腺病毒

腺病毒

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腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70～90 nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为7～9 nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含4.7kb，两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5'端同相对分子质量为

55X103Da的蛋白质分子共价结合，可以出现双链DNA的环状结构。

腺病毒罪孽有前科

提起腺病毒，老一代医生都还记得，在上世纪50～60年代，腺病毒曾相当猖獗。华北、东北及西北于1958年冬及1963年冬均有较大规模的腺病毒肺炎流行。6个月至2岁的婴幼儿患腺病毒肺炎最为危重，儿童肺炎病死率高达16.6%～33.3%。由腺病毒引起的社区或军队呼吸道疾病的暴发有许多报道。上世纪80年代后，腺病毒有所隐蔽，大规模流行减少，但在部分地区仍有局部流行。如今的年轻人对腺病毒几乎没

有什么印象，也是不奇怪的。

变异毒株恣意反扑

近几年腺病毒又有所回升，因为出现了变异毒株，如腺病毒14型变异株在美国纽约、奥勒冈、华盛顿和德克萨斯等地引起急性呼吸道疾病暴发，此变异株在美国已造成超过千人感染。

腺病毒55型是由腺病毒11型与14型基因重组而形成的新型毒株。正因为它有变异，就具备新的毒力特性，在流行病学和临床也表现新特征：发热38.5℃以上、流鼻涕、咽痛、咳嗽，伴有呼吸困难，可能更易于爆发流行。我国曾于2006年在北方的学校中发生过由腺病毒55型引起的学生群体呼吸道暴发疫情。此次保定呼吸道感染发热疫情也具暴发特点，并一度被怀疑为SARS、甲流、禽流感，值得对这一新变异

株进行研究。

不同类型引起多种征候群

腺病毒是引起人类感染的常见病原体，人腺病毒已发现55个血清型，包括感染呼吸道、胃肠道、尿道、

膀胱、眼和肝脏等，可引发多种综合征———

急性发热性咽喉炎———通常为婴儿和儿童发病，出现咳嗽、鼻塞、发热和咽喉部溃疡等症状，这些

表现难以与其他病毒引起的轻型呼吸道感染鉴别。

咽结膜热———症状与急性发热性咽喉炎相似，但常同时发生结膜炎。腺病毒角膜结膜炎有很高的传染性。咽结膜热有暴发流行倾向，一般预后尚好，无后遗症。

急性呼吸道感染———这一综合征以咽炎、发热、咳嗽和全身不适为特点，主要为腺病毒3、4、7、14和21型感染引起。临床上多表现为轻型急性上呼吸道感染，少见重症和死亡病例。

军队的新兵中流行急性呼吸道感染发热征候群，是一种封闭型群体流行现象，多因突然紧张、劳累、

聚集等因素有关。

腺病毒肺炎———多发于婴幼儿，据国内外研究报道，腺病毒肺炎约占婴幼儿期肺炎的10％，大多由腺病毒3、7型引起。腺病毒肺炎也可造成医院内感染，青年人腺病毒肺炎的病死率为8％～10％。

如何防范腺病毒感染

老幼体衰者为重点保护对象。尽管各个年龄组均可感染腺病毒，但以婴幼儿和老年人以及免疫功能缺陷者、接受器官移植者容易感染。这些人群应为重点保护对象，有症状早就医，早诊断，早治疗。

杀灭病原体。腺病毒对脂溶剂有抵抗，对酸碱度和温度的耐受范围较宽，紫外线照射30分钟可灭活，

56℃30分钟可将病毒灭活。

切断传播途径。腺病毒的传播途径主要为呼吸道飞沫和直接接触，也可通过粪-口传播。腺病毒肺炎患者在住院治疗期间应隔离。在腺病毒流行季节，托幼机构的上呼吸道感染患儿应回家隔离休息，以免造成

传播流行。

预防是关键。目前尚无普遍使用的疫苗，国际上已研制出腺病毒4、7型的疫苗，但仅用于预防军营中腺病毒感染。所以预防是关键，需特别重视预防措施，尤其在冬春流行季节尽量少带孩子到公共场所，外出时戴口罩，避免接触病人，以防感染。对于腺病毒，目前尚无特效药物治疗，最常用的方法是中西医结

合对症治疗。

防治方法

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腺病毒感染主要在冬春季流行，容易在幼儿园、学校和军营新兵中暴发流行。一般来说，腺病毒主要通过呼吸道飞沫、眼分泌物，经呼吸道或接触传播；肠道感染主要通过消化道传播。其预防措施和其他呼吸道、消化道传染病预防相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接触患者及其呼吸道飞沫。平常多饮水，多吃蔬菜和水果，注意锻炼身体；室内多通风，保持室内环境清洁；冬春流行季节尽量少去人员密集的公共场所，外出时戴口罩，避免接触病人，以防感染。

一旦发生急性发热、咽喉疼痛和结膜炎的症状，要及早到医院看病，早隔离、早治疗。出现5人以上集体发病的情况要及时向所在地区防疫部门报告，及时采取有效的防控措施，避免疾病漫延。在腺病毒流行季节，托幼机构上呼吸道感染患儿应回家隔离休息，以免造成传播流行。患病后尽量在附近医院就诊，避免到病人较集中的大医院观察室输液，以防造成交叉感染。出现严重咳嗽和呼吸困难症状多属严重病例，应及时到医院住院治疗，以免延误病情。

冻伤是由于寒冷潮湿作用引起的人体局部或全身损伤。轻时可造成皮肤一过性损伤，要及时救治；重时可致永久性功能障碍，需进行专业救治。严重时可危及生命，需紧急抢救。

冬天来了，冬天防冻也是一项不

容忽视的工作,尤其是从南方来的朋友更要注意了。下面给大家简单介绍一下防冻的知识。

冻伤是人体受到寒冷所引起的全身或局部损伤。冻伤常发生于人体长时间暴露在外面

的部位，如指端、鼻尖、耳廓、足等。

冻伤的表现：常见的冻伤分一度和二度冻伤两种。

1.一度冻伤：又叫局限性冻疮。冻疮多位于手足部的指(趾)头，耳朵或鼻等暴露部位

，在O℃以上，10℃以下的低气温时出现血液循坏不良而形成的。冻疮部位的皮肢苍白、淡紫，并有水肿、发硬。局部受暖后，皮肤变红、发痒、轻微灼痛。因发痒搔破时，伤口不易愈合。

2.二度冻伤：是指O℃以下低温所致的冻结性损伤，受伤部位除有红肿外，还有大小

不等的水泡出现，深部组织发生水肿，疼痛比较厉害，对冷、热、针刺感觉可完全消失。

生活中常见到的应该是一度冻伤或者更轻微一些，可能只表现为皮肤红肿、干燥、发

痒等轻微症状。下面介绍一下基本的护理：

1、暴露在外面的皮肤是最容易冻伤的，比如面部、耳廓、手指等等。因此外出时应戴好手套、帽子等衣物。另外，可以在脸上手上涂抹防寒霜等专门的防护用品（一般的护肤品好像只有保湿的作用，所以一定要看清楚哦），这样既可以减小热量散失又可以保持皮肤水分，防止由低温造成的皮肤粗糙、多屑、皴裂、肿痒、以及常见的红脸蛋等。

2、保持服装鞋袜的干燥，受潮后要及时更换，有利于保温。

3、经常自习的同学应该注意尽量能够经常活动一下，一直保持一个姿势不利于血液循环，因为身体末梢主要靠血液循环来提供热量的。尤其是复习考研的同学可要注意拉。

4、对已患冻疮的部位，应加强保暖。冬季易患冻疮的人，除皮肤起水泡或溃烂者外，可用生姜片或辣椒涂擦易患冻疮的部位，每日２次，可减轻或避免冻疮的发生。

5、如果局部除上述症状外，还有水泡出现，较大的可用不含酒精的消毒剂（如１％新洁尔灭溶液）等，清洁患处和周围皮肤后，用注射器吸出其中渗液，并涂些抗菌药膏加以包扎。小的水泡不需要刺破，经过２～３周后，水泡逐渐干枯，形成黑色干痂，脱落后创面已经愈合。

6、对已经溃破的创面，可先消毒周围正常皮肤，再用无菌温盐水清洗创面后，涂以抗菌药物加以包扎。并经常检查创面愈合情况和更换药物及包扎纱布等。

7、经常在室外活动应注意休息和营养，以增加抗寒能力。有人外出时喜欢饮酒挡寒，

（好像东北人就是经常喝酒取暖的，估计这个办法不太适合南方的同学），但酒后血管扩张，增加人体热量向外发散，反而不利于抗寒，且容易引起感冒，所以大家还是不要尝试这个方法了。

立冬已过，尤其北方地区开始供暖，室内干燥的空气却常让人感到肌肤粗糙、唇裂起皮、口舌干燥、体乏力弱……这些都是身体向你发出的缺水信号。这时，有人会大杯大杯地喝水，但燥气伤阴，喝进多少，排出多少，因而光喝水并不奏效。其实，我们可以通过饮食来补“水”，让身体变得滋润起来。

除了喝水，还要多吃果蔬

中国中医科学院西苑医院杨力教授表示，秋冬季节燥气伤阴，喝进的水很大一部分都随尿液排出了。此时，燥气会导致体内有火，不妨多吃一些水果、蔬菜，既可保住水分，还能养阴润燥。

