环境微生物实验复习

光学显微镜操作及微生物个体形态的观察（细菌、真菌、藻类和原生动物）

一、实验目的

?1．了解普通光学显微镜的构造与功能，学习与掌握显微镜观察微生物的方法。

?2．学习用压滴法制作溶液标本片。

?3．观察酵母菌和珠江水中各种微生物（细菌、真菌、藻类和原生动物）的个体形态，学会绘制微生物的形态结构图。

?1．什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？

?2．用压滴法制片时，为什么要尽可能地减少气泡的产生？如何操作才能避免气泡的产生？

?3．根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。

实验二微生物的染色

实验3 培养基的制备、灭菌和细菌的分离、纯化、培养技术

?一、培养基的制备、灭菌

?二、细菌的分离、纯化、培养技术

实验原理一

?不同的微生物生长繁殖都需要提供一定的营养条件，在实验室中，微生物的营养是由培养基来提供的。培养基是按照微生物生长繁殖所需要的营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。

?除营养条件以外，微生物必须在最适酸碱度范围内才表现出最大生命力，因此，应针对不同的微生物将培养基的pH值调节到适当范围。

?培养基的种类较多，根据培养基的物理状态可分为三种

–液体培养基：

–半固体培养基：加0.2~0.5%琼脂，

–固体培养基：加1.5~2.0%琼脂。

?

在自然条件下，微生物常以群落的形式与其他的微生物混杂在一起。为了研究某种微生物的特征，必须获得该种微生物的纯培养。纯培养就是从自然界或已染杂菌的培养体中分离出生产、科研所需的单一微生物个体，进行培养并产生大量的后代。 ?

获得纯培养的方法称为微生物的纯化分离法。

– 纯化分离的方法很多，常用的有稀释平板分离法和平板划线分离法。这些方法都是根据微生物生长所需营养和

环境条件不同而人为的加以控制，以便某一种微生物在培养基上出现单个菌落。

实验器材

? 1、药品

– 牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、琼脂、1N NaOH 、1N HCl 。 ?

2、其他

– 培养皿、三角瓶、吸管、烧杯、天平、包装纸、包装绳等。 – 接种环、酒精灯、 90ml 无菌水，土壤。

?

思考：牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方？

操作步骤一

操作步骤二

?

平板划线分离法：P43

?

思考：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生什么时候？

?

产生的单个细胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。

实验四 水中细菌菌落总数的测定——平板菌落计数法 实验目的：掌握平板菌落计数的的原理和方法

实验原理：在适当的培养基和培养条件下，将样品稀释至一定浓度，取一定量接种到平板上，经过培养，就会出现由单个细胞生

长繁殖

而形成的肉眼可见的菌落。

统计菌落数，根据样品的稀释倍数和取样接种量即可计算出样品中的微生物总量。

细菌菌落总数测定

?

细菌菌落总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h 后所生长出来的细菌菌落总数。

– 它用于指示被检的水源水受有机物污染的程度，也为生活饮用水作卫生学评价提供依据。 – 在我国规定1mL 生活饮用水中的细菌菌落总数在100个以下。

? 在饮用水中所测得的细菌茵落总数除说明水被生活废弃物污染程度外，还指示该饮用水能否饮用。但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

? 因此，结合大肠菌群数和粪大肠菌群数以判断水的污染源和安全程度就更全面。

实验五多管发酵法测定水中的大

肠菌群数和粪大肠菌群数

目的要求：1. 了解多管发酵法测定

水中的大肠菌群数的技术

2. 掌握多管发酵法测

定水中的粪大肠菌群数的技术

1. 多管发酵法测定总大肠菌群数

?初步发酵试验（产气否？）

?平板分离（伊红美蓝鉴别培养基）

?复发酵试验（可疑菌落是否产气菌？）

总大肠菌群数——实验原理

?1．初（步）发酵试验

–发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为pH指示剂，

细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽胞菌生长的作用。

?2．平板分离

–平板培养基一般使用伊红美蓝琼脂(eosin methylene blue agar，EMB agar)，伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，在此亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生带

核心的、有金属光泽的深紫色(龙胆紫的紫色)菌落。

?3．复发酵试验

–以上大肠菌群阳性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽胞杆菌者，通过此试验再进一步证实。

–原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸又产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。

总大肠菌群数——实验仪器

? 1.高压蒸气灭菌器。? 2.恒温培养箱、冰箱。? 3.生物显微镜、载玻片。

? 4.酒精灯、镍铬丝接种棒

? 5.培养皿、试管，吸管、烧杯、锥形

瓶

培养基及染色剂的制备（认真预习）

1.乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2-7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中（内有倒置小套管），于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。

2.三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。

3.伊红美蓝培养基：先将10g蛋白胨、2g K2HPO4、10g乳糖、15-20g琼脂加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.0-7.4，然后加入2%伊红水溶液20ml、0.65%美蓝溶液10ml，115℃高压灭菌20min。

4.革兰氏染色剂：（1）结晶紫染色液（2）助染剂：碘液（3）脱色剂：95%乙醇（4）复染剂：沙黄

总大肠菌群数——测定步骤

? 1. 生活饮用水

–（1）初发酵试验：在两个装有已灭菌的50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中(内有倒管)，以无菌操作各加入已充分混匀的水样100 mL。在10支装有已灭菌的5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管)，以无菌操作加入充分混匀的水样10mL，

