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TiO2对流感病毒(H1N1)灭活作用的研究

TiO2对流感病毒(H1N1)灭活作用的研究
TiO2对流感病毒(H1N1)灭活作用的研究

9.流感病毒的快速检测方法

流感病毒的快速检测方法 一、RT-PCR快速诊断方法 (一)生物安全要求 (二)病毒核酸提取 (三)RT-PCR (四)PCR 产物纯化 (五)流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 (一)原理 (二)标本处理 (三)间接免疫荧光法 (四)结果判断 三、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)快速诊断检测 (一)基本原理 (二)实验试剂 (三)实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法,与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法,即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应(PCR)。 流感病毒的基因组是负链RNA,在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA,即为cDNA。逆转录酶(RT)就是用于合成cDNA的多聚酶,因此,扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物,四种脱氧核苷酸(dNTPs),RNA模板,逆转录酶及Taq DNA 多聚酶;首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA,然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环,使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求:生物安全二级实验室,防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行,核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。

流感病毒的实验室检测方法及进展

·190·星堕墅墅盘查!!!!生篁!!鲞釜i塑!里!』曼!!丛!!至!坠:!!塑!!!!:!!:堕!:! 流感病毒的实验室检测方法及进展 李月越陈杭薇李兵 【摘要】流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其在人群中蔓延快,且具有高发病率及致死率的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征,其确诊还有赖于实验室检查。流感病毒的检测技术大致分为4个方面,即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。 【关键词】流感病毒;检测方法 Lab帅torialmethods狮dp哪哪艄0fd咖tiIlgiIIflu眦avin麟Uy访y獬,CHEN协咒g-讹i,UBi恕g.&加仃批,zfo,尺Ps加m£o删M毒d觑九8,&巧i挖gCDm凇挖d&咒8m£Hospi£nZo,PLA,&巧锄g100700,吼i御 (乃rr已s户D行矗i729口“腩or:(HE小,H口ng一议,Pi 【AbstI’act】Influenzavirusescauseanacuterespiratorydiseasethatspreadsepidemicallyinthehumanpopulation.CharacterofInfluenzaishighmorbidityandmortality.DiagnosisofinfluenzadependsonnotonlyclinicialsymptomsandsingsbutalsolaboratoriaIdetections.Viralcultureandisolation,serodiagnosis,immumolo—gicalassayandmolecularbioIogicaldiagnosisarefourmethodsthatcommonlyusededforinfluenzavirusdetection.Laboratorialmethodsandprogressesofdetectinginfluenzavirusesaresummarizedinthef01lowingtext. 【Keywords】Influenzaviruses;Detectionmethod 流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的急 性呼吸道传染病,传染性强,蔓延快,其抗原易变异, 对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人 群有较高的发病率及致死率,危害很大。流感病毒 分为甲、乙、丙三型,其中变异大的、危害重的主要是 甲型和乙型流感病毒,尤以甲型为主,常可引起较大 范围的流行[1]。 流感的诊断不仅要根据临床症状和体征,还需 要实验室检测来证实。病毒诊断技术大致分为4个 方面,即病毒分离、血清学诊断、现代免疫学诊断及 分子生物学诊断瞳]。现分别进行介绍。 l病毒分离培养 病毒分离培养是诊断流感最可靠的方法之一。 因流感病毒能够在鸡胚中良好生长,所以早期多用 鸡胚分离流感病毒,一般用9日龄至11日龄的鸡胚 通过羊膜腔或尿囊腔接种分离病毒,接种后24~96h 收集鸡胚尿囊液,24h内死亡的鸡胚弃掉,用鸡的 红细胞检测尿囊液或细胞培养液的血凝活性来证实 病毒的增殖和存在,如初次分离不到病毒,可盲传2 代再进行检测;但近年来,随着分子生物学技术的发 展,发现通过鸡胚所分离到的流感病毒,其抗原性与 原始标本有所不同,而通过马一达犬1肾细胞(MDCK) 作者单位;100700北京军区总院呼吸内科 通讯作者:陈杭薇.综述. 分离病毒的抗原性与原始标本相似,另外由于 MDcK细胞对“o”相毒株的敏感性比鸡胚高很多, 故MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一 种宿主系统,现亦得到较为广泛的应用;MDCK分 离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产,因此 病毒分离现同时采用鸡胚及MDCK细胞两套系 统口]。但无论是以上哪种方法对标本中病毒采集、 运输及保存条件要求均较高,病毒样品如能在48h 分离,可在4℃保存,如果样品要存放较长时间必须 低温冻存(一70℃);且要求标本中的病毒含量高, 必须达到鸡胚或MDCK培养法所需要的病毒含量, 分离培养较为复杂、耗时且不稳定,也不能在普通实 验室进行,要确诊需要较长时间,故对流感早期诊断 及临床指导意义不大。 Shih等H3将一种新的实验室培养技术——离 心培养技术(shellvialculture,SVC)应用于流感病 毒的培养,其与传统培养方法没有本质的区别,不同 点为在标本接种后进行长时间的低速离心,使标本 中含病毒的颗粒在外力作用下被压挤吸附于培养细 胞,从而大大缩短了培养时间并提高了敏感性。在 国内倪安平等口]亦采用SVC技术快速诊断流感病 毒,结果显示该技术能在24h内获得流感病毒培养 结果,可以快速确诊流感患者。 郭元吉等[63建立了一种流感快速诊断方法,具 体为:采集标本经成片MDCK细胞扩增,使细胞表万方数据

