柱状田头菇凝集素的分离纯化及其部分性质

微生物菌种的分离和纯化方法

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 1、用固体培养基分离和纯化 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。1.1 稀释倒平板法 首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 1.2 涂布平板法 因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，

银杏叶提取黄酮及分离纯化

银杏叶提取黄酮及分离纯化 组员：李佳辉、黄埔、赵超武 一、实验目的 1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取 2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置 3.学会自主设计实验，培养团队合作精神 二、实验原理 ⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用； ⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm; ⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因 为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。 其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。先用亚硝酸钠还原黄酮类化

合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）

目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。 其工艺流程如下： 银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物 由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。 三．实验材料及器材 1.材料 酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸

补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识 一．目的要求 1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。 2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。 3．掌握香豆素类化合物的检识方法。 二．实验原理 补骨脂 为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯 （补骨脂素）、异补骨脂内酯 （异补骨脂素）和补骨脂次素等。其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。 1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C 11H 6O 3，分子量186.16。 无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。 2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C 11H 6O 3，分子量186.16。无色针状结 晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。 O O O O O O 补骨脂素 异补骨脂 三．实验内容 1.提取 称取补骨脂粗粉200g ，放入1000ml 烧瓶中，加入50％乙醇500ml ，热回流1h, 过滤，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加80ml 甲醇溶解，加少许活性炭，回流l0min ，趁热抽滤，滤液回收甲醇至小体积，放置析晶 2.精制 将上述粗品加适量甲醇(3：100的比例)溶解，加少许活性炭，回流l0min ，

趁热抽滤，滤液放冷析晶，滤取结晶，少量甲醇淋洗，80oC以下干燥即得补骨脂素精品③。 3.补骨脂素和异补骨脂素的分离 取色谱用中性氧化铝40g，装于直径1.6cm*30cm的色谱柱中。取补骨脂素精品甲醇液约1-2ml，加样，以石油醚-乙酸乙酯（1：2）作洗脱剂，洗脱，每20ml 为一溜份，各溜份回收溶剂后，用薄层板检查，和标准品对比，于紫外光灯下观察荧光与颜色。 4.鉴定 1．呈色反应 (1)异羟肟酸铁反应取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入7％盐酸羟胺甲醇溶液2滴～3滴，再加10％氢氧化钾甲醇溶液2滴～3滴，于水浴上加热数分钟，冷却，用盐酸调至pH3～4，加1％三氯化铁试液1滴～2滴，观察溶液颜色。 (2)开环闭环试验取样品少许加稀氢氧化钠溶液1m1—2m1，加热，观察现象；再加稀盐酸试液几滴，观察所产生现象。 (3)荧光取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外光灯下观察荧光与颜色。 2．薄层色谱鉴定 薄层板：硅胶G—CMC-Na板。 点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。 展开剂：石油醚一乙酸乙酯(2：3)。 展开方式：上行展开。 显色：在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。 四．实验说明及注意事项 1．提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成分含量较高。 2．采用75%乙醇提取的产率较高，但因补骨脂中大量脂溶性物质被溶解，使提取液浓缩后过于粘稠，过滤较困难，增加实验难度，杂质多而沉淀外观差。采用50%乙醇提取，产率略低，但其它二方面较佳，特别是实验难度低，在生产上有较大优势，因此采用50%乙醇提取优于用75%乙醇。 3.补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构，具有内酯类成分的通性，可用碱提酸沉取，但因补骨脂种子中含有大量油脂和糖类成分，易与碱水发生皂化反应和形成胶状物，致使难以滤过，降低收得率，故选用50％乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取。 参考文献： 1张红莲,王雅楠,王建华.补骨脂的化学成分及药理活性研究概况[A]. 天然产 物研究与开发，2010，22：909-913, 918 2.罗志冬,郭晏华.补骨脂有效成分提取工艺的考察[A].中国新药杂志，2007，16(9)：705-708 3.陈业高,于丽丽,黄荣.补骨脂化学成分的分离与鉴定[A].云南化工，2005， 32(2)：3-5.