混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。

–（2）平板分离：上述各发酵管经培养24h后，将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基上，置于37℃恒温箱内培养24h，挑选符合下列特征的菌落。伊红美蓝培养基上：

?深紫黑色，具有金属光泽的菌落；

?紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；

?淡紫红色，中心色较深的菌落。

–（3）取有上述特征的群落进行革兰氏染色

–（4）复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管)，每管可接种分离自同一初发酵管(瓶)的最典型菌落1-3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸、产气者(不

论倒管内气体多少皆作为产气论)，即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管(瓶)数查后附表1“大肠菌群检数表”，报

告每升水样中的大肠菌群数。

? 2. 水源水

–（1）于各装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)，分别加入10mL水样；于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)，分别加入1mL水样；再于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)，分别加入1mL 1：10稀释的

水样。共计15管，三个稀释度。将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养24h。

–（2）平板分离和复发酵试验的检验步骤同“生活饮用水检验方法”。

–（3）根据证实总大肠菌群存在的阳性管数，查后附表2“最可能数（MPN）表”，即求得每100mL水样中存在的总大肠菌群数。我国目前系以1L为报告单位，故MPN值再乘以10，即为1L水样中的总大肠菌群数。

?对污染严重的地表水和废水，初发酵试验的接种水样应作1：10、1：100、1：1000或更高倍数的稀释，检验步骤同“水源水”检验方法。

2. 多管发酵法测定粪大肠菌群数

–总大肠菌群测定与粪大肠菌群的测定

? 1. 原理有什么异同？

? 2. 培养基有什么异同？? 3. 实验步骤有什么异同？

? 4. 所需要的时间各为多少？? 5. 所得数据分别反应什么情况？

1.为什么要选择大肠杆菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？

2.伊红美蓝培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠杆菌时，各起什么作用？

3.为什么大肠杆菌群的检验要经过复发酵才能证实？

4.所有发酵管均为阴性反应时，检验结果可否报告为“零”？

5.什么是粪大肠杆菌群？为什么新修订的《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）要增加粪大肠杆菌群这一微生物指标？

6.依据《地表水环境质量标准》（GB3838-2002）中的微生物指标，判断你测定的珠江水水样属于几类水？

表5-4最可能数(MPN)表

（接种3份10mL水样、3份1mL水样、3份0.1mL水样时，不同阳性及阴性情况下100mL水样中细菌数的最可能数）

环境微生物学实验-高冬梅

中国海洋大学本科生课程大纲 课程属性：公共基础/通识教育/学科基础/专业知识/工作技能，课程性质：必修、选修 一、课程介绍 1.课程描述： 随着各种环境问题的日趋严重，微生物实验技术在环境领域得到广泛应用和迅速发展，为人们改造环境和保护环境提供重要的技术手段。本课程以环境工程领域常用的微生物实验技术的教学为主要内容，并以具体的环境问题为依托，使学生掌握专业知识在实践中的应用，提升学生的实践技能。 Microbiology experimental technology has been widely used and rapidly developed in the environmental field with the increasingly serious environmental problems. It plays an important role in transforming the environment and protecting the environment. The main teaching contents of the course are the common microbiology experimental technologies in various environmental issues. The course will enable students to master the professional skills. 2.设计思路： 本课程主要学习和掌握环境领域常用的微生物实验技术，了解其在环境保护和环境改造过程中的实践应用及其重要作用。课程内容的设置注重实用性和可操作性，分为基础实验部分和综合实验部分。基础实验部分以常用微生物实验技术的学习为重点，并注重实验内容的系统性和连贯性；综合实验部分以具体环境问题为依托，进行微生物实 - 7 -

《医学免疫学与微生物学》实验报告

［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］

玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。

(完整版)环境微生物学试题(精华版)