其实，翻开食物成分表不难看出，蔬菜、水果的含水量一般超过70%，即便一天只吃500克果蔬，也能获得300—400毫升水分。另外，日常饮食讲究的也是干稀搭配，从三餐中获得1500—2000毫升的水分并不困难。因此，不妨充分利用三餐进食的机会来补水。每天除喝水之外，选择一些果蔬和不咸的汤粥，补水效果都不错。

“白色食物”能防燥

那么，什么食物最补水呢？中医认为，解除燥热多用润法。根据五行五色的原理，不妨多吃一些“白色食物”。做菜时，可以选择白萝卜、白菜、冬瓜、百合、银耳、莲藕、莲子等。其中，白菜、萝卜这两种“大众化蔬菜”功效最好，可谓是最经济实惠的滋补品了。《本草纲目》就称萝卜为“蔬中最有益者”，白萝卜含有多种维生素和矿物质，其中维生素C的含量比梨和苹果高出8—10倍；而白菜中含有丰富的维生素C、E，防止因燥热导致的皮肤干燥，其中的纤维素还可促进肠蠕动，预防体内火气导致的便秘。但要注意的是，肠胃寒凉的人在冬季应该少吃。吃水果时，梨则是“补水之王”，它们不但能够增加水分的摄入，还有利于维生素的补充。

在烹调方式上，可利用以上食材做一些多汁的流食，比如雪梨羹，把雪梨、银耳、百合一起煮，加入些藕粉，有清热生津、化痰润肺的功效；百合莲子小米小枣粥，有滋阴润燥、补肺养心、健脾生津的作用，适用于在干燥的秋季食用；此外，还可以煲一些冬瓜汤、莲藕汤、白萝卜花生汤、大白菜汤等。

杨力还提醒，冬季晨起最好能喝一杯蜂蜜水，或者在早餐的豆浆或牛奶中加入些蜂蜜，能有效缓解冬季皮肤缺水少油、体内积火燥热的症状。

多吃酸，少吃盐

冬季补水还应注意两点。其一，少辛增酸。中日友好医院李佩文教授介绍，饮食应以健脾、补肝、清肺为主，应多吃山楂、柚子、石榴、苹果等清润甘酸的水果，由于其中含有鞣酸、有机酸、纤维素等物质，能起到刺激消化液分泌，加速胃肠蠕动的作用，可以滋阴润燥。此外，少吃辛辣食物，如葱、姜、蒜、辣椒、胡椒等，以免火上浇油，加重肺燥症状。

其二，少吃盐。咽炎的诱发因素多是炎、热、燥，秋冬人体抵抗力弱，更容易反复发病。这时候你就该看看，自家的菜是否太咸了。如果饭菜中含盐量太高，会导致唾液分泌减少，有利于各种细菌在上呼吸道存活；高盐饮食还可能降低黏膜抵抗疾病的能力，使各种细菌、病毒乘机而入，诱发咽炎。另外，炒货如瓜子、花生之类也要少吃，这些食物又咸又干，同样是咽喉的大敌。

立冬一过，天气变得越来越寒冷了。在寒冷的天气中，该如何调整我们的饮食呢？中医养生学告诉我们，应该多吃一些温热补益的食物来滋养五脏、扶正固本、培育元气，促使体内阳气升发。这样，不仅能使身体更强壮，还可以起到很好的御寒作用。

根据食物中所含营养素的不同，冬季膳食应具有以下特点：

多吃主食，适当吃点羊肉、鹌鹑和海参。

蛋白质、脂肪和碳水化合物被称为产热营养素。所以，冬季我们要适当增加主食和油脂的摄入，保证优质蛋白质的供应。狗肉、羊肉、牛肉、鸡肉、鹿肉、虾、鸽、鹌鹑、海参等食物中富含蛋白质及脂肪，产热量多，中医认为有益肾壮阳、温中暖下、补气生血的功能，御寒效果最好。

怕冷与缺少钙和铁有关。

人怕冷与机体摄入某些矿物质较少有关。如钙在人体内含量的多少，可直接影响心肌、血管及肌肉的伸缩性和兴奋性；血液中缺铁是导致缺铁性贫血的重要原因，常表现为产热量少、体温低等。因此，补充富含钙和铁的食物可提高机体的御寒能力。含钙的食物主要包括牛奶、豆制品、海带、紫菜、贝壳、牡蛎、沙丁鱼、虾等；含铁的食物则主要为动物血、蛋黄、猪肝、黄豆、芝麻、黑木耳和红枣等。

海带、紫菜可促进甲状腺素分泌，产生热量。

人体的甲状腺分泌物中有一种叫甲状腺素，它能加速体内很多组织细胞的氧化，增加身体的产热能力，使基础代谢率增强，皮肤血液循环加快，抗冷御寒，而含碘的食物可以促进甲状腺素分泌。含碘丰富的食物是：海带、紫菜、发菜、海蜇、菠菜、大白菜、玉米等。

动物肝脏、胡萝卜可增加抗寒能力。

寒冷气候使人体维生素代谢发生明显变化。增加摄入维生素A和维生素C，可增强耐寒能力和对寒冷的适应力，并对血管具有良好的保护作用。维生素A主要来自动物肝脏、胡萝卜、深绿色蔬菜等，维生素C则主要来自新鲜水果和蔬菜。

芝麻、葵花子能提供人体耐寒的必要元素。

寒冷天气使人对体内蛋氨酸的需求量增大。蛋氨酸可以通过转移作用，提供一系列适应寒冷所必需的甲基。因此，冬季应多摄取含蛋氨酸较多的食物。如芝麻、葵花子、乳制品、酵母、叶类蔬菜等。

吃辣的可以祛寒。

辣椒中含有辣椒素，生姜含有芳香性挥发油，胡椒中含胡椒碱。它们都属于辛辣食品，冬天多吃一些，不仅可以增进食欲，还能促进血液循环，提高御寒能力。

此外，冬季要忌食或少食黏腻、生冷的食物，因为此类食物属阴，易使脾胃中的阳气受损。

一、火灾预防基本观念

1、火的形成需要下列三个条件：即可燃物、空气和火源，三者缺一火即无法形成。

2、对火灾扑救，通常采用窒息(隔绝空气)，冷却(降低温度)和拆除(移去可燃物)等三种。

二、火灾的种类依我国国家标准(CB4968)的规定可分为四类

1、普通火灾(A类)：凡由木材、纸张、棉、布、塑胶等固体物质所引起的火灾。

2、油类火灾(B类)：凡由引火性液体及固体油脂物体所引起的火灾，如汽油、石油、

煤油等。

3、气体火灾（C类）：凡是由气体燃烧、爆炸引起的火灾都称为气体火灾，如天然气、

煤气等。

4、金属火灾（D类）：凡钾、钠、镁、锂及禁水物质引起的火灾。

5、电器火灾：凡是由电器走火漏电打火引起的火灾称为电器火灾。

三、灭火器的种类及使用方法

1．泡沫灭火器：适用AB类火灾，分为化学泡沫和机械泡沫两种，其中化学泡沫使用时颠倒使用，现已淘汰，而机械泡沫使用方法同于粉灭火剂。缺点：造成污染，不可使用于C类火灾，每四个月检查一次，药剂一年更换。

2.二氧化碳灭火器适BC类火灾，使用方法：a)拔出保险插销：b)握住喇叭喷嘴和阀门

压把；c)压下压把即受内部高压喷出。每三个月检查，重量减二》需重新灌充。缺点：使用人员极易冻伤。

3．干粉灭火器：分为ABC和BC干粉两种，其中适用ABC类火灾，使用方法：a)拔掉保险销；b)喷嘴管朝向火焰，压下阀门压把即可喷出。三个月检查压力表(1．2Mpa)药剂有效时限三年。

4．清水灭火器：它最适合灭A类火灾，不适合扑灭其它类火灾。采用拍击法：先将清水灭火器直立放稳，摘下保护帽，用手掌拍击开启杠顶端的凸头，水流便会从喷嘴喷出。

四、火源和气体的管理注意事项有哪些?

1、天然气皮管道是否破损或漏气，使用后阀门应切实关闭和关紧。

2．营业性的餐厅、厨房、浴室的锅炉间，要求单位负责人指定专人负责安全检查和维护。

3．大楼内部工程施工中的用火，须指定施工期间的负责人明确责任和范围。

4．厨房的尘垢油污应常清洗，烟囱及油烟通风管应加装铁丝铁罩。

5．燃放爆竹，不可自窗口点燃，以免发生火灾。

6．不可乱丢烟蒂或床上吸烟。

7．未经许可，非法经营或使用藏置危险物品者应立即通报当地消防部门或公安机关。

8．家长外出，勿将小孩反锁在家，以免发生火灾时无法逃出。

五、用电安全常识

1．保险丝熔断，是用电过量预告，不可愈换愈粗，以免短路时不能及时熔断，引起火灾电线着火。

2．电线陈旧，最易破损，应注意检查更换。

3．衣柜内不可装设电灯烘烤衣物。

4．电暖炉不可设置易燃物品或靠近衣服。

5．电热水器检查其自动调节装置是否损坏，以免发生过热，引起爆炸后火灾。

6．电气机房及配电所开关附近应备干粉灭火器以备防火。

六、浓烟

浓烟中含有微粒子碳元素CO，、CO：等有毒气体，其上升速度每秒3．0M至5．0M，横向扩散0．5M至1．0M，浓烟吸人百分之四，二至三分钟就会产生休克、窒息而死

亡。在火灾中死亡的人，大多数是由于吸人浓烟中含的有毒气体后休克、窒息而死。

七、高楼防火注意事项

1、安全门或楼梯及通道应保持畅通，不得任意封闭，加锁或堵塞。

2．楼房窗户不应装置防窃铁栅或广告牌等阻塞逃生的路途，如装置应预留逃生口。3．高楼楼顶平台，为临时避难场所，除蓄水池与隙望台外，不可加盖房屋或作其他设备，以免影响逃生。

