猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的分子生物学与致病机理

动物医学进展,2007,28(7):94298

Progress in Veterinary Medicine

猪胸膜肺炎放线杆菌Ap x毒素的分子生物学与致病机理3

胡成名,文心田,曹三杰3,黄小波

(四川农业大学动科院动物传染病与基因芯片实验室,动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川雅安625014)

摘　要:猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(App)引起的猪的一种呼吸道传染病。到目前为止, A PP已经被分离鉴定出了15种血清型(1～15)。15种血清型的A PP能产生属于R TX毒素家族的4种Ap x毒素,分别为Ap xⅠ、Ap xⅡ、Ap xⅢ和Ap xⅣ。Ap xⅠ操纵子包含有Ap xⅠC、A、B、D4个基因;Ap xⅠ毒素含有13个富含甘氨酸的重复区。Ap xⅡ操纵子仅包括结构基因Ap xⅡA和激活基因Ap xⅡC,而无分泌基因;Ap xⅡ蛋白含有8个甘氨酸的序列重复。Ap xⅢ操纵子与Ap xⅠ操纵子相同,具有一个完整的操纵子;Ap xⅢ在N2末端有3个疏水区,在C末端部分有13个富含甘氨酸的区域。Ap x毒素的致病机理为先由没有活性的前体蛋白转变为有活性的Ap xA蛋白,再由有活性的Ap xA蛋白侵害细胞。

关键词:胸膜肺炎放线杆菌;Ap x毒素;分子生物学;致病机理

中图分类号:S852.619;S858.28文献标识码:A文章编号:100725038(2007)0720094205

胸膜肺炎放线杆菌(Acti nobacill us pleurop neumoni ae,App),原名胸膜肺炎嗜血杆菌(Haemop hil us pleurop neumoni ae,Hpp),属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属,后因为其表型与DNA杂交水平与放线杆菌属模式紧密相关,故后改名为胸膜肺炎放线杆菌。猪胸膜肺炎放线杆菌是一种革兰氏阴性杆菌,具有很高的致病性,猪群感染后常因无法得到有效救治而死亡,给世界各地的养猪业造成了重大的经济损失。受感染的猪急性症状表现为具有高死亡率的纤维素性肺炎和胸膜炎,慢性症状表现为可造成动物生长缓慢的肺损伤。已知的毒力因子有溶血素(Ap x)、荚膜多糖(Cap sularpolysaccharide, CP)、脂多糖(Lipopolysaccharide,L PS)、外膜蛋白(Outer membrane p rotein,OM P)、转铁结合蛋白(Transferrin binding p rotein,Tbp)、蛋白酶(Prote2 ase)、渗透因子(permeate factor,PF)、黏附素等[122]。1　Ap x毒素概述

1.1　Ap x毒素的种类

Ap x毒素属于R TX毒素(repeat s in toxin)家族,在所有的15个App血清型中共分泌4种Ap x 毒素,分别为Ap xⅠ、Ap xⅡ、Ap xⅢ和Ap xⅣ,四者都属于细胞孔形成毒素。前3种Ap x毒素既是App致病的主要毒力因子,又是App主要的保护性抗原。J ansen R等(1995)发现不分泌或缺失Ap x的App菌株对小鼠和猪均不致病,缺失株补充了Ap x的结构基因和分泌基因后可恢复原来的毒力,而且气管灌注可以直接引起动物的临诊症状和肺部病变。感染耐过猪可以抵抗其他血清型的再次感染,许多能产生毒素的弱毒活苗都具有交叉保护力,均是由于Ap x毒素能诱导机体产生抗毒素的抗体。

1.2　Ap x毒素与血清型

Frey J等(1993)证明Ap xⅠ具有很强的溶血活性和细胞毒性,分子质量为105ku,它对猪的肺泡巨噬细胞和中性粒细胞也具有很强的细胞毒性作用,由毒力较强的血清1、5、9、10和11型表达并分泌。Ap xⅡ分子质量为103ku,具有弱的溶血活性和中度的细胞毒性,对猪的肺泡巨噬细胞和中性粒细胞也具有一定的细胞毒性作用,A PP的15个血清型中除了10型以外都可以分泌Ap xⅡ毒素[3]。Ap xⅢ分子质量为120ku,没有溶血活性,但有很强的细胞毒性,如对肺泡巨噬细胞和中性粒细胞具有很强的细胞毒性作用,存在于A PP血清型2、3、4、6、8中。Ap xⅣ由Schaller A等于1999年在A PP 中首次发现,其分子质量为202ku,含有1805个氨基酸,理论等电点为4.81,具有微弱的溶血活性而无细胞毒性。15个血清型均能分泌Ap xⅣ,目前还无法在体外检测到该毒素。

3收稿日期:2007204223

作者简介:胡成名(1984-),男,江西赣州人,硕士研究生,主要从事畜禽传染病研究。3通讯作者

2　Ap x 毒素的分子生物学特性2.1　Ap x 毒素的基因

2.1.1　Ap x Ⅰ的基因　Ap x Ⅰ由Ap x Ⅰ操纵子所

编码,该操纵子包含有Ap x ⅠC 、A 、B 、D 4个基因,分别为激活基因ap x ⅠC 、结构毒素基因ap x ⅠA 和两个分泌基因ap x ⅠB 和ap x ⅠD 。在大多数R TX 操纵子中都含有这4个基因,其中C 基因起编码毒素翻译后激活蛋白的作用,A 基因起编码结构毒素蛋白前体的作用,BD 基因则是负责编码毒素分泌所必须的、与蛋白质连在一起的膜。Ap x ⅠC 、A 、B 、D 基因的核苷酸序列在血清型中有高度相似性,只有Ap xIA 基因有多样性,易导致C 末端17和37处氨基酸发生变化产生两种突变的Ap xIA 蛋白[4]。在血清型1、5a 、5b 、9、10和11中存在完整的Ap x Ⅰ的操纵子,可表达Ap x Ⅰ。Frey J 等(1993年)通过克隆以及限制性酶切分析表明,Ⅰ、9和Ⅱ型的ap xI 基因的同源性很高,测序结果也证实了这一点。并且,他们于1995年报道血清型5a 、5b 和10的Ap x Ⅰ基因的3′端虽然不一样,引起一些差异,但其所分泌的Ap x Ⅰ蛋白的免疫性仍然相同。2.1.2　Ap x Ⅱ的基因　Ap x Ⅱ由Ap x Ⅱ操纵子所

编码,该操纵子仅包括结构基因Ap x ⅡA 和激活基

因Ap x ⅡC ,而无分泌基因。Frey J 等(1993年)推测,A PP 在最初的进化过程中,Ap x Ⅱ的操纵子含有完整的C 、A 、B 、D 4个基因,其可以无分泌基因可能

是在生物1型的同一菌株中编码Ap x ⅠBD 的分泌

渠道可以分泌Ap x ⅡA ,或者是太多的分泌渠道导致了细胞膜的不稳定。Boekema B K 等[5]用胸膜肺炎放线杆菌生物1型的致病性同基因株来检测Ap x Ⅱ,所用的菌株已分别被缺失了Ap x ⅡA 或Ap x ⅠBD 。结果显示,缺失了Ap x ⅡA 和Ap x ⅠA 或Ap x