环境微生物学试题答题要点(精华版) 一、名词解释（每题1.5分，计30分） 噬菌体：是侵染细菌、放线菌、霉菌等微生物的病毒。 菌落：菌落是指在固体平板培养基上，微生物的单细胞经过生长繁殖，形成肉眼能看到的，具有一定形态特征的微生物群体。PHB：是细菌细胞中含有的叫聚羟基丁酸盐的贮藏物质。 初生菌丝体：担子菌的孢子直接萌发而成的菌丝体，一般不会繁殖成为子实体。 分生孢子：分生孢子是由菌丝分枝顶端细胞或者由菌丝分化成的分生孢子梗的顶端细胞分割缢缩而成的单个或者成簇的孢子。间歇灭菌法：是利用常压蒸气反复灭菌的方法。 生物氧化：物质在生物体内经过一系列连续的氧化还原反应逐步分解并释放能量的过程。 化学杀菌剂：能够抑制和杀死微生物的化学物质。 共生：两个微生物在一起时形成特殊的结构和功能，两者高度的协调和彼此得利。 启动子：是一个“开始”的信号，它含有与RNA聚合酶结合并启动转录的保守序列。 操纵子：负责合成特殊蛋白质的基因簇。 生态系统：是生物群落与其生存环境组成的整体系统。 活性污泥：污水处理过程中的具有活性的微生物絮凝体。 联合固氮：是指某些生活在植物根的表面至根皮层细胞间而不进入植物根细胞的微生物进行固氮作用的现象。 反硝化细菌：反硝化作用是指微生物还原硝酸产生气态氮的过程。 活性污泥法：以活性污泥为主体的污水生物处理技术。 生物反应器：是通过酶、微生物、动植物细胞等的固定化，进行物质转化的反应器。 根际微生物：生长在植物根系直接作用土壤范围内的微生物。 纯培养：是指在实验室条件下，从一个微生物细胞繁殖得到的后代。 细胞壁：细胞壁是包在细菌细胞表面、内侧紧贴细胞质膜的较为坚韧并略具弹性的结构。 二、是非题（每题1分，计10分） ?溶源性细菌在一定条件诱发下,可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。( + ) ?细菌形态通常有球状、杆状、螺丝状三类。自然界中杆状最常见，球状次之，螺旋菌最少。( - ) ?某些藻类如团藻属存在群体形态。( + ) ?光合磷酸化和氧化磷酸化一样都是通过电子传递系统产生ATP。( - ) ?在固体培养基中，琼脂的浓度一般为0.5—1.0%。( - ) ?称为嗜碱菌的那些细菌是能在pH 7.0以上的环境中生长的细菌。( + ) ?在真核微生物细胞的染色体中，DNA是与组蛋白结合形成染色体的。( + ) ?EMP、ED等糖酵解途径的共同特点是将葡萄糖降解到丙酮酸。( + ) ?精确定量某些成分而配制的培养基是所有成分的性质和数量已知的培养基，称为天然培养基。( - ) ?在实验室中细菌不能形成菌落。( - ) 三、选择题（每题1分，计20分） 1. 适合所有微生物的特殊特征是__c__。 (a)它们是多细胞的（b)细胞有明显的核 (c)只有用显微镜才能观察到（d）可进行光合作用 2. 病毒缺乏__b___。 (a)增值能力(b)独立代谢的酶体系 (c)核酸 (d)蛋白质 3. G－菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___d__。 (a) 支原体(b) L型细菌(c) 原生质体(d) 原生质球 4. 酵母菌的细胞壁主要含___d__。 (a) 肽聚糖和甘露聚糖 (b) 葡聚糖和脂多糖 (c) 几丁质和纤维素 (d)葡聚糖和甘露聚糖 5. 下列能产子囊孢子的霉菌是__c__。 (a) 毛霉和根霉 (b) 青霉和曲霉

环境工程微生物学实验答案.docx

1.使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察 油镜指的是为了减少高倍镜的折光，在物镜和玻片之间滴上松节油等。所以油镜其实就是给高倍镜物 镜和玻片之间加油。而所有高倍镜之前都先要用低倍镜观察，是因为低倍镜下好找目标。低倍镜放大 10 倍，高倍镜放大40 倍，油镜放大100 倍，先用低倍镜、高倍镜，既便于找到目标，又方便调焦距。 要使显微镜视野明亮，除采用光源外，还可以采取哪些措施 加大聚光器光圈，同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮 把材料切薄一点透光较好 使用滤光片，增加反差和清晰度。 向上调节聚光器。 2.怎样区别活性污泥中的几种固着型纤毛虫 大多数情况下，会遇到钟虫、柄纤毛虫、累枝虫等。三种虫形态均类似钟的形状，钟虫每个都是独 立的，相互之间没有连接；柄纤毛虫类似钟虫，量很大，只是在根部汇聚在一根柄上，可以理解成一 根柄上分出很多个钟虫；而累枝虫就像是树，一根柄上分出很多个柄，然后很多个柄上又分出很多个 “钟虫”。 用压滴法制作标本片时注意什么问题 1. 使用的载玻片和盖玻片都要干净； 2. 制成的标本片不能有气泡 4. 涂片为什么要固定，固定时应注意什么问题 如果不固定的话你进行染色后水洗去多余染料的同时会将菌体一并冲走 注意的就是不要弄死细胞咯！不知道你用什么方法，如果是用火，那就是不要烧死它们，用 载玻片背面靠近火源，过两次就好。 Over 一般我都是用酒精灯的外焰烤的但是要注意温度。温度过高挥出现变形细胞。温度已载玻片接触手背，手背不觉得烫为宜。加热只水分蒸发完全后，再在酒精灯外焰上通过两到三次，就成了。 革兰氏染色法中若只做1~4 步，不用番红染液复染，能否分辨出革兰氏染色结果为什么 能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。 革兰氏染色原理和番红复染本身并无关系。 但是，但是， 你能指着一片空白的照片说这些细菌没有被结晶紫染色所以是阴形吗鬼 知道那里有没有细菌。 革兰氏染色在微生物学中有何实践意义 细菌大多可以按照革兰氏法划分，在杀菌方面自然管用， 还有实验方面， 比方说，实验需要G阳性细菌作为研究材料，如果最后需要杀死细菌获取什么代谢产物，已知是G阳性细菌，那就有目的地杀除了，摒除了盲目手段。

环境工程微生物学 讲义

环境工程微生物学讲义 本课程是环境学院各专业学生的专业基础课；与另一门课《环境微生物学实验》相结合，构成一个完 整的体系；本课程强调每个学生要动手，通过实验，加深对讲课内容的理解和记忆；本课程内容分两大部分：一是微生物学的基础知识；二是微生物学在环境领域中的应用。 绪论 主要内容： 环境微生物学的研究对象和任务研究对象研究任务微生物学概述微生物的定义微生物的特点原核微生物与真核微生物微生物的命名与分类第一节环境工程微生物学的研究对象和任务一、环境微生物学的研究对象定义：环境微生物学是研究与环境领域（包括环境工程、给水排水工程）有关的微生物及其生命活动 规律。?其内容包括：微生物个体形态、群体形态；细胞结构功能、生理特性、生长繁殖、遗传变异 等；微生物与环境的关系（尤其是微生物与污染环境之间的关系）；微生物对物质的转化分解作用（特 别是应用微生物来处理各种污染物质，如废水、废气和固体废弃物）。二、环境工程微生物学的研究任务 总的归纳起来有两大方面的任务： （1）防止或消除有害微生物 （2）充分利用有益的微生物资源 三、微生物在环境污染治理（水处理）中的应用

