡(germinal vesicle ，GV )期mTOR 主要集中在核膜处表达，生发泡破裂(germinal vesicle breakdown ，GVBD )后mTOR 伴随染色体分布，第二次减数分裂中期(second metaphase ，M Ⅱ期)mTOR 伴随纺锤体分布；雷帕霉素处理后，小鼠卵母细胞的成熟受到抑制，且这种抑制作用具有浓度依赖性，同时其mTOR 的表达部位和形态也发生变化．研究表明，在小鼠卵母细胞成熟过程中，mTOR 在各个时期的表达及分布具有阶段特异性，并对小鼠卵母细胞GVBD 的发生和第一极体的排放都具有重要作用． 关键词雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，小鼠卵母细胞，雷帕霉素，免疫荧光学科分类号 Q2 DOI:10.3724/SP.J.1206.2009.00446 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2009,36(10):1334~1339 https://www.wendangku.net/doc/3d12047127.html, 研究报告 Research Papers *通讯联系人. Tel:0451-********,E-mail:yanyunqin@https://www.wendangku.net/doc/3d12047127.html, 收稿日期：2009-07-23，接受日期：2009-09-04 雷帕霉素靶蛋白(mTOR)结构与功能上高度保守，是一种存在于哺乳动物细胞中的Ser/Thr 激酶，属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶(phosphatidylinositol kinase-related kinase ，PIKK)家族成员．mTOR 信号通路可以汇聚和整合来自于营养、生长因子、能量和环境胁迫对细胞的刺激信号[1～3]，通过其下游的靶蛋白核糖体蛋白S6激酶1(ribosomal protein S6kinase 1，S6K1)和蛋白质翻译起始因子eIF4E 结合蛋白1(eIF4E binding protein 1,4EBP1)调控蛋白质的翻译，加快细胞G1期/S 期的转换，促进细胞生长和增殖，抑制细胞凋亡[4～6]．mTOR 信号通路紊乱与肿瘤的形成及细胞的恶性转化密切相关[7]． 雷帕霉素(rapamycin ，RAPA ，RPM)是一种大环内酯类抗生素和免疫抑制剂，它进入体内后与胞浆受体FKBP12结合形成复合物，此复合物能够结合在mTOR 蛋白羧基端的FRB 结构域内，形成三元复合物，使得mTOR 的激酶催化域失去接近并磷酸化下游靶蛋白的能力，从而抑制mTOR 的生物学功能[8～10]． mTOR 在卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的研究较少，且大多集中在海星、海胆等动物中[11,12]， 而在哺乳动物卵母细胞中的研究还未见报道．以往的研究表明，mTOR 与一些蛋白质的合成有关[12]，而特定蛋白质的合成对卵母细胞成熟具有重要的作用，因此我们推测，mTOR 可能在哺乳动物卵母细胞成熟过程中有重要作用．所以本研究以小鼠卵母细胞为研究对象，观察了mTOR 在卵母细胞成熟各个阶段的表达及分布情况，同时通过雷帕霉素的处理观察mTOR 对卵母细胞成熟的重要作用，为进一步探索mTOR 在小鼠卵母细胞成熟过程中的分子机制提供实验依据． 1材料与方法 1．1 实验材料 本实验选用昆明白品系6～8周龄性成熟雌鼠，购自哈尔滨肿瘤医院实验动物中心． 1．2 主要试剂 α-MEM 购自Gibco 公司；雷帕霉素购自江苏碧云天生物技术研究所；孕马血清(pregnant mare
肾内科实习进修生入科教育
肾内科实习医师入科教育 一．科室情况介绍 我区（25区）是肾内科病房。常见病种有: 急、慢性肾小球肾炎、肾病综合征、IgA 肾病、狼疮性肾炎，乙肝相关性肾炎、糖尿病肾病，高血压肾病、痛风性肾病、紫癜性肾炎，系统性血管炎肾损害，急慢性肾功能不全（包括尿毒症）、尿路感染、多囊肾等。 目的：学习肾内科常见病的诊疗常规及血液透析及腹膜透析治疗原理。 二．学生纪律及实习规章制度 1. 学生按带教老师排班准时上班，要求提前15分钟入病房。每位同学要严格遵守医院规章制度，不得迟到早退。 2. 请假制度 1）实习期间病假须本人来院请相关科室有开病假资格的医师开具病假条，非本院的医疗证明一律无效（急诊除外）。事假须按学校规定：学校、实习医院均同意有效。 2）病假、事假连续一周以上需补实习，时间安排在实习结束后。 3）未按规定办理请假手续或未经请假擅自离开工作岗位、擅自调班，无故不参加小讲课或教学查房，一律按旷课处理。 4）旷课处理办法：迟到三次补实习一天，旷课一天补实习一周，旷课一周补实习一月。 5）按时参加带教老师组织的小讲课和教学查房、理论考试。 三．安全管理制度 1.每位实习生由相对固定、有带教资格的老师带教。 2．上班时参与的各项医疗活动均需在带教老师的指导下完成。有疑问及时请教带教老师，对病人的提问有不懂应请教带教老师后回答或请带教老师解答，请勿对病人说“不知道，不是我的事……”，而是说“我是实习的，我问一下老师再回答您”。对已发生的差错事故不隐瞒，及时告知带教老师采取补救措施。 四．实习服务态度须知 实习生进入临床科室，首先要树立一切以病人为中心的服务理念，关心、爱护病人，敬业爱岗。在与病人有不同意见时勿与病人争执，避免引起不必要的误会，建立良好的医患关系。遇到困难及时汇报老师，使问题及时得到解决。 五．实习注意事项 1.学生上班时间需穿戴整洁。上班时不允许聚众聊天，对病人隐私注意保密。尊重病人的人格和权利。
