乳牙牙髓干细胞库的构建
乳牙牙髓干细胞库的构建
干细胞是一类具有自我更新、高度增殖与多向分化的细胞。根据干细胞所处的发育阶段，干细胞库分为胚胎干细胞库和成体干细胞库2种。进行胚胎干细胞研究必须破坏胚胎，而
胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式，因此，胚胎干细胞的研究一直颇具争议遭到一部
分人的反对。成体干细胞已从成年个体不同组织中成功分离，该细胞通过分裂维持自身细
胞群大小，经诱导后又可进一步分化为各种不同的组织细胞，继而构成机体中各种组织器官。作为种子细胞，干细胞可以修复和重建受伤或病变的多种组织器官，因此，干细胞库/
细胞银行的设想为干细胞能及时对病变部位和外伤受损处的再生性治疗提供了新思路。如
何以最简单、无创的途径获取种子细胞已成为学者们关注的焦点。目前，已有研究探讨应
用成人牙髓干细胞取代骨髓基质干细胞治疗因脊髓损伤而导致瘫痪的患者。在儿童脱落的
乳牙中，含有丰富的乳牙牙髓干细胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth，SHED）。最近的研究表明：SHED 也具有多向分化的能力，相对于从个体阻生第
三磨牙或因正畸拔除的前磨牙中获取干细胞的途径来说，脱落乳牙是一个更容易获得干细
胞的途径。
国外已有学者对 SHED 库进行了研究，并由此产生了多家机构建立 SHED 库。美国BioEden 公司在德州创立“乳牙银行”（Baby Tooth Cell Bank）并在英国（面向欧洲）和泰
国（面向东南亚）建立了国际实验室，以构建 SHED 储存库。日本广岛大学于 2005 年建
立了“Three Brackets”研究所，这是日本第一家牙齿银行（Tooth Bank），并于 2008 年与
台北医学大学实验室合作建立台湾第一家 DPSC 库，其中就包括 SHED；随后，在 2007 年，名古屋大学也建立起类似的实验室。在北欧挪威，Norwegian 牙齿银行已经收集超过
10 万颗乳牙样本，并且建立起宣教的机构以普及干细胞储存意识。
1 建立 SHED 库的设想
1.1 SHED的生物学特性
SHED 与其他组织来源的干细胞在生物学特性上有很多相似之处。Gronthos等对牙髓干
细胞（dental pulp stem cell，DPSC）的克隆形成率进行了研究，与骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cell，BMSC）比较后发现：SHED 中 DPSC 的克隆形成率明显
高于骨髓来源的 BMSC，这就表明 DPSC 具有较 BMSC 更高的增生能力和自我更新能力。Miura等发现：从 1 颗脱落前牙取材的每12~20个细胞就可以形成黏附克隆集落，这是间质
干细胞增殖的典型表现。进一步的实验结果表明：与 BMSC 和 DPSC 相比较，SHED 有
更高的增殖能力。DPSC 在不同诱导剂的作用下，可分化为成牙本质细胞、脂肪细胞、软骨细胞和神经样细胞等多种细胞。研究人员主要集中研究 SHED 的体内外成骨的潜能，如Cordeiro等利用 SHED 与生物可降解支架与人牙齿切片复合移植于免疫缺陷小鼠，14~28 d后将移植物进行免疫组织化学的检查，结果发现牙本质涎蛋白表达阳性，推断 SHED 在体内能分化为成牙本质样细胞。在成脂、成软骨和成神经诱导方面均有研究证实 SHED 具有多向分化的潜能，为其在体内植入 SHED 使受损或衰退的组织、器官改善或恢复功能提供了理论依据。
1.2 SHED 细胞库的优点
从伦理道德学角度考虑：胚胎干细胞的研究对胚胎的破坏作用使其颇具争议，遭到一部分人的反对，而 SHED 是成体干细胞，不受伦理学的限制。
取材方面：从个体脱落的乳牙获取 SHED 较为简单可行，且对供体（儿童）伤害最少，其父母也较易接受；个体化获取和保存 SHED 来进行自体移植再生性治疗，能最大限度地降低免疫排斥和疾病交叉感染的风险；
此外，先于病变发生而储存干细胞，为个人提供了终身保障，这也是建立干细胞库的指导思想之一；SHED 库更可用于供体近亲，如祖父母、父母和兄弟姐妹等。
Arora等的研究表明：SHED 库的储存费用仅仅为脐带血细胞库的 1/3。在多向分化能力和临床应用潜能方面，SHED 等成体干细胞与脐带血来源的干细胞互为补充，脐带血干细胞能提供血液中的主要细胞如红细胞、白细胞和血小板，用于治疗多种血液疾病，而SHED 则可在软硬组织再生方面起作用，这是造血干细胞无法比拟的。
2 建立 SHED 库的技术要点
医患双方经过充分沟通并了解双方的权利和义务后，签署“干细胞自体储存协议书”并交付一定的费用，收集供体脱落的乳牙，从乳牙牙髓中培养分离 SHED 存入自体储存库，干细胞所有权归存储者所有，其所存的干细胞只用于拥有者本人或经拥有者同意转让给其他家庭成员和无关第三人。
建立 SHED 库要经历乳牙收集、SHED 的分离和储存 3 个步骤。
2.1 乳牙的收集
在收集乳牙前应首先对该乳牙的牙体和牙髓状况进行判断，选择无龋和无牙髓炎症的乳牙，这是成功获取 SHED 的前提。
因此，Arora等制定了建立 SHED 库收集乳牙的标准：
