doc_大鼠肿瘤坏死因子αTNFα酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用，不得用于临床检验。

大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明

书

黄石市艾恩斯生物科技有限公司

【产品名称】

通用名称：大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）

英文名称：Rat Tumor necrosis factor α（TNFα）ELISA KIT

【包装规格】

48人份/盒，96人份/盒

【预期用途】

仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）的浓度。

【检验原理】

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα）的浓度。

【主要组成成分】

主要成分

校准品检测范围：15.6-1000pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。

2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。

6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。

8、如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。

【检验结果的解释】

检测完成后，以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD 值），利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。【检验方法的局限性】

1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排除该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。

3、精密度

批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

4、灵敏度

最低检出剂量小于。

5、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次回收率评估，回收率在85%-115%之间。

6、特异性

本试剂盒识别天然和重组大鼠肿瘤坏死因子α（TNFα），与结构类似物无交叉。

7、稳定性

2℃-8℃保存，有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

技术提示

1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理

所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

Wistar大鼠EAE模型的制备

Wistar大鼠EAE模型的制备 作者：刘颖刘华辛晋敏马太花梁丽云马存根摘要目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达，探讨山西医科大学动物室的Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法:采用免疫诱导方法制备EAE模型并HE染色，同时用原位杂交法检测EAE 大鼠MCP-1的表达。结果:免疫后12d～17d，发病鼠出现EAE临床症状，HE染色，光镜下可见血管周炎性浸润，MCP-1的表达明显增加。结论:山西医科大学Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。 关键词完全抗原;Wistar大鼠;EAE;MCP-1 多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）是中枢神经系统（CentralNervous System，CNS）的炎性脱髓鞘疾病，多发于20岁～40岁女性，大多数患者的病程为复发和缓解交替，在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。MS病因和发病机制复杂，一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎（ExperimentalAu-toimmune Encephalomyelitis，EAE）的病理变化及发病机制与急性MS极其相似，因此，成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料Wistar大鼠:购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒:购于武汉博士德生物制品公司。

1.2 方法 1.2.1 完全抗原的制备:取液体石蜡40mL，羊毛脂20g混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂（In-complete Freund'sAdjuvant，IFA），分装入10mL小瓶，高压灭菌后4℃冰箱保存。健康350g～450g左右雌性豚鼠用3%戊巴比妥45mg/kg腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下，剪开胸腔、剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注直至肝脏变白;迅速取其脑脊髓，小心剥离脑脊膜后称重，加入等量生理盐水，制成50%（W/V）匀浆。同时融化IFA，1mL IFA加入约10mg的M.bovisBCG即制得CFA。将CFA与GPSCH等体积混合，用注射器反复抽推，制成油包水乳液，制成完全抗原，放置冰上备用。 1.2.2 模型制备:将健康、雌性Wistar大鼠30只，随机分成正常对照组、佐剂组和EAE组，三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原0.4mL/只，百日咳原液0.05mL/只（含5.0×10 9 个菌体）。记免疫当日为零天，每天称重，采用双盲法两人进行临床症状评分，取平均值，临床评分2分为发病动物，临床评分采用通用的五分评分法，即:0分无症状，1分动物尾部肌张力降低，2分动物尾部麻痹+后肢肌张力低，3分尾麻痹+后肢肌张力重度低，4分尾麻痹+四肢麻痹，5分频死状态。发病动物只数/实验动物只数为发病率。免疫后12d～17d，3%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射，至四肢瘫软，无菌状态下，剪开胸腔剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注至肝脏变白;4%多聚甲醛灌流至尾部僵直，解剖迅速取其大脑视交叉前后2mm组织、小脑和脑桥部、脊髓颈腰膨大处，再用4%多聚甲醛固定半小时，做常规石蜡包埋、切

