测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

香草醛法测定原花青素的含量

说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。

一、器材/试剂

紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平

儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。

二、实验步骤

1.配制试剂

( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液；

( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％；

( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。

（4）样品溶液：原花青素溶液

以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。

2、扫描最大吸收波长

取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。

3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度）

浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095

A（儿茶

素）

0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175

A（儿茶

素）

0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245

A（儿茶

素）

测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。

注：实验须重复4次，

紫外分光光度法测定蛋白质含量

上海百贺仪器科技有限公司提供ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 紫外分光光度法测定蛋白质含量 摘要： 考马斯亮兰G250与蛋白质结合，在0－1000ug/ml范围内，于波长595nm 处的吸光度与蛋白质含量成正比，可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250 与蛋白质结合迅速，结合产物在室温下10分钟内较为稳定，是一种较好的蛋白 质定量测定方法。 1.实验部分 1.1仪器与试剂： Labtech UV POWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250； 牛血清蛋白；超纯水。 1.2试液的制备： 牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml 容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。 考马斯亮兰G250试剂称取100mg考马斯亮兰G250，溶于50ml95％的乙 醇后，加入120ml85％的磷酸，用水稀释至1升。 2.结果与讨论 2.1校正曲线的绘制 准确吸取1000ug/ml牛血清蛋白标准溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml 分别加入到6只10ml试管中，然后用超纯水补充到0.1ml，各试管分别加入5ml 考马斯亮兰G250试剂，混合均匀后，即可依次在595nm处测定吸光度。以浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标绘制校正曲线如下图，校正曲线方程为 A=0.613556C+0.001008，R=0.9994。

上海百贺仪器科技有限公司ｗｗｗ．ｓｏｕｔｈｈｋ．ｃｎ 2.2精密度 配制0.6mg/ml牛血清蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的 相对标准偏差。 表1精密度测定结果 次数123456RSD% A0.26260.26220.26200.26280.26290.26260.13 2.3稳定性 取1mg/ml牛血清蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化 如下表2。 表2稳定度测定结果 时间（min）A1A2A3A平均 00.55110.55230.55160.5517 100.52040.51840.51680.5185 200.49100.49010.49030.4905 300.47650.47160.47210.4734 400.45240.44750.44400.4480 500.39820.39350.40310.3983 3.结论 该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定 的紫外分光光度法。

红米原花青素的测定方法

红米原花青素的提取及测定方法 1、标准曲线的配置 标准溶液的配制，用甲醇配制原花青素母液2mg/mL 标准液配制： 母液：2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 7ml 8ml 甲醇：8ml 7ml 6ml 5ml 4ml 3ml 2ml 2、试剂 试剂a：10g/L香草醛甲醇溶液，10g香草醛溶于1L甲醇溶液 试剂b：245ml浓硫酸（18.4mol/L）溶于500ml甲醇溶液，并用甲醇定容直1L。 3、提取方法 将红米磨粉后称0.5g，放入15ml试管中，加入8ml的80%甲醇溶液，至于黑暗的地方，每隔2h左右振荡一次，一直浸泡提取8小时。 4、测定方法 吸取1ml提取液或标准液，加入10ml离心管中，然后依次加入2.5ml试剂a和2.5ml试剂b，混匀后35℃下水浴20min，水浴结束后

8000rm离心10min，用移液器取上清液测定其在500nm下的吸光值。 5、参考文献： 1、Sun B, Ricardo-da-Silva JM, Spranger I Critical Factors of Vanillin Assay for Catechins and Proanthocyanidins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46: 4267-4274 2、Gunaratne A, Wu K, Li D, et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins. Food Chemistry, 2013, 138: 1153-1161

紫外-可见分光光度法测定有色溶液 (2)