１）在环境监测方面（水污染的监测） 利用在环境中生存的生物的种类、数量、活性等特征，来判断环境状况的好坏。这些生物称为指示生 物。 生物监测的优缺点： 生物监测的主要优越性： (a)长期性——汇集了生物在整个生活时期中环境因素改变的情况，可以反映 当地的环境变化； (b)综合性——能反映环境诸因子、多成分对生物有机体综合作用的结果； (c)直观性——直接把污染物与其毒性联系起来； (d)灵敏性——有时甚至具有比精密仪器更高的灵敏性，有助于提早发现环境 污染。生物监测的主要缺点： (a)定量化程度不够； (b)需要一定的专业知识和经验。 ２）在环境治理方面 包括水、大气、固体废弃物处理方面其中特别在水处理方面，有着大量成功应用的例子。 第二节微生物概述一、微生物的定义 微生物是指所有形体微小，用肉眼无法看到，须借助于显微镜才能看见的，单细胞或个体结构简单的 多细胞，或无细胞结构的低等生物的统称。 Too small to be seen with naked eyes 二、微生物的特点

微生物实验报告模板

微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般

在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验

《环境工程微生物学》期末考试试卷A卷

《环境工程微生物学》期末考试试卷（A卷） （2002-2003年度上学期） 姓名班级学号成绩 一、选择题（单选或多选，20×2=40） 1、对微生物的概念，以下最正确、最完整的叙述是。 A、微生物是一类个体微小、结构简单，必须借助显微镜才能观察清楚的生物。 B、微生物是一类结构简单，具有单细胞结构，必须借助显微镜才能观察清楚其结构的生物。 C、微生物是一类个体微小、结构简单，具有单细胞结构，必须借助显微镜才能 观察清楚其结构的最低等生物。 D、微生物是一类个体微小、结构简单，具有单细胞、简单多细胞结构或非细胞 结构，必须借助显微镜才能观察清楚其结构的最低等的生物 2、生物五界分类系统包括。 A、原核生物界、原生生物界、真菌界、动物界、植物界。 B、病毒界、原核生物界、真核生物界、动物界、植物界。 C、原核生物界、真核生物界、真菌界、动物界、植物界。 D、病毒界、原核生物界、真核生物界、动物界、植物界。

3、以下微生物属于环境工程微生物范畴的是。 A、病毒、蓝细菌、真细菌、粘细菌。 B、原生动物、蓝细菌、真核藻类、放线菌、粘细菌。 C、微型后生动物、酵母菌、霉菌、真细菌。 D、病毒、螺旋体、细菌、放线菌、 真菌、原生动物、微型后生动物。 4、关于细菌的形态和大小的描述，以下正确的是。 A、细菌的形态包括球菌、杆菌、螺旋菌、丝状菌。 B、杆菌有长杆菌、短杆菌、弧杆菌、链杆菌和芽孢杆菌之分。 C、在任何情况下，细菌的形态都是稳定的。 D、多数球菌的直径为0.5~2.0μm。 5、以下物质属于细胞质内含物的是。 A、细胞膜 B、核糖体 C、荚膜 D、异染粒 E、气泡 6、荚膜具有的功能包括。 A、荚膜可以维持细菌的细胞形态。 B、荚膜为鞭毛提供支点，使鞭毛运动。 C、荚膜是细菌在其表面分泌的一种粘性物质，它可以保护细菌免受干燥的影响； 当营养缺乏时可以作为碳源和氮源被利用。