ⅠBD 的菌株均不能导致病理损害。从而证明了胸膜肺炎放线杆菌生物1型的Ap x Ⅱ致病是需要全毒力基因。Ref 进行了同样的试验,结果为缺失Ap x ⅠBD 不能产生Ap x Ⅱ。因此,Ap x Ⅱ毒素需要Ap x ⅠBD 操纵子的调控才能有效分泌。在血清型2、4、6、7、8和12中,就含有Ap x ⅠBD 这样的操纵子。在血清型3中,由于ap x ⅠBD 的完全缺失,导致Ap x Ⅱ的分泌量很少[628]。2.1.3　Ap x Ⅲ的基因　Ap x Ⅲ由Ap x Ⅲ操纵子所编码,和Ap x Ⅰ相同,具有一个完整的操纵子,包括活化基因Ap x ⅢC 、结构基因Ap x ⅢA 和两个分泌基因Ap x ⅢB 和Ap x ⅢD ,以前它们分别被命名为cly ⅢC 、cly ⅢA 、cly ⅢB 和cly ⅢD [9]。Kamp E M 等(1991年)认为各个基因的功能和Ap x Ⅰ相应基因的功能相同,可以产生、激活和分泌Ap x Ⅲ。Ap x Ⅲ虽然没有溶血活性,但与Ap x Ⅰ和Ap x Ⅱ一样,都具有协同溶血活性,即cAM P 活性。Ap x Ⅰ、Ap x Ⅱ和Ap x Ⅲ基因结构与对应的血清型图详见图1

。

图1　Apx Ⅰ、Apx Ⅱ和Apx Ⅲ基因结构图与对应的血清型

Fig.1　Apx Ⅰ,Apx Ⅱand Apx Ⅲgene structures and t he corresponding serotypes

2.1.4　Ap x Ⅳ的基因　它存在于A PP 所有的15

种血清型中,Schaller 等(1999)分别克隆并表达了

A PP 血清1型和3型的整个的毒素基因,该毒素被

命名为Ap x Ⅳ。Ap x ⅣA 是Ap x Ⅳ基因的一段,Ap x Ⅳ由Ap x ⅣA 基因编码,紧接Ap x ⅣA 基因的上游

有一ORF Ⅰ框,下游是LacZ 基因。ORF Ⅰ基因与

5

9胡成名等:猪胸膜肺炎放线杆菌Apx 毒素的分子生物学与致病机理

前3种毒素的C基因无相似性,但其表达产物在功能上却与Ap x C相似,同样负责Ap xⅣ的激活。在体外的A PP培养物中,还无法检测到Ap xⅣA的基因产物;而在动物体内注入重组Ap xⅣA抗原14d 后,则可在动物体内检测到抗体。Ap xⅣA基因比较保守,尤其在3′端。陈建华等[10]选用在3′端的引物扩增的产物长422bp;在所有的血清型中都能扩增出这条片段,而从其他血缘关系相近的细菌中无法扩增到这一片段,因此说明这一片段具有很高的种特异性。Turni C等[11]利用PCR2REA(A restric2 tion analysis of PCR)的方法扩增Ap xⅣA,建立了胸膜肺炎放线杆菌分型的方法,说明Ap xⅣ的基因在分型中的作用。

2.2　Ap x毒素的结构与功能

Ap xⅠ毒素含有13个富含甘氨酸的重复区,其中N末端有3个疏水区,C末端有一个亲水区。Frey和Nicolet从血清型1型4074菌株分离到了一种分子质量为105ku的热不稳定的溶血素,其合成需要Ca2+的共同作用,但其溶血活性与Ca2+无关。而血清型2菌株所产毒素的溶血活性却需Ca2+共同作用;同时,合成溶血素却不需要Ca2+。这可能与Ap xⅠ富含13个甘氨酸重复序列,并且与Ca2+相连结有关。

Frey J等(1992年)Ap xⅡ的DNA序列被进行分析后,发现Ap xⅡ蛋白含有8个甘氨酸的序列重复,能结合的Ca2+较少,因而在生物合成Ap xⅡ的过程中,不需要较高浓度的Ca2+,而其活性的发挥,则需要的Ca2+浓度较高,其生物学与溶血性菌的白细胞毒素很相似。根据DNA序列及氨基酸序列分析,表明Ap xⅡA与溶血巴氏杆菌白细胞毒素L K2 tA非常相近,有67%的氨基酸序列相同,与大肠埃希菌HlyA有47%的氨基酸序列相同。研究人员用Ap xⅡCA和PL G575大肠埃希菌溶血素分泌基因一起进行表达,其表达产物含有溶血性,从而证明了Ap xⅡA可以用大肠埃希菌分泌基因来分泌,说明了胸膜肺炎放线埃希菌的毒素和大肠埃希菌分泌的毒素有一定的相关性[12]。严克霞等以血清2型菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871bp的A PP毒素Ⅱ的结构基因ap xⅡA,并用克隆到的p ET28a在原核表达载体中构建重组出质粒p ET28aⅡA,转化到大肠埃希菌BL21(DE3),经SDS2PA GE和West2 ern2blotting分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性[13]。王春来等[7]将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌Ap xⅡ毒素的结构基因Ap xⅡA克隆到原核表达载体p GEX26P21,并在大肠埃希菌中进行了表达,表达产物rAp xⅡA以包涵体形式存在,攻毒结果表明,rAp xⅡA蛋白具有良好的免疫原性。

Frey J等(1992年)Ap xⅠ和Ap xⅡ的氨基酸序列有42%的同源性,Ap xⅡ能和针对Ap xⅠ的抗血清发生中和反应,说明这两种毒素在结构和血清学上存在着较密切的关系。Rosendal S等(1998年) Ap xⅠ和Ap xⅡ都对热不稳定,其活性在100℃经15min或60℃经1h的条件下将丧失,同时可被胆固醇、氧抑制或被胰酶所破坏,在4℃保存其活性可持续半年。

MacDonald J等(1992年)Ap xⅢ在N末端有3个疏水区,在C末端部分有13个富含甘氨酸的区域,对热稳定,具有很强的细胞毒性而无溶血活性,可有效杀伤猪肺泡巨噬细胞和中性粒细胞,并对猪肺中非特异的细胞防御体系造成严重破坏。

Ap xⅣ的N末端疏水,C末端含有24个富含甘氨酸的九肽重复与可结合Ca2+的区域,并含有两个典型赖氨酸酰基化作用位点,分别位于氨基酸642位～643位和853位～854位点上。Ap xⅣ的C末端含有两个氨基酸序列,该序列具有DNA聚合酶的特征,并与九肽重复一起形成一个模块结构。Ap x Ⅳ在大肠埃希菌中的表达产物具有弱的溶血活性和cAM P效应。表达的Ap xⅣ都可以与被感染猪的血清反应。目前,尚不能在体外培养的A PP中检测到该毒素。

3　Ap x毒素的分泌与致病机理

Ap x毒素属于R TX毒素家族的成员之一,具有溶血活性和细胞毒性作用,它不仅可以溶解红细胞,更重要的是它具有调节白细胞活性的功能,这一点对它的致病性尤为重要。其中Ap xⅠ和Ap xⅡ的活性属于溶血素,而Ap xⅢ则属于白细胞毒素。Lally 等(1994)发现溶血素和白细胞毒素使用不同的结构域或方法,能在不同类型的细胞膜表面形成膜孔。溶血素比白细胞毒素的靶细胞类型更广泛,因为溶血素依靠静电力将毒素结合在结构域和细胞膜上,而白细胞毒素需要识别特异性受体。