4．缺水或消防车抢救困难地区，应配置灭火器材或自备充足的消防用水。

八、地震时应变描施

1．保持冷静，首先关闭煤气及切断电源开关。

2．远离窗户或有玻璃的家具，危急时可躲人床底或桌子底下可站在阳台上。

3．在户外，寻求空旷地区并远离高楼大厦施工中的滕架、电线杆、牌坊等。

4．在室内，不可急着冲出去或搭乘电梯(电梯可能坏掉或停电)，应先求得自身安全，等地震过后再脱险。

5．勿争先恐后出去，会造成老弱妇孺被挤压或践踏而死。

6．如在车上应立即刹车熄火或留在车内，机车应立即熄火，把车横放并迅速躲入安全位置。

九、家居防火、灭火与逃生

(一)防火相关常识：

1．忌乱扔烟头。家里的可燃物多，特别要警惕吸烟引起火灾。随手扔烟头是很多烟民的不良习惯，要知道“一支香烟头，能毁万丈楼。”

2．忌家用电器、电线“带病工作”。家庭电器化已经普及，使用电炉、电热毯、电熨斗和取暖设备等，要做到用前检查，用后保养，避免因线路老化、年久失修或经常搬运、碰破电线而引发火灾事故。

3．忌随地、随意燃放烟花爆竹。

4．忌烤火取暖粗心大意。冬季烤火取暖严禁使用汽油、煤油、酒精等易燃物引火；火炉周围不得堆放可燃物品；蒸气管道和取暖器材切勿烘烤衣物，以免发生火灾事故。另外，家庭不可用可燃材料搞装饰，避免给火势蔓延创造条件。

5．忌乱烧垃圾。家庭自行焚烧垃圾不安全，要知道垃圾含有很多可燃易爆品，如液化气残液、玻璃瓶、鞭炮、废旧液体打火机等，一旦燃烧就有爆炸的可能。火苗乱飞，也很容易引起火灾。

6．忌小孩玩火。

7．忌燃气泄漏。家庭使用液化气罐或煤气管道时，要具备良好的通风条件，并要经常检查，发现有漏气现象，切勿开灯、打电话，更不能动用明火，要匀速打开门窗通风，排除火灾隐患。

8．忌不备消防器材。欲话说：“不怕一万、就怕万一”。为了做到有备无患，每个家庭都要配备相应的消防器材，每位成员都要掌握使用方法，另外要定期检查，做到警钟长鸣，防患于未燃。

(二)家庭灭火方法

1．发现火灾迅速拔打火警电话119。报警时要讲清详细地址、起火部位，着火物质，火势大小，报警人姓名及电话号码，并派人到路口迎候消防车。

2．一旦起火，不要惊慌失措，如果火势不大，应迅速利用空中备有的简易灭火器材，采取有效措施控制和扑灭火灾。

3．油锅着火，不能泼水灭火，应关闭炉灶燃气阀门，直接盖上锅盖或用湿抹布覆盖，令火窒息，还可向锅内放人切好的蔬菜冷却灭火。

4．燃气罐着火，要用灭火器去灭火，并迅速关闭阀门。

5．家用电器或线路着火，要先切断电源，再用干粉或气体灭火器灭火，不可直接泼水灭火，以防触电或电器爆炸伤人。

6．救火时不要贸然开门窗，以免空气对流加速火势蔓延。

(三)逃生

1．切忌慌乱，判断火来源，选与火源相反方向逃生。

2．切勿跳楼，要借用工具(床单、布条打湿)进行逃生。

3．切勿返人屋内取回贵重物品。

4．切勿用水试图扑灭通电中的电器火灾或油类火灾。

5．夜间发生火灾时，应先叫醒熟睡的人，不要只顾自己逃生，并且尽量大声喊叫，以提醒其他人逃生。

(四)逃生中如何避免火、烟危害?

1．以湿毛巾掩住口鼻呼吸，降低姿势，以减少吸人浓烟。

2．有防烟工具(防毒面具)的，迅速套住头，以避免吸人有毒烟雾或气体。

3．若逃生途中经过火焰区，应先弄湿衣物或以湿棉被、毛毯裹住身体，迅速通过火焰区。

4．烟雾弥漫中，一般离地面二十公分以下仍有残存空气可以利用，可用低姿势逃生，爬行时将手心、手肘膝盖紧靠地面，并沿墙壁边缘逃生，以免错失方向。

5．火场逃生过程中，要一路关闭所有您背后的门，它能减低火和浓烟的蔓延速度。6．烟的上升速度远比上楼梯来得快，故火警时应迅速向地面逃生，不可轻易跳楼，以免产生坠楼伤亡。

十、外出注意事项

1．乘坐火车或汽车遇火灾时，应待车停稳后迅速找到安全出口或打破窗门逃生，车末停稳不可冒险跳车，以致重伤或丧生。

2．投宿饭店、旅社应先观察安全门、梯及各种防火设施位置与逃生方向。

十一、遇火灾时人员疏散

1．任何一个公共娱乐场所，部位，生产岗位都有疏散方案。

2．公共场所有工作人员的地方，要在工作人员、保卫人员的引导下进行有秩序的疏散。3．疏散时大家不要带任何东西，尤其是重物，不要要让老人小孩子先走，一个一个地往外跑。

十二、下列人员应接受消防安全专门培训

1．单位的消防安全责任人，消防安全管理人；

2．专、兼职消防管理人员；

3．消防控制室的值班，操作人员；(应当持证上岗)起蜂拥而出，

4．其他依照规定应当接受消防安全专门培训的人员。

煤燃气与人们的日常生活是息息相关的，正确使用煤气，避免中毒事故，是冬季安全工作的重要内容。煤气中毒也叫一氧化碳中毒。煤气是煤炭在没有充分燃烧时产生的，它是一种看不见闻不到的有毒气体。煤火不旺或快灭时，最容易产生煤气。如果屋子通风不好，人吸入了这种气体以后，它很快和血液里的血红蛋白结合(正常情况下，人吸入的氧气和血红蛋白结合，通过血液把氧气运到全身各组织器官，如果血红蛋白和煤气结合，它就不再和氧气结合了)。影响了氧气的吸入。在这种情况下，人体就会出现缺氧现象，产生头疼、头晕、恶心呕吐、四肢无力、呼吸困难、大小便失禁、瞳孔散大、昏迷不醒等症状，如果抢救不及时，还会造成死亡。

1、要注意通风：屋里生火炉、烧炕取暖时，不要把门窗糊得太严，要注意通风换气，在窗户上向外糊个“风斗”或留个通风孔。并经常清理烟囱，保持烟道畅通，在封火时不得堵塞烟道。

2、防止烟道堵塞和漏气：用炕炉或火墙取暖时，要经常检查烟道和烟囱，还要检查炕缝、火墙缝，如果漏烟，要抹好，烟孔要勤掏。免得堵塞，使煤气进屋里。

3、白天用的取暖水，晚上最好搬到外面。在生炭火盆或用煤球炉、蜂窝煤炉取暖时，一定要在屋外点好，等火着旺后再搬到屋里来，晚上睡觉前要搬到屋外去。同时还必须注意防火。

4、取暖炉一定要装烟筒：在屋内用煤炉取暖时一定要安装烟筒，烟筒接口要严，安装烟筒时应注意风向，不要让风把煤气吹回室内。同时要经常检查烟筒，如有裂缝、破损的地方，要及时修补好。

5、晚上睡觉时，最好不要封火：如果要封火，煤不要压得太多，防止把烟道堵死，发生中毒。

6、养成良好习惯，不要长时间在聚集在火炉旁烤火或用火炉烘烤洗头后未干的湿发。

7、学习有关防煤气中毒的知识。比如，如何检查个人居所煤气安全情况：用肥皂水检查燃气设备接头、开关、软管、截门等部位，查看有无漏气。

8、要教育好家属子女正确使用煤气。在使用煤气做饭时，不准离开操作间做其他事情，以防煤气火焰被溢出的开水浇灭，致使煤气外泄，也不要将煤气燃火控制过小，以免风吹灭灶火，引发燃气泄漏。

9、使用燃气热水器，必须按使用安全说明规定安装，沐浴室要保持通风。

10、确保煤气源始终处于安全状态，如煤气罐必须有合格证，连接罐体与灶盘之间的管线必须是正规厂家符合安全规定的产品，饭前、饭后都要查看煤气开关是否关闭等。

要做到安全用电与防电，就要知道以下一些常识：

（1）安全电压：经验证明，只有不高于36V的电压才是安全电压。家庭电路的电压是220V；动力电路的电压是380V，都超出了安全电压。

（2）用测电笔辨别火线和零线。家庭电路中的两根电线，一根是火线，一根是零线。使用测电笔时，用手接触笔尾的金属，笔尖接触电线或与电线相连的导体。如氖管发光则接触的是火线，不发光，则接触的是零线。

