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细胞生物学实验课自我测试题

1、显微镜的光学系统主要有哪部分些构成？

2、拿到一张固定装片，为了很快找到需要找到的物像，首先应该做什么？

3、为避免显微镜的灯泡烧坏，应注意什么？

4、在低倍镜下找到物像后，为了看得更仔细，向高倍镜转换过程中需要调整粗调节螺旋

吗？为什么？

5、如何搬动显微镜？

6、推血涂片时，要一次成功。即使不成功，也不要再推第二次，一旦推片失败，必须重

新开始。为什么？

7、使用染色缸时，为避免拿出玻片时找不到涂有细胞的一面，应注意什么？

8、如何知道试管中的红细胞溶血了？

9、抓取小鼠注射的正确方法是怎样的？

10、取蛙血时，从胸腔最先看到的一般是哪个器官？如何快速找到心脏？

11、细胞生物学实验要求学生掌握的最重要的技能是什么？

12、鸡的红细胞和小鼠的巨噬细胞相比，哪个体积大？

13、细胞处于高渗或低渗溶液中，如何判断水的运动方向？

14、可自由扩散的脂溶性小分子对细胞的影响如何？

15、显微镜下口腔粘膜细胞的线粒体的形状是什么样的？

16、在细胞吞噬活动观察的实验中，如何在显微镜下快速找到巨噬细胞？

17、推蛙血涂片时应注意什么？

18、为什么要用派洛宁和甲基绿染的混合染液染色RNA和DNA?

19、派洛宁和甲基绿染的混合染液染色细胞，细胞核和细胞质的颜色分别是什么颜色？为

什么？

20、使用显微镜观察标本时，为什么必须按照从低倍镜到高倍镜，再到油镜的顺序进行？

21、使用显微镜时，为什么要先将10倍物镜与标本表面的距离调节到6mm之内？

22、如果标本片放反了，可用高倍镜或油镜找到标本吗？为什么？

23、怎样才能准确而迅速地在高倍镜或油镜下找到目标？

24、如果细调焦螺旋已转至极限而物像仍不清晰时，应该怎么办？

25、如何判断视野中所见到的污点是在目镜上？

26、在对低倍镜进行准焦时，如果视野中出现了随标本片移动而移动的颗粒或斑纹，是否

将标本移至物镜中央，就一定能找到标本的物像？为什么？

27、动物细胞与植物细胞有哪些重要区别？

28、请说明细胞膜具有哪些特点。

29 细胞的吞噬活动对人体有何意义？

30、物质跨膜（细胞膜）运输有哪些方式？请比较它们的不同点。

31、比较动植物细胞有丝分裂的异同点。

32、开始显微镜使用时，电源接通后灯泡不亮,可能有哪几种原因？

33、怎样才能快速在高倍镜下找到洋葱根尖细胞的分裂相？

34、高倍镜观察标本时，无论怎么调节微调螺旋，视野都很模糊，可能的原因是什么？该

怎么处理？

35、动物细胞马蛔虫卵的有丝分裂相的两种图形：染色体直线排列与放射状排列属于什么

时期？

36、着丝点的分裂在有丝分裂的那一个时期？

37、观察洋葱根尖和马蛔虫卵有丝分裂时，二者都能看到核仁吗？

38、显示蟾蜍血液细胞DNA和RNA时，为什么要在纯丙酮中迅速过一下？

39、细胞膜的通透性观察实验中溶血的原因是什么？

40、NaCl溶液和葡萄糖溶液为什么不能产生溶血？

41、蟾蜍心脏取血时，剪开其表皮、打开胸腔时，应注意什么？

42、用牙签取自己的颊粘膜上皮细胞时，最先应做什么？

43、颈椎脱臼法处死大（小）白鼠时关键要注意什么？

44、在鼠肝细胞活体染色显示线粒体的实验操作中，为什么切取肝脏边缘较薄的肝组织一

小块放入盛有染液的小培养皿内（或者凹玻片中）时，染液不可太多？

45、观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动时，为什么在实验前两天，每天每只小鼠腹腔注射6%

