食品及饲料中马属动物源性成分的PCR检测研究

食品及饲料中马属动物源性成分的

PCR 检测研究

*

陈 颖

1**

吴亚君1 徐宝梁1 马 颖1 董 萌

2

(1中国进出口商品检验技术研究所 北京 100025 2四川大学 成都 610044)

摘要 采用马和驴mtDNA 中特异性片段引物,利用聚合酶链反应技术(polymerase chain reac tion,PC R),建立了饲料中马属动物源性动物成分的快速检测方法。通过内切酶Hae ó、Sau 3A 和Alu ?可对扩增结果进行验证并能够区分马成分和驴成分。扩增产物测序结果表明:驴扩增产物序列与数据库序列完全一致,马样品扩增产物与数据库序列的同源性达99%。该方法的检测低限分别为015%(w P w)和0125%(w P w),可作为食品及饲料中马属动物成分鉴别检测的有效方法。关键词 饲料 马属 动物源性成分 PCR 检测收稿日期:2003-08-11 修回日期:2004-03-05

*科技部重要技术标准专项资助项目(2002BA906A25-08),科技部社会公益研究专项资助项目(202DIA50034)**电子信箱:yqychen@https://www.wendangku.net/doc/6c5671891.html,

肉骨粉是牲畜屠宰后其毛纤维、皮革、角质、骨骼、脏器等非实用组织经由高温蒸煮后再挥干水分的成品,是极其重要的动物蛋白饲料,在养殖领域使用极为广泛。食用以动物源性成分为饲料的肉骨粉,一直被认为是牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy,BSE )得以传播的主要途径。自1986年首例疯牛病在英国报道以来[1]

,特别是发现人新变异型克-雅氏病与疯牛病有关后[2]

,这一疾病已成为全世界关注的公共卫生问题。迄今为止,几乎每年都有发现疯牛病的报道。英国、美国、欧盟等世界各国和国际组织已纷纷出台政策,禁止在动物饲料中含有反刍动物成分,反刍动物饲料中含有哺乳动物肉骨粉,或禁止肉骨粉、血粉用于制作所有牲畜的饲料

[3~5]

。因此,开

展饲料中动物源性成分鉴定检测工作对防止B SE

传播,同时也对防止不法商家瞒报肉骨粉成分、干扰正常的进出口贸易,都具有非常重要的意义。目前,饲料中动物源性成分鉴别的主要方法有

物理、化学、免疫学和分子生物学方法[6~8]

。其中尤以分子生物学方法最为快速、灵敏。意大利研究者利用PCR 技术检测牛线粒体DNA 片段以检测动物源性饲料中牛源性成分并对PCR 产物进行测序

确证,检测灵敏度可达01125%[9]

;美国也建立了应

用PCR 技术快速检测动物源性饲料中牛源性成分

的方法[10]

。日本研究者利用1条正向引物和6条反向引物,建立了快速、简单PCR 方法,样品经120e 处理30min 后,尚能鉴别牛、猪、鸡、绵羊、山羊肉制品,但不能检测马肉制品[11]

。国内有关于

饲料中牛、羊[12,13]

、猪、鸡、马源性成分的检测报道[14]

,但对马的检测尚缺乏简便的验证方法,且不能区分马和驴。

本研究拟采用马属动物线粒体DNA 特定片段引物,建立饲料中马属动物成分(马和驴)的PCR 检测方法,旨在能快速、简便、准确、特异灵敏地检测出饲料中马属动物(马和驴)成分,达到严把国门、快速通关的目的。

1 材料与方法

111 材 料

11111 实验样品 驴肉、鸡肉、牛肉、狗肉、羊肉、兔肉、猪肉、鱼肉、骆驼肉、鹿肉、猪肉肠、牛肉肠等均购自北京市场,其中驴肉、兔肉、狗肉为半加工肉制品,鸡肉、羊肉、牛肉、猪肉、鱼肉为鲜肉;骆驼肉、鹿肉为冻肉;新鲜马肝来自中国进出口商品检验技术研究所食品检测中心,马肠来自新疆乌鲁木齐市和阿勒泰市,牛肉卷来自吉林省延吉市工商局,肉骨粉为本实验室保存的送检样品。

11112 主要试剂 引物由上海博亚生物技术公司合成;Wizard Genomic DNA purification 试剂盒购自Promega 公司;Taq 酶、dNTPs 、PCR 缓冲液、溴化

第24卷第5期

中 国 生 物 工 程 杂 志

CHINA BIOTEC HNOLOGY

2004年5月

乙锭、分子量Marker(100~600bp)购自鼎国生物工程有限公司;琼脂糖(电泳纯)购自上海生工公司。11113主要仪器设备SQ2119多功能食品加工机(上海帅佳电子科技有限公司);5804R型冷冻离心机(德国Eppendorf公司);DNA扩增仪(GeneAMB PC R system9700);凝胶成像仪(Gene Genius)。

112方法

11211样品的制备模拟肉骨粉的加工工艺,将各类样品切成薄片,90e烘干24h,用食品加工机粉碎成干粉,备用。将马肝粉和驴肉干粉分别用鱼肉粉稀释至含量为5%、2%、1%、015%和011%的马成分样品和驴成分样品,以检测灵敏度。

11212DNA的提取取样品100m g加入115ml离心管中,在管中加入900L l Wizard Genomic DNA purification试剂盒中的Nuclei Lysis Solution,以下DNA提取步骤按试剂盒说明书进行。最终的50L l DNA提取液作为模板DNA于-20e保存,备用。11213PCR扩增马属动物扩增所用引物为: Equu294-15c tgccacagttggataca tcaac3c,Equu294-25c attga gattaggc gattgtt3c[14]。PC R扩增反应体系为50L l,各组份含量分别为10@PC R缓冲液5L l, 10mmol P L dNTP1L l,10L mol P L引物各1L l,Taq酶2U,模板DNA100-200ng。扩增条件为94e预变性3min,然后以94e,30s;63e,30s;72e,45s,进行35个循环,最后于72e延伸7min。11214PC R扩增产物的电泳检测PCR扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。

11215限制性内切酶酶切分析扩增产物的酶切在20L l的反应体系中进行:内切酶1L l(10U P L l),10 @酶切缓冲液2L l,扩增产物10L l,加水补足至20L l,37e反应2h。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果。

用限制性内切酶Haeó酶切扩增产物,对结果进行初步验证;用限制性内切酶Sau3A和Alu I区分马成分和驴成分。

11216PC R产物的序列测定马肝粉和驴肉粉扩增产物由上海博亚生物技术公司测序。

11217食品及饲料中马属动物成分的检测运用本文所使用的引物、扩增反应条件及驴、马成分酶切确证方法,对市售的肉肠、肉卷、马肠、送检的肉骨粉等样品进行检测,以验证本文所建立方法的可靠性和准确性。

2结果与分析

211马属动物特异性扩增结果

本实验分别对驴肉、马肝、鹿肉、牛肉、羊肉、兔肉、鸡肉、鱼肉、骆驼肉、猪肉等10种动物样品进行PCR扩增,结果如图1所示。可以看出:该引物能够扩增出驴和马成分,扩增产物大小均为294bp,而其它动物扩增结果和空白对照均为阴性,检测结果表明该方法能够特异检测马属动物(马、驴)