紫外-可见分光光度法测有色溶液最大吸收波波长 一、实验目的 1.学习紫外-可见分光光度法的原理； 2.掌握紫外-可见分光光度法测定的实验技术； 3.了解掌握U-3010型紫外-可见分光光度仪的构造及使用方法。 二、实验原理 1.紫外-可见吸收光谱法(称紫外-可见分光光度法)以溶液中物质的分子或离 子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析法。根据最大吸收波长可做定性分析；根据朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）可做定量分析。紫外-可见分光光度法定性分析原理：根据吸收曲线中吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状进行定性分析。 2.紫外-可见分光光度法定量分析原理，根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入 射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 3.仪器由五个部分组成：即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装 置。 三、仪器与试剂 日立U-3010型紫外-可见分光光度仪；吸量管；乙醇；待测溶液；烧杯等。 四、实验步骤 1.接通电源，启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器，预 热半小时。 2.在工作接口上选择测量项目为光谱扫描，设置扫描参数（起点：650nm，终 点：250nm，速度：中，间隔：1.0nm，单次扫描） 3.将两个均装有无水乙醇的1cm石英比色皿放入测量池中，进行基线扫描。 4.基线做好后，按下面的顺序进行操作：做Baseline→换样（换上待测样品置 于Sample池）→进入Analysis Method对相关的参数进行设定→Sample命名→Ready→Measure进行测量，寻找待测溶液的最大吸收波长，再在最大吸收波长处分别测定待测溶液的吸光度。

原花青素的含量正丁醇测定方法

原花青素含量 1.材料和仪器 主要试剂：提取液，原花青素标样，盐酸正丁醇溶液、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。 主要仪器：UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。 溶液配制： 2％NH4Fe(SO4)2 称取3.66g七水合硫酸亚铁固体，溶于100ml水中后即得 95%乙醇移取5ml的蒸馏水至100ml容量瓶中用无水乙醇定容 盐酸正丁醇移5ml浓HCL 至100ml容量瓶正丁醇定容 2.实验步骤 a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.010g，用95% 乙醇溶 解并定容于10mL 容量瓶中，所得浓度为1mg/mL 作标样。吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中，加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇（5:95）溶液，盖塞，摇匀，于微沸的水浴中加热反应40min 取出，于冷水中迅速冷却，溶液显红色，以0mL 溶液作为空白对照，于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。 结果见表 取得标样体 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 积（/ml） 对应标样浓 度（mg/ml) 测的吸光度 值A b.样品测定 分别精确吸取10mL 样品，用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中，按标准曲线制作项下的操作步骤，依次分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液。根据标准曲线计算出结果，按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。

葡萄籽原花青素液相检测方法

原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案 一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。 二．实验方案： 1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)： 2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法） (1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、 1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1ml 测定。 (2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。 (3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃; 检测器:紫外检测器,检测波长525nm 流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。 3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品 色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm； 流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈； 流量：1ml /min； 进样量：5μl; 柱温：30℃； 检测波长：280nm. 洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液) 0 ～5 % ，10min； 5%～20%，10～20min； 20%～40%，20～40min； 40%～50%，40～50min； 50%～5%，45～50min； 5%～0，50～60min。 稳定液配制：取0.5g 抗坏血酸置于1L 容量瓶中，加约500mL 双蒸水，混合，溶解 抗坏血酸。加入100mL 乙腈，用双蒸水稀释至刻度。标准品溶液液的配制与稀释均使 用稳定液做溶剂。

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量

6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1) 2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2) (nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret法） （一）实验原理 双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1. 试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正

花青素含量测定

花青素含量测定 实验目的：掌握花青素含量测定的简单方法。 实验原理：花青素又称花色素，是苯并吡喃衍生物，属于多酚类化合物，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，也是树木叶片中的主要呈色物质，在植物细胞液泡不同的pH 条件下，呈现不同的颜色。大量研究表明：花色苷具有很强的抗氧化作用，可以清除体内的自由基；降低氧化酶的活性；可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平，改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢；抑制胆固醇吸收，降低低密度脂蛋白胆固醇含量；抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。苹果花青素主要存在于果皮中，是果皮颜色形成的重要物质。苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成，同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成，分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响，特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率，因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段，其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 ％～98％J。 器材与试剂： 实验仪器:分光光度计，电子天平，恒温箱，剪刀，烧杯，量筒，移液管 实验试剂：0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇，蒸馏水 实验材料：苹果 实验内容： 1、作标准曲线：采用l ％盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液，浓度分别为100、20．0、10．0、5．0、2．5、1．0 ~g／m L 。用分光光度计测出OD值（波长530nm），计算出标准曲线。 2、选2个苹果，把苹果皮削出，称取5g的果皮加入10m L l ％盐酸甲醇溶液匀浆，在40 ℃下提取1h，离心后取上清液在波长530nm测出OD值。 3、计算出苹果中花青素的含量。