Ap x毒素的致病机理可分为两个阶段,首先由没有活性的前体蛋白转变为有活性的Ap xA蛋白,然后有活性的Ap xA蛋白侵害细胞。具体来说,毒素蛋白是没有活性的前体蛋白,必须经过翻译后修饰才具有活性,即对Ap xA蛋白进行脂肪酸乙酰化作用,这个过程需要有Ap xC蛋白和乙酰化载体蛋白的参与。Ap xB、Ap xD和一些细胞膜上的蛋白共同作用后,在完整的蛋白质膜上形成孔,然后穿过细胞膜孔到达胞外,产生毒性。在此运转过程中转运

69动物医学进展　2007年　第28卷　第7期(总第166期)

蛋白识别的是未被切割的C末端,而不是N端的信号肽,而N端疏水结构域负责孔形成和形成跨膜区。并且Ap xⅠ和Ap xⅡ脂质双层膜上形成孔道的能力是不同的。Ap xⅡ形成的单孔道传导性与Ap xⅠ相似,但其孔道形成活性却至少比Ap xⅠ低10倍。在这两种毒素中,Ap xⅠ与大肠埃希菌的HlyA最像,这与两者的DNA序列高度同源以及对绵羊红细胞的溶血能力相似是一致的,而且,两者形成的单孔道的直径也相似,都大约为2.4nm,而Ap xⅡ为2.5nm。这两种Ap x毒素的孔形成活性看起来对细胞毒性比对溶血活性更有直接的影响。高浓度活化的Ap x毒素蛋白依靠静电力傅将毒素锚定在细胞膜及结构域上,依靠静电作用不需要特异受体,与靶细胞膜结合,穿透破坏细胞质膜,形成孔道,改变了膜通透性,使细胞外的Ca2+进入和细胞内K+流失,细胞内外环境失衡从而导致细胞裂解。在毒素吸附到细胞膜表面这一过程中的关键是乙酰化结构,一旦酰基化结构与靶细胞建立了联系,静电力使成为R TX毒素分子插入细胞膜所必须的。由此可见Ap xC介导的酰基化作用、N端疏水结构域、Ca2+结合重复区都是溶细胞所必需的[14]。而白细胞毒素Ap xⅢ对靶细胞的作用是依赖性的,微量的Ap x毒素就能强烈地刺激白细胞氧化,粒细胞脱颗粒,稍大量的毒素能够杀死白细胞,加大量的毒素对单核细胞和淋巴细胞都有损害作用,能增强组胺和类花生四烯酸的产生,并释放裂解素,破坏上皮细胞的连接,有助于细菌通过呼吸道屏障发生[15]。由于App 的致病性通常是多种毒力因子共同作用的结果,其致病机制较为复杂,而且App感染常伴有其他致病菌的存在,故进一步研究其致病机理有着很重要的临床价值[16]。

4　展望

Ap x毒素作为App最主要的毒力因子,而且又具有很好的免疫原性,能诱导机体产生很好的免疫力。通过进一步对Ap x毒素的分子生物学与致病机理的研究,有助于深入了解Ap x毒素的结构和功能之间的关系,从而为App疫苗的研制提供新的方向,对预防和控制猪胸膜肺炎放线杆菌的传播具有重要意义。

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胡成名等:猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的分子生物学与致病机理

动物医学进展,2007,28(7):982101

Progress in Veterinary Medicine

桉树化学成分及药理作用研究进展

何耀松,张继东3

(广东海洋大学,广东湛江524088)

摘　要:桉树作为世界上三大速生丰产树种之一,已被人们所公认。近年来,桉树及其副产物的综合利用研究取得了一定的进展,桉树的药理作用研究方兴未艾。文章在介绍桉树的主要化学成分的基础上,详细综述了桉树在抗菌、抗炎、杀虫以及促渗等方面的药理作用研究进展,使人们对桉树能有更加全面的了解和认识,拓宽了人们在桉树药用价值等相关领域的研究视野。

关键字:桉树;化学成分;药理作用

中图分类号:S859.7文献标识码:A文章编号:100725038(2007)0720098204

桉树原产于澳大利亚,是地球上最高的被子植物之一,也是世界上最有价值的速生常绿阔叶树硬质材之一。它是桃金娘科(Myrtaceae)杯果木属(A ngop hora)、伞房属(Cory mbra)和桉树属(Eucal y pt us)3个属树木的总称,目前经确认的种类有945种,其中有亚种和变种137个[1]。

桉树树干通直,纤维细长,是一种集观赏、用材、药用于一体的优良树种,具有很高的经济价值。桉树用途广泛,是世界上极有价值的硬木资源之一。其木材坚韧耐腐,是最常用的制造纸浆的主要原料,亦可作为人造板、建筑、桥梁、家具等用材;桉树是常绿树种,适应性强,易栽培,对我国北亚热带和寒温带地区而言,适当引种观赏桉树,可改变当地园林绿化以落叶树种为主的格局,丰富园林植物的种类,增强景观的观赏性;有些桉树的花,是世界著名的优良蜜源,桉树蜂蜜具有独特的风味,而且不同桉树树种的蜂蜜的风味也各不相同;桉叶可提取桉叶油,是医药、香料和化学工业的重要原料,具有一定的药用价值[223]。

收稿日期:2007204220

作者简介:何耀松(1982-),男(回族),山东曹县人,硕士研究生,主要从事高效无公害饲料研究。3通讯作者

Molecular Biology and Pathogenesis of APX toxins

of Acti nobacill us Pleurop neumoni ae

HU Cheng2ming,WEN Xin2tian,CAO San2jie,HUAN G Xiao2bo

(A ni mal Epi demic Disease and H uman Healt h S ichuan,A ni mal I nf ectious Disease and Gene Chi p L aboratory,

College of A ni mal Science and Technolog y,S ichuan A gricult ral Universit y,Ya’an,S ichan,625014,China)) Abstract:Acti nobacill us pleurop neumoni ae(App)is t he pat hogen of porcine pleurop neumonia,a severe, contagious p ulmonary disease of pigs t hat causes great economic losses in indust rialized pig production.So far,App has been identified for15serotypes according to serological typing of cap sular polysaccharides; serotype5is subdivided f urt her into5a and5b.Actinobacillus pleurop neumoniae produces four different R TX toxins,which are called Ap x toxins(for A.pleurop neumoni ae R TX toxins):Ap xⅠ,Ap xⅡ,Ap x Ⅲ,Ap xⅣrespectively.Ap xⅠoperon contains gene Ap xⅠC,A,B and D;Ap xⅠtoxin contains13glycine2 rich areas.Ap xⅡoperon includes only st ruct ure gene Ap x A and activation gene Ap x C;Ap xⅡp rotein contains8glycine sequence repeat.Like Ap x I operon,Ap xⅢoperon contains all t he element s of a oper2 on;Ap xⅢhas3hydrop hobic area in t he N2terminal,13glycine2rich region in t he C2terminal part.Pat ho2 genesis of Ap x toxins:firstly,p recursor protein changed into t he active protein Ap x A,t hen t he Ap x A do disoperation against cells.