细菌素的研究及其在食品工业上的应用

细菌素的研究及其在食品工业上的应用 摘要：细菌素是一类具抑菌活性的蛋白质，可以抑制许多革兰氏阳性菌。本文概述了细菌的分类、与抗生素的区别、细菌素合成、其抗菌机制以及在食品工业中的应用。 关键词：细菌素；食品防腐剂；分类；合成；抑菌机制；应用 Research on bacteriocins and its Application in Food LIU Wen-duo (Zhongkai University of Agriculture and Engineering College of light industry and food science, Guangdong Guangzhou 510225) Abstract: Bacteriocins are antibacterial produced by bacteria that can kill or inhibit the growth of some ba cteria.This article gave an overview of the classification,difference with antibiotics,synthesis mechanisms and antibacterial mechanisms,and its application in the food industry has done a classification description. Finally,through the analysis of the current situation this paper also discussed the future development of bacteriocins. Key words: bacteriocin;food preservative;classification;synthesis;antibacterial mechanism;application 细菌素（bacteriocin）是由某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抗菌活性的多肽、蛋白质或蛋白质复合物，其抑菌范围不局限于同源菌，产生菌及其细菌素有自身免疫性。其中有些作为发酵菌种的细菌素对动物无毒副作用，无抗原性。其抑菌范围广，可以杀死或抑制食品中的一些腐烂菌和病原菌，并有一定的热稳定性，延长了食品的保质期，同时不破坏食品的风味和组织状态[1]。 细菌素最早是在20世纪中期Gratia（1946）对大肠杆菌V菌株抑制Φ菌株现象进行研究时发现的。以后Gratia和Fredericq对大肠杆菌V菌株产生的这种抑制物质进行了分离，并称为大肠杆菌素。以由于很多细菌都可以产生类似物质，Jacob（1953）将这类物质称为细菌素[2]。细菌素具有无毒、热稳定性强、水溶性好、抗菌性强、不影响食品风味等优点。细菌素用作食品保存和医疗工程具有巨大潜力，因为它们可以补充或取代目前使用的抗生素[3]。细菌素在分子遗传、基因工程、蛋白质工程、食品添加剂和微生态制剂等方面有很好的应用前景，尤其在食品工业中越来越受到重视并且陆续被许多国家所接受。 1 细菌素的化学成分 细菌素是一种成分非常复杂的物质。其化学成分复杂多样，但它们都有一个相同的构件，一种必需的蛋白质。确定细菌素分子化学组成的常用方法是用特定的酶做敏感性试验是。检测出的streptocin STH1被认为是一种由必需蛋白、脂质和磷酸基团组成的复杂分子[4]。化学分析表明，许多细菌素可能就是简单的蛋白质。但是很多其他的细菌（葡萄球菌，梭菌和乳酸菌）的细菌素，在纯化状态下，它们是十分复杂的分子，除了蛋白质外还包括一些脂质和糖类等。丁酸梭菌素和产气荚膜梭菌素表现出两亲性蛋白，已经有报道说明它们的疏水基团能够促进它们与靶细胞膜的接触[5]。 2 细菌素的分类[6] 细菌素按其化学结构和热稳定性可分为3大类：第一类（classⅠ）定义为羊毛硫抗生素（lantibiotics）。这类细菌素分子量小于5 ku，属于多肽分子，具有19～50多个氨基酸不等，

水蛭素开发利用与专利技术大全

水蛭素开发利用与专利技术大全 【册数】: 16开精装全一卷（附光盘） 【日期】: 2010年12 【作者】: 国家专利局组织编写 【出版社】: 中国知识出版社 【定价】: 580 【现价】: 380 详细目录介绍 1 CN01141415.4 高效表达重组水蛭素及其生产方法 2 CN03113566.8 菲牛蛭的养殖方法及水蛭素的提取技术 3 CN01121593.3 水蛭素口服缓(控)释剂型 4 CN01133773.7 重组水蛭素口服肠溶缓释制剂 5 CN94194897.8 水蛭素与亲脂化合物的水蛭素结合物 6 CN96101995.6 用水蛭素和乙酰水杨酸治疗未溶栓的急性心肌梗塞病人的方法 7 CN91101687.2 含水蛭素衍生物的分泌物 8 CN91103025.5 水蛭素的重组体制备方法 9 CN92114142.4 具有改善稳定性的新的合成的异水蛭素 10 CN92107076.4 医用天然水蛭素的提取方法

