双水相
生物制药工艺学实验报告
——摸索双水相萃取酵母蔗糖酶的条件
【实验目的】
了解双水相萃取的原理；掌握蔗糖酶比活力测定的原理和方法。
【实验原理】
一、双水相萃取
1.定义：某些高聚物之间或高聚物与无机盐之间在水中以适当的浓度溶解会形成
互不相溶的两水相系统。
溶液的分相不一定依赖于有机溶剂，在一定条件下，水相也可以形成两相（即双水相系统）甚至多相。于是有可能将水溶性的酶、蛋白质等生物活性物
质从一个水相转移到另一水相中，从而完成分离任务。
在这两相中水分都占很大比例，活性蛋白质或细胞在这种环境中不会失活，但可以不同比例分配于两相，这就克服了溶剂萃取中蛋白质容易失活和强亲水
性蛋白质难溶于有机溶剂的问题。
对聚合物而言，由于相对分子质量较大，分子间作用力也较大；
高聚物与高聚物形成两相是由于高聚物的不相溶性，聚合物分子量越高，相分离所需浓度越低；
高聚物与无机盐溶液也能形成两相是由于盐析作用，盐浓度越高，越易分相。
2.相图：两水相的形成条件和定量关系，常用相图来表示，它是一条双结点线。
系线的长度是衡量两相间差别的尺度，系线越长两相间的性质差别越大，反之则越小。
系线的长度反映了两相密度的差异，两相密度差随着系线长度的增加而增加，相分离加快，但远离临界点的聚合物浓度高，粘度大，也会导致相分离困
难，所以在中间组成时，分离速度最佳。
3.影响分配系数的主要因素：
聚合物的相对分子质量：在聚合物浓度不变的前提下，当聚合物相对分子质量降低时，其疏水性下降，亲水性蛋白质易分配于富含该聚合物的相
中。
聚合物的浓度：当双水相系统的总浓度增大时，两相性质的差别增大，蛋白质趋向一侧分配。
盐类的影响：盐的浓度影响蛋白质疏水性。
4.双水相萃取的优点：
双水相系统含水量高，聚合物对蛋白质有稳定作用，为生物活性物质提供了温和的分离环境。
双水相系统界面张力低，蛋白质在两相间达到分配平衡时间短，重现性很好，故可直接放大。
二、蔗糖酶活力测定
原理：蔗糖酶可作用于β－1，2糖苷键，将蔗糖水解为D－葡萄糖和D－果
糖。
葡萄糖和果糖具有还原性，在偏碱性条件下，可与3，5－二硝基水杨酸共热后生成棕红色物质，在一定浓度范围内，还原糖的量和反应液的颜色
强度成正比关系；蔗糖酶的活力通过其水解产生的还原糖量来反映。
【实验步骤】
一、研磨法破碎酵母细胞
称6 g活性干酵母粉于研钵中，用捣杵研磨，破碎酵母细胞（至粉末状），再加入30 mL 0.1M磷酸钠缓冲液（pH7.4），继续研磨（成匀浆状）；
吸取3 mL酵母细胞匀浆液分配于2个dorf管中，5000rpm离心20min，留取上清液（标记为“粗酶液”）；
将剩余匀浆液平均分为三份，每份约9mL。
二、双水相萃取蔗糖酶（双水相体系重量为40g）
考察硫酸铵浓度对蔗糖酶分配的影响
浓度为18% 硫酸铵浓度分别为：10%，15%，17%。
条件：PEG
1500
先称量干净烧杯的重量，去皮，再将一份酵母细胞匀浆液倒入烧杯中，称量匀浆液的重量；
在烧杯中，再加入相应质量的PEG和硫酸铵，PEG均加入7.2g，10%组加入硫酸铵4g，15%加入硫酸铵6g，17%组加入硫酸铵6.8g，分别补充蒸馏水至40g；
搅拌使PEG和硫酸铵溶解，并在磁力搅拌器上充分搅拌5min，5000rpm离心20min，加速两相分开；
在小离心管上标明“萃取组（上）”和“萃取组（下）”。测量上、下相的体积（注：用移液管小心吸出），暂存于离心管中。
三、蔗糖酶活力测定
1.酶解反应体系：
2.DNS法测定体系中还原糖的含量：
四、制作葡萄糖标准曲线
五、蛋白质含量测定
【实验结果】
一、计算蔗糖酶的活力
1.以葡萄糖的质量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制葡萄糖的标准曲线，拟
拟合方程：X
0.0058
Y0.7007
-
?