K ey w ords:Acti nobacill us pleurop neumoni ae;Ap x toxins;molecular biology;pat hogenesis

猪传染性胸膜肺炎的实验室诊断

猪传染性胸膜肺炎的实验室诊断 摘要:采用生化试验?间接血凝试验对送检的疑似猪传染性胸膜肺炎病猪的病料及血清进行诊断和药敏试验?结果表明,从病猪肺脏中分离到1株疑似胸膜肺炎放线杆菌,其革兰氏染色为阴性球杆菌,在普通营养琼脂和麦康凯培养基上不能生长,在TSA平板上形成不透明的淡灰色?湿润?光滑?表面隆起的菌落,血凝试验为阳性,确定所分离菌为胸膜肺炎放线杆菌?同时对该猪群随机抽检12份血样,用猪胸膜肺炎间接血凝试剂盒检测胸膜肺炎抗体,其阳性率为8.3%?药敏试验表明,磺胺间甲氧嘧啶钠和长效痢清为敏感药物? 关键词:猪胸膜肺炎放线杆菌;细菌分离鉴定;血凝试验;药敏试验 The Laboratory Diagnosis of Porcine Contagious Pleuropneumonia Abstract: The biochemistry test and indirect hemagglutination test were used to check the samples and serum of pigs suspected as porcine contagious pleuropneumonia (PCP) The results indicated that a suspected Actinobacillus pleuropneumoniae was isolated from the pig lung. It was Gram staining negative coccobacillus, and could not grow in ordinary nutrient agar and McConkey＇s agar. It could grow and form a opaque ocean grey, moist, smooth conoly with upheaval at surface in TSA plate; and the hemagglutination test was positive. It was confirmed that the isolated bacterium was Actinobacillus pleuropneumoniae. 12 blood samples were randomly selected and examined by PCP indirect hemagglutination assay kit. The results indicated that the positive ratio of PCP antibody was 8.3%. The result of susceptibility test indicated that sulfamonomethoxine sodium and long-acted Liqing were sensitive drugs. Key words: Actinobacillus pleuropneumoniae; isolation and identification of bacteria; hemagglutination test; susceptibility test 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种高度传染性的呼吸系统疾病?该病以急性出血和慢性纤维素性胸膜肺炎为特征,具有较高的发病率和致死率[1]?随着集约化养猪业的迅猛发展,国家及地区间引种频繁,导致该病的发病率及死亡率大大提高,耐药性问题导致的治疗失败,给世界各地的养猪业带来了极大的经济损失[2,3]? 本试验对河南省新乡市某猪场的发病猪病料进行了细菌分离鉴定?血清学检测及药敏试验,旨在为该病的诊断与治疗提供科学依据?

猪传染性胸膜肺炎(APP)的疫苗研制进展(综述)

猪传染性胸膜肺炎（APP）的疫苗研制进展（综述） 贾振宇何启盖刘军发 （华中农业大学畜牧兽医学院，武汉430070） 摘要近10年猪传染性胸膜肺炎我国发病越来越多，给我国养猪行业造成了巨大的经济损失。笔者就猪传染性胸膜肺炎的疫苗研制进展进行了简单的介绍，包括加热灭活和福尔马林灭活油剂苗、猪胸膜肺炎自家苗、猪胸膜肺炎荚膜疫苗、猪胸膜肺炎毒素疫苗、猪胸膜肺炎缺失活苗和猪胸膜肺炎亚单位疫苗。在介绍疫苗的同时简单描述各疫苗的制作原理及各疫苗的优缺点。 关键词猪；胸膜肺炎；疫苗 猪接触传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，APP）是由猪胸膜肺炎放线杆菌引起的以胸膜炎和肺炎为主要特征的呼吸道传染病[1]。又称副溶血嗜血杆菌病。本病病原为胸膜肺炎放线杆菌（Porcine actinobacillus pleuropneumoniae，A.P.）,属于革兰氏阴性菌,在显微镜下呈球杆状。各年龄阶段的猪均易感染此病，但断奶仔猪多发。在急性病型中的发病率较高，一般为85—100%，死亡率为40-100%之间[2]。此病对于猪有特异性，通常通过空气传染。1957年英国人首次报道本病，1983年波尔（Poul）等人通过DNA杂交试验，认为胸膜肺炎嗜血杆菌（Haemophilhus pleuropneumoniae）和1976年由Bertschinger 分离命名的似溶血性巴斯德氏菌（Pasteurella haemodyticalike）与李尼尔氏放线杆菌遗传关系密切，之后本菌被命名为胸膜肺炎放线杆菌[1]。 根据培养时对辅酶Ⅰ（NAD）的依赖性可将胸膜肺炎放线杆菌分为生物Ⅰ型和生物Ⅱ型，其中生物Ⅰ型对猪具有致病性。根据胸膜肺炎放线杆菌的荚膜抗原与细菌脂多糖的不同，又可将生物Ⅰ型分为12个血清型，血清型又分为5a、5b亚型，各个血清型之间无很好的交叉反应。生物Ⅰ型菌株具有溶血素、内毒素、外毒素以及细胞性毒素，此外，荚膜多糖、脂多糖、通透因子等也有致病性，但具有溶血活性的毒力因子在致病性上更重要。[3、4] 朱世盛（1988）从进口种猪中检测出APP抗体阳性猪，杨旭夫等（1990）首次正式确认我国大型集约化养猪场有猪APP存在，分离出致病菌并确定了血清型。高林等（1994）调查表明，近年猪APP在国内集约化猪场的感染发病日益增高，损失重大。由于APP易产生耐药性，不同血清型之间的耐药性也不同，使得药物防治难度很大，药费消耗多但效果不尽人意[5]。因此研制有效的疫苗就显得十分重要，本文对胸膜肺炎的一些常见疫苗和一些国内外的最新疫苗研制进展情况作以下综述。 1．加热灭活和福尔马林灭活苗 此种疫苗是将胸膜肺炎放线杆菌在液体培养基中培养至一定的浓度，然后用加热的方法或加入一定比例的福尔马林溶液，在37℃的条件下静置24小时，使细菌灭活。在灭活的菌液中加入一定比例的油乳剂以增强疫苗的免疫效。此种疫苗的优点是疫苗的制作方法比较简单，且生产成本低廉。但此疫苗也存在缺点，因为胸膜肺炎放线杆菌的12个血清型具有不同的荚膜抗原，根据一种或几种血清型产生的抗体无法抵御其他血清型的胸膜肺炎放线杆菌的感染。世界各地猪场