原花青素基本信息

原花青素 1外观 葡萄籽原花青素提取物外观一般为深玫瑰红至浅棕红色精制粉末，低聚物无色至 浅棕色，但因为葡萄籽种类、来源不同，所以在外观、色泽上都存在一定的差异。 2鞣性 原花青素能与蛋白质发生结合。一般情况下，结合是可逆的。原花青素一一蛋白 质结合反应是其最具特征性的反应之一。 3溶解性 低聚原花青素易溶于水、醇、酮、冰醋酸、乙酸乙酷等极性溶剂，不溶于石油醚、 氯仿、苯等弱极性溶剂中。高聚原花青素不溶于热水但溶于醇或亚硫酸盐水溶液， 这一点相当于水不溶性单宁，习惯上称为“红粉”。聚合度更大的聚合原花青素不 溶于中性溶剂，但溶于碱性溶液，习惯上又称为“酚酸”。 4紫外吸收特性 葡萄籽提取物原花青素水溶液的紫外最大吸收波长为278nm。因其分子中所含的 苯环结构，在紫外光区有很强的吸收。可起到“紫外光过滤器”的作用，在化妆品 中可开发研制防晒剂。 图1为原花青素分子结构

现在发现多种植物中含有原花青素，被提取的植物包括葡萄、英国山楂、花生、银杏、日本罗汉柏、北美崖柏、蓝莓和黑豆等。葡萄籽是葡萄酿酒的主要副产品，且它在葡萄皮渣中占65%，其多酚类物质含量可达5%～8%，在这些多酚物质中，原花青素含量最高，可达80%～85%。花青素广泛存在于各种植物的核、皮或种籽等部 位。 图2为原花青素常见来源植物蓝莓。

1.1提取 目前，普遍采用的工艺是先脱脂的方法包括压榨法、溶剂法、超临界CO2萃取 法，其中，超临界CO2萃取法最佳，不仅油脂提取率高，而且对原花青素的破 坏作用最小，质量较好。 1.2分离 纯化原花青素单体物质通常采用柱色谱进行分离，其中，聚酰胺、SephadexLH-20 和ToyopealHW-40是最有效的填料。对于较难分离或需要量较小的化合物，可 用半制备反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和正相高效液相色谱法(NP-HPLC)制 备。随聚合度的增加，原花青素的同分异构体数目呈几何级数递增，分离纯化这 类大分子的单体物质非常困难。对于多聚体，可将其按分子量(聚合度)大小分段。 目前，已建立起来的分级方法有溶剂沉淀法和多种色谱法，如薄层色谱法、正相 高效液相色谱、凝胶排阻色谱、逆流色谱法等。 2.生物合成法 由硼氢化钠作为还原剂还原(2R，3R)-二氢-3′，4′，3，5，7-五羟黄烷的主要产物 是白矢车菊素(Leucocyanidin)的2，3-反-3，4-反异构体，而酶的还原产物是2， 3-反-3，4-顺异构体。在微酸的条件下，3，4-反异构体可能部分地转化为3，4- 顺异构体。3，4-顺异构体相对于3，4-反异构体较偏酸性，并且易于同硫醇和二 醇还原酶反应。酶合成要求的条件比较苛刻，同时也存在一个顺反异构体的问题， 目前，此法还不太成熟。 药理活性 1.抗氧化活性 原花青素具有极强的抗氧化活性，是迄今为止人类所发现的最强、最有效的自由 基清除剂之一，尤其是其体活性，原花青素的抗氧化活性呈现剂量-效应关系，但 如果超出一定的浓度，其抗氧化活性将随着浓度的升高而降低。 抗氧化特点及机理：①有效地清除超氧阴离子自由基和羟基自由基等，也可中断 自由基链式反应；②参与磷脂、花生四烯酸的新代和蛋白质磷酸化，保护脂质不 发生过氧化损伤；③为强有力的金属螯合剂，可螯合金属离子，在体形成惰性化 合物；④保护和稳定维生素C，有助于维生素C的吸收。 2.抗肿瘤活性 原花青素对于多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤作用，对于多种致癌剂在启动及促 癌阶段都具有显著的抑制作用。原花青素能抑制癌细胞生长及诱导细胞凋亡。此 外，对于肝癌、前列腺癌、皮肤癌等，均表现出较好的抗癌活性，随着研究的深 入，原花青素将会在癌症的预防和治疗中发挥更大的作用，为癌症的治疗带来福 音。 3.抗炎、抗过敏、抗水肿活性 原花青素可降低由炎性介质组胺、缓激肽等引起的毛细血管通透性增高，减少毛 细血管壁的脆性，使毛细血管的力和通透性减小，保护毛细血管的物质转运能力， 从而起到抗炎的活性。此外，原花青素还可抑制组胺脱羧酶的活性，限制透明质 酸酶的作用，对各种关节炎及胃、十二指肠溃疡效果显著。 4.其它 原花青素还具有免疫调节活性、抗辐射作用、抗突变、抗腹泻、抗菌抗病毒、抗 龋齿、改善视觉功能、预防老年性痴呆、治疗运动损伤等功效。 保护心血管作用 1.抗心肌缺血再灌注损伤

