EcoR I

Product name/Description: EcoR I

Cat. #: 1040A

Lot #: K2701AA

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Package Size:10000 U

Package Contents: 1. EcoR I15 U/μl10 KU

2. 10X H Buffer10X 1 ml

3. 10X Loading Buffer10X 1 ml

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Escherichia coli RY 13

Source:

Quality Control Data:

Overdigestion test:

Nonspecific nuclease activity was not detected after incubating 1 μg of λDNA with 12 units of this

enzyme in 50 μl of the supplied buffer overnight at 37°C, as assessed by agarose gel

electrophoresis.

Ligation-Recutting test:

After 10-fold overdigestion with this enzyme, the DNA fragments could be ligated with T4 DNA

ligase and recut with this enzyme.

Ligation: 100% , Recutting: 100%

pKF3 Enforcement Cloning test:

An Enforcement Cloning Vector, pKF3, was completely digested using 10-fold excess amount of

this enzyme, ligated, and subsequently transferred into TH2 Competent Cells. The percentage of

transformants that contained damaged rpsL genes caused by contaminants in this enzyme or ligase

was less than 2.0%.

It is certified that this product meets above specifications.

Manager, Quality Assurance

TAKARA BIO INC.

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Please refer to our website for safety information :

https://www.wendangku.net/doc/60571145.html,

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This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.

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0i系统

1．1 内置I/O 板，当不再连接其它模块时 可设置如下：从X0开始0.0.1.OC02I Y0开始0.0.1./8 1．2．当使用标准机床面板时，手轮有两种接法 （1）接在系统上JA3 可设置如下：系统侧的I/O点从X0开始0.0.1.OC02I Y0开始0.0.1./8 面板侧的I/O点从X20开始 1.0.1. OC02I（或OC01I） Y24开始 1.0.1./8

＊此种设法可使面板上x/y数值上一样（X24对应Y24的信号名称，如此类推，如：X24.0为MEM 方式的X地址，Y24.0为MEM方式输出灯），便于编写梯形图，且注意此时面板后JA3无效 （2）接在面板后JA3 可设置如下：系统侧的I/O点从X0开始0.0.1.OC01I Y0开始0.0.1./8 面板侧的I/O点从X20开始1.0.1. OC02I (OC02I对应手轮) Y24开始1.0.1./8

1．3 分线盘I/O 模块的设定 对于分线盘（分散型）I/O 模块，要将所有的模块（基本模块加扩展模块）作为一个整体一起 设定。因为可以连接一个基本模块，最多3个扩展模块，每个模块单元占用3个字节的输入点，2个字节输出点，总共占用12字节输入/8字节输出（96/64点），和上述的内装I/O 相似，也可以连接手轮，设定方法相似 可设置如下：不带手轮 输入X0开始 0.0.1.OC01I 输出 Y0开始 0.0.1./8 带手轮：输入X0开始 1.0.1. OC02I (OC02I 对应手轮) Y0开始 1.0.1./8

下面图中的地址m就是此处的０,n就是此处的０（首地址） ＊模块的连接顺序（安装位置） 接手轮 注意：１。带手轮接口的扩展模块，要安装在最靠近基本模块的位置，如上图中的扩展模块１。 ２．手轮信号为X12-X14。

常用限制性内切酶酶切位点保护残基

酶切位点保护碱基-PCR引物设计用于限制性内切酶 发布: 2010-05-24 20:19| 来源:生物吧| 编辑:刘浩| 查看: 161 次 本文给出了分子克隆中常用限制性内切酶的保护碱基序列，如AccI，AflIII，AscI，AvaI，BamHI，BglII，BssHII，BstEII，BstXI，ClaI，EcoRI，HaeIII，HindIII，KpnI，MluI，NcoI，NdeI，NheI，NotI，NsiI，PacI，PmeI，PstI，PvuI，SacI，SacII，SalI，ScaI，SmaI，SpeI，SphI，StuI，XbaI，XhoI，XmaI， 为什么要添加保护碱基？ 在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。 其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相临的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边的酶切位点切割。 该如何添加保护碱基？ 添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的。 添加什么保护碱基，如果严格点，是根据两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量。如果某条引物Tm值偏小，GC%较低，添加时多加G或C，反之亦反。 为了解不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求，NEB采用了一系列含识别序列的短双链寡核苷酸作为酶切底物进行实验。实验结果对于确定双酶切顺序将会有帮助（比如在多接头上切割位点很接近时），或者当切割位点靠近DNA末端时也很有用。在本表中没有列出的酶，则通常需在识别位点两端至少加上6个保护碱基，以确保酶切反应的进行。 实验方法：用γ-[32P]ATP在T4多聚核苷酸激酶的作用下标记0.1A260单位的寡核苷酸。取1μg已标记了的寡核苷酸与20单位的内切酶，在20°C条件下分别反应2小时和20小时。反应缓冲液含70mM Tris-HCl (pH 7.6), 10 mM MgCl2, 5 mMDTT及适量的NaCl或KCl（视酶的具体要求而定）。20%的PAGE（7M尿素）凝胶电泳分析，经放射自显影确定酶切百分率。 本实验采用自连接的寡核苷酸作为对照。若底物有较长的回文结构，切割效率则可能因为出现发夹结构而降低。