猪传染性胸膜肺炎的诊断与防治

猪传染性胸膜肺炎的诊断与防控 王华听1， （1.上海恒丰强动物药业有限公司，上海松江201600；） 【摘要】猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种猪呼吸道传染病。因本病血清型较多，各血清型之间缺乏很好的交叉免疫保护力[3]，故其诊断与防治都较为困难，近几年给养猪业造成了严重的经济损失。为此，本文重点在于阐述猪传染性胸膜肺炎的诊断和综合防治，进而为该病的防控提供参考和帮助。 【关键词】猪传染性胸膜肺炎；诊断；综合防治 猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）又称猪胸膜肺炎，是由猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起猪呼吸系统的一种严重的接触性传染病。本病在临床上以急性出血性纤维性胸膜肺炎和慢性纤维性坏死性胸膜肺炎为特征[1]。APP目前鉴定的有15种血清型，在我国流行的优势血清型主要是血清型1型、2型、3型和7型。 猪传染性胸膜肺炎，因病菌血清型众多，各血清型之间很少有交叉免疫保护作用，故疫苗的应用也受到了一定的限制。抗生素使用存在着诊断不确切和细菌的耐药性问题，进而防治成本增大。因此，快速的诊断技术、疫苗和药物的合理应用对于预防和控制该病具有十分重要的意义。 1.流行病学特点 1.1易感性：各种年龄的猪均易感，通常以6周～6月龄的猪较为多发，病重病例多发生于育肥晚期，死亡率约20%～100%不等，这可能与饲养管理和气候条件有关。 1.2传染源与传播途径：病猪和带菌猪是本病的主要传染源，猪与猪之间的密切接触和排泄污染物是本病传播的主要途径。病菌主要存在于患猪的支气管、肺脏和鼻汁中，从鼻腔排出后形成飞沫，经空气传播，拥挤和通风不良可加速传播 [1]。 1.3本病具有明显的季节性，多在4～5月和9～11月发生。饲养环境突然改变、密集饲养、通风不良、气候突变以及长途运输等应激因素可引起本病的发生，因此又称为“运输病”。此外，临床上多与猪地方性肺炎、猪副嗜血杆菌病等混合感染，进而可加重病情。 2临床诊断：本病潜伏期1-2天，临床上可见最急性型、急性型、亚急性或慢性型。 2.1 最急性型：病猪突然发病，未见任何临床症状就突然死亡，或者可以看到体温升高达42 ℃ 以上，有轻微的腹泻和呕吐症状，死前口鼻流出带泡沫血样分泌物。 2.2急性型：精神不振，食欲减退，体温高达 41.5 ℃ 以上，腹泻；喘气、咳嗽、呼吸困难常呈犬坐犬卧姿势，张口伸舌，从口鼻流出带泡沫的血样分泌物；个别猪的口、鼻、耳、四肢等皮肤呈暗紫色；心跳加快，一般于48小时左右因心力衰竭而死亡。 2.3 亚急性和慢性型： 病猪体温略高或正常，但呼吸道症状明显，不断咳嗽、喘气，尤其是受到外界刺激或驱赶后会表现明显的腹式呼吸；食欲减退，增重减慢，饲料转化率降低。 2.4病理变化 死亡的猪只多表现为双侧性纤维素性胸膜肺炎，以肺的心叶、尖叶和部分隔叶见多见。病灶区呈暗紫色，质度较硬，切面发脆，常与胸膜粘连，肺间质内积有许多血色胶样液体；

猪常见的肺部大体病变

猪常见的肺部大体病变 正常肺脏解剖之后的颜色会因为不同的处死方法略有不同，呈不同深浅的均匀的粉红色。一个非常重要的特征是，正常的肺脏在解剖出来之后放置一段时间（具体时间很难说，大概十来二十分钟）后会发生塌陷。肺的正常塌陷是非常重要的一个识别，如果不塌陷，那么就可能是有病变了。肺脏是有一个个小叶组成的，这些小叶在大体剖检能够看到，小叶之间有间隔，这些间隔我们可以称为小叶间间质，与肺泡间质是不一样的（肺泡间质只在显微镜下能看到）。正常的肺塌陷（右肺膈叶）和小叶间间质请看下图。同时请大家注意以后如果有肺脏的病变要拍照，也请按照下图的方式平放肺脏然后先拍总体的图片，有需要才再拍局部的图片。 如下面的示意图，猪的肺脏分为若干个叶。左边有尖叶，心叶和膈叶；右边有尖叶，心叶和膈叶以及多出来的一个附叶。记住这些位置，对于了解肺部病变是很有帮助的。 正常离体肺脏图 支气管性肺炎（小叶性肺炎） 小叶性肺炎的发病部位是前面的肺叶（尖叶心叶和附叶）。病变发生在这里的原因是因为小叶性肺炎的病原是从呼吸道吸入的，病原会最先积聚在前面的肺叶并引起病变。当病变非常严重的时候，肺炎会漫延到膈叶。小叶性肺炎一般呈肉色到暗红色，跟周围没有发生病变的肺组织有清晰的界限。小叶性肺炎的病因绝大多数是吸入性的细菌，例如肺炎霉形体、多杀性巴氏杆菌等等。不同病原造成的小叶性肺炎大体上基本无法辨别，所以光看到边缘界限清晰的肺炎就咬定是霉形体是不可取的。小叶性肺炎的示意图以及大体图片请看下面：

大叶性肺炎 以往的病理课本里面描述的大叶性肺炎一般是严重的小叶性肺炎，而且是从人医的术语借鉴过来的。在猪里面，大叶性肺炎所指的是有非常特异性病变位置的肺炎，病变的部位在膈叶的中间部分。猪能引起大叶性肺炎的病据我所知有两个（注意它们是不同的细菌），胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)和猪放线杆菌(Actinobacillus suis)。猪的大叶性肺炎的大体病变特征是深红色的坏死并在胸膜表面有纤维素性的渗出，到后期会变成黄白色而且质地硬。胸膜肺炎放线杆菌引起的病比较严重以及急性，通常都以死亡告终；而猪可以耐过猪放线杆菌，其病变只在屠宰或者是解剖别的疾病引起的死猪的时候偶尔发现。大叶性肺炎的部位示意图以及大体图片如下：

猪传染性胸膜肺炎怎么治疗

猪传染性胸膜肺炎怎么治疗 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起猪的一种高度传染性呼吸道疾病，又称为猪接触性传染性胸膜肺炎。以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征，急性型呈现高死亡率。 各种年龄、性别的猪都有易感性，其中6周龄至6月龄的猪较多发，但以3月龄仔猪最为易感。本病的发生多呈最急性型或急性型病程而迅速死亡，急性暴发猪群，发病率和死亡率一般为50%左右，最急性型的死亡率可达80%～100%。 病猪和带菌猪是本病的传染源。本病的发生具有明显的季节性，多发生于4～5月和9～11月。饲养环境突然改变、猪群的转移或混群、拥挤或长途运输、通风不良、湿度过高、气温骤变等应激因素，均可引起本病发生或加速疾病传播，使发病率和死亡率增加。 人工感染猪的潜伏期约为1～7天或更长。由于动物的年龄、免疫状态、环境因素以及病原的感染数量的差异，临诊上发病猪的病程可分为最急性型、急性型、亚急性型和慢性型。1．最急性型突然发病，病猪体温升高至41～42℃，心率增加，精神沉郁，废食，出现短期的腹泻和呕吐症状，早期病猪无明显的呼吸道症状。后期心衰，鼻、耳、眼及后躯皮肤发绀，晚期呼吸极度困难，常呆立或呈犬坐式，张口伸舌，咳喘，并有腹式呼吸。临死前体温下降，严重者从口鼻流出泡沫血性分泌物。病猪于出现临诊症状后24～36h内死亡。有的病例见不到任何临诊症状而突然死亡。此型的病死率高达80%～100%。 2．急性型病猪体温升高达40.5～41℃，严重的呼吸困难，咳嗽，心衰。皮肤发红，精神沉郁。由于饲养管理及其他应激条件的差异，病程长短不定，所以在同一猪群中可能会出现病程不同的病猪，如亚急性或慢性型。 3．亚急性型和慢性型多于急性期后期出现。。病猪轻度发热或不发热，体温在39.5～40℃之间，精神不振，食欲减退。不同程度的自发性或间歇性咳嗽，呼吸异常，生长迟缓。病程几天至1周不等，或治愈或当有应激条件出现时，症状加重，猪全身肌肉苍白，心跳加快而突然死亡。 预防和治疗措施 (1)首先应加强饲养管理，严格卫生消毒措施，注意通风换气，保持舍内空气清新。减少各种应激因素的影响，保持猪群足够均衡的营养水平。 (2)应加强猪场的生物安全措施。从无病猪场引进公猪或后备母猪，防止引进带菌猪；采用“全进全出”饲养方式，出猪后栏舍彻底清洁消毒，空栏1周才重新使用。 (3)对已经发病的猪群可用香港龙达的咳喘金针做治疗。对发病猪采用注射效果较好，对发病猪群可每套用于500kg体重治疗，预防1000kg体重，一日一次，连用1-2天，重症加倍。

