利用拮抗试验和RAPD对灵芝属菌株进行分类研究

利用拮抗试验和RAP D对灵芝属菌株进行分类研究3唐传红1　张劲松133　陈明杰1　李泰辉2　曹　晖1

(上海农科院食用菌研究所　上海　201106)1　(广东省微生物研究所　广州　510070)2

摘要:利用RAP D和拮抗试验对来自国内外的10个灵芝属菌株进行了遗传多样性分析。

RAP D分析的结果表明,在01560的相似性水平上分成3个组,第1组包括密纹薄芝、灵

芝、灵芝(信州菌株)和两个无柄灵芝菌株,第2组包括灵芝(G1s p1)、近拟鹿角灵芝

和紫芝,第3组是树舌灵芝。这一结论与传统分类学的结论基本一致。当相似性水平达到

01800的时,上述10个菌株聚成8组,与传统的分类学中种的划分几乎一致。比较两种方

法所得的结果发现,它们的结论是一致的。因此认为拮抗试验在灵芝亲缘关系的初步鉴定

中是有效的,RAP D在灵芝种间鉴定时是有效的,RAP D具有用于种内鉴定的可能性。

关键词:拮抗试验,RAP D,灵芝属,聚类分析

中图分类号:Q939264 文献标识码:A 文章编号:025322654(2005)0520072205

Study on Cl a ssifica ti on of Stra i ns of Ganoder m a by Ana t agon isti c Effect and Rapd3

T ANG Chuan2Hong1　ZHANG J ing2S ong133　CHEN M ing2J ie1　L I Tai2Hui2　CAO Hui1

(Edible Fungi Institute,Shanghai Acade m y of A gricultural Science,Shanghai201106)1

(Guangdong Institute of M icrobiology,Guangzhou510070)2

Abstract:Genetic diversity a mong10strains of Ganoder m a fr om different p r ovinces of China and other countries

were analyzed by RAP D and antagonistic effects,res pectively1The dendr ogra m derived fr om RAP D data indica2

ted that those strains could be divided int o three distinct gr oup s at the si m ilarity level of01560:the first gr oup in2

cluded Ganoder m a tenue,G1resinaceum,G1lucidum(Xinzhou strain)and G1lucidum;the second one includ2

ed G1s p1,G1subam boinense and G1sinense;the last one did G1applanatum1The resultwas in near accordance

with that of traditi onal classificati on of Ganoder m a1And the above10strains could be divided int o8gr oup s at the

si m ilarity level of01800,and the resultwas nearly in accordance with that of traditi onal classificati on1Comparing

with the results by the t w o methods,we found that they were in accordance with each other1The p resent study in2

dicated that(1)the method of antagonistic effectwas effective in the p reli m inary identificati on of strains of Gano2

der m a;(2)RAP D was effective f or the classificati on of the s pecies in Ganoder m a,and RAP D m ight be used t o

distinguish different strains of the sa me s pecies1

Key words:Antagonistic effect,RAP D,Ganoder m a,Clustering analysis

灵芝古称灵芝草、瑞草,在我国已有很长的应用历史。早在《神农本草经》和《本草纲目》中就已记载了它的药用价值,如益心气,安神,补肝气,利关节,治耳聋等[1,2]。灵芝属是由Karsten于1881年建立的,当时只有一个种Polyporus lucidus(Cur2 tis)Fr1(1821),因而该标本就成了单模式标本,但没有真正的材料被保存下来[3,4],随后各国的分类学家根据自己认为重要的形态特征对各自收集到的菌株进行了分类和

3上海市农委重点攻关项目(No1农科攻字2002212423)

其他作者:谭　琦1,潘迎捷1

33通讯作者　Tel:021*********,E2mail:zhangjs888@etang1com

收稿日期:2004211229,修回日期:2005201215

定名,因形态特征易受环境因子的影响,所以导致灵芝属的分类很混乱,同名异种和同种异名的现象普遍存在[4,5]。故在过去的30多年间,以灵芝(Ganoder m a lucidum)为研究材料发表的文献中灵芝具有超过百种的活性成分和各种药理活性,甚至出现相互矛盾的结论[6],因此很有必要建立一套不易受环境因子影响(相对而言)的灵芝属菌株间的鉴定技术体系,以更好地对我国栽培灵芝菌株进行有效的鉴别和分类。这将为进一步更好地开发利用灵芝资源,使我国灵芝产品能进入国际市场提供科学的数据。本文运用RAP D技术和拮抗试验对收集的菌株进行亲缘关系研究。

1　材料与方法

111　供试菌株及来源

见表1。

表1　供试菌株及来源3

菌株编号种　名来　源24密纹薄芝(Ganoder m atenue)上海农业科学院食用菌研究所

81灵芝(G1s p1)斯洛文尼亚

100灵芝(信州菌株)(G1lucidum)(Xinzhou strain)河南生物研究所

108灵芝(G1lucidum)山东金乡真菌研究所

136近拟鹿角灵芝(G1subam boinense)阿根廷

137近拟鹿角灵芝(G1subam boinense)ATCC

140无柄灵芝(G1resinaceum)阿根廷

141无柄灵芝(G1resinaceum)ATCC

165树舌灵芝(G1applanatum)山东济宁光大食用菌科研中心

175紫芝(G1sinense)上海农业科学院食用菌研究所

3各菌株的分类鉴定由李泰辉研究员完成

112　拮抗实验

将不同菌株活化后,在同一平板上按品字形接种3个菌株,28℃50%的相对湿度下培养,观察菌丝间的拮抗反应情况。

113　RAP D实验

11311　菌丝的培养和DNA的提取:将活化过的菌株接种到P DB中,28℃150r/m in条件下培养10～15d,收集菌丝,采用改良过的LETS法[7]提取基因组DNA,并通过1%的琼脂糖凝胶电泳和分光光度计(Beck man公司)检测DNA的质量和浓度,根据需要稀释至25ng/μL。

11312　RAP D反应:选用上海生工的随机引物对10个菌株进行扩增。引物见表2。25μL的反应体系为:10×PCR buffer(Pr omega)215μL,20mmol/L MgCl2(Pr omega) 210μL,模板110μL,随机引物(33ng/μL)012μL,Taq酶(5U/μL)(Pr omega) 012μL,10mmol/L d NTPs0125μL。每个管中加15μL的灭菌矿物油。扩增反应在eppen2 dorf公司的Authorized Ther mal Cycler上进行,92℃预变性2m in,然后92℃变性1m in, 37℃退火1m in,72℃延伸2m in,循环40次,最后72℃延伸10m in。反应结束后,取7μL PCR产物于114%的Agar ose凝胶上电泳,经E B染色后UV检测,拍照记录。

