组培作业
（09生本1 何健强 2009574171）
植物组织培养作业
(1)什么是植物组织培养?
植物组织培养：在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织并诱导使其长成完整植株的技术。
(2)什么是"外植体"?
外植体: 把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体
无丝分裂时由于不经过染色体有规律的平均分配,故存在遗传物质不能保证平均等分配的问题,由此有些人认为这是一种不正常的分裂方式.
(3)按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类?
①植株培养②胚胎培养③器官培养④组织或愈伤组织培养⑤细胞或原生质
体培养
(4)植物组织培养有哪些特点?
①植物基础学科研究的良好系统②生物技术的基础③经济高效，管理方便，利于自动化④技术含量高，试验误差小，人工控制能力强⑤生长周期短，生长速度快⑥试验材料经济单一⑦缺点：设备复杂，投入资金多，电能消耗大
(5)你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价值?为什么?
植物组织培养是生物技术的重要组成部分，并且越来越引起重视。是因为它在理论和应用上都具有极其重要的意义。近20年来，从理论和实践两个方面，有力地推动了生物科学各个领域的发展。包括：①植物形态发展②植物发育学③植物生理学④植物胚胎学⑤植物细胞学⑥遗传学⑦育种学⑧病理学方面⑨基因转化受体的建立
(6)因地制宜建一个组织培养实验室，需要哪些分实验室?各分室的作用是什么?
植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局
1.实验室基本组成
a)无菌操作室
在植物组织培养中，无菌操作室（clean chamber）是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。由于植物组织培养需长时间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门，使空气不致流动，以防外界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台（医用平板推车）、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时连续作业使用两种。超净台中准备接种用的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。在预备室可放置工作服、鞋、帽等，也需要装自来水和紫外灯。
b)化学实验室
组织培养中植物植物材料是生长在人工配制的培养基上，这就需要在化学实验室预先配制好培养基。化学实验室一般由以下几个部分组成：
（1）洗涤室主要用于培养容器、玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。新购进的玻璃器皿一般先用1%盐酸除去可溶性无机物，再用中性洗涤剂；使用中的玻璃器皿可用洗涤剂清洗，自来水冲洗；对较难洗涤的器皿，如吸管等应用洗液进行洗涤。
洗涤室需备有工作台面、上水管和下水管、水池、落水架、电源、干燥箱等。
（2）药品室用于存放无机盐、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节物质等各种化学药品。要求室内干燥、通风、避免光照。室内设有药品柜、冰箱
等设备。各类化学试剂安要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱保存。有毒药品应按规定存放和管理。
（3）称量室根据需要，配备各类天平。要求干燥、密闭、无直射光照。一般配备1/100普通天平（coarse balance）和1/10 000的电子天平（sensitive balance），可能的话。加配1/1000和1/100 000的天平，形成系列。除电源外，应设有防震固定的台座。
（4）培养基配置室用于配制、分装培养基以及培养基的暂时存放。室内应配有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液器等器具；有平面实验台以及安放药品和器皿的各类药品柜、器械柜、物品存放架；有水浴锅、电饭锅、微波炉、过滤装置、酸度计、分注器以及贮藏母液的冰箱等。
（5）灭菌室用于器皿、器械、封口材料和培养基的消毒灭菌。要求墙壁耐湿、耐高温。室内需要备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤装置、煤气灶和电炉等。
玻璃器皿和小用具的消毒常采用干热灭菌法，150℃约保持1-3h。培养基、蒸馏水及一些用具，采用120℃高压蒸汽灭菌法。
在没有条件的地方，可将上述工作合并在一个房间内完成，但设备的安装与排列要合理，房间要宽敞、明亮、通风。
c)培养室
培养室（culture room）是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。需配有固定式培养架、旋转式培养架、转床和摇床、控温控光设备，以满足器官（芽、茎、花药等）、愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液体培养的需要。
进行固体培养和试管苗大量繁殖时，培养材料通常摆在培养架上，制作培养架应考虑使用方便、节能、充分利用空间以及安全可靠。培养架材料为金属、铝合金或木制品。隔板可用玻璃板、木板、纤维板、金属板等，最好使用玻璃板或铁丝网，既透光，上层培养物又不受热。为使用方便，通常设计为5-7层，最低一层离地面高约50cm，以上每层间隔30cm左右，培养架高约1.7-2.3m。一般在每层上方装置日光灯以供补充光照，培养架长度通常根据日光灯的长度设计。宽度可根据工作情况而定，一般装2支日光灯，宽40-50cm。最好使用专门为组织培养设计的节能冷光源，其光谱与日光相近且省电。每日照明时间根据培养物的特性不同而有所区别，一般为10-16h，最好用自动计时器控制光照时间。