1）新鲜拔除的乳牙由口腔医生判断牙体和牙髓的状况，筛选无龋、无牙髓炎症和牙髓坏死等症状的乳牙；
2）选取至少剩余 1/3 牙根的乳切牙或乳尖牙，不推荐选用乳磨牙作为样本；
3）由于正畸治疗的需要提前拔除的健康乳磨牙也可纳入收集标准。
将所收集的乳牙置于含无菌低渗磷酸盐缓冲液（phos-phate buffered saline，PBS）的转移管中，低温保存转移至实验室，并对供体资料逐一进行记录。干细胞存活能力与收集处理时间和保存温度密切相关，这成为干细胞库建立的障碍之一。因此，Arora等建议：从收集乳牙到处理牙髓的时间不应超过 40 h。Honda等提出：长时间冻存组织会影响端粒酶活性，导致细胞衰老。但也有学者持不同意见。Perry等对处理时间进行了研究后发现：将收集到的健康牙齿低温保存 120 h 后，仍能从牙髓中分离出相当数量的干细胞；Oh等对即时处理组与低温冻存后处理组获得的牙周膜细胞活性进行分析，结果发现 2 组间差异无统计学意义，均提示可放宽从收集牙齿到处理牙髓的时间限制。
2.2 SHED 的培养、分离和鉴定
参考 Miura等的方法：
从预冷的培养液中取出牙齿，以聚维酮碘消毒牙面；
用含有双抗的0.01 mol ·L -1 的 PBS 反复冲洗，劈开牙冠或牙科裂钻钻开牙冠，取出冠根部牙髓，PBS 反复冲洗；
用眼科弯剪将牙髓组织剪成小块，加入 3 g·L -1 的Ⅰ型胶原酶和 4 mg·L -1 的中性蛋白酶，37 ℃下消化1 h，期间多次振荡，最终未见成形的牙髓组织；
离心弃上清液及洗净胶原酶后，沉淀用培养液充分混匀，反复吹打离散细胞团块，通过孔径70 μm 的细胞筛网过滤，以获得单细胞悬浮液；
细胞计数按每毫升有 1×10 5个细胞的密度接种到，透气的培养瓶中，加入含有质量分数为 20%的胎牛血清和质量分数为 1%的青-链霉素溶液的改良Eagle 培养基（Dulbecco’s modification of Eagle’smedium dulbecco，DMEM）培养液；
置于 37 ℃、体积分数为 5%的 CO 2孵育箱中培养，3 d 后半量更换培养液，弃去未贴
壁细胞；
每 2~3 d 完全更换培养液 1 次，细胞汇合达 70%~80%时，质量分数为 0.25%的胰蛋白
酶-乙二胺四乙酸室温消化，离心弃上清液，沉淀按 1∶3 比例传代；
有限稀释法分离纯化 SHED。
为鉴定培养分离的细胞具有干细胞特性，挑选具有克隆形成能力的细胞，流式细胞术检
测 BMSC 和 DPSC 共同表达的细胞表面标记物如 Stro-1，CD44，CD146，对于表达阳性的细胞群，再进行体外多向分化诱导，进一步从功能上验证所培养的 SHED 具有多向分化
潜能。最后，将所分离出的 SHED 的健康和活性证明给予供者父母，履行知情权。
2.3 SHED 的冻存
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，使细胞暂时脱离生长状态而使其细胞特性得以保存，需要时再复苏细胞。细胞冻存时，向培养基中加入保护剂二甲基亚砜，可使溶液冰点
降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。Papaccio等将筛选、扩增培养出的 DPSC 冻存于液氮内，储存 2年后复苏，发现冻存后的
干细胞增殖率、凋亡率和多向分化能力与新鲜培养 DPSC 的差别无统计学意义。对于干细
胞冻存的温度，多数学者倾向于将其保存于液氮内，以最大限度保存干细胞的活性。但也
有学者持相反意见，如Woods等将DPSC 分组分别保存于-85 ℃冰箱和-196 ℃液氮中6 个月，复苏后发现：2 组冻存细胞的增殖率并无统计学差异。最近，日本学者对冻存方法提
出了新的设想-- 磁冻结（magnetic freezing），其原理是即使应用一个较弱的磁场，都能
使其中的介质冰点降低 6~7 ℃，以确保所保存的物质能在其结冰点以下却不结冰，可以避
免因结冰膨胀而导致的细胞壁受损。利用此技术对比在几种冻存方式下细胞存活率后发现：磁冻结后的细胞存活率达83%，液氮保存则只有 63%，-85 ℃冰箱保存的为 45%，而家庭
用冰箱（-20 ℃）却只有低至21.5%的存活率。但目前此技术尚未普及。
综上所述，建议 SHED 库的冻存：
（1）将样本干细胞分为 4 份分别冻存于液氮中，以确保干细胞不会因出现问题而全部
遭弃；
（2）以每 1.5 mL 的细胞冻存液含有1.0 ~ 2.0 ×10 6个细胞为宜，密度太高或太低均会导致细胞复苏率的下降；
（3）细胞冻存时应以1℃·min -1 的降温速度降温至-85 ℃，随后即可库存于液氮中。
3 结束语
SHED 库有不受伦理学的限制、取材简便可行、对供体（儿童）伤害最少、自体移植能最大限度地降低免疫排斥和疾病交叉感染的风险以及能在供者本人甚至直系亲属有需要时迅速提供种子细胞等优点，已在北美、北欧和日本等发达国家逐步构建。然而，SHED 库尚处于起步阶段，如何提高人们的“干细胞储蓄”意识，保证干细胞的性能在储存数年甚至数十年仍不改变，检测冻存过程中的干细胞质量，以及干细胞再生性治疗技术逐步成熟都是构建 SHED 库亟待解决的问题。作为一个有较好应用前景的研究方向，目前国内报道较少，相信随着人民生活水平和意识的不断提高、医学水平的不断发展，构建 SHED 库会越来越受到国内学者的关注。