表2　随机引物及其序列

引物编号序列(5π23π)引物编号序列(5π23π)引物编号序列(5π23π) S15GG AGGGTGTT S32T CGGCG AT AG S44TCTGGTG AGG S17AGGG AACG AG S34TCTGTGCTGG S47TTGGCACGGG S24AATCGGGCTG S42GG ACCCAACC S51AGCGCCATTG S28GTG ACGT AGG S43GTCGCCGTCA S53GGGGTG ACG A 114　数据处理分析

在琼脂糖凝胶上DNA条带出现与否分别记为1和0。用UPG MA(NTSYSpc2111a)进行聚类分析,构建树状图。

2　结果与分析

211　拮抗实验结果

图1给出了一些菌株的拮抗照片,从图中可以看出,24号(密纹薄芝)、137号

(近拟鹿角灵芝)和140号(无柄灵芝)菌株之间有拮抗性;136号(近拟鹿角灵芝

)

图1　不同菌株的拮抗现象与140号(无柄灵芝)以及141号(无柄灵芝)菌株之间有拮抗性,而140号(无柄灵芝)和141号(无柄灵芝)之间没有拮抗性。

高等担子菌在双核菌丝阶段发生的认识自我和排斥异己的过程称为体细胞的非亲和性(s omatic incom2 patibility)。遗传背景明显不同的个体在交界区会形成明显的分界线,这便是拮抗反应。拮抗反应正是体细

胞非亲和性的具体体现[8]。各菌株间的拮抗关系见表3。从表3可知,100号(灵芝(信州菌株))菌株和108号(灵芝)菌株之间及140号(无柄灵芝)菌株和141号(无柄灵芝)菌株之间没有拮抗反应,故它们的亲缘关系很近,甚至可能起源于同一个菌株;137号菌株(近拟鹿角灵芝)和175号(树舌灵芝)菌株之间的拮抗反应弱,表明它们的亲缘关系较近;其余各菌株间都有强烈或非常强烈的拮抗反应,这表明这些菌株间的亲缘关系较远。

表3　不同灵芝菌株之间的拮抗情况

2481100108136137140141165175 24-

81+++-

100++++++-

108++++++--

136+++++++++++-

137+++++++++++++-

140+++++++++++++++++-

141+++++++++++++++++--

165++++++++++++++++++++++++-

175+++++++++++++++++++++++-

+++表示拮抗反应非常强烈,++表示拮抗反应强烈,+表示拮抗反应弱,-表示没有拮抗反应或拮抗反应极不明显

212　RAP D 分析结果

通过选取的12个随机引物(见表3),共产生162条带,其中引物S24、S28、S42和S47的扩增效果较好(图2)

。

图2　引物S24、S28、S42、S47的RAP D 电泳图谱

1,2,3,4,5,6,7,8,9,10分别代表编号为24,81,100,108,136,137,140,141,165,175号菌株

灵芝属菌株的RAP D 聚类分析从表4可以看出,10个菌株相互间的遗传相似系数在01422～01900,其中100号和108号的相似系数最大,为01900,而141号和165号

的相似系数最低,为01422。同时还发现来自不同国家的同种菌株136号和137号以及81号和100号、108号之间有一定的遗传多样性。并由此平均遗传相似距离得到如下聚类图。

表4　灵芝属10个菌株的平均遗传相似距离矩阵

菌株编号Strain No 1

2481

100

108

136

137

140

141

165

175

2411000810158011000100015700157811000108015980154001900110001360160001625015250153811000137015820168001689016310

173011000140016200149601660017200156001537110001410164101484016760168001531015430185811000165014880158701497015540155001545014540142211000175

01632

01634

01542

01560

01686

01770

01525

01542

01455

11000

图3　灵芝属菌株的RAP D 聚类图 从图3可以看出,当相性达到

01560的水平时,10个菌株聚成3组,第1组为24号(密纹薄芝)、100号(灵芝(信州菌株))、108号(灵芝)、140号(无柄灵芝)和141号(无柄灵芝);第2组为81号、136号(近拟鹿角灵芝)、137号(近

拟鹿角灵芝)和175号(紫芝);第

3组为165号(树舌灵芝),这与经典分类学中种的划分一致。当相似性达到01800的

水平时,10个菌株聚成8类,与经典分类学中种的划分也几乎一致[9]

。

比较这两种方法所得到的结果,发现它们之间存在高度的一致性。如100号(灵

芝(信州菌株))和108号(灵芝)菌株没有拮抗反应,在RAP D聚类分析时相似性系数很高时聚在一起。165号(树舌灵芝)菌株和其它所有菌株拮抗反应非常强烈,而在RAP D聚类分析时只能单独聚成一类。

3　讨论

拮抗反应是体细胞非亲和性的具体体现,因其快速、便捷和直观的优点而在真菌亲缘关系的初步研究中得到应用。它曾经作为真菌菌种鉴定的主要手段,但这一方法也有一定的局限性,往往不能有效区分出两个在遗传上有相似背景或亲缘关系很近的菌株[10]。因此在真菌的遗传多样性研究中可以通过拮抗反应进行初步分类,然后再通过分子生物学的方法进行深入研究。

由于不同物种的总DNA序列存在差异,其与引物的结合位点以及结合位点之间的距离都会有差异,因而经过PCR扩增后的具多态性的DNA片段就能够比较全面的反映出物种的遗传多样性。RAP D技术已经成功地运用于一些真菌不同种的区分。B idochka 等应用RAP D技术成功区分了金龟子绿僵菌[M etarh izium anisopliae(Metschr1) Sor okin1]、黄绿色绿僵菌(M1flavovirid e W1Ga m s&Rozsypal)和球孢白僵菌(B eau2 veria bassiana Bals2Criv Vuill1)3个昆虫病原真菌的种,并将先前根据形态特征无法鉴定是属于M1anisopliae还是属于M1flavoviride的几个菌株准确地鉴定为M1flavoviride,显示了RAP D技术在真菌种间鉴定中的价值,同时也表明对同一个种的不同菌株的鉴别也是有效的,且RAP D标记与寄主和地理来源无关[11]。秦国夫等利用RAP D技术分析了中国密环菌5个生物种和欧洲2个种的代表菌株,结果也表明,聚类分析的结果将中国密环菌生物种B鉴定为A r m illa ria ga llica Marx m1&Romagn1[12]。因而笔者认为,在对10个灵芝属菌株的遗传多样性的研究中,与传统的分类方法相比较,利用RAP D 标记所获得的结论更加客观和准确。