小鼠精巢细胞减数分裂标本制备与观察
小鼠细胞分裂标本的制备与观察 一、实验目的 a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。 b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。 c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。 二、实验原理 a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA 复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。减数分裂 远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ， 两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。 b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞 经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂 形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化 成精子。 c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游 离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期 的标本。 三、实验试剂及仪器 a)材料：成年雄性小白鼠 b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、 离心管、离心机、玻片等。 c)试剂：1、100mg/ml秋水仙素。 2 、2％柠檬酸钠溶液 3、 0.075M的KCI 4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配） 5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液 6、Gimesa原液 7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓 冲液，混匀。工作液应现用现稀释。 四、实验步骤 a)细胞收集 i.小鼠精巢细胞收集 1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。 (试验前4－5小时，小鼠腹 腔注射秋水仙素0.5ml（100mg/ml）。 2.取睾丸并清洗。断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放 入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞 外脂肪等物。 3.挑出曲细精管并剪碎。弃污液，另加柠檬酸钠溶液 1 ml，用尖 头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
进修人员管理办法(细则)
进修人员管理办法（细则） 进修医师作为临床的重要辅助力量，在上级医师指导下，在临床一线各岗位上发挥了一定的作用。为了进一步提高我院的医疗和服务质量，提高病人的满意度，加强院、科两级对进修医师的管理，完善各项制度，经研究特拟订本管理办法，希望科室和进修人员认真参照执行。 一、来院进修的必备条件： 1、临床医师进修，必须是医学院校本科毕业，在二级甲等医院以上医疗单位 从事专业工作满三年以上者；卫技人员进修，必须是卫生大专以上毕业，从事专业工作三年以上者。 2、进修人员必须身体健康（患有残疾者不予接收），遵纪守法，具有良好的政 治素质和医德医风。 3、临床进修人员必须是经过注册的执业医师，且其注册类别和范围必须与所 申请进修专业相一致。 4、申请进修超声、CT、MR等影像专业的进修人员必须具有相应的大型仪器上 岗证 5、进修人员申请进修须认真、如实地填写进修申请表，经所在单位或上级医 疗卫生行政部门盖章审批。 二、进修人员的管理分工 1、医务处全面负责进修人员的管理工作（护理人员主要由护理部负责管理）， 根据各科室的实际需求和进修人员宿舍安排情况招收安排进修人员，并对进修人员进行上岗前教育。 2、门诊办公室、急诊办公室协助医务处加强对门急诊上岗进修人员的上岗前 教育和日常管理。 3、后勤服务中心协助负责进修人员的膳食、住宿等生活后勤管理。 4、进修人员到科室报到后，其工作安排、业务和政治学习、思想情况、考勤、 结业考试、鉴定等由科室具体负责，科室由专人负责进修人员的管理工作。 5、进修人员在进修期间所发生的问题，由医务处协同相关科室共同处理。 三、进修人员的纪律