（3）安全用电原则：不接触低压带电体，不靠近高压带电体。

（4）日常用电应特别警惕本来不应该带电的物体带了电，本来应该绝缘的物体导了电。因此应该注意：①防止绝缘部分破损；②保持绝缘部分干燥；③避免电线跟其它金属物接触；

④要定期检查及时修理。⑤当发现有人触电时，应赶快拉断开关或用干燥木棍将电线挑开，绝不能用手去拉。

防止触电的常用技术措施有：绝缘、屏护、间距、接地、接零、加装漏电保护装置和使用安全电压等。在完善技术措施的前提下，还要严格遵守安全操作规程，从而最大限度地避免触电事故的发生。

1.绝缘、屏护和间距是最为常见的安全措施

它是防止人体触及或过分接近带电体造成触电事故以及防止短路、故障接地等电气事故的主要安全措施。

（1）绝缘。就是用绝缘物把带电体封闭起来。瓷、玻璃、云母、橡胶、木材、胶木、塑料、布、纸和矿物油等都是常用的绝缘材料。应当注意，很多绝缘材料受潮后会丧失绝缘性能或在强电场作用下，会遭到破坏，丧失绝缘性能。

（2）屏护。即采用遮拦、护罩、护盖箱闸等把带电体同外界隔绝开来。电器开关的可动部分一般不能使用绝缘，而需要屏护。高压设备不论是否有绝缘，均应采取屏护。这样不仅可防止触电，还可防止电弧伤人。

（3）间距。就是保证必要的安全距离。间距除用于防止触用或过分接近带电体外，还能起到防止火灾、防止混线、方便操作的作用。在低压工作中，最小检修距离不应小于0.1m。

2.接地和接零

接地是指与大地的直接连接，电气装置或电气线路带电部分的某点与大地连接，电气装置或其他装置正常时不带电部分某点与大地的人为连接，都叫接地。接地分为正常接地、故障接地和保护接地。正常接地即人为接地。故障接地即电气装置或电气线路的带电部分与大地之间意外的连接。保护接地即为了防止电气设备外露的不带电导体意外带电造成危险，将该电气设备经保护接地线与深埋地下的接地体紧密连接起来。由于绝缘破坏或其他原因而可能呈现危险电压的金属部分，都应采取保护接地措施。如电机、变压器、开关设备、照明器具及其他电器设备的金属外壳都应予以接地。一般低压系统中，保护接电电阻应小于4Ω。

保护接零就是把电气设备在正常情况下不带电的金属部分与电网的零线紧密地连接起来。应当注意的是，在三相四线制的电力系统中，通常是把电气设备的金属外壳同时接地、接零，这就是所谓的重复接地保护措施，但还应该注意，零线回路中不允许装设熔断器和开关。3.装设漏电保护装置

为了保证在故障情况下人身和设备的安全，应装设漏电流动作保护器。它可以在设备及线路漏电时通过保护装置的检测机构取得异常信号，经中间机构转换和传递，然后促使执行机构动作，自动切断电源来起保护作用。

4.加强绝缘

加强绝缘就是采用双重绝缘或另加总体绝缘，即保护绝缘体以防止通常绝缘损坏后的触电。从事服务业的实习生应认真学习安全用电知识，提高自己防范触电的能力。认识了解电源总开关，学会在紧急情况下关掉总电源。注意电气安全距离，不进入已标识电气危险标志的场所。

发生电气设备故障时，不要自行拆卸，要找持有电工操作证的电工维修。公共用电设备或高压线路出现故障时，要打报警电话请电力部门处理。

不乱动、乱摸电气设备，特别是当人体出汗或手脚潮湿时，不要操作电气设备。不用手或导电物（如铁丝、钉子、别针等金属制品）去接触、试探电源插座内部。

电器使用完毕后应拔掉电源插头；插拔电源插头时不要用力拉拽电线，以防止电线的绝缘层受损造成触电；电线的绝缘皮剥落，要及时更换新线或者用绝缘胶布包好。

发现有人触电时要设法及时关掉电源；或者用干燥的木棍等物将触电者与带电的电器分开，不要用手去直接救人。

使用中发现电器有冒烟、冒火花、发出焦糊的异味等情况，应立即关掉电源开关，停止使用。电吹风机、电饭锅、电熨斗、电暖气等电器在使用中会发出高热，应注意将它们远离纸张、棉布等易燃物品，防止发生火灾；同时，使用时要注意避免烫伤。

要避免在潮湿的环境下使用电器，更不能使电器淋湿、受潮，这样不仅会损坏电器，还会发生触电危险。电风扇的扇叶、洗衣机的脱水筒等在工作时是高速旋转的，不能用手或者其他物品区触摸，以防止受伤。

电器长期搁置不用，容易受潮、受腐蚀而损坏，重新使用前需要认真检查。

电器设备一定要有保护接零和保护接地装置。并经常进行检查，确保其安全可靠。

根据线路安全载流量配置设备和导线，不任意增加负荷，防止过流发热而引起短路、漏电。更换线路保险丝时不要随意加大规格，更不要用其他金属丝代替。

修理电器设备和移动电器设备时，要完全断电，在醒目位置悬挂“禁止合闸，有人工作”的安全标示牌。未经验电的设备和线路一律认为有电。带电容的设备要先放电，可移动的设备要防止拉断电线。

使用中经常接触的配电箱、配电盘、闸刀、按钮、插座、导线等要完好无损。绝缘老化、损坏的要及时更换。

手提临时照明灯，要使用不超过36V的安全电压。

遇到雷雨天气，要停止使用电视机，并拔下室外天线插头，防止遭受雷击。

雷雨天应远离高压电杆、铁塔和避雷针。避雷针要完好无损，并定期进行检测。

各项施工中要避开高压线的保护距离。

发生电器火灾时，应立即切断电源，用黄沙、二氧化碳灭火器灭火，切不可用水或泡沫灭火器灭火。

腺病毒中文操作手册

腺病毒载体操作手册中文版 腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章 AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况 3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程 3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 克隆的一般原则 4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体 5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生 5 4.2.1 共转化的一般原则 5 4.2.2 共转化方法 5 4.2.3 预期结果 5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A 细胞 6 4.4.1 细胞铺板 6 4.4.2 磷酸钙转化技术 7 第五章常用技术 8 5.1 QBI-293A细胞培养 8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖 8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存 8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生 9 5.2.1 感染QBI-293A细胞 9 5.2.2 病毒空斑形成 9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞 9 5.3 MOI测定 10 5.4 腺病毒感染力测定 10

5.4.1 X-Gal染色 11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化 11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送 11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交 13 5.5.4 Southern杂交和点杂交 13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定 14 5.5.7 功能测定 14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增 15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒 16 5.7.1 不连续密度梯度离心 17 5.7.2 连续密度梯度离心 17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集 17 5.8 病毒滴度测定 18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法 20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法 20 第六章疑难解答 22 6.1 QBI-293A细胞培养 22 6.2 感染力测定 22 6.3 转移载体克隆 23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞 25 6.6 筛选和测定 25 6.7 在QBI-293A细胞中表达 26 6.8 重组腺病毒的扩增 26 6.9 纯化 26 6.10 病毒滴度测定 27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒 Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒 AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体Amp Ampicillin 氨苄青霉素 β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶 bp Base Pair 碱基对

腺病毒中文操作手册

腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介1 第二章应用重组腺病毒的优点2 第三章AdEasyTM技术3 3.1技术概况3 3.2AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程3 第四章主要流程4 4.1将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 缩写英文全称中文全称 AdAdenovirus腺病毒 Ad5Adenovirusserotype5血清5型腺病毒AdVAdenoviralVector腺病毒载体 AmpAmpicillin氨苄青霉素 β-Galβ-Galactosidaseβ-半乳糖苷酶 bpBasePair碱基对 BSABovineSerumAlbumin小牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补DNA cccDNAClosedCircularCoiledDNA闭环螺旋DNA CPECytopathicEffect细胞病理效应CsClCesiumChloride氯化铯 DMEMDulbecco’sModifiedEagleMediumDMEM培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸EtBrEthidiumBromide溴化乙锭FBSFetalBovineSerum胎牛血清 HrHour小时 ITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复KanKanamycin卡那霉素 kbKilobases千碱基对 KDaKiloDaltons千道尔顿LBLuria-Bertani(broth)LB培养基MCSMultipleCloningSite多克隆位点 MinMinute分钟 MOIMultiplicityofInfection(Virus/Cell)感染复数mRNAMessengerRNA信使RNA MWCOMOIecularWeightCut-off PAGEPolyAcrylamideGelElectrophoresis聚丙烯凝胶电泳PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液PFUPlaqueFormingUnit空斑形成单位 piPostInfection感染后RCAReplicationCompetentAdenovirus增殖性腺病毒RITRRightInvertedTerminalRepeat右侧反向末端重复SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠TBETrisBorate/EDTA三羟甲基氨基甲烷硼酸盐/乙二胺四乙酸 TCID50TissueCultureInfectiousDose5050%组织培养感染剂量 TCPTotalCellularProtein细胞总蛋白 TETris/EDTATE溶液 wtWildType野生型 X-Gal5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-Galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 第一章简介 当今基因输送技术的发展日趋复杂，一些治疗药物（生长激素、干扰素、抗病毒和抗癌复合物）和诊断性蛋白（单克隆抗体）的设计、发展与合成需要更高效的基因输送工具。人类基因组计划和正不断发展的基因治疗同样急需发展快速有效和治疗性的分析工具。为解决这一问题，基因输送技术(通常使用病毒载体如增殖缺陷的腺病毒)通过基因工程不断发展，致力于生产基因表型药物。重组腺病毒提供了一类在基因转移系统发展中有极大潜力的新的生物治疗剂。 1953年对普通感冒病因的探索和研究导致了腺病毒的发现。迄今为止已发现了40多种不同血清型和93种不同种类的腺病毒，它们通常感染眼、呼吸道或胃肠上皮（Fields等，1996）。1977年，FrankGraham博士建立了一种细胞株，可在无辅助病毒的情况下产生重组腺病毒（Graham等，1977）。此后，腺病毒载体作为极具潜力的哺乳动物基因转移载体而得到广