=
+
将测定组的吸光值代入以上方程，得到酶解反应体系中还原糖的质量（mg）。
2.蔗糖酶活力的定义：在一定的实验条件下，在10min内释放1mg还原糖的
量为一个活力单位。
酶活力（U/mL）＝还原糖的质量（mg）÷ 0.5（mL）×酶解反应体系的
体积（mL）÷酶液的体积（mL）
二、计算蛋白质的含量
1. 将粗酶液组、萃取组的吸光值代入实验一所得的标准溶菌酶回归方程中，得
到体系中蛋白质的浓度（mg/mL）。
标准溶菌酶回归方程：Y=0.5871*X+0.0278
三、计算比活力（粗酶液、萃取相）
比活力=酶活力（U/mL)÷蛋白质浓度（mg/mL）
四、计算纯化倍数和回收率
纯化倍数=萃取相的比活力÷粗酶液的比活力
回收率=萃取相的酶含量÷粗酶液的酶含量
酶含量=酶活力（u/mL）×酶液体积（mL）
【实验结果分析】
结论：
中药提取车间工艺用水使用标准管理程序
1 目的 建立工艺用水管理程序，使工艺用水管理使用规范化，保证为生产提供合格工艺用水。 2 范围 生产、使用工艺用水的岗位。 3 职责 工艺用水的生产、使用人员负责本程序的执行、QA监督执行。 4 规程 4.1 饮用水可作为药材净制时的漂洗、制药用具的粗洗用水。除另有规定外， 也可作为药材的提取溶剂。 4.2 纯化水可作为配制普通药物制剂用的溶剂或试验用水；可作为中药注射剂、滴眼剂 等灭菌制剂所用药材的提取溶剂；口服、外用制剂配制用溶剂或稀释剂；非灭菌制剂用器具的注射用水。也用作非灭菌制剂所用药材的提取溶剂。纯化水不得用于注射剂的配制与稀释。 4.3 生产过程称中定时监测产水质量，只有合格的工艺用水才能进入储灌，不合格的产 水排掉，直至处理合格。水质检测执行“”即《纯化水制备水质检测标准操作程序》4.4 工艺用水必须按规定方法储存：纯化水储罐所有接口密闭无泄漏，呼吸器加装 0.22μm疏水滤器并经完整性测试合格，纯化水输送管路应循环。 4.5 为减少浪费应根据生产需要适当安排工艺用水生产时间及产量。 4.6 纯化水在输送管道前端应加装紫外杀菌仪。 4.7各纯化水用水点所接支管长度应小于主管直径的三倍，否则必须在每次使用后确保 拆卸放空。 4.8 工艺用水在使用过程中，应定期监测，水质监测执行“SMP-QA-0019”即《工艺用 水质量监控标准管理程序》。 4.9 在监测中发现有偏差趋向及时查找原因予以纠正，发现不合格立即停产放空，查找
原因，直至处理合格。 4.10 纯化水管道及储罐每月进行放空，并用纯蒸汽121℃灭菌30min。 4.11 所有用水点不管使用与否，每天必须打开放水5-10min。 4.12 所有用水点每次使用前应先进行2分钟排放，然后再使用。 5.13纯化水在不使用时允许关闭循环泵不超过20h，但在重新开始运行前需采用手动， 关闭回储罐阀门，开启排放阀，强制排放5min以上方可开启回储罐阀门。 4.14纯化水产水结束关闭设备电源前，手动开启产水进罐阀、产水取样阀将设备至储罐 间管内存水排空。 4.15 每月将循环系统记录原始数据倒出，刻录成光盘，与运行记录共同存档备查。// 5修订历史
双水相体系萃取(精)
双水相萃取技术 早在1896年,Beijerinck发现,当明胶与琼脂或明胶与可溶性淀粉溶液相混时,得到一个混浊不透明的溶液,随之分为两相,上相富含明胶,下相富含琼脂(或淀粉,这种现象被称为聚合物的不相溶性(incompatibility,从而产生了双水相体系(Aqueous two phase system,ATPS。 传统的双水相体系是指双高聚物双水相体系,其成相机理是由于高聚物分子的空间阻碍作用,相互无法渗透,不能形成均一相,从而具有分离倾向,在一定条件下即可分为二相。一般认为只要两聚合物水溶液的憎水程度有所差异,混合时就可发生相分离,且憎水程度相差越大,相分离的倾向也就越大。可形成双水相体系的聚合物有很多,典型的聚合物双水相体系有聚乙二醇(polyethylene glycol,略作PEG/葡聚糖(dextran,聚丙二醇(polypropylene glycol/聚乙二醇和甲基纤维素(methylcellulose/葡聚糖等。另一类双水相体系是由聚合物/盐构成的。此类双水相体系一般采用聚乙二醇(polyethylene glycol作为其中一相成相物质,而盐相则多采用硫酸盐或者磷酸盐。 萃取原理 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似,都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同时,物质进入双水相体系后,由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等的存在和环境因素的影响,使其在上、下相中的浓度不同。物质在双水相体系中分配系数K可用下式表示: K= C上/ C下 其中K为分配系数,C上和C下分别为被分离物质在上、下相的浓度。 分配系数K等于物质在两相的浓度比,由于各种物质的K值不同,可利用双水相萃取体系对物质进行分离。其分配情况服从分配定律,即,“在一定温度一定压强下,如果一个物质溶解在两个同时存在的互不相溶的液体里,达到平衡后,该物质在两相中浓度比等于常数”,分离效果由分配系数来表征。
双水相萃取和超临界萃取的方法与特点
双水相萃取和超临界萃取的方法与特点 专业生物工程092 课程酶工程 老师王明力 学生吴志洪 学号 0908110342 2012年12月25日
双水相萃取和超临界萃取的方法与特点 摘要：双水相萃取技术是一种高效温和的新分离技术，它与传统的萃取及其它分离技术相比具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点，从而使其能广泛应用于生物分离工程中。同时文章简要介绍了超临界流体萃取的基本原理和特点及其应用，其中超临界CO2萃取是最常用的.随着研究的深入和认识的加强，超临界流体技术作为一项可持续的绿色工艺，将具有广泛的应用前景。 关键词：双水相萃取超临界流体萃取 Abstract: Phasepartitioning technology is a kind of high efficient mild new separation technique ，and the traditional extraction and other separation technology compared with mild conditions, large quantity of operation, easy for operation, which makes its advantages such as extensively applied in biological separation engineering.And his article introduces the basic principle of supercritical fluid extraction and it,s application ,The supercritical CO2extraction is the most commonly used.With the deepening of research and understanding of the strengthen, supercritical fluid technology as a sustainable green technology, has a broad prospect of application.