成分。

图1马属引物对各种动物成分样品的扩增结果

1:DN A分子量Marker;2:驴肉;3:马肝;4:鹿肉;5:牛肉;6:羊肉;7:兔肉;8:鸡肉;9:鱼肉;10:骆驼肉;11:猪肉;12:空白对照

Fig.1PCR amplification of animal meat meal with Equus specific primer

212马属动物扩增结果的验证检测

21211限制性内切酶酶切验证通过对马属动物

引物间序列的限制性内切酶分析,使用Haeó酶切

该片断可得到大小分别为206bp和88bp的2个片

段。对马肝和驴肉扩增产物进行限制性内切酶酶

切,得到与预期片段大小相吻合的片断(图2),从

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第5期陈颖等:食品及饲料中马属动物源性成分的PCR检测研究

图2 马、驴扩增产物Hae ó酶切结果

1,7:分子量Marker;2:马扩增产物;3:马扩增产物酶切结果;4:驴扩增产物;5:驴扩增产物酶切结果

Fig.2 Restriction endonuclease enzyme digestion of PCR products from horse and donkey with Hae

ó

图3 马、驴扩增产物序列比较

Horse 1,Donkey 1:数据库中引物间马、驴序列;Hors e 2,Donkey 2:马、驴扩增产物测序结果

为引物位置,

为马扩增测序产物与数据库中的不同碱基;*为马驴序列不同的碱基

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中 国 生 物 工 程 杂 志第24卷

图4马属动物扩增产物内切酶Sau3A和Alu I检测结果1:DNA分子量Marker;2:内切酶Sau3A对马扩增产物的酶切;3:内切酶Sau3A对驴扩增产物的酶切;

4:内切酶Alu I对马扩增产物酶切;5:内切酶Alu I对驴扩增产物酶切

Fig.4Restriction endonuclease enzyme digestion of PCR products from Equus with Sau3A and Alu I

而可作为马属动物扩增结果验证的方法之一。21212测序验证通过对扩增产物进行序列测定,结果显示驴样品扩增产物序列与数据库序列完全一致,马样品扩增产物与数据库序列有3个碱基差异,分别为:马线粒体DNA第8007个碱基(G y A),第8039个碱基(A y G),第8045个碱基(C y T),同源性达99%(图3)。213马成分和驴成分鉴别检测结果

对马成分和驴成分的区分也使用内切酶检测。从图4可以看出,使用内切酶Sau3A酶切时,马扩增产物得到226bp和68bp2个片段,而驴扩增产物中因为没有该酶切位点,因此仍为294bp片段;当使用内切酶Alu I时,驴扩增产物得到113bp和181bp2个片段,而马的扩增产物不被切动。因此

,

图5不同浓度马、驴成分样品PCR扩增结果

Fig.5PC R amplification o f different concentrations of horse and donkey

81第5期陈颖等:食品及饲料中马属动物源性成分的PCR检测研究

通过选择不同的内切酶,不但可以对扩增产物进行初步确证,还能区分扩增产物是来源于马属中的哪个动物种类。

214 灵敏度实验

使用含有不同浓度马和驴成分的样品经PCR 扩增,能检测出含有015%的马源性成分样品和含有0125%的驴源性成分样品(图5)。215 市售食品中马属动物成分的检测

使用本文所设计的引物及相应的PC R 扩增反应条件检测了9种市售的动物源性食品及2份实

验室保存的送检肉骨粉样品,并对扩增结果进行了酶切验证,以确定马或驴成分。检测结果表明,市售的酱狗肉、猪肉肠、牛肉肠、牛肉片及肉骨粉饲料中均未检测到马属动物成分,酱驴肉中确实能检测到驴成分;但在牛肉卷中也检测到了马属动物成分,酶切结果表明为马成分,该结果与样品来源单位对样品的调查结果完全一致。此外,在2种马肠中只有1种马肠检测出有马成分,而另1种马肠中没有,随后的扩增结果表明该肠为牛肉制品(图6、图7)

。

图6 各种样品中马属动物成分的检测结果

1:DNA 分子量Marker;2:酱驴肉;3:马肠1;4:马肠2;5:牛肉卷;6:牛肉片1;7:牛肉片2;8:酱狗肉;

9:牛肉肠;10:猪肉肠;11:肉骨粉1;12:肉骨粉2;13:空白对照

F ig.6 Equus DNA detection in commercially produced

samples

图7 阳性样品扩增产物Sau 3A 和Alu I 酶切检测结果

1,8:DNA 分子量Marker;2~4:内切酶Alu I 对酱驴肉、马肠2、牛肉卷扩增产物的酶切;

5~7:内切酶Sau 3A 对酱驴肉、马肠2、牛肉卷扩增产物的酶切

Fig.7 Restriction endonuclease enzyme digestion of PCR positive samples w ith Sau 3A and Alu I

3 结论与讨论

311 结 论

本方法通过选用马属动物特异性引物,建立了肉骨粉饲料中马属动物的检测方法及酶切验证和测序验证的方法,并通过选用不同的内切酶可区分

样品中的马和驴成分,方法简单可靠,易于操作,灵敏度高,对马和驴成分的检测低限分别为015%和

0125%。对市售样品的检验结果表明,该方法对检测饲料中的马属动物成分及鉴别商品真伪都具有很好的实用价值和现实意义。

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中 国 生 物 工 程 杂 志第24卷

312 讨 论

任何一个良好的分子生物学检测方法应该满足以下4个条件:通用性、特异性、灵敏性和稳定性。本文中所使用的引物引自相关文献[14],Genbank 中基因序列Blast 比较发现,对马及马产品的扩增具有保守性。此外,我们选择了10种常见动物样品,包括哺乳动物8种,禽类1种,鱼类1种,对引物的特异性进行验证,发现羊、骆驼样品有弱阳性结果,但通过对扩增参数进行优化,即将退火温度从文献推荐的57e 提高到63e ,即可消除羊、骆驼样品的弱阳性,使引物扩增特异性增强。

饲料加工过程中对原料的高强度处理,通常会造成DNA 分子的严重降解,在一定程度上增加了扩增的难度,因此DNA 的提取也是饲料成分PCR 检测的关键步骤之一。为了验证本方法对饲料中动物成分的检测能力,我们模仿肉骨粉制作工艺,对样本90e 高温烘烤24小时后再研磨成干粉,并根据本实验室已有的饲料等深加工样品DNA 提取经验,选择Promega 公司Wizard 提取试剂盒,稍做修改后提取的DNA 模板浓度,纯度都较高,扩增出的目的片段条带清晰明亮,对马成分和驴成分的检测低限分别达015%,对驴样品的检测低限达0125%,说明本方法对马属动物的检测准确性好,特异强且灵敏度高。

通过对市售样品及送检的肉骨粉样品的检验发现,2种马肠中仅有1种真正含有马成分,而在牛肉卷中却又掺有大量的马肉,该结果与官方对样品原料抽检调查的结果完全一致,进一步证明了该方法的可靠性和准确性及其在商品真伪鉴别中的良好应用前景。

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Species -specific PCR for Identification of Horse and

Donkey Materials in Feedstuff

CHEN Ying 1

W U Ya -jun 1

XU Bao -liang 1

MA Ying 1

DONG Meng

2

(1China Import and Export Co mmodity Inspection Technology Ins ti tute,Beijing 100025,China;2Sichuan Universi ty,Chengdu 610044,China)

Abstract A rapid PCR assay for the detection of horse and donkey materials in feedstuff was described.Species -specific PC R primer has been used for this purpose.To discriminate between horse and donke y,enzymes Sau 3A and

Alu I were used to digest the a mplicon.Sequence of donkey a mplicon is consistent with GenBank sequence and sequence of horse amplicon is 99%homology with Genbank sequence.This method allows detection of the presence of horse and donkey DNA in feedstuffs containing less than 015%(w P w)and 0125%(w P w)respectively.It could be an effective method for detection horse and donkey derived materials in feedstuff.