培养室要保持一定的温度条件，大多数情况保持在20-27℃，要求室内温度均匀一致。室内湿度也要求恒定。为防止培养基的干燥和菌类污染，相对湿度保持在70%-80%为好。温湿度的保持可用空调机或调湿机通过继电器、石英定时开关钟、控温仪等来控制。大多数恒温培养，应根据要求预先调节好。温度变动太大，易使培养材料遭受菌类污染。
培养室应保持整洁。有条件的可装置细菌过滤装置。如需进行液体培养，还应根据培养的种类放置摇床、转床等各种培养装置。转床上的培养瓶不同的转动，瓶内培养物交替地处于液相和气相，保证了良好的通气条件，有利于培养物的生长。有的实验要求暗培养，因此应有暗培养的设备，如柜子或无光培养箱。
此外，为避免虫类侵染，培养室应杜绝栽培植物。培养室附近也应尽量避免放置盆花等植物。
d）细胞学观察室
用于观察、记录培养材料的生长情况及结果。室内要有固定的水磨石或瓷砖台板，以放置显微镜、解剖镜、倒置显微镜及照相设备等仪器。
e）驯化移栽室
用于试管苗的移栽。通常在温室或塑料大棚内进行。室内备有弥雾装置、遮荫网、移植床等设施；钵、盆、移植盘等移植容器；草炭、蛭石、沙子等移植基质。试管苗移植一般要求温室温度在15℃-35℃，相对湿度70%以上。
(7)组织培养中，pH值起什么作用?如果pH值过高或过低会有什么后果?
pH就是酸碱度,过高或者过低，都会引起植物组织生长不良,另pH值,过高或过低,会造成培养基(琼脂或卡拉胶)过硬或过软(不能凝结),都会影响植物生长.
(8). 常见的培养基种类有哪些？各有何特点？专为什么材料的培养而设计的？
由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。
1.按照培养基的成分来分
培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。
(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。
(2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。
(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
2.按照培养基的物理状态分
培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。 (1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。
(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。
(3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
3.按照微生物的种类分
培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。
4.按照培养基用途分
培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。
(1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。
(2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。
(3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。
(9).培养基的成分主要包括有哪些？
一般有蔗糖，植物激素，矿质元素，有机添加物，维生素，五大类
(10).培养基中常用的植物激素有哪些？各有何作用？
）GA）CTK）abscisic acid，
brassinosteroid，BR）。它们都是
响细胞的分裂、伸长、分化到影响植物发芽、生根、开花、结实、性别的决定、
2,4－D
能诱导糊粉层内a
速种子发芽。a
容易生根。可用于防止脱落、促进单性结实、疏花疏果、插条生根、防止马铃薯发芽等方面。
脱落酸的作用在于抑制
此是一种生长抑制剂，有利于细胞体积增大。主要作用：抑制细胞分裂，促进叶和果实的衰老和脱落。抑制种子萌发。
乙烯主要作用：促进果实成熟，促进器官脱落和衰老。
(11).外植体的选择需注意哪些问题？什么季节取材最好？
1、植物种质的选择：易于离体培养的品系；生产、研究上有重大意义的品
系；考虑褐化问题。
2、外植体的大小：外植体的表面积、体积、细胞数量会影响培养效果。
一般选择1-2cm左右大小。太大容易污染，太小不易启动或启动后仅产生愈伤组织。
特殊组织器官按器官或组织单位切离。
3、外植体的年龄和着生部位：外植体的幼化程度直接影响组织培养的结果。
来源于幼年植物的外植体比源于成年植株的外植体更易培养。
较低部位外植体要比上部的外植体容易启动。
4、取外植体的季节和时间：处于生长季节的外植体更易培养。
春季取材含菌数少，秋冬季取材难以成功。
雨季、湿热季节取材难以成功。
种质优良，植株健壮，取材的最适时期，适宜的大小
(12).在组织培养过程中，常用的灭菌方法有哪些？
灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
实验室里常用的灭菌方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭菌。（灭菌一消毒是不同的，用紫外线处理属于消毒。）
(13).何谓外植体褐变？产生褐变的主要原因？如何防止减轻褐变现象的发生？
