生科院-基因工程试卷A卷+答案

淮阴师范学院 2009 级生物工程专业《基因工程》课程考试卷(A)答案 2012-2013 学年第 1 学期
限制酶的特异性就会松动, 识别的序列和切割都有一些改变。 改变后的活性 通常称第二活性, 而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一 个星号表示,因此第二活性又称为星号活性。
姓名
得分 题号 得分

得 分




总分 5、基因文库 将特定生物个体的全部 DNA 片段连接入载体 DNA 分子上,并导入受 体细菌或细胞中,经扩增产生的包含该生物全部基因组序列的克隆群体。
一、名词解释 (每题 4 分,共 20 分)
学号
得分 1、同尾酶 来源不同,识别的序列不同,但能切出相同的粘性末端,连接后不能被

得 分
相关的酶同时切割。 得分 2、S-D 序列
二、选择题 (每小题 2 分,共 20 分)
1、下列哪一种酶作用时需要引物? A、限制酶 B、末端转移酶 C、反转录酶 得分 D、DNA 连接酶 2、K1enow 酶与 DNA 聚合酶相比,前者丧失了的活性是? A、5’→3’合成活性 B、3’→5’外切活性 得分 C、5’→3’外切活性 D、转移酶活性 3、逆转录酶也称反转录酶,是一种 A、依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶 B、依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶
(C)
班级
mRNA 中用于结合原核生物核糖体的序列。SD 序列在细菌 mRNA 起 始密码子 AUG 上游 10 个碱基左右处,有一段富含嘌呤的碱基序列,能与 细菌 16SrRNA3’端识别,帮助从起始 AUG 处开始翻译。
线
3、多克隆位点
(C)
系别
指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点 的 DNA 片段
4、星号活性 II 类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性,但是这种特异性受 特定条件的限制,即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件发生改变,
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(B)

C、依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶 D、DNA 聚合酶或 RNA 聚合酶 4、用下列方法进行重组体的筛选,只有_说明外源基因进行了表达(C) A、Southem 印迹杂交 B、Northem 印迹杂交 C、Western 印迹 D、原位菌落杂交 5、下列哪种克隆载体对外源 DNA 的容载量最大? A、质粒 B、黏粒 C、酵母人工染色体(YAC) D、λ 噬菌体 6、 T4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起, 其底物的关键基团是 A、2'-OH 和 5'-P B、2'-OH 和 3'-P C、3'-OH 和 5'-P

A、偏爱性 B、简并性 C、重叠性 D、连续性 10、以下哪些信息无法从 cDNA 克隆中获得? A、外显子序列 B、启动子序列 (C) C、序列的相似性 D、编码产物的氨基酸序列 (B)


三、简答题(每小题 8 分,共 40 分)
(C)
1、PCR 的原理和主要反应过程?
原理 PCR 技术是以 DNA 互补链的聚合反应为基础, 通过 DNA 变性、 引物与模 板 DNA 一侧的互补序列复性杂交,由 DNA 聚合酶催化引物延伸,最终获得特 异 DNA 片段的体外扩增方法。
D、5'-OH 和 3'-P 7、用碱法分离质粒 DNA 时,染色体 DNA 之所以可以被除去,是因为 (C) A、染色体 DNA 断成了碎片 B、染色体 DNA 分子质量大,而不能释放 C、染色体变性后来不及复性
PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成: ①模板 DNA 的变性:模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后,使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离,使之成为单链,以便它与引物 (B) 结合,为下轮反应作准备; ②模板 DNA 与引物的退火(复性): 模板 DNA 经加热变性成单链后, 温度 降至 55℃左右,引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合; ③引物的延伸:DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下,以 dNTP 为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一 (C)
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D、染色体未同蛋白质分开而沉淀 8、根据酶切活性对盐浓度的要求,限制性核酸内切酶可分成 A、2 大类 B、3 大类 C、4 大类 D、5 大类
线
9、下面哪一种特性不是密码所具有的?
条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链。

3、细菌的限制与修饰系统有什么意义?
得分 2、理想质粒载体的必备条件?
宿主控制的限制与修饰现象广泛存在于原核细菌中,它有两方面的作 用,一是保护自身 DNA 不受限制;二是破坏入侵外源 DNA 使之降解。细 菌正是利用限制与修饰系统来区分自身 DNA 与外源 DNA 的。 外源 DNA 可

应具有载体的基本条件 1.具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性); 2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点; 3.具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点; 4.具有较高的外源 DNA 的载装能力; 5.具有合适的筛选标记。 除具备载体的基本条件外,作为质粒本身还需要 1.具有较小的分子质量和较高的拷贝数。 2.具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。
以通过多种方式进入某一生物体内, 但是它必须被修饰成受体细胞的限制内 切酶无法辩认的结构形式, 才能在寄主细胞内得以生存, 否则会很快被破坏。 因此,在基因工程中,常采用缺少限制作用的菌株作为受体,以保证基因操 作的顺利完成。 得分 4、什么是 α-互补筛选(蓝白斑筛选的原理)? 这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在 ? 载体的非 必要区插入一个带有大肠杆菌 ?—半乳糖苷酶的基因片段, 携带有 lac 基因 片段的 ? 载体转入 lac 的宿主菌后, 在含有 5—溴—4—氯—3—引哚—?—D —半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人 lac(或 lac 基因部分被取代)后,重组的噬菌体将丧失分解 X-gal 的能力,转入 lac-宿 主菌后, 在含有 5—溴—4—氯—3—引哚—?—D—半乳糖苷 (X-gal)平板上 形成白色的噬菌斑,非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。 得分 5、抑制性差减杂交所依据的原理

