耐碳青霉烯粘质沙雷菌耐药基因及分子流行病学研究
安徽医科大学学报i4cia 2019 Jan;54(1)? 33 ?网络出版时间：2019 -1 -317:25 网络出版地址:http://kns. cnki. net/kcm s/detail/34.1065. r. 20181230.1809.007. html
耐碳青霉烯粘质沙雷菌耐药基因及分子流行病学研究
袁园w，陈继中*2，潘亚萍1,徐元宏1,王中新1
摘要目的探究耐碳青霉烯粘质沙雷菌耐药表型和碳青霉烯酶基因，同时分析其分子流行病学特征。方法收集临床分离非重复的67株碳青霉烯类耐药的粘质沙雷菌，以纸片扩散法和Vitek-2 Compact检测常见药物敏感性;采用改良碳青霉烯类灭活试验(mCIM)、Carba NP试验、改良Hodge试验(MHT)对碳青霉烯酶进行筛查;PCR检测碳青霉烯酶基因;PCR检测肠杆菌科细菌基因重复序列（ERIC)对耐药菌进行克隆型分析。结果碳青霉烯耐药的粘质沙雷菌主要来自重症监护室（ICU),以痰液标本为主;药敏结果显示67株细菌对头孢噻肟、头孢曲松100%耐药，对亚胺培南、美罗培南、厄他培南、氨曲南耐药率均大于90%,对环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星耐药率较高，仅对阿米卡星和复方新诺明保持高度敏感；mCIM、Carba N P试验、MHT阳性率分别为92. 54%、89. 55%、91. 04% ;PCR显示67株粘质沙雷菌中，检出W aKpe基因32株、组基因7株、Man xA_51组基因7株、基因3株、6Z a<)X A_58组基因1株,其中有8株细菌同时含有多种耐药基因;67株耐碳青霉烯的粘质沙雷菌可分为8个型别（以A~H表示），其中A型（50株）最多。结论 分离的耐碳青霉婦粘质沙雷菌呈现多重耐药性，主要携带况^^和6/a<)X A基因，且有多基因联合共存现象。同种克隆集中趋势明显，有引起院内感染爆发流行可能。
关键词粘质沙雷菌;碳青霉烯酶;耐药基因;肠杆菌科细菌基因重复序列；同源性分析
中图分类号R466. 5
文献标志码A文章编号1000-1492(2019)01 -0033 -07 doi：10.19405/https://www.wendangku.net/doc/4518540250.html,ki.issnlOOO- 1492.2019.01.007
粘质沙雷菌(Serratia m a r c e s c e m,S M)是兼性厌 氧革兰阴性杆菌，属肠杆菌科沙雷菌属，是一种广泛 分布于自然界和医院环境中的条件致病菌。该菌可 在人体抵抗力下降、外科手术、输血、创伤、侵入性操 作等条件下导致包括肺部感染、泌尿系感染、血流感
2018-09-27接收
基金项目：安徽省高校省级自然科学研究项目（编号:KJ2010A174)作者单位:1安徽医科大学第一附属医院检验科，合肥230022
2铜陵市人民医院输血科，铜陵244000
作者简介:袁园，男，主管检验师，住院医师，硕士研究生；
王中新，男，主任技师，硕士生导师，责任作者,E-mail: a y-
wzhx87@ 163. com 染及创口感染等，并有可能导致院内感染的爆发流 行。碳青霉婦类抗生素是一类对超广谱P-内酰胺 酶和头孢菌素酶稳定的超广谱、抗菌活性极强的非 典型P-内酰胺抗生素。因其具有高渗透性、低毒 性、快速杀菌效果而被临床广泛使用。根据2015 ~ 2017年中国细菌耐药监测网（C H I N E T)细菌耐药性 监测报告[1_3]可知，碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌的 临床分离率和耐药率都在逐步上升，产碳青霉烯酶 是其主要的耐药机制[4]。该研究主要针对碳青霉 烯耐药粘质沙雷菌的耐药表型和碳青霉烯酶基因的 携带情况进行探究，同时分析耐药菌的同源性，为临 床抗感染治疗和院内感染防控提供参考。
1材料与方法
1.1菌株来源收集2014年1月~2017年12月安徽医科大学第一附属医院检验科微生物室分离的 对碳青霉烯类抗生素耐药（亚胺培南、厄他培南、美 罗培南中任一药物耐药）的粘质沙雷菌，剔除同一 患者相同部位重复分离株后，共获得67株作为实验 样本。质控菌株为肺炎克雷伯菌（ATCC BAA- 1705、ATCC BAA-1706 ) 和大肠埃希菌（ATCC 25922)。
1.2主要仪器与试剂
1.2.1 主要仪器V itek-2 C om pact全自动微生物 鉴定分析仪、M A LD I-TO F-M S基质辅助激光解吸电 离飞行时间质谱仪、麦氏比浊仪（法国梅里埃生物 公司）；B iom etra基因扩增仪（德国B iom etra公司）；电泳仪(上海天能科技公司）；紫外线凝胶成像系统 (美国B io-R ad公司）；高速低温离心机（德国Ep- pendorf公司）；NanoDrop o n e微量紫外-可见分光光 度计(美国赛默飞公司）。
1.2.2主要试剂仪器配套G N鉴定卡和G N13药 敏卡(法国梅里埃生物公司）；Muller-H i n t o n琼脂、药 敏纸片(英国O x o i d公司）；血平板和M H平板(合肥 天达诊断试剂公司）；亚胺培南西司他丁钠（杭州默 沙东制药公司）；琼脂糖（法国BI0W E S T公司）；细 菌蛋白抽提液(美国赛默飞公司）；6X Loading buff-er、Premix T a q(日本 T a K a R a公司）；酸红粉末、Z n -