双水相萃取实验
一、双水相系统的相图绘制 1.实验目的 了解制作双水相系统的相图的方法，加深对相图的认识。 2.实验原理 相图是研究两水相萃取的基础，双水相形成条件和定量关系常用相图来表示。图1是典型的高聚物-高聚物-水双水相体系的直角坐标相图，两种聚合物A、B以适当比例溶于水就会分别形成有不同组成、度的两相，上相组成用T点表示，下相组成用B点表示，由图1可知上下相所含高聚物有所偏重，上相主要含B，下相主要含A。曲线TCB称为结线，直线TMB称为系线。结线上方是两相区，下方为单相区，若配比取在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为混浊。组成在系线上的点，分为两相后，其上下相组成分别为T和B，T、B量的多少服从相图的杠杆定律。即T和B相质量之比等于系线上MB与MT的线段长度之比。又由于两相密度相差很小，故上下相体积之比也近似等于系线上MB与MT线段长度之比。 图1 A-B-水双水相体系相图 O aqueous two-phase system Figure 1 The phase diagram of the A-B-H 2 3.实验器材和试剂 （1）器材：电子台秤，漩涡混合器，大试管，滴定管，密度计，温度计。（2）试剂：聚乙二醇，硫酸铵，硫酸镁。 4.操作方法 （1）溶液的配制 配制40%的盐（硫酸铵或硫酸镁）溶液 配制40%的聚乙二醇溶液，液体聚乙二醇可用纯溶液。 （2）相图的制作
精确称取一定质量（0.7000g 左右）PEG 溶液于大试管中，按表1所列第1列数据，加入0.5mL 去离子水，用滴定管缓慢滴加已配好的40%的盐溶液，并不断在漩涡混合器上混合，观察溶液的澄清程度，直至试管内液体出现浑浊为止。记录盐溶液的加量(g)。然后，按表格所列第2列数据加入水，溶液澄清，继续向试管中滴加盐溶液并不断混匀，直至再次达到浑浊，如此反复操作。计算每次达到浑浊时，PEG 和盐在系统总量中的质量分数，将实验数据填入表中，以PEG 的质量分数为纵坐标，某种盐的质量分数为横坐标作图，即得到一条双节线的相图。 表1相图制作表 编 号 水 /g (NH 4)2SO 4溶液加量/g 纯(NH 4)2SO 4累计量/g 溶液累计总量/g (NH 4)2SO 4质量分 数/% PEG 质量分数/% 1 0.5 3.1315 0.895 4.3786 20.4 4.79 2 0.3 2.1792 1.5186 5.9511 21.85 3.02 3 0.3 2.0456 2.1 9.2867 22.65 2.26 4 0.3 3.1372 3.0 12.6738 23.68 1.65 5 0.5 6.0769 4.7 19.3276 24.52 1.08 6 0.5 6.1909 6.5 26.0138 25.02 0.8 7 0.5 6.8585 8.5 33.4596 25.32 0.62 根据以上数据以(NH 4)2SO 4质量分数为横坐标，以PEG 质量分数为纵坐标即可做出相图。 二、双水相系统比例的选择 根据相图，选择五个成相比例。 三、蛋白酶酶活标准曲线的绘制—— Folin 酚法或紫外分光光度法 PEG4000与MgSO4双水相图 y = 0.0995x 2 - 5.3887x + 73.334 2012345 6 20 21 22 2324 25 26 MgSO4% P E G 4000%
第七章 双水相萃取
第七章双水相萃取 第一节概述 基因工程产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固—液分离带来了困难，同时这类产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境因素特别敏感，由于它们在有机溶剂中的溶解度低并且会变性，而且大部分蛋白质分子有很强的亲水性，不能溶于有机溶剂中，因此传统的溶剂萃取法并不适合。采用在有机相中添加表面活性剂产生反胶束的办法可克服这些问题，但同样存在相的分离。因此基因工程产品的商业化迫切需要开发适合大规模生产的、经济简便的、快速高效的分离纯化技术。其中双水相萃取技术，又称水溶液两相分配技术是近年来出现的引人注目、极有前途新型分离技术。双水相萃取就是针对生物活性物质的提取所开发的一种新型液一液萃取分离技术。 双水相萃取法的特点是能够保留产物的活性，整个操作可以连续化，在除去细胞或细胞碎片时，还可以纯化蛋白质2～5倍，与传统的过滤法和离心法去除细胞碎片相比，无论在收率上还是成本上都要优越得多见表11．1所示。双水相萃取法和传统的酶粗分离方法(如 盐析或有机溶剂沉淀等)相比也有很大的优势，如以 -半乳糖苷酶为例，用沉淀或双水相萃 取纯化的比较见表11．2。除此以外，处理量相同时，双水相萃取法比传统的分离方法，设备需用量要少3～10倍，因此已被广泛地应用在生物化学、细胞生物学和生物化工领域，进行生物转化、蛋白质、核酸和病毒等产品的分离纯化和分析等。用此法来提纯的酶已达数十种，其分离过程也达到相当规模，如甲酸脱氢酶的分离已达到几十千克湿细胞规模，半乳糖苷酶的提取也到了中试规模等。 近年来又进行了双水相萃取小分子生物活性物质，如红霉素、头孢菌素C、氨基酸的研究和亲和双水相萃取的研究，大大扩展了应用范畴并提高了选择性；使双水相萃取技术具有更大的潜力和宽阔的前景。 双水相萃取现象最早是1896年由Beijerinck在琼脂与可溶性淀粉或明胶混合时发现的这种现象被称为聚合物的“不相溶性”。本世纪60年代瑞典Lund大学的AlbertssonPA及其同事们最先提出双水相萃取技术并做了大量的工作。70年代中期西德的KulaMR和KronerKH 等人首先将双水相系统应用于从细胞匀浆液中提取酶和蛋白质，大大改善了胞内酶的提取效果。虽然双水相技术在应用方面取得了很大的进展，但几乎都是建立在实验基础上，至今还没有一套比较完善的理论来解释生物大分子在体系中的分配机理。1989年，Diamond等以Ftory—Huggins理论为基础，推导出生物分子在双水相体系中的分配模型，但尚有局限性，仍需继续探索，不断完善。 双水相萃取技术真正工业化的例子也很少，其原因是成本较高，使它在技术上的优势被削弱。双水相萃取中，原材料成本占了总成本的85％以上并且总成本随生产规模的扩大而增加很多。因此产业化成了问题，若要发挥其技术优势，降低原材料成本是关键。合成价格低廉并且具有良好的分配性能的聚合物及将其从后续的操作过程中回收是双水相萃取技术研究中的一个主要方向。 一、双水相的形成 在聚合物—盐或聚合物—聚合物系统混合时，会出现两个不相混溶的水相，典型的例子如在水溶液中的聚乙二醇(PEG)和葡聚糖，当各种溶质均在低浓度时，可以得到单相匀质液体，但是，当溶质的浓度增加时，溶液会变得浑浊，在静止的条件下，会形成两个液层，实际上是其中两个不相混溶的液相达到平衡，在这种系统中，上层富集了PEG，而下层富集了葡聚糖。