淀粉肉汤1ml（含台酚蓝）？

46、观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动时，为什么在实验前先给每只小鼠腹腔注射1%鸡红细

胞悬液1ml？

47、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察时，为什么25分钟后再向腹腔注射0.5ml生理盐水？

48、观察蛙血涂片中的细胞形态结构时，甲醇的作用是什么？操作时要注意什么？

49、人的红细胞有细胞核吗？蛙的红细胞有细胞核吗？

50、观察动植物细胞分裂时，间期的典型特点是什么？

细胞生物学实验课自我测试题答案

1、目镜、物镜、光源、聚光镜。

2、对着光线用肉眼找到固定装片上的被观察物，或者盖玻片的位置，将它放在通光孔的

正中央。

3、一旦不观察或离开座位，应关闭光源开关。

4、不用，只调细调节螺旋。因为所有物镜的焦平面都在一个平面内，秩序用微调螺旋轻

轻调节即可。

5、一手托着镜座，一手握着镜臂。

6、因为推两次必然造成两层涂片，细胞层很厚，细胞堆积在一起，在显微镜下无法清楚

地观察单个血细胞。同时，第二次推片时必然破坏第一次推片涂布的细胞

7、应把所用的玻片正面都朝向一侧，并记下方向。

8、隔着试管可以清晰地看见后面纸上的字，即从不透明变成透明。

9、左手大拇指、食指抓小鼠头颈的上后部毛皮，使其颈部不能活动，其余手指固定其身

体，将其翻转后可直接用右手持注射器对其胸腹部注射。

10、红色泡状的肺。跳动的器官即心脏。

11、非常熟练地使用显微镜，掌握临时装片的基本技术，各种细胞形态的观察。

12、一般说来小鼠的巨噬细胞大一些。

13、细胞处于高渗溶液中则水出细胞，细胞处于低渗溶液中则水进入细胞。

14、如果胞外的脂溶性小分子浓度很大，则会大量进入细胞，导致细胞破裂。

15、颗粒状、棒状、弯曲的线状。

16、细胞内有很多蓝色淀粉小颗粒的细胞，就是巨噬细胞。这是因为实验前向小鼠腹腔注射

了含有台酚兰的淀粉肉汤，巨噬细胞吞噬了台酚兰颗粒。

17、斜角越小，速度越快，涂片越薄。

18、核酸是酸性的，它们对于碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力。利用这两种染料的混合

液处理细胞，可使其中的DNA和RNA呈现出不同的颜色，这种颜色上的差异由DNA和RNA聚合程度的不同所引起，因为甲基绿分子上有两个相对的正电荷，它与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色；而派洛宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA相结合使其染成红色。这样细胞中的DNA和RNA可被区别开来。

