生工RNA提取试剂盒

UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒

产品编号：SK1321/SK1322

包装规格：20次/100次

试剂盒组成

组分 SK1321，20次 SK1322，100次

纯化套件（吸附柱+收集管） 20套 100套

Trizol Reagent 12 ml 60 ml

RPE Solution 5 ml 25 ml

DEPC-treated ddH2O 1 ml 5 ml

操作手册1份1份

保存方法及注意事项

试剂盒于常温运输，试剂请按照要求分别保存。有效期见包装。

Trizol是强腐蚀性物质，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

产品介绍

该试剂盒采用Trizol提取总RNA，得到的总RNA通常不含有siRNA、 snRNA、5.8S rRNA、5S rRNA和tRNAs等200 nt以下的RNA。该试剂盒采用的Trizol具有超强的裂解能力和抽提灵敏度，结合试剂盒采用特殊的吸附膜，大大增强了RNA 的得率。得到的RNA纯度好，完整性高。该试剂盒适用于各种细胞或组织中的RNA的抽提，提取的总RNA没有DNA和蛋白污染，可用于Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：

1. 适用范围广。

2. 操作简单快速，整个过程20分钟左右完成。

3. 纯度高，污染少。

试剂准备

1. 自备试剂：无水乙醇、氯仿等。

2. 按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将

瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。若RPE Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。

3. 去酶处理：RNase是导致RNA降解最主要的物质，非常稳定。在一些极端的条件可暂时失活，限制因素去除后又迅速

复性。常规的酸、碱以及加热方法不能使RNase完全失活。RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，因此制备RNA时必须经常更换手套，同时戴上一次性口罩和卫生帽，并保证环境清洁。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等可以使用生工生产的固相RNase清除剂去除RNase（RT4201），对于实验溶液试剂的处理可以使用生工生产的液相RNase清除剂（RT4202）。

4. 样品保存：匀浆后，加氯仿前，样品可在-70°C放置一个月以上；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20°C保存2个星期

以上；如果需要长期保存，请于超低温冰箱中保存。

样品准备

1. 植物组织或真菌：取新鲜样品在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在Trizol中研磨。约50 mg样品使用0.5 ml Trizol。

?研磨要迅速，最好不要超过1分钟。

?对于丝状真菌也按照50 mg/0.5 ml Trizol进行上述处理。

2. 动物组织：取新鲜或-70°C冻存组织，每15~25 mg 组织加入0.5 ml Trizol，用匀浆器匀浆处理。

?样品体积一般不要超过Trizol 体积的10%。

3. 单层培养细胞的收集：可直接在培养容器中裂解（培养面积不超过0.5×10 cm2，细胞不超过1×107），或者使用胰蛋白

酶处理后离心收集细胞沉淀。

a. A. 直接裂解法：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每0.5×10 cm2面积加0.5 ml Trizol。用移液器吹打混匀。

? Trizol加量根据培养板面积决定，而不是由细胞数决定，如果加入的量不够，将导致提取的RNA中有基因组DNA污染。

b. B. 胰蛋白酶处理法：收集细胞并大致确定细胞数量，用PBS洗涤细胞后，向细胞中加入含有0.1~0.25%胰蛋白酶的

PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5,000 rpm 离心5 min，收集细胞沉淀，去除上清。每0.5×10 cm2面积加0.5 ml Trizol。用移液器吹打混匀。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA得率。

4. 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-107动物、植物和酵母细胞或每5×107细菌细胞加入0.5 ml Trizol。