0i系统连接

0i-C 系统结构及硬件连接 目前北京FANUC 出厂的0iC/0i-Mate-C 包括加工中心/铣床用的0IMC/0i-Mate-MC 和车床用的0iTC/ 0i-Mate-TC ，各系统一般配置如下： 系统型号 用于机床 放大器 电机 ０iMC 加工中心，铣床 αｉ系列的放大器 αｉ，αＩs 系列 ０iC 最多4轴 ０iTC 车床 αｉ系列的放大器 αｉ，αＩs 系列 ０i Mate MC 加工中心，铣床 βｉ系列的放大器 βｉ，　βＩs 系列 0i Mate C 最多3轴 ０i Mate TC 车床 βｉ系列的放大器 βｉ，　βＩs 系列 注意：对于0i Mate-C, 如果没有主轴电机, 伺服放大器是单轴型(SVU), 如果包括主轴电机，放大器是一体型(SVPM)，下面详细介绍基本调试步骤。 1．基本连接图 主轴电机 伺服电机

2．0i-C显示器外形结构 插座号用途 COP10A-1 伺服放大器(FSSB) CA55 MDI CA69 伺服检查板 JD36A RS-232C串口 JD36B RS-232C串口 JA40 模拟输出／高速DI JA44A I/O Link JA41 串行主轴／位置编码器 CP1 DC24V-输入

3．显示器与主板结构 0i-C主板与显示器为一体型，其结构如图： (１)轴控制 卡(２)显示卡(3)CPU卡 （4）电源单元 电源单元的输入为24V直流电，经变压后，在印刷板内部有5V,3.3V,15V三种电压，3.3V为内部CPU使用。

4．把轴卡、显卡、CPU卡拆下来之后，就可看到存储卡和模拟主轴卡。

精子和卵子的形成过程

姓名：谭克强 专业：生物技术 学号：2009211803 比较精子和卵子的形成过程。 答：人体的基本构造是由数以百万亿计的细胞组成的，人类的繁衍同样靠细胞支持。人类具有两种细胞，一种是体细胞，如构成心、肝、肺、肾、肌肉、骨骼等人体器官的都是体细胞，而另一类则生衍后代性细胞。性细胞又叫生殖细胞，在男性，就是精子；女性则为卵子。 精子是在男性睾丸内生成的。其生殖的基础，是由几百万条曲细精管内产生的。曲细精管生精上皮的精原细胞，是生殖的基础。 曲细精管生精上皮的精原细胞经过多次分裂，最后成熟为精子，这个过程也需要一定的时间，一般需要75天左右。 男性青春发育以后，睾丸便拥有延续不断的生精能力。成年男人的睾丸重约10--20克，而平均每克睾丸组织每天可产生约1千万个精子。一般到40岁后，生精能力逐渐减弱。 精原细胞经过前期的染色体复制进入减数第一次分裂，同源染色体分离，变成两个次级级精母细胞，进入减数第二次分裂，类似有丝分裂，着丝体分离，变成4个精细胞，然后变形为4个精子，每个精子之含有体细胞染色体数的一半。

女人的生殖基础是卵子，卵子由卵巢产生，但卵巢常常受多方面的影响。 卵子是由卵巢生卵上皮的原始卵母细胞发育成熟而成。原始卵母细胞和它周围的一层颗粒细胞构成一个原始卵泡，胎儿卵巢内原始卵泡多达二百万个。 但是，这些数量的原始卵泡在出生后大部分退化，到青春期仅仅剩下三万个左右。卵巢的生卵作用是不连续的。一个妇女一生约排出400个卵子，最多也不过500个。 卵原细胞经过前期的染色体复制进入减数第一次分裂，同源染色体分离，变成1个次级卵母细胞和一个集体，一个大一个小，进入减数第二次分裂，类似有丝分裂，着丝体分离，变成4个细胞，由次级卵母细胞分裂的大的为卵细胞，小的和另一个集体分裂成的两个集体构成3个集体，每个卵子之含有体细胞染色体数的一半。

FANUC0i系统操作面板示意图及操作说明

按下此键，则可使用手动脉冲产生器来移动各轴。按下此键，则可依循自动速度倍率，按压各轴的手动控制键来移动各轴。 按下此键，则可依循寸动速率，按压各轴的手动控制键来移动各轴。 按下此键再按压手动控制键任何一键，则该轴会归复原点。 按下此键，则程序欲执行自动运转。 是用于下达或编辑暂时之工作指令，详情请参阅操作手册。 用于传进数据或加工程序用，详细请参阅操作手册”程序输入方式”。 按下此键，进入程序边传边做模式。

按下此键，在自动操作模式下一次只会执行一个单节即停止。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。) 按下此键，程序指示前出现”/ ” 前置符号，则该指令无效。关闭为有效。(详细使用时机，请参阅NC 的操作手册。) 按下此键，M01指令程序停止有效。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。) 按下此键，各轴将受制于NC控制器的”机械锁定功能”而受限制，画面中，各轴的坐标数值变化，实际上却无法移动。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。) 在自动模式下执行程序时，按下此键，三轴移动速度转动为寸动(近给)速度；同时间，程序内所设定的F指令无效。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。) 程序中断，可以原位置重新启动。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。) 按下此键，辅助功能M、S、T指令不执行。(详细使用时机，请参阅NC的操作手册。)

X轴正方向寸动，或快速移动。 X轴反方向寸动，或快速移动。 Y轴正方向寸动,或快速移动。 Y轴反方向寸动，或快速移动。Z轴正方向寸动，或快速移动。 Z轴反方向寸动，或快速移动。 第四轴正方向寸动，或快速移动。第四轴反方向寸动，或快速移动。

