拟南芥PHOT2基因超表达载体的构建及转化

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拟南芥PHOT2基因超表达载体的构建及转化

作者：乔新荣赵丽平孙伟徐长水

来源：《江苏农业科学》2014年第01期

摘要：采用PCR技术扩增拟南芥PHOT2基因编码序列，并将其转入pSUPER1300超表达载体中，构建了 pSUPER1300-PHOT2 超表达载体，利用农杆菌介导花序转化法，转入拟南芥野生型gl1、phot1突变体中。PCR扩增及 RT-PCR 分析表明，该基因超表达，筛选到了潜在的转基因株系。

关键词：蓝光受体；向光素；超表达

中图分类号： Q943.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0030-02

收稿日期：2013-06-08

作者简介：乔新荣（1972—），女，河南新密人，博士，讲师，主要从事植物生理及分子生物学研究。E-mail：xinrong806@https://www.wendangku.net/doc/4315638962.html,。光向素（phototropin，PHOT）是植物特有的蓝光受体，PHOT1、PHOT2属于同一家族，其N端含有2个高度保守的光感受区LOV1（light，oxygen，voltage1）区、LOV2区，每个LOV区都结合一分子的黄素单核苷酸（FMN）作为发色团。C端是Ser/Thr蛋白激酶区，蓝光激活多个丝氨酸残基发生自磷酸化作用[1]。研究发现，PHOT1的第851位丝氨酸残基（Ser851）的磷酸化作用是PHOT1发挥其生理作用所必需的[2]。PHOT都定位于质膜，但蓝光会诱导部分PHOT1向胞质迁移，部分PHOT2移至高尔基体及叶绿体外膜[3-5]。PHOT1、PHOT2调节植物的许多生理反应，包括植物的向光反应、气孔开放、叶绿体迁移及提高弱光下植物的光合作用、降低强光对植物伤害等[1，6]。目前，学者们对PHOT1、PHOT2的结构及其生理作用有了较为深入的研究[7-8]，PHOT1、PHOT2以光强依赖方式共同介导植物的许多生理反应，如共同介导弱光下叶绿体的聚集运动及强光下下胚轴的向光弯曲[7]。为了进一步研究PHOT2基因的功能及该基因下游的信号调控网络，本研究通过基因重组技术，构建pSUPER1300-PHOT2超表达载体，转入野生型gl1及phot1突变体2种遗传背景材料，获得PHOT2超表达转基因植株，旨在为深入研究PHOT1、PHOT2所调控

的信号网络提供遗传材料。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1植物材料拟南芥野生型gl1（Col-0生态型）、phot1突变体。