?加入Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

?对于难以裂解的酵母和革兰氏阳性菌需要液氮研磨或匀浆器匀浆。

5. 血液处理：取0.25 ml新鲜或冻溶的血液，12,000 rpm 离心5 min，去除血浆，加入0.5 ml Trizol，充分振荡混匀。

标准抽提步骤

1. 将裂解后样品或匀浆液室温放置5-10 min，使得核蛋白与核酸完全分离。

?样品中如含有较多的蛋白质、多糖、脂肪或其他细胞外基质，可以12,000 rpm 离心10分钟，移去漂浮的油脂，取上清。

2. 加入0.2 ml 氯仿，剧烈振荡30 sec，室温放置3 min。12,000 rpm 4°C离心10 min。

?如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟。

?样品会分成三层：上层水相，中间层和下层有机相。RNA 在上层水相中。

3. 吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入1/2倍体积无水乙醇，混匀。

?不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染。

?加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取和应用。

4. 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中，静置2 min，12,000 rpm离心3 min，

倒掉收集管中废液。

5. 将吸附柱放回收集管中，加入500 μl RPE Solution，静置2 min，10,000 rpm 离心30 sec，倒掉收集管中废液。

? RPE

Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。

6. 重复步骤5一次。

7. 将吸附柱放回收集管中，10,000 rpm 离心2 min。

?此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。

8. 将吸附柱放入干净的1.5 ml离心管中，在吸附膜中央加入30 μl DEPC-treated ddH2O，静置5 min，12,000 rpm 离心2

min，将所得到的RNA溶液置于-70°C保存或用于后续试验。

? RNA在-70°C保存，以防降解。

?若想提高RNA得率，可重复步骤8一次。

?请勿使用小于30 μl的洗脱液进行洗脱。

microRNA快速提取试剂盒

◆RNAmisi microRNA快速提取试剂盒◆目录号1105 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外

RNAmisi microRNA快速提取试剂盒 目录号：1105 目录编号包装单位 110501 50次 适用范围： 适用于快速提取各种细胞组织miRNA和其它各种小RNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次 Lysis/Binding buffer 4°C避光50 ml 70%乙醇室温9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Wash Solution 1 室温12 ml 第一次使用前加入28ml无水乙醇 Wash Solution 2/3 室温10 ml 第一次使用前加入42ml无水乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 吸附柱RA和收集管室温50套 microRNA吸附柱MA 和收集管 室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响使用效果。

储存事项 1.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后，可以在常温保存一个月， 如果要更长时间保存，请存放在4°C，但是使用前，应该先回复到室温。 2.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接 不吸晶体，吸上清使用就可以。 3.运输在常温下进行，不影响使用效果。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及 时盖紧盖子。 产品介绍： 近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除，最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

总RNA提取试剂盒使用说明

总RNA提取试剂盒使用说明 货号：R1200 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤： 1.样品处理： a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm 离心2min，弃废液。 7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。 8.向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。 9.12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 10.将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得 到RNA。 注意事项： 1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

RNA试剂盒提取步骤

常规植物样品总RNA小量抽提 1. 植物样品的研磨。 ?收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。 注：研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。 ?快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。 注：在加入裂解液之前，不要让样品解冻。初次使用时，推荐先使用50mg，待取得理想结果后， 再酌情提高用量。 2. 立即加入500μlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60 秒 充分打散样品，室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。 注：使用前分装适量的Buffer RL，每1ml Buffer RL 加入20μl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。 若植物用量增加超过100mg，按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。 3. 室温下，14,000 x g 离心5 分钟。 4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 x g 离心1 分钟。 5. 弃去gDNA 过滤柱。加入0.5倍体积无水乙醇(~250μl)至滤液中。用移液枪吸打3-5次混匀。 6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。转移第5 步的混合液至RNA柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。 7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。(请另外订购DNase On Column Kit 进化 膜上DNase 消化)。 8. 倒弃滤液，把柱子装在收集管中。加入500μl Buffer RW1 至柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。加入600μl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g 离心30-60 秒。 注：在使用Buffer RW2 之前，必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。 10. 倒弃滤液，把柱子重新装回收集管中。加入600μl Buffer RW2(已用乙醇稀释)至柱 子中。10,000×g 离心30-60 秒。 11. 倒弃滤液，把柱子套回空的收集管。10,000 ×g 离心空柱2 分钟甩干柱子。 12. 将柱子转移至新的1.5ml 离心管。加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 13. (可选)再加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 注：HiPure RNA Column 最小的洗脱体积是30μl，小于30μl 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果RNA 产量超过30μg，推荐按第13 步进行第二次洗脱。 14. 弃去柱子，把RNA 保存于-80oC。