双水相萃取
实训1 双水相萃取相图的制作 一、实训目的 1. 学习双水相分离萃取的原理和方法 2. 学习双水相萃取相图的制作 二、实训原理 双水相萃取法是利用物质在互不相容的两个水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 两水相的形成：高聚物与无机盐在水中由于盐析的作用会形成两个相，如PEG 与硫酸盐或碱性磷酸盐。两种亲水性高聚物在水中由于聚合物的不相容性也会形成两个相。但是它们只有达到一定的浓度时，才能形成两相，双水相形成的定量关系可用相图来表示。 相图是一根双节线, 把均匀区和两相区分隔开来。 当成相组分的配比取在：线的下方时，为均相区； 曲线的上方时，为两相区；在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为浑浊。 相图中TMB 称为系线；T 代表上相组成；B 代表下相组成；同一条系线上各点分成的两相具有相同的组成，但体积比不同。 V T / V B = BM / MT 三、实训器材、试剂、材料 1.器材：试管，离心机，天平，离心管，三角瓶，滴定管。 2.试剂：聚乙二醇2000（PEG2000），硫酸铵。 四、实训操作步骤 1.PEG2000（NH 4)2SO 4双水相体系相图的测定 （1）取10%（g/ mL ）PEG2000溶液10mL 于三角瓶中。 （2）用40%（g/mL ）（NH 4)2SO 4溶液装入滴定管中滴定至三角并中溶液出现浑浊，记录）NH4)2SO 4溶液消耗的体积。加入1mL 水使溶液澄清，继续用（NH 4)2SO 4溶液滴定至浑浊，重复7～8次，记录每次（NH 4)2SO 4溶液消耗的体积，计算每次出现浑浊时体系中PEG2000和（NH 4)2SO 4的浓度（g/mL ）。 （3） 以（NH 4)2SO 4的浓度（g/mL ）为横坐标，PEG2000的浓度（g/mL ）为纵坐标，绘制PEG2000- （NH 4)2SO 4双水相体系相图。 2. 相图制作表 10%PEG2000 10mL 温度T=20℃ PEG2000 % (NH 4)2SO 4 % 两相 均相
反渗透制取纯净水方案及工艺流程
、丿LKfl r #“j J?.>-j r 、”h i e I W L XL . n ,m_*. *”」r 、^血. ,** 山罰* f.,垃灯土UnUjrt 腱;ftnTl> 丄 >”i, kt u> ^抱fB菏汞w^B〕谢甘 J3^B S窥J^S颇^ ^号造l!l岳监w抡HI振捂iH^s 全4s^? 3fto 3SS <5揍$j杂尸^ 龄^p^B ift益肃 直饮水、高纯水、超纯水制备工艺流程图及直饮水系统、高纯水设备、超纯水制备系统介绍 直饮水、高纯水、超纯水制备工艺 1直饮水基本工艺流程： 2.矿泉水、纯净水生产工艺： 3.制药、化工、电子工艺用水，电厂锅炉给水、高纯水、超纯水处理 直饮水、高纯水、超纯水制备工艺流程图及直饮水系统、高纯水设备、 超纯水制备系统介绍 直饮水、高纯水、超纯水制备工艺 1 ?直饮水基本工艺流程： 2 ?矿泉水、纯净水生产工艺:
抑药沉淀 市政自来水| _ 丽词一丽i|2|金介履过词一|活"吸視 |--- ------ r --------------- 1 Ph调节怖药------- - ---- --------------- —?| 一级胃压泵| —|-级R0装JK| -------------- |二級高压泵| —|二级肿装召 灌装线；* |紫外线杀菌装罢—咸品水箱卜一臭氧杀苗液| — 3.制药、化工、电子工艺用水，电厂锅炉给水、高纯水、超纯水处理 注： 1. 选配①为根据各地用户水质硬度情况不同选用软化或加药。 2. 选配②为根据用户一次性投资预算考虑选混床或EDI。 3. 选配③为根据用户对成品水质的要求确定是否需要。 自来水制备超纯水制备系统反渗透纯水设备 一、自来水泵入不锈钢水箱，加药，砂滤，活性炭过滤。 二、得到软化水，加药，进入一级反渗透，出来纯水 三、再进入二级大型工业反渗透水处理设备系统，出来超纯水高纯水 超纯水用在电子工业等标准：二级反渗透出水电导率 1 us/cm2电阻率大于15兆欧/cm2
水牛角水提取工艺的研究
●实验研究● 水牛角水提取工艺的研究 湖南省中医药研究院(410006) 刘天舒 摘要 目的:制定水牛角水提取工艺。方法:采用水回流提取法提取,以水浸出物和总氮量为考察指标。结论:根据正交试验考察,最佳提取为饮片加水提取3次,第1次加14倍量水回流提取10h,第2次加12倍水提取8h,第3次加12倍水提取6h。 主题词 水牛角/分离和提纯 中药制药工艺 水牛角为牛科动物水牛(Bubalus bubalis L innaeus)的 角。性苦、寒,归心、肝经。具有清热解毒、凉血、定惊之功。 主要用于温病高热,神昏谵语,发斑发疹,吐血衄血,惊风,癫 狂。临床上水牛角饮片提取时间较长。本试验以浸膏得率 和总氮量为指标,采用正交试验对加水量、提取时间和提取 次数进行考察,现介绍如下。 1 仪器与试药 1.1 仪器 202-2型电热恒温干燥箱(上海申贤恒温设备 厂)。 1.2 试药 水牛角饮片(湖南三湘中药饮片有限公司提 供)。 2 实验方法与结果 以浸膏得率和提取液中总氮量为指标,采用正交试验 对加水量、提取时间和提取次数进行考察,以此进行水提取 工艺的正交试验。 2.1 因素水平表 根据《中国药典》2000年版一部水牛角 浓缩粉的水提取工艺要求(加水量提取2次,每次提取7～ 10h),选择因素水平,见表1。 