在许多植物组织培养过程中，常遇到褐变问题。褐变主要发生在外植体，在植物愈伤组织的继代、悬浮细胞培养以及原生质体的分离与培养中也经常发生。褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。本文探讨植物组织培养中褐变现象的影响因素、机理及防范措施，对我们进行科学研究或工厂生产，包括植物组织的培养,原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养都有着十分重要的现实意义。
1褐变原因及危害
褐变是指外植体在培养过程中,自身组织从表面培养基释放褐色物质,以致
培养基逐渐变成褐色,外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物数量多少及多酚氧化酶活性有直接关系。很多植物，尤其是木本植物都含有较高的酚类化合物，这些酚类化合物在完整的组织和细胞中与多酚氧化酶分隔存在，因而比较稳定。在切割外植体时，切口附近的细胞受到伤害，其分割状态被打破，酚类化合物外溢。对于外植体本身来讲，酚类物质从外植体切口向外溢出是一种自我保护性反应，可诱导植保素或无物理屏障的形成，以防止微生物侵染组织。但酚类很不稳定，在溢出过程中与多酚氧化酶接触，在多酚氧化酶的催化下，迅速氧化成褐色的醌类物质和水，醌类物质又会在酪氨酸酶等的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活。从而导致组织代谢活动紊乱，生长停滞，最终衰老死亡。此外，由于组织的老化病变也会使多酚氧化酶激活而引起褐变。
2防止外植体产生褐变的对策
从理论上讲,酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制:一是除去引起氧化的物质——氧；二是捕捉或减少聚合反应的中间产物；三是抑制有关的酶。实际操作上，下列措施是被认为行之有效的。
2.1 适当外植体的选择
取材时应注意选择褐变程度较小的品种和部位作外植体。成年植株比幼苗褐变程度厉害，夏季材料比冬季及早春和秋季材料的褐变要严重。冬季的芽不易生长，宜选用早春和秋季的材料作为外植体。王异星[5]用荔枝无菌苗不同组织的诱导试验表明，茎最容易诱导出愈伤组织，培养2周后长出浅黄色的愈伤组织；叶大部分不能产生愈伤组织或诱导出的愈伤组织中度褐变；而根极大部分不产生愈伤组织，诱导出的愈伤组织全部褐变。
2.2 对外植体的处理
通过对较易褐变的外植体材料的预处理能减轻醌类物质的毒害作用。处理方法如下：外植体经流水冲洗后，在2-5℃的低温下处理12-24小时，再用升汞或70%酒精消毒，然后接种于只含有蔗糖的琼脂培养基中培养5-7天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中。取出外植体用0.1%漂白粉溶液浸泡10分钟，再接种到合适的培养基中。若仍有酚类物质渗出，3-5天后再转移培养基2-3次，当外植体的切口愈合后，酚类物质减少，这样可使外植体褐变减轻或完全被抑制。何琼英等[6]用抗坏血酸预处理香蕉吸芽外植体，能减轻外植体褐变，从而提高芽丛诱导率。
2.3 适宜的培养基
培养基的成分与褐变程度有关，要考虑所选培养基的状态和类型。
2.3.1 适当的无机盐浓度张妙霞等[7]在柿树组织培养防止褐变所进行的试验中，4种培养基的无机盐以改良MS(大量元素减半) 和1/2MS的效果最好，MS的效果较差，结果证明低浓度的无机盐可促进外植体的生长与分化，减轻外植体褐变的程度。徐振彪[1]在对玉米幼胚耐NaCl愈伤组织的筛选表明，随NaCl 浓度升高，褐变现象加重。
2.3.2 适当和适量的激素王异星[5]在荔枝的组织培养过程中，培养基中添加1 mg/L BA + 0.5mg/L 2,4-D时，愈伤组织较坚硬，增殖缓慢，易产生褐变。培养基中添加1mg/L BA+1mg/L 2,4-D 时，愈伤组织浅黄疏松，增殖也快。
2.3.3 培养基的硬度在一定范围内，琼脂用量大，培养基硬度大，褐变率低[8]，这可能是培养基的硬度影响了酚类物质的扩散速度的缘故。
2.3.4 培养基中水的硬度的影响硬度低的蒸馏水褐变率低,而使用硬度
较高的自来水,褐变严重,甚至会出现褐变死亡[8]。这可能是配制培养基的水改变了培养基中无机盐的浓度,间接地影响了植物外植体的褐变。
2.3.5 培养基的pH值在水稻体细胞培养中，pH值为4.5-5.0 时MS液体培养基可保持愈伤组织处于良好的生长状态，其表面呈黄白色，而pH值为
5.5-
6.0时，愈伤组织严重褐变[9]。一般来说，酸性环境(pH值为4.5-5.0)不利于褐变过程的发生[10]。
2.3.6 培养条件如温度过高或光照过强，光照会提高PPO的活性，促进多酚类物质的氧化，从而加速被培养的组织褐变。高浓度CO2也会促进褐变，其原因是环境中的CO2向细胞内扩散，细胞内CO32-增多，CO32-与细胞膜上的CO32-结合，使有效CO32-减少，导致内膜系统瓦解，酚类物质与PPO相互接触，产生褐变[11]。因此，初期培养要在黑暗或弱光下进行。
2.4 添加褐变抑制剂和吸附剂
褐变抑制剂主要包括抗氧化剂和PPO抑制剂。在培养基中加入偏二亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等抗氧化剂都可以与氧化产物醌发生作用，使其重新还原为酚[12]。由于其作用过程均为消耗性的，在实际应用中应注意添加量，其中L-半胱氨酸和抗坏血酸均对外植体无毒副作用，在生产应用中可不受限制。在水稻细胞的培养基中，添加植酸(PA)，可防止褐变，PA 分子中众多的羟基产生抗氧化作用，使生色物质的含量下降或PA与PPO分子中的Cu2 +结合，从而降低了其活力。陈学森等[13]在对植酸在银杏组织培养中应用的研究中也证实了植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用。