19、绿色和红色。因为细胞核中主要是DNA，细胞质中主要是RNA，而它们分别被绿色的甲

基绿和红色的派洛宁着色。

20、因为低倍镜观察的表本范围最大，可以更快地找到要观察目标。

21、因为10倍物镜的工作距离为7.63mm，而为了保护物镜不与玻片相撞，应该将目镜与载

玻片的距离调至6mm以内后，再下调载物台，既可找到观察目标，又可保护物镜。

22、不能，因为载玻片的厚度远大于高倍镜或油镜的工作距离。

23、在低倍镜下找到目标后，调至视野正中央，再转换到高倍镜。

24、应该换用粗调节旋钮，轻轻同方向转动一下，在用微调节旋钮调节焦距。

25、轻轻转动目镜，污点随目镜转动，就证明污点在目镜上面。

26、不一定，因为这些斑纹可能位于载玻片的反面（下面）。

27、动物细胞有中心体，植物细胞没有，植物细胞有液泡、细胞壁，动物细胞没有。

28、细胞膜的主要特点是具有不对称性、流动性。

29、细胞的吞噬活动对人体具有保护作用，免受外来微生物、有害物质的侵害。

30、主动运输：消耗能量，从低浓度到高浓度

被动运输：不需要消耗能量，从高浓度一侧向低浓度一侧运输。又可以分为：简单扩散：不需要载体的帮助，物质直接透过细胞膜；帮助扩散：需要载体的帮助。

通道运输：高浓度相低浓度运输，专一性强，运输速度快

31、动物细胞分裂时有星体的形成，而植物细胞因为没中心体，分裂时没有星体。动物细胞

分裂时细胞膜缢缩分裂成两个细胞，而植物细胞因为有坚硬的细胞壁，在赤道板的位置重新形成细胞壁。

32、一是总开关未打开，或者插头接触不良；二是亮度调节旋钮没有打开。

33、先用肉眼对着光线找到切片上的洋葱根尖，然后放在通光孔的正中央，用10倍的物镜，

在生长区找到分裂相，再转换到高倍镜即可。

34、可能的原因主要有：镜头被污染，尤其可能是被镜油污染。应该先用二甲苯清洗，再用

擦镜纸擦去二甲苯。

35、有丝分裂中期，与赤道板垂直的切面和与赤道板平行的切面。

36、有丝分裂后期

37、洋葱根尖的间期能看到核仁一个或者二到三个。动物细马蛔虫卵细胞看不到。

38、在纯丙酮中迅速过一下的目的是为了脱去多余的染料，又不至于脱去已经与DNA和RNA

结合的染料。

39、蒸馏水：水分子可以自由通过细胞膜，低渗溶液中的水分子迅速进入细胞内，使细胞破

裂。乙醇、甘油：可以自由进入细胞，使细胞破裂。乙醇进入的速度慢于甘油。

40、NaCl溶液的浓度高于生理盐水，是高渗溶液，细胞在高渗溶液中，细胞内水分子流出

细胞，钠离子和氯离子都不能通过细胞膜

41、用镊子挑起皮肤，仔细用剪刀剪开皮肤复，再用镊子夹住胸骨。小心剪开，以免直接伤

及内脏，流血过多，不利于取血。

42、漱口。这样可除去口中的食物残渣，便于刮下的大多是细胞。

43、固定头颈部，用力一下子拉直脊椎。

44、要使肝组织的上半部分暴露在空气中，而不可使组织块完全淹没，这样细胞内线粒体的

酶系可被充分氧化而使线粒体易于着色。

45、为了在后续观察实验中清晰地观察到巨噬细胞，含台酚蓝的淀粉肉汤为蓝色，被巨噬细

胞吞噬后可示踪巨噬细胞；此外，腹腔注射的淀粉肉汤作为外来异物，会吸引小鼠体内的巨噬细胞集中到腹腔，便于后续实验得到大量的巨噬细胞。

46、为了观察小鼠腹腔巨噬细胞如何吞噬鸡红细胞

47、使腹腔中的液体多一点，便于收集巨噬细胞和鸡红细胞；生理盐水不会使细胞破裂或变

形。

48、甲醇的作用是使细胞固定。注意用完甲醇后一定要倒回原瓶，予以回收，以免污染环境。

尤其应该严格避免甲醇溅到眼睛和皮肤上，一旦醇溅到眼睛和皮肤上，应立即用清水冲洗。

49、人的红细胞没有细胞核。蛙的红细胞有细胞核。

50、核膜、核仁清晰，染色质呈丝状。

细胞生物学实验指导

细胞生物学实验指导目录一．显微镜的使用实验一、几种光学显微镜的使用实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备二．细胞形态结构实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用实验四、细胞活体染色技术实验五、植物细胞骨架光学显微观察实验六、胞间连丝观察三．细胞化学实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白实验十、多糖及过氧化酶的显示实验十一、核仁组成区的银染显示与观察四．细胞生理实验十二、细胞膜的通透性实验十三、细胞电泳五．细胞和组织培养技术实验十四、植物原生质体的分离和融合实验十五、植物细胞的培养与观察实验十六、动物细胞融合实验十七、动物细胞的培养与观察六．细胞化学成分的分离实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离实验十九、荧光的细胞化学测定实验二十、细胞活力的鉴别实验一几种光学显微镜的使用