细菌总RNA提取说明-生工

细菌总RNA快速抽提试剂盒 产品编号：SK8625/SK8626 包装规格：50次/100次 试剂盒组成 组分 SK8625，50次 SK8626，100次 Buffer Rlysis-B 50 ml 100 ml DEPC-treated ddH2O 30 ml 60 ml 操作手册1份1份 保存方法及注意事项 试剂盒于常温运输，4°C保存。有效期见包装。 产品介绍 本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种细菌总RNA快速抽提试剂盒。因为细菌RNA半衰期很短，RNA很容易发生降解。针对这一难题，本试剂盒采用溶菌酶与裂解液Buffer Rlysis-B共同作用，快速裂解样品，再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤，可获得浓度高、完整性好的RNA。适合于从各种来源的细菌（革兰氏阳性或阴性菌等）培养液中快速提取RNA。 使用本试剂盒，从1 ml对数生长期的细菌菌液中提取5~15 μg总RNA，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。 本产品具有以下特点： 1. 操作简单，全过程可在40分钟内完成。 2. 完整性好，纯化的RNA几乎不会发生降解。 3. 纯度高，OD260/280一般为2.0。 试剂准备 自备试剂：无水乙醇、75%乙醇、溶菌酶、氯仿等。 标准抽提步骤 4. 取1 ml对数生长期的细菌，8,000 rpm 4°C离心1 min，彻底弃掉培养基，加100 μl溶菌酶，振荡混匀。（G-菌使用的溶 菌酶浓度为400 μg/ml，室温酶解3~5分钟；G+菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml，室温酶解5~10分钟。） ?收集菌体后可用500 μl DEPC-treated ddH2O漂洗一次，10,000 rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。 5. 立即加入900 μl Buffer Rlysis-B震荡混匀，室温放置3 min。 6. 向裂解样品中加入200 μl 氯仿，充分混匀。12,000 rpm 4°C离心5 min，取上清。 7. 向上清液中加入1/3 体积无水乙醇，混匀，室温放置3 min，12,000 rpm 4°C离心5 min，小心倒掉上清。 ?离心后，在离心管底部，可能无肉眼可见的沉淀产生，属正常现象，请继续以下操作。 8. 用700 μl的75%乙醇（请用DEPC-treated ddH2O配制）洗涤沉淀，12,000 rpm 4°C离心3 min, 小心倒掉上清。 9. 重复步骤5一次。 10. 室温倒置10 min，尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入30-50 μl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀，立即使用或 -70°C长期保存。 ?如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5~10分钟至残留的乙

TransZol法rna提取试剂盒说明

TransZol法RNA提取步骤 准备试剂：氯仿、无水乙醇。 1.菌体处理 (1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中，用纯水冲洗菌体，12000rpm离心2min，仔细去除培养基上清。 (2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。 (3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。 (4)室温静置5min。 2. 每使用1ml TransZol TM Up，加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚)，剧烈震荡30s，室温孵育3min。 3. 10000×g 4℃离心15min。此时溶液分成三层，无色的水相（上层）、中间层，粉红色有机相（下层）。RNA分布在水相中，水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%（为了避免吸到中间层导致DNA污染，可以适当留下一部分水相）。 4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中，加入等体积的无水乙醇（此时可能会出现沉淀），轻轻颠倒混匀。 5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液（如果体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。 6. 加入500ul CB9，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。 7. 重复步骤6一次。 8. 加入500ul WB9（使用前请先检查是否加入无水乙醇），12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。 9. 重复步骤8一次。 10．12,000×g 室温离心2min，彻底去除残留的乙醇，在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。 11.将离心柱放入RNase-free Tube（试剂盒已配）中，加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央，室温静置1min。 12. 12,000×g 室温离心1min，洗脱RNA。 （可选步骤：为获得更多的RNA，建议重复步骤11和12进行二次洗脱）。

