柠檬酸合酶试剂盒说明书(25管24样)(分光光度法)

货号:QS1005-25 规格:25管/24样柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环第一个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。

测定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

自备实验用品及仪器:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

试剂组成和配制:

试剂一:液体25mL×1瓶,-20℃保存;

试剂二:液体5mL×1瓶,-20℃保存;

试剂三:液体0.5mL×1支,-20℃保存;

试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,4℃保存,临用前加入800μL无水乙醇,用不完的试剂4℃保存一周;试剂六:粉剂×2支,-20℃保存,临用前加入400μL蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;试剂七:粉剂×1支,-20℃保存,临用前加入800μL蒸馏水,用不完的试剂仍-20℃保存;

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

①称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研

钵匀浆。

②将匀浆600g,4℃离心5min。

③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。

④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。

⑤在步骤④中的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或

200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。

2、将试剂四、五、六和七在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min。

柠檬酸合酶试剂盒说明书(25管24样)(分光光度法)

第1页,共2页

相关推荐
相关主题
热门推荐