常用的吸附剂有活性炭和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。活性炭是一种吸附性较强的无机吸附剂，能吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中的杂质、培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糠醛等, 从而有利于培养物的生长。粉末状的活性炭与颗粒状的活性炭相比吸附性更强，一般在培养基中加入1-4g/L的活性炭。在使用过程中应注意，尽量用最低浓度的活性炭来对抗褐变的产生，因为活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附物质的同时，也会吸附培养基中的其他成分，对外植体的诱导分化会产生一定的负面影响[14]。而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)是酚类物质的专一性吸附剂，在生化制备中常用作酚类物质和细胞器的保护剂，可用于防止褐变[15]。
2.5 进行细胞筛选和多次转移
在组织培养过程中，经常进行细胞筛选，可以剔除易褐变的细胞。在外植体接种1-2天后应立即转移到新鲜培养基中，能减轻酚类物质对培养物的毒害作用，降低抑制作用，使外植体尽快分生，连续转移5-6次，可基本解决外植体的褐变问题。
(14).试管苗有哪些特点？移栽应注意哪些方面？
特点：1、试管苗的生态环境：高温且恒温、高湿、弱光、无菌(1)生长细弱；(2)光合作用差3)试管苗叶片的角质层不发达，叶片通常没有表皮毛，或仅有较少表皮毛，(4)叶片气孔数目多(5)根的吸收功能弱(6)对逆境的适应和抵抗能力差注意：通过减肥、增光、降温、控水等措施，提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高光合作用的能力，提高试管苗的移栽成活率。
(15)为什么说植物器官培养是组织培养的一个最重要的方面?
器官培养不仅是研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成的最好材料和方法，而且在生产实践上具有重要的应用价值，如利用茎、叶和花器培养建立的试管苗，可在短期内提高繁殖速率，进行名贵品种的快速繁殖；利用茎尖培养要可得到无病毒试管苗，解决品种好退化问题，提高产量和质量；将植物器官作诱变处理，用器官培养可得到突变植株，进行细胞突变育种。
(16)植物脱毒培养的意义是什么？
植物组织培养脱毒的原理：茎尖分生组织不带毒或带毒少。
---感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒的浓度也越低。
---分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，其传递速度低于细胞分裂和生长的速度。
无病毒苗培育的意义
用组织培养方法生产无毒苗，是一个积极有效的途径，排除了使用药剂，减少污染、防止公害、保护环境。
无病毒苗可以表现出明显的优良效果。
---草莓可增产20%—50%，植株结果多，单果重增加，上等果比例提高。
---菊花切花品种的脱毒株，表现出株高增加，切花数增多，花朵大，切花较重等特点。
---日本用柑桔茎尖微嫁接繁殖无病毒柑桔营养系；美国用组织培养法，使苹果无病毒苗已工厂化育苗。
(17)简述植物茎尖脱毒和热处理脱毒的原理与方法
物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温热处理等
原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目的。
化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在植物体内的复制。
生物学方法：选用抗病毒品种或采用种子繁殖方法。
基本原理
早在1934年，White发现烟草花叶病毒在烟草根中的分布是不均匀的，越靠根尖（root tip）区病毒含量越低，在根尖的顶端不含病毒。
能量竞争，病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。
(18)脱毒植物鉴定方法有哪几种？
①指示植物鉴定②抗血清反应鉴定③直观鉴定④ISEM
甘蔗组培快繁技术实验报告
甘蔗组培快繁技术 生物08本尚丽萍 34号组员：陈洁程燕娜 甘蔗是禾本科甘蔗属植物，是世界上重要的糖料作物，也是中国蔗糖工业的重要支柱。在甘蔗栽培上，通常是以蔗茎节上的腋芽繁殖，或在每年砍伐后，利用残留在土中的茎基上的腋芽作宿根繁殖。茎段繁殖速度慢，用种量大，而且种茎在远途运输中颇为不便，每年秋植蔗种来源难以解决，这对快速繁殖良种甘蔗以满足甘蔗生产的需要极为不利，因此，采用组织培养的方法，规模化生产遗传性状整齐一致的种苗供生产上应用，现将甘蔗组培快繁技术介绍如下。 1材料与方法 1.1材料 甘蔗腋芽及茎尖 1.2方法 1.2.1 材料处理 将所取外植体腋芽（带少量茎节组织）、茎尖（带部分新叶包裹）用洗衣粉水洗净，清水冲洗半小 液处理15分钟，用无菌蒸时，在消过毒的接种间超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%HgCl 2 馏水冲洗4-5次后待接种。 1.2.2 培养基 诱导外植体培养基：MS+BA 1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+琼脂8g/L。 诱导腋芽增殖培养基：MS+BA 5mg/L+活性炭0.5g/L+20g/L蔗糖；MS+BA 10mg/l+活性炭0.5g/L+2%蔗糖。 诱导生根增殖培养基：1/2MS+NAA 2mg/L+IBA0.4mg/L+多效唑2mg/L。 1.2.3培养过程 将处理好的材料接入诱导外植体培养基中进行培养，光照时间10-12小时/天，光照强度（自然散射或荧光灯照明）1500-2000lux，培养温度25-30℃。培养3-5天后，若培养基出现混浊，说明已污染，应立即清除。培养10-15天，芽转绿将边缘褐色部分剥除转入同样培养基中培养，芽长到2-3cm时，转入诱导腋芽增殖培养基中，如此重复进行，直到所需数量后转入诱导生根培养基中进行生根培养，根长至3-5cm后进入炼苗阶段。 将幼苗不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让幼苗接受强光的照射，然后再开口练苗1-2d。从试管中取出发根的幼苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基。但要轻轻除去，应避免造成伤根。栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。栽后轻浇薄水。再将苗移入高湿度的环境中。保证空气湿度达90%以上。 2关键技术