Key words Feedstuff Horse Donkey animal materials PCR assay

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第5期陈 颖等:食品及饲料中马属动物源性成分的PCR 检测研究

《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》

动物源性饲料产品安全卫生管理办法 日期：2003-06-14 16:28发布单位： 第一章总则 第一条为加强动物源性饲料产品安全卫生管理，保证饲料产品安全卫生，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》制定本办法。 第二条凡在中华人民共和国境内从事生产、经营、使用动物源性饲料产品的单位和个人必须遵守本办法规定。 第三条本办法中动物源性饲料产品是指以动物为原料用作饲料的产品，包括肉骨粉、骨粉、肉粉、鱼粉、血及血制品、乳及乳制品、动物下脚料粉、皮革蛋白粉、水解蛋白粉、动物脂肪、油渣、混合油等。 第二章基本条件 第四条动物源性饲料产品生产企业实行《动物源性饲料产品生产企业安全卫生合格证》制度。生产动物源性饲料产品的必须具备下列条件： (一)《安全卫生管理制度》的制定与执行 1．应制定《安全卫生管理制度》，其内容应包括本文的规定。 2．应制定安全卫生检查计划，规定检查时间及项目，检查应有记录，发现问题应及时整改。 （二）厂区环境卫生管理 1. 企业所在地应远离动物饲养场地，最小距离1000米。厂区内禁止饲养畜禽。 2. 厂区内禁止堆积不必要的器材、物品，以防止有害动物孳生。 3. 排水沟应随时保持通畅，不得有淤泥蓄积，废弃物需作妥善处理。 4. 应避免有害(毒)气体、废水、废弃物、噪音等产生，其排放符合环保要求。 （三）厂房设施卫生管理 1. 厂房内各项设施应随时保持清洁，且地面不得有破损或积水。 2. 厂房、厂房的固定物及其它设施应保持良好的卫生状况；生产厂区布局合理，原料整理、生产加工、成品储存等区域必须分开，严防交叉污染。上述专用区域必须具备防蝇、防鼠、防鸟、防尘设备，以保护动物性饲料产品免受污染。 （四）原料安全卫生管理 1. 不得采购腐败污染或来自疫区的动物原料。 2. 原料采购和出库需有完整记录。 3. 原料必须分类堆放，保证合格原料与不合格原料、哺乳类动物原料与其它原料分开，并作明确标识。 4. 原料使用前应进行筛选，去除不合格原料。 5. 禁止使用腐败变质的原料和被有害物质污染的原料。 6．原料使用应保证先进先出的原则。 （五）机器设备卫生管理 1. 生产工艺和设备应能满足产品的安全卫生质量标准和有关法规的要求。 2. 用于制造、包装、储运的设备及器具，应定期清洗、消毒。 3. 在使用同一工艺设备生产时，应保证哺乳类动物性饲料产品不得污染其它动物性饲料产品。 （六）成品卫生管理 1. 成品应分类存放，严防误装混装，防止污染。 2. 必须具备成品安全卫生检验所需的基本检验设备。 3. 成品需作总菌数、大肠杆菌、沙门氏菌等安全卫生指标检验，以符合饲料卫生标准。 4. 成品若遭受有害、有毒物质污染或因其它原因导致品质破坏时，应立即予以销毁，并追查原因，形成记录，杜绝此类事件的再次发生。 （七）人员卫生管理

食品中多种动物源性成分检测实时荧光PCR法(BJS 201904)

附件4 食品中多种动物源性成分检测实时荧光PCR法 BJS 201904 1 范围 本方法规定了肉及肉制品中猪、驴、山羊、绵羊、牦牛、鼠源性成分检测的实时荧光PCR方法。 本方法适用于肉及肉制品中猪（Sus scrofa）、驴（Equus asinus）、山羊（Capra hircus）、绵羊（Ovis aries）、牦牛（Bos grunniens）、鼠源性成分的一种或多种成分同时定性检测。 注：本方法中鼠源性成分包括海狸鼠（Myocastor coypus）、小鼠（Mus musculus）、大鼠（Rattus norvegicus）、豚鼠（Cavia porcellus）和竹鼠（Rhizomy spruinosus）源性成分。 2原理 提取样品DNA，通过特异性引物探针进行动物源性成分的实时荧光PCR扩增，根据PCR 扩增反应中产物荧光信号及扩增曲线判定，实现对样品动物源性成分的定性分析。 3试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。 3.1检测用引物和探针 (a) 猪cytb基因检测用引物探针序列为： 5’端引物：5’-GCACTTTATCCTGCCATTCATCATT-3’ 3’端引物：5’-GTACAAGGATTAGTAGGATTAGT-3’ 探针：5’-FAM-CGCCCTCGCAGCCGTACATCTCCTA-BHQ1-3’ (b) 驴nad5基因检测用引物探针序列为： 5’端引物：5’-GCTAGCCTCATTATCAGTAT-3’ 3’端引物：5’-GTGATGAGGATACGTGCT-3’ 探针：5’-FAM-TCATATCATCAATCCTCAACACCCACA-BHQ1-3’ (c) 山羊cytb基因检测用引物探针序列为： 5’端引物：5’-CTTTATCCTCCCATTCATCATCA-3’ 3’端引物：5’-GAATTCCTGTGGGGTTGTTC-3’ 探针：5’-FAM-GCTCTCGCCATAGTCCACCTGCTTTTC-BHQ1-3’ (d) 绵羊cytb基因检测用引物探针序列为： 5’端引物：5’-CTCATGCTACTAGTACTATTTACG-3’