1、进修人员必须遵守我院的作息时间，不得无故迟到、早退或缺勤，值班时 不得擅离岗位。 2、在进修期间，进修人员不能享受探亲假期，只享受法定节假日休息，也不 得以积休的形式连续休息，如有特殊情况需请事假者，一天以内由所在科室科主任批准，三天内须由医务处批准，三天以上需由选送单位出具证明（其他任何个人、同事之间函电等均无效），医务处审批同意后方可离院，并按期回院办理销假手续。 3、因故中途提前终止进修者，不发给结业证书，进修费用不予退还。 4、进修时间不满半年者，不发给结业证书。 5、住进修人员集体宿舍者，应严格遵守住宿的各项规章制度，凡出现违反规 定者，经教育后仍不改正者，宿舍管理处有权取消其住宿资格。住宿自理者，因各种原因需中途申请宿舍者，本院一律不负责解决。 6、在进修期间，不得擅自外出参观学习，未经医务处同意不得擅自延长进修 期限；进修结束应及时办理离院手续并按时离院，逾期离院者按每天50元收取费用。 四、进修人员的培养 1、进修医生无论年资深浅，进修期间都作为“住院医生”进入岗位，承担住 院医师的工作职责。 2、进修医师来院后前三个月只能在病房工作，三个月考核期满根据业务能力 考核情况择优给予处方权，未取得处方权者不得上门急诊工作，在病房必须在上级医师指导下从事临床工作。 3、进修期间门急诊、病房工作时间分配： 视各科室具体情况而定（详见各科进修医师培养计划） 4、进修人员进入临床科室后，各科应就本科室的具体情况给进修人员进行入 科教育，使进修人员迅速熟悉本科室的各项制度和技术操作常规，防止各类医疗差错、事故的发生。 5、接受进修人员的科室，应根据本专业的特点和进修人员的需要制定出对进 修人员的具体培养计划和安排。 6、进修人员的培养，在上级医师的带教下，应以临床实践为主，在实践中学
细胞培养的一般过程
细胞培养的一般过程 一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。 二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。 三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。 一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。 四、冻存及复苏 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。 复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。 冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。 培养细胞的细胞生物学 一、体内、外细胞的差异和分化 1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞
生精细胞凋亡及其可能的信号通路
生精细胞凋亡及其相关内容 细胞凋亡又叫程序性细胞死亡，是细胞在一系列内源性基因的调控下发生的自然或生理性死亡的过程。细胞凋亡过程是受基因的精确调控而完成的，其具体的过程机制尚不明确，Bcl-2 是一种细胞膜蛋白，主要存在于线粒体膜、滑面内质网和核膜上，高水平的Bcl-2 蛋白有抑制细胞死亡等作用，是细胞凋亡调控机制中的一个关键蛋白。Tanaka等证实Bcl-2 能抑制睾丸生精细胞的凋亡和分化。CytC 是一个线粒体起源的细胞凋亡信号，Bcl-2可通过抑制CytC从线粒体的释放入细胞质，而Bax、Bak可与Bcl-2结合，止其对CytC释放孔道的抑制作用，从而促进CytC从线粒体释放，引起凋亡。CytC通过接头分子使caspase（胱冬肽酶）分子募集并相互酶解活化，进而诱导细胞凋亡。caspase-3是介导细胞凋亡的关键效应酶，是凋亡执行的重要效应分子。正常情况下，caspase-3以酶原的形式存在于细胞质中，无活性，当细胞接受凋亡刺激时，其被激活，而诱导凋亡。caspase-3是多种凋亡刺激信号传递的汇聚点，它的活化是细胞凋亡进入不可逆阶段的标志。 检测生精细胞凋亡的技术 4．1 形态学检测 透射电镜检测：处死大鼠，取出睾丸。取出左侧睾丸少量组织，迅速在冰浴上切成1mm×1mm×2mm小块，置于预冷的2%戊二醛溶液中固定，标本经锇酸固定、脱水、树脂包埋、超薄切片和醋酸双氧铀染色后，在透射电镜下观察。可见细胞质空泡化，核膜增厚，核周隙增宽；染色质浓缩，附着于核边缘呈新月形；严重者染色质固缩、断裂, 出现凋亡小体。