禽腺病毒感染

禽腺病毒感染 禽腺病毒感染：是由禽腺病毒引起的一种亚临床性传染病，多数为长期潜伏带毒，引起症状不明显的潜伏感染，少数可致病。 禽腺病毒可以分为三群： 第Ⅰ群：包括传统的腺病毒和从鸡、火鸡、鹅和其它禽类获得的腺病毒分离物，它们具有一种共同的抗原群； 第Ⅱ群：包括火鸡出血性肠炎病毒、雉鸡（zhi俗称野鸡）大理石脾和鸡大脾病病毒（有人认为，鸡大肝大脾病的病源为：鸡戊型肝炎病毒，是戊肝病毒科戊肝 病毒属的一个成员），这些病毒共有一种与Ⅰ群病毒不同的抗原群； 第Ⅲ群：是与产蛋下降综合征（EDS—76）有关的一些病毒和从鸭获得的相似病毒，它们只是部分含有Ⅰ群病毒的共同抗原 在此，主要介绍“鸡包涵体肝炎”： 《鸡包涵体肝炎》 一、流行病学： 鸡包涵体肝炎：是由鸡腺病毒引起的鸡的一种急性传染病。 也有人称之鸡（Ⅰ群）腺病毒感染。 其主要特征是：病鸡在发生肝炎的同时，伴有出血性变化和再生不良性贫血。 种鸡发生感染时，本身可能无任何临诊症状，但所产种蛋的孵 化率下降，孵化的雏鸡死亡率显著增高。 试验感染证明，出生雏鸡可感染发病，并且雏鸡的日龄越小易感性越强。但在自然条件下，则以3—15周龄的鸡发生较多，成年鸡也可感染，但一般没有可见的临诊症状。 该病的病原体为禽腺病毒科Ⅰ群禽腺病毒属中的“鸡腺病毒”。 目前，分离到的Ⅰ群禽腺病毒共12个血清型，各型之间大多具有较一致的抗原关系。 目前认为鸡腺病毒2型、3型、4型、5型、8型等血清型是鸡包涵体肝炎的主要病原体。 病毒可以通过病鸡的粪便排出，健康鸡直接与病鸡接触或接触病鸡的粪便而感染，并且可以经蛋传染给下一代。

二、临床症状与剖检病变： 病鸡表现：精神沉郁，食欲减退或不食，翅膀下垂，羽毛蓬乱，双脚麻痹，排灰白色或粉灰色水样粪便等，临死前有的发出鸣叫声，并出现角弓反张 等神经症状。 鸡群一旦感染本病，大部分鸡在7—10天内相继发病，发病3—5天死 亡达到高峰，持续3—5天后突然停息。病程10—16天，死亡率一般 为10%左右，经蛋传递时，雏鸡的死亡率克高达40%。 剖检症状：1、皮下、胸肌和腿部肌肉有明显的出血； 2、尸体表现贫血、黄疸； 3、肝脏肿大，边缘钝圆，质地脆弱，呈黄褐色，肝被膜下有较大面积 淤血和出血灶，出血点或出现斑常呈线状或芒状，在出血点之间有 灰黄色坏死灶，使肝脏外观呈斑驳状； 4、脾脏肿大，常见有灰白色斑点； 5、肾脏肿大、苍白，表面有出血点，肾小管有尿酸盐沉积； 6、长骨骨髓呈黄白色，有的呈灰白色胶冻状。 7、组织病理学的特征性变化是肝细胞发生广泛性的脂肪变性和坏死， 细胞核内有嗜酸性包涵体。 三、临床诊断： 根据本病流行特点、临床症状、病例剖检变化可初步诊断；但要作出确切诊断必须进行实验室检测。 四、鉴别诊断： 诊断时应注意与“传染性法氏囊病”、“脂肪肝综合征”、“弯杆菌性肝炎”等相 区别： 1、传染性法氏囊病：同样有严重的肌肉出血和其他类似的症状； 但法氏囊具有肿胀或萎缩或有胶冻样水肿的特征性病变；腺 胃与肌胃交界处有新鲜的出血带； 2、脂肪肝综合征：虽然表现有突然死亡，营养良好，肝脏肿大，被膜下也有出血 点等，但多是由于饲喂高能量饲料引起的代谢性疾病，多为零 星发生，无传染性。

腺病毒详解

腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒，基因组长约25-45kb，理论上可编码22-40个基因。衣壳（capsid）呈规则的20面体结构，直径约80-110nm。衣壳含有240个六联体（hexon）、12个五联体（penton）及12根纤毛（fiber），除此之外还有其他一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2等。六联体是形成病毒衣壳20个三角形面的主要蛋白，12个顶端是5个五联体亚单位和3个纤毛蛋白构成的复合物，12根纤毛以五联体蛋白为基底由衣壳表面伸出，纤毛顶端形成头节区（knob）。五联体和纤毛的头节区可与细胞表面的病毒受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。 腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质，病毒体分子量约为175×106。病毒基因组为线状双链DNA，大约含35kb～36kb，腺病毒12、18 和31型的DNA组成中，G+C mol%最低（48%～49%），属于对动物具有高致癌性基因型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G+C mol%较高（61%），致癌性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准，根据其基因同源性将人腺病毒分为A～F等6组。 腺病毒的基因组以线性的双链DNA形式存在，由蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围，起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来，并通过蛋白VI与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA 末端蛋白（pTP）复合物（DNA-TPC）的特化的结构，与腺病毒复制密切相关。腺病毒基因组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列（ITR），是复制的起始位点。在左端ITR的3′侧有一段长约300bp的包装信号（ψ）介导腺病毒基因组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言，只有包括两端的ITR和包装信号（ψ）的约0.5kb的序列是顺式作用元件，也就是说必须由腺病毒载体自身携带，而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒（或细胞）反式补足。 病毒蛋白约11种（TP和PⅠ～PⅩ），其中有4种蛋白（病毒多肽PⅤ、PⅦ，末端蛋白TP、酶蛋白PⅩ）与病毒基因构成病毒核心，多肽PⅦ是主要的核心蛋白，如同组蛋白一样包裹病毒基因DNA。构成病毒衣壳的蛋白质约7种。多肽PⅡ是病毒衣壳中最丰富和最主要成分，六邻体是由3个PⅡ分子紧密相连组成。多肽PⅥ、PⅧ在六邻体与病毒核心之间形成连接桥，并与多肽PⅨ一起稳定着六邻体分子的晶格排列。5个分子多肽PⅢ相连构成五邻体的基座蛋白，PⅢa为五邻体的周围蛋白，也参与衣壳的组成，五邻体通过PⅤ与病毒核心相连。多肽PⅣ主要构成病毒三聚体纤突，纤突与病毒血凝活性相关，因血凝素（纤突）具有型特异性，常用血凝抑制试验（HI）对临床分离株进行分型。 分类及自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血清型，其中人腺病毒有49种，分为A、B、C、D、E 和F六个亚群（subgroup）。基因治疗常用的人的2型及5型腺病毒在血清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu (plaque forming unit)/ml，其在单个细胞中的基因组拷贝数可达104（约占细胞总DNA的10%）。病毒颗粒比较稳定，通过CsCl梯度离心可以达到1010~1011pfu/ml，满足动物实验的要求。

重组腺病毒常见问题解答(FAQs)解析

重组腺病毒常见问题解答(FAQs) ?Q1. 使用重组腺病毒需要的生物安全级别？ ?Q2. 怎么确定我所用的细胞模型可以感染腺病毒？ ?Q3. 感染细胞时腺病毒的最佳浓度？ ?Q4. 感染腺病毒时所需要的培养基的量？ ?Q5. VP，PFU，IFU的区别？哪一个能更好地反映所使用的有活性的病毒的量？ ?Q6. 病毒的滴度是如何测定的？ ?Q7. 对于体外实验（细胞实验）CsCl纯化或层析柱纯化有必要么？ ?Q8. 重组腺病毒的推荐存储条件是什么？ ?Q9. 腺病毒表达系统承载外源基因的容量？ ?Q10. 腺病毒有多种血清型，哪一种是基因传递中最普遍使用的？ ?Q11. 什么是RCAs？ ?Q12. 目前存在的许多病毒载体系统，包括：腺病毒、逆转录病毒和慢病毒，针对我的实验应该使用哪个系统？ Q1.使用重组腺病毒需要的生物安全级别？ 答：我们所提供的重组腺病毒是E1/E3区缺失的复制缺陷型病毒。根据NIH官方的参考信息，重组腺病毒的生物安全等级被确定为II级，您只需要BL-II级实验设施，值得注意的是，大多数实验室都具备BL-II级的实验设施。野生型腺病毒可复制，能引起感冒和很强的免疫反应，通常不会引起很严重的疾病。要想获得更多生物安全信息，请参考网站https://www.wendangku.net/doc/695373596.html, 返回Q2.怎么确定我所用的细胞模型可以感染腺病毒？ 答：腺病毒有很广泛的宿主范围。它可以感染人类或者其他哺乳动物细胞系或原代细胞，包括可分裂的和不可分裂的细胞。只有少数细胞系不被感染。一些淋巴细胞系对腺病毒有更强的抵抗性，因此需要大量的病毒来感染细胞。为了客户的