抗精子IgG抗体检测试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求中检安泰

抗精子IgG抗体检测试剂盒（胶体金免疫层析法） 适用范围：本试剂盒用于体外定性检测人血清或血浆中的抗精子IgG抗体水平。 1.1产品规格：20人份/盒。 1.2组成： 1.2.1检测卡/条： 1人份/袋×20袋，由样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。 硝酸纤维素膜上检测线包被重组精子抗原、质控线包被羊抗鼠IgG多抗，金标垫上固定胶体金标记的鼠抗人IgG单抗。 1.2.2样本稀释液：3mL/瓶×1瓶，20mM pH7.4 磷酸盐缓冲液。 2.1 物理检查 2.1.1 外观 外观平整，材料附着牢固，内容齐全，试剂无杂质，外包装完整无破损，标签清晰可辨。 2.1.2 样本稀释液净含量 样本稀释液的净含量应不少于3ml。 2.1.3 膜条宽度 膜条宽度应满足3.4～3.8 mm。 2.1.4 液体移行速度 液体移行速度应不低于10mm/min。 2.2 临界值 本试剂盒临界值为抗精子IgG抗体滴度1:12。

检测1份抗精子IgG抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，重复检测20次，检测结果均为阳性反应。 检测1份抗精子IgG抗体滴度为1:16的阴性企业参考品，重复检测20次，检测结果均为阴性反应。 2.3 特异性 检测3份抗精子IgG抗体阴性血清，其中包括抗子宫内膜 IgG抗体阳性血清、抗透明带 IgG抗体阳性血清、抗心磷脂IgG抗体阳性血清各1份，每份阴性血清重复检测3次，检测结果均为阴性反应。 2.4 批间差 抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，检测抗体滴度为1:8的阳性企业参考品，反应结果应显色均一，且均为阳性。抽取三个批次的检测卡/检测条，每个批次20人份，按2.2临界值的检验方法，检测抗体滴度为1:16的阴性企业参考品，反应结果均为阴性。 2.5 稳定性 2.5.1效期末稳定性 在4～30℃下试剂盒有效期为12个月，试剂盒在规定的条件下保存至有效期末，检测结果应符合2.2、2.3各项目要求。 2.5.2热稳定性 将试剂盒在37℃条件下放置20 天，检测结果应符合2.2、2.3各项目要求。

精子是如何进入卵子透明带的

精子是如何进入卵子透明带的？ 伏维阁主发表于 2014-06-16 15:14 从相遇到结合，精子与卵子之间要经历许多复杂的相互作用。在卵子受精之前，精子首先需要与名为“透明带”的卵子外层结构结合，并穿过它进入卵子。但在经过数十年研究之后，这一过程背后的生物学机制仍然悬而未决。而最近，终于有研究者在《细胞生物学期刊》（The Journal of Cell Biology）上发表论文，首次确定了精子究竟依靠结合哪种蛋白质来穿过透明带。 透明带的作用是保护卵子，并在受精卵着床之前保护早期胚胎。透明带的结构似乎非常简单——人类的卵子透明带上共有4种糖蛋白，而小鼠只有3种。但研究者一直不知道精子会与透明带上的哪种糖蛋白结合，不过他们也逐渐把目标锁定在了ZP2和ZP3这两种糖蛋白上。 美国国家糖尿病、消化和肾脏疾病研究所的学者朱利恩?迪恩（Jurrien Dean）和他的同事们打算一探究竟。他们利用基因工程手段让小鼠的卵子表达各种人类和小鼠透明带糖蛋白的组合。研究者发现，如果透明带上没有表达ZP2，小鼠的精子就不会与透明带结合，缺乏ZP2的雌鼠也不会受孕。研究者还发现，如果ZP2蛋白质端点上缺失了某个特殊结构，精子也不会与卵子结合。这一新发现与先前的研究结果一致——过去曾有研究者发现，卵子在受精后会释放出一种酶，切掉那个位于ZP2端点上的特殊结构，阻止其他精子再与透明带结合。

精子（蓝色）与对照组卵子结合（左图），但不会与缺少ZP2糖蛋白的卵子结合（右图）。图片来自：Eurekalert 研究小组还用人类的精子与表达了人类透明带糖蛋白的小鼠卵子进行了测试。结果发现，如果小鼠透明带上携带有人类ZP2，那么人类精子就会与它结合；但如果它上面携带的是人类ZP3蛋白，人类精子就不会结合。这一结果再次验证了ZP2在受精过程中的重要性。（编辑：窗敲雨） 信息来源：Eurekalert-How sperm get into the zona

fanuci系统数控车床的编程与操作

二、 FANUC 0i系统数控车床的编程与操作 2.1 FANUC 0i系统面板的操作 一、FANUC 0i系统面板的结构 FANUC 0i系统面板的结构如图1-19所示。主要分三部分：位于下方的机床控制和操作面板区、位于右上方MDI编辑键盘区、位于左上方的CRT屏幕显示区。 图2.1-1 FANUC 0i车床标准面板 1、机床控制、操作面板按钮 机床控制、操作面板按钮说明见表2.1-1。 表2.1-1机床操作面板按钮说明 钮运行暂停。按“循环启动”恢复运行。

2、MDI编辑键盘区 MDI键盘上各个键的功能见表2.1-2。 表2.1-2 MDI键盘上各个键的功能 软键实现左侧软键实现左侧 中的光标位置。软键实现光标的向上移动；软键 实现光标的向下移动；软键实现光标的向左移动；软键实 实现字符的输入，点击键后再点击字符键，将输入右下角的 字符。例如：点击将在