11 CN92111829.5 重组水蛭素及其复合物用于制备预防和治疗血栓病药物 12 CN94190578.0 高分子量的脱硫水蛭素 13 CN95117701.X 用亲合色谱法提纯水蛭素的方法 14 CN96193457.3 基于水蛭素氨基酸序列的凝血酶抑制剂 15 CN97114426.5 水蛭素 16 CN01113526.3 新型分泌表达载体及其在重组水蛭素表达技术中的应用 17 CN01105798.X 一种新型双功能水蛭素及其制备方法和应用 18 CN00129747.3 水蛭素基因hv2－47k及其合成与表达 19 CN00812955.X 用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu－水蛭素的信号序列 20 CN01107807.3 用酵母分泌表达重组水蛭素 21 CN03132224.7 重组水蛭素的新用途 22 CN03109244.6 水蛭素突变体的一种编码基因与高效表达菌株 23 CN03125104.8 酶性止血剂拮抗水蛭素出血作用的用途 24 CN200410034671.6 用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu-水蛭素的信号序列 25 CN200410037695.7 一种水蛭素冻干粉针制剂及其制备方法

微生物菌种的分离和纯化方法

在从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。 不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特分子生物学的研究及应用中，防止其他微生物的混入。定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”， 、用固体培养基分离和纯化1 有繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、便成称为菌落。一定形态结构的子细胞生长群体，当固体培养基表面众多菌落连成一片时，可以成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，以及许多真菌和单细胞藻鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、为对该微生物进行分类、所谓平板，类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。固体培养基用琼脂或其它凝这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。建立的采用Kock最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100 稀释倒平板法1.1 ），然后分别取不、1:100001:1000首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培同稀释液少许，与已熔化并冷却至如果养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。这个菌落可能就是由一个在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，稀释得当，细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。涂布平板法1.2 且采用稀释因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，因此在微生物倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，再用无菌玻璃涂棒将将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，制成无菌平板，冷却凝固后，）。菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落（图1供参 考． 涂布平板法1 图平板划线法1.3 最简单的分离微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，），微

补骨脂素的提取分离和鉴定

补骨脂素的提取分离与鉴定 三．实验内容 1．称取补骨脂粗粉50g，放入500ml烧瓶中，加入50％乙醇200ml，热回流1h, 过滤，回收乙醇至无醇味，抽滤，得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加80ml甲醇溶解，加少许活性炭，回流 l0min，趁热抽滤，滤液回收甲醇，浓缩至小体积，放置析晶，抽滤，80oC干燥即得补骨脂素粗品，称重，计算提取率。 2精制 将上述粗品加适量甲醇(3：100的比例)溶解，加少许活性炭，回流l0min，趁热抽滤，滤液放冷析晶，滤取结晶，少量甲醇淋洗，80oC以下干燥即得补骨脂素精品③。 3补骨脂素和异补骨脂素的分离 4鉴定 (1)异羟肟酸铁反应取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入7％盐酸羟胺甲醇溶 液2滴～3滴，再加10％氢氧化钾甲醇溶液2滴～3滴，于水浴上加热数 分钟，冷却，用盐酸调至pH3～4，加1％三氯化铁试液1滴～2滴，观察 溶液颜色。（现象为30s 后出现红色（阳性反应））

(2)开环闭环试验取试样少许加稀氢氧化钠溶液1～2ml，加热，观察现象，再加 稀盐酸试剂数滴，观察所产生现象。 (3)荧光取试样少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，晾干后在紫外灯下观察 荧光。 (4)薄层色谱鉴定 薄层板：硅胶G—CMC-Na板。 点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇 液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。 展开剂：石油醚一乙酸乙酯(6：1)。 展开方式：上行展开。 显色：在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。 观察记录：记录图谱，计算Rf值。 附注：①原料最好用未炮制过的补骨脂种子，其中补骨脂素和异补骨脂素含量较高。 ②补骨脂含大量油脂，据文献报道，用50％乙醇或40％丙酮提取，方法简便,得率高，亲脂性杂质少，乙醇又较丙酮便宜，故选用50％乙醇提取。利用香豆素内酯类的特点，用碱提酸沉法，由于补骨脂中含大量油脂和糖类成分，易发生皂化反应和形成胶状物，难以过滤，得率低。 ③从补骨脂中提取得到的白色针状物，为补骨脂素和异补骨脂素的混合物。