表1 因素水平表 因素水平加水量(倍) (A) 提取时间(h) (B) 提取次数(次) (C) 116、14、1412、10、81 214、12、1210、8、62 312、10、108、6、43 2.2 浸膏得率的测定 用L9(34)正交表安排试验,称取100g药材饮片,按正交试验,滤过,滤液合并,浓缩,定容至500m l,滤过,精密量取滤液50m l,置已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,105℃干燥3h,置干燥器中冷却0.5h,迅速称重,计算浸膏得率。同时精密量取滤液10m l至凯氏烧瓶中,用常量法测定含氮量(《中国药典》2000年版一部附录I X L)。结果见表2。 2.3 方差分析 将正交结果进行分析,结果见表3、表4。 由表2中极差R值大小显示,各因素作用主次分别为C >B>A;方差结果表明,A、B因素的影响没有显著性意义(P >0.05),C因素的影响具有非常显著性的意义(P<0.01),两 项指标考察结果均以A 2B2C3组合为佳。故最终选择A2B2C3 组合为最佳工艺,即加水回流提取3次,第1次加14倍量水 提取10h,第2次加12倍量水提取8h,第3次加12倍量水提 取6h。此工艺条件为正试验中的第5号验证试验。 表2 水提工艺正交试验及结果 试验号1(A)2(B)3(C)4(D)浸膏(%)含氮量(%) 11111 2.3380.818 21222 2.364 1.332 31333 3.815 1.408 42123 3.538 1.341 52231 4.162 1.439 62312 2.0420.782 73132 3.819 1.403 83213 2. 1840.796 93321 3.186 1.295 K 1 9.5179.695 6.5649.686G=28.448 浸 K 2 9.7429.71010.0889.225CT=G2/9=89.92097 K 3 9.1899.04311.7969.537SS=(K12+K22+K32) 3-CT 膏 SS0.0515580.096691 4.7455180.036896 R0.5530.667 5.2320.461 K 1 3.558 3.562 3.396 3.552G=10.614 含 K 2 3.562 3.567 3.968 3.517CT=G2/9=12.51744 氮 K 3 3.493 3.485 4.250 3.545SS=(K12+K22+K32)/3-CT 量 SS0.0009170.0014090.6653360.000229 R0.0690.0820.8540.007— 表3 浸膏得率方差分析表 变异来源SS r MS F P A0.05155820.025779 1.4>0.05 B0.09669120.048345 2.6>0.05 C 4.7455182 2.372759128.6<0.01 误差0.03689620.018448—— 表4 浸膏得率方差分析表 变异来源SS r MS F P A0.00091727.5724 4.2>0.05 B0.00140927.9244 6.2>0.05 C0.66533620.70462918.1<0.01 误差0.00022920.0744-- 3F 0.05(2,2) =19;F0.01(2,2)=99 ? 7 7 ? 第21卷第2期 2005年3月 湖南中医杂志 HUNAN JOURNAL OF TRAD I TI O NAL CH I N ESE ME D I C I N E Vol121 No12 Mar 2005
反渗透制取纯净水方案及工艺流程
直饮水、高纯水、超纯水制备工艺流程图及直饮水系统、高纯水设备、 超纯水制备系统介绍 直饮水、高纯水、超纯水制备工艺 1．直饮水基本工艺流程： 2．矿泉水、纯净水生产工艺： 3．制药、化工、电子工艺用水，电厂锅炉给水、高纯水、超纯水处理
注： 1.选配①为根据各地用户水质硬度情况不同选用软化或加药。 2.选配②为根据用户一次性投资预算考虑选混床或EDI。 3.选配③为根据用户对成品水质的要求确定是否需要。 自来水制备超纯水制备系统反渗透纯水设备 一、自来水泵入不锈钢水箱，加药，砂滤，活性炭过滤。 二、得到软化水，加药，进入一级反渗透，出来纯水 三、再进入二级大型工业反渗透水处理设备系统,出来超纯水高纯水 超纯水用在电子工业等标准：二级反渗透出水电导率1 us/cm2 电阻率大于15兆欧/cm2 超纯水工业等标准 反渗透设备超纯水处理: 电子半导体、集成电路芯片及封装、液晶显示、高精度线路板、光电器件、各种电子器件、微电子工业、大规模、超大规模集成电路需用大量的高纯水、超纯水清洗半成品、成品。集成电路的集成度越高，对水质的要求也越高。目前我国电子工业部把电子级水质技术分为五个行业标准，分别为18MΩ.cm、15MΩ.cm、10MΩ.cm、2MΩ.c m、0.5MΩ.cm，以区分不同水质。
一、大型工业反渗透水处理设备系统应用领域：（1）电力工业：锅炉补给水、冷却水坝；（2）电子工业：半导体工业超纯水、集成电路清洗用水、配方用水；（3）食品工业：配方用水、生产用水；（4）制药行业：工艺用水、制剂用水、洗涤用水、注射用水、无菌水制备；（5）饮料工业：配方用水、生产用水、洗涤用水；（6）化学工业：生产用水、废水处理；（7）饮水工程：超纯水制备、饮用水净化；（8）石油化工：油田注入水、石化废水深度处理；（9）海水淡化：海岛地区、沿海缺水地区、船舶、海水油田等生产生活用水；（1 0）环保领域：电镀漂洗水中贵重金属、水的回收，实现零排放或微排放。 二、大型工业反渗透水处理设备系统系统优点：（1）可以从海水或苦咸水中提取淡水；（2）容易去除有机物、细菌和胶体及溶于水中的其它杂质，获得高纯度的水；（3）由于反渗透过程是一个物理过程，没有相变，因而节能；（4）操作简单，易实现自动化，节省劳力；（5）结构紧凑，占地小，从而降低费用；（6）作为一种浓缩方法，能回收溶解在溶液中有价值的成份。 三、广州市水天水处理设备有限公司从事工业水处理工程、软化水处理工程、去离水工程、超纯水工程、高纯水工程、海水谈化工程设备、电子工业用水、食品工业用水、医院制药工业用水、电镀工业用水等。
双水相萃取相图制作实验
