[OAuth]基于DotNetOpenAuth实现Client Credentials Grant

[OAuth]基于DotNetOpenAuth实现Client Credentials Grant

Client Credentials Grant是指直接由Client向Authorization Server请求access token，无需用户（Resource Owner）的授权。比如我们提供OpenAPI让大家可以获取园子首页最新随笔，只需验证一下Client是否有权限调用该API，不需要用户的授权。而如果Client 需要进行发布博客的操作，就需要用户的授权，这时就要采用Authorization Code Grant。

DotNetOpenAuth是当前做得做好的基于.NET的OAuth开源实现，项目网址：https://https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,/DotNetOpenAuth。

Client Credentials Grant的流程图如下（图片1来源，图片2来源）：

一、Client向Authorization Server请求access token 主要操作如下：

1. 由client_id和client_secret构建出credentials。

2. 将credentials以http basic authentication的方式发送给Authorization Server。

3. 从Authorization Server的响应中提取access token Client的实现代码如下：

publicasync TaskSiteHome()

{

varclient_id = "https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,";

varclient_secret = "20140213";

var credentials =

Convert.ToBase64String(Encoding.ASCII.GetBytes(client_id + ":" + client_secret));

varhttpClient = new HttpClient();

httpClient.DefaultRequestHeaders.Authorization = new AuthenticationHeaderValue("Basic", credentials);

varhttpContent = new FormUrlEncodedContent(new

Dictionary

{

{"grant_type", "client_credentials"}

});

var response = await

httpClient.PostAsync("https://https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,/oauth/token ", httpContent);

varresponseContent = await response.Content.ReadAsStringAsync();

if (response.StatusCode == https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,.HttpStatusCode.OK)

{

varaccessToken =

JObject.Parse(responseContent)["access_token"].ToString();

return Content("AccessToken: " + accessToken);

}

else

{

return Content(responseContent);

}

}

二、Authorization Server验证Client，发放access token 主要操作如下：

1. Authorization Server通过

IAuthorizationServerHost.GetClient()获取当前Client。

2. Authorization Server通过

IClientDescription.IsValidClientSecret()验证当前Client。

3. 验证通过后，将access token包含在响应中发送给Client。

主要实现代码如下（基于https://www.wendangku.net/doc/626571725.html, MVC）：

1. Authorization Server中Client实体类的实现代码（关键代码是IsValidClientSecret()的实现）：

public class Client : IClientDescription

{

public string Id { get; set; }

public string Secret { get; set; }

public Uri DefaultCallback

{

get { throw new NotImplementedException(); }

}

privateClientType _clientType;

publicClientTypeClientType

{

get { return _clientType; }

set { _clientType = value; }

}

publicboolHasNonEmptySecret

{

get { throw new NotImplementedException(); }

}

publicboolIsCallbackAllowed(Uri callback)

{

throw new NotImplementedException();

}

publicboolIsValidClientSecret(string secret)

{

returnthis.Secret == secret;

}

}

AuthorizationServerHost的代码（关键代码是GetClient()与CreateAccessToken()的实现）：

public class AuthorizationServerHost : IAuthorizationServerHost {

public static readonlyICryptoKeyStoreHardCodedCryptoKeyStore = new HardCodedKeyCryptoKeyStore("...");

publicIClientDescriptionGetClient(string clientIdentifier)

{

return

ServiceLocator.GetService().GetClient(clientIdentifie r);

}

publicAccessTokenResultCreateAccessToken(IAccessTokenRequestaccessTok enRequestMessage)

{

varaccessToken = new AuthorizationServerAccessToken

{

Lifetime = TimeSpan.FromHours(10),

SymmetricKeyStore = this.CryptoKeyStore,

};

var result = new AccessTokenResult(accessToken);

return result;

}

publicAutomatedAuthorizationCheckResponseCheckAuthorizeClientCredenti alsGrant(IAccessTokenRequestaccessRequest)

{

//...

}

publicAutomatedUserAuthorizationCheckResponseCheckAuthorizeResourceOw nerCredentialGrant

(stringuserName, string password, IAccessTokenRequestaccessRequest)

{

//...

}

publicDotNetOpenAuth.Messaging.Bindings.ICryptoKeyStoreCryptoKeyStore {

get { return HardCodedCryptoKeyStore; }

}

publicboolIsAuthorizationValid(IAuthorizationDescription authorization)

{

return true;

}

publicINonceStoreNonceStore

{

get { return null; }

}

}

三、Client通过access token调用Resource Server上的API

主要实现代码如下：

publicasync TaskHomePosts(string blogApp)

{

//获取access token的代码见第1部分

//...

varaccessToken =

JObject.Parse(responseContent)["access_token"].ToString();

httpClient.DefaultRequestHeaders.Authorization = new AuthenticationHeaderValue("Bearer", accessToken);

response = await

httpClient.GetAsync("https://https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,/blog/posts/sitehome ");

return Content(await response.Content.ReadAsStringAsync()); }

四、Resource Server验证Client的access token，响应Client

的API调用请求

主要实现代码如下（基于https://www.wendangku.net/doc/626571725.html, Web API）：

1. 通过MessageHandler统一验证access token

public static class WebApiConfig

{

public static void Register(HttpConfigurationconfig)

{

config.MessageHandlers.Add(new BearerTokenHandler());

}

}

2. BearerTokenHandler的实现代码（来自DotNetOpenAuth的示例代码）：

public class BearerTokenHandler : DelegatingHandler

{

protected override

asyncSystem.Threading.Tasks.TaskSendAsync( HttpRequestMessage request,

System.Threading.CancellationTokencancellationToken)

{

if (request.Headers.Authorization != null

&&request.Headers.Authorization.Scheme == "Bearer")

{

varresourceServer = new DotNetOpenAuth.OAuth2.ResourceServer

(newStandardAccessTokenAnalyzer

(AuthorizationServerHost.HardCodedCryptoKeyStore));

var principal = await resourceServer.GetPrincipalAsync(request, cancellationToken);

https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,er = principal;

Thread.CurrentPrincipal = principal;

}

return await base.SendAsync(request, cancellationToken);

}

}

3. Web API的示例实现代码：

public class PostsController : ApiController

{

[Route("blog/posts/sitehome")]

publicasync Task>GetSiteHome()

{

return new string[] { https://www.wendangku.net/doc/626571725.html, };

}

}

四、Client得到Resouce Server的响应结果

根据上面的Resouce Server中Web API的示例实现代码，得到的结果是：

["client:https://www.wendangku.net/doc/626571725.html,"]