行业标准出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法编制

行业标准《出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法》 编制说明 一、任务来源 根据国家认证认可监督管理委员会2009年《关于下达2009年度出入境检验检疫行业标准制（修）订计划的通知》下达的编写任务通知（计划编号2009B134），由北京出入境检验检疫局负责《出口动物源性食品中动物种类的定性检测T-RFLP方法》的起草工作。 本标准是按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》的要求进行编写的。 二、标准编制的目的和意义 随着人们生活水平的提高和生活节奏的加快，人们对禽、肉、鱼等食品及其加工食品（如香肠、罐头等）的需求也在不断增加。对于一些凭肉眼难以辨认其来源的动物源性食品（尤其是经过加工的食品），某些商家在经济利益的驱使下，常常用比较廉价的动物品种替代比较昂贵的动物品种。现存比较常见的商业欺诈行为之一就是乱贴标签，标签上标明的原料成分与实际使用的原料成分不符。这种行为不仅损害了消费者的经济利益和健康，而且还有可能打乱正常的市场竞争秩序。 为了更好地保护消费者的身体健康，维护消费者的经济利益，也考虑到宗教信仰问题，世界各国都对食品标签的内容做了严格的规定。例如，在新加坡市场上，食品标签必须包括食品的品名（或对食品真实性的描述用语）和食品的成分，当食品由两种或多种成分构成时，对每一种成分应按它们的重量或所占比例给予恰当说明，其顺序应按照他们占有的重量百分比递减标示。我国的《预包装食品标签通则》（GB7718-2004）也对食品标签的具体内容作了明确规定。国家质检总局于早在2000年就颁布了《中华人民共和国进出口食品标签管理办法》。该办法第二章标签审核的第十一条明确规定“进出口食品标签审核的内容包括：标签的格式、版面以及标注的与质量有关的内容是否真实、准确”。对于乱贴标签现象，世界各国也在相关法规中作出明确规定。如瑞士《食品条例》(Food Ordinance)的第十九章中要求食品标签不允许欺骗消费者。我国的《预包装食品标签通则》（GB7718-2004）中也明确规定“食品标签的所有内容，不得以错误的、引起误解的或欺骗性的方式描述或介绍食品”。 法规已经明确规定食品必须加贴标签，而且食品标签不允许欺骗消费者。贯彻执行这类法规的条件之一就是食品监管机构必须具有判断食品标签是否存在欺诈行为的能力。对于动物源性食品而言，一个重要的判断依据就是检测其标签上标明的动物种类是否与实际使用的动物种类相符，即进行动物种类鉴定。因此，开展动物源性食品中动物种类鉴定方法的研究对于更好地保障我国进出口食品的质量和安全、加强对国内动物源性食品市场和生产企业的监管，从而保护消费者的切身利益具有重要意义。 目前，我国已颁布的与动物种类鉴定有关的国家标准和行业标准有： 1）GB/T 20190-2006 饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法2）GB/T 21101-2007 动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法 3）GB/T 21102-2007 动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光PCR法 4）GB/T 21103-2007动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法实时荧光PCR

动物源性食品安全控制对策和措施(正式)

编订：__________________ 单位：__________________ 时间：__________________ 动物源性食品安全控制对策和措施(正式) Deploy The Objectives, Requirements And Methods To Make The Personnel In The Organization Operate According To The Established Standards And Reach The Expected Level. Word格式 / 完整 / 可编辑

文件编号：KG-AO-2917-26 动物源性食品安全控制对策和措施 (正式) 使用备注：本文档可用在日常工作场景，通过对目的、要求、方式、方法、进度等进行具体、周密的部署，从而使得组织内人员按照既定标准、规范的要求进行操作，使日常工作或活动达到预期的水平。下载后就可自由编辑。 一、广泛宣传，提高对畜产品安全重要性的认识 各级应加强宣传教育，全面提高全社会对畜产品安全的重要性认识，增强广大畜牧兽医工作者、兽药饲料生产者、养殖者和畜禽屠宰加工销售者的责任感和使命感。只有全民的认识提高了，才能自觉执行国家的法律法规，依法生产经营和使用，只有广大群众的共同参与，才能筑牢畜产品质量安全屏障。 二、健全法制，完善畜产品安全法律法规体系 解决畜产品安全的根本措施是健全和完善立法，严格执法。要针对当前畜产品安全方面法律法规少的实际，加快立法步伐。参考欧盟、美国等发达国家和地区的标准，尽快形成具有中国特色的畜产品安全法律体系，覆盖生产、加工、流通和消费各个领域，规

动物源性医疗器械注册技术审查指导原则(2017年修订版)

. 附件 动物源性医疗器械注册技术审查指导原则 （2017年修订版） 本指导原则旨在指导注册申请人对动物源性医疗器械的注册申报资料进行准备。某些医疗器械可能含有动物来源的材料，这些材料是多种多样的，可以构成该器械的主要部件（例如牛/猪源心脏瓣膜、羊肠缝合线、止血材料等）、涂层或者浸渗剂（例如肝素、明胶、胶原等），也可成为生产过程中所用的辅助材料（例如牛脂等）。动物组织及其衍生物的使用可能会比非生物来源的材料（例如金属、塑料以及织物等）使医疗器械具有更好的性能，但是在另一方面，它们应用到人体则又会增加病毒传播和免疫原性等方面的安全风险，且存在材料表征上的困难，因此对于动物源性医疗器械安全性的评价，需要考虑比常规医疗器械更多方面的内容。如果注册申请人在准备医疗器械注册申报资料时有上述考虑，将有助于更加充分、科学地评价医疗器械产品的风险受益比。 本指导原则是在注册申报资料中有关的技术性文件（研究资料、风险分析资料、产品技术要求及产品说明书）满足一般性要求的基础上，针对动物源性医疗器械产品的特点提出的需特别关注和增加论述的内容要求。此外，注册申请人还应按照《医疗器械注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第4号）、《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管理总局令第6号）、《关于公布医疗器械注册申报资料要求和批准证明文件

格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第43号）以及总局发布的其他相关文件要求并参考YY/T 0771/ISO 22442系列标准等技术性文件提交注册申报资料。注册申请人应当依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用。若不适用，应详细阐述其理由及相应的科学依据。注册申请人还应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对注册申请人和医疗器械相关管理部门技术审评人员的指导性文件，不限制相关管理部门对该类产品的技术审评以及注册申请人对注册申报资料的准备工作。本指导原则不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。 本指导原则为2009年发布的《动物源性医疗器械产品注册申报资料指导原则》的修订版。主要修订内容包括：根据《医疗器械监督管理条例》及配套规章调整了指导原则的结构、各级标题和相关内容；增加了动物源性医疗器械免疫原性研究、评价与控制的原则；细化了动物源性医疗器械病毒灭活/去除有效性验证的原则并将之由正文调整至附录；调整了病毒灭活/去除工艺有效性判断的标准等。 一、适用范围 本指导原则适用于全部或部分采用动物组织制成的或取材

动物源性饲料管理办法农业部号令

中华人民共和国农业部令 第40号 《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》业经2004年7月14日农业部第25次常务会议审议通过，现予公布，自2004年10月1日起施行。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?部长杜青林 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 二OO四年八月二日 动物源性饲料产品安全卫生管理办法 第一章总则 第一条为加强动物源性饲料产品安全卫生管理，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》，制定本办法。 第二条农业部负责全国动物源性饲料产品的管理工作。 县级以上地方人民政府饲料管理部门负责本行政区域内动物源性饲料产品的管理工作。 第三条本办法所称动物源性饲料产品是指以动物或动物副产物为原料，经工业化加工、制作的单一饲料。 动物源性饲料产品目录由农业部发布。 第二章企业设立审查