点击软键后再点击将在光标所处位置处输入 键中的“ 点击软键将在光标所在位置输入 点击软键后再点击将在光标所在位置处输入 3、CRT屏幕显示区 CRT屏幕显示区显示了机床位置界面、程序管理界面、设置参数界面等。 ⑴机床位置界面 在手动或手轮方式下，点击进入坐标位置界面。点击菜单软键[绝对]、菜单软键[相对]、菜单软键[综合]，对应CRT界面将对应相对坐标（如图2.1-2-a）、绝对坐标（如图2.1-2-b）、和综合坐标（如图2.1-2-c ）。 a相对坐标界面 b绝对坐标界面 c综合坐标界面 图2.1-2机床位置界面 ⑵程序管理界面 a 显示程序列表 b 显示当前程序 图2.1-3 程序管理界面 在编辑方式下点击进入程序管理界面，点击菜单软键[LIB]，将列出系统中 所有的程序(如图2.1-3-a所示)，在所列出的程序列表中选择某一程序名，点击将显示该程序（如图2.1-3-b所示）。 ⑶设置参数

限制性内切酶保护碱基表

PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表

ApaI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5'GGGCC^C 3' BamHI（类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^GATCC 3' BglII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^GATCT 3' EcoRI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^AATTC 3' HindIII （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' A^AGCTT 3' KpnI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GGTAC^C 3' NcoI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' C^CATGG 3' NdeI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' CA^TATG 3' NheI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^CTAGC 3' NotI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GC^GGCCGC 3' SacI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GAGCT^C 3' SalI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' G^TCGAC 3' SphI （类型：Type II restriction enzyme ）识别序列：5' GCATG^C 3'

精子卵细胞的形成及受精作用(精)

精子卵细胞的形成及受精作用 开课教师：胡彬 开课班级：高二（5）班 开课时间：2006年12月21日教学目标 知识与技能 1．掌握精子和卵细胞的形成过程； 2．减数分裂和受精作用的意义。 过程与方法 1．通过学习精子和卵的形成过程，进一步掌握减数分裂过程中染色体行为的变化； 2．通过对精子和卵形成过程的比较，提高自身的归纳、总结、比较能力。 情感态度与价值观 通过本节课的学习，明白世界上的每一个人都是一个独立而又唯一的个体，能够健康的来到这个世界是多么的幸运和不容易，要尊重和珍爱自己、他人的生命。 教学重点 精子和卵细胞的形成过程 教具准备 多媒体课件、自制染色体磁性贴 教师结合减数分裂图讲 述精子形成过程，及各分裂 段细胞的名称。

知识介绍：在变形的过程中，精细胞的细胞核集中在精子的头部，部分细胞质集中在精子的颈部和长长的尾部， 教师介绍卵巢是形成卵细胞的场所。卵巢中的卵原细胞，通过减数分裂产生卵细胞。请学生观察书上卵细

学生任务

课后反思 比较满意的地方 1．制作了染色体磁性贴，传统与现代教学技术有机结合。本节课将“减数分裂各时期细胞内染色体行为变化”在学习“精子和卵细胞形成过程”之前作为复习引入。一方面要求学生在练习纸上画出减数分裂各时期细胞内染色体的行为，另一方面由一位学生用磁性贴到黑板上排出，目的是为了检查学生是否掌握好了此内容。通过教学发现磁性贴的好处是便于修改，而用多媒体课件就无法做到这点。 2．利用“受精作用及胎儿在母体内孕育过程”录象来激发学生对生命的感悟，学生对此录象非常感兴趣，课上有的学生说：“生命太奇妙了”，有的说：“人真是太强大了”，有的说：“要珍惜自己的生命”。通过学生谈观后体会，在无形中渗透了生命教育。 3．整节课思路比较清晰，各知识点之间过渡衔接较好。通过设疑—思考—回答、课上画或排染色体行为变化和归纳总结精卵形成过程不同点来落实重点，引导学生积极主动参与到教学中。 不足之处 课堂气氛沉闷。一方面教学内容较难，本人也发现科普类的课简单与生活较贴近，学生总能说出点什么，容易调动气氛。而知识点较复杂的课，课堂气氛总是不尽人意。另一方面由于听课教师、家长太多（整整塞满了一个教室，还有很多老师搬着凳子坐在外面，通过窗户听课），在这样的一个环境中，开课班级学生出现了与平时截然不同的反应，甚至是很奇怪的现象，本来观看录象是本节课的高潮部分，很多班级看到此内容，都会发出感叹忍不住要议论纷纷，而开课的班级学生竟然只是仰着头看，没有发出任何的声音，教室里异常地安静。这又使我发现了两个值得探究的地方，一个是教学内容既然很难，那么教师如何来调动学生的课堂气氛；另一个是我觉得教师应当在开课之前关心学生的心理，因为每次开课我们似乎都只考虑到教师会紧张，而学生呢？其实学生也会很紧张，怕说错了丢教师和自己的面子，所以作为老师应当在开课之前关心一下你的学生，帮助他们减减压，对学生进行适当的心理辅导也是一种生命的教育。最后使学生能够明白：区级公开课不光是在提高教师的专业