OMEGArna提取试剂盒中文说明

E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤 A ． 真核细胞和组织 自己需要的材料： β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。 材料的最佳量 想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug 的RNA 。TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。 细胞的步骤 1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用 枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。 a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。 b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器 里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。 c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK 裂解液，漩涡振荡混匀。 2． 匀浆化裂解产物 “裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。 a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。 b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除 RNase 。 3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min, 室温。将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。转到总RNA 分离中第4步。 组织的步骤： 1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg ），使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入 20ul 的β－巯基乙醇。 500ulTRK 裂解液最大裂解能力30mg ，难破碎的组织大于20mg 就用700ul 的TRK 裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg 。 组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮， 2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。 3． 转移上清至，Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收 集的流出液转移到新的EP 管中。 总RNA 分离： 4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul －350ul ）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振 荡20s 。 5． 样品转移到Hibind RNA Mini column 上，离心管的最大容量为750ul ，加完乙醇后可能 会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,1min 。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。 生物秀-专心做生物 w w w .b b i o o .c o m

总RNA提取试剂盒说明书

总RNA提取试剂盒说明书 货号：R1200 规格：50T/100T 产品内容： 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年 RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年 RNase free吸附柱50个100个RT一年 RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤： 1.样品处理： a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。 e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废

EASYspin Plus 骨组织RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

EASYspin Plus Bone Tissue RNA Kit EASYspin Plus骨组织RNA快速提取试剂盒 目录号：RN54 适用范围： 适用于快速提取骨组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次(RN5401) 裂解液CLB 室温50 ml PLANTaid 室温 5 ml 裂解液RLT Plus 室温25 ml 去蛋白液RW1 室温40 ml 漂洗液RW 室温10 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 基因组DNA清除柱 和收集管室温 50套 RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项： 1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项 1.所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm

的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2.需要自备乙醇，研钵或者其它合适的破碎骨组织装置。 3.样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造 成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 4.裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手 套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 5.关于DNA 的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 1)选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与 扩增反应。 2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后 的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。 4)在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购 买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： ?第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! ?取1ml裂解液CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入100μl PLANTaid，颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。 1.液氮研磨法: a. 骨钳夹碎骨组织后放入研钵（研钵在180度干烤2小时），加入液氮后反复研 磨成细粉，注意液氮蒸发后不断补加保存液氮一直存在。

(整理)EASYspin Plus大量组织细胞RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

EASYspin Plus大量组织/细胞RNA快速提取试剂盒 目录号：RN41 目录编号包装单位 RN4101 10次 适用范围： 适用于快速提取动物细胞和易裂解动物组织总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，不需要使用DNase消化，RNA可直接用于PCR，荧光定量PCR.。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存10次 裂解液RLT Plus 室温100 ml 去蛋白液RW1 室温120 ml 漂洗液RW 室温25 ml X 2 第一次使用前按说明加指定量乙醇 70%乙醇室温15ml X 2 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 基因组DNA清除柱 和收集管 室温10套RNase-free 吸附柱RA和收集管室温 10套本试剂盒在室温储存6个月不影响使用效果。

储存事项： 1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接 使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输 和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。 3. 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖 紧盖子。 注意事项 1.所有的离心步骤均可在室温完成，使用可容纳50ml 离心管的离心机。 2. 3.样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造 成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过100mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过6x107细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过6x107，组织不超过200mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 4. 5.