一、实验目的了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。二、实验原理 (一)基本原理一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜：普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜：暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜：相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。

(生物科技行业类)细胞生物学习题与实验

《细胞生物学》综合测试题（一）一、名词解释（每词3分，共30分） 1、细胞 2、分子杂交 3、核体 4、初级溶酶体 5、自由扩散 6、桥粒 7、膜骨架 8、奢侈基因 9、常染色质 10、基本颗粒（F1因子）二、填空（每空0.5分，共15分） 1、原生质体是指（）。 2、细胞的三要素是指（）、（）和（）。 3、被动运输可分为两类，即（）和（）。 4、流动镶嵌模型的三大特点是（），（）和（）。 5、目前发现最小最简单的细胞是（），直径只有（）。 6、根据是否与消化物作用溶酶体可区分为（）、（）两种形式。 7、原核细胞和真核细胞的核糖体的沉降系数分别是（）和（）。 8、细胞内的能量转化细胞器是指（）和（）。 9、细胞学说的内容包括（）、（）和（）。 10、荧光显微镜以（）为光源，电子显微镜则以（）为光源。 11、细胞有两种膜结构具有分拣作用，一个是（）另一个是（）。 12、弹性蛋白的肽链之间通过（）相互交连形成网络。 13、用（）技术可以在电镜下观察膜蛋白的不对称分布。 14、在转移酶I和T因子的作用下，催化P位上肽酰tRNA的（）与处在A位上氨酰基tRNA的（）之间形成肽键。 15、染色质根据功能状态不同可分为（）和（）两种。三、简答（每小题5分，共25分） 1、糙面内质网功能。 2、真核细胞的主要特点是什么？ 3、染色体DNA的三个功能元件是什么？ 4、细胞核的组成部分及功能。 5、为什么说线粒体、叶绿体是半自主性细胞器？四、论述（每小题10分，共30分） 1、试述动物细胞的连接方式 2、试述蛋白质糖基化的生理作用。 3、试述细胞生物学的主要研究内容。《细胞生物学》综合测试题（二）

(完整版)分子生物学实验技术考试题(卷)库

一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。

11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合

细胞生物学实验

1. 什么是细胞培养？细胞生物学实验指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。

对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副

细胞生物学实验指导(植物版)

细胞生物学实验实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。二、材料洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。三、试剂生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生

(完整版)细胞生物学实验测试题

细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作）原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。（滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯）用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片：（1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。（2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。（3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液）（4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。（5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子）（6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来）（8）、制片观察。结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧

细胞生物学实验期末考试试题答案

。细胞生物学实验试题参考答案及评分标准一、填空题（本题共 22 空，每空 1 分，共22分） 1．分辨率；放大倍数，镜口率（数值孔径）。 2．激活巨噬细胞（数量增加、吞噬活性增强），台盼兰作为指示剂。 3．差速、密度梯度；细胞核，叶绿体。 4．中性红；核仁。 5．柠檬酸钠。 6．网格（笼形）蛋白；微丝。 7．SDS；Triton X-100；微粒体。 8．PEG；粉末。 9．0.9％。10．接触抑制。 11．戊二醛；甲醇：冰醋酸（3：1）。二、判断改错题（本题共8小题,每小题2分，其中判断0.5分，改错1.5分，共16分）1．×也可能会 2．×微管 3．×整合蛋白 4．×不同物种的细胞 5．√ 6．×光学显微镜 7．×微丝 8．×浓度偏低三、简答题（本题共_5_小题，共46分） 1．移动载物台，动则在玻片上（2分）；转动目镜镜头，动则在目镜上（2分）；否则在物镜上（2分）。（本题共6分） 2．含红细胞的吞噬泡与巨噬细胞内的初级溶酶体融合，进行消化；（8分） 3．一种糖蛋白（2分）；内质网合成、糖基化，高尔基体内进一步加工、分选，以分泌泡形式与膜融合，胞吐（8分）；它能与鸡红细胞膜表面的糖链专一性结合（2分）（本题共12分） 4．⑴ Giemsa染色前，细胞须固定（染死细胞），主要染的是核、染色质（5分）；⑵ Janas Green B 染的是活细胞（染色前不用固定），主要染的是线粒体（5分）。（本题10分） 5．⑴测量溶血时间（2分）；⑵主要取决于分子的大小和极性（4分）；小分子比大分子容易穿膜，非极性分子比极性分子易穿膜，而带电荷的离子跨膜运动则通常需要转运蛋白的协助（4分）。（本题共10分）四、论述题（本题共_1_小题,每小题 16 分，共 16 分）（0401、0402班同学请回答）答：外周血培养（2分）－秋水仙素处理（2分）－离心收集细胞（2分）－低渗处理（2分）－固定（2分）－制片（2分）－染色（2分）－镜检及显微摄影－核型分析（2分）（原理略）（本题共16分）（0403班同学请回答）答：外周血培养（2分）－秋水仙素处理（2分）－离心收集细胞（2分）－低渗处理（2分）－固定（2分）－制片－老化（2分）－显带处理－染色（2分）－镜检及显微摄影－带型分析（2分）（原理略）（本题共16分）

细胞生物学实验指导(精)

细胞生物学实验指导细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。实验一普通显微镜及其使用（装片观察）一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项：（1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。（2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜

头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？实验二、细胞膜的渗透性实验目的了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。实验原理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。实验用品一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。二、材料羊血。三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。实验方法一、羊血细胞悬液取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的羊血。

细胞生物学实验课自我测试题

细胞生物学实验课自我测试题 1、显微镜的光学系统主要有哪部分些构成 2、拿到一张固定装片，为了很快找到需要找到的物像，首先应该做什么 3、为避免显微镜的灯泡烧坏，应注意什么 4、在低倍镜下找到物像后，为了看得更仔细，向高倍镜转换过程中需要调整粗调节螺旋吗为什么 5、如何搬动显微镜 6、推血涂片时，要一次成功。即使不成功，也不要再推第二次，一旦推片失败，必须重新开始。为什么 7、使用染色缸时，为避免拿出玻片时找不到涂有细胞的一面，应注意什么 8、如何知道试管中的红细胞溶血了 9、抓取小鼠注射的正确方法是怎样的 10、取蛙血时，从胸腔最先看到的一般是哪个器官如何快速找到心脏 11、细胞生物学实验要求学生掌握的最重要的技能是什么 12、鸡的红细胞和小鼠的巨噬细胞相比，哪个体积大 13、细胞处于高渗或低渗溶液中，如何判断水的运动方向 14、可自由扩散的脂溶性小分子对细胞的影响如何 15、显微镜下口腔粘膜细胞的线粒体的形状是什么样的 16、在细胞吞噬活动观察的实验中，如何在显微镜下快速找到巨噬细胞 17、推蛙血涂片时应注意什么 18、为什么要用派洛宁和甲基绿染的混合染液染色RNA和DNA 19、派洛宁和甲基绿染的混合染液染色细胞，细胞核和细胞质的颜色分别是什么颜色为什么 20、使用显微镜观察标本时，为什么必须按照从低倍镜到高倍镜，再到油镜的顺序进行 21、使用显微镜时，为什么要先将10倍物镜与标本表面的距离调节到6mm之内 22、如果标本片放反了，可用高倍镜或油镜找到标本吗为什么 23、怎样才能准确而迅速地在高倍镜或油镜下找到目标 24、如果细调焦螺旋已转至极限而物像仍不清晰时，应该怎么办 25、如何判断视野中所见到的污点是在目镜上 26、在对低倍镜进行准焦时，如果视野中出现了随标本片移动而移动的颗粒或斑纹，是否

细胞生物学实验

实验室规则和要求一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变措施。

药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸，勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电源。