紫外可见分光光度法含量测定

【含量测定】照紫外-可见分光光度法(附录V A)测定。 1.仪器与测定条件：室温：____℃相对湿度：____% 分析天平编号：；水浴锅编号：； 紫外可见分光光度计编号：； 2.对照品溶液的制备： 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含_______mg的溶液，即得。 3. 供试品溶液的制备： 取本品粉末(过三号筛)约______g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时。加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液洗涤药渣2～3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇(4：1)混合溶液至刻度，摇匀,即得。 4.标准曲线的制备： 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml、再精密加0.05％溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol／L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，密塞，剧烈振摇，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白。 5.测定法： 照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA），在nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含西贝母碱的重量，计算，即得。 6.结果与计算 6.1 标准曲线制备：

对照品批号 纯 度 S 对照品来源 干燥条件 对照品称重W 对(mg) 各浓度点稀释倍数f 对 溶液浓度C 对(ug/ml) 吸光度A 对 线性回归方程 A=( )C ＋/-（ ） r ＝（ ） 计算公式： W S C f ?= 对对对 C 对= 6.2 样品测定： 水分Q 取样量W 样（g ） 样品稀释倍数f 样 样品吸光度A 样 样品平均吸光度A 样 浓度C(ug/ml) 含量X （%） 平均含量X （%） 计算公式：() %100Q 110W f C X 6 ?-???= 样样 样 X 1= X 2= 7.本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱(C 27H 43NO 3)计，不得少于0.050％。 结果: 规定 检验人： 检验日期： 复核人： 复核日期:

测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

香草醛法测定原花青素的含量 说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。 一、器材/试剂 紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平 儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。 二、实验步骤 1.配制试剂 ( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液； ( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％； ( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。 （4）样品溶液：原花青素溶液

以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。 2、扫描最大吸收波长 取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。 3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度） 浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095 A（儿茶 素） 0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175 A（儿茶 素） 0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245 A（儿茶 素） 测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。 注：实验须重复4次，

紫外分光光度法测定未知物

紫外分光光度法测定未知物 1.仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个 1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个 1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支 1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支 2.试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 3.实验操作 3.1比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。。。。 3.3未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。 推荐方法 3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于

植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书 微量法

植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC1355 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。 试剂一：11%盐酸8mL，自备,4℃保存。即2.4mL盐酸溶于5.6mL蒸馏水 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加8mL提取液溶解。 工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。 标准品：粉剂×1支，10mg原花青素。 产品说明： 原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。 在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。 自备实验用品及仪器： 天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、11%盐酸和60%乙醇。操作步骤： 一、OPC提取: 将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，提取，30min，12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。 二、测定操作表:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2、用提取液将原花青素配制成10mg/mL标准液，用提取液梯度稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、 0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL的标准溶液。 3、操作表 对照管测定管标准管空白管样本（μL）4040 标准溶液（mg/mL）40 工作液（μL）160160160 H O（μL）16040 2 混匀，30℃水浴30min，立即于微量石英比色皿/96孔板中检测500nm处吸光值，计算?A测定=A测定管-A对照管，?A标准=A标准管-A空白管。空白管只需做一管 三、OPC计算公式: 1、标准曲线的绘制 以?A标准为y轴，标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。 2、OPC的计算 将?A测定带入方程，得到x（mg/mL） （1）按样本鲜重计算 OPC含量（mg/g鲜重）=x×V提取÷W=x÷W。 （2）按样本蛋白浓度计算 OPC含量（mg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。 注意事项： 1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。 2、吸光度变化应该控制在0.006-1.2之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释 倍数要相应改变。