最新土壤中放线菌的分离与纯化

土壤中放线菌的分离与纯化 实验目的 1掌握放线菌的生长特性，微生物的培养方法。 2掌握微生物实验的基本生物技术，主要包括无菌操作技术，纯种分离技术，纯种培养技术，以及抗生素检测等。 3掌握合成培养基，选择培养基的制备方法。 4学习对微生物实验的中出现问题的分析，解决方法 实验材料 药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4?3H2O、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、琼脂、重铬酸钾 其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。 实验原理 放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。分离放线菌常用稀释倒

平板法。根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。 放线菌可以产生抗生素，抑制其他菌种的生长，故可用金黄色葡萄球菌（G+）和大肠杆菌（G-）作指示菌鉴别放线菌。 高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4?3H2O 、MgSO4?7H2O 作为无机盐，FeSO4?7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成 1.高氏一号合成培养基的制备 K2HPO4 ?3H2O 0.125g，可溶性淀粉5g，硝酸钾0.25, MgSO4? 7H2O0.125g， FeSO4?7H2O 0.025g，氯化钠0.125g，琼脂5g，水250ml。 配制时，先依次加入上述药品（除琼脂外）顺序溶解，加入无菌水至250ml，调节pH＝7.4，再加入琼脂不断搅拌震荡至溶化后，121℃灭菌20分钟。 将6套平皿、12只试管灭菌。

实验九.补骨脂素的提取,分离与鉴定

实验九补骨脂素、异补骨脂素的提取、分离和鉴定 补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果实。具有补肾助阳、温中止泻之功。主治肾虚阳痿、遗精遗尿及腰膝冷痛，小便频数；外用治白癫风。补骨脂中含有数种香豆素和黄酮类成分，主要有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)、异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)、补骨脂次素等。药理研究证明，补骨脂甲素有明显扩冠作用，补骨脂素及异补骨脂素是具吸收紫外线性质的光敏性物质，因此是抗白癫风的有效成分，制剂有祛白素，补骨脂注射液、复方补骨脂酊等。 一、补骨脂中主要成分的物理性质 1．补骨脂素(psoralen) : C11H603, 无色针状结晶(乙醇)，mp189oC, ~ 190oC。溶于乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。UVλmax m( lgε ): 242sh (4.38), 247 (4.40), 291 (4.03), 330 (3.80)。IRνmax cm-1 : 1710, 1630, 1575,1259。 2．异补骨脂素(isopsoralen): C11 H603, 无色针状结晶，mp137oC, ~ 138oC。溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿；微溶于水、乙醚，难溶于石油醚。UVλmax m( lgε ): 245 (4.38), 297 (3.96)。IRνmax cm-1 : 1724, 1709, 1613, 1513, 1370, 1330, 1266, 1250, 1055, 999, 833, 747。 3．补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)(bavachin, corylifolin): C20H2004, 无色结晶，mp191oC, ~ 192oC,[α]D为-29.1o（乙醇）。 4. 异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)(isobavachalcone, corylifolinin): C20H20O4,黄色针状结晶，mp154oC, ~ 156oC。 5.补骨脂次素（psoralidin）: mp292oC。 二、目的要求 1. 掌握用溶剂法提取呋喃香豆素类化合物的操作技术。 2. 通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱法的操作技术。 3. 掌握香豆素类化合物的鉴定方法。 三、基本原理 根据内酯类化合物在乙醇中溶解度大，水中溶解度小的性质，利用乙醇，从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素，并用活性炭进行脱色，最后利用两者的极性差异，用氧化铝干柱层析予以分离。 四、操作 (一)提取分离流程 (二)提取 1．超声波振荡提取