小结

看起来比较简单，但实际摸索的过程是曲折的。分享出来，也许可以让初次使用DotNetOpenAuth的朋友少走一些弯路。

【参考资料】

The OAuth 2.0 Authorization Framework

Claim-based-security for https://www.wendangku.net/doc/626571725.html, Web APIs using DotNetOpenAuth

Implementing an API Key with DotNetOpenAuth

基因重组技术论文

基因重组技术 学生姓名：赵慧芳学号：20115071261 生命科学学院生物科学专业 指导教师：张海滨职称：教授 摘要：基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。发生在生物体内基因的交换或重新组合。包括同源重组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类。是生物遗传变异的一种机制。基因重组是指非等位基因间的重新组合。能产生大量的变异类型，但只产生新的基因型，不产生新的基因。基因重组的细胞学基础是性原细胞的减数分裂第一次分裂，同源染色体彼此分裂的时候，非同源染色体之间的自由组合和同源染色体的染色单体之间的交叉互换。基因重组是杂交育种的理论基础。基因突变是指基因的分子结构的改变，即基因中的脱氧核苷酸的排列顺序发生了改变，从而导致遗传信息的改变。[1] 关键词：基因重组；特点；分离；纯化 Abstract: Genetic recombination is the result of the fracture and the connection of different DNA strand DNA fragments of exchange and recombination, the formation of new DNA molecule. In organisms of gene exchange or recombine. Including the homologous recombination, site specific restructuring, transfer function and abnormal four categories. Is a mechanism of biological genetic variation. Genetic recombination is refers to the recombination between alleles. Can produce a large number of variation types, but only to create new genotypes, does not produce new genes. Genetic recombination is the cytological basis of the original cells first division of meiosis, homologous chromosomes split each other, not the free combination between homologous chromosomes and the intersection of the chromatids of homologous chromosomes swap. Genetic recombination is the theoretical foundation of the cross breeding. Gene mutation is refers to the change of the molecular structure of the gene, the gene sequence of DNA nucleotides changed, resulting in the change of the genetic information. Keywords: Genetic recombination；feature；separate；purification 1.基因工程的核心

多重耐药菌知识培训

多重耐药菌知识培训（2015 —季度） 一、什么是多重耐药菌 多重耐药菌（MDRO，主要是指对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌。 常见多重耐药菌包括： 1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA 2、耐万古霉素肠球菌（VRE 3、产超广谱B -酰胺酶（ESBLS细菌 4、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（CRE （如产I型新德里金属B -酰胺酶［NDM-1］或产碳青霉烯酶［KPC］的肠杆菌科细菌） 5、耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌（CR-AB 6、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌（MDR/PDR-PA和多重耐药结核分枝杆菌等。 指对下列5类抗生素中的3类及3类以上抗生素耐药，为多重耐药（MRD 5类抗生素都耐药称为泛耐药（PDR 1、抗假単胞菌的头孢菌素类、 2、碳青酶烯类、 3、B-酰胺酶复合制剂、 4、喹诺酮类、 5、氨基糖苷类、 卫生部要求加强监测的多重耐药菌株包括： 1）MRSA（耐甲氧西林金葡菌） 2）VRE （耐万古肠球菌） 3）产超广谱B -酰胺酶（ESBLS的肠杆菌科细菌 4）耐碳青霉烯的鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌科细菌 二、为什么多重耐药菌受到关注 MRS A超级细菌？ 2007年11月：JAMA刊登美国政府调查报告，被称为“超级病菌” MRSA正在美国国蔓延，每年预计有超过9万人感染这一病菌，被列为世界三大最难解决感染性疾患第1位，年致死的人数可能超过艾滋病 2007年11月：新华社记者参报告，上海发现“超级细菌”感染患者 2007年11月：北京市卫生局关于印发《对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌病例监测与控制案》的通知 2007年12月：卫生部组织召开专家研讨会……

基因重组和重组DNA技术教案

第四节基因突变和基因重组 第2课时基因重组和重组DNA技术 【自主学案】 1．基因重组 （1）概念：生物体在进行________的过程中，控制不同性状的________重新组合的过程。 （2）基因重组的类型 ①自由组合型：生物体在________，非同源染色体上的非等位基因发生自由组合。 ②交叉互换型：生物体在________，同源染色体上的非姐妹染色单体之间交换片段，使得染色单体上的基因发生重新组合。 【思维激活】基因重组有什么意义呢？ 2．重组DNA技术 （1）概念：将从一个生物体内分离得到或人工合成的________入另一个生物体中，使后者获得________或________的技术。 （2）重组DNA技术的一般过程 ①分离目的基因：从生物细胞内直接________，获得目的基因。 ②选择基因工程载体：运载目的基因需要载体，常用的载体有________等。 ③重组DNA技术的基本步骤：体外重组DNA→________→________→目的基因表达。 【思维激活】具备什么条件才能充当载体？ 【典题精析】 重点一：基因重组的理解 例1．以下有关基因重组的叙述，错误的是（） A．非同源染色体的自由组合能导致基因重组 B．非姊妹染色单体的交换可引起基因重组 C．纯合体自交因基因重组导致子代性状分离 D．同胞兄妹的遗传差异与父母基因重组有关 解析：基因重组主要指减数分裂过程中非同源染色体上的非等位基因发生自由组合和同源染色体上的非姐妹染色单体间的交叉互换。纯合体自交后代不发生性状分离。 答案：C 重点二：重组DNA技术技术的操作工具

例2．下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是（） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶能识别和切割RNA C．限制性内切酶的活性受温度的影响 D．限制性内切酶可以从原核生物中提取 解析：限制性内切酶主要从原核生物中分离纯化出来。它们能够识别一种特定的脱氧核苷酸序列，别且使每条链中特定部位的两个核苷酸间的磷酸二酯键断开。 答案：B 【学生自测】 1．进行有性生殖的生物，其亲子代之间总是存在着一定差异的主要原因是（） A．基因重组 B．基因突变C．染色体变异 D．环境条件的改变 2．下列有关基因重组叙述的说法，错误的是（） A．基因重组发生在减数分裂过程中 B．基因重组产生原来没有的新基因 C．基因重组是形成生物多样性的重要原因之一 D．基因重组能产生原来没有的新性状 3．要将目的基因与载体连接起来，在基因操作中应选用（）A．只需DNA连接酶 B．同一种限制酶和DNA连接酶 C．只需限制酶 D．不同的限制酶和DNA连接酶 4．下列有关基因工程技术的叙述中正确的是（） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