病毒性传染病快速检测方法的原理及发展趋势 答案

病毒性传染病快速检测方法的原理及发展趋势 人副流感病毒的病原学特征及流行病学规律 1、HPIV的治疗中()只能在早期使用 B、利巴韦林、干扰素和蛋白酶抑制剂 2、下列有关于HPIV的说法中,错误的是() E、HPIV已成为能够导致最沉重疾病负担及影响经济的病毒之一 3、HPIV的实验室检测手段有() A、LLC-MK2(恒河猴肾细胞) 4、有关HPIV的病原学特征说法错误的的是() B、病毒粒子呈多形性、无包膜,直径约125~250nm 5、下列关于几个亚型的HPIV的季节流行特征的说法中,错误的是() C、HPIV2的几乎每年均可检出,发病高峰期为春夏季

人呼吸道合胞病毒的病原学特征及流行病学规律 1、下列选项中()属于HRSV的实验室检测 B、Hep-2细胞单层 2、()是目前临床上唯一用于治疗HRSV感染的药物 A、利巴韦林 3、下列关于HRSV的临床表现中错误的是() B、大多数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎 4、HRSV的致病机包括() E、以上都是 5、HRSV的病原学特征不包括() B、HRSV病毒粒子呈球形和棒状两种形态,病毒颗粒约120~300 nm 人禽流感病毒及实验室检验技术

1、血凝(HA)试验原理是HA能与人或其它动物多种红细胞表面()受体结合引起红细胞凝集 B、N-乙酰神经氨酸酶 2、中国流感/人禽流感监测信息系统至少有()个国家级网络实验室 A、60 3、人禽流感病毒检测接种鸡胚,样本需要在温度33-35℃、湿度40-60%条件下孵育() A、2-3天 4、以下哪项不属于人禽流感病毒核酸检测方法() D、鸡胚接种 5、微量血抑(HI)试验应制备相应亚型的()个血凝单位的抗原 B、8

禽流感的研究进展

禽流感的研究进展 谭飞虎,刁小龙,朱玉娟,张尚弟,张连团,祁越,刘卫军,吴頔 甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃兰州(730070) E-mail:tanfeihu521@https://www.wendangku.net/doc/3d19122406.html, 摘要:禽流感(Avian Influenza,AI),1878年首次发现与意大利,目前在美洲、非洲、亚洲、欧洲一些国家广泛发生。禽流感(AI)是由是由A型禽流感病毒(av ian in fluenza virus,AIV) 引起的禽类烈性传染病,主要在禽类中传播。AI不仅给世界养禽业造成了巨大的经济损失,而且对人类健康和生命安全构成了严重威胁。它可通过多种途径传播,且临床症状多样。本文主要从AIV的结构特征,致病机理,防治措施等方面论述了AIV 的研究进展 关键词:禽流感,结构特征,致病机理 引言 禽流感(Avian Influenza,AI)又名真性鸡瘟、欧洲鸡瘟,1878年首次发现于意大利。禽流感是由正粘病毒科甲型流感病毒属的A型流感病毒引起的禽类感染和疾病综合症。禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)亚型众多,变异频繁,根据病毒的血凝素(Hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的差异,将A型流感病毒分为不同的血清型,目前已发现16种HA亚型和9种NA亚型。其分子机制涉及点突变引起的抗原漂移(Antiyentil drife)和不同亚型毒株同源性产生新亚型所引起的抗原转变(Antiyentic shift)。该病在临床上所表现的症状变化从亚临床感染,重轻度的呼吸系统疾病,产蛋下降到严重的致死性疾病,其严重程度取于病毒的毒株以及被感染禽的种类,日龄和有无并发症等因素。禽流感病毒仅有H5和H7了两个血清型可引起高致病力禽流感(High Pathogentic Avian Influenza,HPAIV),以突然死亡和高死率为特征,在火鸡和鸡种引起的危害最为严重,常可导致感染鸡群的全军覆没,造成严重的经济损失,所以被国际兽医局列为A类烈性传染病。 1 流感病毒的分类 由于禽流感造成的损失巨大,引起国际社会的广泛关注,并对其分类进行了更为详尽的研究。根据国际病毒分类学(ICTV)第六次分类报告(1995年)规定,正粘病毒科分 3个病毒属:A,B型病毒属(Influenza Virus),A,B,C型流感病毒属(Influenza Virus C),类托高土病毒属(Thogotoline Virus),各属的代表中分别为A型流感病毒,C型流感病毒,托高土病毒,但是习惯上仍将A,B,C型流感病毒都归属亚流感病毒属的3个型[1]。这3个型的流感病毒没有共同的抗原,在内部核蛋白和基质蛋白的抗原性上有很大差异,在致病性和基因结构上也有所不同,其中的A型流感病毒感染的范围最大,危害最大,它可以感染人,猪,马,海洋哺乳动物,禽类等,是人和畜禽呼吸道疾病的重要病原。而B,C型流感病毒却只能感染人,所以禽流感可感染人类,引起以呼吸系统症状为主的急性传染病,部分患者可发展为全身多脏器功能衰竭而死亡。2005年1月新英格兰医学杂志上确认了第一例在人与人之间传播的禽流感病例,由于猪既有人类病毒的受体,又具有禽类病素的受体,所以猪可以同时感染两种病毒,并发生重配进而感染人类,这是禽流感病毒传染的最可能途径[ 2 ]。 -1-

甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒

甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 使用说明书 通用名:甲型流行性感冒病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名:Influenza type A Colloid gold Rapid Diagnostic Kit 汉语拼音:JIAXING LIUXINGXING GANMAOBINGDU KANGYUAN JIANCE SHIJIHE (JIAOTIJIN FA) 【生产企业】广州健仑生物科技有限公司 【产品规格】22份/盒 【使用目的】用于鼻腔抽吸液、鼻腔擦拭液和咽喉擦拭液标本中甲型流感病毒抗原的定性测定。 【试验原理】 流行性感冒是指由流感病毒引起的具有传染力的疾病,可引发肺炎或更严重的并发症。流感病毒的结构主要包括内部的核心和外部的病毒囊膜。流感病毒核心是由核蛋白卷曲包绕螺旋形核糖核酸(RNA)组成,核蛋白的抗原稳定,很少发生变异,具有型特异性。根据核蛋白抗原性的不同,可把感染人的流感病毒分为甲、乙、丙三型。本产品是利用能够特异性识别甲型流感病毒核蛋白的单克隆抗体,以免疫色谱法检测流感病毒核蛋白的试剂盒,本试剂盒仅对样品中的甲型流感病毒有反应,对乙型及丙型流感病毒均不反应,而且不能用于区分病毒感染的亚型。 本品是由样品滴下部、试剂部和展开部三部分组成的检测板,内藏长方块状的载体。其中,试剂部包含胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)(以下将简称为胶体金标记抗体A);展开部包含固定化的抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)(以下简称为抗流感A抗体)及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体(兔)(以下简称为抗鼠免疫球蛋白抗体)。 检测板各部分的名称 样品从检测板的样品滴下部滴下后,胶体金标记抗体A被溶解,与样品中的甲型流感病毒抗原形成免疫复合体。免疫复合体因展开部的毛细管现象而移动,被判定部〔T〕中固定化的抗流感A抗体捕捉,于是在判定部[T]因胶体金的作用形成紫红色的条带。本试剂盒的这个紫红色条带可以肉眼确定,以判断样品中是否存在甲型流感病毒。 另一方面,无论样品中是否有甲型流感病毒存在,剩余的胶体金标志抗体A继续在展开部移动,在判定部[C]被固定化的抗鼠免疫球蛋白抗体捕捉,因胶体金而形成紫红色条带。这显示了胶体金标志抗体的正常移动。【主要组成成份】 1.检测板:20个,每个检测板在试剂部包被有胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠),在展开部包被有抗甲型流感病毒单克隆抗体(鼠)及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体(兔)。 2.样本抽提液:2瓶,11ml/瓶,为含有表面活性剂的TRIS缓冲液并添加有防腐剂,可直接使用,贮存在2~30℃可稳定至有效期。 3.灭菌棉棒20支。 4.抽提用管子20支。 5.滴头21个。 6.立架1个。 【适用仪器】 无需其他仪器,产品开封后直接使用。 【样本要求】 1)鼻腔抽吸液的采集方法 抽吸器一侧的管子连接在抽吸泵上,另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔,启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。 2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。 3)咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中,以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心,摩擦数次,采集粘膜表皮。采

甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明(胶体金)-Alere BinaxNOW

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用说明书 【产品名称】 通用名称:甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名称:Alere BinaxNOW? Influenza A&B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)是一种体外免疫层析试验,用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原,可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染,它属于传染病范畴,可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强,造成的病情也更严重,并且大多数严重的流感也都是由它引起的,而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数,减少抗菌素的使用,而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法,使用方便,结果快速,在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型,有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感(H5N1,主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型),此后,在人群中出现了H5N1病例,使人们对H5N1关注起来,H5N1的变异使得它更易在人群间传播4,由于备案的禽流感感染病人比例很低,快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用的是薄膜免疫层析技术,它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上,形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理:用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来,将标本加到检测条顶端,闭合检测卡,15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中,蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料