参考文献

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[12]秦国夫,贺　伟,沈瑞祥1真菌学报,1996,15(1):26～331

药物临床试验研究者的职责

药物临床试验研究者的职责 第一条负责临床试验的研究者应具备下列条件： （一）在医疗机构中具有相应专业技术职务任职和行医资格； （二）具有试验方案中所要求的专业知识和经验； （三）对临床试验方法具有丰富经验或者能得到本单位有经验的研究者在学术上的指导； （四）熟悉申办者所提供的与临床试验有关的资料与文献； （五）有权支配参与该项试验的人员和使用该项试验所需的设备。 第二条研究者必须详细阅读和了解试验方案的内容，并严格按照方案执行。 第三条研究者应了解并熟悉试验药物的性质、作用、疗效及安全性(包括该药物临床前研究的有关资料)，同时也应掌握临床试验进行期间发现的所有与该药物有关的新信息。 第四条研究者必须在有良好医疗设施、实验室设备、人员配备的医疗机构进行临床试验，该机构应具备处理紧急情况的一切设施，以确保受试者的安全。实验室检查结果应准确可靠。 第五条研究者应获得所在医疗机构或主管单位的同意，保证有充分的时间在方案规定的期限内负责和完成临床试验。研究者须向参加临床试验的所有工作人员说明有关试验的资料、规定和职责，确保有足够数量并符合试验方案的受试者进入临床试验。 第六条研究者应向受试者说明经伦理委员会同意的有关试验的详细情况，并取得知情同意书。 第七条研究者负责作出与临床试验相关的医疗决定，保证受试者在试验期间出现不良事件时得到适当的治疗。 第八条研究者有义务采取必要的措施以保障受试者的安全，并记录在案。在临床试验过程中如发生严重不良事件，研究者应立即对受试者采取适当的治疗措施，同时报告药品监督管理部门、卫生行政部门、申办者和伦理委员会，并在报告上签名及注明日期。 第九条研究者应保证将数据真实、准确、完整、及时、合法地载入病历和病例报告表。

灵芝简介、作用与分类

灵芝的简介 灵芝在公元前1~2世纪时所著的中国医学药典《神农本草经》中已有记载，被视为最上级的药物（上药）所谓上药就表示长期服用无毒、无副作用，能保持活力，延年益寿，维持健康，预防疾病，显著提高免疫力，灵芝可排毒养颜、抗癌止瘤、强身健体、调理血压、健脾、养胃增元气，对肝、心、脾、肺、肾、筋骨等具有针对性作用，长期服用有百病消除之效果，适用于多种患病人群 经过现代人类对灵芝的多年研究结果表明，灵芝中含有大量的高分子多糖体（多糖及原糖）生物碱、蛋白酶、氨基酸、灵芝酸、三甲胺基丁酸甲、油脂、树脂及多种微量元素如锗、镁、银、硼、钙、铁、钾、钠、锰、锌、锡等都是人们身体内必不可少的有效物质。其中的高分子多糖，是提供人体免疫力的主要物质，抗癌的原理又是透过患者免疫力的大幅度提高，来发挥制癌作用，而免疫力的提高则能彻底改善体质，抵抗其他疾病的侵害，灵芝中的灵芝酸具有能有效阻断羊毛甾醇合成胆固醇的能力，同时加快胆固醇和甘油三酯的代谢，有利于脂质排除体外，有效改善血脂；另外灵芝中的—三甲胺基丁酸，它能够增加冠状动脉的血液量，对于人体、缺氧时的抗变形较佳；灵芝中含有锗元素，是其他植物的许多倍，它具有脱氢作用，并快速提高生物体中的含氧量而快速恢复体内的红白血球含量。另外灵芝体中的氨基酸、蛋白质及人体所必须的钙、铁、锌等多种微量元素具有相互协助互补作用，有效的提高人体对多种元素的吸收。 灵芝的种类有很多种，从颜色上基本可分为六种： 称为青芝的青色灵芝又叫龙芝，味酸气平，原产自泰山，有明目、补肝、安顺精神、健肾，可使人体轻盈，减缓衰老延年益寿的作用。 称为赤芝的红色灵芝，又叫丹芝，味苦气平，原产于霍山，可用来调理胸部血气不顺所引起的病痛，能加强心脏功能，滋补内脏，且能增智，提高记忆力。 称为黄芝的黄色灵芝又称金芝，味甘气平，原产于嵩山。主治胸、腹、脾的疾

微生物抗菌素敏感试验

抗菌素敏感试验 一、实验目的 1、掌握药敏试验（K-B纸片琼脂扩散法）方法、原理及结果判读 2、掌握抗酸染色方法及结果判定 二、实验原理 1、抗菌药物分类： （1）β-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类（硫酶素类、单内酰环类、β-内酰酶抑制剂、甲氧青霉素类) （2）氨基糖甙类：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿奇霉素 （3）大环内脂类：红霉素、白霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素 （4）四环素类：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素 （5）氯霉素类：氯霉素、甲砜霉素 （6）作用于G+细菌的其它抗生素：林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽 （7）作用于G-菌的其它抗生素：多粘菌素、磷霉素、、环丝氨酸、利福平、抗真菌抗生素、灰黄霉素 （8）抗肿瘤抗生素：丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素、阿霉素 （9）具有免疫抑制作用的抗生素：环孢霉素 2、抗菌药物敏感试验(antimicrobial susceptibility testing in vitro ) 1）抑菌试验：体外测定抗菌药物抑制细菌生长能力的试验 （1）纸片扩散法（disc diffusion test） K-B纸片琼脂扩散法原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关。（2）稀释法（dilusion test） a.将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内 b.37℃18-24小时后，抗菌药物能抑制被检菌肉眼可见生长的最低浓度（MIC）即该菌 对该抗菌药物的敏感度 c.MIC50 MIC90 d.根据MIC和常用剂量时该药所能达到的血药浓度来划定细菌对各种药物的敏感度或 耐药的界限（break point,折点) （3）E试验法（E test） 2）杀菌实验 3）联合药敏试验 4）检测细菌所产生的抗生素灭活酶试验 3、药物敏感性分级 1）敏感（S）