实验一：双水相萃取的相图制作 一、试验目的 1了解双水相萃取的原理和发展历史、趋势 2 掌握用浊点法制作双水相系统相图的方法。 二、试验原理 某些亲水性高分子聚合物的水溶液超过一定浓度后可形成两相，并且在两相中水分占很大比例，即形成双水相。常见的双水相系统可分为两类，即双聚合物体系和聚合物/盐体系。双水相形成的条件和定量关系可用相图来表示，它是研究双水相萃取的基础。相图是一根双节线，当成相组分的配比在曲线的下方时，系统为均匀的单相，混合后溶液澄清透明，称为均相区；当配比在曲线的上方时，能自动分成两相，称为两相区；若配比在曲线上，混合后，溶液恰好由澄清变为浑浊。 连接双节线上的两点的直线称为系线，它由三点确定,即M(初始混合物组成情况)、T(上相组成情况)、B(下相组成情况)，其中T/B互为共扼相。系线越长，两相间的差别越大，当系线长度趋向零时，两相差别消失。系线上系统的总浓度不同，但均分成组成相同体积不同的两相，两相体积服从杠杆规则：ＶＴ／ＶＢ＝ＢＭ／ＭＴ 三、主要仪器设备 漩涡振荡器、微量滴管装置、电子天平 四、试验步骤 1 双水相系统的制作 精确配制43%（g/ml）的(NH4)2SO4溶液，并测定其密度。另精确称取PEG400液体0.7g 于试管中，按表格中所列第一号数据，用吸管加入0.5毫升水，缓慢滴加已配制好的(NH4)2SO4溶液，并在混合器上混合，观察溶液的澄清程度，直至试管内溶液开始出现浑浊为止，记录(NH4)2SO4的加入量，根据密度求出重量。然后按下表列出的第2号数据加入水，使其澄清，继续向试管中滴加(NH4)2SO4溶液，使其再次达到浑浊。如此反复操作，计算每次达到浑浊时PEG400和(NH4)2SO4在系统总量中的百分含量。
双水相相图制作
实验一双水相相图的制作 一、实验目的 1.了解双水相系统成相的原理和方法。 2.学习双水相相图的制作。 3.掌握双水相溶液配制与双水相萃取的操作。 二、实验原理 双水相系统中使用的双水相是由两种互不相溶聚合物（如聚乙二醇（PEG）与葡聚糖(Dextran)）或者互不相溶的盐溶液和聚合物溶液（如PEG与(NH4)2SO4）组成。双水相系统的制备，一般是将两种溶质分别配制成一定浓度的水溶液，然后将两种溶液按照不同的比例混合，静止一段时间，当两种溶质的浓度超过某一浓度范围时，就会产生两相。两水相形成的条件和定量关系可用相图来表示，它是一根双节线，当成相组分的配比取在曲线下方时，系统为均匀的单相，混合后，溶液澄清透明，称为均相区；在曲线的上方时，能自动分为两相，称为两相区；若配比取在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为浑浊。相图是研究两水相萃取的基础。 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配，但萃取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等) 的存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同。对于某一物质,只要选择合适的双水相体系，控制一定的条件，就可以得到合适的分配系数，从而达到分离纯化之目的。 双水相萃取受许多因素的影响，如高分子聚合物种类、分子量及组成、无机盐种类及组成，pH等。本实验选用PEG—硫酸盐为相系统，点浊法绘制相图。 三、试剂及仪器 仪器：天平、离心机、刻度试管、吸管、分光光度计、试管、移液管等。 药品：PEG6000、硫酸铵、蒸馏水等。 四、实验内容 （一）PEG4000-硫酸铵双水相体系相图的测定 1. 取25%PEG4000溶液（w/v）10ml 于三角瓶中。 2. 用40%硫酸铵溶液（w/v）装入滴定管中滴定至三角瓶中溶液恰好浑浊，记录硫酸铵消耗的体积。加入1ml 水使溶液澄清，继续用硫酸铵滴定至恰好浑浊，重复7次记录每次硫酸铵消耗的体积，计算每次出现浑浊时体系中PEG和硫酸铵的浓度（w/v），并填入表1中。 3. 以硫酸铵的浓度（w/v）为横坐标，PEG浓度（w/v）为纵坐标，绘制出PEG4000-硫酸铵双水相体系相图。 表1 PEG4000-硫酸铵双水相体系相图制作表
第8章双水相萃取技术
第8章双水相萃取技术 第8章双水相萃取技术 1双水相萃取现象：最早是1896年由Beijernek在琼脂和可溶性淀粉或明胶混合时发现的，这种现象称之为聚合物的“不相溶性”。70年代中期西德的Kula和Kroner等人首先将双水相系统应用于从细胞匀浆 液中提取酶和蛋白质，大大地改善了胞内酶的提取效果。 双水相萃取技术：某些亲水性高分子聚合物的水溶液超过一定浓度后可形成两相，并且在两相中水分均占很大比例，即形成双水相系统。利用亲水性高分子聚合物的水溶液可形成双水相的性质进行物质分离的方法称双水相萃取技术，又称水溶液两相分配法。 2双水相萃取技术基本原理：①双水相的形成一聚合物的不相容性：混合是熵增加的过程，可自发进行。但是，分子间的相互作用力也会随分子量的增大而增大。当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于分子量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。这种含有聚合物分子的溶液发生分相的现象称为聚合物的不相容性。 双水相的形成一系统举例：绝大多数天然的或合成的亲水性聚合物水溶液，在与第二种亲水性聚合物混合，并达到一定浓度时，就会产生两相，两种高聚物分别溶于互不相溶的两相中。如用等量的 1.1 %右 旋糖酐溶液和0.36 %甲基纤维素溶液混合，静止后产生两相，上相中含右旋糖酐0.39 %，含甲基纤维素 0.65 %;而下相含右旋糖酐 1.58 %，含甲基纤维素0.15 %。聚合物与无机盐的混合溶液也可形成双水相，例如，PEG^磷酸钾、PEG^磷酸铵、PEG^硫酸钠等常用于生物产物的双水相萃取。PEG^无机盐系统的上 相富含PEG下相富含无机盐。 Dextran-PEG体系的相图：（1）TKB称为双节线，双节线以下的区域为均相区，以上的区域为两相区。（2）TMB称为系线，是连接双节线上两点的直线，在系线上各点处系统的总浓度不同，但均分成组成相同而体积不同的两相。 萃取原理：双水相萃取与水-有机相萃的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同时，物质进入双水相系后，由于表面性质、电荷作用和各种力（如疏水键、氢键和离子键等）的存在和环境因素的影响，使其在上、下相中的浓度不同。 几个常用的术语：（1）分配系数:、二G/C2 = C_/C=.