《临床骨科杂志》投稿攻略发表论文

临床骨科杂志 一、发表说明 本团队专注于论文写作与发表服务，擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作、发表300起，具体价格信息联系： 本团队并非任何杂志编辑中心，本中心是专业代发论文的机构，与各个杂志社具有长期良好的合作关系，也就是我们通过我们的特殊渠道将论文送给杂志社我们特定的内部人处理论文，保证较高的上稿率，以解决投稿人投稿后焦急的等待与石沉大海的结局。通过我们可以较为容易达到发表的目地，当然，论文的质量也是重要的基础。 二、期刊简介如下 本杂志是国内外公开发行的骨科专业学术性期刊，国家科技部中国科技论文统计源期刊。面向临床骨科医生、相关学科医生和研究人员，以临床研究为基石，以新技术、新方法、新思想为引导，普及与提高相结合。本刊注重科学性、创新性、实用性，文章内容翔实、图文并茂、格式规范，可读性强。 临床论著 一期病灶清除植骨融合内固定治疗跳跃性胸腰椎结核实验与临床 兔脂肪干细胞直接修复陈旧性全层兔膝关节软骨缺损综述 肩袖损伤修复技术的研究现状方法与应用 锁定钢板固定治疗老年股骨转子间骨折

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大鼠立体定向图谱解_部分1

de Groot大鼠脑立体定向图谱 参考文献： de Groot J. The rat hypothlamus in stereotaxic coordinates.J Comp Neurol 1959, 113:389-400 使用说明 （一）图谱使用范围 本图谱使用范围主要是下丘脑及其周围结构，也涉及到视前区和中脑上部。选用体重 200-300g英格兰大白鼠的脑，制成冰冻连续切片，片厚50um。在冠状平面，自前而后每隔0.4mm 取一切片，共14张。在矢状平面，中线左侧0.2和1.1mm处各取一切片。全部共16幅平面图。 （二）规定以下各种坐标平面对大鼠下丘脑各结构进行定位 1.水平零平面（H0） 令动物上门齿后缘根部高于两侧颅骨外耳孔中心连线(耳间线)5mm。此时通过上门齿后缘根部所作的水平面（即与定向器框架水平面平行的面)为H0，低于H0者为负值，高于H0者为正值。这样通过耳间线的水平面就比H0平面低5mm，为H-5。按此规定，H0平面正好通过脑的前连合与后连合。 2.冠状零平面（A0） 通过耳间线并与H0平面相垂直的冠状平面为A0。在A0以前的各冠状平面均以正数表示如 A2.8即表示A0以前2.8mm的冠状平面。本图谱所选平面自A2.8到A8.0止。

3.矢状零平面（L0） 通过前囟并与H0 A0两平面均垂直相交的平面称L0。前囟是两侧颅骨、顶骨在正中线的汇合点。前囟位置一般在A0前5.9mm（A5.7-A6.1），H0以上6.3mm(H+6.1-H+6.6)左右。这样，L0就恰好通过矢状缝，而把脑分为左、右对称的两半。本图谱所用L0.2、L1.1两平面分别表示L0外侧0.2mm及1.1mm处的矢状平面。 根据上述各坐标平面，可由图谱查出下丘脑某一结构的坐标读数，并定出其具体空间位置。（三）图谱的表示方法 图谱中核团和脑区的轮廓用虚线表示，纤维束的轮廓用实线表示。各结构的名称用西文缩写。

上海中学生命科学创新实验室建设的实践与思考

上海中学生命科学创新实验室建设的实践与思考 一、创新实验室建设理念与目标： 2008年，上海中学获上海市教委批准率先开展“上海中学创新素养培育实验项目”，在“面”上注重整体推进学生的创新素养培育，在“点”上设置科技实验班（以培养学生的科技创新素养为主），力图以“聚焦志趣”为核心，探索出一条创新人才早期培育新路。为匹配“创新素养培育实验项目”，促进学生的志趣聚焦与创新潜能的开发，上海中学建设了包括“生命科学创新实验室”在内的10个创新实验室。 上海中学生命科学创新实验室遵循上海中学创新人才早期培育以“聚焦志趣”为核心的理念，遵循“让每一个学生的潜能得到充分开发”的教学观点，遵循“高立意、高思辨、高互动”的“三高”教学模式，围绕“以德育为核心，创新精神和实践能力为重点”的素质教育要求，着眼于使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，使学生掌握相关的学科思想，具备学科基本素养，锻炼逻辑性思维、批判性思维和创造性思维。 二、创新实验室设备配置和课程设置 1、现代生物化学和分子生物学实验室 现代生物化学和分子生物学实验室 配备了Thermo生物安全柜、苏净超净工 作台、ABI PCR仪、Bio-rad DNA电泳 系统和蛋白质电泳/转移系统、超声细胞 破碎仪、DNA杂交仪、BioTek酶标仪、 Eppendorf 紫外分光光度计等专业设备， 可承担多门基础型课程和拓展型课程的 教学和创新课题的研究工作。 上海中学基础型和拓展型课程注意 发展学生的问题意识、发展性思维和探 索精神，采取“教授与自学相结合、知 识性学习与实践性学习相结合、基础性