乳牙根尖周炎的治疗原则
东莞天使口腔官网 https://www.wendangku.net/doc/5012193739.html, 乳牙根尖周炎的治疗原则 在我国，很多家长对于乳牙的疾患不够重视，患儿就诊时患牙常已出现牙髓或根尖炎症症状。乳牙牙髓炎和根尖周炎不仅给患者带来疼痛，长期不治疗还会影响继承恒牙胚的发育，使其牙冠钙化差、萌出过早或过迟、萌出位置异常，严重者可作为病灶牙引起机体其他组织的疾病。因此及时有效的治疗乳牙牙髓疾病有着十分重要的意义。 乳牙牙髓、根尖周病的治疗方法较多，有保存生活牙髓的治疗和不保存生活牙髓只保存患牙的治疗，以及治愈根尖周病，保存患牙，恢复功能的根管治疗。但是，由于儿童和乳牙的特点，在乳牙的牙髓疾病和根尖周病的治疗中不容易成功。下面我们从乳牙牙髓治疗疗效评价的方法和标准，影响牙髓治疗的因素等方面进行讨论。 1、乳牙牙髓治疗疗效评价方法 1.1 临床评价 询问患者是否有症状，患牙的感觉是否正常，行使功能时是否存在不适感。临床检查的体征包括：肿胀、窦道、触痛。 1.2 影像学检查 X线片上成功的指标有：牙髓治疗后的牙齿正常脱落、根尖周无病变、无牙内吸收、继承恒牙正常萌出。 2、影响治疗疗效的因素 2.1 治疗性因素 2.1.1 术前因素 在牙髓治疗前，如果有诊断错误、病例选择不当以及预后估计不当均可直接导致后继治疗的失败。病例选择不当是影响治疗成功的重要因素之一。基本的牙髓治疗技术的选择取决于牙髓的炎症范围，目前这些技术可以分为盖髓术、牙髓切断术、牙髓摘除术[3]。如果误将已有牙髓炎的患牙行直接盖髓术或将根髓已有炎症的患牙行牙髓切断术，均会引起术后牙髓炎，常出现自发痛，夜间痛，也可能无明显症状，但较长时间发现牙髓坏死，并引起急、慢性根尖周炎；亦有将根髓明显感染甚至已经坏死的牙进行干髓治疗导致急、慢性根尖周炎。因此，牙髓治疗的术式选择与疗效极有关系，当牙髓炎症波及全部牙髓组织时，或牙髓已有退行性变基础上合并炎症，即保存全部或部分牙髓不能成功时，应将全部牙髓去除行根管充填术。 2.1.2 术中因素
牙髓干细胞 研究进展综述
牙髓干细胞 1牙髓干细胞概念 牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织。2000年Gronthos[1]等通过对人牙髓细胞的研究，发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，细胞中形态呈梭形，可自我更新和多向分化，有着较强的克隆能力。这些由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)。现在普遍认为牙髓组织中具有形成细胞克隆能力和较强增殖能力的未分化间充质细胞即DPSCs[2]。 2牙源性干细胞 至今，已从人类牙齿相关组织中分离和鉴定出7种干细胞: (1)牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)[1]，来自恒牙牙髓；张巍巍等[3]以人牙髓干细胞为种子细胞与PLGA支架材料在体外进行复合培养，表明PLGA 有利于于牙髓干细胞的粘附与增值。Lindroos等[4]得到DPSC与其他间充质源性干细胞具有相似的表面标志物和骨相关性的标志物的结论，支持DPSC在硬组织再生方面的可能性。从成人第三磨牙牙髓中分离的DPSC在适宜的条件下可诱导分化为有功能活性的神经细胞，并在基因和蛋白水平表达神经组织专有的标志物[5]，为治疗神经系统方面的疾病提供了新的途径。DPSCs不表达成牙本质细胞特征性蛋白DSP、DMP，则表明DP-SCs尚处于未分化状态[6]。我国学者通过对根髓和冠髓进行比较时发现：DPSCs 存在于全部牙髓之中,在根髓中的密度更高[7]。 (2)人类脱落乳牙牙髓干细胞(stem cell from the pulp of human exfoliated deciduous teeth, SHED),来自儿童脱落乳牙的牙髓;Miura等[8]研究发现，正常脱落的乳牙牙髓中的细胞经培养会表现出成纤维细胞样生长，其增殖率和群体倍增数均比骨髓基质干细胞(BMMSC)、DPSCs高，于是首次提出了SHED的概念。Shen YY等[9]发现SHED在体外培养过程中可以表达成骨细胞的标志，如RUNX-2、OCN、BSP，表明SHED在体外可以分化为成骨细胞;将SHED与人类牙齿切片复合后，在体外培养或是植入免疫缺陷小鼠皮下，均表达成牙本质细胞分化的标志( DSPP，DMP-1，MEPE)[10]。一系列实验表明SHED在体内只能诱导宿主细胞分化为成骨细胞[11]，而其自身无法分化为成骨细胞，但在体外培养过程中却可以分化为成骨细胞。SHED 可能还具有参与机体的免疫调节等功能[12]。李丽文[13]等用不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数, 观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成能力的方法得到，1.5～3cells/cm2低密度接种培养DPSCs 有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能。SHED 的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成能力均优于DPSCs。 (3)根尖乳头干细胞(stem cell from the apical papilla,SCAP)[14,15]，来自牙根发育未完成的根尖乳头；Abe等[16]从人年轻第三磨牙根末端分离根尖周牙乳头，并采用酶消化法从中分离出细胞进行研究，结果发现这种细胞在低密度下培养时，