4．2 琼脂糖凝胶电泳 通过观察DNA梯状电泳带或定量检测DNA片段，可测定凋亡。凋亡细胞DNA 在核小体连接处规律性降解，形成以180 bp一200 bp为最小单位的寡聚体片段，琼脂糖凝胶电泳时呈典型的“梯状带”。但Singh等琼脂糖凝胶电泳检测到青年人生精细胞DNA迁移呈圆形，老年人凋亡生精细胞DNA迁移呈彗星状。 4．3 DNA缺口原位标记法 处死大鼠，取出睾丸。置于10%中性福尔马林溶液中固定24ｈ，常规石蜡包埋、切片（4μm），用于原位末端标记法（TUNEL）检测。主要以精原细胞凋亡为主。可见曲细精小管中各级生精细胞大量凋亡，管腔变薄，管腔中可见大量凋亡的分裂晚期的精子细胞。DNA 缺口原位标记(TUNEL)法可用于检测凋亡细胞。此方法是将细胞的外源性核苷酸(dUTP)结合到单股断链的3′粘性未端上，标记的DNA 再用荧光或显色法检出。该法可检测早期细胞凋亡，特异性和敏感性都很高。E renpreisa等用甲苯胺蓝(tolui di ne blue，TB)、吖啶橙(acridine orange，A0)和TUNEL法检测人生精细胞DNA的完整性，证实这3种方法具有一致性。 4．4 流式细胞术 流式细胞(flow cytometry，FCM)可进DNA 、RNA含量分析，细胞周期、细胞表面标志和细胞受体分析。凋亡细胞的DNA裂解，FCM的DNA图上呈亚二倍体核型峰特点。应用DNA 染色剂穿透正常和凋亡细胞膜的能力，及其与凋亡细胞DNA 结合能力不同以区分正常细胞、凋亡细胞。FCM 还可定量检测凋亡标记蛋白的表达。吞噬凋亡细胞和未吞噬凋亡细胞的巨噬细胞群可利用带有荧光染料反应物的FCM 区分。 4．5 免疫组化法 利用抗原抗体特异性结合测定凋亡相关物质以检测凋亡。凋亡蛋白抗体或抗单链DNA 抗体标记观察凋亡细胞可检测凋亡标记蛋白Fas／FasL、Bc1-2／Bax、p53、p2l、caspases等以鉴定细胞凋亡。 死亡受体途径
医院进修生培训管理制度
医院进修生培训管理制度 为满足下级医院进修需求，使我院的管理工作更加规范化、制度化、特制定以下制度： 1、进修条件：进修生必须具备大专以上学历，三年以上临床工作经验（偏远山区、贫困地区可酌情）,具备执业医师资格证及执业注册证书。 2、接受程序：单位推荐，我院考核相结合的办法择优录取，以保证进修人员应有的业务水平,进修医师填写进修医师申请表，单位介绍信，携执业相关证件到我院医务科办理手续。 3、进修人员应进行培训后方可进科学习，培训内容参考职工岗前培训项目，严格遵守我院的各项规章制度及相关法律法规。 4、进修医生入科进修须持有医务科开具的入科通知,不经医院许可擅自接受进修医师的科室，要通报批评,如出现事故、纠纷及意外事件,将对进修医生和科室负责人进行严肃处理。 5、接受进修生的科室应按照对医院负责对进修学员负责的精神，认真做好带教工作，由科室派有经验的医务人员指导学习和工作，进修医师考勤，由进修科室负责，医务科不定期检查出勤情况。
6、对获得执业医师资格的进修医生，必须通过科主任提出,经医务科核实，报院长审批，医务科可规定一定范围内的处方权，将签字字样送药剂科，进修结束时取消处方权.进修医师不得单独进行手术操作，但可以作为助手参与手术操作。 7、进修期间：如因业务水平差、服务态度不好，工作责任心不强，而发生医疗事故或严重差错者，又如劳动纪律差脱岗、旷工、无故请假1周不归者，除批评教育外，科室写出书面材料，（事情经过及处理意见），报医务科，院里根据情况作出处理决定.进修人员要爱护我院公共财产，不得携走我院医疗器械病历相关资料，如有违纪立即终止并赔偿损失。 8、进修结束后，填写学习小结由科主任、带教老师讨论后进行鉴定，经考核、成绩合格均发结业证书。
从生物圈到细胞教学设计完整版
从生物圈到细胞教学设 计 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
必修一第1章第1节《从生物圈到细胞》教学设计 【教学目标】 1、知识与技能 （1）举例说出生命活动建立在细胞的基础上； （2）举例说出生命系统的结构层次； 2、过程与方法 （1）初步学会分析生物学知识素材； 3、情感态度和价值观 （1）激发对生物学学科的学习兴趣； （2）认同细胞是基本的生命系统； （3）体验合作学习的快乐。 【学情分析】 本节的资料分析“生命活动与细胞的关系”中所列举的事例和材料，都是学生在初中学过的，但又在初中相关内容基础上有所扩展。，由于初中所学的相关知识与高中将要学习的知识时间相隔较长，大多数内容已经遗忘，另外，多数初中学校对生物课不重视，学生基础薄弱。这些都给学生学习这部分内容增加了难度。 【教材分析】 从生物圈到细胞是人教版普通高中新课程标准实验教科书生物必修1分子与细胞中第1章第1节的内容，由“生命活动离不开细胞”和“生命系统的结构层次”两部分组成。本节内容是学生进入高中学习的第一节课，担负着初高中相互衔接、承上启下的重要任务，可以说是高中生物的绪论课。如何使学生产生对本模块的学习，甚至整个高中生物课的学习兴趣，是本节要解决的首要目标。 【教学重点】 1、生命活动建立在细胞的基础上； 2、生命系统的结构层次； 【教学难点】 生命系统的结构层次； 【教学方法和用具】 1、教学方法：问题探究法、演示讨论法； 2、教学手段：多媒体课件，展现探究相关问题； 3、课时安排：1课时（45min） 【教学过程】