3.缺失 mob 基因。 4.插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。 得分
线
SSH 的核心技术是抑制性 PCR,它是一种将检测子 cDNA 单链标准化 步骤和消减杂交步骤结合为一体的技术。 其中标准化步骤均等了检测子中的 cDNA 单链丰度,而消减杂交步骤去除了检测子和驱赶子之间的共同序列, 使检测子和驱赶子之间不同的序列得到扩增。 抑制性 PCR 是利用链内复性优 先于链间复性的原理, 是非目标序列片段两端的长反向重复序列在复性时产
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生“锅柄样”结构或“发夹结构”而无法与引物配对,从而选择性地抑制了 非目标序列的扩增。 得分 得分
得 分
2、近期“黄金大米”事件在社会上反响强烈,请依据自己所学的基因 四、论述题(每小题 10 分,共 20 分) 工程的知识,谈谈你对该事件的看法
1、基因工程的基本操作程序及常用方法?
转基因技术所带来的好处是显而易见的, 在人类历史进步和发展中起到了积 极作用。
(1)从基因文库中获取,利用 PCR 技术扩增目的基因, 如果基因较小, 核苷酸序列又已知, 可以通过 DNA 合成仪用化学方法直 接人工合成。 (2)基因表达载体的构建 (3)转化 目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 导入植物细胞 方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 导入动物细胞 方法:显微注射技术 常用受体细胞:受精卵 导入微生物细胞 用钙离子处理细胞, 使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理 状态,这种细胞称为感受态细胞。 (4)目的基因的检测与鉴定 DNA 分子杂交技术(检测目的基因、 分子杂交技术(检测 mRNA) 、 抗 原抗体杂交技术(检测蛋白质)
首先,通过该项技术可以提供人们所需要的特性,改良培育新品种; 第二,延长食品保存时间或增加营养成分; 第三, 将抗虫防菌基因转入到作物中, 使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能 力, 减少了农药的使用量,有利于环境保护; 第四,转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。 人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。 外源基因的导入可能会造 就某种强势生物, 产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生 物种群的动态平衡和生物多样性,也即转基因生物存在潜在的环境安全问 题。 转基因作物的大面积种植已有数年, 食用转基因食品的人群至少有10 亿之多, 但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例; 更何况目前每一 种基因工程食品在上市前,都要经过国家法律认可, 食品卫生部门和环境 部门的严格检测。只有测试合格了,才能投放市场。因此公众完全可以安全 地消费、大胆地食用转基因食品。
(或者)随着转基因技术的发展,转基因生物安全问题在国内外已经 引起极大的关注, 不同领域的专家都从自己的专业角度对这个问题进行了很 多研究,积累了丰富的文献。 这些研究主要集中在生态学、科技伦理、环 境科学等方面, 主要通过技术层面来分析转基因生物的安全性问题。 随着研
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究的深入,人们一致认为,生物安全是一个综 合性的问题,它对于人类社 会的深远影响已经超过人们的预期,原来那种希望仅仅依*科学技术的完善 来解决人们对生物安全的疑虑和不安的想法已经显得过于简单 。 转基因生物安全首先是一个科学的概念,转基因生物从实验室到栽培 实验地,到大田,到食品加工厂,到超级市场,到我们的餐桌上,随着消费 者离转基因生物及其产品的距离越来越近, 在这各个过程中, 生物安全涉及 到实验室安全、项目审批、大田栽培风险评估、市场准入、运输隔离、食品 标签等一系列问题。 而在法律的视野中, 转基因生物安全包括着两个层面的 安全:其一是生态和健康上的风险防范。因为“科学不确定性”的存在,使 得法律对转基因生物的风险规制努力只能是“防范”而非“根除”隐患;其 二,是指一旦转基因生物造成了损害,法律是否加以救济,提供怎么样的法 律框架予以救济。这也是生物安全的另一个方面,是法律框架内的安全。 由此我们可以得到这样的转基因生物安全概念, “转基因生物安全,是指为 使转基因生物及其产品在研究、开发、生产、运输、销售、消费等过程中受 到安全控制、 防范其对生态和人类健康产生危害、 以及救济转基因生物所造 成的危害、损害而采取的一系列措施的总和” 。相应地,调整和规范其中每 一个过程中产生的法律关系的法律,其总和也就构成了转基因生物安全法。
(其他答案合理均给分)
得分
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