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断讲课教案
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断 乳牙牙髓病是牙髓组织的疾病，包括牙髓炎症和牙髓坏死。乳牙牙髓病多由深龋感染引起，为乳牙龋病的并发症。除龋病感染外，牙齿外伤也可引起。 乳牙牙髓病有以下特点： ①由于儿童患者对病史描述不清，对检查的主观表达往往不准确，且对常用的 温度试验、电活力试验及牙髓检查方法反应不够敏感，使乳牙牙髓炎的诊断较 为困难。 ②有疼痛史者表明牙髓已有炎症或已经坏死，但牙髓已有病变或坏死者不一定 都有症状。 ③乳牙患龋后，感染很容易由深龋波及牙髓。龋病引起的牙髓炎主要是慢性牙 髓炎，出现急性症状时多是慢性牙髓炎急性发作。 ④乳磨牙慢性牙髓炎常并发根尖周炎症，往往牙髓尚未坏死即可引起牙龈局部 肿胀，或引起牙槽脓肿，常常可见X线显示根分叉处的牙周硬板破损，骨质稀 疏而仍有部分牙髓存活的现象，此时的牙髓炎症为牙髓-尖周炎症或牙髓-根周
炎症。 ⑤牙髓炎症常引起根管内吸收，使根管口或根管腔增大甚至穿通，给治疗带来 困难。 ⑥牙髓炎症常引起牙根异常吸收或病理性吸收，此种吸收常可导致牙齿过早脱 落。 乳牙根尖周病的特点： ①早期症状不明显，就诊时病变多较严重，相当一部分是出现急性牙槽脓肿或 间隙感染之后方才就诊。 ②急性根尖周炎多是慢性根尖周炎急性发作。此时炎症扩展迅速，颌面部肿胀 明显，并出现全身症状，若处理及时，炎症很快消退。 ③牙龈反复肿胀或瘘道反复溢脓。 ④乳牙尖周炎症的脓液易从龈沟排出，此时患牙松动明显。 乳牙尖周病的检查特征： ①患牙深龋穿髓或未穿髓，若穿通髓腔，穿髓孔常见溢血或溢脓。 ②患牙松动并有叩痛。 ③根尖部或根分叉处的牙龈红肿或有牙龈瘘道。
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断 乳牙牙髓病是牙髓组织的疾病，包括牙髓炎症和牙髓坏死。乳牙牙髓病多由深龋感染引起，为乳牙龋病的并发症。除龋病感染外，牙齿外伤也可引起。乳牙牙髓病有以下特点： ①由于儿童患者对病史描述不清，对检查的主观表达往往不准确，且对常用的 温度试验、电活力试验及牙髓检查方法反应不够敏感，使乳牙牙髓炎的诊断较为困难。 ②有疼痛史者表明牙髓已有炎症或已经坏死，但牙髓已有病变或坏死者不一定 都有症状。 ③乳牙患龋后，感染很容易由深龋波及牙髓。龋病引起的牙髓炎主要是慢性牙 髓炎，出现急性症状时多是慢性牙髓炎急性发作。 ④乳磨牙慢性牙髓炎常并发根尖周炎症，往往牙髓尚未坏死即可引起牙龈局部 肿胀，或引起牙槽脓肿，常常可见X线显示根分叉处的牙周硬板破损，骨质稀疏而仍有部分牙髓存活的现象，此时的牙髓炎症为牙髓-尖周炎症或牙髓-根周炎症。 ⑤牙髓炎症常引起根管内吸收，使根管口或根管腔增大甚至穿通，给治疗带来 困难。 ⑥牙髓炎症常引起牙根异常吸收或病理性吸收，此种吸收常可导致牙齿过早脱 落。
乳牙根尖周病的特点： ①早期症状不明显，就诊时病变多较严重，相当一部分是出现急性牙槽脓肿或 间隙感染之后方才就诊。 ②急性根尖周炎多是慢性根尖周炎急性发作。此时炎症扩展迅速，颌面部肿胀 明显，并出现全身症状，若处理及时，炎症很快消退。 ③牙龈反复肿胀或瘘道反复溢脓。 ④乳牙尖周炎症的脓液易从龈沟排出，此时患牙松动明显。 乳牙尖周病的检查特征： ①患牙深龋穿髓或未穿髓，若穿通髓腔，穿髓孔常见溢血或溢脓。 ②患牙松动并有叩痛。 ③根尖部或根分叉处的牙龈红肿或有牙龈瘘道。 ④X线片可见以下内容：龋坏的深度及龋洞与髓腔的关系；尖周病变的状况和程度；乳牙根是否出现生理和（或）病理性吸收；恒牙胚发育状况，包括牙胚的发育程度，所处的位置，牙胚外包绕的牙囊骨壁是否完整等。 乳牙牙髓病和根尖周病的治疗 乳牙牙髓炎和根尖周病的治疗目的： ①去除感染和慢性炎症，消除疼痛； ②延长患牙的保存时间 ③防止对继承恒牙胚产生不良影响 乳牙牙髓炎和根尖周病的治疗原则： ①乳牙牙髓病的治疗原则为保存牙齿重于保存活髓，治疗目的是延长患牙的保 存时间，减少对继承恒牙胚的影响。 ②治疗力求简便有效，以达到消除感染和炎症的目的，扩大乳牙保留范围，
口腔执业医师考试辅导 16.儿童口腔医学——牙髓病与根尖周病(讲义)