灵芝的形状及特征

灵芝的形状及特征 绿慈安灵芝茶是以紫灵芝为主的野生灵芝采集加工制作而成的天然灵芝茶，而真正意义上所说的灵芝其实就是紫芝和赤芝，但是现在社会上很多企业为了功利，把一些假紫或者不能食用的灵芝作为原料生产加工成灵芝茶。 自然界赐予我们的芝菌是一个品种繁多的大家族，仅在中国就有100多个品种，全世界有200多个品种。在这个大家族中灵芝的长相不但存在着巨大的差异，就连它们的成分也是不同的，其中绝大多数的灵芝都是没有药用价值，也不可能食用。 我们现在把所有的芝菌都称之为灵芝，这与古人所指的灵芝是根本不同的，古人所定义的灵芝，是指可以食用，又能入药的芝菌。 灵芝有两个方面的含义，从广义方面理解，灵芝是指整个灵芝科的所有种类；从狭义方面理解，灵芝科中的赤芝才是我们今天所说的灵芝。因为灵芝科中的赤芝是最常见的品种，所有被人们习惯称为灵芝，我们也认同了赤芝和紫芝等于灵芝的说法。目前关于灵芝的开发基本上都是以赤芝和紫芝为研究对象。 灵芝是一种真菌，大多一年生，可多次采收，也有多年生的（如树舌灵芝）。灵芝属担子菌衙门、层菌纲、多孔菌科、灵芝亚科。现在采用的是赵继鼎等人在《中国真菌志》（2000年）第18卷中采用的分类系统，灵芝亚科真菌共有四个属，即灵芝属、假芝属、鸡冠孢芝属、网孢芝属。 灵芝的外形呈伞状，菌盖呈肾形、半圆形或近圆形，也有其他不规则形状的，小的直径有3~4厘米，大的可达30~50厘米或更大，菌柄圆柱形，侧生，少偏生。灵芝从菌蕾形成到喷射孢子一般需要30天~60天。灵芝孢子细小，黄褐色、双层壁有气孔、坚硬，孢子内有1~2个油滴，孢子油大部分为不饱和脂肪酸。灵芝有别于高等植物，无根、茎、叶，不能进行光合作用，其营养来源为菌丝体吸收腐土中的营养成分。 我们所说的灵芝多为赤芝和紫芝，为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体。 赤芝外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，直径10~18厘米，厚1~2厘米。皮壳坚硬，黄褐色至红褐色，有光泽，具环状棱纹和辐射装皱纹，边缘薄而平截，常稍内卷。菌肉白色至淡棕色。菌柄圆柱形，侧生，少偏生，长7~15厘米，直径1~3.5厘米，红褐色至紫褐色，光亮。孢子细小，黄褐色。气微香，味苦涩。紫芝皮壳紫黑色，有漆样光泽，菌肉锈褐色，菌柄长17~23厘米。 野生灵芝大都长在枯死的木头或土中的死树根上。人工栽培时可用椴木或代料栽培（锯末子、棉子壳、糠、秸秆）等为原料。无论灵芝是野生的还是共栽培的，它们的基本成分没有多大区别。 福建的野生灵芝主要分别于武夷山区域，尤其是武夷山南脉梁野山最为丰富，紫灵芝生长的树种主要有枫树和枫香树，枯死的树桩和树根上，八仙过海各显神通中的何仙姑记载的灵芝即为梁野山的紫灵芝。

药敏试验实验报告

药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参

考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

灵芝产地的分布情况

灵芝产地的分布情况 灵芝的产地主要分布在中国、朝鲜半岛和日本。野生的灵芝已经很少见，且质量不容易控制，当今以中国海南岛产量最多，菌种最丰富，市场上大部分都是人工种植的，中国比较出名的人工种植灵芝的产地是福建省厦门。另台湾研究灵芝较出名的灵芝产地有台北、石碇与花莲。

世界上灵芝科的种类主要分布在亚洲、澳洲、非洲及美洲的热带及亚热带，少数分布于温带。地处北半球温带的欧洲仅有灵芝属的4种，而北美洲大约5种。中国地跨热带至寒温带，灵芝科种类多而分布广。

中国灵芝类真菌自然分布的总特点是东南部多而西北部少。如果从东北部的大兴安岭向南方向的西藏东南部画一条斜线，便可将灵芝的分布划分为迥然不同的两大区，正好说明灵芝科种类的分布与中国的地形地貌、生态环境相吻合。已知此条线以西由于干旱或高寒等原因，缺乏灵芝繁殖生长的天然条件，只分布有树舌和灵芝两种。在青海、新疆和宁夏几乎没有发现常见的灵芝（赤芝）。赤芝主要分布长白山和台湾地区，并以长白山灵芝和台湾的樟芝最为著名。 1、灵芝的产地分布华东、西南及吉林、河北、山西、浙江、江西、广东、广西等地，有人工栽培。销全国各地。 2、紫芝的产地分布于浙江、江西、湖南、四川、福建、广西、广东等地，也有人工栽培。

《本草纲目》和宋朝唐慎薇撰写的《重修政合经书证类备用本草》均对六种灵芝所处地理环境有详细记载。有“赤芝生霍（庐）山，青芝生泰山，黄芝生嵩山，白芝生华山，黑芝生常山，紫芝生高山夏峪”的说法。而“霍山”在古代就是现今湖北、河南、安徽三省交界处的大别山区，因此庐山、大别山是赤芝的发源地。庐山、大别山地处华东和中原的中间，淮河上游，中国气候南北分界线上。

医疗器械临床试验研究者手册(模板)

研究者手册模板 研究者手册(Investigator's Brochure )是有关试验用器械在进行人体研究时已有的临床与非临床资料。它必须包含到某一时间为止对受试器械的所有研究资料，通常也包括相似器械的材料。 临床研究资料手册主要用作： 1?给研究负责人提供所有有关被试器械的信息及研究结果。 2?作为受试器械已获得正式核准的标志。 3?包括所有最新的对受试器械所作研究的总结，这可用于新药临床试验或器械上市许可证的申请。 研究者手册的内容通常包括如下内容： 1.封面页：包括器械名称，公司名称，完槁或更新日期以及资料整理者姓名； 2 .目录：列出所有的标题及副标题以及相应的页码； 3.保密声明； 4.试验用医疗器械基本信息。至少应当包括：试验用医疗器械的名称；研究者手册的版本和日期，若有修订，应当提供适当的修订历史概述；试验用医疗器械的申办者或生产企业名称和地址。 5.试验用医疗器械的概要说明。至少应当包括： (1).试验用医疗器械的特点、结构组成及图示、作用机理、规格型号及划分等相关信息，以便能够全面识别和追溯试验用医疗器械；