9.流感病毒的快速检测方法

一、RT-PCR快速诊断方法 (一)生物安全要求 (二)病毒核酸提取 (三)RT-PCR (四)PCR 产物纯化 (五)流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 (一)原理 (二)标本处理 (三)间接免疫荧光法 (四)结果判断 三、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)快速诊断检测 (一)基本原理 (二)实验试剂 (三)实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法,与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法,即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应(PCR)。 流感病毒的基因组是负链RNA,在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA,即为cDNA。逆转录酶(RT)就是用于合成cDNA的多聚酶,因此,扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物,四种脱氧核苷酸(dNTPs),RNA模板,逆转录酶及Taq DNA 多聚酶;首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA,然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环,使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求:生物安全二级实验室,防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行,核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。 (二)病毒核酸提取 1.实验材料及仪器

流感病毒分子生物学研究进展

?专题笔谈?病 毒 感 染 流感病毒分子生物学研究进展 中日友好医院(100029) 安 菁 林江涛  流感病毒是研究最早的病毒之一,主要原因与流感的严重危害有关。流感发作快、传播迅速,短时间内可造成局部地区的爆发或全球范围的流行,导致灾难性的后果。从19世纪以来,已出现四次全球性的流感大流行,最严重的一次(1918~1919年)全世界死于流感的人数超过20万。几十年来,人们作了大量的工作,试图运用分子生物学的手段从机理上揭示流感病毒感染性与致病机制,以研究有效的防治(如监测、疫苗)手段。 1 流感病毒的基因组结构 流感病毒属于正粘病毒科,是RNA病毒。依据其核蛋白(NP)抗原性的差异分成A、B、C三型,这三个型分别在基因组结构、多肽组成、感染性和致病性等方面存在差异。 流感病毒为有包膜的病毒,包膜分内、外两层。内层包膜由基质蛋白M1构成,M1在颗粒核蛋白体(vRNP)的胞质、胞核间的有序转移及病毒体的成熟过程中具有重要的调节作用。外层包膜由一脂质双层构成,其上面嵌有三种病毒蛋白:具有血凝素活性的蛋白质H A、具有神经氨酸酶活性的蛋白质NA和基质蛋白M2。包膜内为病毒基因组与病毒RNA聚合酶亚单位P B1、P B2、PA以及NP形成的具有特定空间构象的结构,称为vRNP,具有依赖RNA的RNA 聚合酶活性。 流感病毒基因组由7个(C型病毒)或8个(A、B 型)分节段的单股负链RNA构成,每个RNA节段的两端都有相对保守的非编码序列,如5′端存在13个核苷酸,3′端存在12个核苷酸,且5′端与3′端反向互补形成锅柄结构。这些结构参与病毒vRNA的复制和mRNA的转录,在RNA聚合酶结合活性、启动子活性、poly(A)化作用以及激活核酸内切酶活性中具有重要作用,是流感病毒复制、转录、包装的重要调控成分。每个RNA节段包括至少一个开放阅读框架(ORF),如:A型流感病毒的各RNA节段及其编码的病毒蛋白为RNA1-P B2、RNA2-P B1、RNA32PA、RNA4-H A、RNA5-NP、RNA6-NA、RNA7-M1和M2、RNA32PA、RNA8-NS1和NS2等。 2 流感病毒的复制及调控 流感病毒大多在宿主细胞核中复制其基因组,通过质膜或细胞器膜芽生形成成熟的病毒颗粒。流感病毒基因组为负链RNA,与具有活性的转录酶复合物和其他负链RNA病毒相同,vRNA、cDNA和cD2 NA转录形成的RNA均不具有感染性,只有形成RNP并转染宿主细胞后才能在宿主细胞内起始病毒基因的复制和表达。 流感病毒侵入宿主细胞依赖于H A的凝集素位点与宿主细胞表面的唾液酸的结合。H A介导病毒包膜与内体膜的融合,使病毒壳衣壳释放进入胞质。流感病毒的脱壳与内体的低pH环境引发的病毒核衣壳结构改变有关,但低pH诱导核衣壳结构改变的分子机制尚不清楚。当病毒脱壳,vRNP在ATP供能的条件下,很快通过宿主细胞核孔复合物(NPC)向核内转运。vRNP向宿主细胞核内转运的调控与NP 和胞质因子NPI21、核转运受体、Ran(T C4)及P10 (NTF2)有关。只有当vRNA与NP同时存在时,vRNA 才可转运到细胞核内。流感病毒蛋白的合成分两个时项。NP、RNA聚合酶亚基和NS1在感染后最初2~3小时即生成。其他蛋白质如H A、NAM1、M2和NS2合成较晚。病毒蛋白的合成可能受到病毒mR2 NA向核外运输的调节,并可能与病毒蛋白NS1的功能有关。对病毒蛋白合成时间的控制在病毒感染周期中具有重要作用,与病毒核衣壳的组装、vRNP的成熟和释放等相关。流感病毒在特定时间内合成的蛋白成分均要通过宿主细胞的介导进入核内以完成vRNP的组装。构成vRNP的主要蛋白成分是NP,为子代vRNA的合成所必需,在RNA复制的同时,子代vRNA随即与NP形成具高级结构的子代vRNP。病