环境微生物学实验报告.doc

环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了

找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型

环境微生物学期末复习A卷

环境微生物学期末复习 A卷 一、名词解释 1、致死时间：当孢子或菌体细胞在物理或化学诱变剂的作用下达到一定致死率所用的时间。 2、生物圈：地球上所有的生物与其环境的总和叫生物圈。是地球表面进行生命活动的有机圈层，包括了生活于大气圈下层、水圈、岩石圈以及三圈界面的所有生命体。 3、溶原性细胞：含有温和噬菌体核酸的宿主细胞被称为溶原性细胞。 4、厌氧菌：一类只能在无氧条件下比在有氧条件下生长好的细菌，而不能在空气和10%二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。 5、微生物的命名：微生物的命名是采用生物学中的二名法，即用两个拉丁词命名一个微生物的种。 6、化能异养型：一群依靠氧化有机物产生化学能而获得能量的微生物，它们的碳源也是其能源，包括绝大多数细菌、放线菌及全部的真菌。 二、填空题 1、微生物对含氮有机物的降解和转化作用包括：氨化作用、硝化作用、反硝化作用和固氮作用。 2、固体废弃物处理方法：焚烧法、填埋法和堆肥法。 3、微生物培养基的分类：按培养基组成的性质分类：合成培养基、天然培养基、复合培养基。按培养基的物理性状分类：液体培养基、半固体培养基、固体培养基。按培养基对微生物的功能和用途分类：选择培养基、鉴别培养基、加富培养基。 三、选择 1、微生物学发展史分为史前期、初创期、奠定期和发展期。其中发展期的代表人物是列文虎克。列文虎克是最早发现微生物的人。 2、噬菌体是侵染细菌的病毒。 3、放线菌。大多数放线菌为腐生菌，少数是寄生菌。放线菌菌丝体可分为营养菌丝、气生菌丝、孢子似。 4、丝状真菌俗称霉菌，无性孢子是丝状真菌进行无性繁殖的主要方式。 5、凡能供给微生物碳素营养的物质，称为碳源。碳源的主要作用是构成微生物细胞的含碳物质（碳架）和供给微生物生长、繁殖及运动所需要的能量。 6、营养物质进入微生物细胞的方式单纯扩散、促进扩散、主动运输、基团转位（化学变化）。 7、一般情况下，活性污泥驯化成熟期最多的原生动物是钟虫。 8、细菌的光合作用:环式光合磷酸化，主要参加的细菌为紫细菌和绿硫细菌。 9、代谢产生ATP不需要DNA和RNA的参加。 10、实验室常规高压蒸汽灭菌的条件 121摄氏度、15~30分钟。 11、腐生菌属于营腐生生活的微生物。它们从已死的动、植物或其他有机物吸取养料，以维持自身正常生活的一种生活方式。属于化能异养型微生物，腐生细菌大大促进了自然界的生物循环。 12、主动运输是微生物吸收营养物质的主要方式。 13、在废水分析过程中，大肠埃希氏菌作为水中粪便污染的指标。 14、纯培养是其中只有一种微生物的培养物。 15、生长因子是一类调节微生物正常代谢所必须，但不能用简单的碳、氮自行合成的有机物。 1．微生物学初创时期的代表人物是（ C ）。 A．巴斯德 B．科赫 C．列文·虎克 D．维诺格拉德斯基 2．噬菌体是侵染（B ）的病毒。 A．植物B．细菌 C．动物 D．动物和植物 3．放线菌具吸收营养和排泄代谢产物功能的菌丝是（A ）。

环境工程微生物学

《环境工程微生物学》课程综合复习资料 一、填空题 1．细菌按形态可分为球菌、杆状；螺旋状；丝状四种。 2 3.各种微生物有一些共同特点，包括个体极小；分布广，种类繁多；繁殖快，易变异。 4.细菌的呼吸类型分为发酵；好氧呼吸；无氧呼吸。 5.细菌营养物质吸收和运输的四种途径分别是单纯扩散；促进扩散；主动运输；基团转位。 6.列举几种微生物所需的生长因子：B族维生素；维生素C；氨基酸；嘌呤；嘧啶；（生物素；烟酸）。 7.细菌连续培养有恒浊连续培养；恒化连续培养两种。绝大多数污（废）水生物处理方法均采用恒化连续培养 8.微生物需要的营养物质有水；碳素营养源；氮素营养源；无机盐；生长因子。9．菌种保藏方法有定期移植法；干燥法；隔绝空气法；蒸馏水悬浮法；综合法5种。 10．生态系统有四个基本组成：环境；生产者；消费者；分解或转化者。 11．细菌的基本结构包括细胞壁细胞膜细胞质细胞核。 12．病毒的化学组成有蛋白质；核酸。少数个体大的病毒，还含有类脂质；多糖13．微生物按照细胞结构的有或无可划分为非细胞结构生物；细胞结构微生物；按照细胞核膜、细胞器及有丝分裂等的有无，可划分为原核微生物；真核微生物。14．细胞质的化学组成有蛋白质；核酸；多糖；脂类；无机盐；水。

15．细菌表面带负电荷。 16．原生动物可划分为四类：鞭毛纲；肉足纲；纤毛纲；孢子纲 17．酵母菌有发酵型；氧化型两种类型，其中前者是将糖转化为乙醇；二氧化碳的一类酵母菌。 18．各种辅酶和辅基中，作为电子传递体系的组成成分的有NAD和NADP；FMN和FAD；辅酶Q，它们各自的功能是传递氢；传递氢；传递氢和电子。 19．污（废）水生物处理中，好氧活性污泥要求碳氮磷比为BOD ：N：P＝100：5： 5 ：N：P＝100：6：1。 1，厌氧消化污泥中的厌氧微生物群体为BOD 5 20．细菌衰亡的原因包括营养物被耗尽，细菌进行内源呼吸；有毒代谢产物积累，抑制生长繁殖。 21．细菌的营养类型有光能自养型、化能自养型、光能异养型、化能异养型 22．根据细菌对温度的最适生长需求，可将细菌分为4类：嗜冷菌；嗜中温菌；嗜热菌；嗜超热菌。 23．微生物之间的关系有竞争关系；原始合作关系；共生关系；偏害关系；捕食关系；寄生关系 24．好氧活性污泥的结构和功能的中心是菌胶团 25．核糖体的功能是合成蛋白质的部位，鞭毛的功能是运动。 1.病毒（Virus）： 没有细胞结构，专性寄生在活的敏感宿主体内，可通过细菌过滤器，大小在μm以下的超微小生物。 2.菌胶团： 多个细菌个体排列在一起，由公共荚膜包藏形成的一定形状的细菌集团。