儿童口腔医学--牙髓病与根尖周病 乳牙 乳牙牙髓组织学特点 ·髓腔大，髓角高，以近中颊角尤为明显 ·髓室底薄，侧副根管多，牙髓感染后易侵犯根分歧，而此时牙髓可为活髓 ·牙髓细胞丰富，活力旺盛 ·牙髓神经纤维不成熟，分布稀疏，感觉不敏感 ·根尖周组织活力旺盛，修复能力强 病因 诊断特点 ·疼痛 ·肿胀、瘘管（可能在根分叉部位），可能龈沟排脓 ·叩痛和松动 ·牙髓活力测验 ·X线检查 乳牙牙髓病临床表现 ·症状不明显，以慢性炎症为主 ·龋蚀未去净露髓，往往说明牙髓已经感染 ·没有疼痛并不能说明牙髓没有感染 乳牙牙髓病治疗技术 1.间接牙髓治疗：保留近髓处的部分龋坏组织 2.直接盖髓术：备洞时的意外穿髓，露髓孔直径小于1mm的患牙；外伤冠折露髓 3.乳牙牙髓切断术：局部麻醉下将冠部牙髓组织切断和去除，保留根部活髓的治疗方法。适用于深龋露髓，部分冠髓牙髓炎，外伤露髓的牙齿 4.乳牙根管治疗术 乳牙牙髓切断术 1.氢氧化钙牙髓切断术 ·术前X线片：牙根吸收1／2时不宜做活髓切断术 ·局部麻醉，上橡皮障 ·制备洞形：消毒手术域，去尽洞壁龋蚀组织 ·切除冠髓：锐利挖匙或中号圆钻针 ·止血：生理盐水冲洗，用消毒棉球轻压止血 ·盖髓：髓组织断面止血后，将新鲜调制的氢氧化钙糊剂盖于断面厚度约1mm，轻压与根髓密合·严密垫底，常规充填。预成冠修复 2.FC（戊二醛）断髓术 ·术前X线片：牙根吸收1／2时不宜做活髓切断术 ·局部麻醉，上橡皮障 ·制备洞形：消毒手术域，去尽洞壁龋蚀组织
·切除冠髓：锐利挖匙或中号圆钻针 ·止血：生理盐水冲洗，用消毒棉球轻压止血 ·盖髓：髓组织断面止血后，将蘸有2%戊二醛或1：5FC的棉球置于牙髓断面，使之与髓组织接触1分钟，避免使用压力将药液压入根管内。取去含药棉球，髓断面覆以氧化锌丁香油水门汀·严密垫底，充填，推荐预成冠修复 3.注意事项 ·牙髓切断术可以一次完成并充填 ·也可用暂封材料暂时充填窝洞，观察1～2周，无异常时再换永久充填 ·断髓后出血暗红，不易止血或髓室内有坏死、化脓现象时，应改做根管治疗 ·牙髓切断术后观察如有炎症反应或叩痛，应改做根管治疗 乳牙根尖周病特点 ·早期症状不明显，往往出现急性炎症时才就诊 ·慢性炎症为主 ·患牙松动并有叩痛。根尖部或根分歧处牙龈红肿，有的出现面部肿胀，局部淋巴结肿大，并伴有全身发热等症状 ·牙龈瘘管，反复溢脓，反复肿胀 ·脓液容易从龈沟排出，加剧乳牙松动 ·X线片检查可见根尖部和根分歧部牙槽骨破坏的透射影像，是诊断慢性根尖周炎的重要指标 ·乳牙根尖周病变可以加速牙根吸收 乳牙根尖周病治疗 ·乳牙急性根尖周炎的应急处理 ①建立髓腔引流 ②切开排脓 ③给予抗菌药物的全身治疗 ·乳牙根管治疗术 ·干髓术 乳牙根管治疗术适应证 ·牙髓炎症涉及根髓，不宜行牙髓切断术的患牙 ·牙髓坏死及根尖周炎而具保留价值的乳牙 乳牙根管治疗术步骤 ·术前拍摄X线片：了解根尖周病变和牙根吸收情况 ·在局麻下或牙髓失活后，将全部牙髓摘除 ·制备洞形，揭顶 ·根管预备 ·根管消毒 ·根管充填 乳牙根管治疗术注意事项
成体人牙髓干细胞的分离与鉴定
成体人牙髓干细胞的分离与鉴定 杨雪超樊明文 武汉大学口腔医学院(430079) email:yangxuecao@https://www.wendangku.net/doc/5012193739.html, 摘要：目地从成人牙髓组织中分离培养牙髓干细胞，研究其生物学性状。方法选取年青患者因正畸拔除的完好牙齿，取出牙髓，采用酶消化及过滤的方法得到单细胞悬液，有限稀释法原代培养。扩大培养细胞克隆，体外诱导分化后对各克隆从碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性,矿化结节形成，牙本质唾蛋白表达，Hoechst33342染色，Oil Red-O 染色，PPARr2基因表达等方面进行检测。结果在矿化液诱导下，克隆细胞呈现明显高的ALP 活性；能够形成矿化结节；可以分泌表达牙本质唾蛋白，已向成牙本质细胞方向发生了分化。Hoechst33342染色大部分细胞为阴性。成脂肪诱导后，Oil Red-O染色阳性，检测到PPARr2基因表达。结论从成体人牙髓组织中可分离培养出干细胞，在体外能有效增殖且保持低分化状态，能够进行分化，为进一步的深入研究奠定了基础。 关键词：成体人牙髓干细胞牙本质唾蛋白成牙本质细胞 1．引言 目前普遍认为，干细胞是具有无限或很强自我更新能力细胞，能分化产生至少一种高度分化的后代细胞。干细胞应具有两个基本性质：（1）自我更新能力，能通过分裂维持自身群体的稳定；（2）分化能力，在一定条件下能分化产生具有特定功能的细胞[1]。干细胞又分为胚胎干细胞和成体干细胞两类，后者是目前研究的新热点。研究表明，皮肤[2]，乳腺[3]，肌肉[4]，甚至神经组织[5]等成熟组织器官中都存在成体干细胞（adult stem cell）。最近，国外学者证实成人牙髓组织中也存在干细胞[6]，国内关于此领域的研究尚刚刚起步，本文是系列研究的第一步，旨在探寻一条分离牙髓干细胞的可靠途径，为更深入的研究奠定基础2．材料和方法 2.1 材料 α-MEM培养基，特极胎牛血清（Hyclone, USA）; collagenase type Ⅰ,dispase(Sigma,USA);ALP检测试剂盒（南京建成）；β-甘油磷酸钠（进口分装）；兔抗人DSP抗体（NIDCR LW.Fisher 博士惠赠）；FITC标记二抗（武汉博士德）；Oil Red-O，IBMX, Hoechst33324(Sigma,USA)；One-Step RT-PCR试剂盒（Promage） 2.2 方法 2.2.1细胞培养和克隆 采用临床19-29岁因正畸或阻生需要拔除的健康第三磨牙，依照文献方法无菌条件下取出完整牙髓[7]。将牙髓剪碎，加入50倍体积的0.2% collagenase typeⅠ及0.2% dispase（体积比1︰1），37℃水浴摇床消化1小时，1000rpm/min离心10分钟，去上清。培养液（含20%胎牛血清）重悬沉淀，用100μm钢网过滤重悬液，获得单细胞悬液。细胞计数板计数 - 1 -