多重耐药菌管理制度[001]

医院感染多重耐药菌（MDRO）管理制度 生效日期：2008年8月9日修订日期：2012年6月14日 一、报告及流行病学调查 （一）微生物室发现多重耐药菌株时，应立即电话通知临床科室，同时报告医院感染管理科，做好登记。 （二）医院感染管理科在接到报告后，到现场进行消毒隔离及防护措施指导。 (三) 科室应立即通知全科医护人员,做到人人知晓，并做好登记。 （四）多重耐药菌感染或者定植患者转诊之前通知接诊的科室。医生在转出记录中注明多重耐药菌感染，护理在《转科患者护理交接表中》“其它”栏中注明多重耐药菌感染。 （五）做好工作人员及家属的健康宣教，限制探视，减少人员出入，严格按照流程处置。 二、多重耐药菌预防控制措施 （一）加强医务人员的手卫生 科室应当配备充足的洗手设施和速干手消毒剂，提高医务人员手卫生依从性。医务人员在直接接触患者前后、进行无菌技术操作和侵入性操作前，接触患者使用的物品或处理其分泌物、排泄物后，必须洗手或使用速干手消毒剂进行手消毒。

（二）严格实施隔离措施 1、对确定或高度疑似多重耐药菌感染患者或定植患者，应当在标准预防的基础上，实施接触隔离措施,预防多重耐药菌传播。 2、尽量选择单间隔离，也可以将同类多重耐药菌感染患者或定植患者安置在同一房间。隔离房间、床头应当有蓝色隔离标识。不宜将多重耐药菌感染或者定植患者与留置各种管道、有开放伤口或者免疫功能低下的患者安置在同一房间。没有条件实施单间隔离时，应当进行床旁隔离。 3、多重耐药菌感染或者定植患者转诊之前应当通知接诊的科室，采取相应隔离措施。 4、与患者直接接触的相关医疗器械、器具及物品如听诊器、血压计、体温表、输液架等要专人专用，并及时消毒处理。 5、医务人员对患者实施诊疗护理操作时，应当将高度疑似或确诊多重耐药菌感染患者或定植患者安排在最后进行。接触多重耐药菌感染患者或定植患者的伤口、溃烂面、粘膜、血液、体液、引流液、分泌物、排泄物时，应当戴手套，必要时穿隔离衣，完成诊疗护理操作后，要及时脱去手套和隔离衣，并进行手卫生。 6、患者隔离期间要定期监测多重耐药菌感染情况，直至临床感染症状好转或治愈方可解除隔离。 （三）切实遵守无菌技术操作规程 医

(整理)基因重组与基因工程

基因重组与基因工程 一、选择题 1．F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为：A．转化 B．转导 C．转染 D．转座 E．接合 2．通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型，称为：A．转化 B．转导 C．转染 D．转座 E．接合 3．溶原菌是指： A．整合了噬菌体基因组的细菌 B．整合了质粒基因组的细菌 C．含有独立噬菌体基因组的细菌 D．含有独立质粒基因组的细菌 E．含有独立噬菌体和质粒基因组的细菌 4．由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为： A．转化 B．转导

C．转染 D．转座 E．接合 5．由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称为：A．位点特异的重组 B．同源重组 C．基本重组 D．随机重组 E．人工重组 6．发生在同源序列间的重组称为： A．位点特异的重组 B．非位点特异的重组 C．基本重组 D．随机重组 E．人工重组 7．限制性核酸内切酶切割DNA后产生： A．5'磷酸基和3'羟基基团的末端 B．3'磷酸基和5'羟基基团的末端 C．5'磷酸基和3'磷酸基团韵末端 D．5'羟基和3'羟基基团的末端 E．以上都不是 8．可识别并切割特异DNA序列的称： A．限制性核酸外切酶 B．限制性核酸内切酶

C．非限制性核酸外切酶 D．非限制性核酸内切酶 E．DNA酶 9．限制酶的识别顺序通常是： A．聚腺苷酸 B．聚胞苷酸 C．RNA聚合酶附着点 D．回文对称序列 E．甲基化“帽”结构 10．限制酶： A．从噬菌体中提取而得 B．可将单链DNA任意切开 C．可将双链DNA任意切开 D．可将双链DNA特异切开 E．不受DNA甲基化影响． 11．限制酶的作用特性不包括： A．在对称序列处切开DNA B．同时切开双链DNA C．DNA两链的切点常在同一位点 D．酶切后的DNA片段多具有粘性互补末端 E．酶辨认的碱基一般为4—6个 12．限制酶的特点不包括： A．只识别一种核苷酸序列 B．其识别不受DNA来源的限制