实验3-环境微生物的检测

实验三环境微生物的检测 一、实验目的 1.了解周围环境中微生物的分布情况。 2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。 3.了解四大类微生物的菌落特征。 二、实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小，人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意，我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明，自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件，微生物就可以在其上生长繁殖。据此，我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。 培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外，根据不同的微生物的要求，在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素，使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念，它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。 灭菌的方法较多，广泛使用的是高温灭菌，其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下，温度可达121℃。一般只要维持15~20min，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染，在整个接种过程中，必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念，经常保持实验台及周围环境的清洁，严格无菌操作，避免杂菌的污染，这是保证实验成功的必要条件。

环境微生物学精彩试题

环境微生物学复习题 环境微生物学试题(一) 一、名词解释（每题1.5分，计30分） 包含体：是病毒在寄主细胞形成的含物。 细胞膜：是围绕在细胞质外面的双层膜结构。 衣原体：是仅在脊椎动物细胞中生活的专性寄生菌，形态上呈球形或椭圆形，个体小，能通过细菌滤器。 同宗配合：同一菌丝体两菌丝结合形成接合孢子。 酵母菌：单细胞的子囊菌，一般以芽殖的方式进行繁殖。 生态系统：是生物群落与其生存环境组成的整体系统。 碳源：是微生物细胞碳素物质或代谢产物中的C的来源。 拮抗：是一种微生物通过产生某种代谢物质抑制或杀死另一种微生物的现象。菌种复壮：使衰退的菌种重新恢复到原有的活性。 DNA的变性：双链的DNA加热到一定温度时，双链可解链成为单链的现象。DNA复制：首先DNA的双螺旋解开，其次以每条DNA链作为模板，通过碱基配对的原则合成与之互补的一条新链的过程。根际微生物：生长在植物根系直接作用土壤围的微生物。 物质流：物质流是生态系统中生物元素的循环。 类菌体：在根瘤组织中形态和功能上和培养基的根瘤菌有很大的区别根瘤菌。硝化细菌：能够将氨氧化成硝酸的严格好氧的化能无机营养微生物，包括亚硝酸细菌和硝酸细菌。 细菌活性污泥法：以活性污泥为主体的污水生物处理技术。 生物反应器：是通过酶、微生物、动植物细胞等的固定化，进行物质转化的反应器。 微生物细胞固定化：将酶活力强的微生物固定在载体上的方法。 堆肥化：依靠自然界广泛分布的微生物，人为地促进可生物降解有机物向稳定的腐殖质生物转化的过程。 自生固氮作用：是指微生物独立生活时进行固N的作用。 二、是非题（每题1分，计10分） 1.原噬菌体是整合在宿主DNA上的DNA片段,它不能独立进行繁殖。(-) 2.细菌的异常形态是细菌的固有特征。（+） 3.真核微生物比原核微生物更能在高温下生长。（-） 4.芽孢是芽孢细菌的繁殖器官。（-） 5.光合细菌和蓝细菌都是产氧的光能营养型微生物。(-) 6.用来固化细菌培养基的多糖是琼脂。(+) 7.微生物生长的衰亡期，细胞死亡速率超过细胞分裂速率。(+)

环境工程微生物学操作实验报告 范例

培养基的配制和灭菌 细菌的纯种分离、培养 接种技术及菌落形态的观察 姓名：张世凡 学号：201330480123 课程名称：环境工程微生物实验

一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。 2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。 3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。 4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。 5、学会几种接种技术。 6、平板菌落计数。 7、抗Cu菌的筛选。 8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。 9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。 二、实验原理 1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的 需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。 本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。 2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭 菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。 3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散 成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在 0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平 板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。 4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另 一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。 5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理 特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。