2016年最新流行性感冒诊断及治疗标准流程

流行性感冒(2016年版) 一、流行性感冒标准住院流程 (一)适用对象。 第一诊断为流行性感冒患者(ICD-10:J11-101)。 (二)诊断依据。 根据《流行性感冒诊疗方案》(卫生部,2000.10.13)及根据卫生部“十二五”规划教材、全国高等学校教材《传染病学》(人民卫生出版社,2013,第8版,李兰娟、任红主编)。 1.发病前7天内与传染期流感确诊病例有密切接触,并出现流感样临床表现。或发病前7天内曾到过流感流行的地区,出现流感样临床表现。 2.出现高热、头痛、周身酸痛等临床表现,同时有以下一种或几种实验室检测结果: (1)流感病毒核酸检测阳性(可采用real-time RT-PCR 和RT-PCR方法); (2)分离到流感病毒; (3)双份血清流感病毒的特异性抗体水平呈4倍或4倍以上升高。

(三)治疗方案的选择。 根据《流行性感冒诊疗方案》(卫生部,2000.10.13)及根据卫生部“十二五”规划教材、全国高等学校教材《传染病学》(人民卫生出版社,2013)。 1.呼吸道传染病隔离。 2.一般治疗:适当休息,清淡饮食,多饮水。 3.对高热、头痛者给予解热止痛等对症治疗。 4.抗病毒治疗:奥司他韦。 (四)标准住院日为7-10天。 (五)进入路径标准。 1.第一诊断必须符合流行性感冒ICD-10:J11-101诊断编码。 2.当患者同时具有其他疾病诊断时,但在住院期间不需要特殊处理也不影响第一诊断的临床路径流程实施时,可以进入路径。 (六)住院期间的检查项目。 1.必需的检查项目: (1)血常规、尿常规、大便常规; (2)血生化:包括电解质,肝肾功能、心肌酶谱; (3)流感病毒抗原检查、流感病毒核酸检测; (4)胸片、心电图。

甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明-Alere

【产品名称】 通用名称:甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名称:Alere BinaxNOW? Influenza A&B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)是一种体外免疫层析试验,用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原,可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染,它属于传染病范畴,可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强,造成的病情也更严重,并且大多数严重的流感也都是由它引起的,而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数,减少抗菌素的使用,而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法,使用方便,结果快速,在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型,有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感(H5N1,主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型),此后,在人群中出现了H5N1病例,使人们对H5N1关注起来,H5N1的变异使得它更易在人群间传播4,由于备案的禽流感感染病人比例很低,快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用的是薄膜免疫层析技术,它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上,形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理:用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来,将标本加到检测条顶端,闭合检测卡,15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中,蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料 1.检测卡:22人份。包含对甲型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、结合

呼吸道病原体抗原七项的检测及临床意义

“呼吸道病原体抗原七项”检测的临床意义 一、呼吸道病毒简介 呼吸道病毒是指一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户,主要引起呼吸道外组织器官病变的病毒。据统计,90%以上急性呼吸道感染由病毒引起。常见的呼吸道病毒包括:A型流感病毒(甲型流感病毒)、B型流感病毒(乙型流感病毒)、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型,各种病毒在电镜下的形态见图1。 流感病毒呼吸道合胞病毒腺病毒副流感病毒 图1 各种病毒在电子显微镜下的形态 二、呼吸道病毒临床诊断 现有的主要方法:1、抗原检测;2、抗体检测;3、病毒分离培养;4、分子生物学方法等。现将上述检测方法的优劣小结于表1。目前临床上使用较多的是抗原检测和抗体检测。 表1 四种呼吸道病毒检测方法的比较 检测方法优点缺点 病毒分离培养特异性高,金标准培养条件要求高、灵敏度低,标本中病原体量少时,易致假阴性。 抗原检测 酶联免疫吸附法较快速有非特异性反应 间接免疫荧光法简便、快速 有非特异性反应需要使用荧光显微镜 直接免疫荧光法简便、快速、灵敏度和特异性均较高 且可用于疾病的早期诊断 需要使用荧光显微镜 抗体检测灵敏度、特异性较高对疾病早期诊断没有太大帮助 分子生物学方法灵敏度和特异性均很高操作繁琐,价格昂贵 三、呼吸道病原体抗原的优越性 1、从理论上讲,只要有病毒感染,通过抗原检测都能鉴定出,而抗体检测却要在人体产