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验报告.docx

紫外分光光度法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.学习紫外光度法测定蛋白质含量的原理； 2.掌握紫外分光光度法测蛋白质含量的实验技术。 二、实验原理 1.测蛋白质含量的方法主要有：①测参数法：折射率、相对密度、紫外吸收等；②基于化学反应:定氮法、双缩脲法、Folin―酚试剂法等。本实验采用紫外分光光度法。 2.蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环中含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280nm附近（不同蛋白质略有不同）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。 利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。 三、仪器与试剂 TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液3.00mg·mL-1、0.9%NaCl 溶液、试样蛋白质溶液。 10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。 四、实验步骤 1.绘制吸收曲线 用吸量管吸取2mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。 2.绘制标准曲线 用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL3.00mg·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。 3.样品测定 取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度（1.363），估算浓度为2.0960 mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍（即取2mL试液，用0.9%NaCl 溶液稀释至刻度，摇匀），估算浓度为0.4192 mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析

原花青素含量检测的概述

原花青素含量检测的概述 【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。 【关键词】原花青素；检测；含量 原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。 1.可见分光光度法[2] 原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。 1.1 Porter法（Bate-smith法） 又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。 在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。 随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。 1.2香草醛-强酸法 常用的酸有盐酸和硫酸，目前的观点认为浓H2SO4更合适，可以提高吸光度值和灵敏性，褪色也较慢[6]。

实验一 紫外分光光度法测定苯甲酸

实验一紫外分光光度法测定苯甲酸 一、实验目的 学习、了解紫外分光光度法原理 了解紫外分光光度计的结构和使用方法 二、实验原理 当辐射能（光）通过吸光物质时，物质的分子对辐射能选择性的吸收而得到的光谱称为分子吸收光谱。分子吸收光谱的产生与物质的分子结构、物质所在状态、溶剂和溶液的PH等因素有关。分子吸收光谱的强度与吸光物质的浓度有关。表示物质对光的吸收程度，通常采用“吸光度”这一概念来量度。 根据朗伯－比尔定律，在一定的条件下，吸光物质的吸光度A 与该物质的浓度C和液层厚度成正比。即A＝ LC 因此，只要选择一定的波长测定溶液的吸光度，即可求出该溶液浓度，这就是紫外－可见分光光度计的基本原理。 在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长为225nm。因此，采用紫外分光光度计测定苯甲酸在225nm处的吸收度就能进行定量分析。 三、仪器与主要试剂 TU-1810紫外可见分光光度计1cm石英比色皿 0.1M氢氧化钠溶液 苯甲酸(AR) 四、实验步骤 1、苯甲酸标准溶液的制备 称取苯甲酸(105℃烘干)100mg,用0.1M氢氧化钠溶液100ml溶解后,转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度.此溶液1ml含0.1mg 苯甲酸. 2、制作苯甲酸吸收曲线,选择最大吸收波长 ①移取苯甲酸标准溶液4.00ml于50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠溶液定容,摇匀,此溶液1ml含苯甲酸8ug. 以氘灯为光源,用0.01M氢氧化钠溶液作为参比,改变测量波长(从210-240nm)测量8ug/ml苯甲酸的吸光度. ②以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制苯甲酸的紫外吸收曲线,并找出最大的吸收波长 (是否是225nm). 3﹑样品的测定 ①取10.00ml苯甲酸样品,放入50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠

保健食品检验与评价技术规范》2003版中“保健食品中原花青素的测定

花青素的测定 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中“保健食品中原花青素的测定 原花青素含量测定方法 1、 原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过 用 热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素 在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 硫酸铁铵 NH4Fe(S04)2?12HO 溶液：用浓度2mmol/l 盐酸配成2%(w/v)的 溶液。 4.1.1 片剂 取 20 片试样，研磨成粉状。 4.1.2 胶囊 挤出 20 粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内 容物尽可能挤出。 4.1.3 口服液 摇匀后取样。 4.2 提取 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中 保健食品中原 2.1 甲醇 分析纯 2.2 正丁醇 分析纯 2.3 盐酸 分析纯 2 、 试剂 2.4 2.5 原花青素标准品 葡萄籽提取物，纯度 95% 3、 仪器 3.1 分光光度计 3.2 回流装置 4、 分析步骤 4.1 试样的制备