大学环境微生物学期末考试试题

一、概念题： 病毒：没有细胞结构，专性寄生在活的宿主体内，大小在0.2 微米以下的超微小微生物。 原核微生物：指核质和细胞质之间不存在明显核膜，其染色体由单一核酸组成的一类微生物。（原核微生物的核很原始，发育不全，只有DNA链高度折叠形成的一个核区，没有核膜，核质裸露，与细胞质没有明显界限，叫拟核或似核。 原核微生物没有细胞器，只有由细胞质膜内陷形成的不规则的泡沫体系，如间体核光合作用层片及其他内折。也不进 行有丝分裂。） 真核微生物：细胞核发育完全具有核仁核膜 , 能进行有丝分裂 , 细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微小生 物 , 都称为真核微生物。（真核微生物由发育完好的细胞核，核内由核仁核染色质。由核膜将细胞核和细胞质分开，使两 者由明显的界限。有高度分化的细胞器，如线粒体、中心体、高尔基体、内质网、溶酶体和叶绿体等。进行有丝分裂。） 原生动物：最原始、最低等、结构最简单的单细胞动物。 光能自养：指利用光能将大气中的二氧化碳和土壤中的水合成有机物的营养类型。 光能异养：指以二氧化碳作为主要碳源或唯一碳源，利用有机物作为供氢体，利用光能将二氧化碳还原成细胞物质营 养类型。 化能自养：通过氧化无机物释放出的能量还原二氧化碳成为细胞有机物的营养类型。 化能异养：指用有机物分解时释放的能量，将有机物分解的中间产物合成新的有机物的营养类型。 芽孢某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形或椭圆形的抗透性休眠体 等电点：在某一 PH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时的溶 液的 PH值称为该氨基酸的等电点。 好氧呼吸 :有外在最终电子受体O2存在时，对底物（能源）的氧化过程。 无氧呼吸：又称厌氧呼吸，是一类电子传递体系末端的受氢体为外源无机氧化物的生物氧化。 质粒:在原核微生物中除染色体外，还含有另一种较小的，携带少量遗传基因的环状DNA 分子，称为质粒，也叫染色 体外的 DNA。他们在细胞分裂过程中能复制，将遗传性状传给后代。 自净容量 :指在水体正常生物循环中能够净化有机污染物的最大数值。 二、简述题： 1）细菌的一般结构 细菌是单细胞的。所有的细菌均有如下结构：细胞壁、细胞质膜、细胞质及其内含物、细胞核质。 2）细菌细胞壁的生理功能 a、保护原生质体免受渗透压引起破裂的作用； b、维持细菌形态（可用溶菌酶处理不同的细菌细胞壁后，菌体均呈现圆形得到证明）； c 、细胞壁是多孔结构的分子筛，阻挡某些分子进入和保留蛋白质在间质（革兰氏阴性菌细胞壁和细胞质之间的区域）； d 、细胞壁为鞭毛提供支点，使鞭毛运动。 3）酶的活性中心 酶的活性中心是指酶的活性部位，酶蛋白分子中直接与底物结合，并与酶的催化作用直接有关的部位 4）真菌的种类 酵母菌，霉菌，以及各种伞菌。 5）酵母菌的一般特征 个体一般以单细胞状态存在；多数以出芽方式繁殖，也有的可进行裂殖或产子囊孢子；能发酵糖类而产能；细胞壁常 含有甘露聚糖；喜在含糖较高、酸性的水生环境中生长。 6）在病毒中，蛋白质的功能 蛋白质的功能：保护病毒使其免受环境因素的影响。决定病毒感染的特异性，使病毒与敏感细胞表面特定部位有特异 亲和力，病毒可牢固的附着在敏感细胞上。病毒蛋白质还有致病性、毒力和抗原性。动物病毒有的含DNA，有的含 RNA。植物病毒大多数含RNA，少数含 DNA。噬菌体大多数含DNA，少数含 RNA。病毒核酸的功能是：决定病毒遗传、变异和 对敏感宿主细胞的感染力。

环境工程微生物学综合实验-

环境工程微生物学综合实验- 功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与性能研究 实验须知* 一、环境工程微生物学实验目的 1. 通过实验进一步加深理解课堂讲授的理论内容。 2. 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，建立无菌概念并掌握无菌操作技术。 通过实验，培养学生分析问题、解决问题的能力及创新能力，提高学生的综合素质，为将来能够独立工作打下坚实的基础。 二、环境工程微生物学实验基本要求 1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，弄清实验目的、原理及操作步骤，以免手忙脚乱，影响实验课效果。 2. 实验前，按内容要求仔细检查所需仪器、药品是否齐全，若有问题及时提出。 3. 整个实验过程要严格按操作步骤进行，不得马马糊糊，否则会造成错误，甚至出现事故。 4. 实验过程中要做好记录，特别是对于连续观察的实验，必须认真记下每次观察到的现象与结果，然后进行整理分析，写出实验报告。 5. 使用贵重精密仪器时要特别小心，注意保护，用毕要复原，并进行登记。实验使用的一切物品实验完毕均放回原处。损坏仪器照价赔偿。 6. 实验室要保持整洁、干净，不准大声喧哗，勿随意走动，严禁吸烟，不许吃东西，不准随便乱丢废物。 7. 实验过程中，一些易燃品如乙醇、丙酮等切勿接近火焰。如遇火险，要先切断火源，再用沙土或湿布灭火，必要时应使用灭火器。 8. 使用过的废液及琼脂培养基不得直接倒入水池内，应先进行灭菌处理，然后再将废液倒入下水道，将琼脂培养基埋掉。 9. 离开实验室前要将桌面擦净，清扫卫生，检查电源、火源、自来水、门窗

是否关闭，以确保安全。 实验一、絮凝菌分离、筛选准备实验 （器皿的包装、无菌水、培养基的制备与灭菌） 一、器皿的包装 （一）实验目的 学会微生物技术实验中所用器皿的包装方法及意义。 （二）包装方法 1.培养皿的包装 用牛皮纸或旧报纸进行包装。包好后灭菌备用。 2. 吸管的包装 在已干燥的吸管的平头端距0.5cm处，塞长约1.5cm的棉花，松紧要合适。过松，棉花易脱出；过紧，吹吸费力，甚至吹吸不动。棉花的作用是防止吸管中的细菌吸入口中，同时又防止口中的细菌吹入管中。将塞好棉花的吸管的尖端，放在裁成4cm ~ 5cm宽的长报纸条的一端，吸管与纸条约成45o角。折叠纸角，包住吸管尖端，然后以螺旋式在桌面上用力向前搓转，纸条将吸管包紧，余下的纸尾打成结。将这样包好的几根或几十根吸管放一起，再用一张牛皮纸或两张报纸包装，然后干热灭菌。 3.三角瓶的包装 在三角瓶的瓶口上塞上合适大小的瓶塞（棉塞或泡膜塑料塞），在瓶口外面包上2层至 3层报纸，扎好灭菌。若进行湿热灭菌，最好再包一层牛皮纸或铝铂，以免打湿棉塞。 二、培养基的制备与灭菌 （一）实验目的 1．掌握培养基和无菌水的制备方法。 2．掌握高压蒸汽灭菌技术。 3．了解灭菌前的准备工作。 （二）材料