抗精子抗体对不孕不育和流产患者的影响

文章编号:1007-4287(2007)10-1370-02 抗精子抗体对不孕不育和流产患者的影响 杨冬梅1,赵丽红2 (首都医科大学附属北京妇产医院检验中心,北京100026) 摘要:目的为探讨抗精子抗体(AsAb)在不孕不育流产中的作用。方法采用快速抗精子抗体ELISA试剂盒检测不孕不育流产患者AsAb。结果在不孕不育患者中As Ab阳性率女性明显高于男性,其中,原发不孕不育患者中男性阳性率为12.59%(34/270),女性检出率29.62%(32/108);继发不育患者中男性阳性率为21.42%(3/14),女性检出率37.5%(6/16);多次流产患者中,男性检出率18.51%(5/27),女性为31.25%(5/16)。与对照组比较(P<0.05),具有显著性差异。结论AsAb检测对不孕不育的诊断具有重要意义。 关键词:不孕不育;抗精子抗体;免疫性 中图分类号:R711.6文献标识码:A Effect of Ant-i sperm Antibodies on Infertile Sterile and M iscarriage Patients YANG Dong-mei,Z HAO Li-hong1(Laboratory o f Beijing Obstetrical and Gynecological Hospital,Capita l University o f Medical Sciences Beijing100026,P.R.China) Abstract:Objective To investigate the effect of ant-i sperm antibodies(AsAb)on infertile sterile and miscarriage patient. Methods We examine infertile sterile and miscarriage patient.s AsAb with the method of fast ant-i sperm an tibody ELISA reagent box.Results Women AsAb.s posi tive rate is obviously higher than men among infertile sterile patient.M en AsAb.s positive rate i s 12.59%(34/270),and women.s is29.62%(32/108)among primary infertile sterile patients,and men.s is21.42%(3/14),while women.s is37.5%(6/16)among secondary infertile sterile patients.Among the patients who have aborted more than one time,men As Ab.s positive rate is19.51%(5/27),and women.s is31.25%(5/16).Compared with contrasting groups,there are signif-i cance differences(P<0.05).C onclusion It is significant to infertile sterile diagnosis to examine AsAb. Key words:infertile sterile;AsAb;i mmuni ty (Chin J Lab Diagn,2007,11:1370) 受精是生育过程中的一个核心环节,免疫性因素影响精卵结合是导致不孕不育的重要方面,抗精子抗体是最常见的免疫因素之一,在男性中,AsAb属于自身抗体,它通过影响精液的质量而降低生育能力。在女性中,AsAb属于异体抗体,是女性免疫不孕的重要原因,为了探讨AsAb在不孕不育中的作用,我们对441例不孕不育流产患者进行相关的检测,现报告如下。 1材料和方法 111对象2005年11月-2006年11月北京妇产医院不孕门诊就诊病人441例,年龄24-40岁,婚两年以上不孕病史,近两年未采取避孕措施,性生活正常,妇科检查正常,丈夫精液正常,对照组为我院产科门诊正常孕检妇女及其配偶。112方法 112.1仪器美国宝特酶标仪 112.2试剂美国Biotrin公司生产的快速抗精抗体ELIS A 试剂盒 112.3方法研究组与对照组均采用清晨空腹静脉血,及时分离血清,-20e冰箱保存,具体操作步骤参照盒内说明进行。 112.4统计处理测定结果采用V2检验。 2结果 表1不孕不育流产患者AsAb测定结果组别 n 男女 阳性数 男女 阳性率(%) 男女 原发不孕270108343212.5929.62 继发不孕14163621.4237.50 多次流产27165518.5131.25 对照组505021 4.0 2.0与女性对照组比较P<0.05,与男性对照组比较P<0.05 3讨论 不孕不育是当前生殖医学研究的一个热点,我国已婚妇女中约有10%-15%不能生育,而相当一部分与免疫因素有关,AsAb产生的主要原因是由于感染、外伤或男方精浆中免疫抑制因子减少,产生的AsAb可活化巨噬细胞破坏配子胚胎而引起不孕及早期流产[1]。AsAb可与精子粘合后活化补体和抗体信赖性细胞毒活性,加重局部炎症,使输精管堵塞加重,我们检测的男性不育患者As Ab阳性率平均约有12. 29%,与王苏梅[2]报告的AsAb致不育占不育患者的10%-30%结果一致。提示精液液化时间长的患者有必要检测AsAb。 AsAb对女性而言,在正常情况下,精浆中存在的免疫抑制物可以抑制对其配偶精子抗原的免疫应答而使女方形成 ) 1370 )Chin J Lab Diagn,October,2007,Vol11,No.10

卵内精子输入法

卵内精子输入法 (ICSI) 什么是卵内精子输入法？ 卵内精子输入法是体外受孕的一种专门形式，用于治疗某些由于男性因素而导致的不孕症。具体做法是将一个精子直接注射到一个成熟的卵子里。 什么时候使用卵内精子输入法？ 大约30%的不孕症是由男性问题所引起的，卵内精子输入法的出现彻底改变了男性不孕症的治疗。在1992年首宗成功的怀孕个案之前，男性不孕的夫妇除了选用捐精之外，并无它计可施。较有可能受惠于卵内精子输入法的包括普通体外授精法效果不佳的夫妇以及有下列情况的男性： 精子輸入之後 精子輸入 卵内精子输入法是怎么做的？ 在能够进行卵内精子输入法之前，我们首先得通过普通的体外受精法取得成熟的卵子。男伴侣的精液在实验室里经过处理，尽量分离出多个健康的、有活力的精子。卵子在实验室里休息了4-6个小时之后，我们会将它们的硬外膜除去，从而鉴定出它们是否成熟，不成熟的卵子不能接受输入。 我们会用一个特殊的仪器将卵子固定，仪器小到它的尖端肉眼几乎看不见。我们再用一根更细小的针（输入针）将一个外表正常的精子吸起，以极高的准确性将针穿过卵子的外壳（透明带）直达卵子的内部。精子被慢慢地注射到卵子里头，针管被拔出来，精子被留在卵子里。 输入后的卵子被放在保温箱里过夜，第二天早上我们会检查看有没有受精的迹象。再过24小时之后我们便能断定有多少受精卵已经分裂，并进一步形成胚胎。并非每个卵子都会受精，也并非每个受精卵都会形成胚胎。跟标准的体外受精法一样，植入多少个胚胎取决于几个因素包括妇女的年龄。如果胚胎看上去健康的话，用剩的胚胎可用于冷藏。 ● 精子形态差 ● 精子活力差 ● 精子数目过低 ● 睾丸或附睾阻塞，妨碍精子的释放。 ● 体内出现抗精子抗体，妨碍精子的正常 功能。 ● 输精管结扎后重新接驳，但不成功，或 接驳后导致精子的数量和质量极低。