预防多重耐药菌传播的感染控制

预防多重耐药菌传播的感染控制 1.5.1 在医疗保健机构中，针对所有病人遵循标准预防。 1.5.2 根据标准预防，当执行有飞溅物产生的操作时（如伤口冲洗，口腔吸痰，插管），护理气管切开病人的病人和有分泌物喷溅的病人时，以及在很可能受到明显定植源（如烧伤创面）传播的环境中工作时，都应使用口罩。在日常护理中，不推荐使用口罩防止多重耐药菌从病人传播到医疗保健人员。 1.5.3 接触隔离的应用 1.5.3.1 在急性病医院，对所有感染和定植目标多重耐药菌的病人常规实行接触隔离。 1.5.3.2 在长期护理机构中，对感染或定植目标多重耐药菌的病人决定除标准预防外是否要实施或完善接触隔离时，要考虑病人的临床表现和该机构中多重耐药菌的流行率和发病率。 1.5.3. 2.1 对于病情相对较轻的住院者（例如：能够独立生活者）实行标准预防，在接触难以控制的分泌物、压疮、引流伤口、失禁的粪便以及造瘘管、造瘘袋时,确保使用手套和隔离衣。 1.5.3. 2.2 对住院者（例如：健康护理和日常生活活动完全依赖于医疗保健人员者，依赖机械通气者）和感染性分泌物或引流液难以控制的住院者，除标准预防之外，还要实行接触隔离。 1.5.3.3 对没有引流伤口、腹泻、不能控制的分泌物的定植或感染多重耐药菌的病人，建立允许行走和社会活动的范围，并根据他们对其他病人的威胁和定植或感染病人的能力使用公共区域，遵守适当的手卫生和其他推荐的预防措施去隔离分泌物和排泄物。 1.5.4 在急救场所，对已知感染或定植目标多重耐药菌的病人实行标准预防，在接触难以控制的分泌物、压疮、引流伤口、失禁的粪便以及造瘘管、造瘘袋时，确保使用手套和隔离衣。 1.5.5 在家庭保健机构中遵循标准预防，在接触难以控制的分泌物、压疮、引流伤口、失禁的粪便以及造瘘管、造瘘袋时，确保使用手套和隔离衣。 由于可能让接受家庭保健服务的病人感染或定植多重耐药菌，应减少可重复使用的保健护理设施的使用。在可能的情况下，将保健护理设施留在病人家里，直到病人不再需要家庭医疗保健服务。 如果低度危险的病人保健设备（如听诊器）不能留在病人家里，应清洁和消毒后带走，使用低至中水平消毒，或把复用设备放入塑料袋中，转运到他处进行后续的清洁和消毒。 1.5.5.1 不推荐对于急救场所或家庭保健机构中常规应用手套、隔离衣预防多重耐药菌传播。未解决问题. 1.5.5.2 在血液透析单位，遵循“长期血液透析病人预防感染传播的建议”。 1.5.6 中止接触预防。没有推荐什么时候中止接触预防。未解决问题。 1.5.7 医院和长期护理机构中病人的安置 1.5.7.1 有单间病房时，先分配给已知或疑似多重耐药菌定植或感染的病人，容易造成感染传播的病人（例如：溢出分泌物或排泄物）应最先分配。 1.5.7.2 没有单间病房时，让相同多重耐药菌的病人集中在同一病房或护理区域。 1.5.7.3 当不能集中相同多重耐药菌的病人时，把多重耐药菌病人与获得多重耐药菌危险性低、感染可引起不良后果危险性低以及可能只是短时间住院的病人安置在一起。I 1.6环境措施 1.6.1 清洁和消毒可能被病原体污染的环境表面和设备，包括密切接近病人的物体表面（如床栏杆、 床头桌）、病人诊疗环境中经常接触的表面（如门把手、病房中厕所的表面和周围），以及与之相比更频繁接触的表面（如候诊室的地面）。 1.6.2 .已知感染或定植多重耐药菌病人使用的低度危险医疗器械尽量专用。 1.6.3 优先清洁实行接触预防的病房。重点清洁消毒经常接触的表面（如床栏杆、床头桌、病房浴 室的设备、门把）和直接临近病人的设备。 加强干预以预防多重耐药菌的传播。

分子生物学重组DNA技术试题

分生—重组DNＡ技术试题 一、单选 1、在分子生物学领域,分子克隆主要就是指（ ) A、DNA得大量复制 B、ＤNA得大量转录 C、DＮＡ得大量剪切 D、RNA得大量反转录 E、RＮＡ得大量剪切 2、在分子生物学领域,重组DNA又称( ) A、酶工程 B、蛋白质工程 C、细胞工程Ｄ、基因工程 E、DNA工程 ３、在重组DＮA技术中,不常用到得酶就是( ） A、限制性核酸内切酶Ｂ、ＤNＡ聚合酶C、ＤNＡ连接酶 D、反转录酶 E、ＤNA解链酶 4、多数限制性核酸内切酶切割后得DＮＡ末端为（） Ａ、平头末端Ｂ、３突出末端 C、5突出末端 D、粘性末端 E、缺口末端５、可识别DNA得特异序列,并在识别位点或其周围切割双链ＤＮA得一类酶称为( ） A、限制性外切核酸酶Ｂ、限制性内切核酸酶Ｃ、非限制性外切核酸酶 D、非限制性内切核酸酶 E、DNＡ内切酶 6、ＣDNA就是指（ ) A、在体外经反转录合成得与ＲNA互补得DNA B、在体外经反转录合成得与DNＡ互补得ＤNA C、在体外经转录合成得与ＤNＡ2补得RNA D、在体内经反转录合成得与RNA互补得DNA E、在体内经转录合成得与DＮA互补得RNA 7、基因组代表一个细胞或生物体得( ） A、部分遗传信息 B、整套遗传信息 C、可转录基因 D、非转录基因 E、可表达基因 ８、在基因工程中通常所使用得质粒存在于( ) A、细菌染色体 B、酵母染色体 C、细菌染色体外 Ｄ、酵母染色体外E、以上都不就是 9、就分于结构而论,质粒就是（）

A、环状双链ＤNA分子 B、环状单链ＤNA分于 C、环状单链RNＡ分子 D、线状双链DNA分子 E、线状单链DNA分子 1０、聚合酶链反应可表示为( ) Ａ、PEＣ B、PER C、PDR Ｄ、BCR E、PＣR 11、在已知序列信息得情况下,获取目得基因得最方便方法就是( ) A、化学合成法 B、基因组文库法 C、CDNＡ文库法 D、聚合酶链反应Ｅ、差异显示法 １2、重组DNA得基本构建过程就是将( ) A、任意两段ＤNＡ搂在一起 B、外源DNＡ接入人体ＤNA C、目得基因接人适当载体Ｄ、目得基因接入哺乳类ＤNA E、外源基因接人宿主基因 1３、ECoRI切割ＤＮA双链产生( ） A、平端Ｂ、5’突出粘端 C、３’突出粘端 D、钝性末端Ｅ、配伍末端 14、催化聚合酶链反应得酶就是( ) A、ＤＮA连接酶 B、反转录酶 C、末端转移酶 D、碱性磷酸酶 E、TaqＤNＡ聚合酶 15、将ＰstI内切酶切割后得目得基因与用相同内切酶切割后得载体ＤNＡ连接属( ) A、同聚物加尾连凑 B、人工接头连接 C、平端连接 D、粘性末端连接 Ｅ、非粘性末端连接 16、限制性核酸内切酶切割DNA后产生( ) A、3磷酸基末端与5羟基末端 B、5磷酸基末端与３羟基末端 C、３磷酸基末端与５磷酸基末端 D、5羟基末端与3羟基末端 E、3羟基末端、５羟基末端与磷酸 17、重组ＤNＡ技术中实现目得基因与载体DNＡ拼接得酶就是( ) Ａ、ＤNA聚合酶 B、RNA聚合酶Ｃ、DNＡ连接酶Ｄ、RＮＡ连接酶 E、限制性核酸内切酶 １8、以质粒为载体。将外源基因导入受体菌得过程称( ） Ａ、转化Ｂ、转染C、感染 D、转导 E、转位