乳酸片球菌细菌素的分离纯化及理化性质_李亚玲

乳酸片球菌细菌素的 分离纯化及理化性质 李亚玲1 ,周志江2,＊ ,韩　烨2 ,薛照辉 2 (1.天津大学化工学院,天津300072;2.天津大学农业与生物工程学院,天津300072) 　摘　要:将乳酸片球菌接种于M R S 培养基,37℃静置培养17h 产生 细菌素。根据细菌素在p H 6.0时与菌体的吸附力最强,p H 2.0时吸附力最弱,通过调节p H 和离心来分离纯化细菌素,得率为22.80%,比活为4.526×104 A U /m g ;细菌素的理化性质实验表明,细菌素经120℃处理20m i n 仍保留70.08%的活性;在p H 2～9范围内20℃处理3h 抑菌活性稳定,当p H ≥9时活性逐渐降低;经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K 处理后均无抑菌活性。实验表明,该细菌素耐热、耐酸、耐碱,对蛋白酶敏感,具有开发为安全、天然的食品防腐剂的良好前景。 　关键词:细菌素,分离,纯化,性质 A b s t r a c t :F r e s h c u l t u r e o f P e d i o c o c c u sa c i d i l a c t i c i s t r a i n w a s i n o c u l a t e da t M R S b r o t h a n d c u l t i v a t e d a t 37℃f o r 17h ,t h e b a c t e r i o c i nw a s e x t r a c t e da n dp u r i f i e df r o m t h e c u l t u r et h r o u g ht h ep H m e d i a t e dc e l l a d s o r p t i o n -d e s o r p t i o n m e t h o d .T h e y i e l d o f b a c t e r i o c i n w a s 22.80%a n dt h es p e c i f i ca c t i v i t yw a s 4.526×104 A U /m g .W e f o u n dt h a t t h eb a c t e r i o c i nr e m a i n e d 70.08%a c t i v i t y w h e n h e a t e d a t 121℃f o r 20m i n .I t w a s a l s oa c t i v e a f t e r i n c u b a t i o n i n p H 2～9e n v i r o n m e n t f o r 3h a t 20℃,b u t o n l y p a r t i a l l y a c t i v e a b o v e p H 9.T r e a t m e n t w i t hp e p s i n ,t r y p s i n ,p a p a i n a n d p r o t e i n a s e K f u l l y i n a c t i v a t e d t h e b a c t e r i o c i n .T h e r e s u l t s s h o w t h a t b a c t e r i o c i n p r o d u c e d b y P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i w a s a n a c t i v e p r o t e i n w i t h s t a b i l i t y t o h e a t a n d a c i d ,w h i c h w i l l h a v e a g o o d p o t e n t i a l a p p l i c a t i o n i n f o o d p r e s e r v a t i o n . 　K e y w o r d s :b a c t e r i o c i n ;e x t r a c t ;p u r i f i c a t i o n ;c h a r a c t e r i z a t i o n 　中图分类号:T S 201.2　文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2007)08-0094-04 收稿日期:2007-01-12＊通讯联系人 作者简介:李亚玲(1982—),女,硕士研究生,研究方向:食品安全。基金项目:国家自然科学基金项目(30571378)。 细菌素是由某些细菌通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质,抑制范围为亲 缘关系相近的细菌[1] 。细菌素作为生物食品防腐剂 比化学防腐剂更安全,且天然、无其他副作用。目前 工业化生产的细菌素是N i s i n ,但乳酸片球菌细菌素比N i s i n 的抑菌范围更广[2] ,而且活性受p H 影响小,容易溶解,具有作为食品保藏剂的巨大潜力。分离纯化细菌素的离子交换柱层析和凝胶过滤层析等方法,由于操作步骤较多,收率常常低于20%。最近一种新的纯化方法—p H 依赖的吸附法,即Y a n g [3] 的方法发展起来,它具有步骤少,成本低,回收率高的特点。本实验采用Y a n g 的方法对细菌素进行分离纯化。乳酸菌细菌素的热稳定范围广[4] ,但是大多数细菌素仅在酸性或中性条件下稳定存在,某些细菌素 在p H 8.0以上即失活(如N i s i n ,p e d i o c i n A c H )[5] ,只能在酸性食品中发挥作用。实验发现,该菌株产生的细菌素具有良好的耐热、耐酸碱的性质,从而为生产更为安全有效的生物防腐剂提供了理论依据。 1　材料与方法 1.1　实验材料 乳酸片球菌P e d i o c o c c u s a c i d i l a c t i c i 为本实验室 分离;植物乳杆菌C I C C 6043购自中国工业微生物菌 种保藏管理中心;M R S 培养基[6] 　把1.5%琼脂粉加入到M R S 制备固体培养基,加入0.8%的琼脂粉制 备软琼脂;胃蛋白酶(1∶3000)、胰蛋白酶(1∶250)　均购自A m r e s c o 公司;木瓜蛋白酶　购自S i g m a 公司;蛋白酶K 购自M e r c k 公司。 1.2　菌种的活化、培养 接种乳酸片球菌于M R S 平板,37℃培养24～36h 。挑取典型的单个菌落,将乳酸片球菌单菌落接种于M R S 液体培养基,37℃、120r /m i n 试管过夜培养。以1‰接种量转接于4000m L 的M R S 液体培养基中,37℃三角瓶静置培养16～18h 。 1.3　细菌素的分离纯化 细菌素按Y a n g 的方法进行分离纯化:菌体培养 完毕后取出置70℃恒温水浴处理30m i n ,使酶失活;灭完酶的培养基冷却至室温后用4m o l /LN a O H 溶液调p H 至6.0;室温电动搅拌30m i n ,使细菌素吸附在细胞上;离心,8000r /m i n ,4℃,30m i n ;弃上清,收集沉淀,将沉淀再次悬浮在5m m o l /L 磷酸缓冲液

