大鼠原位肝移植模型手术并发症的分析

肝胆外科杂志２００８年１０月第１６卷第５期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，１６。Ｎｏ．５，Ｏｃｔ．２００８３５５

大鼠原位肝移植模型手术并发症的分析

汪泳，宇汝胜，周晓俊，钱海鑫

【摘要】目的分析大鼠原位肝移植模型建立中手术并发症的发生原因，以制订防治措施，提高移植成功率。方法用ｓＤ大鼠作为供、受鼠，在Ｋａｍａｄａ等的袖套法大鼠肝移植模型的基础上改进，施行原位肝移植７０例，对预实验中并发症的发生情况进行统计，统计在实验中的并发症发生率，并进行对比分析。结果预实验３０只大鼠并发症发生率为７０％，显著高于正式实验（１２．５％）（Ｐ＜０．０５）。结论实验中发现并及时总结并发症的发生情况，通过改进手术方法和技巧，可显著提高正式实验的手术成功率及大鼠存活率。

【关键词】原位肝移植；大鼠并发症；分析预防

【中图分类号】Ｒ５７５【文献标识码】Ａ【文章编号】１００６－４７６１（２００８）０５－０３５５－０３

ＣＯＭＰＬＩＣＡ＂ｌＩＯＮＳＩＮＳＥＴＴＩＮＧＵＰＴＨＥＭＯＤＥＬＯＦＯＲＴＨＯＴＯＰＩＣＬＩＶＥＲＴＲＡＮＳＰＬＡＮＴＡＴＩＯＮＩＮＲＡＴ（ＷＡＮＧｙｏ增，ＹＵＲｕ—ｓｈｅｎｇ，ＺＨＯＵＸｉａｏ－ｊｕｎ，ｅｔａ１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅｆｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｕｚｈｏｔｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｔｈｅＫｅｙＬａｂｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙｏｆＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，Ｃｈｉｎａ）

【Ａｂｓｔ阳ｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｕｍｍａｒｉｚｅｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｓｅｔｔｉｎｇｕｐｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｒａｔ，ａｎａｌｙｓｅｔｈｅ

ｃａｕｓｅｓａｎｄｔａｋｅｓｅｔｐｓｔＯｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｒａｔｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ７０ＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｂｅｄｏｎｏｒｓａｎｄ

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ｉｎｇｔｏｍｏｄｉｆｉｅｄｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ

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大鼠原位肝移植（ｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ－ｔｉｏｎ，ＲＯＬＴ）是肝脏移植基础研究的重要手段之一。针对模型建立过程中，手术本身的并发症影响手术成功率，我们在预实验中参考ｋａｍａｄａ…“二袖套法”并稍作改进，及时发现并发症，分析其原因，提出改进措施，使操作更简单，无需手术显微镜，术后成活率更高，为建立稳定的大鼠原位肝移植模型提供参考。

１材料和方法

１．１实验材料

１．１．１实验动物

健康ｓＤ大鼠共１４０只，重２３０～２５０ｇ，均由苏州大学动物实验中心提供。分为预实验组６０只

【基金项目】江苏省自然科学基金资助项目（ＢＩ（２００７０５７）

【作者单位】苏州大学第一附属医院，江苏省临床免疫学重点实验室，苏弼２１５００６

【作者简介】汪泳，男，博士，副主任医师。研究方向：普通外科。

【收稿只期】２００８—０４—１０

Ｉ修圊日期】２００８—０５—１０

（供体３０只），实验组８０只（供体４０只，受体４０只），供体体重小于受体约１０ｇ。肝下下腔静脉套管长约３．５ｍｉｎ，内径１．９ＩＩｌｍ，门静脉套管长度３．２ｉｎｍ，内径１．６ｍｉｌｌ。胆管插管长度４．５Ｂｉｎ，内径０．７ｍｍ。外壁均加刻凹槽。仪器：湿微手术器械１套，双权电凝器１台。受体手术前禁食１２ｈ。

１．２手术方法

１．２．１供体手术

采用氯胺酮腹腔注射麻醉，仰卧位，固定四肢，碘伏消毒。取腹部“十”字切口入腹，充分暴露肝脏。电凝切断右肾上腺静脉，暴露胆总管，剪开胆总管前壁，近端插人胆总管支撑管并固定。游离并电凝切断幽门静脉，经腹主动脉持续用０～４ｑＣ林格氏液灌注肝脏，以保持供肝低温（乳酸钠林格氏液含肝素１２．５Ｕ／ｍ１）。灌注压力为６０ｃｍ水柱，流速约３ｍｌ／ｍｉｎ，经胸腔剪开肝上下腔静脉，平右肾静脉开口远端剪断肝下下腔静脉，使灌注液／顺利流出，分离切断肝周韧带，切断肝上下腔静脉周围膈肌，均匀灌注肝脏至淡土黄色，剪断门静脉，取出供肝，置入０～４℃保存液中。

万方数据

３５６肝胆外科杂志２００８年１０月第１６卷第５期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，１６，Ｎｏ．５，Ｏｃｔ．２００８

１．２．２修肝

先修剪门静脉肇上的脂肪组织，将套管套在门静脉外，用娃微镊固定套管，再将门静脉外翻套在套管外，用８—０号丝线结扎固定，同法安装肝下下腔静脉套管。修剪肝上下腔静脉周围膈肌，应保持膈肌腔静脉孔的完整。