植物组织培养报告
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
植物组织培养试题与答案(集合版)
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
2000年组培期终试题
2000-2001学年第一学期生物99 园艺植物组织培养期终试题 姓名：班级：学号：分数： 一、名词解释（每题4分，共20分） 1、指示植物法： 2、外植体： 3、接种： 4、去病毒原原种： 5、抗体： 二、填空（每空1分，共15分） 1、鉴定无病毒苗的常用方法有、、 。 2、病毒在感染植株上的分布是不均匀的，其中老叶及成熟的组织或器官中病毒含量，而又嫩的及未成熟的组织
或器官中病毒含量，生长点（0、1-1、0mm） 则。 3、蝴蝶兰组织培养中最合适的外植体是和。 4、利用组织培养进行快繁的培养程序是、、 、、。 5、卡特兰组培最大的问题是外植体在初代培养中易。 6、多胚性植物可用方法脱毒。 三、判断改错（每小题2分，共10分） 1、在原球茎切块细小，稀疏的培养瓶内，群体生长快。（） 2、兰花种子极小，数目众多，种子中有胚乳和子叶。（） 3、茎尖培养脱毒的效果与茎尖大小呈正相关，而茎尖的成活率与茎尖大小呈反相关。（） 4、分光光度法是定性鉴定病毒的方法。（） 5、含有抗原的血清，称为抗血清。（） 四、间答题（每题5分，共25分） 1、在卡特兰继代培养时，为什么液体培养与固体培养交替进行？
2、在无病毒苗的栽培过程中，如何防止病毒的重新感染？ 3、怎样用指示植物法鉴定病毒？ 4、热处理和茎尖培养脱毒的原理是什么？各有什么优缺点？ 5、按照所给配方MS+BA1+KT 0、5+IBA0、5，如何量取6L培养基 的营养液？母液如下：大量元素10倍，铁盐100倍， 肌醇200倍，维生素1000倍， 微量元素1000倍，BA 0、5mg/ml， KT 1mg/ml ，IBA 0、5mg/ml。
花卉组培快繁技术及产业化运用
花卉组培快繁技术及产业化运用 一、组培快繁技术 组织培养的依据是植物细胞的全能性，即指具有完整细胞核的植物细胞，都具有形成完整植株所必须的全部遗传信息，从而具备发展成完整植株的能力，在适宜的培养条件下任何一个细胞都可以发育成一个新的个体。组织培养是在无菌条件下利用人工培养基培养植物的细胞、组织、器官等外植体，使其形成完整小植株的繁殖方法，根、茎、叶、花器官，甚至细胞及原生质体等均可作为组培的材料。 1.1 花卉组培概况 组培技术自20世纪60年代开始运用于生产以来，已经在农作物的脱毒、快繁、育种等各个方面取得了令人瞩目的成绩，我国20世纪70年嗲以后才开始快繁技术的研究，20世纪80年代以后开始运用。兰花是最早运用也是最成功花卉，通过原球茎的增殖，一个茎尖外植体一年可以繁殖种苗几十万株，形成了当时的“兰花工业”。之后此技术开始运用于月季、香石竹、菊花、唐菖蒲、非洲菊等许多花卉作物的种苗生产，此外在脱毒培养、种质保存、新品种培育等方面也开展了较多的工作。利用组培快繁技术能短时、高效的提供性状一致的优质种源这一特性，在加速选育种过程中获得的性状优良的品种、品系及生产过程中出现的芽变、名、优、新品种及有利用价值的野生花卉的迅速推广及运用上起到了积极的推动作用，各科研院校和企业着力于花卉的组培技术研究及生产开发，形成了一批集科研和开发于一体的大型花卉种苗企业，就云南来讲，有年产200万株以上组培室8-10家。对培养基、环境因子的影响进行了深入研究，探讨了玻璃化、畸形、黄化、变异的形成机理和防治措施，种苗快繁是组织培养技术在生产中运用最为广泛的一项技术，近几年在花卉种苗工厂化生产中广泛运用，对推动花卉产业的发展起到了积极的促进作用。 1.2 组培程序 1.2.1材料选择 首先在引种、试种及市场调查的基础上，选适栽的优良种品种，并在其中挑选花色纯正、健壮、无病虫害的优良单株作为取材母株，然后根据其组培特性取合适的部位作为外植体。 1.2.2材料消毒 将材料在洗涤剂溶液中清洗干净后，在0.1%-0.2%氯化汞中消毒10-20min，再在0.1%-0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10min，用无菌水漂洗3次，在整个消毒过程中，要不断的摇动容器器，使其能够均匀全面的消毒。灭军剂种类和浓度是决定进种成功的关键。 1.2.3生长和分化 将外植体接种于含有各种营养物质和激素的培养基中，MS培养基是运用最为广泛和有效的培养基，它适于多数花卉作物组织培养，生长素和细胞分裂素的种类和浓度因花卉种类和品种以及诱导、增殖、生根等不同阶段而有所不同，经过愈伤组织和不定芽的诱导和分化及丛芽增添制，形成许多芽丛，最后将达到生根
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
植物组培实验报告