421粉状试样称取50-100mg试样置于50ml容量瓶中，加入30ml甲醇，超声处理20min,放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。 4.2.2含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将 原花青素洗入50ml 容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量试样(取样量不超过1ml)置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。 4.3 测定 4.3.1标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液 0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各 取1ml 测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5 的体积比混合后，取出6ml 置于具塞 锥瓶中，再加入0.2ml硫酸铁铵溶液和1ml试样溶液，混匀，置沸水浴回流, 精确加热40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于546nm波长处测 吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在 1 小时内稳定。5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按(1) 式计算 5.1 计算: m1x v x 1000 m x 1000x 1000 式中:X —试样中原花青素的百分含量，g/100g; m1—反应混合物中原花青素的量，ug; v—待测样液的总体积，ml; m—试样的质量，mg 5.2 结果表示

原花青素(OPC)知识解析讲解(一)

原花青素（OPC）知识解析讲解（一） 1956年，英国的哈曼博士（Denham Harmam M.D.，Ph.D）提出了著名的《自由基衰老理论》。理论中，哈曼博士详细介绍了人类衰老和生病的原因：人体内氧化过程会释放一种活泼的有害物质--自由基，它带有一个不成对电子，在体内肆意掠夺其它分子的电子，破坏了细胞、DNA、RNA和蛋白质的结构，使体内细胞、组织、脏器的功能降低、而且不能被再修复，人体免疫系统功能下降，导致各种疾病的发生、甚至死亡。 自由基理论在国际上享有盛誉。细菌、病毒通过侵入感染人体而导致疾病，自由基是通过对各种细胞的氧化损伤导致人体器官和组织功能下降，进而引起疾病与衰老。医学界和抗衰老领域称自由基是“百病之源”，人类衰、老、亡的“元凶”。因此从根源上寻找清除人体自由基的物质--抗氧化剂，是目前医学界和抗衰老研究领域的研究的重要问题，也是人类长命百岁愿望实现的关键。 随着人们对自由基认识的不断深入，具有清除自由基功能的抗氧化产品越来越受到人们的重视，各种各样的抗氧化产品相继问世，如维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、超氧化物歧化酶（SOD）、以及微量元素产品如硒、锗等。经过多年的市场检验、比较以及科学家们的反复论证，从安全性、质量稳定性、抗氧化活性能力、资源、食品要求等因素综合分析，结论是原花青素(OPC)是最值得推广应用的产品。 在欧美等发达国家，以原花青素(OPC)为主要原料的化妆品、膳食补充剂已经被广泛应用多年，人们每天补充或者使用原花青素 (OPC)产品已经形成一种良好的生活习惯，就如同每天补充维生素一样。与注重疾病预防为主的西方健康观念相比较，其实从古代我国就有‘是故圣人不治已病治未病，不治已乱治未乱，此之谓也’的名言。注意加强日常身体锻炼和养护，提前预防衰老以及各种慢性病变的发生，对于降低疾病造成的身心痛苦、家庭负担、提高生活质量有着重要的现实意义。 原花青素（原花青素(OPC):Oligomeric Proanthocyanidins，）属于植物多酚类物质，是一种强力抗氧化剂，能够清除我们身体内部的氧自由基。原花青素(OPC)只存在于自然界部分植物中，而且

葡萄籽原花青素含量检测方法

杭州尼诺生物科技有限公司 葡萄籽原花青素 一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。 二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。 三责任者：QC检验员。 四原理： 原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。 五试剂和对照品： 甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯） 盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯） 葡萄籽对照品（公司自制） 六试剂配制及溶液配制： 1 试剂配制： 50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。 盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。 硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。 2 溶液配制： 对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。 供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。七测定步骤： 在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。加塞，振荡混匀。于98。C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。 在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。 八计算： 此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下： 原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2） 式中： A1 为供试品吸收度 A2 为对照液吸收度 M1 为供试品称样量 M2 为对照品称样量 V1 为供试品最终体积V A-V B V2 为对照品液最终体积 K 为对照品的含量

紫外分光光度法检测规程

紫外分光光度法检测规程 目的： 5. 程序： 5.1. 定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的特定 波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的 方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。 5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。 5.2. 原理：物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产 生的， 因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为： A=lg 1 =ECL T 式中：A 为吸收度 T 为透光率 E 为吸收系数 C 为溶液浓度 L 为光路长度 如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％ １ｃｍ 表示。若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。