Trizol总RNA抽提试剂盒

Trizol使用说明书 一、分离纯化的基本原理 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。二、用户需自备的试剂和材料 无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free） 三、准备工作 RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。 1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。 2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3）在通风柜中室温处理过夜。 4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。 5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。 2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。 四、从组织中提取总RNA 1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少 量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

RNA提取试剂盒步骤

1．取25mg的斑马鱼肌肉组织，加入GTC Lysis Buffer 700ul, 在匀浆器中充分均质。注意：GTC Lysis Buffer 在使用前一定要加入2-巯基乙醇（每1ml GTC Lysis Buffer 加20ul 2-巯基乙醇）。 2．转移到1.5ml的离心管中，13000g离心5分钟，小心吸取上清液至HiBind DNA 吸附柱中，再将吸附柱放于2ml的收集管里。注意切勿吸到脂肪层。 3．在≧13000g的速度下离心1分钟，将DNA吸附柱取出，稍后用作DNA的提取。注意：离心后确保所有的液体流过吸附柱，可以重复离心。 4．加等体积的70%的乙醇至收集管中，此时会产生沉淀，用枪反复吹打彻底混匀。如果在均质的过程中，样品有所损失，可适当调整乙醇的加入量，使乙醇和样品量尽可能相等。5．将收集管中的样品加入HiBind RNA吸附柱中，吸附柱的最大体积是800ul，≧800ul时可分次加入。室温下在速度≧10000g时离心1分钟。弃去滤过液，再将吸附柱放入收集管中。 6．加500ul RNA漂洗液Ⅰ至HiBind RNA 吸附柱中，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。 7．加500ul RNA漂洗液Ⅱ至吸附柱中，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液和收集管。8．将吸附柱放入一个新的收集管中，加入500ul的RNA漂洗液Ⅱ至吸附柱中，≧10000g 离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。 9．≧13000g离心2分钟，彻底干燥吸附柱，弃去收集管。 10．将吸附柱放入一个新的1.5ml的离心管中，在吸附柱中加入40-70ul的DEPC处理的无菌水，10000g离心1分钟洗脱RNA。如果RNA的量大于30ug，可再用DEPC处理的水进行洗脱。 11．将DNA吸附柱放入一个新的2ml的收集管中，在吸附柱中加入500ulHB Buffer，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。 12．在吸附柱中加入700ul的DNA漂洗液，10000g离心30秒。弃去滤过液，加戏附中重新放入收集管中。 13．打开吸附柱的盖，13000g离心2分钟彻底干燥吸附柱。 14．将吸附柱放入一个新的1.5ml的离心管中，在吸附柱中加入50-100ul的洗脱液，盖上盖13000g离心2分钟洗脱DNA。

OMEGA Total RNA 提取试剂盒R6834说明书

E.Z.N.A.? Total RNA Kit I Table of Contents Introduction (2) Illustrated Protocol (3) Kit Contents/Storage and Stability (4) Preparing Reagents (5) Recommended Settings (6) Quantification of RNA (7) Disruption and Homogenization (8) Animal Cell Protocol (10) Animal Tissue Protocol (13) Spin/Vacuum Manifold Protocol (16) DNase Digestion Protocol (18) Troubleshooting Guide (20) Ordering (22) Manual Revision: October 2009 Innovations in nucleic acid isolation 1

Introduction The E.Z.N.A.? RNA family of products is an innovative system that radically simplifies the extraction and purification of RNA from a variety of sources. The key to this system is that it uses the reversible binding properties of the HiBind Matrix in combination with the speed of mini-column spin technology thereby permitting single or multiple simultaneous processing of samples. There is no need for phenol/chloroform extractions and time-consuming steps such as CsCl gradient ultracentrifugation, or precipitation with isopropanol or LiCl are eliminated. RNA purified using the E.Z.N.A.? RNA Purification System is ready for applications such as RT-PCR, Northern blotting, poly A+ RNA (mRNA) purification, nuclease protection, and in vitro translation. The E.Z.N.A.? Total RNA Kit I can purify up to 100 μg of total RNA from cultured eukaryotic cells or tissue. Normally, 1 x 106 - 1 x 107 eukaryotic cells, or 5-30 mg of tissue, can be processed in a single experiment. Fresh, frozen or RNALater? stabilized tissues can be used. Lysis of cells or tissue occurs under denaturing conditions which inactivate RNases. After the homogenization process, samples are applied to the HiBind RNA spin column to which total RNA binds. Cellular debris and other contaminants are effectively washed away after a few quick wash steps. High quality RNA is finally eluted in DEPC treated water. Total RNA greater than 200 nt is isolated using this kit. For isolating total RNA below 200 nt use the miRNA isolation Kit (R7034). For isolating total RNA from gram positive bacteria, the recommended kit is the Bacterial RNA Kit(R6950). While this kit may be used for the isolation of RNA from whole blood, we recommend that you use the E.Z.N.A.? Blood RNA Kit (Product # R6814) as it is specifically designed for effective hemolysis and hemoglobin removal, thereby giving higher RNA yields. Binding Capacity Each HiBind RNA Mini column can bind approximately 100μg of RNA. Using greater than 30 mg of tissue or 1 x 107 cells is not recommended. 2