（2）.试验用医疗器械的适用范围、预期用途，包括所建议的临床适应 症和禁忌症、预定的使用人群； （3）.试验用医疗器械中所用材料的介绍，尤其是与组织或体液接触的 试验用医疗器械材料，包括药械结合产品、人和/或动物组织或它们的衍生物或其他生物活性物质的详情； （4）.试验用医疗器械安装和使用说明及标签样稿和样品（图片），包 括必要的储存和处理要求，使用前安全性和性能检查以及使用后要采取的有关措施等； （5）.使用试验用医疗器械所必需的培训； （6）.在使用试验用医疗器械的过程中可能涉及的必要医疗措施说明。 6.支持试验用医疗器械预期用途和临床试验设计理由的概要和评价，至少包括： （1）.文献综述。相关科学文献和/或未发表的数据和报告的评论性综述以及所查询的文献清单。该综述应能证明开展该临床试验的合理性； （2）?该试验用医疗器械临床前生物学研究、非临床实验室研究和动物 实验的数据摘要和评价，以证明该试验用医疗器械在人类受试者中使用的合理性； （3）.与该试验用医疗器械类似特性的医疗器械以往临床试验中有关发 现的摘要和相关临床经验的总结。同时应当描述试验用医疗器械与类似特性的医疗器械在工作原理、结构组成、制造材料、技术参素和预期用途等方面的异同；

试验主要研究者(PI)工作指南

临床试验主要研究者（PI）工作指南 一．项目立项的准备与申报 1. 若您与申办者或CRO有意向在我院开展药物临床试验（有SFDA批件），请申办者或CRO将资料交药理基地主任或秘书。 2.项目立项审核：参见《药物临床试验运行流程》 3.请您根据项目的具体情况并参照如下人员组成组建研究团队： Ⅰ期临床研究团队应包括：研究医师、病区护士、相关科室人员、药物管理人员。 Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ期临床研究团队应包括：研究医师、病区护士、相关科室人员、药物管理人员。 4.您的研究团队与申办者或CRO召开研究者会议，主要解决以下问题： 4.1试验方案、CRF、知情同意书定稿 4.2病例数的分配 4.3建立并统一各诊断标准、疗效判断评价标准等 4.4讨论各单位检测仪器、试剂的一致性问题，或设立中心试验室 4.5统计专家制订“统计计划书” 4.6确定研究进度（各中心同期进行试验） 4.7监查员及监查计划 4.8成立协调委员会 二．项目伦理答辩及协议审核 1. 由申办者或CRO将伦理申报资料交药理基地办公室秘书。 2. 您需在伦理会上进行方案介绍和答疑，汇报幻灯应侧重研究背景、方案设计、受试者权益保护措施等内容。 3. 请参照《吉林省医疗服务价格》与申办者初步拟定协议和经费，交药理基地办公室秘书。

三．启动会的召开 1.申办者准备试验材料，交研究医师或研究护士；试验药物交药剂科管理（苏兴国） 2.由您和申办者共同确定启动会召开的时间、地点和参加人员，原则上研究团队的所有人员和药理基地代表应参与启动会，必要时还可邀请相关人员参加。启动会需解决如下问题： 2.1 项目组熟悉方案设计，对操作细节进行讨论； 2.2由PI进行人员分工及授权； 2.3研究助理或研究护士根据方案制定SOP； 2.4 监查员就药物收发、CRF填写、标本寄送、随机方式、SAE报告等内容进行培训。 3．启动经费到位后即可开始筛选受试者。 四．项目实施 1. PI负责制，药理基地协助并定期质控。 2. 如试验中发生SAE，请在获知该事件的24小时内通知药理基地、申办者和国家食品药品监督管理局。 3. 对项目进行时间较长的项目，您还需组织撰写中期总结和年度总结并报伦理委员会。 五．项目结题及试验材料归档 1. 研究团队或申办者按照“临床试验资料归档目录”进行试验材料的归档与退还，各经办人核对“临床试验资料归档目录”后签名确认。 3. 您将组织研究小组对临床试验进行讨论和总结。 4．您与申办者或CRO将负责共同审核临床研究的总结并将总结报告交药理基地审核，签字、盖章。 5.临床研究结束后您有义务追踪研究药物的后续信息（如是否获批上市，是否获专利等）及时反馈至药理基地。

细菌药物敏感试验实验报告

细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理

体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。

哪里的灵芝好 灵芝产地介绍

灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。灵芝原产于亚洲东部，主要分布在中国、朝鲜半岛和日本，其中在中国分布最广的是江西。灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍贵药材，具备很高的药用价值，也因此成为了非常受欢迎的滋补品。下面，我们来了解一下灵芝的具体分布情况。 1、世界分布 世界上灵芝科的种类主要分布在亚洲、澳洲、非洲及美洲的热带及亚热带，少数分布于温带。地处北半球温带的欧洲仅有灵芝属的4种，而北美洲大约5种。中国地跨热带至寒温带，灵芝科种类多而分布广。 2、中国分布 中国灵芝类真菌自然分布的总特点是东南部多而西北部少。如果从东北部的大兴安岭向南方向的西藏东南部画一条斜线，便可将灵芝的分布划分为迥然不同的两大区，这正好说明灵芝科种类的分布与中国的地形地貌、生态环境相吻合。目前已知此条线以西由于干旱或高寒等原因，缺乏灵芝繁殖生长的天然条件，只分布有树舌(Ganodermaapplanatum)和灵芝(G. lucidum)两种。在青海、新疆和宁夏几乎没有发现常见的灵芝(赤芝)。赤芝主要分布在

长白山和台湾地区，并以长白山灵芝和台湾的樟芝较为著名。 而树舌和灵芝是中国分布最广泛的两个种类，前者分布于27个省区而后者分布于19个省区。蒙古灵芝原发现于河北省北部，在内蒙古北部的大兴安岭和长白山脉亦有分布。目前人工栽培的种类中，除了灵芝(赤芝)外，松杉树芝质量最佳，在韩国、日本及中国台湾省人工栽培产量大而普遍。 中国目前人工生产最多的主要是以上两种，其次是密纹薄芝(G. tenue)，紫芝产量低而不广泛。在中国已知的种类中，目前驯化栽培而知其名称的还不到10%。由此可见，从野

新版2020GCP考试题库

新版药品GCP 满分：100得分：86.0单选题 （共25题，共50.0分） 得分：44.0 1. 描述监查策略、方法、职责和要求的文件。 2. 伦理审查意见的文件应包括哪些内容： 3. 临床试验中何种试验记载的数据是不属于源数据： 4. 在设盲临床试验方案中，下列哪项规定不必要？

5. 可识别身份数据机密性的保护措施有： 6. 病例报告表中具体用药剂量和时间不明，应填写什么符号 7. 试验开始前，申办者和研究者的职责分工协议不应包括： 8. 《药物临床试验质量管理规范》适用的范畴是