最新基因重组与基因工程

基因重组与基因工程

基因重组与基因工程 一、选择题 1．F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为： A．转化 B．转导 C．转染 D．转座 E．接合 2．通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型，称为：A．转化 B．转导 C．转染 D．转座 E．接合 3．溶原菌是指：

A．整合了噬菌体基因组的细菌 B．整合了质粒基因组的细菌 C．含有独立噬菌体基因组的细菌 D．含有独立质粒基因组的细菌 E．含有独立噬菌体和质粒基因组的细菌 4．由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为： A．转化 B．转导 C．转染 D．转座 E．接合 5．由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称为：A．位点特异的重组 B．同源重组 C．基本重组 D．随机重组

E．人工重组 6．发生在同源序列间的重组称为：A．位点特异的重组 B．非位点特异的重组 C．基本重组 D．随机重组 E．人工重组 7．限制性核酸内切酶切割DNA后产生： A．5'磷酸基和3'羟基基团的末端 B．3'磷酸基和5'羟基基团的末端 C．5'磷酸基和3'磷酸基团韵末端 D．5'羟基和3'羟基基团的末端 E．以上都不是 8．可识别并切割特异DNA序列的称： A．限制性核酸外切酶 B．限制性核酸内切酶

C．非限制性核酸外切酶 D．非限制性核酸内切酶 E．DNA酶 9．限制酶的识别顺序通常是：A．聚腺苷酸 B．聚胞苷酸 C．RNA聚合酶附着点 D．回文对称序列 E．甲基化“帽”结构 10．限制酶： A．从噬菌体中提取而得B．可将单链DNA任意切开 C．可将双链DNA任意切开 D．可将双链DNA特异切开 E．不受DNA甲基化影响．11．限制酶的作用特性不包括：

基因重组和基因工程

第十七章基因重组和基因工程 一、单项选择题 1.限制性核酸内切酶切割DNA后产生 A. 5′磷酸基和3′羟基基团的末端 B. 5′磷酸基和3′磷酸基团的末端 C. 5′羟基和3′羟基基团的末端 D. 3′磷酸基和5′羟基基团的末端 E. 以上都不是 2. 可识别并切割特异DNA序列的酶是 A. 非限制性核酸外切酶 B. 限制性核酸内切酶 C. 限制性核酸外切酶 D. 非限制性核酸内切酶 E. DNA酶 3. 有关限制性核酸内切酶，以下哪个描述是错误的？ A. 识别和切割位点通常是4～8个bp长度 B. 大多数酶的识别序列具有回文结构 C. 在识别位点切割磷酸二酯键 D. 只能识别和切割原核生物DNA分子 E. 只能切割含识别序列的双链DNA分子 4. 在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的酶是 A. 解链酶 B. DNA聚合酶 C. DNA连接酶 D. 内切酶 E. 拓扑酶 5. 对基因工程载体的描述，下列哪个不正确？ A. 可以转入宿主细胞 B. 有限制酶的识别位点 C. 可与目的基因相连 D. 是环状DNA分子 E. 有筛选标志 6. 克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是 A. 卡那霉素抗性 B. 青霉素抗性 C. 自我复制能力 D. 自我表达能力 E. 自我转录能力 7. 重组DNA技术中常用的质粒DNA是 A. 病毒基因组DNA的一部分 B. 细菌染色体外的独立遗传单位 C. 细菌染色体DNA的一部分 D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位 E. 真核细胞染色体DNA的一部分 8. 下列哪种物质一般不用作基因工程的载体？ A. 质粒 B. 噬菌体

C. 哺乳动物的病毒 D. 逆转录病毒ＤＮＡ E. 大肠杆菌基因组 9. 关于pBR322质粒描述错误的是 Ａ．有一些限制酶的酶切位点Ｂ．含有1个ori. Ｃ．含有来自大肠杆菌的lacZ基因片段Ｄ．含个氨卞青霉素抗性基因Ｅ．含四环素抗性基因。 10. 以ｍＲＮＡ为模板催化ｃＤＮＡ合成需要下列酶 A. RNA聚合酶 B. DNA聚合酶 C. Klenow片段 D. 逆转录酶 E. ＤＮＡ酶 11. 催化聚合酶链反应需要下列酶 A. RNA聚合酶 B. DNA聚合酶 C. Taq DNA聚合酶 D. 逆转录酶 E.限制性核酸内切酶 12. 关于ＰＣＲ的描述下列哪项不正确？ A. 是一种酶促反应 B. 引物决定了扩增的特异性 C. 扩增产物量大 D.扩增的对象是ＤＮＡ序列 E.扩增的对象是RNA序列 13. 在基因工程中，DNA重组体是指 A. 不同来源的两段DNA单链的复性 B. 目的基因与载体的连接物 C. 不同来源的DNA分子的连接物 D. 原核DNA与真核DNA的连接物 E. 两个不同的结构基因形成的连接物 14. 基因工程操作中转导是指 A. 把重组质粒导入宿主细胞 B. 把DNA重组体导入真核细胞 C. 把DNA重组体导入原核细胞 D. 把外源DNA导入宿主细胞 E. 以噬菌体或病毒为载体构建的重组DNA导入宿主细胞 15. 重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法 A. 限制酶酶切图谱鉴定 B. PCR扩增鉴定 C. 显微注射 D. 蓝白筛选 E.抗药筛选

2020版：临床重要耐药菌感染传播防控策略专家共识(节选)

2020版：临床重要耐药菌感染传播防控策略专家共识(节选） 耐药菌的传播严重威胁人类健康，加强耐药菌感染的预防、控制和诊疗能力建设，是医疗机构防控耐药菌感染传播的重要内容。 临床重要耐药菌感染防控通用要点 手卫生 正确执行手卫生可减少手部微生物（包括耐药菌）污染，从而降低医院感染发生风险。手卫生被认为是预防和控制耐药菌传播的最基础、最有效、最经济的策略。手卫生是减少病原体感染和传播不可或缺的手段，也是感染防控的基础措施之一，是整体防控策略的一部分。规范的手卫生设施包括流动水洗手池、非手触式水龙头开关、洗手液、干手设施、手消毒剂和手卫生流程示意图等。手卫生设施的设置应方便可及，符合《医务人员手卫生规范》（WS/T313-2019）的要求。 各医疗机构应依据国家规范，制定本机构的手卫生制度，并实施有关策略。包括改善手卫生设施，保证手卫生用品充足且便于获取；张贴手卫生警示标识和提醒；开发领导层，提高重视程度并加强管理；增强对各级各类人员手卫生知识与技能培训教育，开展多种形式的手卫生宣传活动，提高各类人员手卫生意识与技能；加强手卫生监督、管