QIAGEN试剂盒提取RNA说明书中文翻译

1:细菌的溶菌酶破碎 2:细菌的溶菌酶破碎和机械破碎 3:细菌的机械破碎 4:细菌的溶菌酶裂解和蛋白酶K的消化 5:细菌的溶菌酶裂解、蛋白酶K的消化及机械破碎 6:固体培养基细菌的裂解 7:使用RNeasy Mini Kit从细菌溶解物中提纯总RNA。 8:使用RNeasy Midi Kit从细菌溶解物中提纯总RNA。 章节说明 该手册含有两种不同类型方案。我们提供了多种方案，其中方案1-6是针对制备细菌溶解物，方案7-8是针对如何从细菌溶解物中提取全RNA。你需要在方案1-6中选择一种操作，而后在方案7-8中任选其一。 制备细菌溶解物的各个方案都介绍了破碎细菌时如何固定RNA。如何选择不同的实验方案由细菌细胞壁的稳定性所决定。细菌细胞壁的稳定性受多个因素影响，包括细菌种类、生长阶段和培养基的成分。细菌必须完全破碎以确保RNA的有效提取。 制备细菌溶解物的各个方案都包含了不止一步。 ■酶消化：细菌细胞壁可以被溶菌酶进行消化（例如溶菌酶、溶葡球菌酶）。我们认为溶菌酶的作用对于所有的革兰氏阳性、阴性细菌均是有效的。 ■蛋白酶K消化：在复杂培养基上生长的细菌大部分蛋白质可以被蛋白酶K消化以提高RNA 的纯化率。我们认为蛋白酶K对于可在复合培养基中生长的细菌均是有效的。蛋白酶K常常用于提高革兰氏阳性细菌RNA。另外，若从大量原材料中提取RNA，蛋白酶K可以有效提高RNA产率。 ■机械破碎：细菌细胞壁的机械破碎可以使用组织研磨机和玻璃微珠。机械破碎法对于绝大多数的细菌来说都是适用的。机械破碎法与酶消化法相结合可以极大程度的提高RNA产率。尽管本手册中的机械破碎方案均为使用组织研磨机，但采用其他的破碎方法是完全可行的。考虑到细菌种类的多样性以及培养条件的多样性，细菌溶解物的制备方案（方案1-6）必须谨慎选择。在第10页中介绍了制备细菌溶解物的不同方案，第11页（表格一）则提供了这些方案概况以便于参考选择。 方案一：细菌的酶消化 该方案仅涉及到酶消化。我们建议该方案适用对象为生长在基本培养基的为短世代的革