细胞生物学实验指导书09年

实验一普通光学显微镜的构造和使用一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。四、操作步骤 1．观察前的准备（1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。（2）调节光源 2．显微镜观察

（1）低倍镜观察（2）高倍镜观察（3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？实验二胞间连丝的观察一、实验目的观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识．二、实验原理植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。三、实验材料红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片四、实验步骤

细胞生物学实验复习题

细胞生物学实验复习题（动物部分） 1.细胞生物学实验绘图有哪些要求？ 2.细胞中的酶定位有哪些方法？酸性磷酸酶定位的原理是什么？ 3.试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 4.叙述“细胞膜的渗透性”实验的原理、主要步骤和应注意的问题。 5、细胞膜的通透性观察实验中溶血的原因是什么？NaCl溶液和葡萄糖溶液为什么不能产生溶血？ 6、推血涂片时，要一次成功，即使不成功，也不要再推第二次，一旦推片失败，必须重新开始，为什么？ 7、如何知道试管中的红细胞溶血了？ 8、动物细胞和植物细胞相比，有哪些重要区别？ 9、骨髓细胞染色体标本制备过程中，为了保证得到较理想的实验结果，哪些因素是你认为最重要的？ 10、你所完成的动物细胞试验共观察到几种动物细胞？根据你观察的结果，哪种细胞体积或者直径最大？哪个最小？判断依据是什么？ 11、细胞核、细胞质、线粒体、染色体、细胞骨架、酶、细胞中的DNA都分别用什么方法可以得到，用什么方法可以观察到？ 12、利用PEG介导的动物细胞融合，实验原理是什么？细胞生物学实验复习题（植物部分） 1. 倒置显微镜的特点及其用途如何？ 2. 相差显微镜与普通光镜相比有哪些特殊结构？ 3. 试述荧光显微镜的原理和用途。 4. 固定液的作用是什么？说出我们实验中所用过的几种不同的固定

液及它们的实用范围。 5. 常用的组织破碎方法有哪些？各自的适用范围如何？ 6. 什么是差速离心法、密度梯度离心法？各自的用途如何？ 7. 染色法有哪些方式？各如何进行？ 8. 显示染色体的实验，其材料往往要作什么预处理？取材部位如何选择？ 9. 如何进行细胞核的分离和鉴定？叙述细胞核的结构与功能。 10. 试述用考马斯亮蓝R250来显示细胞微丝骨架的原理及其应注意的事项。 11. 如何证明不同分化状态的组织细胞主要是由于基因的选择性表达而不是由于基因的丢失所造成的？ 12. 如何进行线粒体的分离和鉴定（并说明原理）？ 13. 在分离出线粒体后，若要对其进行深入研究，技术路线如何？ 14. 在使用高速离心机时，要注意那些问题？ 15. 试述叶绿体的分离和荧光观察的过程。在分离叶绿体时，如果发现分离出来的叶绿体很小，如何验证其是不是由于分离时所造成的叶绿体破碎的结果？

细胞生物学实验

细胞培养基本理论一细胞培养概述细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞贴壁型细胞形态比较成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等

细胞生物学实验实验报告

细胞生物学实验班级：生科142 姓名：旷江学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞华东理工大学应用生物学系

摘要本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构

Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur

细胞生物学实验教案大全

细胞生物学实验教案【经典学习资料，收藏必备】

实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察【实验目的】在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。【实验原理】细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。（自拍图）（a）（b）（c）（d）图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯【方法与步骤】

一、洋葱根尖切片细胞的观察先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。实验一、细胞的显微测量【实验目的】掌握显微测微计的基本原理及使用方法。【实验原理】细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针（二）材料：血涂片（三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液【方法与步骤】

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2011-04-23 11:01:29)转载▼ 标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学基本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。固相杂交固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。斑步杂交（dot hybridization）是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。印迹杂交（blotting hybridization）