方便，我们提供含有报告基因的病毒，如Ad-CMV-B-gal 和Ad-CMV-GFP从而方便的进行您的预实验。 返回 Q3.感染细胞时腺病毒的最佳浓度？ 答：要得到最佳的实验结果，确定腺病毒的最佳用量是非常重要的。如果用量不足，那么不能达到100%的感染效率，如果用量太高，会对细胞有毒害作用或者其他不可预测的效应。我们应该尽量用最小浓度的病毒来达到100%的基因传递效率。这个最佳的浓度因不同的细胞类型而有显著差异。为了确定你的细胞系的最适病毒用量，可以用带报告基因的腺病毒做预实验，如AdCMV-B-gal 或者AdCMV-GFP。用不同稀释倍数的报告基因病毒感染细胞，在感染1-2天后检测感染效率。可以通过B-gal染色或者通过在荧光显微镜下观察细胞的GFP的表达情况来确定可达到100%感染效率但又不会引起细胞表型变化病毒浓度范围。 我们已经针对多种细胞系做了预实验，加入已混合病毒的培养基，6-8小时或者过夜。对于大多数细胞系来说病毒浓度在2 x 105 - 1 x 106 IFU/PFU (infectious unit)/ml培养基都能得到10%的感染效率而且不会有副作用。我们推荐在您实验系统中用报告基因病毒重新摸索一下最适培养基用量。 返回 Q4.感染腺病毒时所需要的培养基的量？ 答：作为参考，我们推荐您按照如下的量加培养基（已混入病毒）： 10cm培养皿：8-10ml/孔6孔板：1ml/孔12孔板：0.5ml/孔24孔板：0.2ml/孔 返回 Q5. VP，PFU，IFU的区别？哪一个能更好地反映所使用的有活性的病毒的量？ 答：VP(Viral particles) 反映病毒颗粒的总数（包括活病毒和死病毒），由于在病毒制备过程中，每次活/死病毒比率都不同，VP并不能反映有活性的病毒的数量。 PFU（plaque formation unit）代表可感染的或者活病毒的数量。能反映实验中所需要的病毒的量。 IFU（infectious unit）相当于PFU 大多数情况下所制备的病毒，VP/PFU比值在20:1到50:1范围。 应用VP（viral particles）做单位会与实际应用的活病毒的数量有很大出入。用IFU或者PFU做单位会得到比较一致的结果。 返回

腺病毒常见问题与解答

腺病毒常见问题与解答 1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的 外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、我的试验需要多少总量的腺病毒载体？ 腺病毒介导外源基因的基因治疗研究一般分为体外培养细胞试验(体外试验)和动物试验(体内试验)两部分，不同的实验设计所需要的病毒量也不尽相同。根据经验，完成一个完 整的肿瘤治疗实验需要腺病毒的病毒量总量约为3×1012 VP左右. 3、如何提高腺病毒的活性？ 提高腺病毒的活性，关键应该是在病毒包装过程和扩增过程。纯化过程只是去掉有缺陷的病毒和细胞碎片等容易引起机体免疫反应的过程，如果扩增的病毒滴度高，那么纯化后就会更高的。 4、克隆到转移载体的基因中的5’和3’UTR（未翻译区）的额外的碱基会影响蛋白表达吗？ UTR尽可能短一些，特别是在5’要避免在mRNA里形成二级结构。在起始密码子ATG 前面可以加一小段（6-9bp）的碱基序列可以增强目的基因的表达，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。 5、如何判断腺病毒载体是否能高效感染某种细胞？ 参照文献报道是很简单的办法，也可以用带报告基因的腺病毒先行预实验。 Ad5能高效感染绝大多数人类、小鼠等的体细胞（包括分裂和非分裂细胞），比如肝、肌肉、神经组织等。但对血液系统来源细胞和某些肿瘤细胞，比如乳腺癌、白血病细胞等，感染效率较低。 6、腺病毒载体在体外实验（in vitro）中应注意哪些问题？ 1）由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同。可根据文献报道或用带报告基因的腺病毒载体判断病毒用量。 2）在细胞处于对数生长期时感染病毒效果较好。避免在消化细胞后立刻感染病毒，因为此时细胞膜上的病毒受体往往受到了暂时的破坏。培养过夜后再感染病毒，效果较好。 3）选择适当的转导MOI（病毒感染单位数/细胞数），可以在MOI为0.1~1000范围内进行试验( 10倍比稀释)。 4）感染病毒时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。如24孔板可用200ul，6孔板1ml。 5）感染时间为90分钟，每15分钟轻轻晃动培养液一次，以混匀。 6）选择适当表达检测时间，一般感染病毒24h后就能检测到目的基因的表达，48小时表达达到较高水平。 7、用于体内试验的腺病毒，是否要求纯化？ 是的，病毒纯化是很必要的。因为细胞裂解液包含有缺损颗粒、大量的腺病毒fiber和penton蛋白（细胞毒素）、培养基、血清以及细胞碎片。这些杂质如果被注入动物体内，会

第十三章 腺病毒科(Adenoviridae)

第十三章腺病毒科（Adenoviridae） 腺病毒是1953年Rowe等在用扁桃体组织块培养物分离“感冒病毒”的过程中，发现在组织块长出的新组织中，还没有接种病料，就逐渐出现细胞病变。引起这种细胞病变的因子就是后来证明的人的1、2、5、6型腺病毒。翌年，Hilleman等（1954）从急性呼吸道疾病患者的咽喉洗液中也分离到同样的病毒。此后，相继由人、猴、牛、猪、马、犬、羊、小白鼠和鸡分离出将近80个血清型的腺病毒。1956年，Enders等根据病毒经常存在于腺体，且第一次就是在腺体组织中分离获得的事实，提出了“腺病毒”这一名称，这一建议随后为国际病毒命名委员会所接受。 腺病毒在病毒学中的重要性有五个方面：第一，它可引起人类许多急性感染，包括流感样疾病，急性咽炎，婴幼儿致死性肺炎，结膜炎，角膜结膜炎，膀胱炎以及严重的肠炎等；第二，它可引起人类扁桃体、腺样体和其它淋巴组织的隐性持续性感染；第三，迄今所研究的腺病毒均可使非许可性鼠细胞发生转化，有些型别甚至在新生地鼠和小鼠有致癌性；第四，腺病毒是研究真核基因表达的良好模型，这是因为腺病毒易于培养和纯化，在感染过程中可以产生大量的病毒RNA。其次，它的基因组具有中等程度的复杂性，其复制与转录依赖于细胞的聚合酶，所以，在病毒基因的表达控制方面，可以模拟宿主细胞的基因表达机制，腺病毒基因组可称为一个微型染色体，实际上很多真核基因的结构与表达调控机制，是从研究腺病毒获得的；第五，它是缺损性DNA病毒――腺联病毒的辅助病毒。 第一节腺病毒科的分类与毒粒结构 一、腺病毒的分类 腺病毒在自然界分布广泛，迄今所知至少有93个型别，腺病毒科可分为哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)和禽腺病毒属(Aviadenovirus）两个属。其成员均为脊椎动物腺病毒。 （一）哺乳动物腺病毒属 根据其毒粒结构、生物学、生化和免疫学特性，哺乳动物腺病毒又可分为A～F6个亚属。人腺病毒有49个型，以h1～49表示，分属于6个亚属中；猴腺病毒有27个型，牛腺病毒至少12个型，猪4个型，马1个型，犬2个型，羊5个型以及小鼠2个型。 人类腺病毒各亚属与人类疾病的关系

腺病毒肺炎有哪些表现及如何诊断

腺病毒肺炎有哪些表现及如何诊断？ 【临床表现】 病灶性或融合性坏死性肺浸润和支气管炎为本病主要病变。肺炎实化可占据一叶的全部，以左肺下叶最多见。肺切面上从实化区可挤压出黄白色坏死物构成的管型样物，实化以外的肺组织多有明显的气肿。镜检所见病变，以支气管炎及支气管周围炎为中心，炎症常进展成坏死，渗出物充满整个管腔，支气管周围的肺泡腔内也常有渗出物，大都为淋巴、单核细胞、浆液、纤维素，有时伴有出血，而中性白细胞则很少，肺泡壁也常见坏死。炎症区域的边缘可见支气管或肺泡上皮增生，在增生而肿大的上皮细胞核内常可见核内包涵体，其大小近似正常红细胞，境界清晰，染色偏嗜酸性或嗜两色性，其周围有一透明圈；核膜清楚，在核膜内面有少量的染色质堆积；但胞浆内无包涵体，也无多核巨细胞形成，因此，在形态学上可与麻疹病毒肺炎及肺型巨细胞包涵体病区别。此外，全身各脏器如中枢神经系统及心脏均有间质性炎症与小血管壁细胞增生反应。 根据1959～1963年北京245例经病毒学证实的3、7型婴幼儿腺病毒肺炎的分析，其临床特点可概述如下。 1、症状