理、考核与信息反馈；鼓励患者参与手卫生改进实践，提高耐药菌感染患者探视人员的手卫生意识；营造医疗机构内良好的手卫生文化等。落实各项措施，切实提高医务人员手卫生意识、依从性和正确性，降低耐药菌交叉感染的风险。 接触预防 基本要求 多重耐药的微生物（MDRO）感染或定植的患者需在标准预防的基础上采取接触预防措施。根据标准预防原则，应在合理的时机正确地实施手卫生；当执行有喷溅操作（如伤口冲洗、吸痰、气管插管等）、护理气管切开的患者和有分泌物喷溅的患者时，以及在有证据支持感染或定植源（如烧伤创面）引发传播的环境中工作时，应进行面部防护，如佩戴口罩和护目镜或防护面屏。标准预防措施对于防止潜在定植患者的传播也至关重要，MDRO定植通常不易被检测到，即使是主动监测也可能由于缺乏敏感性、实验室缺陷，或由于抗菌药物治疗导致间歇性定植而无法识别。因此，采取接触预防的同时，不能忽略正确实施标准预防。 管理要求 制定MDRO感染防控相关制度，包括抗菌药物合理应用管理、MDRO 预防和控制措施、手卫生制度等；开展相关科室的教育培训，对所有

2015年多重耐药菌医院感染预防与控制中国专家共识

2015年多重耐药菌医院感染预防与控制中国专家共识 多重耐药菌医院感染预防与控制中国专家共识 近一个世纪以来，抗菌药物在人类战胜各种感染性疾病的过程中发挥了关键作用，但日益突出的多重耐药菌问题已给临床抗感染治疗带来了严峻挑战。如何有效减缓多重耐药菌的产生，阻断多重耐药菌传播，已引起医学界、政府与社会的广泛关注。为加强多重耐药菌的医院感染管理，有效预防和控制多重耐药菌在医院内的产生和传播，保障患者的安全，由中国感染控制杂志组织，58位国内知名专家共同发起，邀请全国165位专家参与，历时10个月，召开了9场专题讨论会，在充分收集意见和讨论的基础上，最终形成了《多重耐药菌医院感染预防与控制中国专家共识》。共识荟萃了国内外多重耐药菌医院感染防控的最新进展，总结了我国大多数权威专家防控方面的宝贵经验，旨在规范和指导我国多重耐药菌医院感染的防控，提高我国多重耐药菌感染防控水平。 １概述 1.1定义及临床常见类型多重耐药菌(multi-drugresistance bacteria，MDRO)指对通常敏感的常用的3类或3类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌，多重耐药也包括泛耐药(extensivedrugresistance，XDR)和全耐药(pan-drugresistance，PDR)。临床常见MDRO有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肠杆菌科细菌（如大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌）、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌、多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）、多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-AB）等。 1.2流行病学不同监测网、地区、医院以及同一医院不同科室、不同时期MDRO的监测结果均可能存在差异。CHINET三级甲等医院监测结果显示：MRSA 检出率在2008年之前持续上升，最高达73.6%，随后开始下降,2010年为 51.7%，2013年为45.2%；耐万古霉素粪肠球菌和屎肠球菌2010年检出率分别为0.6%、3.6%，2013年分别为0.2%、3.0%；产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌2010年检出率分别为56.3%、43.6%，2013年分别为54.0%、31.8%；XDR铜绿假单胞菌（MDR-PA）和XDR鲍曼不动杆菌（MDR-AB）2010年检出率分别为1.7%、21.4%，2013年分别为2.0%、14.6%。湖南省2011年度细菌耐药监测结

第二章 重组DNA技术与基因工程的基本原理

生物技术专业核心课程 基因工程 华东理工大学张惠展

基因工程 523416789重组DNA 技术与基因工程的基本概念 重组DNA 技术与基因工程的基本原理 重组DNA 技术所需的基本条件 重组DNA 技术的操作过程 目的基因的克隆与基因文库的构建 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因表达产物的分离纯化

D 基因工程的支撑技术 2重组DNA技术与基因工程的基本原理 C 基因工程的基本原理 B 基因的分子生物学 A 重组DNA技术的理论基础

A 重组DNA技术的理论基础 19世纪中孟德尔豌豆杂交试验遗传因子经典遗传学20世纪初摩尔根果蝇杂交实验基因基因学1944年艾弗瑞肺炎双球菌转化实验遗传物质DNA 分子遗传学1953年沃森-克瑞克DNA双螺旋结构分子生物学1973年伯格-杰克森-考恩-鲍耶DNA分子体外拼接 基因工程

B 基因的分子生物学 基因 蛋白质 机体构架功能效应生物催化 调控元件m R N A 转录 翻译 生物性状生物过程

C 基因工程的基本原理 提高外源基因的剂量——分子遗传学原理 筛选修饰重组基因表达的转录调控元件，如：启动子、筛选修饰重组基因表达的转录调控元件，如：启动子、增强子、操作子、终止子、上游调控序列等 增强子、操作子、终止子、上游调控序列等列、非编码区、密码子等 列、mRNA 非编码区、密码子等——分子生物学原理 修饰构建蛋白质生物合成的翻译调控元件，如：SD 序基因工程菌（微型生物反应器）的增殖及稳定生产 ——生化工程学原理 ——分子生物学原理