生免疫应答以后才能进行鉴定。 2、机体产生IgM一般需要一周左右的时间,而有免疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童,特别是3岁以下的小孩,其产生抗体往往需要更久,且抗体产生的水平也较低。若检测的是IgG,则不能很好地区分既往感染和急性感染。 因此,抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势(详见表2)。 表2 呼吸道病毒抗体检测和抗原检测的比较 病原体抗体IgM检测病原体抗原检测 检测最佳时间一般在感染一周左右病毒感染出现症状后即可检测出 临床意义 回顾性诊断,适用于疾病后期的诊断, 多用于循证医学可用于疾病早期诊断 对患者的治疗有重要指导意义 检测灵敏度不能很好地检测变异的病毒 将多种抗体进行组合,能更好地应对变异 的病毒 检测方法 一般使用酶联免疫(ELISA)或者间接免疫 荧光法,有非特异性荧光一般使用直接免疫荧光法,几乎没有非特异性反应 四、为什么要早期全面检测? 1、病毒治疗针对性强 2、病毒治疗有时效性 3、避免抗生素的滥用 五、项目开展的价值和社会效益分析 本项目可用于呼吸道病原学的研究;提高医院对呼吸道病毒的诊疗水平;还可用于呼吸道传染病流行的监控等。 六、呼吸道病原体检测 我们检验中心/遗传所于3月20日正式开展了“呼吸道病原体抗原7项”。该检验组合包含了甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒1、2和3型7种抗原的检测。收费标准:326.0元/次,不接受单项申请。 临床意义:主要用于呼吸道感染病原体的早期诊断和鉴定诊断。 标本采集和报告时间:鼻咽拭子或下呼吸道分泌物。暂定于每周五4:30pm发出检验报告。 欢迎各临床保健科室踊跃开单,我们将竭诚地为临床服务。咨询电话:临床免疫学检验室,2313065(外线);3065(内线)。 撰稿:罗桂香,编辑:周玉球

《流行性感冒病毒抗原检测试剂注册申报资料技术指导原则》(报批稿)

附件2: 流行性感冒病毒抗原检测试剂注册申报资料 技术审评指导原则 一、前言 本指导原则旨在指导注册申请人对流行性感冒病毒(以下简称流感病毒)抗原检测试剂注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对流感病毒抗原检测试剂的一般要求,申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用,若不适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件,但不包括注册审批所涉及的行政事项,亦不作为法规强制执行,如果有能够满足相关法规要求的其他方法,也可以采用,但需要提供详细的研究资料和验证资料,相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的,随着法规和标准的不断完善,以及科学技术的不断发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。 二、适用范围 流感病毒抗原检测试剂是指利用胶体金法、酶联免疫法

等基于抗原抗体反应原理,以特定的流感病毒抗原为检测目标,直接对人咽拭子、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物样本中的流感病毒进行体外定性检测的试剂。 本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。 三、注册申报资料要求 (一)综述资料 流感病毒包括甲、乙、丙三型,甲型最容易引起流行,乙型次之,丙型极少引起流行。依据病毒颗粒外膜血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白抗原性的不同,甲型流感病毒目前可分为16个H亚型(H1-H16)和9个N亚型(N1-N9)。在甲型流感病毒中,目前已有H1、H2、H3、H5、H7和H9等亚型有人感染的报道。由于编码HA和(或)NA的核苷酸序列容易发生突变,致使HA和(或)NA的抗原表位发生改变,这种抗原性的转变使人群原有的特异性免疫力失效,故甲型流感病毒常引起较大规模甚至世界性的流感流行。按照流行特点,造成人间流感流行的流感病毒可区分为季节性流感病毒和新型甲型流感病毒。季节性流感病毒通常在年度间发生小范围的基因变异,这种基因变异会导致微小的抗原性改变,称为抗原漂移(antigenic drift),因此,季节性流感病毒虽具有年度特异性且抗原性的改变使感染者不易获得持久免疫力,但传播范围通常局限于较小的人群范围,一般

流感病毒的快速检测方法样本

流感病毒的快速检测方法一、.................................................................. RT-PCR快速诊断方法 ( 一) 生物安全要求 ( 二) 病毒核酸提取 ( 三) RT-PCR ( 四) PCR 产物纯化 ( 五) 流感病毒RT-PCR检测引物二、........................................................ 免疫荧光方法检测流感病毒 ( 一) 原理 ( 二) 标本处理 ( 三) 间接免疫荧光法 ( 四) 结果判断 三、................. 实时荧光定量PCR( Real-Time PCR) 快速诊断检测 ( 一) 基本原理 ( 二) 实验试剂 ( 三) 实验步骤四、............................................................................. 快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法, 与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常见于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、

Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法, 即使基因组含量很低或死病毒也能够检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应( PCR) 。 流感病毒的基因组是负链RNA, 在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA, 即为cDNA。逆转录酶( RT) 就是用于合成cDNA的多聚酶, 因此, 扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物, 四种脱氧核苷酸( dNTPs) , RNA模板, 逆转录酶及Taq DNA 多聚酶; 首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA, 然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环, 使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求: 生物安全二级实验室, 防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时能够在生物安全二级实验室里进行, 核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。(二)病毒核酸提取