小鼠卵母细胞的孤雌激活
卵母细胞的孤雌激活 将体外成熟卵母细胞（COCs要提前脱卵丘）分别用M2液及含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液洗3遍，然后将卵母细胞置于含10mM SrCl2的无钙无糖CZB液中培养2.5小时，之后转入不含SrCl2的无糖CZB液中继续培养3.5小时，即在激活处理6小时后观察原核统计激活率。为了维持孤雌激活胚胎的二倍性，激活液和6小时检查原核前短期培养的培养液中均添加5μg/ml的CB。 激活的判定：2原核或2-细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活；卵质膜破裂者判断为死亡；胞质分裂一次或多次但不出现原核者判断为碎裂（fragmentation）。本实验将碎裂卵均归为未激活卵。对照组为未经激活处理，但与激活组培养相同时间的卵母细胞。每次实验，只有当对照组卵母细胞无一激活时，实验组数据才有效。 实验原理：利用氯化锶抑制第二极体的排出 实验用品：培养12小时并老化12小时，即24小时后的卵【要提前脱卵丘】，透明质酸酶，M2操作液，10摩尔每毫升的氯化锶，含钙CZB, 孤雌激活实验步骤 1,，第一天上午杀鼠取卵，培养卵。假设只有一个培养孔的卵，一个孔里最好有20至30个卵，留置第二天孤雌激活。 2,，第二天上午，算好时间，用紫外线照射两个培养孔，15分钟后加液，一个孔里放激活液，【激活液的组成是CB加氯化锶加无钙CZB】，
配置激活液的方法问师兄。另一个孔里放培养液【含钙的CZB】。3，注意激活液不能预热太长时间，CB热时间长会影响效果，【君佐师兄的加法是无钙CZB450微升加上氯化锶50微升平衡20分钟，然后加上氯化锶做滴平衡20分钟就可以放卵了】，在配置激活液时最后应该用枪打一打，好充分混匀。至于放培养液的孔可以以后考虑，激活需要6个小时。把握好时间，脱卵丘后就马上激活。同时预热上需要的药品，包括M2，含钙的CZB，再照上两个中平皿。 4，开始做时先用透明质酸酶处理培养的卵1至3分钟，脱卵丘。再用M2洗3至4遍，再用激活液洗3至4遍，再移入含有激活液的培养孔中。移入培养箱中激活6个小时。 5，假设上午9点做完，下午3点就可以观察。激活的判断方法是2原核或2细胞各具一原核的卵母细胞判断为激活。卵质膜破裂者判断为死亡。胞质分裂一次或多次，但不出现原核者判断为碎裂，本实验将碎裂卵均归为未激活卵。 6，将激活成功的卵母细胞用含钙的CZB培养液洗5至6遍，再转移如含钙CZB的培养孔中培养，理论上48小时后就可以看到4细胞期，此时再转入含糖含钙CZB胚胎培养液中培养，即可以到达囊胚期。
从生物圈到细胞知识点
第一章第1节从生物圈到细胞 一、细胞的生命活动离不开细胞 1、无细胞结构的生物（病毒）的生命活动离不开细胞 生活方式：寄生在活细胞 DNA病毒；噬菌体、天花病毒、乙肝病毒 病毒（由核酸分类； 和蛋白质构成） RNA病毒；SARS病毒、烟草花叶病毒、流感病毒、禽流感病毒 遗传物质：或只是DNA，或只是RNA（一种病毒只含一种核酸） 2、单细胞生物依赖单个细胞完成各种生命活动。 3、多细胞生物依赖各种分化的细胞密切合作，完成复杂的生命活动。 二、生命系统的结构层次 1、生命系统的结构层次；细胞组织器官系统个体种群群落生态系统生物圈 2、每个层次的概念 ①细胞：细胞是生物体的基本结构和功能单位（神经细胞、组织细胞、红细胞、肌纤维等） ②组织：由形态相似、结构和功能相同的一群细胞和细胞间质联合在一起构成上皮组织、结缔组织（如血液、骨、软骨）、肌组织（骨骼肌心肌、平滑肌等）和神经组织 ③器官：不同的组织按照一定的次序结合在一起（植物的六大器官根、茎、叶、花、果实、种子如一个西瓜属于器官而不是个体）例如皮肤、心脏等 ④系统：能够共同完成一种或几种生理功能的多个器官按照一定的次序组合在一起（消化系统、呼吸系统、循环系统、排泄系统、神经系统、运动系统、内分泌系统） ⑤个体：由不同的器官或系统协调配合共同完成复杂的生命活动的生物 ⑥种群：在一定的自然区域内，同种生物的所有个体是一个种群。（一片草地上的所有山羊、一个池塘中的所有鲤鱼） ⑦群落：在一定的自然区域内，所有的种群（所有生物）组成一个群落（一片草地上的所有生物、一根枯木上的所有生物） ⑧生态系统：在一定的自然区域内，生物群落与无机环境相互形成的统一整体（一个池塘、一滴水、一片草原等包括无机环境和所有生物） ⑨生物圈：由地球上所有的生物和这些生物生活的无机环境共同组成 除病毒以外，细胞是生物体结构和功能的基本单位，是地球上最基本的生命系统。 3、易错点 ①病毒不具有生命系统的结构层次。 ②植物细胞不具有系统这个层次。 ③分子、原子、蛋白质、核酸、等没有生命，不属于生命系统的结构层次。 ④阳光、土壤、空气等参与构成生态系统，也是生命系统的一部分。 ⑤病毒的生存必须要依赖于活细胞，故不可以用培养基培养细胞。 ⑥种群必须是同一物种；例如池塘中的所有鱼（鱼由鲤鱼、鲫鱼等很多种类）一片草地上 的所有羊（羊由山羊绵羊等）既不是种群也不属于群落，必须要同一物种如；池塘中的所有