第四条设立动物源性饲料产品生产企业，应当向所在地省级人民政府饲料管理部门提出申请，经审查合格，取得《动物源性饲料产品生产企业安全卫生合格证》后，方可办理企业登记手续。 第五条设立动物源性饲料产品生产企业，应当具备下列条件： （一）厂房设施 1.厂房无破损，厂房及其附属设施便于清洗和消毒； 2.相应的防蝇、防鼠、防鸟、防尘设备和仓储设施； 3.相应的更衣室、卫生间、洗手池。 （二）生产工艺及设备 1.生产工艺和设备能满足产品的安全卫生和质量标准要求； 2.相应的清洗、消毒、烘干、粉碎等设施。 （三）人员 1.技术负责人具有大专以上文化程度或中级以上技术职称，熟悉生产工艺，从事相应专业工作2年以上； 2.质量管理及质检机构负责人具有大专以上文化程度或中级以上技术职称，从事相应专业工作3年以上； 3.特有工种从业人员取得相应的职业资格证书。

【CN109868321A】鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法及试剂盒【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910257118.5 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人 陕西科技大学 地址 710021 陕西省西安市未央区大学园1 号 (72)发明人 徐秦峰　澹台玮　马西亚　 (74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任 公司 61200 代理人 范巍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法及试 剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种鉴别动物源性成分的多 重荧光PCR方法及试剂盒：提取样品中的DNA作为 模板，利用设计的多对物种特异性引物，进行多 重PCR扩增，对多重PCR扩增的产物进行高分辨熔 解曲线分析，根据扩增产物熔解峰的位置判别样 品中所含的动物源性成分。本发明操作简单、检 测周期短、特异性强、检测结果可靠，可以避免开 管造成污染问题以及实现大规模样品的检测。 权利要求书2页 说明书6页序列表2页 附图2页CN 109868321 A 2019.06.11 C N 109868321 A

权　利　要　求　书1/2页CN 109868321 A 1.一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：包括以下步骤： 1)根据样品中的不同动物源性成分的可能掺入情况，确定需要鉴别的各动物源性成分所对应的动物种类，根据确定的动物种类，设计用于扩增对应动物种类的基因组中某段特异性序列的扩增引物； 2)对步骤1)设计的针对不同动物种类的扩增引物进行多重PCR扩增及扩增产物熔解的特异性检验； 3)以提取自所述样品中的DNA为模板，利用经过检验确定的针对不同动物种类的特异性扩增引物进行多重PCR扩增，对扩增得到的产物进行高分辨熔解并获取高分辨熔解曲线，将该高分辨熔解曲线与以各动物种类基因组DNA为模板并采用所述特异性扩增引物扩增得到的对应产物的高分辨熔解曲线进行比对，根据比对匹配的熔解峰位置确定所述样品中动物源性成分的构成情况。 2.根据权利要求1所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：所述步骤1)中，扩增引物扩增的目的片段在200bp以下，扩增的目的片段位于对应动物种类基因组的特异性保守区域，不同动物种类对应的扩增产物在长度和/或GC比值上存在区别。 3.根据权利要求1所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：所述步骤3)中，经过检验确定的特异性扩增引物选自针对山羊的引物对P1、针对绵羊的引物对P2、针对牛的引物对P3、针对水牛的引物对P4中的两对以上引物；其中，引物对P1的序列为：上游引物：5'-GCGGGCAGGGCGGCGGGGGCGGGGCCCACCAAAATTCAACACAATAC CACAT-3' 下游引物：5'-GCGGGCGCCGCCCTGCCCGCAGCGTTATCTTTGTAATAGGTTTTGT-3'引物对P2的序列为： 上游引物：5'-CGTAGATGTAGTATGACTTTTCCT-3' 下游引物：5'-GTGAAGTTAGTTAGGAGAGTAATTATA-3' 引物对P3的序列为： 上游引物：5'-GTTAACAGCTAAACACCCTAGCT-3' 下游引物：5'-AGGTTTGACTCCTCTTTTTACCAA-3' 引物对P4的序列为： 上游引物：5'-CCAAAATTTAACACAATCCCGCAA-3' 下游引物：5'-CATTGGTCGTGGTTGAATTCCA-3'。 4.根据权利要求3所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：所述多重PCR扩增的反应体系包括DNA模板、引物对P1、P2、P3和P4、PCR反应试剂、双蒸水以及荧光染料。 5.根据权利要求1所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：所述高分辨熔解的程序为：将多重PCR扩增的产物在闭管条件下从65℃开始逐渐升温至95℃，同时连续检测荧光强度。 6.根据权利要求1所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR方法，其特征在于：所述样品采集自乳制品或生乳。 7.一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于：包括针对不同动物种类的特异性扩增引物、PCR反应试剂、荧光染料、双蒸水以及对照品对应的高分辨熔解曲线。 8.根据权利要求7所述一种鉴别动物源性成分的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所 2

DB12T 653-2016 鲜冻畜、禽肉中动物源性成分的定量检测 实时荧光PCR法

ICS 67.050 B 45 DB12 鲜冻畜、禽肉中动物源性成分的定量检测 实时荧光PCR 法 Quantitative PCR method for animal derived materials in meat and meat products 天津市市场和质量监督管理委员会发布

前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由天津市农村工作委员会提出。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。本标准主要起草人：赵新、易萌、刘娜、兰青阔、刘雪岩、陈锐、朱珠、王成、徐石勇。 本标准2016年9月首次发布。

鲜冻畜、禽肉中动物源性成分的定量检测 实时荧光PCR法 1 范围 本标准规定了鲜冻畜、禽肉中动物源性成分（包括牛、羊、猪、鸡、鸭等）的定量PCR检测方法的术语和定义、检测方法、结果计算。 本标准适用于生鲜、冷冻畜禽肉中动物源性成分的定量PCR检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 实时荧光PCR real time PCR 实时荧光PCR是指PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，对未知模板进行定性或定量分析。 3.2 Ct值cycle time 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 3.3 内参基因reference gene 能够同时检测出多种动物源性成分的基因（包括牛、羊、猪、鸡、鸭等）。 3.4 牛源性成分bovine-derived materials 牛种属特异性DNA片段。 3.5 羊源性成分ovine-derived materials 羊种属特异性DNA片段。 3.6 猪源性成分porcine-derived materials 猪种属特异性DNA片段。 3.7 鸡源性成分chicken-derived materials 鸡种属特异性DNA片段。 3.8 鸭源性成分duck-derived materials 鸭种属特异性DNA片段。

2014年反刍动物饲料中牛羊源性成分

附件3：2014年反刍动物饲料中牛羊源性成 分 例行监测计划 为打击在反刍动物饲料中添加牛羊源性成分的违法行为，切断“疯牛病”通过饲料的传播途径，确保反刍动物生产安全，根据农业部的统一安排，2014年我省继续组织对牛羊养殖和反刍动物饲料生产比较集中的饲料生产、经营企业和牛羊养殖场（户）进行牛羊源性成分例行监测。 一、监测范围 全省各市、县（市、区）。 二、监测对象 生产、经营、使用反刍动物饲料和动物源性饲料的企业以及牛羊养殖场（户）。 三、监测的产品种类和检查内容 ⒈反刍动物饲料产品：包括商品预混合饲料、精料补充料、浓缩饲料和养殖场（户）自配饲料。 ⒉动物源性饲料产品：包括进口和国产鱼粉、猪肉粉、禽肉粉、羽毛粉和虾粉。 ⒊对饲料生产、经营企业和牛羊养殖场（户）储存、销售、使用的商品反刍动物饲料和动物源性饲料产品的标签进行检查。