抗精子抗体检查时间

抗精子抗体检查时间 【导读】抗精子抗体检查时间没有明确的限制，成年的男性朋友只要觉得自己身体有异样，都可以随时去检查。不过对女性朋友来说，抗精子抗体检查时间最好不要赶在月经期，经期检查会造成不必要的麻烦。 抗精子抗体检查没有明确的时间限制，只要您觉得身体异常，随时都可以去检查，疾病当然是越早发现越早治疗是最好的。 但是女性最好不要在月经期去检查，经期不建议做任何检查，如果非要去的话只会给自己和医生造成不必要的麻烦。 做抗精子抗体检查一定要精确，要坚信“早治早好”，这样才能确保治疗的针对性和有效性。对于不同程度的抗精子抗体，在检查和治疗上也是有区分的；如果男性女性朋友发现有抗精子抗体的异常情况时，一定要去医院做好诊断工作，以免错过最佳的治疗时间，给自身带来伤害。 抗精子抗体检查方法有什么 抗精子抗体是人体出现免疫性不育症的征兆，所以对于抗精子抗体来说，检查血液是比较有效的，因为血液中较容易发现抗精子抗体的因子存在。 此外，男性抗精子抗体检查方法还有睾丸活检、体外细胞检验、免疫鉴定等方法。 睾丸活检就是检查男性睾丸生精功能是否受损，是否因外伤或疾病等影响，造成男性朋友患有无精症、严重少精症等精子精液异常。 体外细胞检验是看精子是否受到其他因素的干扰。由于凝集素、制动因子和精子细胞毒抗体的作用，精子可能会出现凝集、抗体，精子一旦失去了向前运动能力，将无法完成精卵结合，造成不育。 免疫鉴定就是确定免疫球蛋白类型，男性女性都可以采用此检查方法，但免疫球蛋白的类型不同，所选择的治疗方法也会不同。 对于女性患者的抗精子抗体检查，主要是检查女性的生殖道是否有妇科炎症感染，炎症感染是很容易产生抗精子抗体的。 抗精子抗体检查可以看出什么 抗精子抗体检查可以看出患者抗精子抗体是呈阳性、弱阳性还是阴性。通过抗精子抗体检查，还可以了解这个免疫性的不孕不育是属于男性因素，还是女性因素，从而对医生确定治疗方案提供可靠的依据。 由于抗精子抗体的隐蔽，在结婚前是无法发现的，只有到了结婚后想要孩子的时候，需要抗精子抗体检查之后才会发现它的存在。 正常情况下，睾丸有着免疫屏障，当炎症或细菌感染，致使精子外溢，引起其组织的免疫反应，进而自身产生抗精子抗体。如果在进行抗精子抗体检查之后，发现抗精子抗体呈阳性或者弱阳性，则有很大的几率会导致不孕不育。 抗精子抗体是一种免疫因素，这种因素使生育力降低，从而导致不孕。患者可以根据免疫性不孕的具体原因，采取相应的治疗措施。在消除病源的基础上采用隔离，免疫抑制，中医辩证治疗的方法进行治疗，治愈率和受孕率均保持较高水平。 抗精子抗体检查的费用 抗精子抗体的检查费用是需要根据各个医院、患者接受的不同检查项目来决定的，有的仅需几十元，有的则需要几百元。但是大多数抗精子抗体的检查费用会在200元左右，这只是某个医院的参考价，具体价格可以咨询所在当地的医院。

生命的开始 精子和卵子相遇全过程

生命的开始精子和卵子相遇全过程 【摘要】生命的开始是一个神奇的过程，同房后，精子开始走上了漫漫寻爱之旅。精子同卵子要“相会”，至少要过４关：即通过阴道，穿过子宫颈，在宫腔内运行，最后进入输卵管同卵子“相会”。一起来直击卵子与精子相遇过程。 生命的开始是一个神奇的过程，当精子遇上了卵子，它不早不晚，时机刚刚好，才有了受精卵，受精卵在子宫里发育为胎儿，妈妈十月怀胎，直到新生命降临。 看起来这个过程都是那么顺理成章，但是大家知道吗？要让精子与卵子的相遇时机刚刚好，却不是一件随随便便就可以实现的事情。因为正常女性一个月只排出1个卵子，而卵子的存活时间只有1~2天，如何让精子在卵子最美的时候相遇？抓住排卵期和排卵日就变得很 有必要哦。

什么是排卵期？ 正常育龄女性每个月来1次月经，从本次月经来潮开始到下次月经来潮第1天，称为1个月经周期。 排卵发生在两次月经中间。女性的月经周期有长有短，但排卵日与下次月经开始之间的间隔时间比较固定，一般在14天左右。所以排卵日推算法就是从下次月经来潮的第1天算起，倒数14天就是排卵日。卵子排出后在输卵管内能生存1-2天，精子在女子的生殖道内可维持2-3天受精能力，故在卵子排出的前后几天里性交容易受孕。为了保险起见，将排卵日的前5天和后4天，连同排卵日在内共10天称为排卵期。