牙髓间充质干细胞生产
牙髓间充质干细胞生产 I．目的：建立牙髓间充质干细胞制品生产规程。 II．范围：适用于牙髓间充质干细胞的生产；适用于技术部和各中心技术组的所有技术人员。 III．职责： 1.生产主管负责本制度的执行和监督； 2.技术组的所有技术人员要严格按照本流程的要求进行操作； 3.监督员负责全程监督，并即时按要求填写《牙髓间充质干细胞生产记录》和《生产试剂耗材记录表》。 附表1 牙髓/骨髓/脂肪/胎盘/脐带间充质干细胞生产记录 附表2 生产试剂耗材记录表 IV．规程： 一、牙髓间充质干细胞原代操作 消化法： 1.仪器耗材 1）10ml移液管 2）培养皿 3）50ml离心管 4）100μm筛网 5）T75培养瓶 6）15ml离心管 2.试剂 1）生理盐水 2）培养基 3）胶原酶 3. 酶消化法操作流程 3.1 将浸在含1%双抗的生理盐水中的牙齿取出，吸取运输液4ml交给质检，并填写《样本取样单》，牙齿置于75%酒精中浸泡30min； 3.2 取出牙齿在含10ml生理盐水的培养皿中清洗2-3遍，用止血钳固定牙冠，
持骨钳夹碎牙根部，暴露出牙髓，用镊子取出牙髓并放入含有适量生理盐水的培养皿中； 3.3 用剪刀将牙髓组织块剪碎成1mm3，转移到50ml离心管中，加入生理盐水至30ml,再加入10ml 0.2%胶原酶； 3.4 置于37℃恒温摇床，180rmp消化30min ； 3.5 用100μm滤网过滤； 3.6 1200 rpm离心10min ，吸取洗涤液4ml交给质检，并填写《样本取样单》；附表3 样本取样单 3.7 弃剩余上清，调整细胞浓度为107/ml,置于75cm2培养瓶中,放入37℃，CO 2培养箱中进行培养。 4. 组织块法操作流程： 4.1 将浸在含1%双抗的生理盐水中的牙齿取出，吸取运输液4ml交给质检，并填写《样本取样单》，牙齿置于75%酒精中浸泡30min； 4.2 取出牙齿在含10ml生理盐水的培养皿中清洗2-3遍，用止血钳固定牙冠，持骨钳夹碎牙根部，暴露出牙髓，用镊子取出牙髓并放入含有适量生理盐水的培养皿中； 4.3 用剪刀将牙髓组织块剪碎成1mm3，将组织块均匀铺到T25培养瓶（用适量FBS润湿瓶底）瓶底； 4.6 倒置培养瓶，并加入5ml培养基，放入培养箱中培养； 4.7 12-24h后，将培养瓶轻轻翻转，将牙髓组织块浸入工作液中。 二、牙髓间充质干细胞换液 1.耗材 1）10ml移液管 2）15ml离心管 2.试剂 培养基 3. 操作流程 3.1 镜下观察状态细胞； 3.2 吸取上清液4ml交给质检，并填写《样本取样单》； 3.3 吸取上清液于50ml离心管中留作精华液（原代培养上清不留），并补充新的
乳牙牙髓病与根尖周病的临床表现及诊断
乳牙牙髓病与根尖周病得临床表现及诊断 乳牙牙髓病就是牙髓组织得疾病,包括牙髓炎症与牙髓坏死。乳牙牙髓病多由深龋感染引起,为乳牙龋病得并发症。除龋病感染外,牙齿外伤也可引起。 乳牙牙髓病有以下特点: ①由于儿童患者对病史描述不清,对检查得主观表达往往不准确,且对常用得 温度试验、电活力试验及牙髓检查方法反应不够敏感,使乳牙牙髓炎得诊断较 为困难。 ②有疼痛史者表明牙髓已有炎症或已经坏死,但牙髓已有病变或坏死者不一定 都有症状。 ③乳牙患龋后,感染很容易由深龋波及牙髓。龋病引起得牙髓炎主要就是慢性牙 髓炎,出现急性症状时多就是慢性牙髓炎急性发作。 ④乳磨牙慢性牙髓炎常并发根尖周炎症,往往牙髓尚未坏死即可引起牙龈局部 肿胀,或引起牙槽脓肿,常常可见Ｘ线显示根分叉处得牙周硬板破损,骨质稀疏而仍有部分牙髓存活得现象,此时得牙髓炎症为牙髓—尖周炎症或牙髓—根周 炎症、 ⑤牙髓炎症常引起根管内吸收,使根管口或根管腔增大甚至穿通,给治疗带来 困难、 ⑥牙髓炎症常引起牙根异常吸收或病理性吸收,此种吸收常可导致牙齿过早脱 落。 乳牙根尖周病得特点: ①早期症状不明显,就诊时病变多较严重,相当一部分就是出现急性牙槽脓肿或 间隙感染之后方才就诊。