四、监测项目 标签、牛源性成分、羊源性成分。 五、标签检查 承担下半年监测任务的大同市、忻州市、阳泉市、长治市、吕梁市，除提供与样品一致的标签外，每个市须采集2个（每个企业只限抽1个标签）饲料生产企业的产品标签及对应的标准复印件（产品标准采用国家标准和行业标准的不用提供）。 六、抽检依据 ⒈抽样要求 按照《饲料采样》（GB/T14699.1-2005）执行。有证据证明在牛羊饲料中添加使用了乳及乳制品的，不予抽样。 ⒉检测方法 由质检机构根据农业部的规定执行。 七、判定依据和原则 由质检机构根据农业部的规定办理。 八、监测任务分配（见表3） 表3：反刍动物饲料中牛羊源成分例行监测任务分配表

注：1、该样品可从生产、经营、使用反刍动物饲料和动物源性饲料的企业及牛羊养殖场（户）抽样。 2、反刍动物饲料产品包括商品预混合饲料、精料补充料、浓缩饲料、和养殖场（户）自配料。 3、动物源性饲料产品包括进口和国产鱼粉、猪肉粉、禽肉粉、羽毛粉、虾粉。

动物源性饲料管理规定农业部令

动物源性饲料管理规定 农业部令 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#

中华人民共和国农业部令 第40号 《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》业经2004年7月14日农业部第25次常务会议审议通过，现予公布，自2004年10月1日起施行。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?部长杜青林 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 二OO四年八月二日 动物源性饲料产品安全卫生管理办法 第一章总则 第一条为加强动物源性饲料产品安全卫生管理，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》，制定本办法。 第二条农业部负责全国动物源性饲料产品的管理工作。 县级以上地方人民政府饲料管理部门负责本行政区域内动物源性饲料产品的管理工作。 第三条本办法所称动物源性饲料产品是指以动物或动物副产物为原料，经工业化加工、制作的单一饲料。 动物源性饲料产品目录由农业部发布。 第二章企业设立审查 第三章生产管理 第九条企业应当建立下列制度：

（一）岗位责任制度； （二）生产管理制度； （三）检验化验制度； （四）标准及质量保证制度； （五）安全卫生制度； （六）产品留样观察制度； （七）计量管理制度。 第十条企业原料管理应当符合下列要求： （一）原料采购和出库有完整记录，并至少保存二年。禁止采购腐败、污染或来自动物疫区的动物原料； （二）原料分类堆放并明确标识，保证合格原料与不合格原料、哺乳类动物原料与其它原料分开。禁止露天放置原料； （三）原料使用遵循先进先出原则。使用前进行筛选，去除不合格原料并作无害化处理。 第十一条企业生产过程管理应当符合下列要求： （一）禁止在厂区内堆积不必要的器材、物品，以免有害生物孳生； （二）对用于制造、包装、储运的设备及器具定期清洗、消毒； （三）使用同一设备生产不同动物源性饲料产品前，应当对设备进行彻底清洗，防止交叉污染； （四）操作人员应当有健康证明，特殊作业人员须半年体检一次；

动物源性成分

饲料中动物源性成分检测技术研究进展 摘要: 饲料安全与动物生产、环境污染和人类健康密切相关。动物废弃物进入饲料行业曾经弥补了蛋白质饲料不足的缺口,但却带来了新的问题。饲料中动物源性成分的定性或定量检测技术已成为国内外的研究热点，适用于各种样品、基于各种原理的方法和技术被开发出来。本文以组织学特征为基础的显微镜分析方法、以蛋白质和DNA为基础的免疫学和PCR分析方法、高效液相色谱法和近红外光谱法在动物源性饲料组分中的研究应用进展等方面做了综述,并对其发展趋势进行讨论。 饲料安全已与动物生产、环境污染和人类健康 密切相关。动物源性副产品因富含蛋白质、钙、磷等 营养成分而被应用于畜禽饲料中, 但现有的证据表 明, 在动物饲料中添加未经加热处理牛源性饲料或 感染过痒病因子的牛( 羊) 肉/ 肉骨粉( MBM) 后能够 引发和传播疯牛病( BSE)。 我国于1999、2001和2004年先后 下发了关于对动物源性饲料生产和管理的相关条例, 主要对反刍动物源性饲料组分、MBM、肉粉、骨 粉、血粉、动物内脏干粉和动物废弃物等使用做了严 格的规定。目前关于饲料中动物源性成分检测主要 以样品的组织学特性和品种特异性的生物标记物 ( 如蛋白质、DNA和其他生物大分子等) 为对象, 其 中PCR技术发展迅速, 已逐步被世界各国采用。但 由于动物源性饲料组成上的复杂性, 单一的PCR技 术仍不能克服耗时、效率低和假阳性等问题。因此, 研究并建立一种( 套) 快速、灵敏、可靠的动物源性饲 料检测技术, 对于提高饲料质量、防止饲料掺假、控 制进口饲料安全和制订相关饲料法规等均具有重要 意义。 本文中动物源性成分 是指动物组织以及蛋和奶，包括肉类及其制品(含动物 脏器)、水生动物产品等，检测技术是指上述成分中蛋 白质和DNA等具有种间特异性物质的物种鉴定和含量分 析技术。该技术已成为保护消费者权益和安全的重要技 术手段。 动物源性成分检测技术通常建立在对样品蛋白质、 DNA、脂肪酸等分子结构、序列或组成特异性分析的 基础上。涉及的技术手段包括酶联免疫、聚合酶链式

DB21T 2742-2017 饲料中动物源性成分—貂源性组织成分定性检测方法PCR 方法

ICS65.120 B 46 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 2742—2017 饲料中动物源性成分—貂源性组织成分定 性检测方法PCR方法 Animal derived ingredients in Feed - qualitative detection of mink tissue derived ingredients with PCR method 2017-02-23发布2017-03-23实施

前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心提出。 本标准由辽宁省质量技术监督局归口。 本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。 本标准主要起草人：李欣南、韩镌竹、许彬、李洪伟、高红倩、韩春晓、高铎、武凤娇、董娜。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

饲料中动物源性成分—貂源性组织成分定性检测方法PCR方法 1 范围 本标准规定了检测饲料中貂源组织成分的聚合酶链式反应检测方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中貂源性成分的检测。 本方法的貂源性成分检测限为0.5 %（w/w）。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T19495转基因产品检测 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3 原理 利用氯仿抽提法或使用等效的基因组DNA提取试剂盒提取DNA，以提取的DNA为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物；PCR产物用限制性内切酶酶切后电泳和测序进行确证。 4 试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂；实验用水为灭菌双重蒸馏水；所有实验室使用的试剂等级应为不含DNA和DNA酶的分析纯试剂，试剂的选购、验收、储存应符合规定。 4.1 引物 根据Primer 6软件设计，貂源性成分扩增产物为622bp，检测用引物（对）序列为： F：5’- TTAGTAGCTCATAACGCCTTG -3’ R：5’- CGTGAGTATGTTCTTGGTTAG -3’ 根据合成引物的标示浓度，用双重蒸馏水配制成10μM。 4.2 BstXⅠ限制性内切酶。 4.3 PCR Master mix（或DNA聚合酶、dNTP等PCR用试剂）。 4.4 基因组DNA提取试剂盒或其他替代试剂。 4.5 裂解缓冲液：250mmol/L SDS，使用前加入蛋白酶K至100mg/mL。