姓名班级学号实验日期 科目植物生理学实验实验名称Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture 合作者指导教师成绩 Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture Introduction The technology of plant tissue culture is based on the principle of totipotency which means the capacity to generate a whole plant from any cells or an explant.During the plant tissue culture,the hormones affect largely on morphogenesis,such as Auxin and Cytokinin.And the content and ratio of these hormones can make different results.NAA is the routine reagent of auxine and6-BA is the reagent of cytokinin.For the tissue culture,we prepare the Murashige and Skoog’s medium(MS medium).The MS medium contains hormones,macronutrients and micronutrients(detailed ingredients are in Table 2-1).The pH in the medium will be adjusted with1M NaOH.We should prepare10MS media with hormones. During the whole operation of tissue culture,six potential source of contamination are air,water, growth media,equipment,explant and people.We use the laminar flow hood to remove most of microbes from air flow.The water and the media have been autoclaved.The tools should be kept sterile in the70%alcohol and flamed by alcohol burner.And we sterilize the explants with Ca(ClO)2and70% ethanol and sterile water. We use the NAA to induce the callus to generate root. Materials Fresh young leaves of tobacco(Nicotiana tabacum) MS medium:NH4NO3,KNO3,CaCl2,MgSO4,KH2PO4,MnSO4?H2O,ZnSO4?7H2O,KI,Na2MoO4?2H2O,CuSO4?5H2O,CoCl2?6H2O,Na2EDTA,FeSO4?7H2O,Nicotinic acid,Pyridoxine HCl(VB6), Thiamine HCl(VB1).Glycine,Mesoinositol. Agar,HgCl2,NAA,6-BA.2%Ca(ClO)2,sterile distilled water,70%ethanol,Beaker,Balance,10 Bottles,pH test strips,Laminar flow hood,Tween-80,Scissor,Forceps,Scalpels,Alcohol lamp. Method Part1:Prepare10bottles of culture. 1.Wash10bottles and dry them for a group. 2.Our group’s task:Weigh50mg6-BA and mix with sterile distilled water to be50mL1mg/ml solution in a bottle and mark the stock solution name,the date,and our group number. 3.Other groups prepare the MS medium culture,agar,NAA and sugar.In Table2-1,MS=100ml A+ 1ml B+10ml C+5ml D+10ml E.Every3group prepare1L medium=MS+1mg/ml6-BA+ 0.2mg/L NAA+3%sugar+0.7%agar.Boil the solution with induction cooker to mix thoroughly. 4.Adjust the pH of medium to 5.8with1M NaOH or HCl. 5.Repackage the1L medium to the bottles of3groups.10bottles of each group,30ml for each bottle. 6.Sterilize the culture bottles by autoclaving at115℃for30min.Store them at room temperature. Part2:Operation of plant tissue culture. 1.The space in the laminar flow hood has been sterilized by UV light for15min.We place all items in well order to start working. 2.Rinse4young leaves as explants in tap water for10-30min.The next operations are all aseptic.