②急性根尖周炎多就是慢性根尖周炎急性发作。此时炎症扩展迅速,颌面部肿胀 明显,并出现全身症状,若处理及时,炎症很快消退、 ③牙龈反复肿胀或瘘道反复溢脓。 ④乳牙尖周炎症得脓液易从龈沟排出,此时患牙松动明显、 乳牙尖周病得检查特征: ①患牙深龋穿髓或未穿髓,若穿通髓腔,穿髓孔常见溢血或溢脓。 ②患牙松动并有叩痛。 ③根尖部或根分叉处得牙龈红肿或有牙龈瘘道、 ④X线片可见以下内容:龋坏得深度及龋洞与髓腔得关系;尖周病变得状况与程度;乳牙根就是否出现生理与(或)病理性吸收;恒牙胚发育状况,包括牙胚得发育程度,所处得位置,牙胚外包绕得牙囊骨壁就是否完整等。 乳牙牙髓病与根尖周病得治疗 乳牙牙髓炎与根尖周病得治疗目得: ①去除感染与慢性炎症,消除疼痛; ②延长患牙得保存时间 ③防止对继承恒牙胚产生不良影响 乳牙牙髓炎与根尖周病得治疗原则: ①乳牙牙髓病得治疗原则为保存牙齿重于保存活髓,治疗目得就是延长患牙得保 存时间,减少对继承恒牙胚得影响。 ②治疗力求简便有效,以达到消除感染与炎症得目得,扩大乳牙保留范围,尽 力将患牙保存至替换时期、 乳牙牙髓病与根尖周病得治疗方法: 间接盖髓术-—在治疗深龋近髓患牙时,为避免露髓,有意识得保留洞底近髓得部分龋坏牙本质再矿化及其下方得修复性牙本质得形成,保存牙髓活力。该方法没有年龄限制,适用于乳牙,也适用于恒牙、 适应症:深龋近髓患牙,没有可逆性牙髓炎症状或体征,X线检查无病理性改变。
一次性乳牙根管治疗术治疗乳牙牙髓病及根尖周病疗效观察
一次性乳牙根管治疗术治疗乳牙牙髓病及根尖周病疗效观察 目的探讨一次性乳牙根管治疗术治疗乳牙、牙髓病及根尖周病的效果。方法选取2015年1月～2017年1月我院收治的130例乳牙牙髓病及根尖周病的患儿，随机分为对照组和观察组，各65例。对照组采用常规根管治疗，观察组采用一次性乳牙根管治疗，观察两组患儿的治疗成功率、疼痛程度及不良反应发生率。结果观察组的治疗成功率为93.85%，高于对照组的78.46%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。观察组的疼痛程度及疼痛评分均优于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。观察组患儿的不良反应发生率为4.62%，低于对照组的12.30%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论一次性乳牙根管治疗术治疗乳牙、牙髓病及根尖周病，临床效果显著，可缓解患儿的疼痛感，且安全性较高。 Abstract：Objective To investigate the effect of one time root canal therapy for dental pulp disease of the deciduous teeth and periapical disease.Methods 130 children with dental pulp disease of the deciduous teeth and periapical period disease from January 2015 to January 2017 were randomly divided into control group and observation group，with 65 cases in each group.The control group was treated with conventional root canal therapy.The observation group was treated with one time deciduous root canal.The success rate，pain level，and adverse reaction rate of the two groups were observed.Results The treatment success rate in the observation group was 93.85%，which was higher than 78.46% in the control group，the difference was statistically significant （P＜0.05）.The pain and pain scores of the observation group were better than those of the control group，and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The incidence of adverse reactions in the observation group was 4.62%，which was lower than the 12.30% in the control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion One time dental pulp disease of the deciduous teeth and periapical disease has significant clinical effects，can relieve pain in children，and has high safety. Key words：One time root canal therapy；Dental pulp disease of the deciduous teeth；Periapical disease；Safety 乳牙牙髓病（dental pulp disease of the deciduous teeth）及根尖周病（periapical disease）是常見的儿童乳牙疾病，会造成乳牙早失，影响牙列的完整性，及早治疗是不影响儿童生长发育的关键[1-3]。