9. 由申办者设立的，定期对临床试验的进展、安全性数据和重要的有效性终点进行评估，并向申办者建议是否继续、调整或者停止试验的委员会。 10.风险最小化的措施有： 11.关于试验用药品的供给和管理，以下不属于申办者职责的是：

12.临床试验的科学性和试验数据的可靠性主要取决于： 13.没有能力给予知情同意的成人参加临床试验，知情同意应符合以下哪些要求： 14.在什么阶段，申办者在可向研究者和临床试验机构提供试验用药品？ 15.关于申办者与研究者和临床试验机构签订的合同，以下哪种说法是错误的：

16.由申办者委派的稽查员撰写的，关于稽查结果的书面评估报告。 17.本法规要求申办者应当从研究者和临床试验机构获取的伦理委员会相关信息和文件是： 18.试验设计中减少或者控制偏倚所采取的措施包括： 19.为建立和记录计算机化系统从设计到停止使用，或者转换至其他系统的全生命周期均能够符合特定要求的过程。

20.受试者接受试验用药品后出现的所有不良医学事件，可以表现为症状体征、疾病或实验室检查异常，但不一定与试验用药品有因果关系。 21.药物临床试验的哪些信息必须告知受试者： 22.指在临床试验中建立的有计划的系统性措施，以保证临床试验的实施和数据的生成、记录和报告均遵守试验方案和相关法律法规。 23.在有关临床试验方案下列哪项是正确的？

南方医科大学微生物实验报告

2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军

4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法

灵芝常见的食用方法

灵芝常见的食用方法，一种是泡水喝；一种是煲汤喝。除此之外，还有灵芝孢子粉，灵芝孢子油等，有采取冲剂用水冲服；也有采用胶囊用水服用的。 下面介绍一下灵芝的简单吃法：灵芝泡水喝和灵芝煲汤喝的一些办法。 一、灵芝泡水喝： 1.【原料】：灵芝片（或将灵芝剪成片状），清水，蜂蜜 【制作方法】：将灵芝片（或灵芝剪成片），加入清水，放置文火中炖煮2小时，取其汁加入蜂蜜饮用即可。 2.【原料】：灵芝片（或将灵芝剪成片状），清水 【制作方法】：将灵芝片（或灵芝剪成片），放入罐内，加水煎煮，一般煎煮3~4次。把所有煎液混合，分次口服。 二、灵芝煲汤喝： 1.灵芝清补汤 【原料】：灵芝15克，红枣23克，党参23克，枸杞子24克，人参须15克，猪排骨300克。盐适量。 【制作方法】：将灵芝等药材浸入6000毫升水中约10分钟（用布袋装好，扎口），再加入排骨，文火煮3小时。捞除布袋，再加盐调味，每次250-300毫升，吃肉喝汤每天1次。 【功效】：清润提神，健脾开胃。 2.灵芝蹄筋汤 【原料】：灵芝15克，黄芪1克，猪蹄筋100克、葱、姜、调料适量。 【制作方法】：将灵芝、黄芪装纱布袋内，扎口；猪蹄筋洗净与灵芝、黄芪及水共炖至熟烂，去药袋，调味，饮汤食肉。 【功效】：健脾安神，益肾养肝，适用于慢性肝炎、食欲不振、体虚乏力、神经衰弱等。 3.灵芝大枣汤 【原料】：灵芝15~20克，大枣50克，蜂蜜5克。 【制作方法】：灵芝、大枣入锅加水共煎，取煮液2次，合并后加入蜂蜜再煮沸即成。 【功效】：对肿瘤细胞有抑制作用。可防治癌症。 4.灵芝陈皮老鸭汤 【原料】：灵芝50克，陈皮1个，老鸭1只，蜜枣2枚 【制作方法】：先净老鸭剖洗干净，去毛、去内藏、去鸭尾，斩大件；灵芝、陈皮和蜜枣分别用清水洗干净。然后将以上全部材料一齐放入已经煲滚了的水中，继续用中火煲约三小时左右，以少许幼盐调味，即可佐膳饮用。 【功效】：灵芝具安神、健胃、去痰、活血的作用；陈皮具仍行气健脾、燥湿化痰的作用；老鸭肉有滋阴补虚、利尿消肿的作用；蜜枣具有补中益气、止咳润补肺肾、化痰平喘的作用。

实验11-抗生素的抑菌试验

实验十一抗生素的抑菌试验 一目的要求 1、掌握纸片法测定抗生素抗菌作用的基本方法 2、了解抗生素的抗菌谱 二实验原理 抗生素是某些植物与微生物生长到对数期前后所产生的次生代谢产物，其在低浓度下可其它微生物生长具抑制作用或杀死作用的物质。抗生素对敏感微生物的作用机理分为抑制细胞壁的形成、破坏细胞膜的功能、干扰蛋白质合成及阻碍核酸的合成。 由于不同微生物对不同抗生素的敏感性不一样，抗生素的作用对象就有一定的范围，这种作用范围成为抗生素的抗菌谱，作用对象广的抗生素称为广谱抗生素，作用对象少的抗生素称为窄谱抗生素。而且当某种抗生素长时间用于敏感微生物生长后，即使同一种菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生抗性菌株，则抗生素将失去对抗性菌株生长的抵制，只以采用新的抗生素才可能控制抗性菌株的生长与繁殖，因而不断开发新的抗生素是保健人类身体健康的重要工作。新抗生素产生菌的分离筛选应通过拮抗菌发酵，然后以发酵产物进行抗菌活性实验，根据实验结果而获得产新抗生素的菌株。微生物代谢产物的抗菌活性常以管碟法与纸法进行检测，根据透明抑菌圈的有无与大小作为依据。 三实验器材 1、菌种枯草杆菌、大肠杆菌。 2、培养基MH（Mueller-Hintion）琼脂。 3、试剂青霉素、链霉素。 四方法步骤 1、无菌滤纸片以孔径6mm打孔器将滤纸打为圆形纸片，放入培养皿内，121℃蒸汽湿热灭菌，100℃烘干2h。 2、抗生素溶液制备将取适量青霉素、链霉素，以无菌水溶解。 3、指示菌悬浮液的制备枯草杆菌、大肠杆菌斜面菌种分别以无菌水洗下菌苔细胞，到入无菌三角瓶内，制备适宜浓度的细胞悬浮液。 4、混菌平板制备取批示菌细胞悬浮液1mL加入无菌培养皿内，再加入温度为43~45℃的PDA培养基或牛肉膏蛋白胨琼脂培养基20mL，立即振荡使细胞与培养基混合均匀，静置冷凝。 5、平板加抗生素溶液将滤纸片在抗生素溶液中充分浸泡2min以上，然后将纸片放于混菌平板上，每皿呈三角形放3点，每点贴放纸片2张。 6、培养与观察将平板放于33℃左右的温度培养，每24h测量一次透明抑菌圈直径，共测量3次。