（1）起病：潜伏期3～8天。一般急骤发热，往往自第1～2日起即发生39℃以上的高热，至第3～4日多呈稽留或不规则的高热； 3/5以上的病病例最高体温超过40℃。 （2）呼吸系统症状：大多数病儿自起病时即有咳嗽，往往表现为频咳或轻度阵咳，同时可见咽部充血，但鼻卡他症状较不明显。呼吸困难及发绀多数开始于第3～6日，逐渐加重；重症病例出现鼻翼扇动、三凹征、喘憋（具有喘息和憋气的梗阻性呼吸困难）及口唇指甲青紫。叩诊易得浊音；浊音部位伴有呼吸音减低，有时可听到管性呼吸音。医学教育`网搜集整理初期听诊大都先有呼吸音粗或干罗音，湿啰音于发病第3～4日后出现，日渐加多，并经常有肺气肿征象。重症病儿可有胸膜反应或胸腔积液（多见于第2周），无继发感染者渗出液为草黄色，不混浊；有继发感染时则为混浊液，其白细胞数多 超过10×109/L. （3）神经系统症状：一般于发病3～4天以后出现嗜睡、萎靡等，有时烦躁与萎靡相交替。在严重病例中晚期出现半昏迷及惊厥。部分病儿头向后仰，颈部强直。除中毒性脑病外，尚有一部腺病毒所致的 脑炎，故有时需作腰穿鉴别。 （4）循环系统症状：面色苍白较为常见，重者面色发灰。心律增快，轻症一般不超过每分钟160次，重症多在160～180次，有时达200次以上。心电图一般表现为窦性心动过速，重症病例有右心负荷增加和T波、ST段的改变及低电压，个别有1～2度房室传导阻滞，

人腺病毒分子生物学常用检测技术

Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 11-16 Published Online June 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,/journal/amb https://https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,/10.12677/amb.2017.62002 The Molecular Biological Techniques for Human Adenovirus Detection Ye Li1,2, Tuo Dong1,2, Vladimir I. Zlobin3, Oleg Reva4, Zhangyi Qu1,2* 1Department of Microbiology, School of Public Health, Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 2Department of Natural-Foci Diseases, Institute of Environment-Associated Diseases, Sino-Russia Joint Medical Research Centre, Harbin Heilongjiang 3Research Institute for Biomedical Technologies, Irkutsk State Medical University, Irkutsk, Russia 4Department of Biochemistry, Bioinformatics and Computational Biology Unit, University of Pretoria, Pretoria, South Africa Received: May 12th, 2017; accepted: May 30th, 2017; published: Jun. 2nd, 2017 Abstract Adenovirus is one of the major viruses causing human respiratory diseases. The effective and rapid method in adenovirus detection is helpful to strengthen the surveillance of adenovirus in-fection, to investigate the epidemic trends timely, and to control the virus infection. The current molecular biological methods for adenovirus detection both used in laboratory and clinical are reviewed in this paper. The principle, characteristics and application of these techniques are commented. Keywords Adenovirus, PCR, Molecular Biological Detection 人腺病毒分子生物学常用检测技术 李烨1,2，董妥1,2，Vladimir I. Zlobin3，Oleg Reva4，曲章义1,2* 1哈尔滨医科大学，公共卫生学院，卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨 2中俄医学研究中心，环境相关疾病研究所，自然疫源性疾病研究室，黑龙江哈尔滨 3俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学，生物医学技术研究所，伊尔库茨克，俄罗斯 4南非比勒陀利亚大学，生物信息学与计算生物学部，生物化学系，比勒陀利亚，南非 收稿日期：2017年5月12日；录用日期：2017年5月30日；发布日期：2017年6月2日 *通讯作者。 文章引用: 李烨, 董妥, Vladimir I. Zlobin, Oleg Reva, 曲章义. 人腺病毒分子生物学常用检测技术[J]. 微生物前沿,2017,

腺病毒和腺相关病毒有哪些区别

腺病毒和腺相关病毒有哪些区别？ 腺病毒和腺相关病毒（AAV）是用于基因传递的两种不同类型的病毒载体。这两个重组病毒系统都具有感染广泛宿主的能力，包括分裂和非分裂细胞，而无需与宿主基因组整合。它们两之间有几个主要区别：包装能力、水平，基因表达的起效和持续时间以及免疫应答。 腺病毒简介 腺病毒有约8.5千碱基的容量，具有高水平的蛋白质表达和瞬时基因表达。表达的发作时间可早于感染后16-24小时。腺病毒系统的局限性主要在于靶细胞的高免疫应答。尽管如此，由于它们对大多数组织有高效转导作用，仍被广泛用于研究中。 腺病毒不能整合至宿主基因组，仅能瞬时表达。它可以对分裂期及非分裂期细胞进行感染。其包装片段至多8 kb，浓缩滴度至多为1011-1012TU/mL，片段越大，滴度越低，表达水平还是比较高的。 腺病毒优势 宿主范围广：能够感染分裂期细胞与静止期细胞；对上皮细胞有高度嗜性，尤其适用于感染原代细胞、悬浮细胞等难转染细胞类型 感染效率高：优于其他病毒载体和转染系统的高感染能力，能达到近100%的效率 包装容量大：最高可插入7.5 kb的外源片段 表达水平高：1-2d即开始高水平表达 安全系数高：去除病毒蛋白编码序列，降低细胞毒性和免疫反应；双质粒转染系统，生物安全性高 无整合风险：无插入致突变性 腺相关病毒简介 AAV的包装容量约为4.5千碱基，蛋白质表达水平相对较低，有长效基因表达的潜力。 AAV的趋向性也可以通过不同的血清型增强。 AAV的主要缺点是其对目的基因的包装容量较小，并且表达起效较晚（体外2-7天，体内3-21天），然而，该传递系统所产生的免疫应答水平却非常低。 腺相关病毒可以稳定整合至宿主基因组，并且可以在特定基因产物存在的条件下整合至人类19号染色体中的特定位点。它能对分裂期及非分裂期细胞进行感染。其包装片段至多8 kb，浓缩滴度至多为1011-1013TU/mL，片段越大，滴度越低。腺相关病毒可以应用Tet-on等诱导表达系统，表达水平也是比较高的。 腺相关病毒优势

腺病毒的一些常见问题及解答----整理自丁香园

汇总了腺病毒的一些常见问题及解答！ 1.目前，对于基因治疗的载体选择，很难有一个统一的结论，文章也很多，我将在如下给出。 本人认为，无论选择哪种载体，关键在于此载体在局部的表达效率。无论是采用IN VI VO 或者EX VIVO的方法，因为我们最终的目的是要在局部表达我的目的基因，并且使其具有一定的作用。而对于载体的副作用，目前较为公认的就是病毒载体转染效率高，但副作用大；质粒载体毒性小，但转染效率比较低。 同时，对于目前所常用的一些带有报告基因的表达载体如BD公司所开发的系列载体，pEGFP、pDsRed、pEYFP和pECFP等： https://www.wendangku.net/doc/695373596.html, 这些载体如果用于细胞水平的检测，也许会更加的方便、直观，但是，如果用于体内的基因治疗，那就不是一个理想的载体了。而传统的表达载体如INVITROGEN公司（https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,)的pCDNA载体系列，会更好一些。 同时，为了获得更加高效的表达，一些公司也开发出了具有信号肽的表达载体，以增加外源基因的分泌表达。 https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,/vcore/Plasmids/pUMVC6a.htm https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,/vcore/Plasmids/pUMVC7.htm 正如一个疾病的治疗一样，治疗的方法越多，就证明还没有一个最有效地治疗手段。基因治疗的载体也是同样，很难说哪个载体具有高转染、高表达、低毒性的全部优点。 以上是本人的一点愚见，还请各位同道指正。 2.转染过小鼠肝癌细胞H22，请赐教：用什么方法可以达到最佳效果，脂质体、电转还是重组病毒？如果用脂质体，哪家的最好？ H22细胞为悬浮细胞，用病毒（逆转录病毒和腺病毒）最为理想，一是转染效率高， 二是不用筛选直接用于实验。但逆转录病毒的转染效率并不能达到100%，且影响因 素多，而腺病毒感染效率高，几乎可达100%，但只能短期表达（7－10天），随着细 胞传代，外源基因会逐渐丢失。 当然，H22也可用脂质体进行转染，筛选应在96孔板上进行，由于培养液少、细胞 相对静止，两周后可见细胞克隆生长，在倒置显微镜下用吸管吸取克隆，进行扩大 培养。 3.重组腺病毒作基因治疗，因为不是很了解，用AdEasy系统可以吗？具体的 实验步骤是来自什么地方？主要细胞及试剂的来源？ .BIOgene公司有整个系统，从质粒到细胞都有，我AdEasy的基本原理请参阅文献 https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,A Vol.95.pp.2509-2514,March 1998 4.以腺病毒为载体做肿瘤细胞的基因转染，查文献，病毒滴度测定用噬斑法，但所用细胞不统一，是否有统一规定？就用肿瘤细胞来测行吗？ 只有能反式提供E1的细胞才能用来测腺病毒滴度，一般用HEK293细胞，用肿瘤细胞肯定不能形成噬斑。1）腺病毒E1区有转化细胞能力，出于安全性的考虑，也是为了增加载体的包装容量，现在通行的腺病毒载体是E1区缺失的。 2）由于E1区是复制必需区，所以需要包装细胞系反式提供E1蛋白，这种细胞系最常见的就是293系列和911细胞。 3）病毒感染性滴度的测定方法有几种。一般是通过噬斑记数来测定的，所以需要能够支持病变的细胞基质。如果你的病毒带有荧光或颜色标记，可以用一般的细胞系进行滴度测定，前提是病毒可以感染这种细胞。