随着牙体保护技术和口腔医学的不断发展，根管治疗得到了更多患者的肯定。本研究以130例患儿为主要对象，对一次性乳牙根管治疗术的治疗效果进行评价，具体如下。 1资料与方法 1.1一般资料本研究选取2015年1月～2017年1月天津市口腔医院儿童口腔科收治的130例乳牙牙髓病及根尖周病患儿，本研究通过医院伦理会批准。将患儿随机分为对照组和观察组，每组65例。对照组中，男35例，女30例；年
乳牙牙髓病的实用治疗
乳牙牙髓病的实用治疗 我认为目前儿童牙科诊疗存在的困难如下： 1，小孩子哭哭啼啼，不肯配合治疗，很累！ 2，儿童牙科的治疗低廉，不赚钱，家长又不理解，很累！ 3，儿童牙病的治疗方法手段落后，远期效果不好，易反复，做得医生没信心！ 4，很多院校将《儿童口腔病学》课程设置为选修科。老师学生都不够重视！ 以上原因导致临床全科口腔医生，不爱做，不愿做，开展儿童牙科的治疗工作困难重重！ 我们是不发达国家，很多条件都不够好，儿童牙科的春天在哪里呀？ 我认为：办法总比困难多！ [ft=rgb(68, 68, 68),1,]210例乳牙牙病治疗失败的统计表 请记住一个电话号码！45788 这是我当年老师叫我记住的一个数字。这个是乳牙A--E牙根开始吸收的时间，很顺口，用于判断乳牙牙根吸收的时间，结合乳恒牙正常替换时间和次序，正确选择对乳牙的治疗时机和手段。举例子，下颌乳牙D牙根开始吸收的时间是7周岁，今年患者为10周岁半，牙根吸收得差不多了！ 根据国内国外的资料表明： 1，乳牙龋病，深龋的保髓不容易成功。 2,乳牙的盖髓术不易成功，更不能在在盖髓后直接充填，而是应该根据情况，用活髓切断术，干髓术，或是去髓术，比较好。 在实践中正确操作小孩子的干髓术! A,注意开髓治疗时候防止底穿！ B，乳牙失活剂理论上使用金属砷。我平时使用第四军医大的多聚甲醛乳牙失活剂。对于快砷，我是非常反对的。（进口的梅卡能有的话，当然是最好不过了！）封乳牙失活可以根据情况用暂封王，有反应的时候，交一把一次性的探针给家长，教家长怎么挖掉。 C，要认真按医疗常规做常规的冲洗，封药时间可以长点！ D，失活后的乳牙，应先去冠髓，尽量抽去大部分根髓。用浓度高的干髓糊剂做小孩子干髓剂。将干髓剂压入根管口内，垫底充填。 补充说明下， 很多人对于成人干髓术或是小孩干髓术的去除冠髓的操作存在疑问。并不是大家想象的那样的用拔髓针去拔，拔后牙髓的断面糟碎，不整齐。我这次利用去医科大读书的机会，专门咨询了医大的口内科老师。正确的做法：准备几把锋利的消毒无菌的小锐挖匙伸向根管口内少许！像割水稻一样，整齐刮去冠髓！千万避免在髓室底用钻针。主要是因为髓室底很薄，很容易底穿！ 书本上或许会介绍一些比如活髓切断术等一些做法。很多专家的意见是，在理论上可行，在临床上却不易取得成功。难点在于操作，难于正确判断牙髓的状况和活力情况。不好选择适应症。
口腔执业医师考试儿童口腔医学复习要点：乳牙牙髓病的治疗方法
乳牙牙髓病的治疗方法 （一）盖髓术 用药物覆盖于近髓的牙本质上或露髓的牙髓创面上，使牙髓病变恢复的保存全部生活牙髓的治疗方法，前者为间接盖髓术，后者为直接盖髓术。氢氧化钙及其制剂是目前首选的盖髓剂。 1、间接盖髓术 （1）适应症：深龋近髓或外伤牙冠折断近髓无明显牙髓炎症症状，或症状轻微的轻度牙髓充血的患牙。 （2）治疗步骤：去龋——盖髓——垫底、充填——4～6周后无症状可改为永久充填。 2、直接盖髓术 （1）适应症：意外露髓，露髓孔直径小于1mm或外伤冠折新鲜露髓的患牙。 （2）治疗步骤：隔湿——消毒——盖髓——充填。 （二）牙髓切断术 有活髓断髓术和失活后断髓术（干髓术）。 乳牙的活髓断髓，依据所用药物分为活髓切断术（断髓术）和FC断髓术/戊二醛断髓术（半失活牙髓切断术）两种类型。 1.活髓切断术 （1）适应症：深龋、部分冠髓牙髓炎和前牙外伤性冠折牙髓外露。 （2）术前准备：器械、药品。术前X片了解根尖周组织及牙根吸收情况，牙根吸收超过根长1/2，不宜作牙髓切断术。 （3）治疗步骤：麻醉——备洞——切断冠髓——盖髓（盖髓剂厚约1mm）——垫底、充填FC断髓术：切除冠髓后，含丁香油、FC的棉球置于断髓面2～3分钟，再将FC糊剂覆盖于牙髓断面上，垫底，充填。 2.干髓术 （1）适应症：乳磨牙牙髓炎 （2）术前准备：常规器械、失活剂（多聚甲醛失活剂、金属砷失活剂）和干髓剂等。（3）治疗步骤 1）第一次治疗：牙髓失活。 2）第二次治疗：干髓充填。 （4）注意事项：失活时不宜选用亚砷酸失活剂，多聚甲醛失活剂作用温和，使用安全，失活效果好，适宜于乳牙失活。 （三）牙髓摘除术 在局麻下或牙髓失活后，摘除全部牙髓，预备根管，用能被吸收的根管充填材料充填根管，保留患牙。 （1）适应症：牙髓炎症涉及根髓，不宜行牙髓切断术之患牙。 （2）术前准备：常规器械、药品；X线片。 （3）治疗步骤：麻醉——备洞——摘除牙髓、预备根管——充填根管