流感病毒检验

流感病毒检验 发表时间:2009-08-10T09:20:24.920Z 来源:《中外健康文摘》2009年第20期供稿作者:谭耀武 (黑龙江省宝清县八五三农场疾控中心黑龙江宝清 [导读] 流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0277-01 流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒。流感病毒属正粘病毒科,可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)3型。甲、乙、丙不仅反映了病毒被发现的前后顺序,更重要的是反映了对人危害程度的顺序,甲型常以流行的形式出现,可造成世界性的大流行,乙型常以局部流行的形式出现,丙型主要是侵犯婴幼儿。 1 样本采集 1.1采样液 Hank平衡盐、细胞培养液、牛肉浸液(小牛肉浸膏l0g、牛血清白蛋白2g,加蒸馏水至400ml、庆大霉素40mg、多粘菌素 B 0. 8mg,过滤除菌)等均可作采样液。 1.2采集鼻咽腔拭子标本(1)咽拭子:用棉签擦拭双侧扁桃体及咽后壁,将棉签头部浸人2~3ml采样液中。(2)鼻咽抽取物:用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插人鼻腔、接通负压,旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液,并用采样液刷洗收集器3次。(3)含漱液:用8~10以采样液漱口。 1.3收集血清标本血清标本应包括急性期和恢复期双份血清。急性期应在发病7天内采集,恢复期则在发病后2~4周采集。血液标本以2500r/min离心l5min,收集血清,弃血凝块。 1.4标本运送病毒分离标本采集后应立即低温保存,应尽快送至实验室。24~48h内样品可置4℃保存,如48h内未能进行接种,应置-70℃或以下保存。血清标本可在4汇存放一周,在-20℃长期保存。 1.5标本处理咽拭子标本,收集管于混合器充分震荡,用无菌镊子取出棉拭子并在管壁上反复挤压棉拭子后弃拭子,标本加入双抗(青霉素、链霉素)终浓度为l000IU/ml,混匀置4℃2h方可接种或低温保存;含漱液标本,混匀后自然沉淀,取上清液3ml,加双抗;鼻咽抽取物标本,取无菌毛细吸管将洗液反复吹打,把粘液打散,而后按上述方法进行处理;器官组织标本,先用无菌的乳钵磨碎,用生理盐水配成20%悬液,2000r/min离心l0min,取上清液3ml按上述方法进行抗菌处理。 2 检验方法 2.1材料和方法 2.1.1器材孵卵箱(38℃、33~35℃:各一个)、照卵器、卵盘、注射器、消毒剂、镊子、无菌生理盐水、毛细吸管、试管、液体石蜡和封口胶等。 2.1.2方法当今国内外常用狗肾传代细胞(MDCK)。将已长成单层的细胞管弃生长液,用含有l00IU/ml双抗HanK's液洗2遍,用0.2~0.4ml处理过的标本液接种于细胞管,每份标本接种4管,置35T吸附1~2h后弃标本液,加入病毒培养液,其量为生长液的2倍。如标本液清亮和进行病毒传代时,可不必吸附,直接加入。置33~35℃孵育7d。从第3d开始观察细胞病变(CPE),如细胞出现颗粒增多、变圆、脱落达+++~++++时进行收获。如果7d还不出现CPE,可收集病毒培养液做血细胞凝集试验,在做试验前将细胞管冻融1~2次,以提高病毒滴度。阳性者可测定其血凝滴度并鉴定之,阴性者混合4管细胞液盲传2代,仍为阴性则弃去。 2.3病毒鉴定新分离的病毒可用血细胞凝集抑制试验、补体结合试验和中和试验等方法进行鉴定。最常用和简单的方法是血细胞凝集抑制试验,必要时采用补体结合试验。 2.4快速诊断流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮细胞,在病人呼吸道标本的脱落细胞中含有流感病毒抗原,通过直接检查脱落上皮细胞内抗原即可诊断。标本最好采用负压抽吸法收集呼吸道分泌物。 2.5血清学诊断病毒分离是诊断流感最常用的方法之一,如因各方面因素未分离出病毒,血清学亦可作为一种代替手段,但必须收集急性期和恢复期双份血清,如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上,即可诊断。本章介绍两种常用的方法:血凝抑制试验和中和试验。