常见耐药菌感染及应对方案

常见耐药菌感染及应对方案 世界范围内抗生素的过度使用和滥用导致了全球卫生保健领域的抗生素耐药性问题。抗生素耐药感染可能会发生，在更糟糕的情况下，可能已经没有对感染有效的抗生素了。在严重感染中，这种情况可能危及生命。?细菌产生抗药性的原因之一，是因为抗生素通常不适当地用于由病毒引起的疾病。抗生素不能杀死病毒，由病毒引起的疾病如：●咽炎：大部分的嗓子疼●鼻炎：咳嗽、感冒和流鼻涕●流感大多数病毒性疾病不需要特殊的药物治疗，属于自限性疾病，即患者自身的免疫系统可以抵抗这种疾病。遭受病毒感染的患者一般是休息、大量饮水，并对症治疗如对乙酰氨基酚或布洛芬，以减轻发烧或身体疼痛。有时，在复杂或长期的病毒感染中，细菌也可能入侵，并引起“继发感染”，这时需要医生根据情况开具抗生素治疗。美国疾病控制与预防中心（CDC）发布了对美国的前18种耐药性威胁清单。危险级别分为紧急，严重和令人关注。对人类健康的紧急威胁包括：艰难梭菌，耐碳青霉烯肠杆菌科细菌和耐药奈瑟氏球菌。?应始终根据抗菌药敏试验结果和医疗专业人员的知识，为患者量身定制针对耐药菌的最终治疗方案。治疗选择取决于：●感染的类型和严重性●当地的药物敏感性●患者特定的因素，例如年龄，肾脏和肝功能●药物过敏●既往治疗●成本问题 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） ●从皮肤和软组织感染，到泌尿道感染，骨髓炎，心内膜炎，肺炎和脑膜炎。●可能需要切开/引流或清创术。●MRSA已对常见的抗生素如甲氧西林，阿莫西林，青霉素，纳夫西林，奥沙西林和头孢菌素产生抗药性。●MRSA通过接触传播。●MRSA通常会影响皮肤，如手术部位。MRSA也可能导致肺部或血液感染。●感染可以在社区或医疗机构中爆发，如疗养院，透析中心或医院?局部软组织感染可能包括7-10天的口服抗生素疗程：复方磺胺甲恶唑，

基因重组技术基本工具

课题 学科组高二生物主备人朱建国执教人朱建国课题DNA重组技术的基本工具课型时间 课时教学目标1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 教学设想 重点：DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。 难点：基因工程载体需要具备的条件。 教法学法指导：：启发式教学多媒体课件 教学过程个性化修改 1.设置问题情境，引导学生在思索中学习新知识。 本节内容主要是介绍DNA重组技术的三种基本工具及其作用。如果我们采用直白、平淡的方式介绍，不利于调动学生学习的积极性，也不利于学生科学素养的全面提高。应当通过创设情境，提出问题，诱导学生积极参与教学活动，开启他们思想的闸门。 限制酶──“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割后产生的结果。可在进入这部分内容学习时，设置学生关心的问题“限制酶从哪里寻找”，诱导学生联想从前学过的内容──噬菌体侵染细菌的实验，进而认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭，有何保护机制？进而诱导学生产生“可能是有什么酶来切割外源DNA，而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就将书中直白的“这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的写法，变成了一个自主探索的思想活动。 DNA连接酶──DNA片段的“分子缝合针”，写得比较简洁。我们可以从原有的知识出发，诱发学生思考，达到辨析、明理的作用。要想连接被切割开的DNA，学生根据从前学过的知识，第一反应就想到“DNA聚合酶”。学生这种想法的产生是很自然的。但实际上并不能用这种酶进行DNA片段的连接。应引领学生分析DNA聚合酶与DNA连接酶的不同作用，从而达到更深层次认识DNA连接酶的目的。 基因进入受体细胞的载体──“分子运输车”的学习内容，提到作为载体必需的四个条件。教学不能仅仅着眼于让学生记住这几个条件，而应该通过诱导思索，明确为什么要有这四个条件才能充当载体。 2.让抽象的语言在直观的插图中找到注释，在实际动手中形成正确认识。 语言文字具有抽象、概括的特点；插图等信息媒体，具有形象、直观的特点，容易

基因工程和基因重组

第十四章基因重组与基因工程 内容提要： 细菌的基因转移包括接合作用、转化作用、转导作用等。当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞转移至另一个细胞，这种类型的DNA转移称为接合作用。通过自动获取或人为的供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转化作用。由病毒携带将宿主DNA片段从一个细胞转移至另一细胞的现象或机制，称为转导作用。在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接即为重组。 重组DNA技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。为研究基因的结构与功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括：1．分，即目的基因的获取及基因载体的选择。目的基因指科学家感兴趣的外源基因，其来源有几种途径：化学合成、PCR技术、基因组文库或cDNA文库中获得。载体是目的基因的携带者，常用的载体有质粒、噬菌体等。2．切，即限制性核酸内切酶的应用。限制性内切酶是识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，是实现重组DNA技术的重要的工具酶。3．接，即将目的基因与载体连接形成重组体（或重组DNA）。4．转，即将重组体导入宿主菌（或细胞），根据采用的载体性质不同，将重组体导入宿主菌的方法有转化、转染及感染。5．筛，即重组体的筛选与鉴定，将重组体导入宿主菌后，通过适当形式的培养板生长即可获得一定的抗药菌落。利用原位杂交，和Southern印迹或免疫学方法对抗药菌落进行筛选，获得含目的基因的转化子菌落，再经扩增、分离重组DNA获得基因克隆。重组DNA 技术在疾病基因的发现，表达有药用价值的蛋白质，DNA诊断及疾病的预防等方面具有广泛应用价值，并促进了当代分子医学的诞生和发展。 一、选择题 【A型题】 1．下列DNA序列属于回文结构的是（） A．ATGCCG TACGGC B．GAA TTC CTTAAG C．GGCCGG CCGGCC D．TCTGAC AGACTG E．CTAGGG GA TCCC 2．DNA经限制性内切核酸酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。这是因为存在着（） A．钝性末端B．平端C．粘性末端D．5’端E．3’端 3．限制性内切核酸酶的通常识别序列是（） A．粘性末端B．聚腺苷酸 C．回文对称序列D．RNA聚合酶附着点E．甲基化“帽”结构 4．pBR322是（）