医科大学2020年进修生招生简章【模板】
XX医科大学 2020年进修生招生简章 一、医院简介 XX医科大学附属第一医院于1957年由原上海第一医学院（现复旦大学）附属医院分迁来渝创建，历经60余年的建设和发展，已成为全国首批“三级甲等医院”和融医疗、教学、科研、预防、保健及涉外医疗为一体的重点大型综合性教学医院。 医院开设临床科室36个，医技科室8个，现有编制床位3200张。常年承担疑难危急重症救治、应急救援、干部保健及涉外医疗任务，是XX市SARS、甲型H1N1流感等重大传染病重症病例救治首要单位和专家组长单位，以及XX市唯一一家同时获肝、肾移植技术准入的地方医院。形成了器官移植、微创、介入、无痛诊疗等优势技术，推行以疾病为链条的多学科诊疗模式。拥有国家卫健委“国家临床重点专科建设项目”17个（产科、检验科、重症医学、专科护理、内分泌科、心血管内科、胸外科、神经外科、麻醉科、神经内科、普通外科、眼科、呼吸内科、耳鼻咽喉科、肿瘤科、医学影像科、老年病科），数量居全国第12名。拥有国家中医药管理局“中医老年病重点专科”1个。获批卫生部培训基地14个，XX市临床诊疗中心27个，XX市医疗质量控制中心20个，XX市专科护士培训基地10个。各学科均形成了自身的特色优势，综合诊断治疗水平居国内先进行列。 二、进修基本条件 原则上只接收二级以上医院，具有良好政治思想素质人员。 三、报到时间 1.春季报到时间：2020年3月3日
2.秋季报到时间：2020年9月1日 四、申请录取报到程序 1. 填写申请表：重医附一院官网-院本部-医学教育-继续教育科，下载进修申请表，也可复制******/index.php?file=edu&smid=93下载。 2. 选送单位审批：单位主管部门签字同意并盖章。 3．邮寄申请表：即日起开始，最迟于进修报到前2月将《进修申请表》及相关证书复印件交（或邮寄）回我院教务处继教科。 4．接收单位审核：教务处初审、接收科室签署接收意见。 5. 发放报到通知书：报到前1月教务处邮寄《进修人员报到通知书》。 6. 网上查询录取名单及报到流程：报到前一周可查询。网址同申请表下载地址。 五、进修费用 进修费、住宿费均按XX市物价局批准的标准收取。 六、进修住宿 我院进修生公寓条件：3人间院内住宿，公共洗漱设施，无网络。床位和条件有限，不能全部满足学员申请需要，能否住宿以报到通知书为准。 七、进修结业证书 进修期间无违反国家法律、法规及我院进修管理有关规章制度和纪律者，进修结束时，经进修所在科室、教务处考核合格，获《进修结业证书》。 八、医院各科室（专业）2020年招收进修人员计划表
新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细胞
新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细 胞 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 作者：毕聪明，王珅，王军，费东亮，肖银霞 【摘要】目的探讨小鼠精原干细胞体外诱导分化精子样细胞的可行性。方法以7～8日龄小鼠睾丸为材料，采用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层，应用维甲酸诱导、成年小鼠睾丸组织液诱导以及低温诱导精原干细胞分化，应用流式细胞仪分析诱导精子样细胞的染色体倍性。采用显微注射法将精子样细胞注射到卵母细胞和去核卵母细胞，观察受精卵的发育状况。结果三种方法诱导精子样细胞比例分别为5.9%、1.6%、0.35%；流式细胞仪分析维甲酸诱导单倍体比率为19.3%；诱导精子样细胞能激活卵母细胞，囊胚发育率20.36%。结论新生小鼠精原干细胞体外可以诱导分化为精子样细胞，并具有激活卵母细胞的能力。 【关键词】精原干细胞分化单倍体小鼠 Abstract: Objective To discuss the possibility of SSCs of Newly-born mice inducing the differentiating Sperm-like cells. Methods Taking the testis of male mice of 7～8 days for material