甲型和乙型流感病毒抗原快速检测结果分析

浙江临床医学2019年5月第21卷第5期·689· 【摘要】目的?探讨本地区甲/乙型流感病毒在不同流行季节的变化趋势,分析流感病毒阳性患者外周血细胞中白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、嗜酸性细胞(Eos)、血小板(PLT)和C反应蛋白(CRP)等感染性指标的变化。了解季节因素对流感病毒传播的影响,为流感病毒的临床治疗及疾病预防提供流行病学依据。方法利用胶体金标记免疫层析技术进行流感抗原的检测,对2017年3月至2018年2月检测的1648份流感病毒抗原筛查结果进行统计学分析,分析其流行病学特征,包括季节、年龄段分布特点。同时分析流感病毒阳性病例的相应血常规和CRP等感染性指标的变化。结果?与正常对照组比较,流感组CRP明显升高,WBC、Eos、Lym、PLT则明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。2017-2018年度,本地区流感高峰期在2018年1~2月,且以乙型流感为主,其余月份为散发低流行。年度甲型流感和乙型流感病毒检出率比较,差异有统计学意义(χ2=20.615,P<0.05)。不同年龄组的流感病毒抗原检出率比较差异有统计学意义(χ2=27.174,P<0.05)。结论?流感病毒的流行与季节有着密切的关系,本地区流感的类型在不同的流行季节存在着一定的变化趋势。甲型/乙型流感病毒抗原胶体金法具有快速、简单准确和无污染等优点,适合基层医院广泛筛查使用。 【关键词】胶体金免疫层析法?白细胞?C反应蛋白?甲型、乙型流感病毒抗原?季节性流行病? 【Abstract】Objective To?discuss?the?trend?about?influenza?antigen?in?different?seasonal?in?Shaoxing?area,meanwhile?to?detect?and?analyze?the?variety?about?WBC,NEU,LYM,EOS,PLT?and?CRP?in?patients?which?infected?by?influenza.?To?master?and?understand?the?influence?about?seasonal?factor?to?influenza?virus?transmission,and?in?order?to?provide?the?epidemic?foundation?for?clinical?treatment?and?disease?prevention.?Methods?The?immunochromatogragphic?assay?was?used?to?detect?the?1648?patient's?influenza?virus?antigen?from?March?2017?to?February?2018?which?were?diagnosed?and?detected?in?our?hospital.?The?data?were?analysis?using?SPSS,the?epidemiological?characteristic?and?the?factor?such?as?seasonal?and?age?were?also?analyzed.?Results Compared?with?the?normal?group,the?CRP?in?the?influenza?group?were?higher?than?the?normal?group,and?WBC,EOS,LYM,PLT?were?significantly?decrease(P<0.05).From?2017?to?2018,the?peak?period?of?influenza?was?in?January?and?February?in?2018,and?the?mainly?type?was?influenza?B,the?other?months?were?low?epidemic?period.?Compared?with?the?influenza?virus?type?A?and?B?in?the?total?year,there?was?statistical?significance?between?them(χ2=20.615,P<0.05).?The?influenza?virus?antigen?prevalence?in?different?age?group?were?also?showed?statistical?difference (χ2=27.174,P<0.05).?Conclusions?The?epidemic?of?influenza?virus?is?closely?related?to?the?season.?The?types?of?influenza?in?this?region?have?a?certain?change?trend?in?different?epidemic?seasons.?Colloidal?gold?assay?for?influenza?A/B?virus?antigen?has?the?advantages?of?rapidity,simplicity,accuracy?and?non-pollution.?It?is?suitable?for?extensive?screening?in?grass-roots?hospitals. 【Key words】Immunochromatogragphic?assay?White?blood?cell?C-reactive?protein?Influenza?virus?A&?B?antigen?Seasonal?epidemics? 流行性感冒病毒(Flu)是引起全球性流行性感冒的病原体,病毒为正粘病毒科,单负股RNA病毒,通过飞沫传播[1]。人类流感病毒主要分为甲、乙、丙三种类型。对于甲型和乙型流感病毒检测具有较大临床意义,而丙型流感病毒主要侵袭婴幼儿,且以散发出现,一般不引起流行[2]。为了解近期本地区流感病毒随不同季节的流行情况,作者对1648例疑似患者进行流感病毒抗原的筛查检测,现报道如下。 1?资料与方法 1.1?临床资料?2017年3月至2018年2月本院发热 甲型和乙型流感病毒抗原快速检测结果分析 钱亚琼茅利明章海峻张利群 作者单位:312030?浙江省绍兴市中心医院 and?malignant?adnexal?masses.?J?Ovarian?Res,?2016,9(1):43. [2] N agy?B?Jr,?Krasznai?ZT,?Balla?H,?et?al.?Elevated?human?epididymis?protein?4?concentrations?in?chronic?kidney?disease.?Ann?Clin? Biochem,2012,49(Pt4):377-380.? [3] S tevens?PE,?Levin?A,?Kidney?Disease:?Improving?Global?Outcomes?Chronic?Kidney?Disease?Guideline?Development?Work?Group? Members.?Evaluation?and?management?of?chronic?kidney?disease:? synopsis?of?the?kidney?disease:?improving?global?outcomes?2012? clinical?practice?guideline.Ann?Intern?Med,2013,158(11):825-30.[4] Gündüz?UR,?Gunaldi?M,?Isiksacan?N,?et?al.?A?new?marker?for?breast?cancer?diagnosis,?human?epididymis?protein?4:?A?preliminary? study.?Mol?Clin?Oncol,2016,5:?355-360.?[5] F an?Q,?Luo?G,?Yi?T,?et?al.?Diagnostic?value?of?urinary?to-serum?human?epididymis?protein?4?ratio?in?ovarian?cancer.?Biomed? Rep,2017,7(1):67-72. [6] L evey?AS,?Stevens?LA,?Schmid?CH,?et?al.?CKD-EPI(Chronic?Kidney?Disease?Epidemiology?Collaboration):?A?new?equation? to?estimate?glomerular?filtration?rate.?Ann?Intern?Med,2009,150:? 604-612. [7] L v?YW,?Yang?L,?Zhang?M,?et?al.?Increased?human?epididymis?protein?4?in?benign?gynecological?diseases?complicated?with?chronic? renal?insufficiency?patients.?Genet?Mol?Res,2015,14:?2156-2161.[8] L armour?KE,Maxwell?AP,Courtney?AE.?Improving?early?detection?of?chronic?kidney?disease.?Practitioner,2015,259(1779):?19-23,2-3. ·流行病学调查·

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