（分配系数K等于物质在两相的浓度比，由于各种物质的K值不同，可利用双水相萃取体系对物质进行分离）。（2）萃取率： 该相中被提取物质的量 Y%= 100% %=体系中被提取物质的总量％ 双水相体系萃取分离的特点：条件温和；操作方便；回收率高、提纯的倍数可达2-20倍,如体系选择 适当，回收率可达80%-90%A上,且分离速度快。 3双水相相图的操作：①把刻度离心管放置于电子天平上，调零；②向刻度离心管滴加一定量50% PEG-6000（简称A），记录重量；③调零，再滴加40%硫酸铵溶液（简称B），振荡，继续滴加B,直到混合物 呈现混浊状态，显示已形成不溶的两相，记录B的重量；④电子天平调零，然后，向混合物滴加一定重量 的水（0.4-0.5ml），经振荡后，重新呈现澄清状态，此现象表明溶液又回复成单相，记录此时的W重量；⑤ 电子天平调零。接着，再一次滴加B;⑥重复上述步骤。最后可得一系列成单相的点。 双水相相图的绘制：以PEG-6000和硫酸铵构成的双水相系统的相图曲线可根据如下公式计算获得： X=［0.4B/（A+B+W）］100% , 丫二［0.5A/（A+B+W）］100% （公式符号含义：Y :在某成单相点时 PEG-6000占总量的百分数；X :在某成单相点时硫酸盐占总量的百分数； A :在某成单相点时PEG-6000溶 液在系统中的总量（g）；B:在某成相点时硫酸铵溶液在系统中的总量（g）；W：在某成单相点时水在系统中的总量（g））。以丫为纵坐标，X为横坐标，丫对X作图得双水相系统相图。相图中曲线左边部分为单相区（含 曲线），曲线以右为双相区。 4双水相萃取的应用：①分离和提取各种蛋白质（酶）:PEG /硫酸铵双水相体系提取 a -淀粉粉酶和蛋白酶时a -淀粉粉酶收率90%分配系数为19.6，蛋白酶的收率高于60%分离系数高达15.1 :②提取抗生素；③双水相电泳分离氨基酸、蛋白质④基因工程药物的分离与提取：用PEG 4000/磷酸盐从大肠杆 菌碎片中提取人生长激素，用PEG -磷酸酯/磷酸盐提取a 1-干扰素和3 -干扰素。 5双水相萃取分离技术的发展方向：①新型双水相体系的开发：用变性淀粉取代葡聚糖；用羟基纤维 素取代聚乙二醇。②后续色谱纯化工艺研究：双水相萃取与层析技术。③金属亲和双水相萃取技术：利用金属离子和蛋白质中精氨酸、组氨酸的亲和作用。
双水相萃取技术研究论文
双水相萃取技术 姓名：小行星学号： 2015xxxx专业：化工工艺 摘要：双水相萃取是一种新型的萃取分离技术，本文介绍了双水相体系的形成 及特点，重点介绍了双水相萃取技术的应用和双水相萃取的主要设备， 对双水相萃取技术应用前景及展望 关键字：双水相萃取分离技术应用展望 1、引言 溶剂萃取法是分离技术中最重要的方法之一。传统的溶剂萃取分离是依据被分离物质在两个互不相溶液相中的溶解性不同而达到分离目的。一般的萃取体系包括有机相和水相两部分,迄今为止,已有若干种分类方法。随着近年来分离技术在生命科学、天然药物提纯及各类抗生素药物等方面应用的迅速发展,新型的萃取技术应运而生。例如对于生物物质来说,分离的对象复杂,既包括可溶物,如蛋白质和核酸,也包括悬浮的小颗粒,如细胞器和整个细胞;由于生物物质极易变性和失活,传统的有机相和水相的两相萃取不能解决生物物质失活等问题，给分离带来很大的难度，而双水相萃取技术能够很好的解决这一难题。 双水相萃取(Aqueoustwo-phase extraction, ATPE)[1]是两种水溶性不同的聚合物或者一种聚合物和无机盐的混合溶液,在一定的浓度下,体系就会自然分成互不相容的两相，被分离物质进入双水相体系后由于表面性质、电荷间作用和各种作用力(如憎水键、氢键和离子键)等因素的影响,在两相间的分配系数K不同,导致其在上下相的浓度不同,达到分离目的，这种现象在1896年被 B eijerinck首次发现,随后双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视,与传统的萃取及其他分离技术相比具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点,随着生物、医药等行业的蓬勃发展，从而使双水相萃取技术能越来越广泛应用于生物工程、药物分析和金属分离等方面。 2、双水相体系 简而言之，双水相萃取是利用溶质在两个互不相溶的水相中的溶解度不同
双水相萃取技术
三、双水相萃取 3.1 双水相萃取的原理及特点 3.1.1 双水相萃取的原理 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配，但萃取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的存在和环境因素的影响，使其在上、下相中的浓度不同。分配系数K等于物质在两相的浓度比，由于各种物质的K值不同，可利用双水相萃取体系对物质进行分离。 3.1.2 双水相萃取的特点 双水相体系萃取具有如下特点：(1)含水量高(70%~90%)，是在接近生理环境的温度和体系中进行萃取，不会引起生物活性物质失活或变性；(2)分相时间短，自然分相时间一般为5~15min； (3)界面张力小(10-7~10-4mN/m)，有助于强化相际间的质量传递；(4)不存在有机溶剂残留问题； (5)大量杂质能与所有固体物质一同除去，使分离过程更经济；(6)易于工程放大和连续操作。由于双水相萃取具有上述优点，因此，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。 3.2 双水相萃取在分离和提取各种蛋白质(酶)上的应用 用聚乙二醇(PEG)/羟丙基淀粉酶(Reppal PEG)体系经两步法可从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶(PGK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。在黄豆匀浆中加入PEG4000，可絮凝细胞碎片及大部分杂蛋白。在上清液中加入PEG4000(12%)-ReppalPES(40%)，PGK在上相、GAPGH在下相的收率均在80%以上。萃取过程的放大采用离心倾析机连续处理匀浆液，用离心萃取器完成双水相体系的两相分离，整个工艺具有处理量大、接触时间短、酶收率高的特点。