临床试验术语汇总

临床试验术语 临床试验 代表含义: 指任何在人体（病人或健康志愿者）进行药物的系统性研究，以证实或揭示试验药物的作用、不良反应及/或试验药物的吸收、分布、代谢和排泄，目的是确定试验药物的疗效与安全性。 Ⅰ临床研究 代表含义: 首次在人体进行研究药物的周密试验计划，受试对象是少量（开放20~30例）正常成年健康自愿者。目的是观察药物在人体内的作用机制。 Ⅱ临床研究 代表含义: 在只患有确立的适应症的病患者（盲法不小于100对）上进行的研究，目的是找出最佳的剂量范围和考虑治疗可行性 Ⅲ临床研究 代表含义: 确定研究药物的有效性和安全性、受益和危害比率。（试验组不小于300例。） Ⅳ临床研究 代表含义: 新药获准注册上市后的大型研究，检察普遍临床使用时的不良反应和毒性。 药品临床试验管理规范 代表含义: 对临床试验的设计、实施和执行，监查、稽查、记录、分析和报告的标准。该标准是数据和报告结果的可信和精确的保证；也是受试者权益、公正和隐私受保护的保证。 伦理委员会 代表含义: 是指一个由医学，科学专业人员及非医学，非科学人员共同组成的独立体，其职责是通过对试验方案、研究者资格、设备、以及获得并签署受试者知情同意书的方法和资料进行审阅、批准或提出建议来确认临床试验所涉及的人类受试者的权益、安全性和健康受到保护，并对此保护提供公众保证。 申办者 代表含义: 发起一项临床试验，并对该试验的启动、管理、财务和监查负责的

公司、机构或组织。 研究者 代表含义: 实施临床试验并对临床试验的质量及受试者安全和权益的负责者。研究者必须经过资格审查，具有临床试验的专业特长、资格和能力。 协调研究者 代表含义: 在多中心临床试验中负责协调参加各中心研究者工作的一名研究者。 监查员 代表含义: 由申办者任命并对申办者负责的具备相关知识的人员，其任务是监查和报告试验的进行情况和核实数据。 合同研究组织 代表含义: 一种学术性或商业性的科学机构。申办者可委托其执行临床试验中的某些工作和任务，此种委托必须作出书面规定。 研究中心 代表含义: 指实际实施试验相关活动的场所。 多中心研究 代表含义: 是由多位研究者按同一试验方案在不同地点和单位同时进行的临床试验。 安全性研究 代表含义: 观察评估药物副反应 有效性研究 代表含义: 观察评估药物有效性 预防研究 代表含义: 例如疫苗、抗生素 治疗研究 代表含义: 一般药物治疗研究、外科步骤 研究者手册 代表含义: 是有关试验药物在进行人体研究时已有的临床与非临床研究资料试验方案

GCP试题2020年82分

新版药品GCP 单选题 题目说明: 1.受试者被告知可影响其做出参加临床试验决定的各方面情况后，确认同意自愿参加临床试验的过程。 A．研究者手册 B．知情同意 C．病例报告表 D．知情同意书 2.由申办者委派的稽查员撰写的，关于稽查结果的书面评估报告。 A．监查报告 B．监查计划 C．稽查计划 D．稽查报告 3.对于生物等效性试验，试验用药品的留存样品不得由哪方保存？ A．具备条件的独立第三方 B．申办者或者与其利益相关的第三方 C．临床试验机构或其委托的具备条件的独立第三方 D．临床试验机构 4.紧急情况下，预计许多受试者没有能力给予知情同意，临床试验应符合以下哪些要求： A．如果不可能事先获得受试者的同意，必须得到其监护人的同意 B．如有可能，在受试者有能力时，事先获得其在未来失能期间参加研究的同意 C．其他三项均是 D．如果无法获得受试者或其监护人的同意，临床试验不能纳入该受试者 5.关于研究者和临床试验机构应当具有完成临床试验所需的必要条件，以下哪一项描写错误？ A．确保临床试验数据的真实、完整和准确 B．监管所有研究人员执行试验方案，并采取措施实施临床试验的质量管理。 C．不需要采取质量管理的措施 D．确保所有参加临床试验的人员充分了解试验方案及试验用药品 6.由申办者设立的，定期对临床试验的进展、安全性数据和重要的有效性终点进行评估，并向申办者建议是否继续、调整或者停止试验的委员会。 A．伦理委员会 B．独立数据监查委员会 C．申办方 D．合同研究组织 7.《药物临床试验质量管理规范》适用的范畴是 A．为申请药品注册而进行的药物临床试验 B．新药非临床试验研究 C．人体生物等效性研究

药物临床试验研究者的职责

药物临床试验研究者的职责 在进行药物临床试验的过程中，首先临床试验研究者应该清楚的知晓自己的职责所在。并且在试验过程中严格遵守，才可以安全有效的完成工作。 一、药物临床试验研究者必须详细阅读和了解试验方案的内容，并严格按照方案执行。 二、研究者应了解并熟悉试验药物的性质、作用、疗效及安全性(包括该药物临床前研究的有关资料)，同时也应掌握临床试验进行期间发现的所有与该药物有关的新信息。 三、研究者必须在有良好医疗设施、实验室设备、人员配备的医疗机构进行临床试验，该机构应具备处理紧急情况的一切设施，以确保受试者的安全。实验室检查结果应准确可靠。 四、药物临床试验研究者应获得所在医疗机构或主管单位的同意，保证有充分的时间在方案规定的期限内负责和完成临床试验。研究者须向参加临床试验的所有工作人员说明有关试验的资料、规定和职责，确保有足够数量并符合试验方案的受试者进入临床试验。 五、研究者应向受试者说明经伦理委员会同意的有关试验的详细情况，并取得知情同意书。 六、药物临床试验研究者负责作出与临床试验相关的医疗决定，保证受试者在试验期间出现不良事件时得到适当的治疗。 七、研究者有义务采取必要的措施以保障受试者的安全，并记录在案。在临床试验过程中如发生严重不良事件，研究者应立即对受试者采取适当的治疗措施，同时报告药品监督管理部门、卫生行政部门、申办者和伦理委员会，并在报告上签名及注明日期。 八、药物临床试验研究者应保证将数据真实、准确、完整、及时、合法地载入病历和病例报告表。 九、药物临床试验研究者应接受申办者派遣的监查员或稽查员的监查和稽查及药品监督管理部门的稽查和视察，确保临床试验的质量。 十、研究者应与申办者商定有关临床试验的费用，并在合同中写明。研究者在临床试验过程中，不得向受试者收取试验用药所需的费用。 十一、临床试验完成后，研究者必须写出总结报告，签名并注明日期后送申办者。