找准排卵日比推算的排卵期更靠谱 为什么卵子的生存时间只有1~2天，但是排卵期却有10天那么 长呢？那是因为排卵也会受到环境、心情、饮食等因素的影响而发生改变（这就是为什么我们的月经周期不会永远都固定为30天或28天），因为排卵日会有小幅的浮动，就只能用一个大概的时间段来推算排卵期，卵子排出后有1~2天的存活时间。精子在女性生殖道里可存活2～3天，而受精能力多在排卵后的24小时之内，超过2～3天精子即失去与卵子结合的能力。因此，在排卵前2～3天和排卵后1～2天同房，才更有机会受孕。所以，利用辅助工具（例如排卵测试笔等）找准排卵的那2天，比推算出来10天的排卵期更加靠谱。 在排卵期的相爱精子和卵子相遇全过程 排卵之后同房了，精子开始走上了漫漫寻爱之旅。精子同卵子要“相会”，至少要过４关：即通过阴道，穿过子宫颈，在宫腔内运行，最后进入输卵管同卵子“相会”。 在排卵期，宫颈粘液助精子一臂之力：在排卵期，子宫粘液量多而稀薄，便于精子通过；同时宫颈粘液中白细胞数量减少，从而减少了吞吃精子的机会；另外，此时子宫颈粘液碱性增强，而精子正是喜碱厌酸，故起到了保护精子的作用。而在其他时期，子宫颈粘液少而

保护性碱基集锦

New England Biolabs Technical Literature - Updated 04/04/00 Cleavage Close to the End of DNA Fragments (oligonucleotides) To test the varying requirements restriction endonucleases have for the number of bases flanking their recognition sequences, a series of short, double-stranded oligonucleotides that contain the restriction endonuclease recognition sites (shown in red) were digested. This information may be helpful when choosing the order of addition of two restriction endonucleases for a double digest (a particular concern when cleaving sites close together in a polylinker), or when selecting enzymes most likely to cleave at the end of a DNA fragment. The experiment was performed as follows: 0.1 A 260 unit of oligonucleotide was phosphorylated using T4 polynucleotide kinase and γ-[32P] ATP. 1 μg of 5'[32P]-labeled oligonucleotide was incubated at 20°C with 20 units of restriction endonuclease in a buffer containing 70 mM Tris-HCl (pH 7.6), 10 mM MgCl 2, 5 mM DTT and NaCl or KCl depending on the salt requirement of each particular restriction endonuclease. Aliquots were taken at 2 hours and 20 hours and analyzed by 20% PAGE (7 M urea). Percent cleavage was determined by visual estimate of autoradiographs. As a control, self-ligated oligonucleotides were cleaved efficiently. Decreased cleavage efficiency for some of the longer palindromic oligonucleotides may be caused by the formation of hairpin loops .

FANUCi系统数控车床的编程与操作

二、FANUC 0i系统数控车床的编程与操作 FANUC 0i系统面板的操作 一、FANUC 0i系统面板的结构 FANUC 0i系统面板的结构如图1-19所示。主要分三部分：位于下方的机床控制和操作面板区、位于右上方MDI编辑键盘区、位于左上方的CRT屏幕显示区。 图FANUC 0i车床标准面板 1、机床控制、操作面板按钮 机床控制、操作面板按钮说明见表。 按钮名称功能说明 自动运行此按钮被按下后，系统进入自动加工模式。 编辑此按钮被按下后，系统进入程序编辑状态，用 于直接通过操作面板输入数控程序和编辑程

序。 MDI 此按钮被按下后，系统进入MDI模式，手动 输入并执行指令。 远程执行此按钮被按下后，系统进入远程执行模式即 DNC模式，输入输出资料。 单节此按钮被按下后，运行程序时每次执行一条数 控指令。 单节忽略此按钮被按下后，数控程序中的注释符号“/” 有效。 选择性停止当此按钮按下后,“M01”代码有效。 机械锁定锁定机床。 试运行机床进入空运行状态。 进给保持 程序运行暂停，在程序运行过程中，按下此按 钮运行暂停。按“循环启动”恢复运行。 循环启动程序运行开始；系统处于“自动运行”或“MDI” 位置时按下有效，其余模式下使用无效。 循环停止程序运行停止，在数控程序运行中，按下此按 钮停止程序运行。 回原点机床处于回零模式；机床必须首先执行回零操 作，然后才可以运行。 手动机床处于手动模式，可以手动连续移动。 手动脉冲机床处于手轮控制模式。 手动脉冲机床处于手轮控制模式。 X轴选择按钮在手动状态下，按下该按钮则机床移动X轴。Z轴选择按钮在手动状态下，按下该按钮则机床移动Z轴。 正方向移动按钮手动状态下，点击该按钮系统将向所选轴正向移动。在回零状态时，点击该按钮将所选轴回零。 负方向移动按钮手动状态下，点击该按钮系统将向所选轴负向 移动。 快速按钮按下该按钮，机床处于手动快速状态。 主轴倍率选择旋钮将光标移至此旋钮上后,通过点击鼠标的左键 或右键来调节主轴旋转倍率。

各种酶切位点的保护碱基(引物设计必看)