１．２．３受体手术

麻醉后仰卧位并固定｝『ｑ肢，腹部消毒。取右肋缘下切订进腹，游离、电凝歹仁切断右肾上腺血管；顺时针方向游离肝脏，电凝左膈静脉和肝后与食管的交通Ｉｆ『Ｌ管；电凝并切断肝动脉，游离胆总管，在分叉处切断，游离门静脉。微血管夹紧贴有肾静脉上方阻断肝下下腔静脉。于肝门处阻断门静脉，无肝期计时，在门静脉分叉处穿刺，缓慢注入４０。Ｃ贺斯液３ｍｌ左右，用小Ｓａｔｉｎｓｋｙ钳阻断肝Ｅ下腔静脉，橡皮泥固定钳末端，紧贴肝缘断肝卜下腔静脉、门静脉和肝下下腔静脉，移出受体肝脏，供肝原位置入，８－０血管缝线吻合肝上上腔静脉，吻合结束前用肝素生理盐水冲洗静脉腔，排气后拉紧缝线作结。袖套法吻合门静脉及肝下下腔静脉。去除阻断后，肝脏迅速变红，立即用温生理盐水复温。然后行胆管插管并结扎，将肠管复位，按层缝合腹壁。移植成功的大鼠术毕即醒，能翻身，角膜反射炙敏。灯光保温ｌｈ，６ｈ后町进水，不禁食，３ｄ后单笼喂养。

２结果

４０次正式实验中，３５例术后存活＞２ｄ，手术成功率８７．５％。失败的５例中２例因Ｉ、Ｊ静脉套管脱落，２例因肝上下腔静脉出ｍ，ｌ例凶肝上下腔静脉血栓而死亡。供体手术时间平均为２５ｍｉｎ，体外修肝时间平均８ｍｉｎ，无肝期时间平均２１ｍｉｎ，受体手术时间平均６０ｍｉｎ统计学方法：两组间比较采用ｘ２检验，以Ｐ＜０．０５为差异有显著性统计学意义。

３讨论

大鼠原位肝移植模型的建立是一种难度较大的手术，不仅需要熟悉大鼠解剖及具备显微外科手术技巧，而且必须注重同手术期的处理。在实验进程中，随着操作技巧的不断提高，及时发现同手术期并发症的发牛，积极采取相应预防措施，并发症便会随之下降，显著提高后期实验成功率。

３．１术中主要死亡原因的预防及处理

术中主要死亡原因是麻醉意外、出血、血栓形成和ｆｆＩＬ管扭曲等旧“Ｊ。氯胺酮腹腔麻醉镇痛与肌肉松驰效果满意，心肺抑制轻微，对氧和二氧化碳分压影响较小及肝毒性较小等优点，符合肝脏移植的麻醉要求，且一次性给药，操作方便。但氯胺酮麻醉的个体差异甚大，麻醉过深可导致呼吸抑制，甚至呼吸、心跳骤停。尤其受体大鼠麻醉过深严重影响术后生存率。预防麻醉意外的最好方法是：严格掌握麻醉剂的用量，初次给予适量的麻醉剂，麻醉浅时可追加剂量。对受体，麻醉深度以切皮及分离肝动脉时，大鼠轻微反应为好。

出血多见于吻合口处，吻合时保持适当的边距和针距、拉线松紧适当是避免吻合口出血的关键。因此缝合时必须保证绝对无张力；针距边距必须适当；前壁缝合结束前务必冲尽血管内气泡，以免造成空气栓塞及Ｆ腔静脉血液同流障碍；打结时不可将缝线收得过紧，以免造成打结处血管壁坏死及吻合口狭窄。

熟练的手术操作，缩短手术时间，可预防血栓形成。其次，要防止血栓形成，也应尽量避免术中钳夹血管壁造成ｍ管内膜的损伤。另外，在门静脉和肝下下腔静脉套管前，轻微松开ＩＩＩＬ管夹，排出血栓或含微血栓的血液少许，可减少血栓的形成。而受体全身肝素化并不能明显减少血栓形成，相反，还增加术中出血。置入套管前仔细辨认套管的正确位置和固定的操作流程，能完全避免血管扭曲的发生。

３．２术后主要死亡原因的预防及处理

术后主要死亡原囚足脱水、休克、腹腔感染、肝脓肿和胆道梗阻等”一Ｊ。受体手术期间肠管及腹腔暴露，体液丢失，无菌冰水降低体温，对动物苏醒及血流动力学恢复极为不利。因此，肠管用温盐水纱布包裹，问断复位防止血管扭曲而造成肠管缺血再灌注损伤。手术结束前，可用等渗盐水多次灌洗腹腔，尽快复温。此外，大鼠承受手术打击后对机体各系统均存在影响，如体温不高、呼吸减慢、食欲降低；活动能力降低和易于感染等。因此，术后保温、给氧、营养支持可以提高机体抵抗力，不能进食者建议皮下或静脉注射补充葡萄糖盐水，可以防止脱水、休克等严莺后期并发症的发生。

腹腔感染及肝脓肿的发生可通过改善手术环境

万方数据

肝胆外科杂志２００８年１０月第１６卷第５期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｐａｗｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，１６，Ｎｏ．５，Ｏｃｔ．２００８３５７