微生物实验报告

脓汁和粪便标本中病原菌的检测 专业：学号：姓名： 一、实验目的 探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。 二、实验材料 器材 打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称量纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镊子、玻片、吸水纸、拭镜纸 试剂药品 普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄糖微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清 三、方法与步骤 1、培养基制备 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→（1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。（2）斜面培养基：培养基趁热斜放→琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。

→贴上标签后灭菌使用。 2、空气与人体体表细菌学检查 ①空气的细菌学检查 每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15min→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24h→观察结果。 ②人体体表的细菌学检查 甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板 按规定在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 3、细菌的分离培养 接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。 4、细菌的群体生长特性观察和纯化培养 接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养→做好标记→接种环烧灼灭菌→斜面培养基置于37℃培养过夜→保存备用 5、细菌的个体形态特征的观察 ①革兰氏染色： 取洁净载玻片→用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上→挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀→待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合→结晶紫初染1min→水洗→卢戈碘液媒染1min→水洗→95％乙醇脱色约20s→水洗→稀释品红→复染1min→水洗→吸干,镜检。 ②肉汤接种法: 接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6h 6、药敏试验 接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布→接种环烧灼灭菌→标记:青、链、庆→镊子火焰消毒→贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→按压→镊子消毒→倒置37℃培养18～24h→观察结果

各种野生灵芝种类和功效

各种野生灵芝种类和功效 野生灵芝，其药用价值是相当高的，也是保健的佳品；本店销售的绝非是人工种植或是观赏灵芝。如有预购的，请与我联系！ 一野生赤灵芝：（文献名：丹芝，红芝） 1.性味：甘淡，苦，平，脾，胃，肺经。补肺益肾，和胃健脾，安神定志，扶正固本。 2.协助治疗：用于治疗虚劳咳喘，心悸失眠，食欲不振，冠心病，心绞痛，高血压，高血脂，心肌炎，白细胞减少症，肝炎，胃炎及十二指肠溃疡，糖尿病，多发性硬化症。对高原反应，毒菇中毒，长期患病身体虚弱和潜在型慢性克山病，脑发育不全，视网膜色素变性，戒烟综合症有治疗作用。 3.服用方法：每次6-15g，水煎服，日服2次 二野生班褐灵芝 1.性味：辛，温，活血通经，化瘀止痛。 2.协助治疗：调月经，血瘀闭经，痛经，月经不调瘕积聚，冠心病，心律失常，心绞痛。 3.服用方法：与铁板灵芝和赤灵芝同用效果更佳，煲汤而食10-20g/人次，泡酒而饮20g /斤米酒。 三野生桦褐灵芝（别名：白桦茸，日本称：万能珍贵药用真菌，俄罗斯称：上帝恩赐的奇特礼物） 1.性味：辛，温，苦，平， 2.协助治疗：增强免疫力，抗衰老美容，治疗糖尿病，抗癌防癌（如乳腺癌，胃癌，耳下腺癌，肺癌，皮肤癌，直肠癌，淋巴癌）防艾滋病，抑制传染病，防止高血压，还能治疗肝炎，肾炎，肠胃炎，调整肠胃系统等功能。 3.服用方法：与赤灵芝同食效果更佳，糖尿病患者最好空腹而食，粉剂直接冲水泡饮适量，煲汤而食10g/次。泡酒而饮10g/斤米酒。 四野生紫灵芝（木灵芝） 1.性味：甘，温 2.协助治疗：耳聋，利关节，保神益精气，坚筋骨，好颜色，久服轻身不老延年，疗虚劳，治痔（本草纲目），扶正固本，解毒护肝，补中强智，宁心益胃，抗衰，抗癌，美容滋补强壮，提高调节免疫力。 3.服用方法：药食同源的佳品，煲汤而食15g/人次，泡酒而饮20g/米酒。 五野生白灵芝（又名：玉，素灵芝）

药物临床试验GCP试题2

药物临床试验GCP培训考核试题 第一部分单选题（每题2分） 1 保障受试者权益的主要措施是：C A有充分的临床试验依据B试验用药品的正确使用方法 C伦理委员会和知情同意书D保护受试者身体状况良好 2 下列哪一类人员不必熟悉和严格遵守《赫尔辛基宣言》？D A临床试验研究者B临床试验药品管理者 C临床试验实验室人员D非临床试验人员 3 下列哪一项不是伦理委员会的组成要求？D A至少有一人为医学工作者B至少有5人参加 C至少有一人应从事非医学专业D至少有一人来自药政管理部门 4 伦理委员会的工作应：D A接受申办者意见B接受研究者意见 C接受参试者意见D是独立的，不受任何参与试验者的影响 5 经过下列哪项程序，临床试验方可实施？D A向伦理委员会递交申请 B已在伦理委员会备案 C试验方案已经伦理委员会口头同意 D试验方案已经伦理委员会同意并签发了赞同意见 6 伦理委员会做出决定的方式是：C A审阅讨论作出决定B传阅文件作出决定 C讨论后以投票方式作出决定D讨论后由伦理委员会主席作出决定 7 在伦理委员会讨论会上，下列什么人能够参加投票？A A参加会议的伦理委员会委员B非医学专业委员 C非委员的专家D非委员的稽查人员 8 伦理委员会书面签发其意见时，不需附带下列哪一项？C A出席会议的委员名单B出席会议的委员的专业情况 C出席会议委员的研究项目D出席会议委员的签名 9 伦理委员会从下列哪个角度审阅试验方案？A A保护受试者权益B研究的严谨性 C主题的先进性D疾病的危害性 10 下列哪项不是知情同意书必需的内容？C A试验目的B试验可能的受益和可能发生的危险 C研究者的专业资格和经验D说明可能被分配到不同组别 11 下列哪项不是受试者的权利？C A自愿参加临床试验B自愿退出临床试验 C选择进入哪一个组别D有充分的时间考虑参加试验 12 受试者在任何阶段有权退出试验，但退出后无权要求下列哪一项？D A不受到歧视B不受到报复 C不改变医疗待遇D继续使用试验药品 13 关于签署知情同意书，下列哪项不正确？D A 受试者在充分了解全部试验有关情况后同意并签字 B 受试者的合法代表了解全部试验有关情况后同意并签字 C见证人在见证整个知情过程后，受试者或其合法代表口头同意，见证人签字D无行为能力的受试者，必须自愿方可参加试验