RNA提取trizol试剂盒说明书

注：各种样品的最大使用量（1ml Trizol） 操作步骤： 1. 在液氮中将组织(单头飞虱)研磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，将粉末转移到1.5ml离心管中。细胞经计数后直接加入离心管，然后5000rpm室温离心去上清。每100mg组织或5×106个细胞加1ml的Trizol。注意：如果组织量（1-10mg）或细胞数很少（1×102-1×104），在样品中加入800μl的Trizol，用枪头反复抽吸混匀，再加入糖原（终浓度为250μg/ml），剧烈振荡或用匀浆器匀浆。 2. 用1ml针筒，26-G号（6#）针头抽吸匀浆液两次以剪切基因组DNA，然后直接从针筒中将样品转移到无菌1.5-ml离心管中。 3. 加入200μl氯仿/异戊醇（24:1）或氯仿，剧烈振荡混匀30秒。 4. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。 5. 将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml 离心管中，加入等体积的异丙醇，室温下放置5分钟。（注意：不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染） 6. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。 7．小心移去上清液，防止RNA沉淀丢失。 8. 用70%酒精洗涤两次，每次700μl，12000rpm，室温离心2分钟。 9. 尽可能彻底地吸走上清，防止RNA沉淀丢失。 10. 真空离心干燥3-5分钟，或放在室温下使酒精完全挥发。 11. 沉淀用30-50μl DEPC-H2O溶解。如发现沉淀难溶，68℃处理10分钟。对于胰腺，肾等组织中RNase含量很高，沉淀用100%去离子甲酰胺溶解。12．DNA的分析和定量： （1）测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。按1 OD=40μg RNA计算RNAD的产率：OD260/280在1.8-2.0视为抽提的RNA纯度很高。若需精确量化，只有浓度在4μg/ml以上的样品适于用光度计测定。 （2）进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。 注意：很少量的样品中加入糖原以提高RNA的产率。糖原（＜4μg/ml）的存在，不影响cDNA第一链的合成，也不影响PCR。

血液(液体样本)总RNA提取试剂盒探讨

使用说明 ◆RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒 ◆目录号1123 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外

RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒 目录号：1123 目录编号包装单位 112301 20次 112302 50次 适用范围： 适用于快速提取全血（液体样本）高纯度总RNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存20次50次裂解液RLS 4℃避光25 ml 50 ml 去蛋白液RE 室温15 ml 25 ml 漂洗液RW 室温5 ml 10 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 10 ml 70%乙醇室温4ml RNase-free H2O 9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free吸附柱RA 室温20个50个收集管（2ml）室温20个50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项： 1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直 接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。 2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此 运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。裂解液RLS可以常温运输，收到后4℃避光保存。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及 时盖紧盖子。 产品介绍： 改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不 需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。 3.独有的RLS裂解液配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除红细胞。 4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。 5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

Axygen-RNA提取试剂盒

AxyPrep总RNA小量制备试剂盒 本试剂盒用于从各种动物组织、植物组织、细胞、细菌、酵母和丝状真菌中提取总RNA。提取的总RNA分子完整、纯度高，适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、S1核酸酶作图、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。 一、试剂盒组成、贮存、稳定性 Cat. No. AP-MN-MS-RNA-4AP-MN-MS-RNA-50AP-MN-MS-RNA-250 Kit size 4 preps 50 preps 250 preps Spin/vac mini column450250 2 ml Microfuge tube 4 50 250 1.5 ml Microfuge tube 8 100 500 Buffer R-Ⅰ 3 ml 25 ml 125 ml Buffer R-Ⅱ 1 ml 10 ml 50 ml Buffer W1A concentrate 2.4 ml 24 ml 120 ml Buffer W2concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 ml Buffer TE 1 ml 6 ml 30 ml Protocol manual 1 1 1 Spin/vac mini column：小量制备管。 Buffer R-Ⅰ：细胞裂解液。室温密闭贮存。 Buffer R-Ⅱ：中和液。室温密闭贮存。 Buffer W1A concentrate：洗涤液。使用前，根据瓶上指定的体积加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用无水乙醇或95%乙醇。 Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上指定的体积加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用无水乙醇或95%乙醇。 Buffer TE ：洗脱液。10 mM Tris-HCl，0.1 mM EDTA，pH 7.5。室温密闭贮存。 二、注意事项 Buffer R-Ⅰ和Buffer W1A 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。 三、实验准备 1. 第一次使用时，在Buffer W1A concentrate 和Buffer W2 concentrate中按试剂瓶上指定体积加入 无水乙醇或95%乙醇。 2. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管，以避免提取过程中RNA 被RNase降解。