以及术后饲养环境而减少，也可使用抗生素预防。

胆道梗阻多由于胆管扭曲、钳夹胆管、胆管插管过细或过长。保留受体左、右肝管有利于插管前确认胆管方向，可有效减少胆管扭曲的发生，同时，自左、右肝管汇合、处插管，左、右肝管作为牵引，可避免钳夹胆管。胆管插管过细或过长，胆汁流通不畅，易发生梗阻。插管长度４ｍｍ左右，直径０．７～０．８ｍｍ，一般不会引起梗阻。选择一片血供好的大网膜组织覆盖于月日管吻合”］，为胆管提供充足的血供以防胆管坏死，发生月日漏。

总之，ＲＯＬＴ是一个极为精细、复杂手术，每一个细节对手术的成功都是至关重要的。大鼠的质量、精细的手术操作及细心的围手术期管理是决定大鼠原位肝移植成败的关键因素。通过改进、简化ＲＯＬＴ术操作，提高手术成功率，为进一步研究打好基础。

参考文献：

［１］ＫａｍａｄａＮ，ＣａｌｎｅＲＹ．ＡＳＲｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｌｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒ－

ｔｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔｓ［Ｊ］．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（１）：６４—６９．［２３ＹａｎｇＮ，ＹａｎｇＧＳ，ＱｉＩｌＪＷ，ｅｔａ１．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｒｅｄｕｃｅｄｓｉｚｅｈｅ－

ｐａｔｉｃｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｓｏ，ＰＬＡ，２００３，１８（４）：２３５—２３６．

［３］刘立新，彭方兴，张英男，等．改良法大鼠原位肝移植死亡冈素分析及对策［Ｊ］．中国普外基础与临床杂志，２１３０５，１２（２）：１２０—１２２．［４］邵堂雷，蔡伟耀，杨．ｎ平，等．二种大鼠供肝原位肝移植术后近期死因的分析［Ｊ］．中华肝胆外科杂志，２００２，８（１１）：６６４—

６６６．

［５】刘金彪，郑树国，张玉君，等．提高大鼠原位肝移植手术质量的技巧和注意事项［Ｊ］．中华器官移植杂志，２００２，２６（８）：５００—

５０２．

（本文编辑赵红１１１）

胆囊结石合并胆囊内瘘的诊治体会

晏建军１，黄胜２，曹杰１，严以群１

【摘要】目的分析总结胆囊结石合并胆囊内瘘的临床特征和诊治经验。方法回顾性分析２０例胆囊结石合并胆囊内瘘患者的临床资料。结果２０例患者临床症状无明显特殊，其中胆囊十二指肠瘘９例，胆囊结肠瘘５例，胆囊胃瘘４例，胆囊胆总管瘘２例。Ｂ超是目前首选的检查手段，其中１６例提示胆囊呈萎缩状。本组仅有５例术前疑诊为胆囊内瘘（２５％），其中１例行钡灌肠诊断为胆囊结肠瘘，２例Ｂ超示胆囊内积气，ｌ例行腹部平片示胆管内积气，诊断月Ｈ囊结肠、胃瘘，１例行ＣＴ检查诊断胆囊十二指肠瘘。治疗均切除胆囊后，行十二指肠瘘修补术５例，十二指肠瘘修补术＋胃大部切除术４例；横结肠癌根治性切除１例，结肠瘘修补４例，胃瘘修补４例，胆总管修补十Ｔ管引流ｌ例，胆总管空肠Ｒｏｕｘ—ｅｎ－Ｙ吻合术ｌ例。结论胆囊内瘘治疗原则仍然是切除病变的胆囊、切断瘘管、修补瘘口、酌情胆道探查、Ｔ管引流、解除消化道梗阻。

【关键词】胆囊内瘘；诊断；治疗

【中图分类号】Ｒ５７５．６【文献标识码】Ａ【文章编号】１００６－４７６１（２００８）０５－０３５７－０３

ＤＩＡＧＮＯＳＩＳＡＮＤＴＲＥＡＴＭＥＮＴＯＦＧＡＬＬＢＬＡＤＤＥＲＳＴＯＮＥＷＩＴＨＩＮＴＥＲＮＡＬＧＡＬＬＢＬＡＤＤＥＲＦＩＳＴＵＬＡ（ＹＡＮＪｉａｎ－ｊｕｎ，ＨＵＡＮＧＳｈｅｎｇ，ＣＡＯＪｉｅ，ｅｔａ１．ＥａｓｔｅｒｎＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ

２００４３８，Ｃｈｉｎａ）

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｌｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅａｎｄｓｕｍｍａｒｉｚｅｔｈｅｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｇａｌｌ—ｂｌａｄｄｅｒｓｔｏｎｅｗｉｔｈｉｎｔｅｒｎａｌｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒｆｉｓｔｕｌａ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆ２０ｃａｓｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｒｅｉｓｎｏｔｙｐｉｃａｌｃｌｉｎｉｃａｌ

ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｉｎａｌｌｐａｔｉｅｎｔｓ，ｍｏｓｔｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｈａｄｒｉｇｈｔａｂｄｏｍｉｎａｌｐａｉｎａｃｃｏｍｐｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｒｉｇｈｔｓｈｏｕｌｄｅｒｏｒｆｉｇｈｔｂａｃｋｐａｉｎ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ９ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｄｕｏｄｅｎａｌｆｉｓｔｕｌａｃ嬲ｅ８，５ｃｙｓｔｉｃｏｌｉｃｆｉｓｔｕｌａｓ，４ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｇａｓｔｒｉｃｆｉｓｔｕｌａｓ．ａｎｄ２ｃｙｓｔｉｃｈｏｌｅｄｏｃｈｉｆｉｓｔｕ—ｌａ．Ｂｕｈｒｏｓｏｕｎｏｇｒａｐｈｙｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｃｈｏｉｃｅｏｆｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ．ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒａｔｏｎｅＷａｓｆｏｕｎｄｉｎａｌｌｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄａｔｒｏｐｈｉｃｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒＷａｓｆｏｕｎｄｉｎ１６ｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｔｈｅＢｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ．Ｉｎｔｈｉｓｇｒｏｕｐ，ｏｎｌｙ５ｉｎｔｅｒｎａｌｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒｆｉｓｔｕｌａｓｗｅｒｅｄｉａｇｎｏｓｅｄｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｏｔｈｅｒｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｉｎｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ａｌｌｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅａｃｃｅｐｔｅｄｃｈｏｌｅｃｙｓｔｅｃｔｏｍｙ，ａｔｔｈｅｓａｎｌｅｔｉｍｅ，５ｐａｔｉｅｎｔｓａｃｃｅｐｔｅｄｄｕｏｄｅｎａｌｆｉｓｔｕｌａｒｅｐａｉｒ，４ｐａ—ｔｉｅｎｔｓａｃｃｅｐｔｅｄｄｕｏｄｅｎａｌｆｉｓｔｕｌａｒｅｐａｉｒａｎｄｇａｓｔｒｉｃｒｅｓｅｃｔｉｏｎ，１ｐａｔｉｅｎｔａｃｃｅｐｔｅｄｔｒａｎｓｖｅｒｓｅｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｅｒａｄｉｃａｌｒｅｓｅｃｔｉｏｎ，４ａｃｃｅｐｔｅｄｃｏｌｏｎｆｉｓｔｕｌａｒｅｐａｉｒａｎｄ４ａｃｃｅｐｔｅｄｇａｓｔｒｉｃｆｉｓｔｕｌａｒｅｐａｉｒ，１ｐａｔｉｅｎｔａｃｃｅｐｔｅｄｃｏｍｍｏｎｂｉｌｅｄｕｃｔｆｉｓｔｕｌａｒｅｐａｉｒａｎｄＴ－ｔｕｂｅｄｒａｉｎａｇｅ，ｌｐａ－ｔｉｅｎｔａｃｃｅｐｔｅｄｅｈｏｌｅｄｏｃｈｏｊｅｊｕｎｏｓｔｏｍｙ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆｉｎｔｅｒｎａｌｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒｆｉｓｔｕｌａｉｎｃｌｕｄｅｓ【作者单位】１．上海第二军医大学东方肝胆外科医院，上海２００４３８

２．浙江省象山县人民医院

【作者简介】晏建军，男。研究方向：普通外科。

【收稿日期１２００８—０７—１１

【修回日期】２００９—０９一０１

万方数据

大鼠原位肾脏移植模型的建立

中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 3347 Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China Mai Hai-xing★, Master, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China maimark24@ https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, Correspondence to: Chen Li-jun, Doctor, Professor, Master’s supervisor, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China chenlijun829@ https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, Received: 2010-10-26 Accepted: 2010-12-02 解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 麦海星★，男，1981年生，广东省阳江市人，汉族，2008年解放军第四军医大学毕业，硕士，主要从事肾脏移植的研究。 maimark24@ https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, 通讯作者：陈立军，博士，教授，硕士生导师，解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 chenlijun829@ https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, 中图分类号:R617 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2011)18-03347-04 收稿日期：2010-10-26 修回日期：2010-12-02 (20101026009/W ? W) 大鼠原位肾脏移植模型的建立★ 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军 Rat models of orthotopic kidney transplantation Mai Hai-xing, Qu Nan, Zhao Li, Huan Chen, Wang Ya-lin, Li Xue-chao, Li Jian-tao, Chen Li-jun Abstract BACKGROUND:There are many ways to prepare kidney transplantation models in rats; however, there are still many problems about operation time, transplantation effect and so on. OBJECTIVE: To study the microsurgical technique of establishing a reliable rat model of orthotopic kidney transplantation. METHODS: Kidney transplantation was performed from SD to Wistar strain (allogeneic),the donor’s artery and renal vein were put on the self-make rubber septum and underwent the end to end anastomosis surgeon with the receptor’s arteriae renalis and renal vein. After that, the donor’s bladder valva was inosculated with the receptor’s bladder. All the rats were divided into two groups: control group and Cyclosporin A (CsA) group, each group included 30 rats. The control group received 1 mL D-hanks each day after transplantation; the CsA group received subcutaneous injection of CsA for 15 mg/kg. The serum creatinine levels were observed at days 3, 5 and 10 after transplantation, pathological changes were also observed at 10 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: Rat orthotopic kidney transplantation was performed in 60 rats, and the successful rate was 85%. The serum creatinine level in the CsA group was lower than that in the control group (P < 0.05), but the survival time in the CsA group was longer than that in the control group (P < 0.05). Allografts of the control group exhibited typical severe acute rejection. It is indicated that this rat model of kidney transplantation is a reliable model with good reproducibility and high achievement ratio. Mai HX, Qu N, Zhao L, Huan C, Wang YL, Li XC, Li JT, Chen LJ.Rat models of orthotopic kidney transplantation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3347-3350. [https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, https://www.wendangku.net/doc/481166928.html,] 摘要 背景：目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。 目的：探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。 方法：以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组，对照组移植后每日腹腔内输注1 mL D-hanks 液；环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A 15 mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3，5，10天测定血肌酐值，移植后第10天，光镜下观察移植肾病理改变。 结果与结论：大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5，10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P < 0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P < 0.05)，移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好，具有较高的成功率。 关键词：模型，动物；肾；移植；显微外科；大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.028 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军.大鼠原位肾脏移植模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3347-3350. [http://www.crte https://www.wendangku.net/doc/481166928.html, https://www.wendangku.net/doc/481166928.html,] 0 引言 大鼠是目前器官移植实验中最常用的实验动物[1-5]。由于大鼠的肾血管短，手术视野小，端端吻合难度较大，因而以往实验大多采用端侧吻合，但这须阻断大鼠体循环，导致其下半身在吻合期间处于缺血状态。当开放血管夹后，将发生严重的缺血-再灌注损伤[6-9]。有的方法采用带有与供肾动脉和肾静脉相连的主动脉和下腔静脉片，分别与受者肾动脉、肾静脉端端吻合，膀胱与膀胱吻合，但术中往往发现主动脉与肾动脉管径相差甚远，吻合后容易漏血。另一种方法利用供、受体动、静脉袖口式套叠，此方法提高了受体的存活率并缩短了手术时间，但因所用的套管管径有限，在翻转血管壁形成袖口时，使血管腔变狭小，影响移植肾脏血流的恢复，腹腔静脉与肾静脉作端端吻合时，因静脉壁薄弱常引起静脉壁撕裂而导致手术失败。 不阻断大鼠体循环的肾血管端端吻合原位肾移植技术的建立，避免了上述的缺点，采用端端吻合法减少了供肾的缺血-再灌注损伤，术后动物的存活率较采用端侧吻合者有明显提高[10-12]。 实验采用供体肾动脉、肾静脉分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合的方法。施行大鼠肾移植。