动物源性饲料的质量控制及安全性指标

动物源性饲料的质量控制及安全性指标 欧阳雅连1 ,李明凤2 ,侯自花3 (1. 郑州种畜场,河南郑州450008 ; 2. 河南省科技厅,河南郑州450003 ; 3. 河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州450002) 摘要: 动物源性饲料多为食品加工的副产品或下脚料,其营养价值较高,在畜禽养殖业中应用较为普遍。但由于其来源复杂、品质不稳定及易传播疾病等特点,给畜牧业生产带来安全隐患。为此,综述了动物源性饲料生产过程的质量控制要点和质量控制关键安全性指标,以便为养殖业中应用动物源性饲料提供参考。 关键词: 动物源性饲料; 质量控制; 安全性指标 中图分类号: S816. 48 文献标识码: B 文章编号: 1004 - 3268 (2007) 12 - 0119 - 02 动物源性饲料主要有鱼粉、肉粉、肉骨粉、骨粉、血粉、蚕蛹、羽毛粉、动物下脚料、油渣粉、动物油脂等,其原料多为食品加工的副产品或下脚料。动物源性饲料因其蛋白质、矿物元素及B 族维生素含量高,生物学价值较高,在畜禽养殖业中应用广泛。但是,由于动物源性饲料原料来源复杂、品质不稳定,易受污染及易传播疾病等特点,加之其加工方法简单和缺乏有效的管理,给畜牧养殖业和人类健康带来很大的安全隐患。因此,加强对动物源性饲料的安全控制意义重大。 1 动物源性饲料的生产 1. 1 原料来源控制 为确保动物源性饲料的安全,其原料来源控制是首要环节。这就要求提高生产企业从业人员的素质,禁止采购腐败、污染或来自动物疫区的动物源性原料。目前生产肉骨粉的原料很多,有反刍动物(牛、羊) 的下脚料,也有猪、禽屠宰场的下脚料。肉骨粉生产企业应按猪、禽、反刍动物肉骨粉原料分类生产,控制疫病传播;并在产品标签上注明肉骨粉的种类,便于使用和监管。 1. 2 生产加工过程的控制 动物性饲料原料生产工艺的选择对其产品的质量安全有着重要影响。应确立生产加工过程的关键控制点,严格清洗、消毒,防止交叉污染。使用同一设备生产不同动物源性饲料产品前,应对所有设备和工具、容器进行彻底清洗,防止交叉污染。鱼粉生产中质量关键控制点主要包括: (1) 原料。刚捕捞的不能食用的小杂鱼原料由于受贮存条件限制,往往不能马上加工成鱼粉,通常采用在小杂鱼中加盐的方法以延长保存期,这类原料生产的鱼粉新鲜度达不到要求,且盐分含量超标。(2) 加工工艺选择。鱼粉的生产工艺主要有蒸干和脱脂两种,蒸干鱼粉含脂肪量过高,一般在10 %以上,容易氧化,产品不易较长时间保存,影响产品质量,且在夏季高温季节甚至会在运输途中自燃。(3) 温度控制。如温度过低,不能有效杀灭原料中的病原微生物;蒸干加温过度,致使部分鱼粉蛋白质变性。肌胃糜烂素是鱼粉在加热干燥处理时,由鱼粉中的游离组氨酸及其代谢产物组胺与鱼粉中的蛋白质发生反应而形成的。制造鱼粉时加热处理的温度愈高,愈易产生毒素。因此,为防止鱼粉中形成肌胃糜烂素,原料应新鲜、冷藏(加热干燥时温度应不超过130 ℃) ;预先在原料中加入抗氧化剂,可抑制在加热干燥时毒素的形成。 肉骨粉、骨粉关键的质量控制点是不同畜禽原料分类生产,同时由于肉骨粉中蛋白质、脂肪含量都较高,易受微生物污染(尤其是沙门氏菌污染) 。因此,对肉骨粉应进行酸价、挥发性盐基氮及微生物指标的监测与控制,保证原料的新鲜。血粉生产工艺有喷雾干燥、发酵、膨化、滚筒干燥等多种工艺,其中喷雾干燥法、发酵法较为多见。血粉的适口性较差,其消化率及饲养效果因血粉的加工工艺不同而异。血粉容易吸潮、结块、发霉和腐败,因而血粉应低温干燥贮存且不宜久贮。皮革蛋白粉是皮革下脚料,它含有大量的铬,对动物有害;在水解加工时必须进行脱铬处理,控制其铬含量不超过200 mg/ kg。羽毛粉养分含量因混杂物含量不同

动物源性细菌

第十九章动物源性细菌 一、名词解释 1、人畜共患菌 2、有菌免疫 3、波浪热 4、鼠毒素 5、F1抗原 6、水肿因子 7、串珠试验 二、填空题 1、布氏杆菌是一类革兰染色——的短小杆菌，我国流行的主要是——布氏杆菌。 2、布氏杆菌感染动物主要引起——，感染人类引起——。 3、布氏杆菌是专性需氧菌，初次分离还需——气体。培养基内加入——浸液可促其生长。 4、布氏杆菌的侵袭力主要与——酶和——的抗吞噬作用有关。 5、布氏菌为——菌，所致布菌病较难根治，易转为——且——。 6、鼠疫杆菌属于——菌属，引起的鼠疫是——烈性传染病。 7、鼠疫杆菌的抗原种类较多，与其毒力有关的主要有——、——和——。 8、鼠疫杆菌革兰染色——，菌体两端浓染称为——，在陈旧培养物中形态常呈——。 9、鼠疫杆菌在肉汤培养液中生长48h后可形成——，稍加摇动可出现——状下沉。 10、鼠疫杆菌的荚膜抗原又称为——；与毒力有关，可制备类毒素的抗原是——。 1l、鼠疫杆菌的典型菌落是——型，其S型菌株的毒性——。 12、鼠疫杆菌产生的毒素有——和——。 13、杀死炭疽杆菌的芽胞除高压灭菌法外，还可采用1：2500 ——浸泡或干烤——℃，3h。 14、Ascoli沉淀反应检测的抗原是——杆菌的——抗原。 15、炭疽杆菌主要的致病物质是——和——。 16、人类炭疽因侵入途径的不同分为——、——和——三种临床类型。 17、对炭疽疫区的牧民、屠宰工、兽医等人员应接种——，其免疫力维持时间为——左右。 18、炭疽杆菌的抗原有——、——、——三种。 三、最佳选择题 l、感染动物后引起母畜流产的病原是( ) A．布氏杆菌B．炭疽杆菌C．鼠疫杆菌D．钩端螺旋体E．空肠弯曲菌 2、布氏杆菌的致病物质是( ) A．芽胞B．荚膜C．鞭毛D．血浆凝固酶E．链激酶 3、食人未经消毒的羊奶，最有可能患的病是( ) A．波浪热B．结核C．伤寒D．破伤风E．肉毒中毒 4、慢性波浪热患者分离布氏杆菌阳性率最高的标本是( ) A．血液B．粪便C．尿液D．痰E．骨髓 5、培养布氏杆菌应接种于( ) A．血平板B．巧克力平板C．罗氏培养基D．肝浸液培养基E．吕氏血清斜面 6、可以寄生在巨噬细胞内的细菌是( ) A．布氏杆菌B．金黄色葡萄球菌C．肺炎链球菌D．破伤风梭菌E．炭疽杆菌 7、布氏杆菌与结核分枝杆菌的区别是( ) A．可以在巨噬细胞内生长B．致病性与超敏反应有关