1.1.6+腺病毒感染

疾病名：腺病毒感染 英文名：adenovirus infections 缩写： 别名： 疾病代码： ICD ：B97.0 概述：可引起人、猿、马、猪、羊、狗等感染。实验发现可引起动物致癌；未证实其可致人类肿瘤,但可引起人类多种感染性疾病。 流行病学：病毒由病人及隐性感染者通过粪便及呼吸道分泌物排出,可经气溶胶、密切接触及粪-口途径传播眼、鼻、口黏膜为入侵途径。感染者半数无症状,儿童的呼吸道疾病约5%～10%由腺病毒引起。 病因：目前发现腺病毒有6个亚型(A～F)和47个不同的血清型(按中和试验分型)。已知约20余种亚型可感染人类。病毒为直径70～80nm 的20面体衣壳,内核含双股DNA。对热和酸不稳定。由于不含脂质,对胆盐等脂质溶解剂抵抗力强,故能在肠道中存活。不同亚型可引起不同感染,见表1。 发病机制：呼吸道病毒侵入人的呼吸道表面的纤毛上皮细胞后,在其内复制和扩散并直接引起受染细胞损伤,造成局部病变或产生全身毒血症状。某些病毒感染的组织损伤可能由机体免疫反应所介导,如呼吸道合胞病毒对呼吸道纤毛上皮细胞的直接破坏最轻,但能引起婴幼儿严重呼吸道疾病；最易罹患的年龄正是母传C D D C D D C D D C D D

抗体水平最高的阶段；接种疫苗后反而使自然感染者的病情加重等均提示其发病可能与免疫反应有关。呼吸道病毒感染的病理改变有鼻、咽、喉黏膜充血、水肿、渗出与单核细胞浸润,部分细胞可发生变性、坏死、脱落。上皮细胞胞质或胞核内可查见包涵体。病变程度与病毒种类、型别和感染部位有关。轻者数天后上皮细胞可再生而恢复正常。如病变累及细支气管,可发生上皮细胞坏死、剥脱,细支气管壁有广泛单核细胞浸润,纤维蛋白、细胞碎片和黏稠的黏液可堵塞管腔而致肺不张、肺气肿。病毒性肺炎最初表现为纤毛进行性减少,上皮细胞空泡形成,继之上皮细胞变性,肺泡实质性坏死、萎陷,肺泡壁也可见坏死和增厚,间质水肿和单核细胞、淋巴细胞浸润。并发细菌性感染时,可见黏膜充血,中性粒细胞浸润和黏液脓性分泌物,严重者可发生肺脓肿、败血症及多个器官的化脓性变化。 临床表现：潜伏期4～5天。 1.儿童中最常见的临床表现 (1)呼吸道感染：鼻炎为婴儿腺病毒感染最常见的症状。这个年龄组中偶可引起暴发性支气管炎和肺炎,部分病儿发生百日咳综合征。 (2)咽结膜炎热(pharyngo-conjunctival fever,APC fever)：腺病毒3、7型引起为多,夏季可发生小流行,与游泳池水传播有关。发病急,发热38℃以上,出现咽炎、鼻炎、眼结膜炎及颈淋巴结炎。球结膜及睑结膜可见颗粒状突起、红肿,常为单侧,双侧者常为一侧较重。症状延续1～2周,无后遗症。一般不伴支气 管炎及肺炎。 (3)出血性膀胱炎(hemorrhagic cystitis)：大多由腺病毒11、21型引起,男孩多见,无明显季节性。可有血尿、尿频、尿急及排尿困难、肉眼血尿,约3～7天,镜下血尿可持续2周左右。 (4)其他：婴儿腹泻、心包炎、慢性间质性纤维化、风疹样疾病及先天性畸形曾发现与腺病毒感染有关。有报道器官移植及免疫缺陷者腺病毒感染后,除引起呼吸道、泌尿道感染,还可致脑炎等中枢神经系统感染。 2.成人常见的临床表现 (1)呼吸道感染：常见为非典型肺炎的表现,可有发热、咳嗽、咽痛、流涕、肺部啰音。X 线胸片示间质性肺炎改变,多为单侧,下肺野较多见,可发生少量胸膜渗出。病程常自限性(约1～2周),罕见继发细菌感染或致死病例。 C D D C D D C D D C D D

重组腺病毒生产技术研究进展

2004 年 10月The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2004 重组腺病毒生产技术研究进展 祁丽，顾铭，丛威 (中国科学院过程工程所生化工程国家重点实验室，北京 100080) 摘要：目前基因治疗，尤其是对癌症的基因治疗越来越多地得到人们的关注. 随着基因工程技术 的发展，对癌症在基因水平上的认识不断深化，发现了很多对治疗癌症有帮助的基因，但临床面 临的最大问题就是如何建立一个安全、高效、实用、可重复的基因转移系统，将这些治疗基因有 效地导入靶细胞. 人们构建了各种载体，重组腺病毒就是基因治疗的重要载体之一. 能否生产出大 量高质量的腺病毒载体是制约体外实验和临床实验的关键因素. 本文从感染机制、生产和纯化计数 等几个方面讨论生产重组腺病毒载体的进展. 关键词：基因治疗；重组腺病毒载体 中图分类号：Q952 文献标识码：A 文章编号：1009?606X(2004)05?0475?06 1 前言 基因治疗是近年来兴起的一种针对单基因和多基因遗传病、心血管疾病、恶性肿瘤和一些传染病的新的治疗模式，目的是将外源治疗基因导入靶细胞，在体内产生疗效. 基因导入系统是基因治疗的核心技术，可分为病毒载体系统和非病毒载体系统. 到目前为止，病毒载体在基因治疗中仍然是最有效的基因导入系统[1]. 腺病毒就是已经用于基因治疗的载体之一，与其它病毒载体相比，腺病毒载体一个主要优势是在包装细胞中能获得较高的病毒滴度，能感染分裂期和非分裂期的细胞，目前应用最多的是Ad5[2]. 用外源DNA置换出一定长度的病毒基因片断及获得重组的腺病毒，根据腺病毒载体中的病毒基因置换程度，可将其分为第一代、第二代和第三代. 第一代腺病毒载体去除了基因序列中的E1和E3区，包装外源基因的能力较小，在8.5 kb以内，主要用于单基因疾病的治疗[3]，缺点是导入基因的表达时间短和引起宿主的免疫反应，导致直接的细胞致病变作用(Cytopathic Effects，CPE)，另外，在293细胞内同源重组作用导致野生腺病毒(Replicative Competent Adenovirus，RCA)的产生[4]. 为了避免上述缺点，第二代腺病毒载体进一步去除了E2a, E2b或E4，载体的容量和安全性比第一代有所改进，但是其介导的外源基因的转染和表达时间并没有明显延长，而且产生重组病毒滴度低，另外保留的病毒基因仍有低水平的表达并引起细胞免疫反应[5,6].第三代腺病毒缺失全部或大部分腺病毒基因，或者包装腺病毒微染色体系统，这种载体缺失了病毒蛋白，所以很大程度上降低了细胞的免疫源性，并且外源基因的表达时间明显延长，但对包装细胞的要求很高，分离辅助病毒困难. 至今在临床中应用的腺病毒载体主要是第一代腺病毒载体. 重组腺病毒的生产过程主要包括包装细胞的培养、病毒感染、病毒的分离纯化和病毒计数及滴度测定等几个主要步骤. 以下从腺病毒的感染机制、生产和纯化计数几个方面论述重组腺病毒载体的生产技术. 收稿日期：2003?09?28，修回日期：2003?11?05 基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(编号: 2001AA217121) 作者简介：祁丽(1979?)，女，河南省原阳县人，硕士研究生，生物工程专业；丛威，通讯联系人，E-mail: weicong@https://www.wendangku.net/doc/695373596.html,.

腺病毒的包装和感染PDF

腺病毒的包装，纯化和感染 技术背景：Adeasy系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1基因的293细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒性问题。 所需试剂： ●293细胞； ●重组好的腺病毒质粒； ●Pac I限制性内切酶； ●质粒回收相关试剂； ●细胞培养、转染相关试剂； ●TBS：10mM Tris,0.9%NaCl,pH8.1; ●40%CsCl：28.45g CsCl溶于42.7ml的TBS中，4度保存； ●15%CsCl：9.085g CsCl溶于47.69ml的TBS中，4度保存； ●Beckman离心管：14*89mm，SW41转头； ●Polybrene(sigma)，10mg/ml； ●透析袋：Spectrum Co.（成卷供应，带少量甘油，硫化物与重金属）， MW=8000~14400； ●灭菌甘油。 操作流程： 1.293细胞（E1-transformed human embryonic kidney cells在转染前24小时接种 于1或2个60mm培养盘中，使之在转染时细胞汇合率为50-70%； 2.在转染前，用Pac I处理目的质粒（一般一个60mm细胞盘需要6μg DNA）。 处理后质粒用乙醇沉淀并重悬于20μl无菌水中； 3.用PEI或其他转染试剂将6μg Pac I处理过的质粒转染细胞；