稳定大鼠原位肝移植模型的建立

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２００９年５月第６卷第１３期 图１腹主动脉灌注图２修肝及套管 圈３肝脏血管系统吻合完成 当延长供肝的冷缺血时间并不明显增加术后死亡率及并发症的发生。而术中过多地牵动供肝则会明显影响供肝的质量嗍。手术分离时尽可能去除血管壁周围的筋膜、结缔组织等。防止再通后造成套管腔狭窄及血栓形成。 ３．２供肝灌注 先松开门静脉夹，再松开肝下下腔静脉夹，均缓慢松开。灌洗压力过大容易引起供肝的细胞器肿胀、细胞坏死和淋巴细胞浸润，导致细胞内钙超载和能量代谢障碍．从而影响移植肝的质量。本研究采用的是经腹主动脉的灌注法。以１￣２ＩｌｉＯｎ的速度灌注腹主动脉，灌注液体经过肝动脉和门静脉系统回流入肝脏，从而保证肝脏得到充分、缓慢而均匀的灌注，提高供肝的质量。 ３．３袖套管放置 套管必须保证硬度适中、内壁光滑。由于不重建肝动脉，而胆道血供多由肝动脉供应．故供肝胆总管不应保留过长．有利于减少胆道并发症。在脾静脉水平安放门静脉袖套较为方便。在左肾静脉水平剪断ⅣＣ。有利于袖套的翻转。 ３．４受体手术 笔者在进腹时习惯取中上腹横切口，而此过程中笔者建议结扎左右腹壁下静脉，首先该血管相对较粗大，出血会影响术野，其次该血管的出血量相对于只有１２一１３“血容量的大鼠来讲会是术后出血性休克死亡的重要原因。受体术前１５ｒｎｉｎ常规给予阿托品对于预防术后肺炎、肺不张有较好的效果ｆＩｑ。供肝恢复血供后对于肝门部的处理，使用血供较好的大网膜覆盖，既有加压防止出血、使胆漏和胆道感染局限化的作用，同时可以适当供给胆道血供，可以预防胆道并发症的发生【ｌｌｌ。受体阻断门静脉后，经门静脉注入羟乙基淀粉 ?论著? 注射液可将肝内残存的血液及时推人体循环。起到“自身输血”的作用。在ＳＶＣ的吻合过程中，缝线不宜过紧。防止血管狭窄。供肝门静脉及ＩＶＣ“套管法”吻合前，必须排出阻断夹后方的一段积血。以防止血栓栓塞。Ｐａｅｈｅｃｏ等旧研究表明，随门静脉淤血时间的延长。再灌注后闲肠道内菌群移位而使内毒素骤升。如此可激活肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，产生大量的ＴＮＦ—Ｏｔ及一系列的级联反应。从而对供肝及受者的肺脏产生损伤１７．Ｌａ－ｌ川。同时．ＩＶＣ阻断时间的延长会导致血钾浓度显著升高。在供肝恢复血供的过程中．应缓慢放开无创血管夹，而且应按顺序先放开门静脉。后放开肝上上腔静脉，尽量使心脏逐渐适应血容量的增加。 ４结论 重复是技巧之母．所以大量的练习是提高手术技巧的关键。认真、耐心、仔细的手术是成功的关键。对于供肝的提早冷缺血处理及对供肝植入后的细心操作。使得手术成功的机会大大增加。 【参考文献】 【１】ＫａｍａｄａＮ，ＣａＭｅＢＹ．ＡｓｕｒｇｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｆｉｖｅｈｕｎｄｒｅｄｔｈｉｒＩｙｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｒａｔ【Ｊ】．Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９８３，９３（Ｐｔｌ）：６４－６９． 【２】宇汝胜，汪泳，钱海鑫．大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨阴．肝胆胰外科杂志．２００８．２０（１）：７－９． 【３】权毅，付华。徐亮．大鼠原位肝移植模型的建立和术式改进阴．中国现代医学杂志．２００６．１６（２）：２２６－２２９． 【４】ＷａｎＣＤ，ＣｈｅｎｇＲ，ＷａｎｇＨＢ。ｅｌａ１．１ｒａｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｅｔａｏｆｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｒａｔｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ陬ＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＰａｎｃｒｅａｔＤｉｓＩｎｔ，２００８，７（１）：２９—３３． 【５】汪根树。陈规划，朱晓峰．大鼠小体积原位肝移植模型的建立田．中国实验诊断学，２００６，（１０）：儿１９－１１２２． 【６】贾凯，徐钧．二袖套法大鼠原位肝移植术的改进们．山西医科大学学报，２００６，３７（４）：３５６－３５８． 【７】ＴｉａｎＹ，ＪｏｅｈｕｍＷ，Ｇ∞晒ｅｖＰ，ｅｔａ１．Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＴＮＦ－Ｍｐｈａｓｉｇｎａｌｉｎｇｍｅｄｉａｔｅｓｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｅａｒｔｅｒｉａｌｉｚｅｄｓｍａｌｌ—ｆ打一ｓｉ∞ｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩｎｏｕｏｅ叽ＰｌｏｃＮａｉｌＡｃａｄＳｃｉ．２００６，１０３（１２）：４５９８－舢奶． 【８】ＵｍｔａＫＮａｎｙｅｎＢ，Ｂｍｕｈ＆ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｒａｒｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｌｌｅｘｔｅｎｄｅｄｃｏｌｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ：ｒｏｌｅ０ｆｐｏｒｔａｌｖｅｉｎｃｌａｍｐｉｎｇｔｉｍｅＩＪ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２８（２）：３６６－３７３． 【９】邵堂雷，蔡伟耀，张明钧，等．影响肝移植鼠近期存活的术中因素分析叨．上海第－－ｇｇ科大学学报，２００１，２１（３）：２２３—２２５． 【１０】彭勇，龚建平，刘长安，等．大鼠原位肝移植模型制作过程中麻醉方法的选择【Ｊ】．中华普通外科杂志，２００３，１２０）：６７３－－６７６． 【１ｌ】常顺伍，郑树森，梁廷波，等．大鼠原位肝移植术中胆道重建方法的改进【Ｊ】．中华器官移植杂志２００７，（１）：１３—１６． 【１２】ＰａｅｈｅｅｏＥＧ，ＧｏｒａｅａＭＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｓＧ凡ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｉｖｅｒｉａｅｈａｅｍｉｅｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｃｉｒｒｈｏｔｉｃｒａｔｓｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏｈｅｐａｔｉｃｉｓｅｈａｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ【Ｊ】．ＡｅｔａＣｉｒＢｒａｓ，２００６，２１：２４－２８． 【１３】ＯｌｌｕｏｇｌｕＥ，ＫｅｒｅｍＭ，ＰａｓａｏｇｌｕＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｌａｙｅｄｅｎｅｒｇｙｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ０ｆｉｓｃｈｅｍｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎｈｅｐａｔｉｃｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ仞．ＥｕｒＳｕｒｇＢｅｓ，２００６，３８：１１４－１２１． 【１４］Ｋａｓｈｔｉ气Ｍｅｈｒａｂｉ气ＰａｈｌａｖａｎＩＳ，ｅｔａ１．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅ呲忉．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｅｔ２００５，３７：１８５－１８８． （收稿日期：２００９－０２—１７） ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中目医琦导囊３５　万方数据

大鼠原位肾脏移植模型

大鼠肾移植模型制作 大鼠肾移植模型目前仍是肾移植实验研究中非常有价值和常用的动物模型。这一模型具有许多优点：显微外科技术的应用使建立稳定可靠的实验动物模型成为可能；大鼠繁殖快，成本较低；有大批基因型明确的纯系大鼠供选择如SD大鼠、Wistar大鼠等。这一术式的基本方法如下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、实验动物及麻醉 根据实验目的选择同一品系或不同品系的大鼠，一般8～10周龄，体重150～250g，供鼠雌雄不限，受鼠最好为雄性大鼠，供受者体重相仿。腹腔注射0.3％戊巴比妥2ml/100g或氯胺酮 10mg/100g体重或已醚吸入麻醉均可。 三、供肾切取术 腹部正中切口，切开皮肤、腹直肌和腹膜，充分暴露左肾，以湿纱布覆盖周围组织器官。 1.供肾血管游离：使用棉签和无齿眼科镊钝性分离左肾动静脉及其分支，游离与其连接的腹主动脉和下腔静脉，结扎肾上腺动、静脉。在游离完毕的左肾动脉上方和右肾动脉下方的腹主动脉部和腹主动脉远端及左肾静脉上下方的下腔静脉各以1号细丝线围绕，勿结扎。