农业部令第《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》

动物源性饲料产品安全卫生管理办法 (农业部令第40号) 《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》业经2004年7月14日农业部第25次常务会议审议通过，现予公布，自2004年10月1日起施行。 部长杜青林 二OO四年八月二日 动物源性饲料产品安全卫生管理办法 第一章总则 第一条为加强动物源性饲料产品安全卫生管理，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》，制定本办法。 第二条农业部负责全国动物源性饲料产品的管理工作。 县级以上地方人民政府饲料管理部门负责本行政区域内动物源性饲料产品的管理工作。 第三条本办法所称动物源性饲料产品是指以动物或动物副产物为原料，经工业化加工、制作的单一饲料。 动物源性饲料产品目录由农业部发布。 第二章企业设立审查 第四条设立动物源性饲料产品生产企业，应当向所在地省级人民政府饲料管理部门提出申请，经审查合格，取得《动物源性饲料产品生产企业安全卫生合格证》后，方可办理企业登记手续。 第五条设立动物源性饲料产品生产企业，应当具备下列条件： （一）厂房设施

1.厂房无破损，厂房及其附属设施便于清洗和消毒； 2.相应的防蝇、防鼠、防鸟、防尘设备和仓储设施； 3.相应的更衣室、卫生间、洗手池。 （二）生产工艺及设备 1.生产工艺和设备能满足产品的安全卫生和质量标准要求； 2.相应的清洗、消毒、烘干、粉碎等设施。 （三）人员 1.技术负责人具有大专以上文化程度或中级以上技术职称，熟悉生产工艺，从事相应专业工作2年以上； 2.质量管理及质检机构负责人具有大专以上文化程度或中级以上技术职称，从事相应专业工作3年以上； 3.特有工种从业人员取得相应的职业资格证书。 （四）质检机构及设备 1.设立质检机构； 2.设立仪器室（区）、检验操作室（区）和留样观察室（区）； 3.质量检验所需的基本设备。 （五）生产环境 1.企业所在地远离动物饲养场地，最小距离1000米。如靠近屠宰场所，需有必要的隔离措施； 2.厂区内禁止饲养动物；

动物源性医疗器械注册技术审查指导原则(2017年修订版)

动物源性医疗器械注册技术审查指导原则(2017年修订版)

附件 动物源性医疗器械注册技术审查指导原则 （2017年修订版） 本指导原则旨在指导注册申请人对动物源性医疗器械的注册申报资料进行准备。某些医疗器械可能含有动物来源的材料，这些材料是多种多样的，可以构成该器械的主要部件（例如牛/猪源心脏瓣膜、羊肠缝合线、止血材料等）、涂层或者浸渗剂（例如肝素、明胶、胶原等），也可成为生产过程中所用的辅助材料（例如牛脂等）。动物组织及其衍生物的使用可能会比非生物来源的材料（例如金属、塑料以及织物等）使医疗器械具有更好的性能，但是在另一方面，它们应用到人体则又会增加病毒传播和免疫原性等方面的安全风险，且存在材料表征上的困难，因此对于动物源性医疗器械安全性的评价，需要考虑比常规医疗器械更多方面的内容。如果注册申请人在准备医疗器械注册申报资料时有上述考虑，将有助于更加充分、科学地评价医疗器械产品的风险受益比。 本指导原则是在注册申报资料中有关的技术性文件（研究资料、风险分析资料、产品技术要求及产品说明书）满足一般性要求的基础上，针对动物源性医疗器械产品的特点提出的需特别关注和增加论述的内容要求。此外，注册申请人还应按照《医疗器械注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第4号）、《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管理总局令第6号）、《关于公布医疗器械注册申报资料要求和批准证明文件

格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第43号）以及总局发布的其他相关文件要求并参考YY/T 0771/ISO 22442系列标准等技术性文件提交注册申报资料。注册申请人应当依据具体产品的特性确定其中的具体内容是否适用。若不适用，应详细阐述其理由及相应的科学依据。注册申请人还应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对注册申请人和医疗器械相关管理部门技术审评人员的指导性文件，不限制相关管理部门对该类产品的技术审评以及注册申请人对注册申报资料的准备工作。本指导原则不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。 本指导原则为2009年发布的《动物源性医疗器械产品注册申报资料指导原则》的修订版。主要修订内容包括：根据《医疗器械监督管理条例》及配套规章调整了指导原则的结构、各级标题和相关内容；增加了动物源性医疗器械免疫原性研究、评价与控制的原则；细化了动物源性医疗器械病毒灭活/去除有效性验证的原则并将之由正文调整至附录；调整了病毒灭活/去除工艺有效性判断的标准等。 一、适用范围 本指导原则适用于全部或部分采用动物组织制成的或取材

动物源性饲料管理规定农业部号令完整版

动物源性饲料管理规定 农业部号令 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

中华人民共和国农业部令 第40号 《动物源性饲料产品安全卫生管理办法》业经2004年7月14日农业部第25次常务会议审议通过，现予公布，自2004年10月1日起施行。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?部长杜青林 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 二OO四年八月二日 动物源性饲料产品安全卫生管理办法 第一章总则 第一条为加强动物源性饲料产品安全卫生管理，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》，制定本办法。 第二条农业部负责全国动物源性饲料产品的管理工作。 县级以上地方人民政府饲料管理部门负责本行政区域内动物源性饲料产品的管理工作。 第三条本办法所称动物源性饲料产品是指以动物或动物副产物为原料，经工业化加工、制作的单一饲料。 动物源性饲料产品目录由农业部发布。 第二章企业设立审查 第三章生产管理 第九条企业应当建立下列制度： （一）岗位责任制度；

（二）生产管理制度； （三）检验化验制度； （四）标准及质量保证制度； （五）安全卫生制度； （六）产品留样观察制度； （七）计量管理制度。 第十条企业原料管理应当符合下列要求： （一）原料采购和出库有完整记录，并至少保存二年。禁止采购腐败、污染或来自动物疫区的动物原料； （二）原料分类堆放并明确标识，保证合格原料与不合格原料、哺乳类动物原料与其它原料分开。禁止露天放置原料； （三）原料使用遵循先进先出原则。使用前进行筛选，去除不合格原料并作无害化处理。 第十一条企业生产过程管理应当符合下列要求： （一）禁止在厂区内堆积不必要的器材、物品，以免有害生物孳生； （二）对用于制造、包装、储运的设备及器具定期清洗、消毒； （三）使用同一设备生产不同动物源性饲料产品前，应当对设备进行彻底清洗，防止交叉污染； （四）操作人员应当有健康证明，特殊作业人员须半年体检一次； （五）严格按照生产工艺流程生产；