月产一吨水蛭素提取纯化工艺设计

目录 第一章项目总论 (1) 1.1水蛭素的介绍 (1) 1.1.1水蛭素的化学结构和理化性质 (1) 1.1.2水蛭素的生理功能 (2) 1.2水蛭素的应用前景 (3) 1.3水蛭素生产工艺 (3) 1.3.1粗提纯 (3) 1.3.2水蛭素的纯化 (4) 1.3.3水蛭素蛋白质分析方法 (5) 第二章方案设计 (1) 2.1产品方案概述 (1) 2.1.1进行产品方案选择 (1) 2.1.2 简要论述选定方案 (1) 2.2工艺流程 (2) 2.2.1工程流程示意图 (2) 2.2.2工艺流程说明 (2) 2.2.3工艺流程论证阐述以及工艺参数 (3) 2.3物料衡算 (4) 2.3.1技术参数 (4) 2.3.2计算 (5) 第三章设备选型 (1) 3.1粉碎机 (1) 3.2过滤装置 (2) 3.3离心装置 (3) 3.4凝胶层析装置 (3) 3.5浓缩结晶装置 (3) 3.6冷冻干燥装置 (4) 第四章防污措施 (6)

4.1车间环境 (6) 4.2设备和管道的清洗与杀菌 (6) 4.3废水的处理 (6) 4.4废渣的处理 (6) 第五章结语 (7) 参考文献 (8)

第一章项目总论 1.1 水蛭素的介绍 水蛭素(hirud in)是水蛭（Leech）及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质（多肽）。水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。近年来在我国以水蛭素为主要成分的中成药已有许多种，如抗血栓片、活血通胶囊等，其年产值达数千万元。含水蛭的新药也在不断研究和推出。利用基因工程生产重组水蛭类多肽药物，以取代水蛭素或作为抗凝化瘀药的添加成分，这在近期内就可实现。作为注射剂用于心血管系统疾病和肿瘤治疗药物，则还需要进一步的临床研究。毋庸置疑，重组水蛭素类多肽药物的开发将会带来巨大的社会效益和经济效益。所以对水蛭素生产工艺研究的不断深入,完善水蛭素提取工艺就显得尤为重要。 1.1.1水蛭素的化学结构和理化性质 水蛭（Hirudo）为水蛭科动物蚂蟥（Whitman ia p igra Whitman）、水蛭（Hirudo nip po nica W hit man）或柳叶蚂蟥（Whitman ia acranulata W h itman）的干燥全体，具有破血、逐瘀、通经作用，用于癥瘕痞块、血瘀经闭、跌扑损伤治疗。作为常用的活血化瘀中药，水蛭在临床广泛用于脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病的治疗，其有效成分主要为一种抗凝血物质，名为水蛭素（Hirud in）。它能阻止凝血酶对血小板的作用，抑制血小板受凝血酶的刺激而释放，从而延缓或阻止血液的凝固。研究表明，水蛭素是由65个氨基与3个二硫键组成的多肽，分子量约为7 000，在干燥状态下稳定存在;室温下，在水中稳定存在6个月，80 ℃下加热15 min不被破坏;提高溶液的p H值，其稳定性下降;20 ℃下，在0.1 mo l/L的HC l或NaOH中可稳定15min。 水蛭素是一类很有前途的抗凝化瘀药物，它可用于治疗各种血栓疾病，尤其是静脉血栓和弥漫性血管凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善体外血液循环和血液透析过程。在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭

食品中腐败菌的分离纯化及生物学性状观察

微生物学大实验 食品中腐败菌的分离纯化及生物学性状观察 （标题小四黑体，正文小四宋体，段前、段后0，行距20磅） 专业 班级 姓名 同组人 日期

0 前言 食品腐败变质是指食品受到各种内外因素（例如温度，气体等）的影响，造成其原有物理性质或化学性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程。食品腐败变质的过程实质上是食品中碳水化合物、蛋白质、脂肪在污染微生物的作用下分界变化、产生有害物质的过程。 本次实验以略微腐烂的苹果、栗子、香蕉，饮料为材料，运用三区划线、倾注、点植、涂布等方法从中分离出腐败菌，观察和分析其菌种及菌落形态。 1 试验材料和仪器设备 1．1试验材料 食材：土豆、苹果、栗子、香蕉、饮料。 试剂：营养琼脂粉、麦芽粉、琼脂粉、葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、溴麝香草酚兰溶液、草酸结晶紫、碘液、95%酒精、沙黄、生理盐水、%吕氏碱性美蓝染液、自来水等。 1．2仪器设备 试验仪器：显微镜、蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、试管、酒精灯、接种针（环）、针、培养皿、盖玻片、载玻片、三角玻璃涂布棒等。 2 试验方法 培养基的制备 2.1.1营养琼脂培养基 称取4.5克营养琼脂粉，加入100ml水加热溶解，分装，在121℃下蒸汽灭菌。20min后取出导入无菌平皿中冷却凝固。 2.1.2土豆培养基 将去皮土豆200g切成2cm左右小块加入1000ml水煮沸10min，过滤补充水份，加入20g琼脂粉，20g葡萄糖，加热溶化，分装，121℃下蒸汽灭菌20min。 2.1.3麦芽汁培养基 称取5g麦芽粉加入100ml和2g琼脂，在115℃下蒸汽灭菌20min。 2.1.4糖发酵培养基的制备 2.1.4.1葡萄糖发酵管 取0.25g葡萄糖加入100ml的已配置好的糖溶液混合均匀即可. 2.1.4.2葡萄糖发酵管 取0.25g乳糖加入100ml已配置好的糖溶液混合均匀即可.

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离及鉴定

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离及鉴定 1结构及性质 补骨脂素和异补骨脂素属香豆素类化合物。 补骨脂素：（补骨脂内酯），C 11H 6O 3,无色针状结晶（乙醇），有挥发性，溶 于甲醇，乙醇，苯，氯仿，丙酮；微溶于水，乙醚和石油醚。 异补骨脂素：C 11H 6O 3，无色针状结晶（乙醇），有挥发性，溶于甲醇，乙醇， 苯，氯仿，丙酮；微溶于水，乙醚；难溶于冷石油醚。 2提取方法的选择 用50%的乙醇浸提：称取补骨脂粗粉50g,用500ml 的乙醇冷浸提取，过滤， 水浴加热，回收乙醇，得浸膏。取浸膏置于烧瓶中，加甲醇 50ml 和适量活性炭， 回流15min ，趁热抽滤。浓缩滤液至小体积，放置沉淀，用甲醇淋洗沉淀。 3.补骨脂素和异补骨脂素的分离 取色谱用中性氧化铝40g ，装于直径1.6cm*30cm 的色谱柱中。取补骨脂精 品甲醇液约1-2ml ，加样，以石油醚-乙酸乙酯（1： 2）作洗脱剂，洗脱，每20ml 为一溜份，各溜份回收溶剂后，用薄层板检查，和标准品对比，于紫外光灯下观 察荧光与颜色。 4鉴定 a 呈色反应 （1）异羟肟酸铁反应：取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入 7%盐酸羟胺甲醇 溶液2?3滴，再加10%氢氧化钾甲醇溶液2?3滴，于水浴上加热数分钟，冷 却，用盐酸调至pH3?4,加1 %三氯化铁试液1?2滴，观察溶液颜色。 7 异补骨脂素 补骨脂素