2.左肾原位灌洗：以Lee氏夹阻断左肾动脉下方的腹主动脉血流，以血管钳夹闭腹主动脉和下腔静脉远端，在肾动脉以下的腹主动脉上切一小口插管，注入500u/ml肝素等渗盐水2ml使全身肝素化，然后相继结扎左肾动脉以上的腹主动脉和左肾静脉以下的下腔静脉，在左右肾静脉开口之间剪断下腔静脉，进行低温灌洗。用4℃等渗盐水10ml/min自腹主动脉插管处推注，灌洗5分钟，见左肾和附属血管完全苍白，停止灌注。 3.输尿管、膀胱分离：以小弯蚊式钳轻轻提起膀胱底，钝性分离膀胱和输尿管，并逐渐延伸至左肾门，注意适当保留部分输尿管周结缔组织（其内有输尿管滋养血管），整块剪下左肾肾血管、灌洗段腹主动脉和下腔静脉、左输尿管及膀胱，立即置入4℃平衡盐溶液中保存。 4.供肾处理：4℃平衡盐溶液冰浴中修剪供肾血管、输尿管和膀胱。把连接肾动脉的腹主动脉修剪成一3×2mm2的椭圆形动脉瓣，并将连接左输尿管的膀胱亦修剪成直径3mm的膀胱瓣。 四、供肾原位移植术 受者麻醉后，将肠管推向右侧，湿纱布保护内脏器官和周围组织，用自制拉钩牵引暴露左肾及其周围组织。 1.受者血管游离：如前述钝性分离左肾动、静脉及其分支，并分离此处下腔静脉、腹主动脉和左输尿管肾门端，仔细除去左肾动脉根部腹主动脉血管外结缔组织，并结扎此处腹主动脉分支。用眼科剪锐性分离左肾，4号丝线结扎肾动、静脉远心端和左输尿管肾门部，将连有左肾动脉根部的腹主动脉完全分离，小心去除血管外结缔组织，并结

大鼠辅助性原位肝移植的体会

【摘要】目的研究大鼠辅助性原位肝移植模型的手术技巧及术后并发症的预防。方法30只SD大鼠作供体。30只SD大鼠为受体。通过“袖套法”施行大鼠辅助性原位肝移植。结果24h存活率76％(19/25)；周存活率56％(14/25)。结论熟练的显徽外科技术是模型成功与否的关键。 【关键词】肝脏；移植；大鼠 Parital auxiliary orthotopic liver transplantation in rats LONG Guang-hui, XIAO Ping, XIE Yong, et al. Department of Hepatobiliary Surgery，Peking University Shenzhen Hospital，Guangdong，518036 [Abstract］Objective To investigate the method and technique of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in rats. Methods 30 cases of parital auxiliary orthotopic liver transplantation in SD rats were performed using cuf-tecnique and microsurgery method. The successful rate, operation time and complications were observed. Results The general successful rate was 90%, the survival rate of post-operation 24-hour and one week was 76％(19/25)and 56％(14/25)respectively. Conclusion Meticulous and skilled microsurgical technique is the key to successful operation. [Key words］liver; transplantation; rat 近年来，辅助性原位肝移植因其手术创伤相对较小、供体来源比较容易获取以及术后不必长期服用免疫抑制剂等优点已经越来越多地受到临床医生的重视[1]。但是，该该移植方法目前也有其一定的局限。其中又以供肝与移植肝功能竞争导致移植肝萎缩最为明显[2]。因此，建立动物辅助性原位肝移植模型了解供肝与移植肝功能竞争的机理是解决这一难题的重要研究手段。70年代大鼠原位肝移植模型获得成功后[3,4]。原位肝移植的动物模型已经逐渐成熟并被实验研究广泛采用。但是，辅助性原位肝移植的动物模型尚不多见。本实

大鼠肝脏移植模型制作

大鼠肝脏移植模型制作 大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。最初由Lee在1973年报道，经过许多学者的改进，其手术基本稳定，根据肝上下腔静脉吻合方式，大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”，下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。 一、手术器械 显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、供、受者大鼠的选择 根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠等不同品系的动物。 三、术前准备 供、受者术前禁食14h，自由饮水，采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法，提高手术的安全性，受者术前肌肉注射阿托品0.03mg，防治分泌物阻塞呼吸道。 四、供者手术 麻醉成功后，经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml，使供者全身肝素化。十字切口入腹，经腹主动脉穿刺灌洗供肝；灌洗前，剪开膈肌，阻断腹主动脉，离断胸腔段肝上下腔静脉，灌洗至流出液澄清为止，约需灌洗液20～30ml。游离肝下下腔静脉，分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉，自肠系膜上静脉置管，缓慢注入20ml含肝素的林格氏液，于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉，剪开胆总管前壁，近肝端插入外径1.0mm，长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm（可用硬膜外导管制成），结扎固定后远肝端离断之，分离结扎离断肝固有动脉；游离门静脉，结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉，于脾静脉下方离断门静脉，锐性分离肝周韧带，结扎左膈下静脉，绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜，保留2.0mm