and adopting the testis of mice , SSCs differentiating were induced by using retinoic acid, tissue fluid of adult mice and low temperature. Flow cytometry was used to analyse the ploidy of chromosome inducing sperm-like cells. Microinjection was used to inject the sperm-like cells into oocytes and enucleate oocytes to observe the development situation of zygotes. Results The proportions of sperm-like cells induced by the three methods were 5.9%,1.6%,0.35% respectively. The rate of Flow cytometry to analyse retinoic acid haploid is 19.3% .The sperm-like cells achieved could activate bovine oocytes by sperm injection (ICSI), and the development rate of blastosphere was 20.36%. Conclusions SSCs of newly -born mice can be induced and differentiated into sperm-like cells and are also capable of activating oocytes. Key words:SSCs; differentiating; haploid; mice 在生精过程中，原始生殖细胞在胚胎期迁移到生殖嵴，经有丝分裂，迅速增殖形成精原干细胞（spermatogoial stem cells， SSCs），然后进一步形成精原细胞。吴应积等［1］利用曲细精管体外共培养法长期培养精原干细胞自分化为精子样细胞，另外应用外源基因修饰的雄性生殖细胞系或青春期的精原干细胞也可分化出精子样细胞［2－5］，通过体内移植使无内源性精子的动物产生精子。但在体外研究
小鼠睾丸支持细胞使用说明
小鼠睾丸支持细胞 小鼠睾丸支持细胞产品说明： 为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠睾丸支持细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠睾丸支持细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠睾丸支持细胞产品简介： 产品名称：小鼠睾丸支持细胞 组织来源：小鼠睾丸 产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶 小鼠睾丸支持细胞细胞简介： 睾丸支持细胞又称sertoli细胞。它是生精细胞的支架,为其提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白,为其提供高浓度的雄激素环境等,还具有构成血-睾屏障,形成睾丸内微环境,调节精子发生等功能。制备高活率的sertoli 不仅对sertoli的基础研究有重要价值,而且在精子发生等领域有重要意义。本研究旨在建立小鼠sertoli的快速高效分离方法,并根据其分泌FasL的特性,采用细胞免疫化学方法对分离的小鼠sertoli进行鉴定,以期为进一步研究和应用sertoli奠定基础。
普外科进修生培养计划
普外科进修生培养计划 临床医疗: 掌握普外常见病如甲状腺、乳腺疾病、胃肠肿瘤、外科急腹症的诊治，加强诊疗规范。提高疑难危重病人的诊疗能力。掌握科学的临床思维，培养严谨的工作作风。腹腔镜技术及乳腺癌的早期诊断和综合治疗是科室的两大特色。进修生经考核合格后可值副班，在本院医师指导下从事临床诊疗操作。高资历的进修医师可协助从事一定的实习、见习带教 腹腔镜技术: 我科腹腔镜胃肠手术在国际国内处于先进水平，科室有一套专门的培训系统。根据进修生的腔镜水平因材施教。进修生经考核合格后可值副班，在本院医师指导下管理病人。目前我科开展的腹腔镜手术有胃肠道恶性肿瘤根治术、腹腔镜下超低位直肠癌保肛术、腹腔镜联合内镜诊断小肠大出血、甲状腺良性肿瘤切除术、腹壁巨大切口疝修补术。 进修护士培训内容(三,六个月制) 培训内容预期目标培训形式专题讲课授课教员考核形式考核内容熟悉科室的环境、设施掌握科室的环境、设专人带教教学查房随机及物品存放位置，各种施、物品存放位置及各或护理查 规章制度及熟悉各班工种规章制度房 作程序 熟悉专科护理技术操作掌握专科护理技术操专人带教教学查房随机实践操作/ 及护理评估作及护理评估实践操作或护理查 房 掌握本科常见病、多发专人带教温海飞熟悉本科常见病、多发