多重耐药菌管理

首都医科大学附属北京佑安医院李素英 一、前言 多重耐药菌 (Multidrug resistant bacteria ， MDRB) 在全世界广泛流传，细菌耐药受到世界性关注。多重耐药菌的产生与流行已构成社会性危害，也是医院感染经验性治疗失败的主要因素，了解医院感染菌谱及其 MDRB 的流行及变化趋势，对指导合理使用抗菌药物具有重要意义。 2011 年 4 月 7 日的世界卫生日主题定为，抵御抗药性：今天不采取行动，明天就无药可用。全球每天有 140 万人发生耐药。由于全球贸易和旅行的发展，使耐药性生物可在数小时内传播到全世界。 面对严峻的形势，为加强耐药菌的管理，有效预防和控制多重耐药菌在医院内的传播，保障患者安全，近年来，卫生部采取了一系列措施推进抗菌药物临床合理应用。 2011 年 1 月又颁布了《多重耐药菌医院感染预防与控制技术指南》，这些规范性文件的颁布，对抗菌药物临床不合理应用现象必将得到有效遏制。 二、定义和概念 （一）耐药细菌 什么是耐药细菌？抗菌药物通过杀灭细菌发挥治疗感染的作用，细菌作为一类广泛存在的生物体，也可以通过多种形式获得对抗菌药物的抵抗作用，逃避被杀灭的危险，这种抵抗作用被称为“细菌耐药”，获得耐药能力的细菌就被称为“耐药细菌”。 （二）多重耐药菌 什么是多重耐药菌？多重耐药菌（ Multidrug-Resistant Organism ， MDRO ）主要是指对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌。 （三）泛耐药（PDR） 目前泛耐药菌在临床上不断被发现，什么叫泛耐药？指的是对现有的（或可获得的）所有抗菌药物几乎都耐药，称为泛耐药。如泛耐药的鲍曼不动杆菌、泛耐药的铜绿假单胞菌和泛耐药的结核杆菌等。 （四）临床常见多重耐药菌和泛耐药细菌 临床常见的多重耐药菌，球菌类包括：耐甲氧西林或耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）；耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌（MRCNS）；耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（ VRSA ）；耐万古霉素的肠球菌（VRE），临床上比较多见的有粪肠球菌和屎肠球菌。 杆菌类包括：产超广谱β-内酰胺酶细菌（ ESBLs ）如肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌等；染色体介导 I 型β-内酰胺酶（ AmpC ）如阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌等；耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（ CRE ）如产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶 [NDM-1] 或产碳青霉烯酶 [KPC] 的肠杆菌科细菌。多重耐药的结核分枝杆菌（ MDR-TB ）。 常见的泛耐药细菌，泛耐药的鲍曼不动杆菌（ PDR-AB ）；泛耐药铜绿假单胞菌（ PDR-PA) ；产Ⅰ型新德里金属β - 内酰胺酶细菌（ NDM-1 ）。 （五）耐药菌定植

基因重组技术一、 技术原理基因重组是指不同DNA链的断裂和连接而 ...

基因重组技术 一、技术原理 基因重组是指不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。从广义上讲,任何造成基因型变化的基因交流过程,都叫 做基因重组。而狭义的基因重组仅指涉及DNA分子内断裂- 复合的基因交流。真核生物在减数分裂时,通过非同源染色体的自由组合形成各种不同的配子,雌雄配子结合产生基因型各不相同的后代,这种重组过程虽然也导致基因型的变化,但是由于它不涉及DNA分子内的断裂- 复合,因此,不包括在狭义的基因重组的范围之内。 二、基因重组分类 基因重组，包括同源重组、位点特异性重组、转座作用和异常重组四大类。 1同源重组 同源重组(Homologus Recombination)，是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、Rec F、RecO、RecR等；以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11- Rad50等等。同源重组反应通常根据交叉分子或holiday结构（Holiday Juncture Structure) 的形成和拆分分为三个阶段，即前联会体阶段、联会体形成和Holiday 结构的拆分。 2位点特异性重组 在位点特异性重组(site-specific recombination)中，DNA节段的相对位置发生了移动，从而得到不同的结果─D NA序列发生重排。位点特异性重组不依赖于DNA顺序的同源性（虽然亦可有很短的同源序列），而依赖于能与某些酶相结合的DNA序列的存在。 λ噬菌体编码λ整合酶（integrase）。这个酶能指导噬菌体DNA插入E.coli染色体中。这种插入作用是通过两个DNA分子的特异位点进行重组，将两个环状

介绍动物细胞基因重组技术的最新进展

介绍动物细胞基因重组技术的最新进展 摘要：本文主要介绍了一个动物细胞基因重组技术的最新进展。即深入研究Myf6基因对肌肉发育的调控机制，实现对Myf6基因的调控，从而提高牛的产肉能力与牛肉品质。实验应用PCR方法扩增Myf6基因片段，在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入Myf6基冈构建真核表达载体，再利用脂质体技术转染鲁西黄牛成纤维细胞和成肌细胞，通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用western blot、Real-time PCR技术检测细胞转染前后Myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量变化。实验结果表明：转染后的成纤维细胞和成肌细胞中Myf6蛋白和mRNA的表达量提高，肌肉肌酸激酶基因mRNA表达量升高，肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量也提高。细胞形态观察显示转染后的成纤维细胞没有形态变化，未融合为肌管。转染后的成肌细胞融合为肌管。表明构建的真核表达载体pIRES2．EGFP-Myf6能在成纤维细胞和成肌细胞中高效表达，并且Myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。 关键词:牛Myf6基因真核表达载体成肌细胞转染细胞分化 一、研究进展 1.1 Myf6的作用与研究意义 Myf6与Myf3(MyoD)、Myf4(MyoG)、Myf5同属于生肌调节因子家族(myogenic regulatory factors，MRFs)，是骨骼肌分化所必需的因子，通过控制成肌细胞的融合和肌纤维的形成来对肌肉的分化起中心调节作用。Myf6与终末分化有关，发挥着调节肌肉干细胞终末分化为肌管肌纤维的功能。 肌肉细胞的形成及分化是一个极其复杂的调控过程，目前已成为发育生物学研究细胞分化的一个很好的例子。从动物育种的角度，了解肌肉发育过程中的调控机制，将为畜禽肉用性状的基因定位以及在动物育种中进行标记辅助选择，从而提高家畜的瘦肉率提供一种崭新的手段。生肌决定因子(MRFs)基因家族控制着肌细胞的增殖和分化，与肌纤维的数量、大小有着密切的关系，因而对肉质和风味有非常重要的作用，它们各自或协同控制着肌生成方面的关键调节因子。当前对Myf3(MyoD)、Myf4(MyoG)和Myf5已经有了很多研究，但对Myf6的研究目前还较少，不过其重要的地位和意义已经引起了科学工作者们的重视。 1.2 研究状况 实验应用PCR方法扩增Myf6基因片段，在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入Myf6基冈构建真核表达载体，再利用脂质体技术转染鲁西黄牛成纤维细胞和成肌细胞，通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用western blot、Real-time PCR 技术检测细胞转染前后Myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量变化。实验结果表明：转染后的成纤维细胞和成肌细胞中Myf6蛋白和mRNA 的表达量提高，肌肉肌酸激酶基因mRNA表达量升高，肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量也提高。细胞形态观察显示转染后的成纤维细胞没有形态变化，未融合为肌管。转染后的成肌细胞融合为肌管。表明构建的真核表达载体pIRES2．EGFP-Myf6能在成纤维细胞和成肌细胞中高效表达，并且Myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。