大鼠心脏移植模型制作

大鼠心脏移植模型制作 大鼠心脏移植模型是研究移植排斥反应、器官保存和药物筛选的常用动物模型。由于此模型操作简单、能直接观察到移植物的状况，通过观测移植心是否搏动和/或心电图可以鉴别移植物的存活情况，耐受和排斥、成功和失败的标准明确。因而应用十分广泛。自20世纪60年代Abboll等创立心脏移植模型依赖，经过多次修改，目前受鼠操作、存活率均较以 前有很大的提高。 一、手术器械：显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。 二、供、受者大鼠的选择 根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠，小鼠－大鼠等不同品系的 动物。 三、麻醉 麻醉采用戊巴比妥钠50mg/kg体重腹腔麻醉的方法，可以以采用5%水合氯醛3ml/kg 体重，麻醉过浅时加乙醚吸入辅助、 四、供心切取手术 大鼠麻醉后仰卧位固定，用酒精消毒胸腹部，正中切口1次剪开胸腹部皮肤，暴露胸部，沿腹白线开腹，暴露腹主动脉和下腔静脉，并从下腔静脉缓慢注入2ml 含肝素的无菌生理盐水（25IU/L）全身肝素化，然后横断腹主动脉和下腔静脉放血，迅速打开胸腔，0℃～4℃预冷的平衡液不断淋浇心脏表面，并向胸腔加入少量冰屑，分别在靠近右心房处结扎并 切断下腔静脉和右上腔静脉，结扎右上腔动脉时将右心耳一起结扎。游离升主动脉、肺动脉和无名动脉，实施腹部心脏移植模型则在无名动脉分叉处剪断，如果是颈部心脏移植模型，于主动脉分出无名动脉的远端结扎切断主动脉，于靠近主动脉约1mm处切断无名动脉， 再在左右肺动脉分叉处剪断肺动脉，提起心脏，1次结扎左上腔、左肺和右肺静脉以及周围

大鼠原位肝移植步骤及详细说明

大鼠原位肝移植步骤及详细说明 动物案例 供体：Lewis大鼠、DA大鼠； 受体：BN大鼠 造模方法 二袖套一吻合法(门静脉和肝下下腔静脉行袖套法,肝上下腔静脉行吻合法) 供肝的获取 腹采用10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3ml/100g)，十字切口入腹，离断肝脏镰状韧带，将小肠移出腹腔外，以生理盐水纱布覆盖。游离胃小弯背腹侧的尾状叶盘状乳头突，近肝侧结扎并离断左膈下静脉，结扎并切断左肝至食管高位血管支，结扎右肾上腺静脉丛，并切断右肾动静脉。游离肝下下腔静脉至左肾静脉上缘，游离肝外胆管并行胆管内插管，经门静脉主干向肝脏内灌注含肝素50U 的4℃生理盐水10ml，行肝脏冷灌注。当肝脏变白时，在靠近左肾静脉入口处剪断肝下下腔静脉，形成灌注液流出道，在膈肌上方横断肝上、下腔静脉，将供肝取出，置于4℃生理盐水内。 血管袖套制备 在4℃生理盐水中将门静脉与肝下下腔静脉壁外翻，分别套在外径2.10mm和2.76mm的聚乙烯管上，用5-0丝线环扎固定，完成袖套制备。

具体步骤 大鼠麻醉后，上腹部直切口入腹，分步游离受体肝脏，游离完毕后将受体肝脏取出。将供肝自生理盐水保存液中取出置于受体原位，冰生理盐水纱布覆盖肝脏表面，以预置的7-0无损伤线吻合肝上、下腔静脉，吻合时，受体侧连同膈肌环一并缝合，先缝合后壁，从左侧开始，将缝线从血管外缝入腔内，在腔内连续缝合。针距控制在1mm，至右侧角时，将缝线穿出血管壁，在血管腔外与右侧角缝线打结。以同一缝线从右侧角连续缝合血管前壁，接近左侧角时，向肝上、下腔静脉内注入4℃生理盐水，驱出血管腔内的空气，至左侧角时，与原缝线打结。以弯血管夹在吻合口近肝侧钳夹肝上、下腔静脉，更换下小儿Satinsky心耳钳，检查吻合口是否出血。吻合成功后，经门静脉向供肝内灌注4℃生理盐水10ml，排除肝内的肝素盐水，夹闭肝下下腔静脉，将供肝门静脉套管插入受体门静脉内，开放门静脉及肝上、下腔静脉阻端夹，结束无肝期。肝下下腔静脉的吻合方法与门静脉相同，最后将供体胆管插入受体胆管插管内，按层缝合腹壁。 造模周期 约1h一对 模型成功率 95%以上

大鼠原位肝移植模型的手术技巧

大鼠原位肝移植模型的手术技巧作者：王振猛，唐乙，宋少华，陆智杰，王全兴，俞卫锋 【摘要】目的探讨建立稳定的大鼠原位肝移植模型的外科手术技巧，为研究肝脏缺血再灌注损伤提供技术支持。方法 110只雄性SD 大鼠随机配对后分别作为供体和受体，通过改良Kamada“二袖套”法施行大鼠原位肝移植。结果改良Kamada法建立大鼠原位肝移植模型共52例，7d 生存率88.5%，7例长期存活大于100 d。结论大鼠原位肝移植模型的建立需要极度的耐心和娴熟的手术技巧，模型的建立有助于研究肝脏缺血再灌注损伤，移植免疫及器官保存。 【关键词】原位肝移植；动物模型；大鼠 Abstract： Objective To improve the operation technique for orthotopic liver transplantation in rats, and illustrate the hepatic ischemia-reperfusion injury in future study.Methods One hundred and ten male SD rat were randomly paired as donor and receptor and were performed with orthotopic liver transplantation by modified Kamada’s two cuffs technique.Results As a result, 88.5% of the 52 rats with orthotopic liver transplantation survived more than 7 days and 7 ones survived longer than 100 days. Conclusion Extreme