微生物实验报告：环境中微生物

实验四环境中微生物的检测和分离纯化 一、实验目的 1.熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3.用平板划线法和稀释法分离微生物。 4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪； 平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul 各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml 三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1.配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml配置培养基，调 pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2.采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带 回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验 室。 3.制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中， 用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸 取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。 类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4.涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃 涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。 2）单菌落划线（4块）：用接种环挑取未知平班上的菌落，做单菌落划线分离，每人2板。 3）手指（1块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用肥皂洗过的手指头和用酒精棉球擦过的手指头(不用毛巾擦)在同 一平板的不同分区涂抹（用力一致）。

微生物学期末考试试题答案

1.细菌特殊构造包括、、、等。（本题2分） 2.溶源性细胞在正常情况下有大约10 -5 细胞会发生现象，这是由于少数溶源细胞中的变成了的缘故。（本题分） 3.营养物质可以通过、、和四种方式进入细胞。（本题2分） 4.控制有害微生物措施中杀灭的方法有和，常用和方法，抑制的方法有和。（本题3分） 5.证明遗传物质的基础是核酸的三个著名的实验为、、。（本题分） 6.微生物基因重组的方式包括、_____、_____和。（本题2分） 1.纯培养是其中（）的培养物。 A.只有一种微生物 B.只有细菌生长所需的一种营养物 C.除主要微生物外只有一种微生物 D.没有代谢废物 2.实验室常用的培养细菌的培养基是（）。 $ A. 马铃薯培养基 B. 牛肉膏蛋白胨培养基 C.高氏一号培养基 D.麦芽汁培养基 3.己糖单磷酸支路和ED途径是进行（）替换的一个机制。 A.微生物中DNA合成 B.光合生物中的光合作用 C.某些种类微生物中的能量代谢 D.化学渗透作用 4.微生物代谢中，硝酸盐和硫酸盐可作为电子受体是在（）。 A.无酶时 B.无ATP时 C. 有细胞色素时 D. 无氧时 5.由于控制微生物的目的，灭菌一词指的是（）。 A.除去病原微生物 B.降低微生物的数量 ? C.消灭所有的生物 D.只消灭体表的微生物 6.紫外线辐射主要作用于微生物的（）。 A. 核酸 B.酶类 C. 糖类 D.细胞壁 7.青霉素族的抗生素主要用于抗（）。 A.病毒 B.真菌 C.革兰氏阴性菌 D.革兰氏阳性菌 8.所有下述特征皆适合质粒，除了（）之外。 A.它们是自我复制的DNA环 B.它们有10～50个基因 C.它们是细菌存活所必需的成分 D.它们是接合所必需的成分 9.接合时F因子进入受体细胞，受体细胞（）。 A.经历裂解 B.快速繁殖 C.变成供体细胞 D.发育出线粒体 — 10.研究不同微生物群落及其环境之间的关系的是（）。 A.微生物进化 B.微生物生态学 C.微生物生理学 D.微生物生物化学 四、判断题（每小题1分，共10小题10分）

大学土壤微生物分离实验报告

从土壤中分离纯化培养微生物并作初步观察鉴定 【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据细菌在选择培养基的存活情况，确定该菌种的固氮解磷解钾属性。 【关键词】细菌芽孢杆菌培养基、选择培养基的配制高压蒸汽灭菌 前言： 在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。群落是不同种类微物的混和体。为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。 分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。 实验目的： 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。 3、对提取的土样进行微生物选择培养、分离、纯化，根据菌落的存活状况来判断未知 菌的属性。 实验原理： 菌种来源:选择无机磷农药含量较高的土壤,有机磷农药化工厂 旁边的土壤和排污口区的污水. 培养基的选取：五组选择培养基，分别以辛硫磷、甲胺磷、敌敌畏、草甘膦及五种有机磷农药混合为微生物生长的唯一氮源磷源。 分离纯化微生物：稀释倒平板法、涂布平板法、稀释摇管法、平板划线分离法。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：（一）选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部

分不需要的微生物。（二）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。 微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。 1. 实验器材、试剂与实验方法： 1.1器材： 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、培养皿、自动立式压力蒸汽灭菌器、烘箱、玻璃珠、移液枪、枪头、称量纸、药匙、试管架、接种环、酒精灯、超净工作台, 粉碎机，接种环，移液枪配枪头。 1.2试剂： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、1mol/L NaOH、1mol/LHCl、NaCl、95%乙醇、75%酒精，草甘膦，甲甘磷，敌敌畏，辛硫磷。 1.3土样、样品： 取自二十三冶草莓园的土壤，建设北路的大棚蔬菜菜地土壤，化工厂污水口。 1.4 实验方法 1.4.1配制培养基： (一）配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基200ml(用2个100ml三角瓶和2支试管分装）牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。 配方如下：牛肉膏 0.6g 蛋白胨 2g NaCl 1g 琼脂 3~4g 水 200ml pH 7.4-7.6 1、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白 胨可分别放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补充所失水分。 3、调pH 用pH试纸或酸碱度计检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaoH， 边加边搅拌，并随时检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用１mol/l HCL进行调节。 pH调节通常放在加琼脂之前。注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的