细胞生物学实验步骤

冻存细胞的复苏 1、于液氮罐中取出冻存管。 2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。 3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。 4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。 5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。组织块法培养骨骼肌细胞 1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。 2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。 3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。 5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。贴壁细胞的传代和冻存 1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。 2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。 3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。 4、加培养液终止消化。 5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。 6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。 7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。 8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。 9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃ 2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。细胞计数

细胞生物学实验方法与技术

第二节细胞生物学实验方法与技术细胞生物学是生命科学中的重要分支，它以生命基本单位细胞为研究对象，应用近代物理、化学和实验生物学方法，从显微、亚显微和分子水平来揭示细胞生命活动及规律，其中包括细胞的生长、发育、分裂、分化、遗传、变异（包括癌变）、兴奋、运动、代谢、衰老与死亡等基本生命现象，并且利用与调控细胞的行为活动，已达到为生产实践尤其为医药卫生事业服务。当前细胞生物学与医药保健事业联系的较为紧密的热点问题主要有以下几种：1）真核细胞基因结构及其表达调控；2）细胞膜、膜系、受体与信号传递研究；3）细胞生长、分化、衰老、癌变、死亡，尤其是程序性细胞死亡的研究；4) 细胞工程，包括基因工程及体细胞核移植的研究。一、细胞培养常用方法 1、细胞原代培养（primay culture）又称初代培养，即直接从机体取下细胞、组织、或器官、让他们在体外维持与生长。原代细胞的特点是细胞或组织刚离开机体，他们的生物状态尚未发生很大的改变，一定程度上可反映他们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性，因此用于药物实验尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等研究是极好工具。常用的原代培养方法有组织快培养法及消化培养法。前者方法简单，细胞也较易生长，尤其是培养心肌有时能观察到心肌组织块的搏动。细胞从组织块外长并铺满培养皿或培养瓶后即可进行传代。 2、细胞的传代培养当细胞生长至单层汇合时，便需要进行分离培养否则会因无繁殖空间、营养耗竭而影响生长，甚至整片细胞脱离基质悬浮起来直至死亡。为此当细胞达到一定密度时必须传代或再次培养，目的是借此繁殖更多的细胞，另一方面是防止细胞的退化死亡。二、器官培养方法器官培养（organ culture）是指用特殊的装置使器官、器官原基或它们的一部分在体外存活，幷保持其原有的结构和功能。器官培养可模拟体内的三维结构，用于观察组织间的相互反应、组织与细胞的分化以及外界因子包括药物对组织细胞的作用。器官培养方法很多，最经典的方法即表玻皿器官培养法；一种最常用的方法是不锈钢金属网格法及Wolff培养法和扩散盒培养法，实验者可根据情况选择采用。三、放射自显影术测定放射自显影术（autoradiography）是利用放射性同位素电离辐射对核子乳胶的感光作用，显示标本或样品中放射物的分布、定量以及定位的方法。放射性同位素能在紧密接触的感光乳胶中记录下它存在的部位和强度，准确显示出形态与功能的定位关系。现已可将放射自显影术与电镜以及生物分子结合起来。不但可以研究放射性物质在组织和细胞内的分布代谢，而且可以揭示核酸合成及其损伤等改变，目前已在生命科学各领域被广泛应用。四、染色体分析技术染色质或染色体是遗传物质在细胞水平的形态特征。前者是指当细胞处于合成期时遗传物质经碱性染料着色后，呈现出细丝状弥漫结构；当细胞进入分裂期时，染色质细丝高度螺旋化凝聚为形态有特征的染色体。特别是在分裂中期，复制后的染色体达到最高程度的凝聚，称为中期染色，是进行染色体形态观察分析的最佳时期。染色体分析应用领域越来越广，主要用于以下几方面：1）为临床诊断提供新手段；2）研究不育和习惯性流产发生的遗传基础； 3) 通过检查胎儿的染色体，预防有染色体异常患儿出生（先天愚型）；4）根据染色体的多肽性进行亲子和异型配子的起源研究；结合DNA重组技术可以将基因定位于染色体的具体

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