植物组织培养的应用及发展前景修订稿
植物组织培养的应用及 发展前景 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]
植物组织培养技术应用及进展 摘要：本文综述了植物组织培养理论的发展，重点论述其再脱毒、快繁、育种与有机化合物工业生产以及种质资源的保存等方面的应用，并对应用的前景作简单的展望。 关键词:植物组织培养；应用；进展 中图分类号： 1.理论起源 19世纪30年代，德国家施莱登和德国动物学家创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在的理论是植物组织培养的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从传向世界各地，美国植物学家斯等人，用韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。 植物组织培养的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。 植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工上进行培养，这些器官或组织就会进行，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。 植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科 2.植物组织培养发展简史 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。 植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。20世纪初，曾有人提出能否将植物的薄壁细胞培养成完整植株研究者从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并在液体培养基中培养，使其分化出了愈伤组织，从愈伤组织又得到胚状体，胚状体转移到固体培养基上继续培养后，获得了完整的胡萝卜试管植株。经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。
园林植物快繁技术试卷
园林植物快繁技术（2007.9） 一、单项选择题（本大题共17小题，每小题1分，共17分） 每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。 1、将培养体转移到新的培养基的过程，称为 A. 初代培养 B.继代培养 C.固体培养 D.平板培养 2、固体培养基中，常加入的凝固剂是 A.琼脂 B.活性炭 C.蔗糖 D.抗生素 3、花药和花粉培养时，对多数植物而言，花粉最容易诱导成功时期为 A.单核中期至单核晚期 B.双核期至三核期 C.三核期 D.减数分裂前期至中期 4、1960年，在快速繁殖和脱病毒上有重要贡献的法国人是 A. Murashige B. Cocking C. Morel D. Haberlandt 5、对外植表面灭菌时，较难从外植体上去除的消毒剂是 A.次氯酸钾 B.升汞 C.乙醇 D.过氧化氢 6、花药培养中，染色体加倍常用的诱变剂是 A. KT B. 蔗糖 C.聚乙二醇 D.秋水仙素 7、植物组织培养的理论基础是 A.植物细胞全能性 B.植物细胞学 C.细胞学说 D.植物生理学 8、利用母液配制MS培养基1升时，需吸取100X微量元素母液、称取0.7%琼脂的量 分别为 A.5ml;7.0g B.10ml;7.0g C10ml;0.7g D.5ml;0.7g 9、对于热不稳定物质，如IAA，常采用灭菌方式为 A.表面消毒 B.高压蒸汽灭菌 C.干热灭菌 D.过滤灭菌 10、细胞分裂素的主要作用是 A.促进细胞分裂和分化 B.促进细胞伸长和分裂 C.促进脱落和衰老 D.加速细胞的伸长生长 11、花粉培养时，小孢子的第一次分裂从不均等分裂变为均等分裂，分裂后形成两个大 小、形态和染色深浅相同的细胞，而后再继续分裂发育为花粉胚，该雄核发育途 径是 A.营养细胞发育途径 B.营养细胞和生殖细胞同时发育类型 C.生殖细胞发育类型 D.花粉均等分裂途径 12、植物无糖组织培养中，植物体的碳源是 A.蔗糖 B.氨基酸 C.CO2 D.活性炭 13、悬浮培养时，细胞数目扩增生长曲线呈 A.Z形 B.S形 C.L形 D.W形 14、配制NAA母液时，需先用下列哪种溶液溶解，再进行定容？ A.蒸馏水 B.乙醇 C.盐酸 D.丙酮 15、培养基的湿热灭菌时，一般灭菌的温度是 A.75摄氏度 B.100摄氏度 C.121摄氏度 D.160摄氏度 16、植物组织培养实验室中，接种室最常用的装置是 A.摇床 B.电子平台 C.高压蒸汽灭菌锅 D.超净工作台
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌
组织培养论文
本科期中论文 学院 专业 年级 姓名 论文题目 指导教师职称 2013 年 5月 7日
目录 摘要 (3) 关键词 (3) Abstract (3) 正文 (3) 1植物组织培养概述 (3) 2植物组织培养在农业上的应用 (4) 2.1离体无性系的快速繁殖 (4) 2.2培养无病毒种苗 (4) 2.3新品种的选 (5) 2.4人工种子和种质的保存 (6) 3植物组织培养在农业上的应用前景 (6) 参考文献 (7)
植物组织培养在农业中的应用 生命科学学院2010级生物技术张志强 ［摘要］：通过有关植物组织培养方面的文献综述植物组织培养在农业上离体无性系的快速繁殖、培养无病毒种苗、新品种的选育和人工种子和种质的保存方面的应用，并对应用的前景作简单的展望。 ［关键词］：植物组织培养农业 [Abstract]:The paper shows that the tissue culture plays an important role in the application of agriculture by analyzing the documents of tissue culture and indicate its outlook of the application. [Key words]: plant tissue culture; agriculture 植物组织培养是二十世纪初兴起的一项高新生物技术，至今已经有一百多年的历史，如今已成为了生物领域里面十分活跃的技术。植物组织培养开始走上工厂化和商业化始于20世纪六十年代，得利于花粉小孢子培养和原生质体培养的成功［1］。和植物组织培养的历史相比，中国的在这方面的研究起步算是比较早的，在二十世纪四十年代在这方面就有所研究，但是大范围的发展起来还是始于二十世纪七十年代的花药培养。 农业对农作物和经济植物的最终要求是提高产量和改进质量。常规方法是以有性杂交为作为指导进行育种，这种方法局限性很大，而且周期长，效果还不理想。植物组织培养为农业的优化提供了新的途径，如今，植物组织培养已广泛应用于植物育种，在单倍体育种、胚培养、体细胞杂交、细胞突变体筛选、遗传转化等方面均取得了显著成就。 1植物组织培养概述 植物组织培养，是指在人工控制的条件下，将植物体的任何一部分，或器官、或组织，或细胞，进行离体培养，使之发育形成完整的植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任伺一部分是指根、茎、叶、花、果以及它们的组织切片和细胞［2］。它的优越性在于：可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制［3］。 植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性（totipotency）。一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成完整植株，这就是所谓的细胞全能性［4］。