学习与研究性学习相结合、母语教学与双语教学相结合”的策略，让学生从被动接受式学习逐渐转变为主动探索式学习。 生命科学学科自20世纪50年代以来发展极其迅速，中学生命科学拓展型课程有必要从学科的前沿性和时代性出发，展示现代生命科学和生物技术发展的成果，使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，激发学生科技创新的热情。基于这一思考，上海中学除了实施上海课程标准外，增设了“走进基因工程”、“话说基因”、“转基因植物栽培”、“现代生物学基础实验”、“人类基因组与生物信息学”等理论与实验相结合的拓展型课程，给予学生必要的知识铺垫，使学生有可能从中发现问题从而进一步探究（表1）。 表1、现代生物化学和分子生物学分层实验课程的设置（部分） 基础实验课程拓展型课程探究性课题 1.目的基因的克隆（PCR） 2.质粒的抽提、纯化、鉴定和 转化 3.DNA指纹图谱（凝胶电泳） 4.DNA杂交 5.RNA的抽提和cDNA的合成 6.血红蛋白凝胶柱层析 7.蔬果中维生素C含量的测定 8.紫外线抑菌作用的研究 9. ABO血型的鉴定 10. 人外周血淋巴细胞培养及染色体观察 1、转基因大豆的鉴别 2、蚕豆微核实验在环境 监测中的应用 3、固氮菌的作用 4、水生生物对水中N、P 的吸附 5、中药对大型水蚤心率 的影响 6、蔬果抑菌作用的探究 7、精油抑菌作用的探究 8、不同奶品中蛋白质含 量的测定 9、影响酶活性的因素 1、大豆耐盐基因的预测与筛选 2、探讨从原球茎直接提取铁皮石斛原药成 分的可能性 3、铁钼离子浓度对光合细菌产氢效率的影 响和产氢废水的筛选 4、栀子果实根茎叶指纹图谱初探及提取工 艺研究 5、黄柏中高纯度小檗碱提取方法的研究 6、再生纸浆的酶法辅助漂白改性 7、水解乳蛋白替代培养基配方研制 8、免疫金试纸法快速检测“瘦肉精”研究 9、转基因黄芪毛状根培养基的替换 10、PCR鉴定鸟类性别 如表1所示，学生在学校开设的基础型实验课程和拓展型课程（含理论课程与实验课程）的基础上，根据其兴趣提出了创新课题，并在课题立项和实施过程中了解科学研究的一般思路，掌握科学思想方法，磨练意志，为其日后的发展打下坚实基础。 原野、刘文嘉辉、史天泽和陈文朴同学在学习了“质壁分离”相关内容后提出：植物细胞在受盐胁迫时在细胞水平上表现出了原生质层和细胞壁分离的现象，那么在分子水平上植物会表现出怎样的响应特征呢？如果四位同学没有学习和实践过“目的基因的克隆和鉴定”等相关知识，估计他们也问不出这个问题，当然也就不存在“大豆耐盐基因的预测与筛选”课题了。（本项目获得第二十五届Intel上海市青少年科技创新大赛一等奖、生命科学杰出项目专项奖、全国青少年科技创新大赛三等奖。） 创新思维不可能一蹴而就，只能慢慢培养。中学时代的每个学生都有着良好的创新潜能，但对创新潜能的激发需要良好的环境和氛围。因此，培养学生的创