用PEG/(NH4)2SO4双水相体系，经一次萃取从A-淀粉酶发酵液中分离提取α-淀粉酶和蛋白酶，萃取最适宜条件为PEG1000(15%)-(NH4)2SO4(20%)，pH=8，α-淀粉酶收率为90%，分配系数为19.6，蛋白酶的分离系数高达15.1。比活率为原发酵液的1.5倍，蛋白酶在水相中的收率高于60%。通过向萃取相(上相)中加进适当浓度的(NH4)2SO4可达到反萃取。实验结果表明，随着(NH4)2SO4浓度的增加，双水相体系两相间固体物析出量也增加。固体沉淀物既可干燥后生产工业级酶制剂，也可将固体物加水溶解后用有机溶剂沉淀法制造食品级酶制剂. Harris用双水相体系从羊奶中纯化蛋白，研究了牛血清清蛋白(OSA)、牛酪蛋白、β-乳球蛋白在PEG/磷酸盐体系中的分配以及PEG相对分子质量、pH值和盐的加入对3种蛋白分配的影响。实验结果表明。增加NaCl浓度，可提高分配系数，最佳pH为5。对OSA和牛酪蛋白，可得到更高的分配系数。在含有疏水基葡聚糖中，蛋白质和类囊体薄膜泡囊的分配研究表明，苯甲酰基葡聚糖和戊酰基葡聚糖具有疏水性。疏水基影响氨基酸、蛋白质和薄膜泡囊在双水相体系中的分配，在只有磷酸盐缓冲溶液的PEG8000/葡聚糖双水相体系中，大部分β-半乳糖苷酶被分配在上相，但在下相中加入少量的苯甲酰基葡聚糖(取代程度为0.054)或戊酰基葡聚糖(取代程度为0.12)时，β-半乳糖苷酶的分配系数就降低了100倍。在对牛血清清蛋白、溶菌酶、脂肪酶和β-乳球蛋白的分配进行的观察中发现具有相似的现象。类囊体薄膜泡囊的分配受疏水基的影响特别大，薄膜泡囊被分配在含有疏水基的一相中。在含有N，N-二甲基甲酰胺的聚合物双水相中，利用逆流分配可对玉米醇溶蛋白进行分级分离。Miyuki在PEG/K3PO4双水相体系中用两步法对葡糖淀粉酶进行了萃取纯化。用第一步萃取后含有酶的下相和PEG组成双水相作为第二步萃取体系，称作两步法。葡糖淀粉酶的最佳分配条件是PEG4000(第一步)、PEG1500(第二步)，pH=7，纯化系数提高了3倍。
双水相萃取的特点
双水相萃取的特点 双水相萃取是一种可以利用较为简单的设备, 并在温和条件下进行简单操作就可获得较高收率和纯度的新型分离技术。与一些传统的分离方法相比, 双水相萃取技术具有以下独有的特点。 ( 1) 两相间的界面张力小, 一般为10- 7—10- 4mN·m- 1 ( 一般体系10- 3—2×10- 2mN·m- 1 ) ,因此两相易分散, 而且它比一般的有机萃取两相体系界面张力低的多, 这样有利于强化相际间的物质传递。 ( 2) 操作条件温和, 由于双水相的界面张力大大低于有机溶剂与水相之间的界面张力, 整个操作过程可以在常温常压下进行, 对于生物活性物质的提取来说有助于保持生物活性和强化相际传质。 ( 3) 双水相体系中的传质和平衡速度快, 回收率高, 分相时间短, 传质过程和平衡过程速度均很快, 自然分相时间一般为5—15min, 因此相对于某些分离过程来说, 能耗较低, 而且可以实现快速的分离。 ( 4) 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉, 与其他常用固液分离方法相比, 双水相分配技术可省去1—2 个分离步骤, 使整个分离过程更经济。 ( 5) 含水量高, 一般为75%—90% , 在接近生理环境的体系中进行萃取, 不会引起生物活性物质失活或变性。 ( 6) 一般不存在有机溶剂的残留问题, 现已证明形成双水相的聚合物( 如PEG) 对人体无害, 可用于食品添加剂、注射剂和制药, 因此
对环境污染小。 ( 7) 聚合物的浓度、无机盐的种类和浓度, 以及体系的pH 值等因素都对被萃取物质在两相间的分配产生影响, 因此可以采用多种手段来提高选择性和回收率。 ( 8) 易于连续化操作, 设备简单, 并且可直接与后续提纯工序相连接, 无需进行特殊处理。例如可以采用高分配系数和高选择性的多级逆流分配操作。 ( 9) 分配过程因素较多, 可以采取多种手段来提高分配选择性或过程收率。
双水相萃取的应用
双水相萃取在蛋白质分离纯化中的应用双水相萃取技术( Aqueous two-phase extraction ,ATPE) 是指亲水性聚合物水溶液在一定条件下形成双水相,由于被分离物在两相中分配的不同,便可实 现分离；其双水相体系可由高聚物/高聚物双水相体系、高聚物/无机盐双水相体系、低分子有机物/无机盐双水相体系、表面活性剂双水相体系等组成，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。同时，双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视；此方法可以在室温环境下进行,双水相中的聚合物还可以提高蛋白质的稳定性,收率较高【1】。 1、近年来双水相萃取技术研究综述概述 由于双水相萃取技术在生物工程、医药分析、金属及一些煤矿等化学分析中具有重要作用,因此也一直是分离提纯领域研究的热点。特别是在近几年，随着生物工程技术、生物化学技术、高分子技术的发展，双水相萃取技术的研究也取得了较快的发展。 2008年，郭宪厚【2】对双水相萃取技术进行了综述,阐述了双水相萃取技术的基本原理、特点、工艺流程、物质分配平衡的影响因素及其在生命科学，复杂中药体系的分离以及重金属回收等方面的应用，并对双水相萃取技术的发展前景作了展望。2009年，徐长波、王巍杰【3】对双水相萃取技术进行了综述，并发表了《双水相萃取技术研究进展》，以此综述了双水相萃取技术基本原理、特点、应用及热力学模型,并对双水相萃取技术存在的问题和发展趋势作了论述。2010年，马春宏、朱红【4】等，发表了《双水相萃取技术的应用研究进展》，对双水相萃取技术的具体应用进行了相关综述，简单介绍了双水相萃取技术及其原理、特点, 综述了双水相体系在生物工程( 其中包括萃取分离抗生素、酶、分离提纯蛋白质和萃取其他生物活性物质) 、药物分析和金属分离等方面的应用。2010年，姜大雨、朱红【5】对离子液体双水相萃取的应用研究进行了综述，指出了离子液体双水相的研究取得的一些阶段性的成果，介绍了离子液体双水相体系及其优点, 综述了离子液体双水相体系在生物工业分析、药物分析和金属分离等方面的应用，同时展望了离子液体双水相体系的应用前景。2010年，谭志坚、李芬芳、邢建敏