植物组织培养试题与答案集合版
植物组织培养试题与答 案集合版 Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞，进行离体 培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任何一部 分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞脱分化形成 愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的全部操作 过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种 致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。 11、液体培养是将培养物方在液体培养基中培养，又称为液体震荡培养。 三、
蓝莓组培快繁技术实例 · 附配方
蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。 本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 高灌蓝莓半木质化茎段。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约 0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。 1.1.3 培养条件 诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L 增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L 复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。 以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。 培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。
2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。 2.2 继代增殖培养 将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。 2.3 复壮培养 将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。 2.4 瓶外生根培养
组培实验报告
学号姓名 学院 专业、班级 实验课程名称红豆杉愈伤组织的诱导培养 1. 实验设备及材料 （1）主要实验用具和仪器 冰箱，普通天平，分析天平，各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、电炉，三角瓶，移液管，量筒，烧杯，容量瓶，玻璃棒，医用口杯，精密pH试纸（pH5.4~7.0），药勺，称量纸，标签纸，封口膜，橡皮筋，电炉，高压蒸汽灭菌锅、100ml三角瓶、500ml 搪瓷杯、25ml量筒、10ml和5ml吸管、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、枪状镊子、眼科手术剪、手术刀、酒精灯、100ml三角瓶、500或1000ml搪瓷杯、50ml量筒等。 （2）药品和试剂 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、6-BA （6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、愈伤组织继代培养基、75％酒精。（3）实验材料 红豆杉种子 处于脱分化进程中的外植体 2．实验方法步骤及注意事项 I、MS培养基母液和常用试剂的配制 （1）培养基的成分 目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 （2）培养基的配制方法 配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液(母液)，贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。 （3）MS培养基母液的配制 母液的配制有两种方法：
植物组织培养脱毒方法综述
植物组织培养脱毒方法综述 摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养 正文： 植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来。随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。 1、茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。 1．1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。大于以上尺寸脱毒率将会下降，反之成活率将会下降，迅速将摘出的生长点置于培养基中。就香石竹而言，切掉叶柄后，生长点是在几重叶原基的包围下，要从外到内逐一切掉外层叶原基，当生长点露出时把包括1—2片叶原基在内的生长点切下，迅速移入事先预备好的培养基内，注意生长点的方向及不要把生长点埋在培养基内。在康乃馨的茎尖培养中取带有1—2个叶原基、长0.2-0.3 mm的茎尖接种到培养基上，接种时只须沾取茎尖置于轻轻划破的培养基表面即可。洋葱可用0.5—0.7 mm茎尖培养，能有效地脱除洋葱中的O YDV和GI v病毒。在对白葱的茎尖脱毒研究表明，以带有1片叶原基大小为0.2-0.6 mm的茎尖外植体较为适宜。 1．2 茎尖培养可能出现的问题及防治方法 茎尖培养可能出现褐化、玻璃化等现象，这会严重影响植物的成活率，所以