(2)开环闭环试验：取样品少许加稀氢氧化钠溶液1?2m1,加热，观察现象；再加稀盐酸试液几滴，观察所产生现象。 (3)荧光：取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外光灯下观察荧光与颜色。 b薄层色谱鉴定 薄层板：硅胶G-CMC-Na板。 点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。展开剂：石油醚一乙酸乙酯(2 : 3)。展开方式：上行展开。 显色：在紫外光灯(365nm)下观察荧光斑点。 (专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注)

酸面团细菌多样性、产细菌素乳酸菌分离及RtcR蛋白激活rtcBA操纵子转录机制研究

酸面团细菌多样性、产细菌素乳酸菌分离及RtcR蛋白激活rtcBA 操纵子转录机制研究 由抗生素引发的多重耐药菌导致人类某些疾病无法治愈而引起患者死亡,所以有关抗生素替代品-细菌素的研究成为目前科学领域的焦点,而限制细菌素广泛应用的原因在于已发现的大部分细菌素存在抑菌谱较窄的问题。该问题可以从以下两个方面解决:第一,发掘更多广谱细菌素,丰富细菌素的种类;第二,研究致病菌耐细菌素机制,为制定预防或减少耐药性策略提供研究基础。对于第一个方面,通过从酸面团中筛选产广谱细菌素的乳酸菌,从而为获得广谱细菌素提供丰富菌种。对于第二个方面,选取具有代表性的细菌素-大肠杆菌素（Colicin）,研究病原菌耐Colicin机制。虽然Colicin E3、E4、E5、E6和Colicin D通过切断病原菌的t-RNA和16S rRNA来抑制蛋白质合成,最终杀死病原菌,但是含有rtcBA操纵子的病原菌-大肠杆菌MG1655通过上调RtcB蛋白（连接酶）和RtcA蛋白（环化酶）的表达可耐受Colicin。而rtcBA操纵子转录需要RtcR蛋白激活Eσ⁵⁴全酶(RNA聚合酶和σ⁵⁴因子)才能转录rtcB和rtcA基因,所以本研究通过研究RtcR蛋白激活转录rtcBA操纵子机制为研究耐Colicin机制提供研究基础。对于以上两方面的探索,可以为研究病原菌对Colicin的抗性机制提供研究思路,为未来制定预防或减少耐药性提供策略,为细菌素取代抗生素的应用提供研究思路。因此,本研究的主要内容是酸面团细菌多样性分析、产广谱细菌素乳酸菌分离、克隆表达纯化与RtcR蛋白激活转录功能相关的

水蛭素提取工艺-推荐下载

2014分离工程方向课程设计题目 动物试验与临床研究表明，水蛭素能高效抗凝血、抗血栓形成，以及阻止凝血酶催化的凝 血因子活化和血小板反应等进一步血瘀现象。此外，它还能抑制凝血酶诱导的成纤维细胞 的增殖和凝血酶对内皮细胞的刺激。与肝素相比，它不仅用量少，不会引起出血，也不依 赖于内源性辅助因子；而肝素则有引起出血的危险，在弥漫性血管内凝血的发病过程中抗 凝血酶III 往往减少，这将限制肝素的疗效，采用水蛭会有较好的效果。 过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免

外，大大简化了下游工程。我们根据水蛭素的特性，设计了适合大规模生产的低成本的分 离纯化新工艺，无需高效液相层析或反相层析，只经三步纯化，即获得电泳纯的产品。目 前我们得到水蛭素的表达量、纯度和得率均达到国际先进水平。 表达水平，纯化工艺，产品质量与国外水平相当，某些技术指标超过国外，成本比国外低。 在美国，药用重组水蛭素每毫克6美元。我国生产的成本低，如果每毫克降至人民币 6元， 广大患者就有可能承受得起。国外重组水蛭素都采用针剂，我们正在研制口服剂型，口服 无疑更易被病人接受，成本也可更多降低。尤其是它可以拓宽使用的范围，用于各种血栓 病的防治，或作为有关药物的主要成分或添加成分，可开发更大的市场。 、管路敷设技术不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术包含线槽、管架等多项方式，为解决、电气课件中调试工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启、电气设备调试高中资料试卷技术中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