病的观察与护理及急 病的观察与护理及急危危重症病人救治与配 合重症病人救治与配合 熟悉护理文书的书写及掌握护理文书的书写专人带教刘星实践操作健康宣教，熟悉整体护及健康宣教，能运用护实践 理工作的基本程序及常理程序为病人实施整 见的护理诊断和相应的体护理， 护理措施 了解本科护理新业务新熟悉本科护理新业务专人带教甄莉技术的开展情况 新技术的开展情况(造实践操作 口及慢性伤口护理) PICC留置技术及护理 了解护理教学、护理管掌握护理教学、护理管专人带教教学查房甄莉理论答卷专科知识，理、护理科研的基本程理、护理科研的基本程跟班或护理查实践操作护理程序序与方法序与方法房知识考核理论和操作 进修总结，学员上交学 习体会及护理病历各一 份。
细胞培养复习题有答案
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型? ⑴按生长方式分为二型： 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。） ⑵可分四型：(1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞 2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程 ⑴通常，体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段： ①原代培养期：也称初代培养，是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。此期的细胞呈现出活跃移动的特点，可见细胞分裂，但不旺盛。处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。细胞群具有明显的异质性，细胞间的相互依存性强，在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。 ②．传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期，原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。一般情况下，正常体细胞在传代10-50次左右后，细胞分裂的能力就会逐渐减弱，甚至完全丧失，细胞便进入衰退期。 ③衰退期：处于衰退期的培养细胞，增殖速率已经变得很慢或不再增殖，直至最后衰退死亡。 以上特点，主要是针对体外培养的机体正常细胞，对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言，永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力，这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。 ⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态，也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上，游离期结束。底物：玻璃、塑料、胶原、
进修人员管理规定
进修人员管理规定 一、总则 第一条进修教育是继续医学教育的一种教育形式，是以学习与专业有关的新知识、新理论、新技术、新方法为主的一种知识更新教育。教学形式以临床实践为主，辅以有关的专业理论教学。为提高进修教学的管理水平和教学质量，使进修教学工作更好地与医院管理工作相配合，现参照《中华人民共和国执业医师法》、《医疗事故处理条例》及医院的有关规章制度，特制定本办法。 二、招收进修生 第二条招生条件 1、临床医生：大专以上毕业有2年以上临床工作经验，持有与进修专业相符的《医师资格证》和《医师执业证》的医生。 2、临床护士：中专毕业有2年以上临床经验，并持有《护士资格证》和《护士执业证》者。 3、医技人员：大专以上毕业有2年专业工作经验或中专毕业有五年专业工作经验者。 第三条招生程序 1、凡申请到我院进修学习者,填写我院《进修申请表》,并按要求附上所需材料，送科教办审核。 2、科教办经与相关进修科室协商，确定接收进修人员数量及进修时间，报请主管院长审核批准后，由科教办向申请人单位发录取通知书。 3、在科室学习期限严格按照进修申请表审批时间进行，确需要更改进修时间者，进修人员需要向科室及科教办报告，经同意后，方可改变进修期限。 第四条各科室不得自行接收进修生。未经医院安排，科室自行接收进修生，其进修资格医院不予承认。 三、进修培训 第五条各临床业务科室由科室主任和教学秘书负责进修生的教学管理工作，各科室（病区）应安排有执业资格的、具备中级以上职称的人员担任进修生的指导老师，负责其在本科室（病区）进修学习期间的教学质量、医德医风、劳动纪律的管理，并指导其开展各项医疗活动。 第六条各科室应严格按专业要求进行教学。 第七条结合本科室“三基”培训教学方案，按照计划对进修生进行专业授课。 第八条各科室（病区）在进修生入科后，必须根据本专科的实际情况安排半天至一天的时间，对其进行科室内部的岗前培训，内容包括介绍科室情况、规章制度、工作流程、病历书写、验单填写等。 四、进修管理 第九条进修生管理实行医院、科室二级负责制。科教办负责组织协调及实施，科室根据医院要求负责培训管理工作。