各种酶切位点的保护碱基 酶不同，所需要的酶切位点的保护碱基的数量也不同。一般情况下，在酶切位点以外多出3个碱基即可满足几乎所有限制酶的酶切要求。在资料上查不到的，我们一般都随便加3个碱基做保护。 寡核苷酸近末端位点的酶切 (Cleavage Close to the End of DNA Fragments (oligonucleotides) 为了解不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求，NEB采用了一系列含识别序列的短双链寡核苷酸作为酶切底物进行实验。实验结果对于确定双酶切顺序将会有帮助（比如在多接头上切割位点很接近时），或者当切割位点靠近DNA末端时也很有用。在本表中没有列出的酶，则通常需在识别位点两端至少加上6个保护碱基，以确保酶切反应的进行。 实验方法：用γ-[32P]ATP在T4多聚核苷酸激酶的作用下标记0.1A260单位的寡核苷酸。取1 μg 已标记了的寡核苷酸与20单位的内切酶，在20°C条件下分别反应2小时和20小时。反应缓冲液含70 mM Tris-HCl (pH 7.6), 10 mM MgCl2 , 5 mM DTT及适量的NaCl或KCl（视酶的具体要求而定）。20%的PAGE（7 M尿素）凝胶电泳分析，经放射自显影确定酶切百分率。 本实验采用自连接的寡核苷酸作为对照。若底物有较长的回文结构，切割效率则可能因为出现发夹结构而降低。

2.双酶切的问题 参看目录，选择共同的buffer。其实，双酶切选哪种buffer是实验的结果，takara公司从1979年开始生产限制酶以来，做了大量的基础实验，也积累了很多经验，目录中所推荐的双酶切buffer 完全是依据具体实验结果得到的。 有共同buffer的，通常按照常规的酶切体系，在37℃进行同步酶切。但BamH I在37℃下有时表现出star活性，常用30℃单切。 两个酶切位点相邻或没有共同buffer的，通常单切，即先做一种酶切，乙醇沉淀，再做另一种酶

限制性内切酶的一般原则和建议!

限制性内切酶的一般原则和建议! 1．如何做酶切反应？ 该问题看似什么简单： DNA中加上酶，然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中，我们不断听到：切不动，装不上。问题在什么地方？能系列生产限制性内切酶的公司国际上，就那么几个，位列前 3 的是NEB, Fermentas, SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题，但是更多的问题来源于模板是否合适酶切要求。下面几点对你的酶切是有帮助的。 1) 成功酶切的关键是准备好模板DNA。DNA样品中不能含有有机溶剂（会使酶变性或产生星号货性），不能含有干扰酶活性的污染物质，不能含有高浓度的EDTA (TE中的EDTA浓度较低，对Mg的浓度影响较小)；同时要对DNA甲基化程度及其对酶切效率的影响要做到心中有数。 2) 选用合适的酶。根据酶切序列选用，特别注意选用甲基化对酶活性的干扰。 3) 正确使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低温环境中，只是在需要用酶才从冰箱中取出来。运输和临时存放时需要将酶至于冰上。手拿酶管时不要接触酶管下步含酶的部分，移酶时尽可能用长TIP, 避免污染。用完后需要及时送回原处。注意：酶通常是最后加。所有4) 反应体积需要根据实验目的定，常规的酶切一般要维持在10-50ul，酶切鉴定10-20ul就可以了。 5) 模板浓度问题：浓度过高，溶液黏度过大，酶不能有效扩散，酶切效果不会好。浓度过低，也会影响酶活性。 6) 注意模板用量和反应体积的关系。对酶用量，模板用量，反应体积等要素的确定需要的是时间和经验的积累。 7) 酶切反应的各个组分加完后，需要用TIP小心混匀几次，short spin 一下就可以保温了。一般不能使用振荡器混匀。 8) 反应温度的选择。一般反应都用37度，但是 Sma I 的最适合温度是25度，37度时酶仍表现出活性，但是效率下降50%。部分从耐热菌制备的酶需要在37度以上的温度反应，如Taq I的最适温度为65度，37度保温，效率仅为前者的1/10。 9) 反应时间的选择。一般酶切鉴定30分钟就可以了。要完全酶切可以采用少量的酶长时间反应，或较高的酶量短时间处理都可以达到。在使用高酶量的时候需要注意甘油的最终浓度不要超过5%，也就是说10ul的体系，酶的用量不要超过1ul。 10) 是否和如何终止反应？酶切鉴定之类的实验不需要特殊处理。灭活的手段：加入高浓度的EDTA；65度或80度热处理20-30分钟；部分从高温菌纯化出来的内切酶由于最适的反应温度比较高，热处理灭活不一定完全，需要用苯酚/氯仿/乙醇方法纯化；电泳回收也是实验室常用除酶的手段。 2．如果遇到酶切不动或切不完全，该怎么办？ 要回答这么问题常常需要了解酶活性单位是如何确定，我们多次接到这样的问题：1个单位的酶能在60分钟内切1ug的DNA,为什么我们的DNA那么少切那么长时间也不能切开或切完全？从下面几个因素去考虑： 1) 酶是否有活性：酶的活性单位通常是在60分钟酶切1ug lambda DNA或特定线状DNA所需要的酶量。鉴定酶的活性高低不是用您待切的DNA模板，也不是别的公司的酶来判定。因为不同公司酶可能是从不同系统中纯化的，虽然识别位点相同，但是酶的特性可能是有差异的。鉴定酶必须使用使用说明书上认定的酶活确定的方式，通常需要用lambda DAN做模板来判定。同时如果酶对甲基化敏感，还需要用Dcm-, Dam-的DNA.不排除由于运输或分装不当导致酶活性下降，这种情况是很少发生。我们公