【CN110124022A】一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910318204.2(22)申请日 2019.04.19 (83)生物保藏信息 CGMCC NO：13858 2017.05.26CGMCC NO：13335 2016.11.22CGMCC NO：16802 2018.11.09CGMCC NO：13334 2016.11.22CGMCC NO：13333 2016.11.22 (71)申请人 河南省农业科学院畜牧兽医研究所地址 450000 河南省郑州市金水区花园路 116号(72)发明人 徐引弟　王治方　张青娴　朱文豪　 许峰　焦文强　李海利　郎利敏　张立宪　游一　王克领　 (74)专利代理机构 郑州明华专利代理事务所 (普通合伙) 41162 代理人 高丽华(51)Int.Cl. A61K 39/02(2006.01)A61K 39/102(2006.01)A61K 39/09(2006.01)A61P 31/04(2006.01)C12N 1/20(2006.01)C12R 1/35(2006.01)C12R 1/21(2006.01)C12R 1/46(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用(57)摘要 本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原和免疫佐剂，五种菌株均有良好的免疫原性，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病， 降低成本。 权利要求书2页 说明书18页 序列表8页 附图5页 CN 110124022 A 2019.08.16 C N 110124022 A

猪传染性胸膜肺炎症状特点是什么

猪传染性胸膜肺炎症状特点是什么 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的，一种重要的接触性呼吸道传染病，以急性出血性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征。下面我们了解一下猪传染性胸膜肺炎症状特点。 猪传染性胸膜肺炎的流行症状 (1)各种日龄的猪均有易感性，以4-5月龄猪较多发，死亡率为20%-100%。 (2)病猪和带菌猪是主要传染源，往往通过空气飞沫而传播。 (3)拥挤、气温剧变、相对湿度高和通风不良等应激因素，可促使本病的传播。 (4)本病具有明显的季性，多在4-5月和9-11月发生。 猪传染性胸膜肺炎的实验室诊断 (1)细菌学检查：采取支气管或鼻腔渗出液和肺炎病变组织，最急性病例可以从其他器官涂片染色镜检，可见到多形态两极染色的革兰阴性球杆菌。确诊需进行病原的分离与鉴定，但培养较为困难。 (2)血清学检查：补体结合试验、凝集试验和酶联免疫吸附试验等血清学方法，可用于本病诊断。 (3)PCR检测：根据该菌的一些毒力基因、荚膜基因等设计PCR引物，扩增特异基因。 常见猪传染性胸膜肺炎的诊疗失误的原因 猪传染性胸膜肺炎主要表现为体温升高，呼吸困难，四肢末端呈蓝紫

色。与此症状类似的有猪瘟、猪肺疫、猪链球菌病、猪棒状杆菌感染和猪气喘病等。 (1)猪瘟：相似之处，有传染性，体温高，不食。鼻、耳、四肢皮肤蓝紫色，呼吸困难等。不同之处，公猪尿鞘积有混浊异臭液。剖检可见回盲瓣口有纽扣状溃疡。 (2)猪肺疫：相似之处，有传染性，冷热交替、气候剧变时发病，呼吸困难，几鼻四肢皮肤紫红斑。剖检有纤维性胸膜炎等。小同之处，咽喉型，颈下咽喉红肿发热坚硬，口流涎，剖检可见颈部皮下出血性炎性水肿。胸膜肺炎型，胸部听诊有哕音、摩擦音。剖检可见肺表面呈暗红色或灰黄红色，全身浆膜、黏膜和皮下组织有大量出血点。病料涂片镜检可见两极浓染的小球杆菌。 (3)猪链球菌病：相似之处，有传染性，体温高(41.5-42℃)，不食、呼吸困难，口鼻流淡红色泡沫，耳、四肢皮肤红紫斑等。不同之处，败血型眼结膜潮红，流泪，跛行。脑膜炎型，多见于哺乳仔猪和断奶后小猪，有运动失调、转圈、磨牙、卧地做游泳动作等神经症状。病料涂片镜检可见散在或成双排列、短链带荚膜的球菌。 (4)猪棒状杆菌感染（急性）：相似之处，体温高(39.5-41.5℃)，呼吸急促困难，流鼻液，皮肤紫红等。不同之处，与病猪邻近的猪不传播，多在分娩后发病、泌乳减少，个别有乳房炎。剖检膀胱黏膜有弥漫性出血，有血色尿、脓和黏膜坏死碎片。肾受侵害时有变性和坏死灶。化脓性肺炎，支气管有淡绿色或黄白色泡沫性、脓性分泌物：用病料涂片镜检，可见革兰阳性无芽孢、无荚膜、多形性的细小杆菌、球杆

猪传染性胸膜肺炎的治疗措施

猪传染性胸膜肺炎是集约化猪场常发的呼吸道传染病，急性胸膜肺炎的死亡率很高，如果没有及时发现、及时治疗，会造成大面积感染，甚至死亡，因为该病是传染性非常强的一种疾病，猪传染性胸膜肺炎以呈现胸膜肺炎症状和病变为特征。 病原：本病的病原体为胸膜肺炎放线杆菌，呈多形态的小球杆菌状，革兰氏阴性，病料中的胸膜肺炎放线杆菌呈两极着色，致病菌具有荚膜，并能产生毒素。至1988年为止，已鉴定出12个血清型，以I型和V型的致病力最强，造成的发病率和病死率最高。本菌的抵抗力不强，容易被一般消毒药杀死。 流行特点：不同年龄的猪均有易感性，以4～5月龄猪发病死亡较多，病猪和带菌猪是本病的传染源，胸膜肺炎放线菌主要存在于呼吸道黏膜，通过空气飞沫传播，在大群集约化饲养的条件下最易接触感染。 猪群之间的传播主要是因引入带菌猪或慢性病猪，初欢发病猪群的发病率和病死率均较高，经过一段时间，逐渐趋向缓和，发病率和死亡率显着下降，但隔一段时间后又可能暴发流行，因此，本病的发病率和死亡率有很大差异，发病率在8.5%～100%，死亡率在0.4%～100%，猪群受到应激，可促进本病的发生。 防控办法；每吨饲料中每吨饲料中添加呼必宁2000g，连用5-7天，病发症状基本消失，清热解毒、宣肺平喘、止咳化痰、增强食欲、促进生长、提高免疫 猪传染性胸膜肺炎的症状和剖检 临床症状：急性病猪开始体温高至41.5℃以上，沉郁，不食，继而呼吸困难，张口呼吸，常站立或呈犬坐姿势，口鼻流出泡沫样分泌物，耳，鼻及四肢皮肤呈蓝紫色，如不及时治疗，常于1～2天内窒息死亡。若开始症状缓和，能度过4天以上，则可逐渐康复或转为慢性，此时病猪体温不高，发生间歇性咳嗽，生长迟缓，很多猪开始即呈慢性经过，症状轻微。

猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的研究进展

猪胸膜肺炎放线杆菌Ａｐｘ毒素的研究进展 张欣，马魁，罗满林 （华南农业大学兽医学院，广东广州 ５１０６４２） 收稿日期：２００６－０５－１７ ＡＰＰ是引起猪传染性胸膜肺炎的致病菌。该 菌为革兰氏阴性，有荚膜的短小球杆菌。根据其生长营养需要，可将该菌分为两个生物型，即生物Ⅰ型（Ｎ ＡＤ依赖型）和生物Ⅱ型（ＮＡＤ非依赖型）。迄今所知ＡＰＰ共有１５个血清型，即１～１５型，其中 ５型又分为５ａ和５ｂ亚型。由于部分血清型菌株 的脂多糖具有相同的Ｏ侧链，因而存在部分抗原交叉反应，如血清１／９／１１、４／７、５／６。不同的血清型致病性有所不同，可能与其毒力有关。其中血清 １、５、９和１１四种血清型毒力最强，而血清３和６ 型则被认为毒力较弱。在ＡＰＰ致病机制中有多个因子的参与，包括荚膜多糖、脂多糖（ＬＰＳ）、外膜蛋 白、转铁结合蛋白、蛋白酶、渗透因子及Ａｐｘ毒素。其中Ａｐｘ毒素是主要的毒力因子，也是主要的免疫原［１］，因此有关Ａｐｘ毒素的研究已成为该病的研究热点。 Ａｐｘ毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类 溶血毒素。血清型毒力的强弱与Ａｐｘ毒素种类有关。ＡＰＰ的１５个血清型共产生四种溶血毒素［２］：Ａｐｘ Ⅰ、ＡｐｘⅡ、ＡｐｘⅢ、ＡｐｘⅣ。它们都属于ＲＴＸ毒素 （ｒｅｐｅａｔｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｔｏｘｉｎ，ＲＴＸ）家族。四种 毒素都具有ＣＡＭＰ效应，即与金黄色葡萄球菌共培养时，其溶血效应会加强［３］。其中产ＡｐｘⅠ和ＡｐｘⅡ毒素的血清型毒力最强。在ＡＰＰ的致病过程中Ａｐｘ毒素的作用是溶解红细胞，但是它还具有调节白细胞活性的功能。这对于它在猪传染性胸膜肺炎致病过程中尤为重要。 １ＡｐｘⅠ毒素 在ＡＰＰ感染过程中，会产生有活性的毒素 ＡｐｘＩ。ＡｐｘＩ毒素具有很强的溶血活性。其相对分 子量为１０５ｋＤａ，同时它对肺泡巨噬细胞和嗜中 性白血球也具有很强的细胞毒性作用。研究表明血清型１、５、９、１０、１１产生ＡｐｘＩ。ＡｐｘＩ操纵子是由激活基因ＡｐｘＩＣ、结构毒素基因ＡｐｘＩＡ、分泌必需基因ＡｐｘＩＢ和ＡｐｘＩＤ四个基因组成的，即ＡｐｘＩ－ＣＡＢＤ。 这是一个典型的ＲＴＸ毒素的操纵子。在操纵子中，各基因的功能不同。ＡｐｘＩＡ基因编码毒素蛋白的前体，ＡｐｘＩＣ基因编码毒素翻译后的激活物， ＡｐｘＩＢＤ基因负责毒素的分泌。ＡｐｘＩ操纵子被转录 成两种ＲＮＡ：一种大小为３．５ｋｂ，由Ｃａ２＋诱导，含有ＡｐｘＩＣ和ＡｐｘＩＡ的ＲＮＡ，它占主要地位；另一种 大小为７．５ｋｂ，不是由Ｃａ２＋诱导，它包含整个操 纵子ＡｐｘＩＣＡＢＤ的ＲＮＡ［４］。 在不同的血清型中，可能存在ＡｐｘＩ毒素基因的同源性。Ｆｒｅｙ利用克隆以及限制性酶切分析了 １、９和１１型的ＡｐｘＩ毒素基因的同源性。发现三 者的同源性很高，但是这三种血清型与血清５ａ、 ５ｂ、１０、１１型的ＡｐｘＩ基因存在明显的差异。虽然 这两组基因在限制性酶切片段上的差异已达到了 ５％，但是它们所表达的两组毒素的结构非常相似。 到目前为止，还没有单克隆抗体能够将它们区分开来［５］。严克霞等［６］利用毒性极强的ＡＰＰ２１菌株表达的ＡｐｘＩＡ毒素，并且与天然毒素做了免疫原性比较。结果表明，天然毒素和复性的重组表达蛋白均具有良好的免疫原性，对小鼠具有较好的免疫保护效力。 ２ＡｐｘⅡ毒素 ＡｐｘⅡ有较弱的溶血活性，它对肺泡巨噬细胞 摘要：猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＡＰＰ）引起的细菌性呼吸道传染病。Ａｐｘ毒素（ａｃｔｉｎｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｔｏｘｉｎ）是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素，在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中，Ａｐｘ毒素起了重要的作用。 关键词：胸膜肺炎放线杆菌；Ａｐｘ毒素 中图分类号：Ｓ８５２．６１＋９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５－８５６７（２００６）０５－００１５－０３ 广东畜牧兽医科技２００６年（第３１卷）第５期研究进展 １５??

猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查

猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查 贾振宇何启盖 摘要对6个猪场所送检的未免疫胸膜肺炎疫苗的不同年龄阶段猪的315份血清用间接血凝试验检测胸膜肺炎抗体。通过对数据进行分析发现在12月、3月、4月送检血清的阳性率最高，分别达到63%、58%、65%。中猪、后备猪和产仔母猪的阳性率很高分别达84%、92%、92%，而10日、40日龄的仔猪阳性率很低，达到30%、18%。这些说明胸膜肺炎暴发的高峰是在冬春两季，且2、3月龄的猪易感此病。 关键词猪，传染性胸膜肺炎，流行病学调查，血清 猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia）是由猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，App）引起的一种以胸膜炎和肺炎为特征的传染病，胸膜肺炎放线杆菌以前称为副猪嗜血杆菌，特异性地寄生于猪呼吸道。该病主要依靠空气传播，在猪群中由带菌猪引起，在我国规模化猪场的感发率日益增高[1]。本病由于引起败血症且高度呼吸困难[2]，急性型表现为患病猪很快死亡，慢性型表现为猪生长缓慢，严重影响饲料报酬[3]，已成为危害养猪业最严重疾病之一[4]。 1957年英国人首次报道本病，1983年波尔（Poul）等人通过DNA杂交试验，认为胸膜肺炎嗜血杆菌（Haemophilhus pleuropneumniae）和1976年由Bertschinger 分离命名的似溶血性巴斯德氏菌（Pasteurella haemodyticalike）与李尼尔氏放线杆菌遗传关系密切，之后本菌被命名为胸膜肺炎放线杆菌[5]。 世界各地猪场流行的胸膜肺炎放线杆菌血清型是不一致的。据材料介绍，澳大利亚和加拿大流行的主要是血清1型，而瑞典、丹麦和日本则以血清2型为主。该病病原胸膜肺炎放线杆菌在我国广泛存在且不同地区的血清型不同。我国杨旭夫（1993）和高林等（1994）从我国北方猪场分离出的胸膜肺炎放线杆菌主要是血清7型，其次是血清4型、血清5型、血清8型和血清3型[6]。甘肃、宁夏、青海主要以2、3、7型为主；湖北、湖南流行3、7、10型；福建、海南流行1、7型[7]。 如今，猪传染性胸膜肺炎已给我国的养猪业带来巨大的经济损失，此病也引起了人们的重视。对本病进行流行病学调查，从而了解该病的传播规律，以便确定预防该病的最佳时期就显得十分必要。本文针对此目的进行分析总结。现将结果报道如下： 1 材料与方法[8、9] 1.1 被检血清 由湖北、湖南、浙江、广东4省送检的315份血清，其中后备母猪、肥猪、产仔母猪、未断奶仔猪、断奶仔猪、中猪送检血清各53、60、53、49、49、51份。 1.2 胸膜肺炎试剂盒 该试剂盒包括：胸膜肺炎诊断液稀释液阳性血清阴性血清 1.3 仪器 移液器振荡器恒温水浴锅离心机96孔V型板

第五节 猪接触传染性胸膜肺炎

第五节猪接触传染性胸膜肺炎 (Porcine contagious pleuropneumonia) 猪接触传染性胸膜肺炎是猪的一种呼吸系统重要传染病。本病主要引起猪的一种伴有胸膜炎的出血性坏死性肺炎，多呈最急性或急性病程而迅速致死，可发生任何年龄的猪只，但以3月龄仔猪最易感，是当代国际公认危害现代养猪业五大重要传染病之一。 病原猪接触性传染性胸膜肺炎的病原是胸膜肺炎放线杆菌（APP），本菌包括两个生物型。生物Ⅰ型APP菌生长依赖v因子，生物Ⅱ型APP菌生长不依赖v 因子。迄今为止根据可溶性荚膜多糖和脂多糖，可将生物Ⅰ型分为15个血清型、生物Ⅱ型有2个血清型。各型的毒力主要是荚膜的高度毒型和毒素作用所引起的。各型对猪有高度致病性，生物Ⅰ型的毒力比生物Ⅱ型强，在生物Ⅰ型中血清型1型毒力最强，102个菌可引起猪发病，105个菌可导致猪的死亡。高剂量108-109可导致猪6-12小时呈最急性死亡。而2型毒力相对较弱。已明确的型交叉反应存在于3-6-8，1-9，4-7型间。 流行病学各种年龄猪均易感，3月龄猪最为易感。本病在猪群之间的传播主要由引进带菌猪引起。主要传播途径是气源感染，通过猪对猪的直接接触或通过短距离的飞沫小滴使疾病传递。拥挤、气温急剧改变、相对湿度高和通风不良等应激因素可促进本病的发生和传播，使发病率和死亡率升高。一般说大群比小群更易发生本病。老疫区的猪群发病率和病死率趋于稳定，如又突然暴发是由于饲养管理突变或新的血清型入侵所致。我国北方地区分离的胸膜肺炎放线杆菌，以血清5和7型居多。 症状根据猪的临床表现，可分为最急性、急性和慢性三个类型。 1、最急性型，有一只或几只猪突然病得很重，体温升高至41.5℃，表情漠然，食欲废绝，有短期的下痢和呕吐。后期出现严重的呼吸困难，张口呼吸，呈犬坐

猪传染性胸膜肺炎的流行病学和流行特点

猪传染性胸膜肺炎的流行病学和流行特点 作者：侯红岩，何家惠，侯继波编辑：xiaowu 来源：中国执业兽医网更新时间：2010-12-3 猪传染性胸膜肺炎(PCP) 是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起猪的一种高度接触性呼吸道疾病，又称为猪接触性传染性胸膜肺炎。它可致各年龄段的猪发生急性和慢性感染，急性猪传染性胸膜肺炎以急性出血性纤维素性胸膜肺炎为特征，病猪发热(可达42℃)、呼吸困难、食欲不振，呈现高死亡率；慢性猪传染性胸膜肺炎以慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征，潜伏于猪群内，可使猪只生长缓慢，平均日增重下降，饲养报酬降低，给养猪业造成巨大的经济损失。 猪传染性胸膜肺炎是一种世界性疾病，广泛分布于全世界所有养猪国家，近十几年来本病的流行呈上升趋势，给世界养猪业造成巨大的经济损失。自195 7年Pattison等首次报道猪传染性胸膜肺炎以来，世界大部分国家相继报道了本病的暴发和流行，如欧洲、美国、加拿大、墨西哥、南美、韩国、日本、澳大利亚。在我国，1987年哈尔滨兽医研究所发现临床病例，并证明猪传染性胸膜肺炎在我国的存在和流行，特别是近年来随着我国规模化养猪业的发展，猪传染性胸膜肺炎在我国多省流行蔓延开来呈现暴发式流行，严重威胁着我国养猪业的发展。 一、病原学 猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)是猪传染性胸膜肺炎的病原菌，该菌属于放线菌属，为革兰氏染色阴性，两极着色，有荚膜，无芽孢，无运动性。本菌包括两个生物型，生物Ⅰ型为NAD依赖型，毒力强，生物Ⅱ型为NAD非依赖型，毒力弱。根据细菌荚膜多糖和细菌脂多糖的不同，生物Ⅰ型分为12个血清型，其中血清5型进一步分为5A和5B两个亚型。但有些血清型有相似的细胞结构或相同的LPSO链，这可能是造成有些血清型间出现交*反应的原因，如血清8型与血清3型和6型，血清1型与9型间存在有血清学交*反应。我国流行的主要以血清7型为主，其次为血清2、4、5、10型。生物Ⅱ型有2个血清型（1 3、14），主要分布于欧洲。 研究表明，胸膜肺炎放线杆菌的主要毒力因子包括荚膜、脂多糖、外膜蛋白、黏附素和Apx毒素等。其中，Apx毒素是APP最主要的毒力因子，目前已知A PP至少分泌4种Apx毒素，除了新发现的ApxⅣ毒素在所有血清型中都存在外，其他3种只被某些血清型分泌。 二、流行病学 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌与不良饲养管理条件及易感猪群 等综合因素相互作用而引起猪的一种呼吸道传染病。各种年龄、性别的猪都有易感性，其中6周龄至6月龄的猪较多发，但以3月龄仔猪最为易感，主要是仔猪断奶后母源抗体消失，增加了对该病的易感性。病猪和带菌猪是本病的传染源，急性感染耐过或隐性感染猪是带菌者，成为该病流行的潜在传染源，是本病防控和根除的隐患。感染猪的鼻汁、扁桃体、支气管和肺脏等部位是病原菌存在的主要场所，病菌随呼吸、咳嗽、喷嚏等途径排出后形成飞沫，通过直